PERQUIRRE

Revista do Ncleo Interdisciplinar de Pesquisa e Extenso do UNIPAM (ISSN 1806-6399)

Patos de Minas: UNIPAM, n. 7, vol. 1: 167-179, ago. 2010

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Avaliao da frequncia de microncleos em eritrcitos

perifricos de mandi-amarelo
(Pimelodus maculatus) do rio Paranaba
Admilson da Costa e Silva
Graduado em Cincias Biolgicas pelo Centro Universitrio de Patos de Minas
(FAFIPA/UNIPAM)

Jlio Csar Nepomuceno

Professor Titular do Centro Universitrio de Patos de Minas (UNIPAM)

Resumo: O teste do microncleo possibilita a deteco de efeitos genotxicos provocados

por vrios agentes qumicos e fsicos, podendo ser utilizado para avaliao das condies
ambientais. Os microncleos so estruturas originrias de fragmentos cromossmicos ou
cromossomos inteiros que, durante a anfase, no migram para os plos da clula. O presente
trabalho tem como objetivo avaliar os possveis efeitos genotxicos da poluio aqutica em
peixes do rio Paranaba, regio de Patos de Minas/ MG, por meio do teste do microncleo. O
peixe utilizado foi o mandi-amarelo (Pimelodus maculatus), por ser comum na regio, de fcil
captura, alm de ser consumido pela populao ribeirinha. Amostras de sangue, para
preparao dos esfregaos, foram obtidas por meio de puno branquial, mediante o uso de
seringa e agulha. Aps 24 horas os esfregados foram fixados com metanol puro durante 5
minutos, e corados com Giemsa e tampo fosfato (pH 6,8) na proporo de 1:20, durante 10
minutos. O nmero de microncleos foi determinado a partir de 2.000 eritrcitos analisados
por peixe. A anlise estatstica dos dados foi feita pelo teste condicional para a deteco de
eventos raros (PEREIRA, 1991). Verificou-se que a frequncia de microncleos em eritrcitos
perifricos foi significativamente maior nos peixes do rio Paranaba que nos peixes do crrego
Caxambu. Esta diferena no foi estatisticamente significativa entre os grupos de peixes do
rio. A partir destes resultados, pode-se concluir que a alta frequncia de microncleos nos
peixes do rio se deve, provavelmente, exposio destes a substncias e/ou a condies
ambientais de potencial genotxico.
Palavras-chave: Peixe. Microncleo. Genotxico. Teste do Microncleo

Abstract: The micronuclei test allows to detect hazardous effects due to various chemical
and physical agents in the genetic material, and therefore may be useful for environmental
assessment. The micronuclei are organic structures originated either from chromosomal
fragments or entire chromosomes that during the anaphase do not migrate to the cell pole.
The goal of this study is to apply this test to evaluate the effects of hazardous pollutants in
the water on fishes from the Paranaba River. Samples were collected downstream and
upstream of the Paranaba River in the region of Patos de Minas County, in the state of Minas
Gerais, Brazil. We utilized the Pimelodus maculatus because it is a common fish in the region,
it is ease to capture, and it is a major food source for riverine human population. We
collected blood sample from gills, using needles. Blood spreads were fixed with pure
methanol for 5 minutes, after 24 hours. The material was stained 20% Giemsa diluted in
buffer phosphate (pH 6.8) for 10 minutes. The number of micronuclei was estimated from
2,000 analyzed erythrocytes for each specimen. The statistical analysis of the data was done
with the conditional test for detection of rare events (PEREIRA, 1991). The frequency of

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micronuclei in peripheral erythrocytes was significant higher in the fishes from the Paranaba
River than in the fishes from the Caxambu creek. No significant differences were found
between the fishes from the upstream and downstream of the Paranaba River. We concluded
that the high frequency of micronuclei was caused likely by exposure to hazardous genotoxic
substances and other hazardous environmental conditions.
Key words: Fish. Micronuclei. Genotoxic. Micronucleus test.

