LABORATORIO DE FISIOLOGA VEGETAL

DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE AGUA EN LAS PLANTAS

DETERMINACIN DEL POTENCIAL DE AGUA TOTAL
OBSERVACIN DE ESTOMAS A TRAVS DEL MICROSCOPIO
KATTERINE PAEZ DIAZ
ESTUDIANTE EN TECNOLOGA EN PRODUCCIN AGRCOLA
DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA
RESUMEN
En el laboratorio de fisiologa vegetal de
la universidad nacional abierta y a
distancia realizamos el trabajo propuesto
por el profesor German Castellanos,
titulado Determinacin del contenido de
agua en las plantas donde se cortaron
pedazos de diferentes especies de
hortaliza de 1 cm y estos se dejaron
durante dos horas en cajas de Petri con
solucin salina , Determinacin del
potencial de agua total se prepararon
muestras de papa de 1 cm en cajas de
Petri con solucin salina , se realiz el
mtodo de coloracin Shardakov, por
ultimo observamos los estomas de la
especie lirio a travs del microscopio.

Pf = Peso fresco
Ps = Peso seco (a 85C hasta peso
constante).
Sin embargo, esta medida es imprctica
porque no se pueden hacer comparaciones
con otras medidas de contenido de agua
en las mismas plantas o con otras
especies.
El contenido de agua se puede expresar
con base en peso seco o peso fresco; es
decir:
Formula:

PFPS
X 100
PS

PFPS
X 100
PF

INTRODUCCIN
DETERMINACION DEL CONTENIDO
DE AGUA EN LAS PLANTAS

El contenido de agua es la medida ms

comn para estimar el grado de
hidratacin de las plantas.
Por lo general, ste se expresa en
trminos relativos, en relacin con la
mxima capacidad de agua que los tejidos
vegetales pueden almacenar, y se expresa
de manera sencilla as:
= Pf - Ps
Donde:
= Contenido de agua en gramos

Sin embargo, estas dos expresiones

tambin subestiman o sobreestiman el
contenido de agua porque al expresarlo
con base en peso seco, este tiende a
cambiar diaria o estacionalmente, y al
expresarlo con base en su peso fresco, los
problemas de cambio de peso se
minimizan, pero tambin tiende a
minimizar cambios importantes en el
contenido de agua.
Para evitar estos errores, l se expresa
con base en su peso trgido (Pt) que es el
peso del tejido a su mxima turgencia. De

esta manera el se llama ahora

"contenido relativo de agua (CRA)" o
"dficit de saturacin de agua (DSA)".
CRA=

PFPS
X 100
PT PS

DSA=

PT PF
X 100
PTPS

DSA = 100-CRA

CRA: Contenido
Agua
PF: Peso Fresco
PS: Peso Seco
PT: Peso Turgente

Relativo

de

DETERMINACIN DEL
POTENCIAL DE AGUA TOTAL
La energa libre del agua es un concepto
termodinmico que se usa para expresar
la capacidad que tiene el agua para
realizar trabajo dentro del sistema de la
planta (potencial qumico) y ms
apropiadamente se le llama "potencial de
agua" (A). El A es la diferencia entre
el potencial qumico del agua en el
sistema y el potencial qumico del agua
pura a la misma temperatura, y se expresa
de la siguiente manera:
RT
e
Potencial de agua = Va ln e
Donde:
R = Constante de los gases
V = Volumen parcial molar
T = Temperatura absoluta
e = Presin de vapor del agua en el
sistema
e = Presin de vapor a saturacin del
agua pura.

El A en plantas integra el efecto de

varios componentes: potencial osmtico
(o), potencial de turgencia (t),
potencial matricial (m) y potencial
gravitacional
(g).
El
potencial
gravitacional se puede eliminar porque
slo representa una fuerza de 0.01
Megapascales (MPa) por metro y la
contribucin del potencial matricial
tambin es despreciable con valores
cercanos a cero. Finalmente, el A total
de un tejido est expresado por los
componentes: potencial osmtico (o) y
potencial de turgencia (t).
A = o + t

