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Temas:
1. Crear Proyecto
2. Desarrollo de Mtodos
3. Creacin de un Conjunto de Mtodos
4. Configuracin del Equipo y el Software Empower
5. Creacin de Mtodos de Proceso
5.1
1) Crear Proyecto
o Abrir el Software Empower, ingresar usuario (System) y la contrasea (manager),
luego se debe presionar OK.
Nota: desde aqu en el icono Configure System se crea el proyecto y se realizan las
configuraciones pertinentes.
o
Nota: de esta forma el proyecto ya esta creado. Una vez creado el proyecto, se debe
crear el mtodo.
2) Desarrollo de Mtodos
o Iniciar nuevamente sesin en el software Empower (escribiendo el usuario y la
clave correspondiente)
Se abrir un cuadro de dialogo (Select Project System), a partir del cual se debe
seleccionar el nombre del proyecto que fue creado anteriormente y el sistema
cromatogrfico que es Defaul y seleccionar OK.
Nota: en esta ventana programo todas las condiciones del proyecto, tanto del mtodo
instrumental (dibujo uno encerrado en el crculo) como del detector (dibujo dos encerrado
en el crculo). Las condiciones se modifican por separado (se debe hacer clic en cada
uno).
Condiciones modificadas en:
Mtodo Instrumental:
General: en esta pestaa se debe establecer el rango de la longitud de onda con
la cual deseo trabajar de comienzo a fin (start wavelength end wavelength)
Degas
Eventos
Flujo: establezco el flujo con el cual va ir pasando la fas mvil a travs de la
columna (ml/min)
Temperatura: modifico la temperatura a la cual quiero que se mantenga la
columna.
Solvente: hay cuatro recuadros (solvente A, solvente B, solvente C, solvente D)
en los cuales debo escribir la composicin de la fase mvil y la proporcin en la
que se encuentra, dependiendo de por cual canal este pasando mi fase mvil.
Canal
Detector:
General
Eventos
Canal 1
Canal 2
Nota: las condiciones indicadas, aparecen en la parte superior del software (pestaas) al
momento de hacer clic sobre cada uno de estos (mtodo instrumental o detector).
o Finalmente se debe presionar donde dice File Save as se abrir un cuadro
para guardar el mtodo instrumental (colocar el nombre), el cual estar dentro del
proyecto que se creo anteriormente.
o Una vez realizado esto, en la barra de estado (parte inferior de la pantalla) debern
aparecer los nombres asignados con el cual se guardo el mtodo (Method Set) y el
proyecto (Instrumental Method).
Nota: en el caso que el mtodo instrumental ya haya sido creado (se hayan establecido
todas las condiciones), se debe presionar el icono
abrir el mtodo instrumental que ya fue creado.
o
En
donde dice
Instrument
Method
(encerrado
en el circulo
rojo) debo
seleccionar
el nombre
del mtodo
(el cual fue
creado
En la pestaa donde dice Run Sample Sample Queue (se deben escribir,
todos los parmetros de las muestras que sern inyectadas).
Nota: Debido a que el software ajusta automticamente la escala del grafico en tiempo
real, la lnea de base puede aparecer con ruido.
o Una vez que se detiene el proceso de monitorizacin, se debe hacer clic en el
icono que dice Corrida de la muestra, es decir, se le dar partida a las
inyecciones. Una vez que doy la partida aparece un cuadro en el cual debo
especificar el nombre de la muestra (la que comenzara a correr) y luego se
presiona Run.
o Al hacer clic en el
icono Inyeccin de muestra se abrir el cuadro de
dialogo de configuracin de los parmetros de inyeccin nica (Specify Single
Inject Parameters).
NOTA: UNA VEZ QUE LAS INYECCIONES HAN SIDO GRABADAS Y COMIENZA LA
CORRIDA EL TIEMPO DE CORRIDA DE LA MUESTRA NO SE PUEDE CAMBIAR.
Nota: se debe completar con el nombre de la muestra, la funcin (en el caso que sea
estndar o muestra lo que se este inyectando), nombre del mtodo, ubicacin de la
muestra en el vial, volumen de inyeccin, tiempo de corrida de la muestra y finalmente
presionar Inject.
EL
ICONO LO PRESIONO SOLO CUANDO QUIERO IR INYECTANDO
LAS MUESTRAS UNA A UNA Y ASI EVITO COMPLETAR LA TABLA QUE APARECE AL
PRESIONAR LA PESTAA RUN SAMPLE (VENTANA DE ANALISIS DE MUESTRA)
YA QUE LA COMPLETO SOLO CUANDO QUIERO INYECTAR VARIAS MUESTRAS Y
LAS ESCRIBO TODAS DE UNA SOLA VEZ.