Introduo
Desde que a vida surgiu na Terra, h cerca de 3,5 bilhes de anos, a gua foi
fundamental como base da alimentao dos organismos e como meio de
desenvolvimento de plantas e animais. Ela to bem aproveitada que, ao longo de
milhes de anos, o mesmo estoque original em movimento alimenta rios, lagos e
aquferos ou reservatrios subterrneos, atravs do ciclo hidrolgico (Pegorin, 2001).
Segundo Karmann (2001), a gua a substncia mais abundante na superfcie
do planeta, participando dos seus processos modeladores pela dissoluo de materiais
terrestres e do transporte de partculas. Ela cobre 70% da superfcie do planeta Terra,
porm irregularmente distribuda e, de toda a gua na Terra, 97,5% so salgadas e
menos de 2,5% so doces. Estas esto distribudas entre as calotas polares (68,9%), os
aquferos (29,9%), rios e lagos (0,3%) e outros reservatrios (0,9%) (HIRATA, 2001). S o
Brasil, segundo Garcia (2003), detm sozinho cerca de 12% de toda a gua doce de
superfcie do mundo, mas a distribuio tambm irregular pelo territrio brasileiro,
com regies como a Norte, que detm o maior volume, em contrapartida Nordeste,
em que h escassez. H excesso em alguns lugares, falta em outros e poluio em quase
toda parte. No Brasil, nas regies Norte e Centro-Oeste, jogam-se metais txicos nos
rios, como o mercrio usado no garimpo. No Sul e no Sudeste so os produtos
qumicos dos pesticidas agrcolas e o crescente aumento do volume de esgoto em
consequncia concentrao urbana (PEGORIN, 2001).
A contaminao da gua vem crescendo assustadoramente, sobretudo nas
zonas costeiras e em grandes cidades em todo o mundo. Os rios tm sido, ao mesmo
tempo, pontos de capitao de gua para abastecimento de reas metropolitanas,
servindo de receptores para os lanamentos de esgotos urbanos, de lixos e de efluentes
agro-industriais. Em vrias regies o meio ambiente tem sido incapaz de degradar
estes contaminantes e restituir o seu equilbrio natural (HIRATA, 2001).
Figuerdo (1999 apud ALVES, 2000) relata que a degradao das guas
superficiais causada principalmente pelos seguintes fatores: lanamento in natura dos
esgotos domsticos, lanamento de efluentes lquidos industriais, disposio
inadequada dos lixos urbanos, eroso do solo e assoreamento de material carreado e
usos indiscriminados de nutrientes e defensivos agrcolas.
Uma Pesquisa Nacional de Saneamento Bsico do IBGE aponta que 58,4% dos
distritos do Brasil no coletam esgoto, outros 27,5% tm rede coletora de esgoto, mas
no o tratam antes de lan-lo no ambiente. Em funo disso, rios que passam por
centros urbanos esto quase todos poludos (GARCIA, 2003).
Segundo Hirata (2001), os efluentes domsticos municipais tm elevadas
concentraes em carbono orgnico, cloreto, nitrognio, sdio, magnsio, sulfato e

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alguns metais, incluindo ferro, zinco e cobre, alm de concentraes variadas de