Se supone que el A puro a la

temperatura y presin estndar es igual a
cero, por lo tanto, el A de las plantas es,
por lo general, negativo y se usan
unidades de presin para expresarlo:
1 baria = 1.0 X 10 dyn/cm = 1.0 X 10
N/m
= 0.987 atm = 1017 cm de agua = 75.0
cm Hg
= 14.50 Ib/pulg. = 10 Pa = 0.1 MPa = 100
J/Kg.
Mtodo de cambio de peso
Este mtodo para determinar el potencial
de agua (A) es uno de los ms antiguos.
Se basa en el hecho de que los tejidos
vegetales ganan o pierden agua, cuando
se les coloca en soluciones que tienen un
potencial osmtico (o) conocido como
sacarosa, manitol o polietiln glicol. Las
soluciones con una concentracin
conocida se utilizan para ceder o absorber
agua del tejido vegetal que se coloca en
ellas. La finalidad de este mtodo es
encontrar una solucin en la cual el tejido
no modifique su peso. Esto indica que no

hubo ni prdida ni ganancia de agua y que

el tejido y la solucin estn en balance,
por lo tanto, el A del tejido es igual al
A de la solucin. Este mtodo, basado
en el cambio de peso, puede ser muy til
cuando no se tiene otros instrumentos que
ayuden a precisar el A.

Mtodo de coloracin de
Shardakov
Este mtodo consiste en sumergir
muestras de tejido vegetal durante algn
tiempo en un gradiente de concentracin,
de soluciones de sacarosa, manitol o
polietilen-glicol. Las soluciones ganarn
o perdern agua (disminuyendo y
aumentado su densidad respectivamente),
esto depende del potencial del agua A
del tejido. Si la densidad de la solucin no
cambia, esto indica que el tejido y la
solucin tienen el mismo A. La presin
de turgencia, la transpiracin, los
componentes del soluto y la hidratacin
son factores que influyen en el potencial
hdrico de una planta.
En el laboratorio se determinar el
potencial
hdrico
a
diferentes
concentraciones de sacarosa y se
analizar qu sucede en cada una de ellas.
Fenmenos osmticos
Osmosis es la difusin de una sustancia a
travs de una membrana semipermeable,
es decir, aquella que deja pasar los
solventes pero no los solutos. En las
clulas vegetales ocurre smosis porque
las membranas citoplasmticas no dejan
pasar numerosas sustancias disueltas en
las vacuolas, lo cual determina la
existencia de una menor energa libre del
agua en su interior, provocando la entrada
de agua a la clula; a medida que esta
agua entra, el protoplasma es presionado

contra la pared celular limitando ella su

grado de expansin. Dicha presin se
denomina "presin de turgencia" y es el
producto, a su vez, de la presin osmtica
del contenido celular.
El termino o conocido como potencial
de solutos o potencial osmtico,
representa el efecto de la disolucin de
solutos sobre el potencial hdrico. Los
solutos reducen la energa libre del agua
por su dilucin. Este efecto es
esencialmente un efecto entrpico; es
decir, la mezcla de solutos yagua aumenta
el desorden (entropa) del sistema y,
consecuentemente, disminuye la energa
libre. El efecto entrpico de los solutos
disueltos tambin se observa en otros
efectos
fsicos,
conocidos
como
propiedades coligativas de las soluciones:
los solutos disminuyen la presin de
vapor de las soluciones, aumentan su
punto de ebullicin y disminuyen su
punto de congelamiento.
Para soluciones diluidas de sustancias no
disociadas, el potencial osmtico puede
ser estimado por la ecuacin de Van't
Hoff:
o = - RTCs

Donde:
R = constante de los gases (8,32
Lmolv.k': 0,00831Kg.MPa.moll.okl)
T = temperatura absoluta en grados
Kelvin
Cs = concentracin de solutos de la
solucin expresada como osmolalidad
(moles de solutos totales disueltos por
litro de agua [mol.L:']).
OBSERVACIN DE ESTOMAS A
TRAVS DEL MICROSCOPIO

Los estomas estn presentes en las hojas

de todas las plantas superiores y en
rganos de plantas primitivas tales como
musgos y hepticas. Se trata de pequeas
aberturas
que
se
encuentran
principalmente en la epidermis de las
hojas y de algunos tallos jvenes y que
estn flanqueadas por dos clulas
epidrmicas especializadas que reciben el
nombre de clulas guarda. Su funcin es
doble: permitir el intercambio gaseoso y
mantener un adecuado nivel hdrico en la
planta. Normalmente estn en el envs y
en ocasiones en el haz y el envs, aunque
en este caso son ms numerosos en el
envs. En ocasiones slo hay en el haz.
Tambin, a veces, como ocurre en la
adelfa, Nerium oleander, pueden estar
encerrados
en
unas
depresiones
denominadas criptas estomticas, lo que
parece ser una adaptacin a las
condiciones de sequedad ambiental. En el
caso del olivo, estn recubiertos por una
serie de tricomas pluricelulares que se
asemejan a las sombrillas de playa. Las
clulas guarda, tambin llamadas
oclusivas, suelen tener (aunque no
siempre) dos caractersticas que las
diferencias del resto de las clulas
epidrmicas:
a) No estn conectadas con las
clulas vecinas a travs de
plasmodesmos.
b) Tienen cloroplastos.
MATERIALES Y METODOS.

