UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA

Facultad de Ingeniera Ambiental

MICROBIOLOGA SANITARIA I

INFORME DE LABORATORIO N11

Ttulo:
Control Microbiolgico de Ambientes, Superficies y
Manipuladores.
Docente:
MSc. Martn Martnez Vila
Integrantes:
Vsquez Pea Julian Gustavo 20132141E
Flores Crdenas Karen Kimberly 20123502I

2015

INFORME DE LABORATORIO N11

I.

2015

OBJETIVOS
Comprender el rol que cumplen los microorganismos en la contaminacin del
aire, superficie y los manipuladores.
Establecer la importancia de la educacin sanitaria.
Aplicar las tcnicas, metodologas adecuadas para el control microbiolgico
del ambiente, superficie y manipuladores.

II.

MARCO TEORICO

Procedimiento para la seleccin de la muestra

El procedimiento para seleccionar muestras, debe estar en funcin de los riesgos
sanitarios relacionados a las diferentes etapas de la cadena alimentaria, sea de la
fabricacin, de la elaboracin y/o expendio.
En fbrica de alimentos y bebidas
a) Superficies inertes
Se seleccionarn aquellas que estn o tendrn contacto directo con los
alimentos que no sern sometidos a un proceso trmico posterior u otro
tratamiento que disminuya la carga microbiana.
b) Superficies vivas
En establecimientos de elaboracin y expendio
a) Superficies inertes
Se seleccionarn aquellas superficies que estn en contacto con los alimentos
destinados al consumo directo, como utensilios, vajilla, superficies de corte,
menaje, quipos, entre otros.
b) Superficies vivas
Se seleccionarn las manos de los manipuladores, con o sin guantes, que estn
en contacto con los alimentos destinados al consumo directo.
Seleccin del mtodo del muestreo
La seleccin del mtodo del muestreo debe estar en funcin de las caractersticas de la
superficie a muestrear.

INFORME DE LABORATORIO N11

Mtodo del muestreo

Mtodo del hisopo

Mtodo de la esponja
Mtodo del enjuague

2015

Superficies a muestrear
Se utiliza para superficies inertes regulares e
irregulares, tales como tabla de picar, cuchillas de
equipos, cortadoras de embutidos, cortadora de pan
molde, fajas transportadoras, tolvas, mezcladoras,
pisos, paredes y otros.
El mtodo de la esponja se utiliza preferentemente
para muestrear superficies de mayor rea.
Se utiliza para superficies vivas (manos) y para objetos
pequeos o para muestreo de superficies interiores de
envases, botellas, botellas de plstico, etc.

AGAR TSA
El TSA Agar es un medio de uso general que permite el
crecimiento tanto de microorganismos exigentes como no
exigentes, que incluyen bacterias aerobias y anaerobias.
Permite visualizar reacciones hemolticas que producen muchas
especies bacterianas. Tiene por base una fuente proteica
(digeridos trpticos, digeridos proteicos de soja) con una
pequea cantidad de hidratos de carbono naturales, cloruro
sdico y 5% de sangre. Es un medio recomendado para la
deteccin y recuento de una amplia gama de microorganismos. La presencia de Lectina
y Tween permite neutralizar la actividad antibacteriana, facilitando la investigacin de
los grmenes en productos o superficies que contengan: Aldehdos, derivados
fenlicos, o amonio cuaternario.
La aportacin de casena y peptonas de soja al Agar de Tripticasa-soja hace el medio
muy nutritivo por el suministro de nitrgeno orgnico, particularmente aminocidos y
pptidos de cadena ms larga. La presencia de estas peptonas en el medio permite el
cultivo de una gran variedad de grmenes aerobios y anaerobios que crecen
rpidamente, as como los del gnero Candida. Tambin permite el crecimiento de
algunos grmenes exigentes como estreptococos, pneumococos, Brucella,
corinebacterias, Erysipelothrix y Pasteurella.

INFORME DE LABORATORIO N11

2015

AGAR SABOURAUD
El agar Sabouraud es un tipo de medio de cultivo selectivo que
contiene peptonas. Es utilizado para el cultivo de hongos,
especialmente dermatofitos, aunque tambin pueden
desarrollarse en l cierto tipo de bacterias filamentosas tales como
Nocardia.
Fue utilizado por primera vez por Raymond Sabouraud en 1892. Ms tarde Chester W.
Emmons mejor el medio acercando el pH al neutro y disminuyendo el nivel de glucosa
para permitir el crecimiento de otros subcultivos de hongos.
MANITOL SALADO
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el
aislamiento y diferenciacin de estafilococos. Es recomendado
para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir de
muestras clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros
materiales de importancia sanitaria. Tambin, este medio
puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas de Vibrio,
si no se dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio
Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. Los
estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las
colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa
negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias
sospechosas, se repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles,
posteriormente, la prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de
carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono
fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el agente
selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador
de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el
manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de
pH del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el
manitol.

