TESE Andreia Peraro Nascimento

UNIVERSIDADE DE SO PAULO
FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS

Programa de Ps-Graduao em Frmaco e Medicamentos
rea de Produo e Controle Farmacuticos
Desenvolvimento e validao de metodologia para medicamentos

contendo dipirona sdica e cloridrato de papaverina isolados e
em associao
Andria Peraro do Nascimento
Tese para obteno do grau de

DOUTOR
Orientador:
Profa. Titular Erika R. M. Kedor -Hackmann
So Paulo
2005
Ficha Catalogr fica

Elaborada pela Diviso de Biblioteca e
Documentao do Conjunto das Qumicas da USP.
N244d
Nascimento, Andria Peraro do

em associao / Andria Peraro do Nascimento. -- So Paulo,
2005.
141 p.
Tese (doutorado) - Faculdade de Cincias Farmacuticas
da Universidade de So Paulo. Departamento de Farmcia.
Orientador: Kedor-Hackmann, Erika Rosa Maria
l. Medicamento: Controle de qualidade 2. Cromatografia em
lquido de alta eficincia: Anlise qumica : Farmacologia
3. Espectrofotometria: Anlise de medicamentos I. T. II KedorHackmann, Erika Rosa Maria, orientador.
615.19015
CDD
Andria Peraro do Nascimento

em associao
Comisso Julgadora
da
Tese para obteno do grau de Doutor
Profa. Dra. Erika Rosa Maria Kedor-Hackmann

orientador/presidente
Profa. Dra. Magali Benjamim de Arajo

1o. examinador
Profa. Dra. Maria Palmira Daflon Gremio

2o. examinador
Profa. Dra. Veni Maria Andres Felli

3o. examinador
Profa. Dra. Maria Ins Rocha Miritello Santoro

4o. examinador
So Paulo, 31 de janeiro de 2006.
A glria no consiste em jamais cair, mas sim de erguer-se

toda vez que for necessrio.
Deus,
Os que confiam no Senhor sero como o monte de Sio, que
no se abala, mas permanece para sempre
Salmo 125:1
Aos meus pais Ademar Peraro e Durvalina Cricco Peraro pela

fora, amor e tanta compreenso, principalmente nos momentos
mais difceis.
Ao meu irmo Luciano Cricco Peraro e Maria Helena pelo

apoio, mesmo distncia.
Ao meu marido Lafaiete Marcos pela sua

compreenso, apoio, amizade, encorajamento e amor.
professora Erika Rosa Maria Kedor-Hackmann, pela

orientao, compreenso, sabedoria, apoio profissional e
pessoal durante a realizao deste trabalho.
AGRADECIMENTOS
Coordenadoria do Programa de Ps-Graduao em Frmaco e Medicamentos do

Departamento de Farmcia da Faculdade de Cincias Farmacuticas da
Universidade de So Paulo.
profa Titular Maria Ins Rocha Miritello Santoro, pela amizade, incentivo
colaborao.
Ao prof Dr Anil Kumar Singh, pela amizade, incentivo e sugestes.
s amigas e colegas Rosa Fernanda Igncio, Elizngela Abreu Dutra, Flvia Garcia
e Njla Mohamed Kassab, pelas sugestes, discusses, companheirismo e convvio.
Ao amigo Marcello Garcia Trevisan do Instituto de Qumica da Unicamp, pelos

clculos e interpretaes com a calibrao multivariada, pelas correes e valiosas
sugestes.
Ao Prof. Dr Ronei Jesus Poppi do Instituto de Qumica da Unicamp, pelo uso do

programa MATLABTM , pela ateno e pacincia.
Ao Prof Dr Martin Steppe, pelas amostras de Dipaverina.
Ao Coordenador do curso de Farmcia do Centro Universitrio de Lavras-Unilavras

prof Disney Ribeiro Dias, pela ateno, compreenso e apoio.
Ao amigo Dr. Matheus Puggina de Freitas, pela preciosa sugesto.
Ao amigo Diogo Teixeira Carvalho, pelas correes e incentivo.
Aos colegas do Laboratrio de Controle de Qualidade Fsico-Qumico Tatiana de

Fzio, Pedro Garcia, Ricardo Leite, Renata pelo auxlio e amizade.
funcionria Iria Raimunda da Silva pelo carinho, compreenso e colaborao.
Ktia Botelho, pela amizade e colaborao.
s profas Dra Valentina Porta e Dra Maria Palmira Gremio pelas correes e
sugestes.
Eliane Silva de Sousa, bibliotecria do Centro Universitrio de Lavras-Unilavras,

pelo auxlio bibliogrfico.
Ao prof Dr Jorge Seferin Martins pelo apoio.
s funcionrias Raquel e Regina Maura Rojas, pela colaborao.
Elizabete C. S. Paiva, secretria do Programa de Ps-Graduao em Frmaco e

Medicamentos, pela ateno e colaborao.
Aos funcionrios da Secretaria de Ps-Graduao da Faculdade de Cincias

Farmacuticas da Universidade de So Paulo Elaine M. Ychico, Jorge de Lima e
Maj pela ateno e colaborao.
Aos tios do Lafaiete, Antnio Batista da Matta e Odete Caputo da Matta, pelo apoio e
incentivo.
Fundao de apoio para o remdio popular Furp, pelo fornecimento de matriasprimas.
Indstria Cristlia Produtos Qumicos e Farmacuticos pelo fornecimento de

matrias-primas e solventes.
Ao CNPq pela concesso da bolsa, mesmo tendo sido utilizada por alguns meses.
A todos que direta e indiretamente colaboraram pela realizao deste trabalho.
RESUMO
A dipirona sdica em associao com o cloridrato de papaverina usada

como medicamento analgsico e antiespasmdico. O objetivo desta pesquisa foi o
desenvolvimento e validao de mtodos analticos para a determinao de dipirona
sdica e cloridrato de papaverina em preparaes farmacuticas. A soluo oral
contendo dipirona sdica isolada e a soluo oral contendo a associao de dipirona
sdica e cloridrato de papaverina foram determinadas por cromatografia lquida de
alta eficincia, com as condies padronizadas: Coluna cromatogrfica: Supelcosil
C18 - LCPH (250 mm X 4,6 mm, 5m) Supelco e pr coluna C -18 (20 X 4,6 mm,
5m) Supelco, fase mvel: gua: acetonitrila: metanol (70: 20: 10) trietilamina 0,3% e
pH: 3,0 ajustado com cido ortofosfrico, vazo de 0,7 mL/min e deteco no UV a
254 nm.
Para a soluo injetvel contendo cloridrato de papaverina foi padronizado e
validado o mtodo por cromatografia lquida de alta eficincia, empregando coluna
cromatogrfica Merck LiChrospher 100 RP - 18 (125 X 4,6 mm, 5m), fase mvel:
gua : acetonitrila : metanol ( 70 : 20 : 10 ) trietilamina 0,3% e pH: 3,0 ajustado com
cido ortofosfrico, vazo: 1,0 mL/min e deteco no UV a 254 nm.
Para a determinao simultnea de dipirona sdica e cloridrato de papaverina
em
soluo
oral,
foi
desenvolvida
uma
nova
metodologia
utilizando
espectrofotometria na regio do ultravioleta (UV) e calibrao multivariada. Neste

sistema, utilizou-se a faixa de leitura: 210 a 300 nm (passo 0,5 nm) e metanol como
solvente. A calibrao foi feita com 25 solues nas concentraes de 15,0 a 35,0
g/mL para a dipirona sdica e de 0,5 a 1,5 g/mL para o cloridrato de papaverina.
As curvas de calibrao foram lineares. Os excipientes das amostras no
interferiram nas metodologias. Foram apresentados adequados resultados de desvio
padro e mdia de recuperao. Os mtodos propostos mostraram especificidade,
preciso e exatido para a determinao de dipirona sdica e cloridrato de
papaverina em formulaes farmacuticas.
ABSTRACT
Dipyrone sodium and papaverine hydrochloride are used as an analgesic and

antispasmodic drugs. The objective of this study was to develop and validate
analytical
methods
for
determination
of
dipyrone
sodium
and
papaverine
hydrochloride in pharmaceutical preparations.

The commercial formulations with dipyrone hydrochloride alone and its
combination with papaverine hydrochloride were analysed by liquid chromatography.
A Supelcosil C18 - LCPH column (250 X 4.6 mm, 5m) Supelco and a mobile phase
constituted by water: acetonitrile: methanol (70:20:10), with 0.3% of triethylamine and
pH adjusted to 3.0 with phosphoric acid were used. The flow rate was 0.7 mL/min
and UV detection at 254 nm.
The injection formulation with papaverine hydrochloride was analysed by a
high performance liquid chromatographic method. The method was standardized and
validated using a Merck LiChrospher 100 RP 18 column (125 X 4.6 mm, 5m) and
a mobile phase constituted of water: acetonitrile: methanol (70:20:10), with 0.3% of
triethylamine and pH adjusted to 3.0 with phosphoric acid. The flow rate was 1.0
mL/min and UV detection at 254 nm.
The same oral solution with the combination of dipyrone sodium and
papaverine hydrochloride was also quantified by UV spectrophotometry using
multivariate calibration, in the range of 210 to 300 nm. The calibration set was
constructed with twenty-five solutions in the concentration ranges from 15.0 to 35.0
g mL-1 for dipyrone sodium and 0.5 to 1.5 g mL-1 for papaverine hydrochloride in
methanol.
The results show that the methods presented good relative standard deviation
and good recovery values. The obtained data indicates specificity, precision and
accuracy of the proposed methods for the simultaneous determination of dipyrone
sodium and papaverine hydrochloride in pharmaceutical formulations.
SUMRIO
1 INTRODUO
01
2 REVISO DE LITERATURA
05
2.1 Dor
2.1.1 Classificao da dor
2.1.2 Tratamentos da dor
2.2 Analgsicos, antipirticos e antiinflamatrios
2.2.1 Dipirona sdica
2.2.1.1.Metabolismo
2.2.1.2.Mecanismo de ao da dipirona
2.2.1.3 Usos clnicos da dipirona
2.2.1.4 Polmica sobre o uso da dipirona
2.2.2 Metodologias para a anlise de dipirona sdica
2.2.2.1 Espectrofotometria Ultravioleta/Visvel (UV/VIS)
2.2.2.2 Cromatografia lquida de alta eficincia CLAE
2.2.2.3 Outras metodologias analticas para a determinao de dipirona sdica
2.3 Cloridrato de papaverina
2.3.1 Farmacocintica
2.3.2 Farmacodinmica
2.3.3 Usos clnicos
2.3.1Metodologias analticas para determinao de cloridrato de papaverina
2.3.1.1. Cromatografia lquida de alta eficincia CLAE
2.3.1.2 Outras metodologias utilizadas para a determinao analtica de
cloridrato de papaverina
2.4 Espectrofotometria no Ultravioleta e Visvel (UV/VIS)
2.5 Cromatografia lquida de alta eficincia CLAE
2.5.1 Instrumentao para a CLAE
2.5.2 Modos de separao por CLAE
2.5.2.1 Cromatografia em fase normal
2.5.2.2 Cromatografia em fase reversa
2.5.2.3 Cromatografia de compostos inicos
2.5.2.4 Cromatografia de troca inica
2.5.2.5 Cromatografia de excluso
2.6 Mtodos de calibrao multivariada
2.7 Quimiometria
2.8 Validao de mtodos analticos
05
06
07
08
11
12
13
14
15
19
19
22
23
24
25
25
25
26
26
29
30
34
35
37
38
39
39
40
41
41
44
45
3 OBJETIVOS
51
4 MATERIAL E MTODOS
4.1 Material
4.1.1 Reagentes e solventes
4.2 Substncias qumicas de referncia
4.1.3 Equipamentos e acessrios
4.1.4 Amostras
52
52
52
53
53
54
4.2 Mtodos
4.2.1 Testes preliminares
4.2.2 Ensaios cromatogrficos preliminares para a anlise de dipirona sdica
e cloridrato de papaverina
4.2.3 Validao da metodologia analtica para a cromatografia lquida de
alta eficincia
4.2.3.1 Padronizao do mtodo cromatogrfico para a associao de
dipirona sdica e cloridrato de papaverina
4.2.3.1.1 Construo da curva analtica
4.2.3.1.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes para a Amostra 1
4.2.3.1.3 Aplicao do mtodo padronizado Amostra 1
4.2.3.2 Padronizao do mtodo cromatogrfico para o cloridrato de
papaverina isolado
4.2.3.2.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes
4.3 Ensaios preliminares utilizando a espectrofotometria no UV com aplicao
do PLS (Partial Least Squares) para a anlise de dipirona sdica e
4.3.1 Modelo de calibrao para a espectrofotometria no UV com aplicao
do PLS
4.3.1.1 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes
4.3.1.2 Aplicao do mtodo padronizado Amostra 1
5 RESULTADOS
5.1 Testes preliminares com as substncias de referncia
5.1.1 Testes descritos pela Farmacopia Britnica
5.1.2 Teste de identificao por espectrofotometria no UV
5.2 Ensaios cromatogrficos preliminares para a anlise de dipirona
sdica e cloridrato de papaverina
5.2.1 Testes preliminares com a coluna cromatogrfica Merck
LiChrospher 100RP- 8 (125 X 4,6 mm , 5m)
5.2.2 Testes preliminares com a coluna cromatogrfica Merck LiChrospher
100 RP -18 (125 X 4,6 mm, 5m)
5.2.3 Testes preliminares com a coluna cromatogrfica Nova Pack C18
(300 x 3,9mm)
5.2.4 Seleo de melhor comprimento de onda atravs de espectros de
absorbncia
5.3 Padronizao do mtodo cromatogrfico para a associao de dipirona
5.3.1 Construo da curva analtica
5.3.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes para a Amostra 1 Especificidade
5.3.3 Aplicao do mtodo padronizado Amostra 1
56
56
57
60
60
61
63
64
65
67
69
70
70
72
74
75
77
78
81
81
81
83
84
84
86
88
88
90
90
93
95
5.3.4 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes para a Amostra 2

