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Dr.HctorRangelVillalobos,AsesorCientficoDNAProfileSC
Dr.enC.HctorRangelVillalobos1
Resumen
La facilidad para obtener perfiles genticos ha
revolucionado la identificacin humana para resolver casos
criminales as como determinar relaciones biolgicas de
parentesco, comnmente paternidad. Las repeticiones cortas en
tndem, ms bien conocido como STRs son los marcadores
genticos ms utilizados con este fin. Un perfil de ADN se
compone de los genotipos para varios STRs, que forman un cdigo
casi nico para diferenciar o relacionar a una persona
biolgicamente. Actualmente el anlisis de laboratorio se basa en
tres tcnicas: 1) extraccin de ADN, 2) PCR multiplex, y 3)
electroforesis capilar, y existen kits comerciales para desarrollar
fcilmente esta tarea. En paternidad se espera que entre el perfil
de ADN de un supuesto padre (SP) e hijo (H) exista al menos una
concordancia por cada marcador. Cuando para ms de un
marcador no hay concordancia entre SP y H, se establece una
exclusin y prcticamente el resultado es incuestionable. Sin
embargo, cuando todo concuerda entre SP y H se debe hacer una
valoracin bioestadstica del caso, estimando la probabilidad de
que algn otro individuo tomado al azar de la poblacin pudiera
concordar con el hijo. Para esto se debe haber estudiado a los
marcadores STRs en la poblacin donde se realizan las pruebas de
ADN, para usar las frecuencias allicas de los STRs en el anlisis
bioestadstico. A dicha estimacin se le denomina ndice de
paternidad (IP), que indica cuantas veces es ms probable haber
encontrado la concordancia SP-H considerando que s es el padre,
respecto a que fuera un individuo tomado al azar de la poblacin.
Este IP puede ser transformado a porcentaje de paternidad (W),
para facilitar la interpretacin. Por ejemplo, un IP de 1000 se
convierte en W= 99.9%. Existen formulas especificas para
calcular el IP, las cuales cambian segn el genotipo de cada
marcador analizado, y segn el caso de paternidad, ya sea que
participe o no la madre, si no est el padre pero s estn los
abuelos, si se duda de la paternidad de ambos padres, etc. En
Mxico existen estos estudios que sustentan su correcta aplicacin,
suele ser ms preocupante que no hay suficiente personal
capacitado, tanto en el mbito laboratorial como en la imparticin
de justicia, que garanticen siempre la correcta interpretacin de la
prueba sobre bases cientficas.
Introduccin
En 1985 Alec Jeffreys implement el uso del material
gentico (ADN2) para identificacin humana, obteniendo un patrn
de bandas parecido a un cdigo de barras al que denomin huella
digital del ADN (DNA fingerprinting) (Figura 1). Actualmente a
esta prueba se le conoce como perfil de ADN, huella gentica, o
simplemente prueba de ADN. Este perfil de ADN se ha
demostrado que es prcticamente nico e irrepetible, a excepcin
de los gemelos monocigotos3, lo que permite diferenciar a
cualquier persona de otra y establecer sus relaciones biolgicas de
parentesco. Las aplicaciones de la prueba de ADN son diversas,
pero destacan dos, las pruebas de paternidad y los anlisis
forenses; este ltimo en casos criminales para establecer la relacin
de un sospechoso con la evidencia dejada en la escena de un
crimen (p. ejem. mancha de sangre o semen), para incriminarlo o,
en su caso, exonerarlo. Otras aplicaciones menos comunes son para
establecer relaciones familiares de restos cadavricos en casos de
desastres o personas desaparecidas, en investigaciones histricas
(p. ejem. restos de la familia Romanov, origen de Cristobal Coln,
etc.), o en antropologa al analizar poblaciones humanas para
estudiar su origen y evolucin. Esta revisin sobre la prueba de
ADN se centrar en su aplicacin en paternidad, revisando para
ello aspectos bsicos del genoma humano y de los marcadores
moleculares, tcnicas para obtener un perfil de ADN, aspectos
bioestadsticos para la interpretacin del resultado emitido por un
laboratorio, y preguntas frecuentes sobre la prueba de ADN.
