Instituto Tecnolgico de Tuxtepec

Bioqumica
MC. Rosalba Fernndez Velasco
PRCTICA : HIDRLISIS DE POLISACRIDOS
INTRODUCCIN
Los polisacridos son molculas naturales constituidas por un gran nmero de
unidades de monosacridos, unidos mediante enlaces glucosdicos. Por hidrlisis
de los polisacridos se obtienen molculas de monosacridos. La hidrlisis la
podemos llevar a cabo de forma cida, cida catalizada y por enzimas hidrolticas.
Las enzimas hidrolticas son especficas en su modo de reaccin, tienen la
particularidad de acelerar el desdoblamiento de diversas molculas, entre ellas
polisacridos como el glucgeno, introduciendo una molcula de agua entre las
uniones glucosdicas. Estos polisacridos producen monosacridos.
La D-glucosa es la unidad monosacardica predominante en los polisacridos,
pero tambin podemos obtener polisacridos de la D-manosa, la D-fructosa, la Dy L-galactosa, la D-xilosa y la D-arabinosa.
En la saliva poseemos este tipo de enzimas hidrolticas, especficamente la
amilasa o ptialina, que se encuentra tambin en el jugo pancretico, por ser
especialmente digestiva. Esta enzima rompe las uniones glucosdicas, al introducir
una molcula de agua entre los enlaces alfa-1,4 de la alfa-amilasa y entre los
enlaces alfa-1,6 lo hace la enzima desramificante alfa 1,6 glucosidasa, donde
como producto final se obtiene el disacrido maltosa.
Los tres polisacridos ms importantes para el hombre son: El almidn, la celulosa
y el glucgeno, los cuales podemos encontrar en forma natural en plantas y
animales.
El almidn desempea la funcin de almacenamiento energtico en las plantas, lo
encontramos en forma de grnulos, mientras que la celulosa es el polisacrido que
da rigidez a la pared celular de las plantas, desempea una funcin de estructura.
El glucgeno es la fuente de almacenamiento energtico en los animales, se
almacena en el hgado y msculos de estos.

OBJETIVO
En esta prctica se ilustran algunos de estos mtodos, verificando la produccin
de la reaccin mediante determinaciones cualitativas. Podrn compararse no solo
la diferencia de tiempos requerido en cada mtodo, sino tambin la gran diferencia
en las condiciones requeridas para que se verifique la hidrlisis.

MATERIAL
1 Mechero Bunsen
1 Tripi
1 Tela de asbesto

1 Recipiente para Bao Mara

2 Tubos de ensaye de 15 X 150 mm
1 Vaso de precipitados
1 Gradilla
1 Pipeta de 1 ml
1 Pipeta de 10 ml
1 Pipeta Pasteur con goma
1 Agitador de vidrio
1 Placa de porcelana
2 Baos Mara
2 Termmetros
Papel pH
Papel aluminio

MATERIAL BIOLGICO
Saliva (amilasa salival). Recolectar unos 5 ml de saliva, evitando la espuma.

REACTIVOS
1. - Solucin de Almidn Soluble al 2% . Pese 2 gramos de almidn, mzclelos
bien con un poco de agua destilada, mientras hace hervir 90 ml de agua
aproximadamente. Cuando haya formado una pasta con el almidn humedecido,
agregue a dicha pasta el agua hirviendo, agitando intensamente. Deje enfriar un
poco y complete a 100 ml filtre si es necesario.
2. - HCl concentrado
3. - NaOH al 20%
4. - Solucin indicadora de Lugol
Mezcle bien 2 gr. de KI y 1 gr. de Yodo; disuelva esta mezcla en agua destilada,
calentando ligeramente si es necesario. Complete a 100 ml.
5. - Reactivo de Lucas. Disuelva 136 gr de ZnCl 2 en 89 ml. de HCl concentrado.
6. - Reactivo de Benedict . Disuelva 173 gr de Citrato de Sodio 100 gr de
Carbonato de Sodio en aproximadamente 800 ml de agua caliente.
Filtre a travs de papel filtro en una probeta de 100 ml y complete con agua hasta
850 ml, mientras tanto disuelva 8.65 gr de Sulfato de Cobre en aproximadamente
50 ml de agua destilada y complete hasta 75 ml . Vierta la primera solucin en un
vaso de precipitados de 2 lts. Y aada lentamente la solucin de Sulfato de Cobre
agitando continuamente.