Material vegetal
Cajas de Petri
Balanza
Papel secante
Solucin salina 0,8, 0,5 0,2 0,1
0,05
H2O destilada
Tubos de ensayo

Pipeta
Azul de metileno
Porta objetos
Cubreobjetos
Microscopio
Agitador magntico de laboratorio
Matraz volumtrico 100 ml
Probeta
Gradilla

RESULTADOS

DETERMINACIN DEL
CONTENIDO DE AGUA EN LAS
PLANTAS

Material vegetal:
Repollo (Brassica
oleracea var. capitata L.)

PF: 1, 6 gr
PT: 1, 8 gr
PS: 0, 1748 gr

CRA=

1,6 gr 0,1748 gr
X 100
1,8 gr 0,1748 gr

CRA=

1,4252 gr
X 100
1,6252 gr

CRA = 87, 69%

 Mtodo de cambio de peso:

Lechuga crespa (Lactuca sativa)

PESOS PAPA SOLUCIN NaCl

PF: 0, 9 gr
PT: 1, 0 gr
PS: 0,0824gr

CRA=

0,9 gr 0,0824 gr
X 100
1,0 gr 0,0824 gr

0,8176 gr
CRA=
X 100
0,9176 gr

CRA = 89,10 %

Acelga (Beta vulgaris var. Cicla)

PF: 0, 6 gr
PT: 0,7gr

Solucin
Nacl

Peso
inicial

Pesos
final

Cambio
peso

0,8

1,5 gr

1,7 gr

0,2 gr

0,5

1,5 gr

1,4 gr

0,1 gr

0,2

1,0 gr

1,1 gr

0,1 gr

0,1

1,3 gr

1,1 gr

0,2 gr

0.05

1,0 gr

1,06 gr

0,06 gr

Determinacin del porcentaje cambio

de peso:

de cambio de peso

Peso solucin NaCl 0,8

PS: 0, 0762 gr
de cambio de peso
CRA=

CRA=

0,6 gr0,0762 gr
X 100
0,7 gr0,0762 gr

0,5238 gr
X 100
0,6238 gr

CRA = 83, 96 %

DETERMINACIN DEL
POTENCIAL DE AGUA TOTAL

peso final peso inicial

X 100
peso inicila

1,7 gr 1,5 gr
X 100
1,5 gr

de cambio de peso=13,33

Peso solucin NaCl 0,5

de cambio de peso

1,4 gr1,5 gr
X 100
1,5 gr

de cambio de peso=6,66

Mtodo de coloracin de
Shardakov.
Peso solucin NaCl 0,2
Solucin de NaCl en los tubos de ensayo

de cambio de peso

1,1 gr1,0 gr
X 100
1,0 gr

dos por cada concentracin de NaCl:

de cambio de peso=10

Peso solucin NaCl 0,1

Solucin 0,8: Esta se esparce

lentamente baja y forma un aro

Solucin 0,5: Se forman anillos

se esparcen y se forman ms

de cambio de peso

1,1 gr1,3 gr
X 100
1,3 gr

anillos

Solucin 0,2 : Se esparce y

forman una capa encima

de cambio de peso=15,3

Solucin

0,1:

Se

esparce

lentamente.

Solucin 0,05: Despus de 20

segundos se forma un aro.

Peso solucin NaCl 0,1

de cambio de peso

1,1 gr1,3 gr
X 100
1,3 gr

de cambio de peso=10

Peso solucin NaCl 0,05

1,06 gr 1,0 gr
de cambio de peso
X 100
1,0 gr
de cambio de peso=6

OBSERVACIN DE ESTOMAS A
TRAVS DEL MICROSCOPIO
1. Observacin de la especie lirio al
10x
Clula
oclusiva

DETERMINACIN DEL
CONTENIDO DE AGUA EN LAS
PLANTAS

Ostiolo

Estoma
abierta

2. Observacin especie a 40 x

El agua es
el
componente
mayoritario en las hortalizas,
representado en torno al 85-95 %
de su peso, 97% del agua absorbida es
transpirada. Por cada molcula de CO2
incorporado se pierden 400 molculas de
H20.
Los resultados obtenidos en el laboratorio
nos muestran que la CRA en las hortalizas
se establece en los mtodos dichos
anteriormente
Acelga = 83, 96 %
Repollo =87, 69%
Lechuga =89,10 %