Especificidade
5.4 Padronizao do mtodo cromatogrfico para o cloridrato de papaverina
em amostra isolada
5.4.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes
5.5 Ensaios preliminares utilizando a espectrofotometria no UV com aplicao
do PLS para a anlise de dipirona sdica e cloridrato de papaverina
5.5.1 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes - Especificidade
5.6 Comparao estatstica dos mtodos de cromatografia lquida (CLAE) e
espectrofotometria na regio do ultravioleta (UV) com aplicao do PLS
97
99
100
100
103
104
106
109
113
6 DISCUSSO
116
7 CONCLUSES
124
8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
126
1. INTRODUO
A dor , em geral, um grande aliado do ser humano, um indicador de que

alguma coisa vai mal no organismo. ela que aponta para a existncia de uma
doena ou avisa que o corpo pode ter chegado ao limite em razo de um esforo
fsico ou mesmo do stress. Em muitos casos a dor a prpria doena, no
consegue-se a cura (BUCHALLA, A. P.; POLES, C., 2002). De acordo com a
Associao Internacional do Estudo da Dor, a dor uma experincia sensitiva e
emocional desagradvel associada ou relacionada leso real ou potencial dos
tecidos, e cada indivduo aprende a utilizar esse termo atravs das suas prprias
experincias anteriores. Da que comum se ouvir que cada pessoa entende da sua
dor, o quanto di, onde di, como di, e o que reduz ou piora a sensao dolorosa
(International Association for the Study of Pain, IASP) (TEIXEIRA, M. J, 2005).
De acordo com dados aceitos e divulgados por diversas entidades mdicas

internacionais, pelo menos 30% dos indivduos sentem dor durante algum momento
da sua vida e, em mais de um tero dos casos, a dor tem durao superior a um dia.
A dor a causa principal de sofrimento, incapacitao para o trabalho e ocasiona
graves conseqncias psicossociais e econmicas. No existem dados estatsticos
oficiais sobre a dor no Brasil, mas a sua ocorrncia tem aumentado
substancialmente nos ltimos anos (SOCIEDADE, 2005).
Os dados referentes incidncia da dor crnica, aquela cuja durao igual ou

superior a seis meses, mostram que entre 7 a 40% da populao mundial tm este
tipo de dor e, desse contingente de pessoas, cerca de 60% ficam parcial ou
totalmente incapacitados, de maneira transitria ou permanente, comprometendo de
modo significativo a sua qualidade de vida (SOCIEDADE, 2005).
O aumento dos casos de dor registrados em todo o mundo, especialmente os de

dor crnica, vem crescendo talvez em decorrncia de novos hbitos de vida, maior
longevidade dos indivduos, prolongamento da sobrevida de pessoas com males

naturalmente fatais, modificaes do ambiente em que se vive e, provavelmente, do
reconhecimento de novos quadros dolorosos e da aplicao de novos conceitos que
expliquem ou justifiquem as to diversas sensaes dolorosas.
As dores que mais atingem a populao so a cefalia, quase 30 % dos

brasileiros sofrem de dores de cabea crnicas, as mais comuns so a enxaqueca e
a cefalia tensional. A cefalia de cunho crnico ocupa o primeiro lugar no apenas
entre os adultos, mas tambm entre as crianas.
A lombalgia, tradicional dor nas costas, vitima cerca de 20 % da populao.

Outros tipos de dores musculares que surgem em qualquer parte do corpo, esto
associadas a movimentos repetitivos, m postura, stress, traumatismos ou
sobrecarga muscular (VAN TULDER M, KOES B, 2001). O tratamento, na maioria
das vezes, consiste de analgsicos, antidepressivos e sesses de alongamento.
Outras causas de dor crnica so a artrose (desgaste da cartilagem de uma

articulao) e artrite reumatide (inflamao na articulao), nesses casos
inevitvel o uso contnuo de analgsicos e antiinflamatrios (BUCHALLA, A. P.;
POLES, C., 2002)
Dentre os 5 frmacos mais vendidos em todo o mundo, 4 so analgsicos: a dor

movimenta uma indstria de bilhes de dlares anualmente. Hoje, graas ao de
frmacos cada vez mais eficazes, somos capazes de lutar e vencer a dor (QUIMICA
VS DOR, 2005).
A produo de analgsicos e antiinflamatrios o ramo que mais cresce em toda

a indstria farmacutica mundial. O Brasil o segundo maior mercado consumidor
de analgsicos do mundo, com cerca de 500 milhes de dlares movimentados
anualmente. A lista dos dez medicamentos mais procurados nas farmcias
brasileiras inclui quatro medicamentos para combater a dor, dentre eles a dipirona
sdica um dos medicamentos mais consumidos (BUCHALLA, A. P.; POLES, C.,
2002).
A dipirona , em verdade, o principal analgsico da teraputica brasileira, com

31,8 % do mercado, sendo o paracetamol com 29,7 % em segundo e o cido acetil
saliclico, com 27,1 %, em terceiro (GAZETA MERCANTIL, 2003). Existem no pas
125 produtos a base de dipirona, sendo 71 em associao a outras substncias
(ANDRADE, M. P. 2005). Dentre estas h medicamentos com associao de
dipirona sdica, que age como analgsico e antipirtico e cloridrato de papaverina,
que possui ao antiespasmdica. No mercado brasileiro comercializam-se os
seguintes medicamentos contendo essa associao: Atroveran (Laboratrio DM);
Melpaz
(Laboratrio
Profarb);
Sedalene
(Cristlia
Produtos
Qumicos
Farmacuticos), entre outros (DEF, 2004; DEF, 2005).
H tambm outras associaes entre analgsicos, por exemplo: dipirona sdica e

paracetamol; paracetamol e ibuprofeno; dipirona, citrato de orfenadrina e cafena;
dipirona e butil brometo de escopolamina; dipirona, cloridrato de prometazina e
cloridrato de adifenina, entre outros (DEF, 2005).
Nos compndios oficiais no constam monografias de medicamentos analgsicos

em associao, a maioria analisada individualmente.
A cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) um dos mtodos analticos

mais utilizados para a determinao de compostos em misturas, como por exemplo,
a associao de frmacos (ALTUN, M.L., 2001). Um dos grandes problemas dessa
metodologia o alto custo dos equipamentos e sua manuteno, alm do uso de
solventes altamente puros.
Alguns laboratrios de pesquisas tm procurado tcnicas alternativas quando no

h possibilidade de se usar a CLAE. Os pesquisadores tm buscado melhorar as
metodologias j existentes.
Um grande avano nas tcnicas instrumentais analticas foi impulsionado pela

presena de microprocessadores e microcomputadores nos laboratrios qumicos,
no incio dos anos setenta. Foi necessrio criar tcnicas de tratamento de dados
mais complexas do ponto de vista matemtico e estatstico, surgindo uma nova

disciplina chamada quimiometria (SENA, M.M.; POPPI, R.J., 2004).
A quimiometria (do ingls chemometrics) descreve as tcnicas e operaes

associadas com o tratamento matemtico e a interpretao de dados qumicos. Com
o avano da instrumentao e automao dentro dos laboratrios de anlise, uma
enorme quantidade de dados, tabelas e grficos comearam a ser gerados muito
rapidamente. A identificao, classificao e interpretao desses dados podem ser
fatores limitantes na eficincia e na operao efetiva das anlises, principalmente
sem a utilizao de um tratamento de dados adequado.
A espectroscopia molecular tem sido a rea da qumica analtica, onde mais a

quimiometria tem contribudo. So numerosas as metodologias quantitativas
desenvolvidas nas ltimas dcadas baseadas na combinao de calibrao
multivariada (BRERETON, R.G., 2000) com tcnicas de espectroscopia molecular
tais como, absoro no ultravioleta (UV) (DIN, E.; BALEANU, D.; ONUR, F.,2001),
e/ou no visvel, no infravermelho (IV) mdio ou prximo, Raman e fluorescncia
molecular (BRAGA, J. W. B.; POPPI, R.J. 2004).
Para a determinao direta de frmacos tem sido aplicada a combinao de

quimiometria
espectroscopia
molecular.
calibrao
multivariada
espectroscopia molecular uma alternativa rpida, simples e relativamente barata

para a determinao direta de frmacos (SENA, M.M.; POPPI, R. J, 2004).
2. REVISO DE LITERATURA
2.1 Dor
A dor continua sendo uma das grandes preocupaes da Humanidade. Desde

os primrdios do ser humano, conforme sugerem alguns registros grficos da prhistria e os vrios documentos escritos ulteriormente, o homem sempre procurou
esclarecer as razes que justificassem a ocorrncia de dor e os procedimentos
destinados a seu controle. A expresso da dor varia no somente de um indivduo
para outro, mas tambm de acordo com as diferentes culturas. A ocorrncia de dor,
especialmente crnica, crescente, talvez em decorrncia de novos hbitos de vida;
maior longevidade do indivduo; prolongamento de sobrevida dos doentes com
afeces clnicas naturalmente fatais; modificaes do ambiente em que vivemos; e
provavelmente do reconhecimento de novos quadros dolorosos e da aplicao de
novos conceitos que traduzam seu significado. Alm de gerar estresses fsicos e
emocionais para os doentes e para os seus cuidadores, a dor razo de fardo
econmico e social para a sociedade (TEIXEIRA, M. J, 2005).
Nos Estados Unidos, dor uma prioridade para a sade pblica, sendo a
partir de 2000, escolhida como a dcada da dor, e um dos quatro aspectos
analisados no credenciamento e pontuao dos hospitais. Os hospitais tambm
devem ter o 5 sinal vital (dor) registrado obrigatoriamente, alm de temperatura,
presso arterial, pulso e respirao nas papeletas hospitalares (MARQUEZ, J. O.,
2005).
Atualmente o tratamento da dor tem recebido ateno especial de mdicos de

todo o mundo, com um crescente nmero de profissionais que estudam e se
dedicam ao aperfeioamento dos cuidados clnicos e teraputicos da dor. H
tambm todo um movimento para incluir a dor como 5 sinal vital (SOCIEDADE,
2005), como j ocorre nos Estados Unidos.
2.1.1 Classificao da dor
A dor pode ser considerada como um sintoma ou manifestao de uma

doena ou afeco orgnica, mas tambm pode vir a constituir um quadro clnico
mais complexo. Existem muitas maneiras de se classificar a dor. Considerando a
durao da sua manifestao, ela pode ser de trs tipos:
- DOR AGUDA - Aquela
que se manifesta transitoriamente durante um perodo relativamente curto, de

minutos a algumas semanas, associada leses em tecidos ou rgos, ocasionadas
por inflamao, infeco, traumatismo ou outras causas. Normalmente desaparece
quando a causa corretamente diagnosticada e quando o tratamento recomendado
pelo especialista seguido corretamente pelo paciente. A dor constitui-se em
importante sintoma que primariamente alerta o indivduo para a necessidade de
assistncia mdica, por exemplo: a dor ps-operatria (que ocorre aps uma
cirurgia); a dor que ocorre aps um traumatismo; a dor durante o trabalho de parto; a
dor de dente; as clicas em geral, como nas situaes normais (fisiolgicas) do
organismo que podem provocar dores agudas, como o processo da ovulao e da
menstruao na mulher (SOCIEDADE, 2005).
DOR CRNICA - Tem durao prolongada, que pode se estender de vrios

meses a vrios anos e que est quase sempre associada a um processo de doena
crnica. A dor crnica tambm pode ser conseqncia de uma leso j previamente
tratada. Exemplos: Dor ocasionada pela artrite reumatide (inflamao das
articulaes), dor do paciente com cncer, dor relacionada a esforos repetitivos
durante o trabalho, dor nas costas e outras (SOCIEDADE, 2005).
DOR RECORRENTE - Apresenta perodos de curta durao que, no entanto,

se repetem com freqncia, podendo ocorrer durante toda a vida do indivduo,
mesmo sem estar associada a um processo especfico. Um exemplo clssico deste
tipo de dor a enxaqueca (SOCIEDADE, 2005).
2.1.2 Tratamentos da dor
O tratamento adequado dos processos dolorosos tem como pilar fundamental

