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UFMA UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHO.

CCET CENTRO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLOGIA.
CURSO: ENGENHARIA QUMICA
DISCIPLINA: BIOQUMICA DE ALIMENTOS
MINISTRANTE: PROF. ALEXANDRA M.S. SOARES
ANA BEATRIZ DA PAIXO RIBEIRO E BIANCA SILVA CORDEIRO

Relatrio Referente Aula Prtica

Ensaio Peroxidase

So Lus
26-04-2015

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Ana Beatriz da Paixo Ribeiro
Bianca Silva Cordeiro

Relatrio:
ENSAIO PEROXIDASE

Relatrio tcnico apresentado como requisito parcial

para obteno de aprovao na disciplina de
Bioqumica de Alimentos, no Curso de Engenharia
Qumica, na Universidade Federal do Maranho.
Prof. Dr. Alexandra M. S. Soares

So Lus
26-04-2015

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SUMRIO

INTRODUO..........................................................................................................................3
OBJETIVO.................................................................................................................................4
MATERIAIS E REAGENTES..................................................................................................4
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL....................................................................................4
RESULTADOS E DISCUSSES..............................................................................................5
CONCLUSO............................................................................................................................8
REFERENCIAS.........................................................................................................................9

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1. INTRODUO
Enzimas so polmeros biolgicos, geralmente protenas, catalisadores de reaes
bioqumicas pouco espontneas e muito lentas, que tornam a vida possvel. Alm disso,
muitas reaes bioqumicas comuns envolvem eventos qumicos que so desfavorveis ou
improvveis no ambiente celular, tais como a formao de intermedirios carregados ou a
coliso de duas ou mais molculas com a orientao precisa necessria para que ocorra a
reao. Logo, a presena e manuteno de um conjunto completo e balanceado de enzimas
fundamental para o metabolismo.
As peroxidases so uma famlia de protenas que incluem enzimas com origem em
mamferos, fungos e plantas. A peroxidase catalisa a oxidao provocada pelo perxido de
hidrognio, esta apresenta uma alta resistncia trmica. Devido a este fato, a peroxidase um
indicador apropriado para o controle da inativao total de todas as enzimas. A atividade da
peroxidase pode ser determinada atravs do teste do guaiacol. Neste a peroxidase reage com
o perxido de hidrognio, liberando O2, que por sua vez oxida o guaiacol. Este adquire uma
cor castanha acusando a presena de enzimas ativas.
A enzima peroxidase converte o guaiacol e perxido de hidrognio em tetraguaiacol e
gua. O tetraguaiacol um composto colorido.

Figura 1 Reao Cataltica do Guaiacol e Perxido de Hidrognio com formao do Tetraguiacol em

presena de Peroxidase

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2. OBJETIVO
Determinar qualitativamente e quantitativamente a atividade da enzima peroxidase numa
amostra de extrato de buriti atravs da formao de produto da reao cataltica entre
perxido de hidrognio e guaiacol, que gera o tetraguaiacol, um composto colorido.
3. MATERIAIS E REAGENTES
Materiais

Tubos de ensaio;
Pipetas, ponteiras, estantes;
Cubeta plstica;

Reagentes

Tampo Acetato de sdio 50mM, pH 5,2;

gua destilada;
Perxido de Hidrognio 50mM, 30%, preparado momentos antes do ensaio;
Guaiacol;
Amostra contendo extrato de buriti

4. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
Identificou-se os tubos de ensaio;
Aos tubos de ensaio adicionou-se em ordem, 800L do tampo, 500L de guaiacol e

por fim 500L de perxido.

Ao primeiro tubo de ensaio, adicionou-se 100L de gua, e a este denominou-se

branco, pois sua finalidade de zerar, calibrar, o espectrofotmetro.

Adicionou-se a primeira soluo contendo o branco Cubeta e colocou-se o mesmo
no espectrofotmetro com transmitncia de 100% para que este fosse zerado.

Aps zerar, colocou-se a soluo dos tubos adicionando-se 100L da amostra na

cubeta plstica a fim de realizar a leitura. Leitura feita na faixa de absorbncia de
480nm.

O procedimento acima contendo a amostra foi realizado em triplicata, afim de que se

pudesse ter maior preciso nos resultados a serem discutidos.

Com as amostras, em triplicata, faz-se o seguinte: faz-se a primeira leitura aps 10

segundos de adio de perxido. Em seguida, acompanha-se o decrscimo da
absorbncia ao longo do tempo em intervalo de 20 segundos. Fazendo-se anotaes
das mesmas.

5. RESULTADOS E DISCUSSES
A seguinte tabela foi obtida como resultado da triplicata feita com as amostras de extrato de
buriti onde tm-se a absorbncia observada em cada tempo:
TEMPO
10
20
40
60
80
100
120

0,172
0,215
0,290
0,355
0,412
0,460
0,522

ABSORBNCIA
0,216
0,258
0,321
0,382
0,439
0,492
0,547

0,170
0,215
0,287
0,350
0,408
0,461
0,514

A mdia das absorbncias das amostras feitas em triplicata teve como resultado os valores na
tabela abaixo:
TEMPO
10
20
40
60
80
100
120

MDIA
0.186
0.229
0.299
0.362
0.420
0.471
0.528

Afim de que se determinasse a atividade da peroxidase, o grfico abaixo foi traado:

Absorbncia x Tempo
0.600

f(x) = 0.01x
R = 0.96

0.500
0.400
0.300
0.200
0.100
0.000
0.0

20.0

40.0

60.0

80.0

100.0

120.0

140.0

O grfico acima mostra a relao da absorbncia com o tempo. A linha de tendncia traada
at o zero corrige o valor da absorbncia encontrada no experimento, resultando no valor de
inclinao igual a 0,005 que tem unidades de absorbncia por segundo (UA/s). Pode-se notar
que os primeiros 10 segundos no so identificados no grfico, visto que estes so
considerados apenas como zeros, o incio da absorbncia. Alm disso, verifica-se que o R 2
apresenta um valor muito baixo, o que indica algum erro no experimento.
Para determinar a atividade da peroxidase em unidades de UA/mgP, primeiramente
transformamos de segundo para minuto a inclinao da reta:
1 segundo= 0,005 UA /s

60 segundos= 600,005=0,3 UA /min

Transformamos ento as unidades da amostra de microlitro para mililitro:

100 L=0,10 mL

Com a quantidade de protena determinada na amostra de extrato de buriti atravs do

experimento anterior (Quantificao de Protenas - Mtodo de Bradford) temos que em 1
mL de amostra temos 0,4229 mg de Protena, logo em 0,10 mL temos ento 0,04229 mg de
Protena.
Logo, a atividade da peroxidase na amostra de extrato de buriti durante o tempo de
experimento de 2 minutos igual a:
UA
0,3
2 min
min
atividade=
0,04229 mg P

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atividade=1 4,188 UA /mgP

6. CONCLUSES
Com o presente relatrio pde-se determinar a presena da enzima peroxidase na amostra
de extrato de buriti. No entanto, quando foi traada a linha de tendncia correspondente

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aos dados coletados encontrou-se um erro inesperado, uma vez que o R da equao
apresentou um valor muito baixo. Desta forma concluiu-se que o experimento realizado
acima deve ser repetido, e em caso de resultados semelhantes deve ser descartado para a
determinao de peroxidase em extrato de buriti.

7. REFERENCIAS

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LEHNINGER, Albert Lester, 1917-1986.L princpios de bioqumica/David L. Nelson, Michael
M. Cox; traduzido por Arnaldo Antnio Simes, Wilson Roberto Navega Lodi. 3. Ed. So Paulo
2002.