UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGIA E INGENIERIA

TRABAJO COLABORATIVO 1: 201103 BIOQUMICA- 1-2012.

ACTIVIDADES RELACIONADAS CON METODOS CUALITATIVOS

PARA LA IDENTIFICACION DE AMINOCIDOS Y PROTEINAS

ORIENTACIONES
Se proponen las siguientes actividades, cuyo objetivo se basa en que el
estudiante tenga ms claros los conceptos que se requieren para poder
entender el desarrollo de los laboratorios de la primera Unidad o que son
necesarios para emitir un anlisis de resultados.
Aminocidos:
Este tipo de componentes tambin se pueden identificar por pruebas
coloreadas, y para entender estos procedimientos es importante saber
algunos referentes tericos como la estructura de los aminocidos,
especficamente el grupo de tomos que hacen parte de la cadena
lateral R.
En la pgina principal del curso (tpico primera unidad), se encuentra los
objetos de aprendizaje virtual llamados:
Presentacin Objeto de aprendizaje: Estructura general
clasificacin de aminocidos.
Presentacin: Caracterizacin cualitativa de aminocidos
protenas parte 1
Presentacin: Caracterizacin cualitativa de aminocidos
protenas parte 2

y
y
y

Nota: observarlos en el orden sugerido.

Protenas :
Existe una prueba coloreada, especfica para identificar enlaces
peptdicos, la cual se conoce como Biuret. De este tema, es importante
que el estudiante repase temticas relacionadas con: definicin de una
protena, clasificacin de protenas por funcin biolgica y solubilidad,
niveles
de
estructuracin,
propiedades
acido-bsicas
(punto
isoelctrico).

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TRABAJO COLABORATIVO 1: 201103 BIOQUMICA- 1-2012.

ACTIVIDADES A DESARROLLAR
I. Analice la siguiente situacin:
Esta Usted dentro del desarrollo del laboratorio #1; su tutor de prctica
le solicita que tome 500 ml de leche, fresca, de cantina, sin
procesamiento trmico y le adicione con volmenes controlados H 2SO4
hasta un pH igual a 4.6. Luego de esto se centrifuga y se obtiene en el
precipitado la protena tipo casena de la leche. El tutor les solicita que
le explique el cambio qumico que ha pasado para separar la caseina
del sistema lcteo. De acuerdo a lo anterior, responda:
1. Efecto de la adicin de protones (H +) del
cido
sobre la
estructura de la protena: Nota: es su respuesta tenga en cuenta la
relacin que existe con el pKa de una protena para mantener estable el
enlace peptdico. Escriba su respuesta en 100 palabras, evite adjuntar
informacin que no d respuesta al enunciado.

Orientacin: para poder dar un buen anlisis es importante relacionar el

pKa:
El pKa es una medida de la fuerza con que una sustancia cede o acepta
protones y se indica en valores de pH. Una protena para que ejerza su
funcin biolgica, debe tener un pH y un Pka adecuado, es decir, que
tanto su N-terminal como su C-terminal y las cadenas laterales de sus
aminocidos tengan el estado de ionizacin que corresponde al pH y
pKa de la protena, esto es que tengan el nmero de cargas +/- o
estado neutro (N-terminal, C-terminal y las cadenas laterales de sus
aminocidos) el cual va de acuerdo al pH del medio.

2. Por qu el pH tiene que llegar a 4.6?, qu ocurre a pH 4,6 en

relacin con la solubilidad de una protena?: Nota: es su respuesta tenga
en cuenta relacionar palabras como in zwiterrion y lo que lo

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caracteriza. Escriba su respuesta en 100 palabras, evite adjuntar

informacin que no d respuesta al enunciado.

Orientacin: para poder dar un buen anlisis es importante que el

estudiante enfatice en:
Cuando un pptido o una protena esta en ion zwiterion, sus cargas son
elctricamente neutras, esto hace que no exista cargas para reaccionar
con los solventes del medio. Entonces es importante analizar que a pH
4.6 como est la casena?, y que nombre toma este pH? Y si no
reacciona con solventes, como es su solubilidad?.