o diagnstico das causas que provocaram o seu aparecimento, com base no exame
clnico e nos exames complementares. Nos casos de dor aguda, a remoo da
causa da dor (por exemplo, a extrao de um dente cariado), o uso de
medicamentos adequados e em determinados casos procedimentos de fisioterapia e
/ ou psicologia so suficientes para a melhora da dor e restabelecimento do individuo
em suas atividades normais. Os casos de dor crnica demandam um tratamento
mais complexo e prolongado, por serem resultantes de mecanismos multifatoriais
que conduziram o organismo afetado a esse ponto de cronicidade e, em geral,
demandam avaliao por especialistas de vrias reas para se obter um melhor
alvio da dor. Os mtodos para o tratamento da dor so utilizados de maneira
associada (conjunta), conforme a necessidade de cada paciente e so descritos a
seguir:
- TRATAMENTO MEDICAMENTOSO: A medicao deve ser utilizada de

acordo com a orientao mdica e no somente quando o paciente considere
necessrio. Consiste na administrao por via oral, injetvel ou uma outra mais
apropriada, de produtos como os analgsicos e anti-Inflamatrios, que combatem a
dor e as inflamaes nos tecidos ou rgos e de produtos adjuvantes, que so
auxiliares dos analgsicos, aumentando a sua eficincia no alvio da dor e, ao
mesmo tempo, melhorando o apetite, o humor e a parte emocional. So eles:
antidepressivos, que tem efeito analgsico e que, alm disso, melhoram o humor, o
sono e o apetite; neurolpticos, que em geral diminuem a ansiedade gerada pela dor
e que tambm colaboram no seu alvio; corticosterides, que em geral reduzem o
inchao e a inflamao local, aumentam o apetite e o nimo. Em situaes especiais
tambm so utilizados os anticonvulsivantes, miorrelaxantes e outros tranqilizantes.
- TRATAMENTOS AUXILIARES: Alm dos medicamentos, a utilizao de

recursos como a fisioterapia, a acupuntura e a psicologia auxiliam num melhor
controle do processo da dor. Esses recursos, alm de aliviarem a dor, tm a
vantagem de apresentarem pouco ou nenhum efeito colateral e de diminuir a

necessidade de analgsicos (TEIXEIRA, M. J, 2005).
2.2 Analgsicos, antipirticos e antiinflamatrios
A dor e a febre, associadas ou no a processos inflamatrios, tm

preocupado a humanidade h muitos sculos. A utilizao de infuses de plantas,
notadamente de Salix alba vulgaris ( casca do salgueiro) , como antipirtico remonta
ao sculo XVIII. Da casca do salgueiro Leroux isolou, em 1827, a salicina, que, por
hidrlise, libera glicose e lcool saliclico (saligenina). Mais tarde, em 1838, Piria
isolou um cido da salicina, que denominou de cido saliclico. Em 1844, o cido
saliclico foi isolado por Cahours do leo de gaultria (wintergreen), e finalmente, em
1860, Kolbe e Lautemann conseguiram obt-lo atravs de sntese. Em 1899, Dreser
introduziu no uso clnico o cido acetilsaliclico. Tais descobertas foram seguidas
pela introduo de novos produtos, dando incio teraputica de importantes
compostos de ao analgsica, antipirtica e antiinflamatria, que ainda hoje
continuam em franco desenvolvimento (SILVA, P. 2002)
Analgsicos
so
depressores
seletivos
do
sistema
nervoso
central
empregados para aliviar a dor sem causar a perda de conscincia. Agem por elevar
o limiar da percepo da dor. O termo analgesia vem da palavra grega que significa
sem dor.
A associao Mdica Norte-Americana dividiu os analgsicos em duas

classes: analgsicos fortes ou hipnoanalgsicos e os analgsicos suaves.
Os analgsicos suaves, isto , os que eliminam dores moderadas, tais como

cefalia, mialgia, artralgia e outras, podem apresentar tambm aes antitrmica,
antiinflamatria e antigotosa, alm de outras. Distinguem-se, portanto, os
antipirticos, os anti-reumticos e os uricosricos.
Antipirticos ou antitrmicos so frmacos que eliminam ou aliviam os

estados febris. No baixam a temperatura normal, mas apenas quando ela est
elevada.
A temperatura corporal controlada por um mecanismo regulador situado no

hipotlamo, que controla a produo e a perda de calor. O hipotlamo , por assim
dizer, o termostato do organismo. Ao sobrevir febre, eleva-se o nvel do
termostato, embora persista o equilbrio entre a produo e perda de calor. Entre as
causas da febre sobressaem as seguintes: inflamao, neoplasias, leses do
sistema nervoso central, desidratao (sobretudo em crianas), certos frmacos,
molstias infecciosas (KOROLKOVAS, A. BURCKHALTER, J. H., 1988).
O desequilbrio entre a produo e a perda de calor desencadeado pelos

neurnios do hipotlamo em resposta a um estmulo provocado por piretognios
endgenos leucocitrios, que so protenas especficas veiculadas pelo plasma.
Estes piretognios so sintetizados por certos tipos de leuccitos quando os
piretognios exgenos (tais como bactrias) invadem o organismo. Os antipirticos
produzem abaixamento da temperatura corporal elevada em conseqncia do
aumento da perda de calor (KOROLKOVAS, A. BURCKHALTER, J. H., 1988).
Os analgsicos antipirticos e antiinflamatrios constituem um grupo de

compostos muito heterogneos com vrias estruturas qumicas, podendo ser
distribudos nas seguintes classes, de acordo com o grupo qumico a que pertencem
(KOROLKOVAS, FRANA, F.F.A.C., 2002):
- salicilatos: salicilato de sdio, cido acetilsaliclico, salicilamida, diflunisal;
- derivados da pirazolona: fenazona; metamizol;propifenazona
- derivados do para-aminofenol: paracetamol (acetaminofeno);
- derivados de cidos arilpropinicos: ibuprofeno, naproxeno, fenoprofeno;
10
Alm dos analgsicos que tambm so usados como antipirticos, h aqueles

que se utilizam exclusivamente como analgsicos, embora possam exercer
igualmente outras aes. Esses frmacos so divididos em: frmacos usados no
tratamento
de
neuralgias;
fenamatos;
frmacos
antienxaqueca
diversos
(KOROLKOVAS, FRANA, F.F.A.C., 2002) :
- frmacos usados no tratamento de neuralgias: neuralgia do trigmeo

carbamazepina
(anticonvulsivante);
baclofeno
(miorrelaxante)
fenitona
(anticonvulsivante); neuralgia glossofarngea carbamazepina; neuralgia psherptica amitriptilina (antidepressivo); neuralgia diabtica carbamazepina,
fenitona ou antidepressivos tricclicos;
-fenamatos e issteros: cido mefenmico; clonixinato de lisina; floctafenina;
frmacos
antienxaqueca:
diidroergotamina;
ergotamina;
metisergida;
naratriptana; pizotifeno; rizatriptana; sumatriptana; zolmitriptana; betabloqueadores;

bloqueadores do canal de clcio; antidepressivos e compostos de ltio;
- diversos: flupirtina, levomepromazina e viminol.
No comrcio so encontradas especialidades farmacuticas que contm um

produto isoladamente ou associao de princpios ativos pertencentes ao mesmo ou
a diferentes grupos (SILVA, P. 2002).
11
2.2.1 Dipirona sdica
Figura 1 - Estrutura qumica da dipirona
A dipirona tambm chamada de Noramidopiriniometanossulfonato sdico,

analgina, metamizol, metampirona, noramidopirona, sulpirina e por outros nomes,
um dos derivados do pirazol.
P cristalino branco ou quase branco, inodoro, solvel em gua.

reconhecidamente analgsico e antipirtico eficiente. Por ser hidrossolvel, pode ser
administrado parenteralmente em grandes doses, o que constitui vantagem e,
provavelmente, contribui para o abuso deste frmaco, que o analgsico e
antipirtico
mais
vendido
no
Brasil
sob
dezenas
de
nomes
comerciais,
principalmente como constituinte de associaes medicamentosas (KOROLKOVAS,

A. BURCKHALTER, J. H., 1988).
12
A dipirona sdica um derivado pirazolnico introduzido na prtica clnica em

1922, na Alemanha. A histria de sua sntese remonta a 1883, quando a nica forma
conhecida de combate febre, na Europa, era o consumo de um produto feito
base de casca de cinchona, rvore natural de Java, da famlia das rubiceas. Este
produto, alm de ter eficincia relativa, tinha custo excessivamente alto, em razo de
sua escassez e difcil obteno. Assim, a produo industrial da antipirina (ou
fenazona), que um derivado pirazolnico sintetizado a partir da anilina (um
corante), por um laboratrio farmacutico alemo, medida que permitiu a produo
sinttica de um medicamento que s podia ser obtido da Natureza, tornou o combate
febre mais eficaz e menos oneroso. Tal fato era essencial para o combate a
diversas doenas que grassavam na poca, notadamente tuberculose, malria e
demais epidemias. Somente alguns anos aps sua introduo constataram-se as
propriedades analgsicas do composto. Tal fato ocorreu em 1889, durante um surto
da gripe influenza que assolou a Europa, onde este medicamento foi utilizado
amplamente para o tratamento. Estas propriedades analgsicas foram reforadas
pela sntese e introduo no mercado alemo de um novo composto em 1921, a
primeira pirazolona de uso clnico nomeada dipirona (em verdade, composta por
50% melubrina e 50% aminopirina). No Brasil, a dipirona foi introduzida em 1922
pela Hoechst AG, com o nome de Novalgina (ANDRADE, M. P., 2005).
2.2.1.1.Metabolismo
A dipirona apresenta, de acordo com estudos realizados em voluntrios

humanos, quatro metablitos conhecidos: 4-metil-amino-antipirina (MAA), 4-aminoantipirina (AA), 4-acetil-amino-antipirina (AAA) e 4-formil-amino-antipirina (FAA)
(LEVY, M.; FLUSSER, D.; ZYLBER-KATZ , E; GRANIT, L, 1984). Aps
administrao por via oral, a dipirona passa por rpida hidrlise no-enzimtica,
determinando a formao do metablito MAA, que a seguir metabolizado no fgado
por demetilao a AA, e por oxidao a FAA (ERGN, H.; FRATTARELLI, D.A.C.;
ARANDA, J. V., 2004). Nenhum desses metablitos liga-se extensivamente s
protenas
plasmticas,
(ROHDEWALD,
P;
DREHSEN,
G;
MILSMANN,
E;
DERENDORF, H., 1983) sendo predominantemente excretados pelo rim. Os efeitos

analgsicos correlacionam-se, de modo bem prximo, com as concentraes dos
13
dois primeiros metablitos acima descritos (MAA e AA) (SCHUG, S.A.; ZECH, D. ;
DRR, U., 1990). Alm da importante propriedade analgsica destacada ao longo
do tempo, o frmaco ainda apresenta propriedades antiinflamatrias que foram
identificadas em alguns modelos farmacolgicos, mas cuja relevncia clnica , at o
presente momento, questionvel. Weithmann e Alpermann(WEITHMANN, K.U.;
ALPERMANN, H.G, 1985) avaliaram os efeitos bioqumicos e farmacolgicos da
dipirona e metablitos sobre a cascata do cido araquidnico e verificaram que os
metablitos 4-MAA e 4-AA inibiram a sntese de prostaglandinas na faixa de 103 a
104 mol/L, sendo, portanto, comparveis ao cido acetilsaliclico, enquanto os
outros dois metablitos mostraram-se praticamente inativos. Os dados do suporte
ao conceito de serem estes os metablitos responsveis pelos efeitos analgsicos
clnicos da dipirona.
2.2.1.2.Mecanismo de ao da dipirona
A despeito de inmeros estudos comportamentais e eletrofisiolgicos, o

mecanismo de ao pelo qual se evidencia o efeito analgsico da dipirona ainda no
est claramente elucidado, parecendo concorrer mecanismos perifricos e centrais.
Em nvel perifrico, alguns trabalhos experimentais iniciais enfatizam a ao da
dipirona sobre a hiperalgesia decorrente da leso tecidual, tanto por inibio da
ativao da adenilciclase por substncias hiperalgsicas como por bloqueio direto do
influxo de clcio no nociceptor (LORENZETTI, B.B., FERREIRA, S.H., 1985).
Lorenzetti e Ferreira descrevem a ativao de uma via arginina-xido ntrico para
explicar a analgesia perifrica e espinhal da dipirona (LORENZETTI, B.B.;
FERREIRA, S.H. 1996). Trabalhos experimentais mais recentes sugerem que o
efeito antinociceptivo perifrico tambm decorre da ativao de canais de potssio
sensveis ao ATP (ALVES, D.; DUARTE, I.,2002). Sachs, Cunha e Ferreira, neste
sentido, situam a dipirona como fazendo parte de uma nova classe de frmacos
analgsicos capazes de ativar a via arginina/ NO/ GMPc/protena cinase G/canais de
K+ ATP sensveis ao ATP, constituindo-se numa categoria de analgsicos
perifricos com mecanismo de ao diverso dos glicocorticides ou inibidores de
cicloxigenases. Outros grupos procuraram investigar o mecanismo de ao
analgsico da dipirona a partir da reconhecida propriedade antipirtica, que decorre
14
da capacidade de inibio de prostaglandinas no sistema nervoso central (SNC),