1
ElDr.HctorRangelesBilogo,MaestroyDoctorenGenticaHumana
egresado de la Universidad de Guadalajara (UdeG), adems de ser asesor
cientficodeDNAProfileSC,esprofesorinvestigadortitulardelCUCienega
UdeG,dondedirigeelInstitutodeInvestigacinenGenticaMolecularen
Ocotln, Jalisco. Es miembro del Sistema Nacional de Investigadores (SNI
CONACyT), del Grupo EspaolPortuges de la International SOciety of
Forensic Genetics (GEPISFG), y de la misma ISFG, de la Sociedad
LatinoamericanadeGenticaForense(SLAGF),ydelaAsociacinMexicana
deGenticaHumana(AMGH).
Esautordevarioscaptulosenlibrosyartculosdedivulgacin
cientficarelacionadosconlapruebadeADNylaaplicacindemarcadores
moleculares para estudios en la poblacin mexicana, los cuales estn
publicadosenartculoscientficos.Hadirigidoy/oasesoradovariastesisde
licenciatura,maestraydoctoradoenelreadeCienciasdelaSalud,yha
participado como ponente o conferencista en docenas de eventos
cientficos relacionados con la gentica desde 1997. Ha recibido varias
distinciones, entre las que destacan: mencin honorfica en tesis de
maestra (1998), presea al mrito acadmico en el rea de Ciencia e
InvestigacinporelSTAUdeG(2002),dosveces1erlugaryunavezsegundo
delpremioHECTORMARQUEZMONTERalmejortrabajodeinvestigacin
porlaAMGH(1999,2004y2008),nombradoBilogoDestacadoporlos
BilogosColegiadosdeJalisco(2005).Fueasesordeltrabajoqueobtuvoel
Premio Chihuahua 2006 en Ciencias Biolgicas, y ganadorde un Premio
Nacional del INAH (2007) por su trabajo de divulgacin indito en
AntropologaMolecular.
Figura 1. Alec Jeffreys, ideo el uso del ADN para identificacin humana en
1985 en Leicester, UK. Al fondo se observa la huella gentica del ADN
(DNA fingerprinting) como se llam al patrn de bandas parecido a un
cdigo de barras, presumiblemente nico para cada individuo.
Genoma Humano
La estructura del cido desoxirribonucleico o ADN es
bien conocida: una doble cadena que gira sobre s que contiene
informacin hereditaria codificada solo por cuatro letras o
nucletidos4: A, G, C y T (adenina, guanina, citosina y timina,
respectivamente) (Figura 2). El ADN es importante porque su
informacin es necesaria para el funcionamiento de la clula, ya
que contiene las instrucciones para sintetizar protenas5, quienes
propiamente llevan a cabo las diferentes funciones celulares, en
forma de enzimas, hormonas, receptores, transportadores,
molculas estructurales, de contraccin, soporte, inmunolgicas,
etc.
2
ADN:cidodesoxirribonucleico,tambinconocidocomoDNAporsus
siglaseningls.
3
Gemelosmonocigotos:Aquelloshermanosqueprovienendelmismo
cigoto.
4
Nucletido:UnidadfundamentaldelADN,formadoporlaazcarribosa,
unfosfatoyunabasenitrogenada:Adenina(A),Guanina(G)Citosina(C)o
Timina(T).
5
Protena:Cadenadeaminocidosunidosporenlacespptidicos,porlo
quesedenominantambinpolipptidos,quedesarrollanlamayorade
funcionescelulares.
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Genoma:Dotacingenticacompletaquecaracterizaaunindividuoo
unaespecie
7
Gen:FragmentodeADNconinformacinparacodificarunaprotena.