microorganismos patognicos.
O rio Paranaba, importante rio brasileiro, um rio que tem sofrido com a
degradao ambiental. Com uma extenso de 1.120 km, este nasce na serra Mata da
Corda, a uma altitude de aproximadamente 1.100 metros. O rio Paranaba, depois de se
juntar ao rio Grande, forma o rio Paran; este segue rumo bacia do Prata e da ao
oceano Atlntico. No seu percurso, o rio Paranaba faz a divisa natural entre os Estados
de Minas e Gois (total de 580 km) e Minas e Mato Grosso do Sul (WERNECK, 1994).
Segundo Cambraia e Silva (2000), esse rio considerado o principal recurso
hdrico do Alto Paranaba, tendo importncia no abastecimento industrial e na diluio
de efluentes, na pesca e piscicultura e na irrigao de culturas. Alm disso, tem um
grande potencial turstico e de lazer. Sua bacia a mais densamente povoada do
Estado de Minas Gerais, com populao aproximada de 3,5 milhes de habitantes
distribudos nos seus 123 municpios que fazem parte desta regio, trazendo como
consequncia uma grande presso sobre os seus recursos naturais, principalmente os
hdricos. Um destes municpios o de Patos de Minas/MG, cidade que, assim como
outras, tem o rio como principal fonte de abastecimento de gua e receptor de esgotos
sanitrios.
Diante dos atuais problemas ambientais, somados conscientizao do homem
sobre os potenciais perigos de poluentes em ambientes aquticos, tem-se crescido o
interesse no uso dos peixes como indicadores para o monitoramento de carcingenos,
teratgenos e mutgenos presentes no ambiente. Isso se deve, principalmente, pelo fato
de ambientes aquticos servirem com repositrios convenientes para dejetos biolgicos
e tecnolgicos do homem (KRISHNAJA; REGE, 1982).
De acordo com Kligerman (1982) a Cincia da Toxicologia aqutica tem-se
desenvolvido no sentido de conhecer os efeitos dos impactos biolgicos nos
ecossistemas aquticos. Trazendo novas informaes sobre as aes antropognicas
que afetam esses ecossistemas, os peixes tm sido os organismos mais usados em tais
estudos, porque so ecologicamente e economicamente importantes nesses sistemas,
alm do que so muito sensveis s adversidades do ambiente. Assim, os peixes tm
um papel importante nos estudos da toxicologia aqutica, atuando como elementos de
monitorizao da poluio ambiental (HOSE et al., 1987; HOOFTMAN e RAAT, 1982; DAS e
NANDA, 1986).

Teste do Microncleo
Matter e Schmid (1971) verificaram em roedores a correlao entre aberraes
cromossmicas e o aparecimento de anomalias nucleares (microncleos) em eritrcitos
jovens, aps a expulso do ncleo. Os autores, utilizando vrias doses de Trenimon,
concluram que a incidncia dessa anomalia era dose dependente, e que a sensibilidade
para este ento chamado teste do microncleo era similar s tradicionais anlises
citogenticas, considerando-o como um teste rpido e simples na deteco de
mutagenicidade.
O teste do microncleo baseia-se na observao de clulas que sofrem
alteraes na distribuio de suas cromtides (efeito sobre o fuso) ou quebra de
cromtides. Durante a anfase, momento em que h a segregao dos cromossomos, os
fragmentos provenientes das quebras e de cromossomos inteiros, e que no esto
ligados pelo fuso, no acompanham a migrao para os plos da clula. Aps a
telfase, tais fragmentos cromatdicos no so includos nos ncleos das clulas filhas,
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formando um nico ou mltiplos microncleos no citoplasma dessas clulas (LEDEBUR;

