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Mtodos pticos
O
HO S
HO
O
HO
O
+
N2 Cl-
HCl +
NH2
HO
N=N
NH2
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Preparacin de los patrones para la curva:
Llevar los siguientes volmenes de solucin estndar a 50 mL en matraz aforado:
0; 0,5; 1; 2; 3; 4 y 5 mL.
2.2.- Preparacin de la muestra y patrones:
Si la muestra de agua presenta material suspendido, filtrar a travs de filtro de
membrana de 0,45 m. Tomar una alcuota de 50 mL de muestra con pipeta de bulbo y
colocarla en un vaso de precipitado de 100 mL, agregarle 1 mL de cido sulfanlico. Entre
2 y 8 minutos despus agregarle 1 mL de 1-naftilamina (Cuidado! Cancergeno, trabajar
bajo campana y con proteccin), esperar 10 minutos antes de leer su absorbancia a 540
nm.
Repetir el procedimiento con cada una de las soluciones de calibracin. Usar la solucin
con 0 mL de standard como blanco para las lecturas de absorbancia.
4- Cuestionario:
a-Qu intervalos de longitudes de onda corresponden en el espectro electromagntico
a las regiones: a) UV lejano; b) UV cercano; c) visible; d) IR cercano; e) IR medio; f) IR
lejano?
b- En esta experiencia, Porque cree que la determinacin del ion nitrato es ms simple
que la del nitrito? De qu material deben ser las celdas utilizadas en cada caso?
c- Cul es el propsito de preparar una curva de calibracin?
d- Suponga que la absorbancia experimental es mayor a uno. Cmo modificara su
procedimiento?
e- Deduzca la ley de Beer e indique las causas de sus desviaciones. Cmo estn
relacionadas algebraicamente el porcentaje de transmisin y la absorbancia?
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La resolucin de la mezcla en sus distintos componentes puede realizarse por dos
mtodos a partir de los espectros de las dos especies por separado y del espectro de la
muestra problema.
A.- Mtodo de las curvas de calibracin
Los espectros individuales nos permiten una adecuada seleccin de las longitudes de
onda de trabajo, de modo tal que la absorbancia de una de las especies componentes
sea elevada y simultneamente la de la otra especie sea baja. Esta eleccin permite
minimizar los errores de medida.
A la longitud de onda 1 la absorbancia ser:
A1 (1 ) MnO .b.CMnO (1 ) Cr O2 .b.CCr O2
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A.2.- Clculos y resultados:
Los datos obtenidos se llevan a grficas de Absorbancia vs concentracin molar,
obtenindose un par de curvas de calibracin para cada componente de la mezcla.
De las pendientes de las mejores rectas trazadas por mnimos cuadrados, se obtendrn
los coeficientes de absortividad molar (1 (MnO4-), 2(MnO4-), 1 (Cr2O72-), 2 (Cr2O72-)).
Con los valores de obtenidos, calcular la concentracin de cada especie componente
de la mezcla problema en moles / litro.
B.- Mtodo por Anlisis de Regresin Lineal Multi-longuitud-de-onda (ARLM)
La absorbancia de una mezcla de dos especies no interactuantes que absorben en la
misma zona del espectro, Am est dada por:
Am = 1bc1 + 2bc2
(1)
Sean cs1 y cs2 las concentraciones de soluciones estndar de cada componente, entonces
As1 = 1bcs1
As2 = 2bcs2
(2)
Al graficar Am/As1 en funcin de As2/As1 a varias longitudes de onda se obtiene una lnea
recta de cuya pendiente y ordenada al origen se obtiene el valor de c 2 y c1
respectivamente.
B.1.- Parte experimental
Procedimiento:
Registrar los espectros superpuestos de soluciones estndar 2 x 10-4 M de KMnO4 y
2 x 10-4 M de K2Cr2O7 y de la solucin problema, mezcla de ambos compuestos.