3. Exprese en una grfica el comportamiento que tendr la protena a

valores por encima y por debajo de 4.6, redacte el anlisis de esta
grfica con sus propias palabras: Nota: en su respuesta (anlisis de la
grfica) tenga en cuenta relacionar tipo de carga elctrica, punto
isoelctrico. Escriba su respuesta en 100 palabras, evite adjuntar
informacin que no d respuesta al enunciado.

Orientacin: para poder dar un buen anlisis es importante que el

estudiante enfatice en: el anlisis de la grfica. A pHs por debajo de
4.6, que tipo de cargas tendra la protena???? Como incide este tipo de
cargas en su estabilidad biolgica?.
A pHs por encima de 4.6, que tipo de cargas tendra la protena????
Como incide este tipo de cargas en su estabilidad biolgica?
4. Realice un cuadro comparativo

explicando
las
diferencias entre la hidrlisis qumica y enzimtica de la
casena.

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Hidrlisis cida
Redacte en
palabras.

no

Hidrlisis
ms

de

enzimtica

200 Redacte no ms de 200 palabras.

Nota: evite adjuntar informacin que no da respuesta al enunciado.

Orientacin: para poder dar un buen anlisis es importante que el

estudiante enfatice en:
En cada hidrlisis hay que diferenciar;
Qu tipo de enlaces de rompen en la casena, sern enlaces peptdicos
de la estructura
primara de la casena. Qu tipo de estructuracin
tiene la casena (alfa-hlice, beta lmina, terciaria o cuaternaria)? Es
especifica la hidrlisis cida o la enzimtica, es decir, rompe
especficamente
a un tipo de enlace dentro del a casena?. En la
enzimtica: que tipo de enzima se usa?

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II. Analice la siguiente situacin:

Esta Usted dentro del desarrollo del laboratorio #1; su tutor de prctica
le solicita que tome 500 ml de leche, fresca, de cantina, sin
procesamiento trmico y le adicione con volmenes controlados H 2SO4
hasta un pH igual a 4.6. Luego de esto se centrifuga y se obtiene en el
precipitado la protena tipo casena de la leche. Con esta protena, Ud
procede a identificar mediante pruebas coloreadas, los siguientes
aminocidos: tirosina, metionina y cistena, triptfano, aromticos,
histidina, arginina. El tutor les solicita que
explique los resultados
obtenidos. De acuerdo a lo anterior, complete el anlisis de la siguiente
tabla:

Aminocid
o

Prueba
aplicada

Resultado
esperado

Que parte de la estructura

del aminocido identifica
(funcin amina, funcin
carboxilo o la cadena
lateral (especficamente
que tomos o grupos de
tomos).

Descripcin de
la reaccin
entre el
aminocido y
el reactivo.

En 50
palabras

Grafique la estructura del

aminocido y seale y
describa la parte que se
identifica en la reaccin.

Grafique la
reaccin y
esplique la
formacin del
color.

SUGERENCIAS Y ADVERTENCIAS!

Nota:
adjuntar
no dasuperar
respuesta
El evite
desarrollo
de informacin
este punto que
no debe
lasalelenunciado.
nmero de
palabras solicitadas.
No se aceptan copias tcitas o idnticas de internet ( copiar y
pegar), si se comprueba esta accin, el punto tendr una
calificacin de 0.0
No se aceptan similitudes , semejanzas o prestamos de aportes
entre grupos , si se comprueba esta accin, el punto tendr una
calificacin de 0.0
Utilice las normas APA para relacionar referencias bibliogrficas.
Sea responsable con la entrega de su aporte a tiempo.

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ACTIVIDADES RELACIONADA CON FRACCIONAMIENTO DE

PROTENAS EN SEMILLAS DE LEGUMINOSAS Y CEREALES POR
SOLUBILIDAD

ACTIVIDADES RELACIONADAS CON FRACCIONAMIENTO DE PROTENAS

POR SOLUBILIDAD.
Dado que una protena contiene varios grupos cargados, su solubilidad
depende de la concentracin de sales disueltas, la polaridad del solvente, el pH
y la temperatura. Algunas de estas variables o todas ella pueden manipularse
para precipitar de manera selectiva ciertas protenas, mientras otras se
mantienen disueltas. La solubilidad de una protena en una concentracin baja
de iones (soluciones salinas diluidas), aumenta a medida que se agrega la
solucin salina, un fenmeno llamado salting in.
De acuerdo a lo anterior:
1.