1973). No caso de um efeito no fuso, como por exemplo, sob a influncia de
colchicina, h uma formao de microncleos bem maiores do que os que se formam
sob a influncia de agente clastognico (YAMAMOTO; KIKUSHI, 1980).
Os microncleos so encontrados em uma grande variedade de clulas da
medula ssea: mieloblastos, mielcitos, eritrcitos. Contudo, eles so principalmente
observados nos eritrcitos policromticos. As clulas policromticas tm um curso
mais vantajoso para este teste. Poucas horas aps as ltimas mitoses, os eritroblastos
expelem seus ncleos. Por razes desconhecidas, os microncleos mantm-se dentro
deles, e so fceis de serem detectados. Durante um perodo de 24 horas os eritrcitos
jovens tm uma colorao diferenciada de outras formas. A cor desses ento chamados
eritrcitos policromticos azulada (LEDEBUR; SCHMID, 1973). Os eritrcitos jovens
(policromticos) coram em azul-acinzentado basoflico com Giemsa, porque ainda no
perderam seus ribossomos, que perduram aproximadamente 24 horas aps a
enucleao. Aps a dissoluo dos ribossomos, a clula madura (normocromtica) cora
em laranja-rosa acidfilo (HEDDLE et al., 1983).
O teste com eritrcitos pode ser usado como uma alternativa para o teste de
aberraes cromossmicas. Uma pequena gota de sangue pode produzir milhares de
clulas vlidas para o teste, no sendo necessrios processamentos especiais, e a
contagem microscpica no requer um citogeneticista treinado. A uniformidade das
clulas do sangue perifrico permite uma contagem automtica das anomalias
nucleares satisfatoriamente. Todas estas propriedades acrescentam para a convenincia
e aplicabilidade do teste (HOOFTMAN; RAAT, 1982).
Majone et al. (1988), verificando as diferentes tcnicas de colorao para
deteco de microncleos em moluscos marinhos (Mytilus galloprovincialis), concluram
que a tcnica com Giemsa mais apropriada para estudos ambientais, sendo um
mtodo confivel e mais prtico comparados aos outros testes citogenticos.
Countryman e Heddle (1976), estudando a produo de microncleos em cultura de
linfcitos humanos expostos a radiao, concluram que o mtodo reproduz com
fidedignidade a aberrao cromossmica, sendo bastante econmico, e requer uma
menor habilidade ou percia do que o mtodo convencional de anlise de metfase,
sendo ainda 10 vezes mais rpido.
Para verificar a persistncia de microncleos em eritrcitos do sangue
perifrico, Schlegel e Macgregor (1982) retiraram amostras de sangue perifrico de
camundongo, tratados com agentes mutagnicos. Os resultados mostraram que
eritrcitos micronucleados, induzidos por agentes mutagnicos, acumulam-se no
sangue perifrico, tendo uma pequena ou nenhuma remoo dessas clulas da
circulao.
Hogstedt (1984) analisa e compara os mtodos utilizados no teste do
microncleo em linfcitos: sem a preocupao da preservao do citoplasma, e do
mtodo, onde se mantm o citoplasma do linfcito intacto. Ele conclui que o mtodo
mais preciso na identificao de microncleos o da preservao do citoplasma,
justificando-se pela dificuldade em diferenciar microncleos de ncleos fragmentados
de outras clulas, devido ausncia de citoplasma.
De acordo com o guia para a conduta do teste do microncleo em eritrcitos da
medula ssea de mamferos (MACGREGOR et al., 1987), uma substncia a ser testada
aumenta a frequncia de eritrcitos micronucleados, indicando que ela interfere na
diviso nuclear dos eritroblastos da medula, levando a um aparecimento de
fragmentos da cromatina ou cromossomos inteiros, que no se incorporaram aos
ncleos filhos. Agentes que quebram cromossomos, ou interferem no fuso, induzem ao
aparecimento de microncleos. Uma elevada frequncia de clulas micronucleadas
SCHMID,

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sugere que um desses tipos de aberraes ocorreu. Quando a freqncia de clulas

micronucleadas no elevada, pode-se concluir que os tipos de aberraes acima
descritos no ocorreram nos eritroblastos, em diviso, da medula ssea, sob as
condies de tratamento utilizados no teste.
Grisolia (2002) usando ciclofosfamida, mitomicina C e vrios pesticidas fez uma
comparao entre o teste de microncleos em ratos e peixes, sendo os resultados mais
positivos observados em Tilapia rendalli do que em ratos.