8
Alelo:FormaalternadeunasecuenciaofragmentodeADN
9
Marcadorgenticomolecular:SecuenciadeADNvariablequepresenta
msdeunaleloenlapoblacin,yquepermitediferenciarelgenoma
maternodelpaternoenunindividuo,comodiferenciarindividuosentres
10
Genotipo:Combinacindealelosdeunindividuoparaungeno
secuenciadeADNespecifica
11
MarcadorSTR:Delingls,shorttandemrepeats,cuyavariabilidadse
basaenelnmerodevecesqueserepiteunasecuenciacorta(p.ejem.
GATA);losalelossuelendefinirseporelnmeroderepeticiones
12
heterocigoto:Individuoquepresentaungenotipoconunpardealelos
diferentesparaciertasecuenciadeADN(genomarcadorgentico)
13
homocigoto:Individuoquepresentaunsoloaleloenciertasecuenciade
ADN(genomarcadorgentico).Presumiblementeambospadresle
heredaronelmismoalelo
14
PerfildeADN:ConjuntodegenotiposdeunindividuoparavariosSTRs
15
PCR:siglaseninglsdeReaccinencadenadelapolimerasa,tcnica
parareplicarinvitroalgunasecuenciadeintersenelADN,quegenera
millonesdecopias(amplifica)desta
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Primers:PequeassecuenciasdenucletidosusadasenlaPCRpara
delimitarlareginquesequiereamplificar;suextremo3esusadoporla
Taqpolimerasaparaaadirnucletidos
17
Taqpolimerasa:Enzimatermoestablecapazdeaadirnucletidosal
extremodeunprimerparasintetizarunanuevacadena;fueextradadela
bacteriaThermusaquaticus,dedondederivasunombre.
18
Electroforesis:Separacindeunamolculaenunmediodesoportepor
accindeuncampoelctrico,enbaseasucarga,pesomolecularyforma.
19
Escaleraallica:FragmentosdeADNquecontienentodosolamayora
dealelosdeunoovariosSTRsdeunsistemagentico,loscualessirvende
referenciaparadefinirporcomparacinelalelodelindividuo.
20
ElectroforesisCapilar(EC):Mtododeelectroforesisatravsdeuntubo
deltamaodeuncapilarrellenodepolmero.Permiteaplicarmayores
voltajes,separarmsrpidolamolcula,ydetectarlafluorescenciadeADN
marcadoconunfluorforodeformaautomtica.
21
Kitosistemagentico:Conjuntodemarcadoresgenticos(STRs)que
puedenseranalizadossimultneamente,porejemploporPCRmultiplexy
electroforesiscapilar
22
Amelogenina:Marcadorquedefineenelperfilgenticosielindividuoes
hombre(XY)omujer(XX)
23
Fluorocromo:Molculacapazdeemitirfluorescenciadespusdeun
perododeexcitacin
24
Electroferograma:Grficacuyospicosquerepresentanfragmentosde
ADNamplificados(STRs)marcadosconfluorocromosycomofueron
migrandoatravsdelcapilar,determinandoassutamao(pb)yla
fluorescenciaqueemiten(color).
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Figura 7. Los dos principales kits comerciales para identidad humana que
analizan 15 STRs y el marcador sexual amelogenina (A). Los nombres de
los STRs estn en recuadros de colores, y en la parte de abajo un estndar
de tamao o marcador de peso molecular para definir el tamao de los
alelos STRs. Ntese que cada STR abarca un rango de tamao por los
diferentes tamaos que sus alelos pueden tener, y que no se sobrelapa con
otro STR.
Interpretacin de resultados
Despus de obtener los perfiles en una prueba de ADN
para determinar la paternidad entre un supuesto padre y un hijo en
disputa, existen dos resultados posibles al comparar sus perfiles: 1)
Que para al menos dos marcadores no exista ninguna coincidencia
entre los alelos/genotipos del supuesto padre e hijo, lo que se
denomina exclusin25, y se descarta de inmediato la paternidad
biolgica (Figura 10).