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A
C+M
C
M
Leer las absorbancias de cada solucin a cinco longitudes de onda en el rango de mayor
superposicin del espectro, 340 400 nm, y armar la siguiente tabla:
Absorbancias
St. K2Cr2O7 (As2)
Mezcla (Am)
Am/As1
As2/As1
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TRABAJO PRCTICO N 7: PROPIEDADES COLORIMTRICAS DESEABLES E INDESEABLES
EN EL SISTEMA Fe(II)-o-fen
1.- Fundamentos:
Los mtodos espectrofotomtricos de anlisis requieren que las sustancias a ser
estudiadas, o sus derivados por el agregado de un agente cromognico, formen
soluciones que debern reunir idealmente las siguientes cinco propiedades:
1. Estabilidad en el tiempo, como para permitir su determinacin con precisin.
2. Color intenso (elevado ).
3. Libre de efectos por cambios en el pH, temperatura u otros factores.
4. Solubilidad del compuesto coloreado.
5. Obedecer la ley de Beer.
Cuando se requiere de un agente formador de color, ste deber poseer las siguientes
caractersticas:
1. Estabilidad en solucin.
2. Rpido desarrollo del color.
3. Reaccin estequiomtrica con el constituyente deseado. En casos de equilibrios
desfavorables se deber agregar un gran exceso de reactivo.
4. Transparencia ( = 0) en la regin de medida.
5. Selectividad o especificidad con el constituyente deseado.
6. Libre de interferencias con otros constituyentes.
7. Capacidad de actuar en distintos solventes.
En este experimento se considerarn algunas de las propiedades que son deseables en
un agente cromognico y de la especie que ser medida.
Se analizarn las caractersticas en el complejo de hierro, Fe(II)-ortofenantrolina (Fe-ofen).
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0,3 %. Agregue solucin de NaAc 2 M hasta ajustar el pH 5, verificando con papel
indicador. Trasvase a un matraz de 100 ml, enjuagando el vaso con pequeas porciones
de agua destilada y lleve a volumen. Mida la absorbancia a 512 nm cada 20-30 min.
contra un blanco de agua destilada. Grafique Absorbancia vs tiempo.
Nota: Utilice esta solucin en la parte D de esta experiencia.
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celda del espectrofotmetro. Tpela con el dedo y agite vigorosamente; mida la
absorbancia. Si no observa ningn efecto agregue otra pequea porcin de NaF y repita
la agitacin y medida.
Enjuague la cubeta con agua de canilla, luego con agua destilada y finalmente con la
solucin de pH 1. Vuelva a medir la absorbancia de la solucin de pH 1 y repita el
procedimiento con el agregado de Na2Ox, Na-tartrato y KH2PO4.
Reporte sus observaciones sobre el efecto de cada anin en la lectura de absorbancia
del sistema Fe-o-fen.
4- Cuestionario:
a- Cules son las propiedades que debe presentar un complejo para permitir su
utilizacin en un mtodo espectrofotomtrico? En este sentido, Qu caracterstica
debe poseer un agente formador de color?
b- Investigue en bibliografa algn analito que mediante su tratamiento con un agente
cromognico dando lugar a una complejacin o derivatizacin, permita su cuantificacin
por espectroscopa UV-Visible.
TRABAJO PRCTICO N 8: DETERMINACIN DE HIERRO EN UN MEDICAMENTO.
1- Fundamento:
Uno de los temas de mayor inters en las ciencias de la salud y en la qumica
bioinorgnica es el comportamiento del hierro en los sistemas biolgicos. El dficit de
hierro es un problema usual en la dieta humana. Este elemento cumple una labor
importantsima en el organismo dado que transporta el oxgeno en los glbulos rojos.
Tambin es un componente estructural de la mioglobina muscular y es imprescindible
en el aprovechamiento de las vitaminas del grupo B. De ah surge el inters por conocer
la disponibilidad de hierro en los alimentos. Su dficit provoca Anemia Ferropnica, muy
comn en nios con baja calidad alimentaria, y en las ltimas semanas de embarazo
donde aumentan las necesidades de hierro. Tambin aumenta el requerimiento de
hierro en la dieta si consumimos caf o alcohol en exceso ya que stos disminuyen su
absorcin. Por el contrario, la vitamina C mejora la absorcin. El aporte mnimo
recomendado es de 10 a 15 mg/da. Las principales fuentes de hierro son: carnes,
hgado, verduras verdes, cereales integrales, frutos secos y levaduras.
En este trabajo prctico determinaremos espectrofotomtricamente la concentracin
de Fe en un medicamento a travs de dos mtodos. En el primero de ellos realizaremos
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la cuantificacin a partir de la curva de calibracin, de manera anloga a la forma en la
que lo hicimos en las experiencias anteriores. Muy brevemente esta metodologa
consiste en determinar la absorbancia de una serie de patrones que han sido
preparados igual que la muestra y que cumplan con la ley de Beer en su intervalo de
concentracin. Para que la medida sea vlida, la absorbancia de la muestra debe caer
dentro del intervalo de absorbancia de los patrones. Sin embargo, este mtodo se
encuentra limitado en el sentido en que cuanto ms compleja es la muestra, ms difcil
se vuelve preparar patrones similares respecto a su matriz. En estos casos puede
utilizarse el mtodo de adicin estndar, que asegura que los efectos de matriz y de los
interferentes estn controlados. El mismo consiste en agregar cantidades conocidas de
un analito, cuyo contenido se quiere determinar. A partir del aumento de la seal se
deduce cuanto analito haba presente en la muestra. Este mtodo requiere una
respuesta lineal frente al analito.