Ostiolo

Clula
oclusiva

Estoma
cerrado

Con un promedio para las hortalizas

analizadas de 86, 91 %.
El CRA es la expresin ms usada para
medir el nivel de agua de un tejido. Es la
medida del contenido de agua respecto al
total que este puede almacenar; se
expresa como porcentaje y permite
conocer el estado hdrico de la planta.
DETERMINACIN DEL
POTENCIAL DE AGUA TOTAL

ANALISIS DE RESULTADO

El tejido de papa presento cambios en

pesos tras haber sido sometido a la
solucin salina estos se reflejan en la
tabla de resultados pero estos no fueron
cambios favorables debido al tiempo que
se dej las soluciones donde no se manej
bien el procedimiento. Los cambios
tenan que haber sido de ganancia o de
estabilidad.

El potencial hdrico de una clula, es

decir su capacidad para absorber agua,
depende de los solutos disueltos
(Potencial osmtico) y de la resistencia a
la distensin que opone la pared celular, a
consecuencia del ensanchamiento de la
vacuola producido por la entrada de agua.
Esta resistencia se conoce como presin
de turgencia. El agua penetra en las
clulas vegetales por un proceso especial
de difusin llamado smosis. En las
clulas vegetales ocurre smosis porque
la membrana citoplasmtica no deja pasar
las numerosas sustancias disueltas en la
vacuola, lo que determina la existencia de
una menor energa libre del agua en su
interior, provocando su entrada a la
clula. A medida que el agua entra el
protoplasma es presionado contra las
paredes celulares, limitando ellas su
grado de expansin. Dicha presin,
presin de turgencia es producto, a su
vez, de la presin osmtica del contenido
celular. Un tejido vegetal perder agua si
se introduce en una solucin con menor
potencial hdrico, ganar agua si el
vegetal introducido en la solucin
presenta menor potencial hdrico y no
perder ni ganar agua cuando sea
introducido en una solucin con el mismo
potencial hdrico. Dicha ganancia,
prdida o estabilidad de masa puede ser
cuantificada comparando las masas de un
tejido vegetal antes y despus de ser
introducido en una solucin de potencial
hdrico conocido.
Mtodo de coloracin de
Shardakov.
Las gotas transferidas a los tubos
presentaron difusin en algunos
casos homogenizndose en las
soluciones estos comportamientos se
detallan en los resultados.

El colorante de azul de metileno

tiende a moverse en favor de un
gradiente de mayor a menor
concentracin a medida que se
alcanza un equilibrio las molculas
se mueven ms despacio cuanto
mayor sea la diferencia mayor ser
la difusin.
OBSERVACIN DE ESTOMAS A
TRAVS DEL MICROSCOPIO
Cada hoja es un rgano de nutricin
especializada, cuyo papel es la
fotosntesis, proceso que requiere un
suministro continuo de agua, energa
radiante y bixido de carbono. Por lo
general las hojas son anchas y planas,
para presentar la mxima superficie a la
luz solar para que sirva de intercambio de
gases, oxigeno, bixido de carbono y
vapor de agua. Las clulas de proteccin
en forma de haba poseen paredes ms
gruesas hacia el lado de la estoma. En
general las estomas se abren en presencia
de luz y se cierran en la obscuridad la
abertura y cierre son regulados por
cambio de la presin de turgencia en el
interior de clulas de proteccin. El
aumento de la presin de turgencia comba
las paredes externas, y curva las internas
separando unas de otras y creando la
abertura del estoma entre ellas. Cuando
disminuye la presin de turgencia en la
clula de proteccin las paredes internas,
elsticas, recuperan su forma original y la
estoma
se
cierra.
La estoma abierta permite la entrada de
bixido de carbono y capacita a la hoja
para la fotosntesis. En ausencia de luz
suspende la fotosntesis tanto en las
clulas de proteccin con en las dems; la
presin de turgencia disminuye y el
estoma se cierra.

CONCLUSIONES
Concluyendo lo primero fue que
la prctica se realiz con poco
tiempo por esto el resultado de
mtodo de cambio de peso.
Importante mencionar que el
potencial hdrico de una clula, es
decir su capacidad para absorber
agua, depende de los solutos
disueltos (Potencial osmtico) y
de la resistencia a la distensin
que opone la pared celular, a
consecuencia del ensanchamiento

de la vacuola producido por la

entrada de agua.

BIBLIOGRAFA
Cultivos Tropicales, 2006, vol. 27,
http://exa.unne.edu.ar/biologia/fisi
ologia.vegetal/Crecimiento.pdf
Hoja de ruta ;fisiologa vegetal ;
unad
fisiologa vegetal ; Fcen Bbe Uba

ANEXOS