25
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Ejemplo 2 (do)
Este caso es relativamente comn y quin no participa
normalmente es la madre. Se tomar la misma combinacin de
genotipos del ejemplo anterior eliminando a la madre, para notar
los cambios en las frmulas y el resultado final (Cuadro 2).
Ejemplo 1 (tro).
Ahora vamos a emplear las frmulas en casos reales a
partir de diferentes combinaciones de genotipos. Comenzaremos
con un caso de un tro donde participan padre, madre e hijo
(Cuadro 1).
Cuadro 1. Ejemplo de estimacin de IPs, IP total y W en un caso de paternidad (tro).
Marcador
STR
Formula
IP
X/Y
1/0,5954
ndice de
Paternidad (IP)
30 (0.2977)
Formula
IP
X/Y
1/2frec30
12/13
11 (0.3017)
1/ frec11
1/0,3017
3,3146
11
10 (0.262)
1/ 2frec10
1/0,524
1,9084
IP total=
21.24
Hij@
(H)
Madre
(M)
Similitud SP-H
(frecuencia alelo)
D21S11
Supuesto
Padre
(SP)
29/30
30
29/30
D7S820
11
11/13
CSF1PO
10/12
10/11
1,6795
0,955 = 95,5%
ARTICULODEREVISION:LapruebadepaternidadconADN
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Marcador
STR
Hij@
(H)
Supuesto
Padre (SP)
Similitud SP-H
(frecuencia alelo)
Formula IP
X/Y
Formula IP
1/Y
ndice de
Paternidad (IP)
D21S11
30
29/30
30 (0.2977)
1/2fr30
1/0,5954
1,6795
D7S820
11/13
11
11 (0.3017)
1/ 2fr11
1/0,3017
1,6573
CSF1PO
10/11
10/12
10 (0.262)
1/ 4fr10
1/1,048
0,9542
IP total=
Probabilidad de Paternidad= [IP / (IP+1)] = W =
2,6559
0,7265 = 72,65%
Exclusiones
En un caso estndar de un tro de SP-H-M analizado
con 13 a 16 marcadores, es tpico encontrar de 7 a 10 exclusiones,
lo que no significa que podamos encontrar un caso con slo 2 o 3
exclusiones, u otros con 12. En casos de paternidad con un solo
progenitor el nmero de exclusiones tpico es entre 4 y 5. En casos
ms complicados donde se pierde informacin gentica se reduce
el nmero de exclusiones que se espera encontrar, por lo que hay
que aumentar el nmero de marcadores investigados. Existe un
caso particular denominado exclusin de segundo orden28, donde
SP y H son homocigotos para alelos diferentes. Este resultado se
puede explicar, adems de la no-paternidad, porque comparten un
alelo invisible (alelo nulo) y SP realmente es el padre biolgico
del hijo en disputa. Todos los dems casos de exclusiones se
denominan de primer orden.
26
FBI,siglasdeFederalBoreauInvestigation
CODIS,siglasdeCombinedDNAIndexSystem,queesunconjuntode
STRssugeridoparaidentificacinhumana,conelfindecrearbasesde
datosdeperfilesgenticosquepermitanintercambiarinformacinde
intersparalaimparticindejusticia,etc.(crmenesviolentos,crmenes
contralalibertadsexual,identificacindemilitares,entreotros.)
27
28
Exclusindesegundoorden,aquellaexclusindondeSPyHson
homocigotosparaalelosdiferentes,loqueabrelaposibilidaddequeen
realidadcompartanunaleloinvisible,denominadoalelonulo.
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29
Mutacin,Cambioenelmaterialgentico,enpaternidadestas
mutacionessedanenlosgametos(espermatozoidesuvulos)quedarn
origenaunafalsaexclusinentreelpadrebiolgicoyelhijo.
30
AABB,AmericanAssociationofBloodBanks.