Nota: Es aqu donde se realiza la adquisicin de los datos, para luego poder procesarlos.
5) Creacin de Mtodos de Proceso ( Integrar los datos Calibrar los patrones
Cuantificar las muestras)
o Hacer clic en la pestaa Browse Project (en donde estarn todas las inyecciones
realizadas). En la parte superior de esta pestaa, existen subpestaas (Sample
Sets - Injections Channels Methods Result Sets Results Sign Offs
Curves).
En la subpestaa simple set aparece el nombre con que guarde las muestras
inyectadas y en la pestaa Injections aparecern cada una de las inyecciones
que fueron guardadas con el nombre de la muestra.
Una vez ubicada en la pestaa Sample Set ubico el mouse sobre el nombre de
las muestras inyectadas (quedara de color negro), luego se debe presionar el
icono que dice Review Data Process Extraer cromatograma (aqu se debe
cambiar la longitud de onda (presionar enter) a la cual quiero medir el compuesto
de inters (cromatograma en la parte superior), para ver con mayor claridad el
compuesto
en
la
muestra inyectada (cromatograma en la parte
inferior)
o Luego se deba hacer clic en Next (cuadro de dialogo: Integration peak deteccin 1)
Next Seleccionar donde dice mnima rea y hacer clic en el pic de
inters (una vez que el rea mnima haya sido seleccionada, se le debe borrar el
ultimo decimal y hacer clic en Test Next Next (aparecer un cuadro con el
nombre del pic que ha sido seleccionado junto con el tiempo de retencin de
este).
Nota: Hacer clic con el botn derecho del ratn en el grfico para tener acceso a las
opciones de zoom (Full View/Unzoom) del men contextual.
Nota: en este cuadro de dialogo, las reas de los pic ya estn seleccionadas (lneas de
color rojo, observadas en la lnea base).
o
Nota:
Hacer clic sobre un pico para el que se desee definir el rea mnima o la altura mnima. El
pico aparecer marcado de color rojo. Hacer clic en Minimum Area o Minimum Height.
El campo o campos se rellenan automticamente con un nmero que representa el 95%
de la altura o rea real del pico. Las opciones Minimum Area y Minimum Height inhiben la
integracin de los picos con reas y alturas iguales o inferiores a los valores introducidos.
Como alternativa, introducir los valores en estos campos de forma manual.
Nota: Cuando se introducen los valores en estos campos de forma manual, se activa el
botn Test y se puede hacer clic en l para visualizar los resultados obtenidos con los
valores introducidos. Si el software determina los valores, el botn Test se desactiva y la
prueba se realiza automticamente.
Cuando se obtenga una integracin satisfactoria, hacer clic en Next.
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o
Se abrir la pantalla de nombres y tiempos de retencin (Calibration Names and
Retention Times).
introducidos en la tabla. Habr una fila para cada uno de los picos integrados
visualizados en el cromatograma
Nota: las cantidades (Amount) y las unidades (Units) se deben escribir de forma manual.
o
A continuacin, hacer clic en Next. Se abrir la pantalla del nombre del mtodo de
proceso (Processing Method Name).
Nota: Se debe escribir el nombre del mtodo correspondiente y luego hacer clic en
Finish.
o
Nota: Hacer clic en la pestaa Peaks para visualizar los resultados de la integracin,
como nombres de los picos, tiempos de retencin, cantidades, etc.
6.1 Comprobacin Manual del Mtodo de Proceso
o
o
Hacer clic en
Hacer clic en
Hacer clic en
Nota: Para visualizar los resultados del proceso de datos manual, hacer clic en el icono
(icono de proceso) de la barra de herramientas. Se abrir la ventana de revisin de
datos (Review).
o
o
o
Nota: A cada una de las concentraciones que voy guardando le voy colocando un
nombre.
o
o
Luego presiono el icono donde dice Review Main Window, para regresar al
cuadro inicial en donde tengo el cromatograma (cada uno de los compuestos
identificados con sus nombres).
En el caso que se este inyectando muestra (no se conoce la concentracin), en la
parte inferior en la ventana 2D Channels, y selecciono la lnea, voy a File Save
Result (voy guardando cada uno de los compuestos que ya estn integrados).
o
o
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