notadamente no hipotlamo. Para estes autores, a propriedade analgsica da
dipirona dever-se-ia ao dos metablitos sobre a sntese de prostaglandinas no
SNC. (SACHS, D; CUNHA, F.Q.; FERREIRA, S.H., 2004). Campos e colaboradores
estudaram a ao da dipirona sobre a regulao da atividade das cicloxigenases,
descrevendo-se, mais recentemente, que a dipirona seria capaz de inibir uma
isoenzima da cicloxigenase (COX 3), mecanismo central pelo qual o frmaco
exerceria as aes analgsicas e antipirticas. (ANDRADE, M.P., 2005). Muitos
trabalhos tm respaldado, porm, que o mecanismo de ao analgsico da dipirona
se efetive, de modo relevante, por sua ao espinhal. Neugebauer e colaboradores
em
estudos
conduzidos
em
felinos
roedores,
apresentam
evidncias
eletrofisiolgicas que respaldam um stio de ao antinociceptivo espinhal, situandoo no corno dorsal da medula espinhal (NEUGEBAUER, V.; SCHAIBLE, H.G.; HE, X.;
LCKE, T.; GNDLING, P.; SCHMIDT, R.F., 1994). Este ltimo stio de ao
reforado por estudos recentes (VAZQUEZ, E; HERNANDEZ, N; ESCOBAR, W;
VANEGAS, H., 2005) que administrando a dipirona por via venosa no rato (200
mg/kg) demonstraram a ativao de circuitos opioidrgicos endgenos na substncia
periaquedutal cinzenta e no ncleo magno da rafe - ativao esta reversvel pela
naloxona diretamente aplicada nestas reas, que compem o chamado sistema
descendente inibitrio espinhal. Deste modo, parece que o mecanismo de ao da
dipirona permanece no totalmente elucidado, possivelmente decorrendo a ao
analgsica da atividade tanto central quanto perifrica, e em diferentes nveis de
processamento da informao dolorosa.
2.2.1.3 Usos clnicos da dipirona
A dipirona um analgsico no-opiide empregado em mbito mundial para

tratamento da dor, tanto aguda quanto crnica (EDWARDS, J. E., MCQUAY, H. J.,
2002). A eficcia clnica em diversos quadros lgicos tem sido relatada, destacandose, entre outros, a utilidade no tratamento da dor ps-operatria (STANKOW, G.;
SCHMIEDER, G.; LECHNER, F.J.; SCHINZEL, S., 1995), episdios de clicas
nefrticas (GARCIA-ALONSO, F.; GONZALES DES SUSO, M.J.; LOPEZ-ALVAREZ,
M.; PALOP, R.; LUCENA, M.I.; MARIN R., 1991) crises de enxaqueca com e sem
15
aura (BIGAL, M.E.; BORDINI, C.A.; SPECIALI, J.G., 2002), tratamento da dor
dentria ( ANDRADE, M.P., 2005) e dores do cncer (RODRIGUEZ, M.; BARUTELL,
C.; RULL, M.; GALVEZ, R; PALLARES, J.; VIDAL, F.; ALIAGA, L., 1994),
considerada um dos melhores antitrmicos para crianas (BERLIN, C., 2001;
SPIGSET O, HAGG S, 2000). A dipirona sdica, disponvel em formulaes para uso
por via oral, parenteral e retal, bastante utilizada como agente nico ou
coadjuvante no tratamento da dor ps-operatria. Posso e outros autores em
trabalho clnico, prospectivo e duplamente-encoberto com placebo conduzido em
cirurgias abdominais, avaliaram a importncia da dose administrada no perodo psoperatrio no que diz respeito analgesia conferida pela dipirona, onde se
empregaram trs diferentes doses (500 mg, 1.000 mg e 2.000 mg). Os autores
ressaltaram a analgesia dose-dependente da dipirona, descrevendo que o aumento
da dose administrada acompanhou-se de reduo da intensidade de dor referida
pelos pacientes (POSSO, I.; ABRAMOF, S.; CRISCUOLO, D., 1996). Demais
autores comparam, no mbito da dor ps-operatria, a analgesia provida por doses
maiores de dipirona (em torno de 30-35 mg/kg) com a proporcionada pela
administrao de opiides de potncia intermediria, como tramadol (SPACEK, A.;
GORAJ, E.; NEIGER, F. X.; JAROSZ, J.; KRESS, H. G. 2003). Em outro trabalho foi
descrito um efeito poupador de opiides atribuvel dipirona quando administrada
conjuntamente com a morfina, no perodo ps-operatrio, a pacientes adultos
submetidos a procedimentos abdominais e urolgicos (TEMPEL, G.; VON
HUNDELSHAUSEN, B.; REE-KER, W., 1996). No mbito da dor ps-operatria, a
maioria dos trabalhos publicados tem avaliado as caractersticas da analgesia
conferida pela dipirona quando administrada aps a inciso cirrgica (ANDRADE,
M.P. 2005).
2.2.1.4 Polmica sobre o uso da dipirona
A dipirona sdica amplamente usada no s no Brasil, mas como em outros

pases como a Frana, Alemanha, Hungria, Israel, Espanha, Sucia e Tailndia.
Todavia, nos Estados Unidos o uso da dipirona foi proscrito h mais de 20 anos, em
virtude do suposto papel em deprimir a medula ssea, causando anemia aplstica e
agranulocitose (BENSEOR, I.M. 2001).
16
Em 1932, Madison e Squier estabeleceram, pela primeira vez, a relao entre

o uso da aminopirina e agranulocitose. Entre 1934 e 1937 ocorreu principalmente
nos EUA, uma crescente ateno para a possibilidade de tal efeito adverso. Em
1937, a antipirina foi retirada do mercado americano pela Food and Drug
Administration (FDA). A aminopirina, por sua vez, dado o seu parentesco com a
antipirina, foi colocada no Schedule IV do Pharmacy and Poisons Act, de 1938,
restringindo o seu uso sob prescrio mdica. Desta forma, a dipirona passou a ser
olhada com desconfiana. Em 1952, Discombe realizou um estudo retrospectivo
agregando dados de trs outros trabalhos retrospectivos e de uma comunicao
pessoal, pretendendo estudar a relao entre a aminopirina (e no a dipirona) e a
incidncia de agranulocitose na populao geral. Trata-se de um levantamento com
erros metodolgicos graves, que incluiu casos expostos a outros fatores por si s
capazes de ocasionar agranulocitose, como a fenilbutazona, acarretando uma
incidncia inaceitavelmente alta (morbidade de 1 caso/115 exposies e mortalidade
de 1 caso/159 exposies). Seguiram-se outros levantamentos, incluindo o de
Huguley, em 1964, que simplesmente recompilou o trabalho de Discombe,
acrescentando os resultados de mais trs pesquisadores, sem que entre os casos
arrolados se acrescentasse mais um caso de agranulocitose e originando, assim,
nmeros discretamente diferentes dos citados por Discombe. No entanto, as reaes
do FDA, do Reino Unido e da Sucia que se seguiram foram baseadas neste
trabalho. Desta forma, a Austrlia retirou a dipirona de seu mercado em 1965.
(BRASIL, 2005).
Em 1986 publicaram-se os dados de um vultoso estudo epidemiolgico que

buscou
analisar
esta
questo,
estudo
de
Boston;
The
International
Agranulocytosis and Aplastic Anemia Study, que por sua perfeio metodolgica
veio a colocar um ponto final nas especulaes existentes. Este estudo foi
conduzido em sete pases (Alemanha, Itlia, Espanha, Hungria, Israel, Bulgria e
Sucia) de 1980 a 1984, incluindo 300 hospitais e 22,2 milhes de pessoas e
concluiu que: - o risco estimado para agranulocitose entre os usurios de dipirona
era bastante baixo, no se verificando correlao entre uso de dipirona e incidncia
de agranulocitose; - a agranulocitose e a anemia aplstica podem ser causadas por
muitos medicamentos, assim como agentes qumicos e pesticidas; - a agranulocitose
ocorre raramente em crianas, aumentando a sua incidncia com a faixa etria; - a
17
agranulocitose , basicamente, uma reao alrgica, iniciando-se os sintomas entre

2-3 dias aps a exposio ao agente qumico ou medicamento; - o excesso de risco
de agranulocitose atribuvel dipirona , quando muito, de 1,1 caso por milho de
pessoas expostas que tenham tomado o frmaco por 7 dias antes do incio da
doena; - a dipirona no est associada anemia aplstica (THE, 1986).
Alguns pesquisadores afirmam que o risco de agranulocitose atravs do uso

de dipirona mnimo e a mortalidade praticamente a mesma relacionada ao uso
de paracetamol (CAMU, F.; VANLERSBERGHE, C., 2002).
Em julho de 2001, a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (Anvisa)

conduziu o Painel Internacional de Avaliao da Segurana da Dipirona (BRASIL,
2005), contando com a participao de autoridades nacionais e estrangeiras, com o
objetivo de promover esclarecimento sobre os aspectos da segurana do uso clnico
da dipirona. Os seguintes pareceres foram emitidos:
- h consenso de que a eficcia da dipirona como analgsico e antitrmico

seja inquestionvel;
- h consenso de que os riscos atribudos sua utilizao em nossa

populao at a presente data sejam baixos, e de que os dados cientficos
disponveis apontando a ocorrncia destes riscos no sejam suficientes para se
indicar uma alterao do status regulatrio (venda sem prescrio);
- os dados apresentados durante o painel permitiram aos participantes

concluir que os riscos da dipirona so similares, ou menores, que os de outros
analgsicos/antitrmicos disponveis no mercado;
- a mudana da regulamentao atual da dipirona incorreria em aspectos

negativos para a populao, aumentando os riscos de utilizao de outros frmacos
indicados para a mesma finalidade teraputica.
18
Um estudo recente sobre o risco de agranulocitose atribuvel dipirona com

base em banco de dados de laboratrios de hematologia e registro de discrasias
sangneas associadas ao uso concomitante do frmaco tambm concluiu pela
baixa incidncia deste evento adverso (IBANEZ, L.; VIDAL, X.; BALLARIN, E.;
LAPORTE, J.R. 2005).
Em dezembro de 2004, os consumidores do analgsico e antitrmico mais

usado no Brasil foram surpreendidos pela notcia de que, a partir de 14 de janeiro do
ano seguinte, a Anvisa deveria restringir alguns dos medicamentos comercializados
contendo a dipirona como princpio ativo, que s poderiam ser vendidos com
apresentao de receita mdica e deveriam portar tarja vermelha. O Ministrio
Pblico Federal apresentou denncia da Sociedade Brasileira de Vigilncia de
Medicamentos (Sobrevime) sobre os riscos que esta substncia poderia trazer
sade, alegando que a dipirona uma substncia que provoca funestas
conseqncias decorrentes de sua alta toxicidade, como anemia, nuseas, reaes
alrgicas e que pode levar morte. O Ministrio Pblico se baseava no fato de
vrios pases j proibirem a livre comercializao da dipirona, citando, tambm,
estudos realizados pela Organizao Mundial da Sade, pelo Conselho Federal de
Farmcia, pela Universidade de Braslia e pela Sociedade Brasileira de Vigilncia de
Medicamentos para restringir o uso da dipirona atravs da exigncia da receita
mdica (ANDRADE, M.P.)
Por deciso judicial, estes medicamentos deveriam entrar para a categoria

dos frmacos que demandam prescrio mdica. Logo aps esta deciso, porm,
um recurso impetrado por um dos laboratrios fabricantes derrubou a liminar.
Chamada a opinar na ao, a Anvisa alegou que a dipirona est no mercado
mundial h 80 anos, sendo o analgsico e antitrmico mais usado no Pas. Disse
ainda, segundo a Justia Federal, que os riscos atribudos substncia at o
presente so baixos. A diretoria da Anvisa, na ocasio, citou ainda o painel
organizado pela agncia, que concluiu que a dipirona um medicamento seguro e
eficaz. Desta forma, a dipirona sdica permanece em nosso pas sob
comercializao livre de prescrio mdica (ANDRADE, M.P., 2005).
19
2.2.2 Metodologias para a anlise de dipirona sdica
2.2.2.1 Espectrofotometria Ultravioleta/Visvel (UV/VIS)
Amostras de comprimidos contendo dipirona sdica foram analisadas por

espectrofotometria visvel atravs de reao com iodato de potssio 0,1 M,
produzindo um composto de cor amarelo avermelhada por cinco minutos, com
(comprimento de onda) mximo em 460 nm. Essa metodologia seguiu a lei de Beer
no intervalo de concentrao de 1 a 10 mg para dipirona sdica (QUERSHI, S.Z.;
SAEED, A,; HASAN, T.,1989).
Foram testados vrios solventes para o doseamento de dipirona por