Teste do Microncleo em Peixes

Nos ltimos anos os peixes tm recebido uma ateno especial, como possveis
monitores de ambientes poludos, objetivando assim a deteco da atividade dos
agentes genotxicos no ambiente aqutico (HOOFTMAN; RAAT, 1982). A utilizao do
peixe como organismo-teste vem da importncia deste animal no estudo da toxicologia
aqutica, tendo em vista a sua susceptibilidade s adversidades ambientais e sua
facilidade tanto na manipulao em laboratrio quanto no emprego de testes
citogenticos (NEPOMUCENO, 1993).
Partindo de estudos feitos anteriormente, com microncleos em mamferos,
Hooftman e Raat (1982) empregaram o teste do microncleo em eritrcitos do sangue
perifrico de peixe, chegando concluso de que o teste poderia ser usado como uma
alternativa no teste de aberraes cromossmicas.
Danos mutagnicos em peixes podem ser avaliados usando-se vrios mtodos.
Entre os mtodos citogenticos, o teste do microncleo em eritrcitos tem se mostrado
ser simples, confivel e sensvel (KLINGERMAN, 1982).
Landolt e Kocan (1983 apud HOSE et al., 1987) classificaram o teste do
microncleo como uma das mais promissoras, barata e rpida tcnica, aplicvel para
avaliao a exposio por contaminantes para peixes marinhos e de gua doce.
Segundo Hose et al. (1987), este aplicado independentemente de caractersticas
cariotpicas, e igualmente aplicvel para qualquer espcie de peixe.
Manna et al. (1985), utilizando tilpias (Oreochromis mossambica), mostraram que
a freqncia de aberraes cromossmicas induzidas pela mesma dose de Raios-X, no
epitlio branquial, foi mais alta do que a frequncia de microncleos em eritrcitos
perifricos, mas afirmaram tambm que um meio rpido de detectar a presena de
agentes genotxicos no ambiente aqutico.
Hose et al. (1987) aplicaram com sucesso o teste do microncleo para a deteco
de microncleos em eritrcitos de peixes de ambientes poludos no Sul da Califrnia.
Um aumento significativo na frequncia de microncleos em peixes coletados em
ambiente contaminado, comparado com peixes coletados em locais de referncia, foi
observado. Neste estudo, os autores encontraram dois tipos de microncleos: unidos
ao segmento nuclear, semelhante aos descritos por Hooftman e Raat (1982), e
fragmentos isolados do ncleo, como microncleos de clulas de mamferos.
Nepomuceno e Span (1992) verificaram uma elevada frequncia de
microncleos em eritrcitos circulantes de tilpias (Oreochromis mossambicus)
provenientes das Estaes de Piscicultura do IBAMA (Uberlndia/MG) e da Estao de
Piscicultura da Fazenda Experimental do Glria da Universidade Federal de
Uberlndia (Uberlndia/MG). De acordo com os autores, os resultados observados
comprovam o emprego do teste do microncleo como sendo um instrumento de
monitoramento rpido, e os peixes como biomonitores eficientes para detectar a
presena de agentes genotxicos no meio ambiente aqutico.
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Nepomuceno et al. (1997) demonstraram em Cyprinus carpio expostos ao