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2015

Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias

amarillas rodeadas de una zona del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas,
rodeadas de una zona del mismo color o prpura.

III.

MATERIALES Y EQUIPOS
Tubos de ensayo 16 x 150mm con 10ml de agua peptonada (0.1%) ms tween
80 (1%).
Tubos de ensayo 15 x 150mm con 10ml de agua peptonada (0.1%).
Torundas estriles con vstego de madera.
Plantillas de hojalata o aluminio de 10cm x 10cm (100cm2).
Esptula Drigalsky.
Incubadora 35oC.
Pipetas bacteriolgicas 1ml.
Refrigeradora.
Bao Mara a 46oC.
Agar TSA en placa Petri estril (recuento de hetertrofos).
Agar Endo en placa Petri estril.
Agar Manitol Salado en placa Petri estril. (para aislar estafilococos).
Agar sabourand glucosado en placa Petri estril.

IV.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

A. Anlisis de Superficies
Mtodo del hisopado (torundas):
Humedecer la torunda que contiene la muestra en el tubo de ensayo que
contiene agua peptonada con twin80 (10ml).
Sostener la torunda con un ngulo de 30 y pasarlas por el rea (100cm2) de
la plantilla de tres formas diferentes, el primer hisopo de forma vertical, el
segundo hisopo de forma horizontal y el ltimo hisopo de forma diagonal.
Romper el vstago el interior del tubo de ensayo (realizar este proceso es las
proximidades de la llama de un mechero bunsen para evitar el crecimiento
de otro tipo de microorganismos). Agitar por 20 minutos para homogenizar
la muestra.

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2015

SIEMBRA POR DISEMINACION

Primero se coloca el inoculo (0,1 ml) en la placa Petri con los agares ya
preparados y con la ayuda de una pipeta estril, ir diseminando el inoculo
con una esptula de Drigalsky correctamente esterilizada. Esto se realiza en
la proximidad de las llamas del mechero.
Realizar este proceso con todos los agares a usar.
Dejar enfriar los agares e incubar las placas a 35oC por 48 horas en caso de
los agares TSA, ENDO y Manitol salado. Invirtiendo la placa.
Incubar a temperatura ambiente 20 22oC por 4 das en caso del agar
Sabourand Glucosado. Sin invertir la placa.
Contar colonias y expresar UFC / cm2.
/2 =

10 10
1002

B. Control higinico de manipuladores

MUESTREO DE MANIPULADORES
Coger una torunda esterilizada y humedecer la torunda con la muestra en
el tubo de ensayo que contiene agua peptonada con twin80 (10ml).
Frotar completamente la torunda humedecida por la mano de una de las
personas que est realizando el experimento.
Romper el vstago el interior del tubo de ensayo (realizar este proceso es las
proximidades de la llama de un mechero bunsen para evitar el crecimiento
de otro tipo de microorganismos).
Agitar por 20 minutos para homogenizar la muestra. Revivificar.
Realizar el proceso de SIEMBRA POR DISEMINACION en los mismos
agares.
Reportar UFC / mano.
/ =

10 10

C. Control microbiolgico de ambientes (aire)

Mtodo de sedimentacin:
Elegir zonas estratgicas del ambiente.
Colocar placas Petri con los medios de cultivo slidos indicados (ASG, TSA,
Manitol salado y Endo) con las tapas retiradas por 20 minutos.
Colocar las tapas e incubar pacas.
Bacterias: a 35oC por 48 horas.

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V.

Hongos: a 20-22oC por 4 das.

Recuento: UFC / 20min.

RESULTADOS
Ambiente

ENDO
TSA
MS
ASG

2015

Superficie

Limpio
10 colonias
Limpio
3 moho verde

ENDO
TSA
MS
ASG

Limpio
Incontables
Incontables
31 levaduras

2 moho blanco
3 levaduras

Mano
ENDO
TSA
MS
ASG

VI.

Limpio
Incontables
2 colonias
40 levaduras
1 moho

CONCLUSIONES

No hubo presencia de coliformes en el ambiente (Laboratorio de microbiologa)

Existe presencia de hongos en el laboratorio
Existe crecimiento de hongos en las tres mtodos analizados

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VII.

2015

RECOMENDACIONES

Tomar las superficies con cuidado de manera horizontal, vertical y en diagonal

Agitar el tiempo suficiente para que se puedan formar las colonias.

Todo proceso se debe hacer en presencia del mechero

VIII. BIBLIOGRAFA

o http://www.primuslabs.com/spanish/services/guia_de_muestreo_para_sup
erficies.pdf

ANEXOS