espectroscopia no ultravioleta (UV). Foram realizados espectros na regio de 225 a
300nm com solues preparadas com cido clordrico 0,1 M, hidrxido de sdio 0,1
M, gua deionizada e lcool etlico. Atravs da anlise de regresso linear, o cido
clordrico apresentou melhores resultados, sendo o solvente mais indicado para este
tipo de anlise (CARDOSO, T.F.M.; KANIS, L.A.; SILVA, W.B.; GALATO, D.,2003).
SAKIARA, K. A. et al. determinaram a dipirona sdica nas formulaes

farmacuticas comprimidos e soluo oral atravs da espectrofotometria. O mtodo
foi baseado na seleo oxidativa da dipirona, em presena de cido sulfrico,
formaldedo reagindo com um cido cromforo, produzindo um composto de cor
violeta-avermelhado ( max = 575 nm). O mtodo mostrou ser simples, exato,
seletivo e apresentou linearidade (SAKIARA, K.A.; PEZZA, L.; MELIOS, C.B.;
PEZZA, H.R.; MORAES, M., 1999).
LIMA, J.L.F.C. et al., desenvolveram um mtodo de determinao de dipirona

atravs de sistema de injeo de fluxo em espectrofotometria. Foi utilizado um
sistema de micro-bombas e as amostras foram monitoradas por espectrofotometria a
430 nm. O mtodo mostrou muita versatilidade, exatido, preciso e limite de
deteco de 1mg/L de dipirona (LIMA, J.L.F.C.; S, S.M.O.; SANTOS, J.L.M.;
ZAGATTO, E.A.G., 2003).
20
ERK, N. e ONUR, F. analisou comprimidos contendo dipirona sdica e

paracetamol em associao. Determinaram os dois compostos simultaneamente
atravs da espectrofotometria derivada de primeira ordem, utilizando metanol como
solvente. A dipirona foi medida em 249,2 nm e o paracetamol em 264,8 nm (ERK,
N.; ONUR, F., 1997).
DOGAN, H.N. fez a determinao simultnea de dipirona sdica, paracetamol

e cafena atravs da espectrofotometria, devido as solues padro terem o ponto
isoabsortivo em 265,4 nm, utilizando-se etanol como solvente. Aplicou-se o mtodo
dos mnimos quadrados e determinou-se a concentrao de cada componente. Os
excipientes do comprimido no interferiram na anlise. Os resultados mostraram um
mtodo simples, sensvel e exato (DOGAN, H.N., 1996).
Pesquisadores fizeram a determinao simultnea de dipirona sdica,

paracetamol e cafena atravs da espectrofotometria derivada pelo mtodo de zerocrossing, utilizando HCl 0,1 M, como solvente. As concentraes dos trs compostos
na mistura foram determinadas pelo uso de grficos de calibrao de cada
componente obtidos pela medida da amplitude dos comprimentos de onda mximo e
mnimo selecionados. Foram feitos clculos matemticos atravs dos valores obtidos
de absortividade de cada composto. Essa nova metodologia possibilitou um melhor
uso da espectrofotometria para a anlise de mistura de componentes (DIN, E.;
ONUR, F., 1998)
Para a anlise simultnea da mesma mistura ternria, contendo dipirona

sdica, paracetamol e cafena em comprimidos foram pesquisadas duas tcnicas de
calibrao multivariada, tambm chamada quimiometria. Foram aplicadas as
tcnicas de mtodo dos mnimos quadrados inverso (ILS) e anlise do componente
principal (PCA) sobre a anlise espectrofotomtrica desses multicomponentes.
Foram medidas as absorbncias dos trs componentes em soluo de HCl 0,1 M, na
faixa espectral de 225 a 285 nm (passo = 5 nm). Os 13 comprimentos de onda
utilizados para a realizao do modelo de calibrao da mistura ternria foram
tratados pelo software MAPLE V. Atravs de clculos matemticos foram obtidos os
valores de desvio padro relativo para o ILS e PCA para os trs princpios ativos e
21
as respectivas mdias de recuperao. Os resultados obtidos foram comparados

com os resultados de CLAE, nas seguintes condies cromatogrficas: coluna
Nucleosil C18(250 x 4,6 mm); fase mvel: gua: metanol 18:82 v/v; vazo de
1mL/min
deteco
254
nm.
As
duas
tcnicas
aplicadas
sobre
espectrofotometria possibilitaram bons resultados de eficincia, preciso, exatido e

linearidade (DIN, E.; BALEANU, D. e ONUR, F., 2001).
ABURJAI et al, determinaram simultaneamente a dipirona sdica e a vitamina

C em comprimido e soluo injetvel, atravs da espectrofotometria derivada de
segunda ordem, utilizando-se o comprimento de onda de 280 nm para a vitamina C
e 272 nm para a dipirona, usando metanol como solvente. Neste mesmo trabalho,
utilizaram a cromatografia em camada delgada de alta eficincia para essa mesma
determinao. As amostras foram dissolvidas em solues metanlicas e aplicadas
em placa de slica gel para cromatografia em camada delgada e examinadas a 260
nm. As duas metodologias mostraram bons resultados para a anlise das amostras
(ABURJAI, T.; AMRO, B.I.; AIEDEH, K.; ABUIRJEIE, M.; AL-KHALIL, S., 2000).
MORELLI, B. analisou a mistura binria de dipirona sdica e cloridrato de

pitofenona, um frmaco antiespasmdico, por espectrofotometria derivada.
O primeiro mtodo utilizado foi a aplicao da derivada de segunda ordem

com calibrao linear a 266,5 e 302,5 nm (dipirona), 257 e 286 nm (pitofenona) e
para a derivada de terceira ordem a 242 e 278,3 nm (dipirona) e 228,5 e 300 nm
(pitofenona). No segundo mtodo foram utilizadas as derivadas de primeira ordem
com calibrao linear para os seguintes comprimentos de onda: 235 e 262 nm
(dipirona) e 229,5 e 288,5 nm (pitofenona), para a derivada de segunda ordem 249,7
e 268 nm (dipirona) e 280,5 e 300 nm (pitofenona). Todas as solues foram
preparadas em gua destilada. Os procedimentos foram simples, rpidos e no
necessitaram de separao preliminar ou tratamento para as amostras (MORELLI,
B., 2003).
22
2.2.2.2 Cromatografia lquida de alta eficincia - CLAE
ASMARDI, G. e JAMALI, F. fizeram a determinao de dipirona e de seu

metablito ativo o 4-metil-amino-antipirina (MAA) atravs da cromatografia lquida. A
dipirona foi determinada atravs da coluna de troca inica Bondapak AX/Corasil
(Waters Assoc.) 61 cm X 2 mm (35-50 m), fase mvel: tampo fosfato pH 5,6:
metanol (85:15), vazo de 0,5 mL/min, deteco no ultravioleta(UV) a 254 nm. Para
a determinao do MAA utilizou-se uma coluna de fase reversa 30 cm X 3,9 mm (10
m) (Bondapak C18 , Waters Assoc.). A fase mvel foi gua: metanol: cido actico
(75:20:5), vazo de 1,0 mL/min e deteco no UV a 280 nm. As amostras foram
analisadas dos fludos biolgicos urina e plasma (ASMARDI, G.; JAMALI, F., 1983).
Atravs
da
CLAE
pesquisadores
separaram
determinaram
quantitativamente a dipirona e seus produtos de degradao, os parmetros

seguidos foram: coluna cromatogrfica de fase reversa Merck RP 18 (25 cm X 4,6
mm, 10 m) e pr-coluna RP-18 de 5 cm, 10 m); fase mvel: metanol: gua:
trietilamina (50:50:0,025), vazo de 0,3 mL/min. a dipirona foi detectada no UV a 228
nm,
seus
produtos
de
degradao
244
nm
(EDDINE,N.H.;BRESSOLE,F.;MANDROU,B.; FABRE,H., 1982).
KATZ, E.Z. et al. fez a determinao simultnea de dipirona e seus

metablitos em plasma utilizandose como metodologia a cromatografia lquida, com
os seguintes parmetros: coluna cromatogrfica Bondapak C18(300 mm X 30 cm,
10 m), fase mvel:8% de metanol em soluo de acetato de sdio 0,01 M , pH 3,0
ajustado com cido clordrico concentrado, vazo de 1,6 mL/min, deteco no UV a
257 nm. Atravs desse mtodo foi possvel uma boa separao entre a dipirona e
seus metablitos (KATZ, E.Z.; GRANT, L.; DRAYER, D.E.; LEVY, M., 1984).
ABOUNASSIF,
M.A.;
GAD-KAREIM
WAHBI,
A.M.
determinaram
simultaneamente pela CLAE dipirona, fenobarbital e quelina em comprimidos. Os

parmetros utilizados: coluna de fase reversa Pak Varian, fase mvel:
metanol:gua(68:32) para a reteno de quelina e dipirona com deteco UV a 254
nm; 94,5 mL de gua, 0,5 mL de amnia(para ajustar o pH a 10,5) e 5mL de metanol
23
para fenobarbital detectado em UV a 240 nm e vazo de 0,7 mL/min. Essa

metodologia apresentou reprodutibilidade, especificidade e exatido (ABOUNASSIF,
M.A.; GAD-KAREIM e WAHBI, A.M., 1990).
ALTUN, M.L. fez a determinao simultnea de dipirona, paracetamol e

cafena pelo mtodo cromatogrfico com os parmetros: coluna cromatogrfica Bondapak C8; fase mvel KH2PO4 0,01 Mmetanol-acetonitrila-lcool isoproplico
(420:20: 30:30), vazo de 1mL/min, deteco espectrofotomtrica a 215 nm (ALTUN,
M.L., 2002).
SENYUVA, H.Z. et al. determinaram a dipirona em formulaes lquidas e

slidas pela cromatografia lquida com deteco de arranjo de diodos, utilizando a
uma coluna de fase reversa Zorbax SB C18(250 X 4,6 mm, 5 m), fase mvel:
metanol/gua (80/20), deteco UV a 254 nm. Os resultados foram comparados com
a espectroscopia de Ressonncia Magntica Nuclear (RMN) (SENYUVA, H.Z.;
AKSAHIN, I.; OZCAN, S.; KABASAKAL, B.V., 2005).
2.2.2.3 Outras metodologias analticas para a determinao de dipirona sdica
A amperometria foi utilizada como mtodo de determinao de dipirona em

formulaes farmacuticas, utilizando-se eletrodo de ouro. Os resultados foram
comparados com a titulao iodomtrica, que o mtodo oficial preconizado pela
farmacopia britnica (MUOZ, R.A.A.; MATOS, R.C.; AGNES, L., 2001).
A espectroscopia Raman com transformada de Fourier foi empregada para a

determinao quantitativa de dipirona sdica (IZOLANI, A.O.; MORAES, M.T.;
TLLEZ, C.A., 2003).
Atravs da cromatografia em camada delgada alguns pesquisadores

separaram e quantificaram a dipirona e seus produtos de degradao, os
parmetros foram os seguintes: placa cromatogrfica de slica gel F254, espessura de
0,25 mm; fase mvel: etanol-clorofrmio-benzeno-soluo de amnia a 10%
(50:30:18:2). As manchas foram reveladas sobre luz UV a 254 nm e quantificadas
24
por medidas espectrofotomtricas de reflectncia a 273 nm (FABRE, H.; EDDINE,

N.H.; BRESSOLE, F.; MANDROU, B. 1982).
Pelos compndios oficiais a dipirona sdica determinada atravs de

titulao iodomtrica (FARMACOPEIA, 1977; BRITISH, 2002).
2.3 Cloridrato de papaverina
O cloridrato de papaverina foi o primeiro agente miotrpico a ser introduzido

na medicina, um dos alcalides extrados do pio, as cpsulas de sementes
imaturas de papoula, Papaver somniferum, nas quais ocorre na proporo de 1%. A
papaverina foi isolada por Merck, em 1848, e sintetizada em 1909, por Pictet e
Gams. Atualmente obtida por sntese total (KOROLKOVAS, A.; BURCKHALTER,
J.H., 1988)
Figura 2 Estrutura qumica da papaverina
Faz parte do grupo da benzilisoquinolina, depressor da musculatura lisa sem

ao sobre o sistema nervoso central, no sendo euforizante. Considerada como
prottipo dos frmacos vasodilatadores, costuma ser confrontada em testes de
novas substncias para esse propsito (SILVA, P. 2002).
25
um dos frmacos mais importantes que atuam como relaxantes da

musculatura uterina, juntamente com a hioscina, fazem parte do grupo de frmacos
anticolinrgicos. Sua ao espasmoltica, analgsica e sedativa. Suas vias de
administrao so a oral, intramuscular e endovenosa (SILVA, P. 2002).
2.3.1 Farmacocintica
Quando a papaverina administrada por via oral, a meia-vida de uma a

duas horas: entretanto, h uma grande variao interindividual. Liga-se protenas
plasmticas em 90%, metabolizada no fgado e excretada na urina quase
totalmente como metablitos fenlicos conjugados com glucorondios (SILVA, P.
2002).
2.3.2 Farmacodinmica
Relaxa
musculatura
lisa
vascular
por
inibio
inespecfica
da
fosfodiesterase, promovendo aumento do AMP cclico (SILVA, P. 2002).
2.3.3 Usos clnicos
Tem ao espasmoltica, sendo til em processos caracterizados por

espasmo vascular. Tem sido usada em pacientes com insuficincia arterial perifrica
e cerebral. til para realizao do teste de ereo frmaco-induzida e como
frmaco utilizado para auto-injeo em pacientes com impotncia sexual orgnica
isoladamente ou associada a outros frmacos (SILVA, P. 2002).
Muito eficaz no tratamento de espasmo vasocerebral agudo por diferentes

vias de administrao (LIU, H.M. TU, Y.K. 2002).
Est sendo amplamente utilizada em doenas arteriais, como o embolismo

pulmonar e tambm no alvio de clicas renais e biliares (YAN, J.; MI, J Q,; HE,JT.;GUO, Z-Q.; ZHAO,M-P.; CHANG, W-B.,2005)
26
2.3.1Metodologias analticas para determinao de cloridrato de papaverina
2.3.1.1. Cromatografia lquida de alta eficincia CLAE
SINGH, D.V. et al. analisaram os principais alcalides contidos na