Defina los fenmenos salting in y salting out de una protena .

2. Analice las siguientes grficas y en el recuadro en 50 palabras, describa

lo que se observa despus de adicin del solvente y centrifugacin:

Solvente: NaCl al
0.5%

Extracto
Proteico

Sobrenadan
te

Escriba el anlisis, de acuerdo al tema de

Solubilidad de protenas, identificado que tipo
de stas quedan en el precipitado y en el
sobrenadante, incluya en la respuesta, que
tipo de protena quedan con efecto saltin in y
salting out. Mximo 50 palabras.

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Precipitado

Solvente: BaOH al 0.
6%;

Extracto
Proteico

Sobrenadan
te

Escriba el anlisis, de acuerdo al tema de

Solubilidad de protenas, identificado que tipo
de stas quedan en el precipitado y en el
sobrenadante, incluya en la respuesta, que
tipo de protena quedan con efecto saltin in y
salting out. Mximo 50 palabras.

Precipitado
Solvente: etanol a
90%,

Extracto
Proteico

Sobrenadan
te

Escriba el anlisis, de acuerdo al tema de

Solubilidad de protenas, identificado que tipo
de stas quedan en el precipitado y en el
sobrenadante, incluya en la respuesta, que
tipo de protena quedan con efecto saltin in y
salting out. Mximo 50 palabras.

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TRABAJO COLABORATIVO 1: 201103 BIOQUMICA- 1-2012.

Precipitado

Solvente: agua
destilada

Extracto
Proteico

Escriba el anlisis, de acuerdo al tema de

Solubilidad de protenas, identificado que tipo
de stas quedan en el precipitado y en el
sobrenadante, incluya en la respuesta, que
de protena quedan con efecto saltin in y
SUGERENCIAS Y tipo
ADVERTENCIAS!
salting out. Mximo 50 palabras.
Sobrenadan
te

El desarrollo de este punto no debe superar

palabras solicitadas.

Precipitado

el

nmero de

No se aceptan copias tcitas o idnticas de internet ( copiar y

pegar), si se comprueba esta accin, el punto tendr una
calificacin de 0.0
No se aceptan similitudes , semejanzas o prestamos de aportes
entre grupos , si se comprueba esta accin, el punto tendr
una calificacin de 0.0
Utilice las normas APA para relacionar referencias bibliogrficas.
Sea responsable con la entrega de su aporte a tiempo.
Enlaces de

apoyo que

puede consultar como preparacin al

laboratorio o complemento a ste :

http://books.google.com/books?id=aU_aBXvAB3MC&pg=PA990&dq

&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=3&ved=0CDYQ6AEwAg#v
=onepage&q&f=false
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ACTIVIDADES RELACIONADA CON ENSAYOS ENZIMTICOS

CUALITATIVOS
Actividades relacionadas con la experiencia ESTUDIO CINTICO
DE LA UREASA
La Ureasa, de acuerdo con la clasificacin internacional de enzimas,
pertenece al grupo de las hidrolasas (rompen enlaces por hidrlisis). La
reaccin es:

La actividad enzimtica, definida como la cantidad de producto formado

o cantidad de sustrato degradado por unidad de tiempo, es afectada por
una serie de factores tales como: temperatura, pH, concentracin del
sustrato y concentracin de enzima.
El objetivo de este ejercicio es analizar algunos de estos factores, por lo
tanto:
a. Efecto del pH Si tomamos en cuenta que las enzimas son
protenas, y por tanto son polielectrolitos, se debe entonces
relacionar que un cambio en dichas cargas puede ocasionar un
efecto en la actividad enzimtica. Analice la grfica y deduzca que
le puede pasar a la ureasa cuando se le adiciona las siguientes

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soluciones. En su anlisis relacione el nivel estructural de la

enzima, grupos de tomos de pueden modificarse por los cambios
de pH (tenga en cuenta la clasificacin de los aminocidos en
cidos, bsicos, polares y no polares).