mercrio metlico, nas doses 2, 20 e 200 mg Hg/litro de gua, durante um perodo de
159 dias, um aumento na frequncia de microncleos nas mais altas concentraes (20 e
200 mg Hg/litro de gua). Nesse estudo, os autores consideraram o teste do
microncleo em peixes como um efetivo teste de curta durao para o monitoramento
de ambientes aquticos poludos.
A presena de produtos qumicos carcingenos no meio ambiente vem sofrendo
um crescente aumento devido atividade humana, tanto rural e industrial quanto
urbana. A deteco destes produtos e seus provveis efeitos nos organismos so
importantes no estudo do impacto que eles podem trazer s populaes animal,
vegetal e humana (COSTA; MENK, 2000).
Diante do exposto, esta pesquisa teve como objetivo avaliar os possveis efeitos
genotxicos da poluio aqutica em peixes do rio Paranaba, regio de Patos de
Minas/MG, por meio do teste do microncleo.
Material e mtodos
Neste trabalho foram utilizados peixes da espcie Pimelodus maculatus, por ser
uma espcie comum na regio e de fcil captura. Esta espcie popularmente
conhecida por mandi-amarelo.
Os peixes foram coletados no rio Paranaba, montante e jusante da cidade de
Patos de Minas/MG, e no crrego Caxambu, municpio de Lagamar/MG. No rio
Paranaba foram coletadas duas amostras de peixes: uma amostra 1000 metros acima
do primeiro ponto de lanamento de efluentes da cidade no rio e outra a 500 metros
abaixo do ltimo ponto de lanamento de efluentes. A amostra de peixes coletados no
crrego Caxambu foi composta por onze peixes de ambos os sexos. A amostra de
peixes coletada no rio, montante, foi composta de seis peixes, e a amostra coletada
jusante foi composta de dez peixes, tambm de ambos os sexos. As amostras de peixes
do rio constituram os grupos de estudo.
De cada peixe capturado foi feita a coleta de sangue perifrico para confeco
de esfregaos em lminas (duas por peixe); em seguida, os peixes foram devolvidos ao
seu habitat. O sangue foi obtido conforme metodologia descrita por Nepomuceno
(1993). Esta metodologia consiste em fazer uma puno na regio branquial, regio rica
em vasos sangneos. O toque com biseu da agulha nas lminas branquiais provoca
um pequeno sangramento, em que se obtm uma gota de sangue necessria para a
confeco do esfregao sanguneo.
A agulha e a seringa, empregadas na coleta, foram as mesmas para todos os
peixes. Porm, procedeu-se uma rpida lavagem com soluo fisiolgica aps a coleta
do sangue de cada peixe. Nepomuceno (1993), usando esta tcnica em estudos com
tilpias, relatou que nenhuma estrutura semelhante a tipo celular, muito menos
hemcias, foi encontrada. Tambm no foi utilizado anticoagulante, pois o sangue era
rapidamente colocado sobre a lmina e, posteriormente, distendido sobre a mesma.
As amostras de sangue foram fixadas 24 h aps a coleta com metanol puro por 5
minutos; posteriormente estas amostras foram ento coradas com Giemsa e tampo
fosfato (pH 6,8) na proporo de 1:20, durante 10 minutos. Estas amostras de sangue
foram analisadas no microscpio ptico de luz, com aumento da objetiva de imerso
(100 X).
O nmero de microncleos (MN) e de clulas micronucleados (CMN) foi
determinado a partir de mil (1000) eritrcitos por lmina. As lminas foram codificadas
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e numeradas usando teste cego, sendo analisados um total de dois mil (2000) eritrcitos
por peixe.
A anlise estatstica dos dados foi feita de acordo com o teste condicional para a
deteco de eventos raros (PEREIRA, 1991), por meio do qual possvel dizer se a
diferena na frequncia de microncleos entre os grupos significativa.
O nmero de eritrcitos analisados, utilizando peixes como biomonitor,
bastante variado: Hooftman e Raat (1982) utilizaram 5000 eritrcitos por animal; Das e
Nanda (1986) analisaram 4000 eritrcitos por animal; Hose et al. (1987) utilizaram 1000
eritrcitos por animal; Nepomuceno (1993) analisou 6000 eritrcitos por animal e
Grisolia (2002) utilizou 3000 eritrcitos por animal.

Resultados e discusso
O nmero de microncleos e de clulas micronucleadas foi mais elevado nos
grupos amostrados no rio Paranaba do que no grupo amostrado no crrego Caxambu,
local de referncia (Tabela 1). O mesmo observado para a freqncia mdia de
microncleos e clulas micronucleadas, expressa por mil. A frequncia mdia
microncleos e de clulas micronucleadas no grupo amostrado jusante do rio foi
menor que a frequncia mdia no grupo amostrado montante. A incidncia de
microncleos foi 4,8 e 4,5 vezes maior nos grupos do rio, montante e jusante, que no
grupo amostrado no crrego, respectivamente.
A anlise estatstica dos resultados demonstrou que a frequncia de
microncleos e clulas micronucleadas foi significativamente maior nos grupos
amostrados no rio, montante e jusante, quando comparado com o grupo amostrado
no crrego Caxambu (Figura 1). O grupo de peixes amostrado montante da cidade de
Patos de Minas apresentou maior incidncia de microncleos do que o grupo
amostrado jusante da mesma cidade. No entanto, esta diferena na foi significativa.
Os nveis de significncia descritos para todas as comparaes tiveram valor de P<
0,05, evidenciando o potencial genotxico do meio ambiente aqutico do rio.

Tabela-1 Frequncia de microncleos (MN) e clulas micronucleadas (CMN) %o em eritrcitos

perifricos de mandi-amarelo (Pimelodus maculatus) coletados no crrego Caxambu (1) e no rio
Paranaba montante (2) e jusante (3) da cidade de Patos de Minas/MG.