Papaver somniferum, atravs da CLAE, utilizando uma coluna Merck Durasil C18(250
x 4,6 mm) com fase mvel acetonitrila: tampo fosfato (20:80) e pH 3,8 ajustado com
acido actico glacial; vazo de 1 mL/min e deteco a 240 nm, com arranjo de
fotodiodo. Foi possvel a quantificao de morfina, codena, oripavina, codeinona,
reticulina, tebana, papaverina e narcotina (SINGH, D.V.; PRAJAPATI, S.; BAJPAI,
S.; VERMA, R.K.; GUPTA, M.M.; KUMAR, S. 2000).
Para determinao de cloridrato de papaverina em xarope foi utilizada a

CLAE seguindo os parmetros: coluna Ultrasphere 5m Spherical 80 (250 mm X
46 mm), fase mvel: gua: acetonitrila, etanol (38:60:2) contendo cido perclrico 1
mM, vazo de 1mL/min e detector de condutividade (LAU,O-W; MOK,C-S.; 1995).
Para a determinao simultnea de cloridrato de efedrina, teofilina, cloridrato

de papaverina e cloridrato de hidroxizina foi usada a CLAE nas seguintes condies:
fase mvel: acetonitrila: gua ( 5:95 v/v ), pH 2,4 0,1 ajustado com cido orto fosfrico, vazo de 1,5 mL/min, coluna Nucleosil C
18
(150 X 4,6 mm ,5 m), sistema
gradiente e deteco a 220 nm (BOBERIC, D.B.;RADULOVIC,D.; IVANOVIC,D.;

RISTIC,P., 1999.)
Na determinao de alguns alcalides atravs de mistura de solventes

orgnicos-aquosos analisados por CLAE foram seguidos os parmetros: detector UV
a 254 nm, coluna Lichrosorb Si 60(100 X 4 mm,10 m), fase mvel: mistura de
tampo fosfato ( cido fosfrico com hidrxido de sdio 5 M, com concentrao final
de 0,2 M ) (GOLKIEWICZ, W.; KUCZYNSKI, J.; MARKOWSKI, W.; JUSIAK, L.,
1994).
Na Farmacopia Britnica 2002 consta como mtodo de anlise para um

medicamento chamado Papaveretum injetvel, que contm uma mistura de
27
papaverina, morfina e codena, a CLAE, usando-se coluna 10 cm X 4,6 mm, vazo

de 2 mL/min, fase mvel: acetato de sdio 0,01 M e sulfossuccinato dioctilsdico
0,005 M em metanol 60%, ajustado ao pH 5,5 com cido actico glacial ou NaOH 2
M, deteco UV a 285 nm (BRITSH, 2002).
Determinou-se a papaverina em plasma e urina por CLAE atravs dos

parmetros: coluna fase-reversa C8 (25 cm X 4.6 mm, 10 m); detector UV-Vis a 239
nm; fase mvel: metanol: borato de sdio 0,015 M pH 8,5 (58:42) ; vazo: 2,7
mL/min e laudosina como padro interno (GAUTAM, S.R.; NAHUM, A.; BAECHLER,
J. BOURNE, D.W.A., 1980).
A CLAE foi utilizada na determinao de papaverina em amostra de sangue

total atravs de cromatgrafo (injetor com loop de 100 L ), coluna Micropak CN
10 (30 mm X 4 mm, 10 m ) a 30 C , fase mvel: n- hexano diclorometano
acetonitrila propilamina( 50: 25 :25: 0,1 ) com detector UV a 254 nm, vazo de 2
mL/min. A amostra foi submetida uma extrao por mistura de clorofrmio e nhexano(2:3) (HOOGEWIJS,G.; MICHOTTE, Y.; LAMBRECHT, J.; MASSART, D.L.,
1981).
AYYANGAR, N.R. e BHIDE, S.R. desenvolveram uma metodologia de

separao de oito alcalides e do cido mecnico e quantificao de cinco principais
alcalides, dentre eles a papaverina por CLAE, atravs de coluna Bondapack Phenyl
(30 cm X 3.9 mm, 10 m), para as corridas preliminares e coluna MN Nucleosil 7
C6H5 (25 cm X 4,0 mm,7 m) e pr-coluna Resolve CN(10 m) para a quantificao,
fase mvel : metanol : gua (5:95), sistema gradiente; vazo: 1,5 mL/min e deteco
UV a 280 nm (AYYANGAR, N.R. ; BHIDE, S.R., 1988).
Para uma separao de morfina, codena, noscapina e papaverina foi usada a

cromatografia de fase reversa com pareamento inico, com os seguintes
parmetros: coluna Bondapack C18 ( 300 X 4 mm ); eluente ou fase mvel: metanol:
gua (35: 65) com variao de proporo de tampo fosfato 0, 050 M e cido
camsulfnico, variando-se o pH entre 2,3 e 4, vazo de 1,5 mL/min e deteco a 254
nm (LINDBERG, W.; JOHANSSON, E.; JOHANSSON, K., 1981).
28
Para a otimizao e validao de metodologia analtica para a determinao

de alcalides (sendo a papaverina, um deles) com a finalidade de acrescentar a
metodologia em compndios de avaliao de qualidade, utilizou-se a CLAE. Foram
preparadas solues de papaverina em etanol 96 %, como fase mvel foi utilizada
tampo fosfato pH: 3/ metanol (65:35) + cido-pentanossulfnico de sdio a 0,005
M, vazo: 1,5 mL/ min, deteco UV 254 nm e coluna C18 (250 X 4mm) ao
inoxidvel (BUDVARI-BARANY, Z.; SZSZ, G.; GYIMESI-FORRS, K., 1997).
MAURICH, V. e MONEGHINI, M. desenvolveram uma metodologia por CLAE

para a separao de papaverina e seus produtos de degradao, utilizando coluna
Lichrosorb RP 18, 10 m; fase mvel: acetonitrila: metanol: gua (470:340:190),
cido actico 0,5 mL /L e dodecilsulfonato sdico puro, vazo de 2,5 mL/min e
deteco no UV a 238 nm (MAURICH, V. e MONEGHINI, M., 1983).
Atravs da CLAE fez-se a determinao simultnea de metilbrometo de

homatropina e a mistura de cinco alcalides, dentre eles o cloridrato de papaverina,
os parmetros seguidos foram: coluna Nucleosil C8 (120 X 4,65 mm); fase mvel:
tampo fosfato 0,01 M(pH 5,0):40% de acetonitrila, vazo de 1mL/min e deteco a
220 nm. A cromatografia gasosa tambm foi utilizada nesta pesquisa (MAJLAT, P.;
HELBOE, P.; KRISTENSEN, A.K., 1981).
EL-GINDY, A. comparou duas metodologias para a determinao simultnea

de cloridrato de papaverina, diprofilina e fenobarbital, a CLAE e a espectrofotometria
UV com aplicao de calibrao multivariada. A CLAE foi padronizada e validada
com os parmetros: coluna HALSIL 100 C- 18 (250 x 4,6 mm, 5 m); fase mvel:
fosfato de potssio 0,02M, pH ajustado com cido fosfrico e acetonitrila na
proporo 55:45 v/v; vazo de 1,5 mL/min e deteco UV a 210 nm. No mtodo
espectrofotomtrico foram aplicados aos dados os mtodos PLS (mnimos
quadrados parciais) e PCR (anlise do componente principal), a faixa de leitura dos
espectros foi de 215 a 245 nm, com intervalo de 0,2 nm, utilizando-se 23 solues
para a construo do modelo de calibrao. Os mtodos propostos mostraram
concordncia quando comparados (EL-GINDY, A., 2005).
29
2.3.1.2 Outras metodologias utilizadas para a determinao analtica de cloridrato de

papaverina
O cloridrato de papaverina foi analisado por espectrofotometria juntamente

com o cloridrato de meclozina em formulaes farmacuticas. Primeiramente fez a
extrao dos frmacos atravs de clorofrmio e diclorometano e reaes com
produtos fenilazlicos, produzindo compostos coloridos. Fizeram-se leituras de
absorbncia a 524 e 536 nm para meclozina e 528 e 540 nm para papaverina.
(ABDEL-GHANI, N.T.; SHOUKRY, A.F.; ISSA, Y.M.; WAHDAN, O.A., 2002).
A cromatografia em camada delgada foi usada para a determinao e

separao da papaverina e seus produtos de oxidao, usando-se placa com
espessura de 0,25 mm coberta por gel de slica fluorescente (20 X 20 X 0,3cm),
visualizao em UV 254 nm ou com spray de reagente Dragendorff. A papaverina foi
dissolvida em 1 mL de cido actico glacial e 2mL de cido clordrico. (HABASHY,
G.M.; FARID, N.A., 1973).
Pelo mtodo potenciomtrico pde-se determinar o cloridrato de papaverina,

utilizando-se clula potenciomtrica, pH mantido a 5,3 com tampo acetato 0,01 M.
Nesta pesquisa sugere-se a aplicao deste mtodo para a anlise de papaverina
em presena de novacana, dipirona, cido acetil saliclico e outros frmacos em
associao. (SHETEROVA, I.P.; KARIBYAN, E.E.; TURAEVA, S.S.; PENZINA,
M.M., 1995).
Para a deteco de baixas concentraes de papaverina usou-se a

espectrometria de massa com ionizao de fisso de fragmentos, em amostras de
fluidos
biolgicos.
(CHIVANOV,
V.D.;
EREMENKO,
I.A.;
AKSENOV,
S.A.;
GREBENIK, L.I. EREMENKO, V.I.; KALINICHENKO, T.G.; TATARINOVA, V.I.;

ZDOIMA, N.G.; SKLYAROVA, Z.V., KURAEV, V.V.; KNYSH, A.N.; MISHNEV, A.K.,
1997).
A eletroforese capilar foi utilizada para a anlise de uma mistura de morfina,

codena, normorfina, tebana, noscapina e papaverina, nas seguintes condies:
30
capilar 55,5 cm X 50m, deteco a 214 e 254 nm, tendo como meio eletrofortico
acetato de amnio 25 mM cido actico 1M em acetonitrila, metanol, formamida
ou N-metilformamida. (BJORNSDOTTIR, I.; HANSEN, S.H., 1995).
Foram analisadas solues contendo papaverina para investigar seus

produtos de degradao e oxidao atravs de degradao fotoqumica. Tanto a
papaverina quanto seus produtos de degradao e oxidao foram determinados
por espectroscopia Raman, Ressonncia Magntica Nuclear e os resultados
comparados com a CLAE. (GIRRESER, U.; HERMANN, T.W.; PIOTROWSKA, K.
2003).
Mirzeva et. al. determinaram a papaverina e dimedrol em formulaes

farmacuticas foi utilizada uma extrao com um azo reagente, e em seguida o
composto colorido formado pela papaverina e pelo sulfonazo foram detectados por
fotometria a 580nm. (MIRZAEVA, K.A.; AKHMEDOVA, M.S.; RAMAZANOV, A.S.;
AKHMEDOV, S.A., 2004).
A Farmacopia Brasileira preconiza a titulao em meio no aquoso, como

mtodo de doseamento para o cloridrato de papaverina (FARMACOPEIA, 1977) e a
Farmacopia Britnica tem a potenciometria como mtodo de doseamento.
(BRITISH, 2002).
2.4 Espectrofotometria no Ultravioleta e Visvel (UV/VIS)
A Espectrofotometria, tambm pode ser chamada de espectroscopia

eletrnica molecular ou espectrometria de absoro molecular abrange a regio de
comprimento de onda de 160 a 780 nm. Medidas de absoro da radiao
ultravioleta e visvel tm ampla aplicao na determinao quantitativa de uma
grande variedade de espcies inorgnicas e orgnicas. (SKOOG, D.A.; HOLLER,
F.J.; NIEMAN, T.A., 2002).
A variao da cor de um sistema com a mudana da concentrao de um

componente a base da anlise colorimtrica. A cor , usualmente, devido
31
formao de um composto colorido pela adio de um reagente apropriado ou