PROCEDIMIENTO
1. - Hidrlisis cida del almidn.
En un vaso de 100 ml coloque 20 ml de disolucin de almidn al 2%. Agregue 20
gotas de HCl concentrado y caliente de modo que hierva suavemente. Agite
continuamente. Cada 5 minutos tome con una pipeta Pasteur una gota y
depostela sobre una excavacin en una placa de porcelana. Agrguele una gota
de Lugol y anote el color que se produce.
Contine calentando hasta que ya no se produzca color azul con la solucin
indicadora de Lugol y hasta que aparezca un color amarillo, lo cual indica que la
hidrlisis se ha completado es total. Pase a un tubo de ensaye 1 ml de la
disolucin hidrolizada que queda en el vaso, ajuste el pH a neutralidad con NaOH
y verifique la reaccin de Benedict, en la cual se debe observar un color rojo lo

que nos indica la presencia de AZUCARES REDUCTORES y por tanto corroborar

la hidrlisis del polisacrido.

2. - Hidrlisis cida catalizada del almidn.

En un vaso de precipitados coloque 10 ml de la solucin de almidn agregue 3 ml
de reactivo de Lucas (CUIDADO causa quemaduras graves), caliente durante 3
minutos de modo que la mezcla hierva suavemente, deje enfriar, tome una
muestra y lleve a cabo la prueba de lugol. Enseguida neutralice con 8 ml de NaOH
al 20% la solucin que queda en el vaso. De esta muestra neutralizada tome un
mililitro y efecte la prueba de Benedict.

3. - Hidrlisis enzimtica del almidn.

En un vaso de precipitados coloque 5 ml aproximadamente de saliva SIN
ESPUMA. Introduzca 3 ml de saliva en un tubo mantenido en bao de agua a 3535 C y agregue rpidamente 2 ml de disolucin de almidn al 2 %. Cada 30
segundos tome del tubo una muestra de 0.5 ml, una gota utilcela para llevar a
cabo la prueba de Lugol, y la cantidad que queda en la pipeta colquela en un
tubo de ensaye para efectuar la prueba de Benedict, hasta terminar con la mezcla.

PRUEBAS CUALITATIVAS
1. - Prueba de Lugol.
Color producido en la reaccin de hidrlisis del almidn
AZUL + No hay hidrlisis
ROJO + Hidrlisis parcial
AMARILLO - Hidrlisis total

2. - Prueba de Benedict
Colocar en un tubo de ensaye volmenes iguales tanto de solucin problema
como de Reactivo de Benedict. Tapar el tubo con papel aluminio y colocarlo en
Bao Mara con agua hirviendo. La aparicin de un color ROJO indica la presencia
de AZUCARES REDUCTORES SENCILLOS. Si a los 15 minutos no ha aparecido
el color, significa que no hay azcares reductores en la solucin problema.

PRESENTACIN DE RESULTADOS
Experimento nmero uno.- Hidrlisis cida del almidn
TIEMPO DE LA PRUEBA DE LUGOL , SIGNIFICADO EN TRMINOS DEL
COLOR PRODUCIDO DURANTE LA HIDRLISIS
5 Min. _________________ ________________________
10 Min. _________________ ________________________
Etc.
Resultados de la prueba de Benedict._______________________________
Tiempo requerido para la hidrlisis total del almidn.
__________________________

Experimento nmero dos.- Hidrlisis cida catalizada del Almidn

Resultados prueba de lugol.
_____________________________________________
Resultados prueba de Benedict.
__________________________________________

En base a los resultados de sus pruebas, Indique el grado de hidrlisis del

almidn. __________________________________
Tiempo requerido para la hidrlisis cida catalizada del Almidn.
________________

Experimento nmero tres.- Hidrlisis enzimtica del Almidn

TIEMPO PRUEBA DE LUGOL, PRUEBA DE BENEDICT SIGNIFICADO EN
TERMINOS DEL COLOR PRODUCIDO POR LA HIDRLISIS
30 Seg. ________________ ____________________ _______________
60 Seg. ________________ ____________________ _______________
90 Seg. ________________ ____________________ _______________
Etc. ... ________________ ____________________ _______________
Tiempo requerido para la hidrlisis enzimtica del Almidn.
______________________
NOTA: Para detectar la presencia de azcares reductores se puede utilizar el
reactivo de Benedict el reactivo de Nelson-Somogy.

CUESTIONARIO
1. - Qu obtenemos como producto en la hidrlisis parcial y total del Almidn y de
la Celulosa?
2. - Diga en forma clara, que diferencia presentan entre ellos los polisacridos
abajo enlistados, adems de esquematizar y explicar su estructura y tipo de
enlace que presentan.
Celulosa
Almidn
Glucgeno
3. - Cul es el modo de accin de un catalizador ?. Explique.