2- Parte Experimental:
Este mtodo se basa en la reaccin del Fe (II) con o-fenantrolina para dar un complejo
intensamente coloreado.
Soluciones:
1.- Solucin estndar de Fe(NH4)2(SO4)2 : (0.0100 mg/mL) preparar 100 mL*
2.- Solucin de hidrocloruro de hidroxilamina (5.0 g de H2NOH.HCl en 50 mL de agua
destilada)
3.- Solucin de 1,10-fenantrolina: 0.250 g en 250 mL
4.- Solucin de acetato de sodio, 1.2 M (250 mL).
Aadir 0.20 mL de H2SO4 concentrado al matraz donde se preparar la solucin.
Diluciones de la muestra:
La muestra consiste en un medicamento en forma de gotas. Para la determinacin del
Fe(II) contenido en la muestra se realizaran las siguientes diluciones:
1. SOLUCIN M1: En un matraz de 50 ml colocar 2 ml de las gotas y llevar a volumen
con agua destilada (ya se encuentra preparada).
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2. SOLUCIN M2: En un matraz de 50 ml colocar 1ml de la SOLUCIN M1 y llevar a
volumen con agua destilada (ESTA ES LA SOLUCIN A PARTIR DE LA CUAL SE
PREPARARA EL COMPLEJO Fe-o-fen).
Procedimiento:
A. Construccin de curva de calibracin:
1. En diferentes matraces de 100 ml Coloque volmenes de 0, 10, 15, 20 y 25 ml
de la solucin estndar de Fe (0.01 mg Fe/ml).
2. Luego, en cada matraz aada: 1 mL de hidroxilamina, 10 mL de acetato de
sodio, y 10 mL de 1,10-fenantrolina. Deje descansar las mezclas por 5 minutos,
luego diluya hasta la marca con agua destilada y mezcle bien.
3. Lave dos celdas y enjuague tres veces con la solucin a la que vaya a medir su
absorbancia. Mida la absorbancia a 512 nm de la solucin estndar y la de la
solucin blanco (la solucin que contiene todos los reactivos excepto la solucin
estndar de hierro) con respecto a agua destilada. Anote los datos.
4. Medida de la muestra:
En un matraz de 100 ml coloque 10 ml de la SOLUCIN M2, repita el punto 2.
para dar lugar a la formacin del complejo Fe-o-fen y mida la absorbancia de la
solucin a 512 nm.
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Luego de una correcta agitacin se procedi a medir las absorbancias de cada uno y se
obtuvieron los siguientes datos:
Volumen/ ml
0
2
3
5
Absorbancia
0,332
0,435
0,534
0,751
Figura 2
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2.- Procedimiento:
Reactivos : NaCl p.a, KCl p.a.
* Solucin estndar de Na de 100 ppm: pesar 254 mg de NaCl p.a al 0,1 mg y llevarlo a
volumen de 1 L con agua destilada.
* Solucin estndar de KCl de 100 ppm: pesar 190,7 mg de KCl p.a al 0,1 mg y llevarlo a
volumen en un matraz de 1 L con agua destilada.
2.1.- Anlisis de Na
i.- A partir de la solucin madre de Na+, preparar una serie de patrones estndar
conteniendo 5, 10, 25, 50, 75 y 100 ppm de Na+.
ii.- Encender el equipo, la llama y el compresor, ajustando la presin de aire al valor de
0,6 kg/cm2. Asegrese que el instrumento tenga colocado el filtro para sodio.
iii.- Ajustar la lectura del aparato en cero aspirando agua destilada (0 ppm de Na +). Usar
luego la solucin de 100 ppm para llevar la lectura a 100 (fondo de escala). Luego se
determinan las lecturas de emisin para las otras soluciones de Na + SIN CAMBIAR LOS
CONTROLES DEL INSTRUMENTO.
iv.- Medir la lectura de emisin de una muestra de agua potable y agua mineral.
2.2.- Anlisis de K.