inerente ao constituinte que se deseja analisar. A intensidade da cor comparada
com a intensidade da cor que se obtm com o mesmo procedimento pelo tratamento
de uma amostra cuja quantidade e concentrao so conhecidas. Na anlise
espectrofotomtrica usa-se uma fonte de radiao que alcana a regio ultravioleta
do espectro. Para isso, escolhe-se comprimentos de onda bem definidos e com
largura de banda de menos de um nanmetro ( VOGEL, 2002).
Um espectrofotmetro ptico um instrumento que possui um sistema ptico

que dispersa a radiao eletromagntica incidente e permite a medida da
quantidade de radiao transmitida em determinados comprimentos de onda
selecionados da faixa espectral. Um fotmetro um equipamento que mede a
intensidade da radiao transmitida ou uma funo desta quantidade. Quando
combinado em um espectrofotmetro, o espectrmetro e o fotmetro produzem sinal
que corresponde diferena entre a radiao transmitida por um material de
referncia e a radiao transmitida por uma amostra em comprimentos de onda
selecionados. A vantagem principal dos mtodos colorimtrico e espectrofotomtrico
que eles so uma maneira simples de determinar quantidades muito pequenas de
substncias. A seletividade da tcnica espectrofotomtrica pode ser aumentada com
a espectrofotometria derivada. ( VOGEL, 2002).
A espectroscopia de absoro molecular est baseada na medida da

transmitncia T ou absorbncia A de solues contidas em clulas transparentes
tendo um caminho ptico de b cm. De forma comum, a concentrao c de um analito
absorvente est relacionada linearmente absorbncia, conforme representado pela
equao:
A = -log T = log
Po
= bc
P
(1)
32
Sendo: - P, Po - potncia de radiao ou intensidade de radiao I, Io;
- a absortividade =
A
ou coeficiente de extino, k; c pode ser expresso em g/L
bc
ou em outras unidades de concentrao; b pode ser expresso em cm ou em outras

unidades de comprimento;
= absortividade molar =
A
ou coeficiente molar de extino, c est expresso em
bc
mol/L; b est expresso em cm.
A equao (1) uma representao matemtica da lei de Beer. Normalmente,

a transmitncia e a absorbncia no podem ser medidas em laboratrio porque a
soluo do analito precisa estar contida em um recipiente transparente, ou clula
(tambm chamada de cubeta). Ocorre reflexo nas duas interfaces parede/soluo.
A atenuao resultante do feixe de luz substancial, alm disso, pode ocorrer
atenuao de um feixe de luz por espalhamento por molculas grandes e, s vezes,
por absoro pelas paredes do recipiente. Para compensar esses efeitos, a potncia
do feixe transmitido pela soluo do analito comparada com a potncia do feixe
transmitido por uma clula idntica contendo apenas o solvente. A transmitncia e a
absorbncia experimentais que se aproximam muito das verdadeiras so obtidas
atravs das equaes (SKOOG, D.A.; HOLLER, F.J.; NIEMAN, T.A., 2002):
T=
Psoluo
P
=
(2)
Psolvente Po
A = log
Po
Psolvente
= log
(3)
Psoluo
P
33
- Desvios da Lei de Beer
A lei de Beer geralmente vlida em uma faixa de concentraes

razoavelmente elevada, se a estrutura do on colorido ou do no-eletrlito colorido
em soluo no mudar com a concentrao. Pequenas quantidades de eletrlitos
que no reagem quimicamente com os componentes coloridos normalmente no
afetam a absoro da luz. Grandes quantidades de eletrlitos podem deslocar a
posio do mximo de absoro e, tambm, mudar a absortividade molar.
Encontram-se discrepncias, usualmente, quando o soluto colorido se ioniza, se
dissocia ou se associa em soluo, porque, neste caso, a natureza da espcie que
absorve varia com a concentrao. A lei de Beer no vlida quando o soluto forma
complexos
cuja
composio
depende
da
concentrao.
Podem
ocorrer
discrepncias quando a luz utilizada no monocromtica. sempre possvel testar

o comportamento de uma substncia fazendo-se o grfico log(Po/Pt , sendo Pt
potncia da luz transmitida) ou log(Io/It sendo It intensidade de luz transmitida),
contra a concentrao. Uma linha reta que passa pela origem indica que a lei de
Beer est sendo obedecida( VOGEL, 2002).
Um dos principais usos da espectrofotometria no UV/VIS refere-se a

medies quantitativas. Uma concentrao desconhecida de um composto
conhecido, quando se adapta a lei de Beer, pode ser determinada. As amostras para
a absoro UV podem ser examinadas na forma de vapor ou de uma soluo.
Solventes apolares e polares podem ser empregados para preparar uma amostra
analtica. Um diagrama simplificado de um espectrofotmetro UV/VIS est
apresentado na Figura 3.
34
Figura 3 Espectrofotmetro clssico UV-VIS com seus respectivos componentes.
Os avanos na tecnologia levaram ao desenvolvimento e a implementao de

detectores de fotodiodo, os quais, quando colocados em grupos lineares
intimamente espaados, oferecem a anlise rpida e exata do espectro. A principal
vantagem dos detectores de feixe linear que eles permitem a anlise simultnea
de todo um espectro no perodo de alguns segundos. Isso vantajoso quando se
realizam estudos cinticos envolvendo elementos rapidamente mutveis (ABDOU,
H.; HANNA, S.; MUHAMMAD, N. 2004).
2.5 Cromatografia lquida de alta eficincia - CLAE
A CLAE tambm conhecida por cromatografia lquida de alto desempenho,

cromatografia lquida de alta performance, cromatografia lquida de alta presso e
mais comumente HPLC de High Performance Liquid Chromatography (CIOLA,
1998). A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao. Ela est
fundamentada na migrao diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre
devido a diferentes interaes entre duas fases imiscveis, a fase mvel e a fase
estacionria. A grande variedade de combinaes entre as fases mveis e
estacionrias torna-a uma tcnica extremamente verstil e de grande aplicao.
separao
cromatogrfica
baseia-se
na
migrao
diferencial
dos
componentes de uma mistura, que ocorre devido s diferentes interaes entre duas
fases imiscveis, a fase mvel e a fase estacionria, e no alargamento de bandas,
35
que dependente de processos fsicos e no da diferena de equilbrio. A migrao

diferencial resulta da diferena de equilbrio dos analitos entre as duas fases
imiscveis e determinada pelos fatores que afetam este equilbrio: composio da
fase mvel, composio da fase estacionria e temperatura da separao.
Mudanas em um ou mais destes parmetros levam a alteraes na migrao
diferencial.
2.5.1 Instrumentao para a CLAE
A instrumentao necessria para a CLAE extremamente sofisticada, muito

diferente das utilizadas pela Cromatografia Clssica. A Figura 4 mostra os
componentes fundamentais de um equipamento para CLAE.
Atualmente, existem equipamentos totalmente computadorizados. So

divididos em mdulos, que podem ser controlados individualmente ou por
computador. Os softwares disponveis so capazes de detectar problemas de
funcionamento e tambm a necessidade de troca de alguma pea.
Figura 4 Esquema bsico de um equipamento para CLAE
36
O desenvolvimento de colunas com fases estacionrias preparadas com

partculas de menor dimetro, as quais ofereciam maior resistncia passagem de
fase mvel, tornou necessria a utilizao de sistemas de bombeamento mais
eficientes.
Bombas - Uma bomba para CLAE precisa ser capaz de reproduzir fluxo
constante e reprodutvel, sem pulsos, nas altas presses necessrias, e ser
resistente s fases mveis utilizadas.
Injetores Para a introduo da amostra eram utilizadas microsseringas.

Atualmente, so utilizados injetores de vlvula. A ala de amostragem (loop)
de tais vlvulas pode ser externa ou interna. As alas externas nada mais so
que tubulaes de volume preciso, as quais podem ser trocadas para que se
permita a injeo de diferentes volumes de amostra. Estas vlvulas possuem
duas posies. Na posio LOAD, a amostra injetada na ala de
amostragem com uma seringa de ponta rombuda, sendo o excesso
imediatamente descartado. A posio INJECT abre a vlvula para que a fase
mvel empurre a amostra para a coluna.
Detectores a funo destes equipamentos a deteco dos compostos

vindos do eluente da coluna. So de vrios tipos:
a) UV-Visvel o detector mais usado em CLAE; seu princpio absoro de

luz ultravioleta ou visvel, por parte da amostra, quando nela passa radiao
eletromagntica;
b) Fluorescncia um detector para molculas que fluorescem;
c) ndice de refrao: mede a diferena no ndice de refrao da fase mvel e do

eluente vindo da coluna; muito utilizado em anlises de amostras que no
absorvem no UV e no fluorescem e em cromatografia preparativa;
37
d) Infravermelho seu princpio a absoro de luz infravermelha por parte da

amostra, quando nela passa radiao eletromagntica, deteco pouco utilizada;
e) Polarmetro e dicrosmo circular: medem o efeito da luz plana ou circularmente

polarizada sobre compostos oticamente ativos, so equipamentos seletivos,
especficos para a deteco de compostos quirais;
f) Eletroqumicos: baseiam-se em interaes eletroqumicas teis deteco do

analito por CLAE, so seletivos para solutos inicos, oxidveis ou redutveis, e
apresentam alta sensibilidade e baixos limites de deteco; g) Espalhamento de
luz: seu princpio envolve a nebulizao do eluente vindo da coluna em um
aerossol, seguido de vaporizao do solvente para produzir pequenas partculas
que sero detectadas em uma cela de espalhamento de luz, detector no
seletivo e destrutivo;
h) Espectrometria de massas: um detector universal, embora destrutivo, que

apresenta alta sensibilidade, fornece a massa molecular dos solutos e permite a
elucidao estrutural destes;
i) Ressonncia magntica nuclear: combina o poder de separao da CLAE s

informaes estruturais obtidas pela RMN, no de uso rotineiro, devido
dificuldade encontrada e sua hifenao CLAE (CASS, Q.B.; DEGANI,
A.L.G.,2001).
Colunas: a separao cromatogrfica efetuada dentro das colunas

cromatogrficas. Os tubos das colunas so cheios com a fase estacionria
conveniente, geralmente slica ou seus derivados (CIOLA, R., 1998).
2.5.2 Modos de separao por CLAE
A classificao da cromatografia lquida de acordo com a fase estacionria

levou a uma grande variedade de tipos. A primeira grande diviso feita foi:
38
cromatografia de adsoro e cromatografia de partio, referindo-se s fases

estacionrias slida e lquida, respectivamente.
No caso das fases estacionrias serem lquidas, estas podem estar

simplesmente adsorvidas sobre um suporte slido ou imobilizadas sobre ele. No
primeiro caso, a cromatografia referida como cromatografia de partio. A
cromatografia de partio perdeu espao para a cromatografia de fases
quimicamente ligadas, devido maior estabilidade conferida por estas quando
comparadas com as fases lquidas adsorvidas. Estas fases com suportes
modificados so consideradas parte por diferirem dos outros modos em seu
mecanismo de separao.
grande
desenvolvimento
conseguido
partir
das
fases
lquidas
quimicamente ligadas fez com que estas sejam majoritariamente usadas em CLAE
analtica.
A separao de uma mistura por CLAE se d por uma ou mais interaes

entre o soluto, a fase estacionria e a fase mvel, as quais podem ser pontes de
hidrognio, interaes eletrostticas e hidrofbicas ou foras de Van der Waals,
entre outras. Os modos de separao podem ser classificados de acordo com a
natureza destas interaes. So eles: cromatografia em fase reversa, em fase
normal, por pareamento de ons ou por troca inica e por excluso.
2.5.2.1 Cromatografia em fase normal
A fase estacionria mais polar que a fase mvel; o oposto ocorre em

cromatografia no modo reverso. Os solventes usados so normalmente uma mistura
de solventes orgnicos sem a adio de gua.
Os modelos de reteno interao-solvente e competio-solvente tm sido

usados para descrever o efeito da fase mvel em cromatografia lquida no modo
normal.
39
Embora molculas inicas ou ionizveis possam ser separadas por

cromatografia no modo normal, a aplicao majoritria tem sido para molculas
neutras. As molculas hidrofbicas (menos polares) so eludas primeiro, enquanto
as molculas hidroflicas (mais polares) so mais retidas.
2.5.2.2 Cromatografia em fase reversa
A fase mvel mais polar do que a fase estacionria. A cromatografia em

fase reversa a mais utilizada em CLAE, pois permite a separao de uma grande
quantidade de solutos e o uso de fases mveis aquosas. A fase mvel mais
comumente utilizada uma mistura de acetonitrila/gua, sendo a acetonitrila,
quando necessrio, substituda pelo metanol ou tetraidrofurano (THF). O uso de
apenas esses trs solventes deve-se pequena quantidade de solventes orgnicos
miscveis em gua.
A separao em fase reversa se deve principalmente a interaes entre a

parte no-polar do soluto e a fase estacionria, isto , repulso desta parte do
soluto pela fase mvel aquosa.
2.5.2.3 Cromatografia de compostos inicos
A separao de compostos ionizveis pode ser conseguida por supresso da