31
PoderdeExclusin,probabilidadqueofreceunmarcadorparaexcluira
unSPfalsamenteimplicadoenunapruebadepaternidad(esdecir,sesabe
queelnoeselpadre)
32
Cromosoma,formacompactadadelmaterialgenticoqueseforma
cuandolaclulasevaadividir,yaseaparaformarmsclulasdelcuerpo
(mitosis)oclulasreproductivas(espermatozoidesuvulos).
33
Meiosis,divisincelularmediantelacualseformanclulasreproductivas
conlamitaddelacargagenticanormal(dobleodiploide)
34
Haplotipo,combinacindematerialgenticoqueseheredadepadresa
hijosenbloqueoenconjunto,paraelcromosomaYrefierealosalelos
obtenidosconvariosmarcadoresSTRs
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Conclusiones
En los ltimos aos el desarrollo de las tcnicas de
biologa molecular ha facilitado enormemente la tarea de
identificacin gentica, gracias a sistemas genticos estandarizados
(STRs) que pueden compararse entre laboratorios. A pesar del
desarrollo de nuevas tecnologas para analizar marcadores
genticos de un nucletido (SNPs35), suena difcil que desplacen a
los STRs de las cuales se han generado ya bases de datos
gigantescas en diferentes pases, principalmente como auxiliares en
la investigacin criminal, por ejemplo comparando el perfil de
ADN de una escena de un crimen con una base de datos que
facilita la labor de buscar sospechosos.
Sin embargo, cabe sealar la importancia de la
capacitacin de personal de laboratorios y los involucrados en la
imparticin de justicia, ya que desde mi punto de vista este es uno
de los retos ms importantes en Mxico para lograr la correcta
interpretacin de la prueba de ADN con bases cientficas,
estableciendo perfectamente la responsabilidad tanto de los peritos
en gentica forense como de los jueces. Por ejemplo, en un caso
criminal la funcin del perito no es sealar si los sospechosos son o
no culpables, sino establecer si, por ejemplo, el perfil de ADN de
una mancha de sangre encontrada en la escena del crimen
corresponde a la del sospechoso, lo que indica que ste estuvo all
ms no que l sea un criminal. En cambio, al juez le tocar decir la
culpabilidad o inocencia del sospechoso, considerando no solo la
evidencia gentica, sino tambin la informacin no gentica de
relevancia, por ejemplo si conoca o haba amenazado a la vctima,
si tiene antecedentes de violencia, si lo vieron en la zona antes del
crimen, etc. En paternidad, aunque el resultado de la prueba s se
relaciona directamente con la resolucin que dar finalmente el
juez, debe considerarse la posibilidad de situaciones especiales
como que el supuesto padre haya recibido un transplante (lo que
cambiara su perfil de ADN), o que el padre biolgico estuviera
relacionado con l supuesto padre, lo que incrementara la
posibilidad de coincidencia. Finalmente, esto nos llevar a concluir
que las pruebas de ADN actualmente son tcnicamente confiables
y relativamente fciles de realizar, nuestro mayor reto ahora es que
el pblico y el personal de laboratorio y de justicia la entienda
correctamente, para lo cual se realz este trabajo.
Literaturas Recomendadas
Butler JM. (2005). Forensic DNA typing. Elsevier Academic
Press, Burlington, MA, USA. p 201-240.
Butler JM. (2006) Genetics and Genomics of Core Short Tandem
Repeat loci used in Human Identity Testing. Journal Forensic
Sciences 51(2): 253-265.
Evett IW, Weir BS (1998). Interpreting DNA evidence. Sinauer.
MA, USA.
Jobling MA, Gill P. (2004) Encoded Evidence: DNA in forensic
analysis. Nature Reviews (5):739-752.
Ma. Begoa Martnez Jarreta (1999). La prueba del ADN en
Medicina Forense., Masson (Ed.), Barcelona, Espaa.
35
SNPs,polimorfismosdeunnucletido(i.e.AG),delingls
Singlenucleotidepolymorphisms.
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