Considerando que la concentracin del ion K en aguas en gral promedia 10 ppm:
i.- preparar a partir de la solucin madre de 100 ppm de K+ una serie de patrones
estndar tomando como extremo superior de la escala 20 ppm de K +.
Repetir el procedimiento anterior ii y iii para la calibracin del instrumento.
iv.- Medir la lectura de emisin de una muestra de agua corriente y de agua mineral.
2.3.- Tratamiento de datos y resultados:
Graficar los datos Lectura (Intensidad de emisin) vs concentracin empleando escalas
lineales y doble logaritmo. Por interpolacin de las lecturas encontrar el contenido de
Na, y K en las muestras problemas.
B.- Estudio del efecto de los cationes en las medidas de espectroscopa atmica.
1.- Fundamentos:
Cuando en una solucin se presentan varios metales que emiten radiaciones de longitud
de onda muy prximas, se observan desviaciones en la determinacin de la
concentracin.
Evidentemente estas interferencias sern considerables si se emplea un aparato de
filtro, por razones puramente pticas. Adems, los otros iones pueden tener otros
efectos sobre los procesos de radiacin en la llama.
Con el objetivo de estudiar este comportamiento, se determinar el efecto que
producen diversos cationes en la determinacin del sodio en fotometra de llama.
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2.- Procedimiento:
Reactivos: NaCl, Ca(NO3)*2, MgCl2 (o Mg(NO3)2, KCl.
2.1.- Se preparan, a partir de una solucin de 100 ppm de Na+, tres soluciones que
contengan 20 ppm de Na+ ms 10 mg de los siguientes cationes: Ca2+, Mg2+ y K+** (un
metal por cada solucin). Se preparan 100 mL de cada solucin y se tiene en cuenta la
pureza y grado de hidratacin de los reactivos para el clculo de los 10 mg.
Calibrar adecuadamente el fotmetro de llama con 0 ppm y 100 ppm de Na + y medir el
estndar de 20 ppm de Na+ puro y las muestras con los cationes adicionados. Observar
cualquier cambio en los porcentajes de emisin del Na.
(*) utilizar CaCO3 y HNO3 (1:3).(**) reservar la solucin 20 ppm Na c/ K+ para C.
2.2.- Tratamiento de datos y resultados:
Comparar los valores de emisin en presencia de cationes interferentes y estimar el
error relativo en la concentracin que causar la presencia de cada catin. Tabular E (%
de emisin) en funcin de M (ppm de metal interferente); identificar el metal que ms
interfiere en la determinacin y proponer la fuente de interferencia.
C.- Estudio de interferencia mutua de los iones K+ Na+.
1.- Fundamentos:
Uno de los fenmenos que pueden ocurrir en el plasma de la llama es el proceso de
ionizacin de un electrn de tomos alcalinos a la temperatura de trabajo de la llama
gas natural - aire. Evaluando los potenciales de ionizacin de los elementos alcalinos se
puede deducir la funcin del ion K+ como supresor de ionizacin del Na. Con el objeto de
estudiar ste comportamiento se medir la lnea de emisin de Na a 589 nm en
presencia de K+ y el efecto de la presencia de Na+ en la lnea de emisin de K a 766 nm.
2.- Procedimiento:
2.1.- Preparar dos series de soluciones de K+ con 5, 10, 25, 50, 75 y 100 ppm del catin
conteniendo en cada matraz 10 ppm Na+ (serie 1) y 20 ppm de Na+ (serie 2).Realizar los
clculos a partir de una solucin madre de 100 ppm de sodio y matraces de 100 o 50 ml.
Medir la serie 2 de matraces en la longitud de onda de emisin de Na (calibrar con 0100 ppm de Na+ patrn) y la serie de matraces 1 -2 en la longitud de onda de K (calibrar
con 0-100 ppm de K+ patrn).
2.2.- Tratamiento de datos y resultados:
Hacer la grfica de emisin de Na (20 ppm) vs concentracin de 0 a 100 ppm de K;
comparar en un mismo grafico la emisin de K (serie 1 y 2) vs concentracin de 0 a 100
ppm de K .Discutir los resultados.
D.- Cuestionario:
a- Que ventajas presentan las tcnicas de anlisis en llama (emisin o absorcin)?
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b- Para qu tipo de especies qumicas elegira la Fotometra de Emisin de llama por
sobre otras tcnicas?
c- Qu tipo de muestras puede analizar?
d- Cules son los fenmenos que ocurren en la llama?
e- Cules son las fuentes de inestabilidad en la lectura en un Fotmetro de emisin?
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