Local

Crrego Caxambu (1)

Rio Paranaba (2)
Rio Paranaba (3)

No. de
Total de Total de Total de
indivduos clulas MN
CMN
11
6
10

22000
12000
20000

56
144*
226*

55
144*
222*

X (%o)
SD
MN

CMN

2,5
1.01
12
3.38
11,3
3.74

2,5
1.06
12,0
3.38
11,1
3.52

* Diferena estatisticamente significativa quando comparada com o grupo amostrado no crrego

Caxambu ao nvel de significncia
= 0,05.

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Figura 1. Frequncia de microncleos e clulas micronucleadas (%o) em eritrcitos perifricos

de mandi-amarelo (Pimelodus maculatus) coletados no crrego Caxambu (1) e no rio Paranaba
montante (2) e jusante (3) da cidade de Patos de Minas, MG.

A diferena significativa encontrada entre os grupos de peixes amostrados no

rio Paranaba e o grupo amostrado no crrego Caxambu, evidencia a presena de
substncias e ou condies ambientais com potencial genotxico, capaz de causar dano
ao material gentico dos peixes.
Hose et al. (1987), Saotome e Hayashi (2003) e Bucker e Conceio (2004), em
trabalhos semelhantes, utilizando o teste do microncleo em outras espcies de peixes
e locais, tambm obtiveram resultados positivos conforme descrito a seguir: Hose et al.
(1987) observaram, em sua pesquisa com peixes no sul da Califrnia, um aumento
significativo na frequncia de microncleos dos peixes coletados em ambiente
contaminado, comparado com peixes coletados em locais de referncia, ou seja, sem
poluentes; Saotome e Hayashi (2003) obtiveram resultados positivos em estudo de
induo de microncleos em Hemicentrotus pulcherrimus exposto s guas poludas da
baa de Tquio, em condies de laboratrio. Amostras de gua da Bacia de Tquio
induziram microncleos numa frequncia variando de 3,8 a 24,8%; Bucker e Conceio
(2004), empregando o teste do microncleo em eritrcitos perifricos de tilpias juvenis
(Oreochromis mossambicus) expostas s guas do rio Itaja-A/SC, usando tanques de
500 l e diferentes tempos de exposio (Tempo Zero T0, 24 horas, 48 horas, 72 horas e
10 dias de exposio), observaram uma diferena significativa no nmero de
microncleos quando comparado ao controle negativo (To).
Os eritrcitos de mandi-amarelo (Pimelodus maculatus) analisados
apresentavam-se, em sua maioria, de forma circular, com ncleos ovalados e
centralizados no citoplasma. Isto tornou mais fcil a contagem dos microncleos e das
clulas micronucleadas. Foram observados microncleos quase unidos ao ncleo e
separados do mesmo, dispersos pelo citoplasma da clula e com tamanhos semelhantes
aos descritos por Hose et al. (1987), ao analisarem eritrcitos perifricos de peixes
coletados em reas contaminadas no sul da Califrnia, e aos descritos por Hooftman e

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Raat (1982), ou seja, microncleos unidos ao segmento nuclear e fragmentos isolados