Buffer
Fosfato
pH 5, ml

Buffer
Fosfato pH
6, ml

Buffer
Fosfato pH
7.2, ml

Buffer
Fosfato pH
8, ml

Buffer
Fosfato pH
10, ml

Mximo
50
palabras

Mximo 50
palabras

Mximo 50
palabras

Mximo 50
palabras

Mximo 50
palabras

Orientaciones: a esta enzima se le esta adicionando sustancia

buffer que me cambian el pH del medio: que comportamiento
tendr el enzima cuando el pH esta en 5.0, 6.0, 7,2, 8.0 y 10?.
En el eje x se tiene los rangos d pH y en el eje y la actividad
enzimtica. En que rengos se pierde o se mantiene la actividad
biolgica del enzima?. Recuerde tener presente en su anlisis:
a.
. El nivel estructural de la enzima, grupos de tomos de
pueden modificarse por los cambios de pH (tenga en cuenta la
clasificacin de los aminocidos en cidos, bsicos, polares y no
polares).
b. Explique la forma de preparacin de cada buffer, para ello emplee los
conocimientos de qumica general, en su respuesta
ecuacin pH = 1 / log
Orientaciones:

emplee :

la

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El buffer a preparar es uno solo que es Buffer fosfato, el cual se

prepara con Fosfato potsico monosustituido (fosfato cido de sodio)
0.15 M y Fosfato sdico di sustituido 0. 15 M .

Para ir
calculando estos pHs, se debe tener volmenes de cada uno de
ellos as:
Los

pHs

experimentales son: 5.0, 6.0, 7,2, 8.0 y 10.

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pH

Fosfato
potsico
monosustituido
(ml)

Fosfato sdico Volumen

di
sustituido (ml)
(ml)

5.0

10

6.0

10

7.2

10

8.0

0.5

9.5

10

10.0

10

10

total

Como empleara Ud. la formula pH = 1 / log para calicular el pH

terico de este buffer?.
Recuerde usar las siguientes ecuaciones
Acido
H
+

pH = -logH+

Sal

pH =H1+ / log

c. Efecto de la temperatura: El hecho de aumentar la temperatura,

aumenta la energa cintica de las molculas reaccionantes, y por
consiguiente es mayor la probabilidad de que ocurra las colisiones
efectivas para que la reaccin se lleve a cabo. Analice la grfica y
deduzca que le puede pasar a la ureasa cuando se somete a las
siguientes temperaturas. En su anlisis
relacione
el nivel
estructural de la enzima y la energa de activacin de la reaccin.

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bao
de
agua con
hielo
( 4C)

Temperatur
a de 16C

Temperatur
a de 37C

Temperatur
a de 60C

Temperatur
a de 92C

Mximo
50
palabras

Mximo 50
palabras

Mximo 50
palabras

Mximo 50
palabras

Mximo 50
palabras

Es importante tener en cuenta: el efecto que hace la

tempratura aplicada sobre la estabilidad de los enlaces
que le dan estabilidad
a la estructura que posee la
ureasa, entonces s se debe investigar que tipo es, si es
primaria, que enlaces estabilizan la estructura primaria, si en
secundaria, que tipo de enlaces estabilizan a una alfa-hlice
o a una beta-lmina?, etc Y cmo afecta la T la estabilidad
de dichos enlaces?.

SUGERENCIAS Y ADVERTENCIAS!

El desarrollo de este punto no debe superar

solicitadas.

el

nmero de palabras

No se aceptan copias tcitas o idnticas de internet ( copiar y pegar), si se

comprueba esta accin, el punto tendr una calificacin de 0.0
No se aceptan similitudes , semejanzas o prestamos de aportes entre grupos ,
si se comprueba esta accin, el punto tendr una calificacin de 0.0
Utilice las normas APA para relacionar referencias bibliogrficas.
Sea responsable con la entrega de su aporte a tiempo.

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Nota: los aportes se deben entregar en el

formato del anexo 1, tenga en cuenta esta
recomendacin, ya que est relacionada en la
rbrica de evaluacin.

ANEXO 1.
FORMATO PARA LA PRESENTACIN DE APORTES
Trabajo:
Nombre:
Actividad a desarrollar:
Objetivo:
Contenido del aporte:

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Conclusin:

Referencia bibliogrfica (Formato APA).