do ncleo, como microncleos de clulas de mamferos.
A identificao de substncias potencialmente genotxicas no foi objeto deste
estudo, mas a presena de substncias e condies ambientais que podem ter tal efeito
relatado em trabalhos de monitoramento das guas do rio Paranaba.
De acordo com a Fundao Estadual do Meio Ambiente, em 2000, as guas do
rio Paranaba, jusante da cidade de Patos de Minas, apresentavam um ndice de
qualidade ruim. A contaminao por txicos era mdia e com ocorrncia acima dos
limites tolerveis para classe de: cobre, coliformes fecais, fosfato total, mangans e
turbidez. O ndice de qualidade da gua, o IQA, reflete a contaminao por esgotos e
outros materiais orgnicos, por nutrientes e por slidos. J a contaminao por txicos
avaliada considerando-se os seguintes componentes: amnia, arsnio, brio, cdmio,
chumbo, cianetos, cobre, cromo hexavalente, ndice de fenis, mercrio, nitritos e
zinco. Em funo das concentraes observadas, a contaminao caracterizada como
baixa quando (< 20%), mdia (20 a 100%) ou alta (> 100%) (FEAM, 2004).
Caixeta (2002), avaliando as propriedades fsicas, qumicas e biolgicas das
margens do rio Paranaba, afim de um diagnstico cientfico de degradao ambiental,
constatou: ausncia da vegetao ciliar em vrios pontos; presena de lixo de maneira
esparsa no leito do rio; espumas amarelas e brancas no naturais; e existncia de
microorganismos indicadores de poluio fecal (bactrias do grupo coliforme) nas
proximidades dos emissrios de esgoto. Tambm foi constatada a existncia de vinte e
dois (22) emissrios de esgoto neste trecho, sendo que dois so os crregos Ftima
Porto e Cadeia.
Cambraia e Silva (2000) tambm observaram que em alguns pontos do rio,
prximos aos emissrios de esgoto, foram obtidos resultados abaixo de 5 mg/L para
anlises de OD (Oxignio dissolvido) da gua do rio Paranaba, o que de acordo
deliberao normativa do COPAM 010/86 torna-a invivel ao desenvolvimento de
organismos aquticos. Quanto aos resultados de DQO (Demanda Qumica de
Oxignio), estes autores concluram que as guas esto contaminadas por dejetos
advindos de esgoto. A mdia encontrada foi de menos que 5 mg/L, o que indicativo
de contaminao.
Outra fonte de contaminao do rio que pode ter um efeito genotxico sobre os
peixes seria a contaminao por agrotxicos, em funo de seu uso indiscriminado.
Segundo o engenheiro agrnomo Vargas, de Patos de Minas, este mais um dos
problemas presentes na bacia do rio Paranaba (WERNECK, 1994).
Metcalfe (1989 apud BUSS et al., 2003) relata que o uso das respostas biolgicas
como indicador de degradao ambiental vantajoso em relao s medidas fsicas e
qumicas da gua, pois estas registram apenas o momento em que foram coletadas,
como uma fotografia do rio, necessitando assim de um grande nmero de anlises para
a realizao de um monitoramento temporal eficiente. De acordo com Buss et al. (2003),
mesmo em casos de lanamentos contnuos, dentro das normas estabelecidas por lei, o
uso da biota aqutica uma importante ferramenta na avaliao da qualidade da gua.
Isso se deve a um processo natural denominado biomagnificao, que a transmisso
de compostos que no so metabolizados ou excretados pelos organismos para o nvel
superior da cadeia trfica. Em alguns casos, esses compostos podem ser txicos se
acumulados, como no caso de metais pesados e de pesticidas organoclorados. Portanto,
mesmo estando dentro das normas legais de lanamento, esses efluentes podem estar
degradando as inter-relaes biolgicas, extinguindo espcies e gerando problemas de
qualidade de vida para as populaes que utilizam aquele recurso.
Devido baixa sensibilidade do teste e aos resultados verificados neste estudo,
pode-se considerar que a concentrao de agentes clastognicos e aneugnicos,
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presentes na gua do rio Paranaba alta, induzindo frequncias de microncleos de

12,0 %o e 11,3%o nos grupos amostrados montante e jusante, respectivamente.
Valores estes estatisticamente significativos quando comparados com a frequncia de
microncleos do grupo amostrado no crrego Caxambu (2,5%o). Isto mostra a
importncia dos peixes no biomonitoramento ambiental e comprovam o emprego do
teste do microncleo como um instrumento de monitoramento rpido e fcil,
corroborando com Hose et al. (1987), que afirmam ser o teste do microncleo um teste
rpido e uma ferramenta para monitoramento e deteco da presena de agentes
gentoxicos no ambiente.

Concluses
O teste do microncleo, utilizando o peixe mandi-amarelo (Pimalodus
maculatus), mostrou-se um teste rpido e prtico para o monitoramento da poluio de
ambientes aquticos.
A frequncia de microncleos, significativamente superior nos peixes do rio
Paranaba, evidencia a presena de substncias poluentes capazes de causar dano ao
material gentico destes peixes.
Agradecimentos
Polcia Especializada do Meio Ambiente de Minas Gerais (PMMG), pelo
apoio tcnico em algumas etapas do estudo.

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