ionizao ou, ento, por completa ionizao e separao por pareamento de ons ou
por troca inica.
Em cromatografia de fase reversa, a reteno diminui para compostos mais

hidroflicos, assim, quando um cido ou uma base so ionizados, eles se tornam
menos hidrofbicos e, conseqentemente, a reteno reduzida. Com o aumento
do pH, a reteno para cidos diminui e para bases aumenta.
Quando o pH igual ao pKa de um composto, este se encontra parcialmente

ionizado. Todas as mudanas de reteno ocorrem dentro de uma faixa de
40
1,5(CASS, Q.B.; DEGANI, A.L.G., 2001) ou 2,00 unidades de pKa
(CIOLA, R.,
1998). Fora desta faixa, o composto ou est ionizado ou est no ionizado, e a

reteno no muda muito.
cidos e bases fortes no podem ser separados por pareamento inico de

ons porque permanecem inicos na faixa de pH de 2 a 8, ou s vezes maior. Se a
forma ativa for a no dissociada, ento ser possvel de se analisar por
cromatografia em fase reversa. Se ela for inica, no ser possvel a no ser que
sua carga seja modificada por algum processo. A tcnica que permite a eliminao
da forma dissociada chamada de supresso inica e s pode ser empregada com
cidos ou bases fracas (CIOLA, R., 1998), devido a maior facilidade deve ser
escolhida como primeira alternativa a supresso inica e eluio no modo reverso. A
adio de um par inico deve ser considerada quando a primeira alternativa falhar
(CASS, Q.B.; DEGANI, A.L.G., 2001).
Numa separao perfeita os compostos so retidos e particionados por um

nico
mecanismo
de
reteno.
Em
fases
reversas
os
solutos
reagem
hidrofobicamente com as cadeias alqulicas do empacotamento. Nas colunas de fase

reversa a presena de grupos silanis residuais pode chegar a 20,0% e com isso
acarretar fortes interaes com o soluto. Como resultado, ter a formao de caudas
levando a assimetria dos picos. Este efeito pode ser eliminado introduzindo, na fase
mvel, compostos que competem fortemente com a s hidroxilas cidas dos grupos
silanis. Pequenas concentraes de aminas, por exemplo, a trietilamina so
eficientes. (CIOLA, R., 1998).
2.5.2.4 Cromatografia de troca inica
o mtodo de escolha para anlise de ons inorgnicos e, s vezes, o

preferido para a anlise de pequenos ons orgnicos. A reteno em troca inica se
d por atrao eletrosttica entre ons na fase mvel e os ons de carga oposta na
fase estacionria. As fases estacionrias so referidas como resinas trocadoras de
ons e so classificadas em aninicas e catinicas. As aninicas fortes tm
usualmente um on amnio quaternrio imobilizado, enquanto a catinica forte tem
41
um cido sulfnico, sendo ionizados na faixa completa e pH. As resinas aninicas

fracas apresentam aminas imobilizadas, enquanto as catinicas fracas tm cidos
carboxlicos.
As resinas catinicas so usadas para separao de ctions como bases

protonadas, enquanto as aninicas so usadas para a separao de nions ou
solutos cidos.
2.5.2.5 Cromatografia de excluso
usada especialmente para: separao preliminar de amostras complexas

visando isolar ou purificar polmeros, na anlise de polmeros para observar a
presena de dmeros, trmeros, etc. ou para estimar o peso molecular de polmeros
sintticos ou naturais. A separao por excluso requer que o tamanho do poro da
fase estacionria seja adequadamente selecionado de acordo com o tamanho das
molculas que se pretende separar. As molculas pequenas devem penetrar nos
poros, enquanto as molculas grandes devem ser excludas de todos os poros da
fase estacionria. As de tamanho intermedirio sero s parcialmente excludas.
2.6 Mtodos de calibrao multivariada (UNICAMP, 2005)
A calibrao multivariada tem como princpio bsico a utilizao simultnea

de muitas variveis independentes x1, x2,... xn (ex: valores de absorbncia a vrios
comprimentos de onda), para quantificar alguma varivel dependente y (ex:
concentrao). A seguir, so apresentados os principais mtodos de calibrao
multivariada.
Regresso Linear Mltipla (RLM)
O mtodo mais simples de calibrao multivariada a RLM. Na RLM, a

varivel a ser prevista para vrias amostras (vetor y) estimada por uma
combinao linear das variveis independentes contidas na matriz X,
42
y = Xb
ou
y = b1x1 + b2x2 + ... + bnxn
onde b o vetor com os coeficientes de regresso. A soluo por mnimos

quadrados : b = (XX)-1Xy. A RLM o melhor mtodo de calibrao para sistemas
bem comportados (respostas lineares, sem interferentes, sem interaes entre
analitos, com baixo rudo e nenhuma colinearidade). Entretanto, a sua limitao est
no fato de ela usar toda a informao contida na matriz X, no importando se
relevante ou no, para construir o modelo. Com isso, quantidade significativa de
varincia (informao) irrelevante incorporada e o modelo se torna pouco robusto,
isto , com pouca habilidade para prever novas amostras. Outro problema est na
etapa de inverso da matriz (XX). Se a matriz X contiver menos linhas que colunas
(menos amostras que variveis), ela no poder ser invertida e a soluo no
existir. Portanto, so necessrias mais amostras do que variveis. Uma das
maneiras de contornar as limitaes da RLM utilizar previamente algum mtodo de
seleo das variveis.
Regresso em Componentes Principais (PCR)
A PCR, do ingls principal components regression, um mtodo que

fornece uma maneira de superar as limitaes da RLM. A regresso, ao invs de ser
feita nas variveis originais, feita nos escores obtidos em uma PCA. Aps a
decomposio da matriz X, a matriz de escores obtida, T, usada na determinao
dos coeficientes de regresso, que por sua vez sero usados na previso das novas
amostras;
y = Tb + E
onde b contm os coeficientes de regresso e y os valores da varivel dependente.

A soluo dada por b = (TT)-1Ty.
43
Mnimos Quadrados Parciais (PLS)
O PLS, do ingls partial least squares, o mtodo mais usado em

calibrao multivariada e difere da PCR por usar a informao de y no clculo das
chamadas variveis latentes (equivalentes as CPs na PCA). As matrizes X e Y so
decompostas simultaneamente em uma soma de h variveis latentes, como nas
equaes a seguir:
X = TP + E = thph + E
Y = UQ + F = uhqh + F
onde T e U so as matrizes de escores das matrizes X e Y, respectivamente; P e Q

so as matrizes dos pesos das matrizes X e Y, respectivamente; e E e F so os
resduos. A correlao entre os dois blocos X e Y simplesmente uma relao linear
obtida pelo coeficiente de regresso linear, tal como descrito abaixo,
uh = bh th
para h variveis latentes, sendo que os valores de bh so agrupados na matriz

diagonal B, que contm os coeficientes de regresso entre a matriz de escores U de
Y e a matriz de escores T de X. A melhor relao linear possvel entre os escores
desses dois blocos obtida atravs de pequenas rotaes das variveis latentes
dos blocos de X e Y.
A matriz Y pode ser calculada de uh,
Y = TBQ + F
e a concentrao de novas amostras prevista a partir dos novos escores, T*,

substitudos na Equao anterior.
44
Y = T*BQ
Nesse processo, necessrio achar o melhor nmero de variveis latentes, o que

normalmente feito usando um procedimento chamado validao cruzada (cross
validation), no qual o erro mnimo de previso determinado. Deve ser mencionada
ainda, a diferenciao entre PLS1, em que a regresso feita para uma varivel
dependente de cada vez (a matriz Y um vetor coluna), e PLS2, onde todas as
variveis dependentes so calculadas simultaneamente.
2.7 Quimiometria (UNICAMP, 2005)
A quimiometria uma rea que se refere aplicao de mtodos estatsticos

e matemticos, assim como aqueles baseados em lgica matemtica, a problemas
de origem qumica.
Com a sofisticao crescente das tcnicas instrumentais, impulsionada pela

invaso de microprocessadores e microcomputadores no laboratrio qumico,
tornaram-se necessrios tratamentos de dados mais complexos do ponto de vista
matemtico e estatstico, a fim de relacionar os sinais obtidos (intensidades, por
exemplo) com os resultados desejados (concentraes).
As anlises quantitativas que eram realizadas na maioria das vezes por via
mida como titulao, precipitao e reaes especficas, que so demoradas e
muitas vezes pouco precisas, esto cada vez mais sendo substitudas por tcnicas
instrumentais
como:
Ressonncia
Magntica
Nuclear,
Espectroscopia
no
Infravermelho, Espectroscopia no visvel/ultravioleta, Espectroscopia de Massa,

Cromatografia, Polarografia, Anlise por Injeo em Fluxo, etc., que aliam a
velocidade de anlise com uma boa qualidade de resultados. Nessas tcnicas
instrumentais no obtida uma informao direta do resultado, mas sim uma grande
quantidade de sinais (curvas, picos) que podem ser tratados para uma possvel
quantificao das vrias espcies presentes.
45
Muita nfase tem sido dada aos sistemas multivariados, nos quais se pode
medir muitas variveis simultaneamente, ao se analisar uma amostra qualquer.
Nesses sistemas, a converso da resposta instrumental no dado qumico de
interesse, requer a utilizao de tcnicas de estatstica multivariada, lgebra
matricial e anlise numrica. Essas tcnicas se constituem no momento na melhor
alternativa para a interpretao de dados e para a aquisio do mximo de
informao sobre o sistema.
De todos os ramos da qumica clssica, talvez a qumica analtica tenha sido

a mais afetada pelo desenvolvimento recente da instrumentao qumica associada
a computadores. De fato, a Chemometrics Society, organizao internacional
dedicada ao uso e desenvolvimento de mtodos em quimiometria, composta
principalmente por qumicos interessados em problemas analticos. Atualmente
muito raro se encontrar qualquer peridico respeitvel sobre pesquisas em qumica
analtica, que no traga artigos reportando dados obtidos com o auxlio de
microcomputadores,
ou
tratados
por
matemtica
multivariada
ou
mtodos
estatsticos, sempre com o objetivo de melhorar a qualidade dos resultados ou

facilitar a sua interpretao.
2.8 Validao de mtodos analticos
A necessidade de se mostrar a qualidade de medies qumicas, atravs de

sua comparabilidade, rastreabilidade e confiabilidade, est sendo cada vez mais
reconhecida e exigida. Dados analticos no confiveis podem conduzir a decises
desastrosas e a prejuzos financeiros irreparveis. Para garantir que um novo
mtodo analtico gere informaes confiveis e interpretveis sobre a amostra, ele
deve sofrer uma avaliao denominada validao. A validao de um mtodo um
processo contnuo que comea no planejamento da estratgia analtica e continua
ao longo de todo o seu desenvolvimento e transferncia. Para registro de novos
produtos, todos os rgos reguladores do Brasil e de outros pases exigem a
validao de metodologia analtica e, para isso, a maioria deles tem estabelecido
documentos oficiais que so diretrizes a serem adotadas no processo de validao.
46
H vrias definies para a validao, como por exemplo: - a validao deve

garantir, atravs de estudos experimentais, que o mtodo atenda s exigncias das
aplicaes analticas, assegurando a confiabilidade dos resultados, definio da
ANVISA (Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria) que desde 29 de maio de 2003,
preconiza a Resoluo 899 para os testes de validao;
- Validao o processo de definir uma exigncia analtica e confirmar que o mtodo

sob investigao tem capacidade de desempenho consistente com o que a
aplicao requer o que define o Eurachem Working Group;
- Confirmao por testes e apresentao de evidncias objetivas de que

determinados requisitos so preenchidos para um dado uso internacional, conceito
dado pela ISSO/IEC 17025;
- Para a Farmacopia Americana: A validao assegura a credibilidade dos mtodos

analticos durante o uso rotineiro, sendo algumas vezes mencionado como o
processo que fornece uma evidncia documentada de que o mtodo realiza aquilo
para o qual indicado para fazer;
- A Organizao Mundial de Sade diz que validao Avaliao sistemtica de um

procedimento analtico para demonstrar que est sob as condies nas quais deve
ser aplicado. (RIBANI, M. et al.,2004).
Os parmetros analticos normalmente encontrados para validao de

mtodos so: seletividade, linearidade e faixa de aplicao, preciso, exatido, limite
de deteco, limite de quantificao e robustez.
Estes termos so conhecidos como parmetros de desempenho analtico,

caractersticas de desempenho e, algumas vezes, como figuras de mrito.
47
Seletividade ou especificidade
A seletividade de um mtodo instrumental a capacidade de avaliar, de forma

inequvoca, as substncias em exame na presena de componentes que podem
interferir com a sua determinao em uma amostra complexa. Se a seletividade no
for assegurada, a linearidade, a exatido e a preciso estaro seriamente
comprometidas.
Linearidade
A linearidade corresponde capacidade do mtodo em fornecer resultados

diretamente proporcionais concentrao da substncia em exame, dentro de uma
determinada faixa de aplicao.
A correlao entre o sinal medido e a massa ou concentrao da espcie a

ser quantificada muito raramente conhecida a priori. Na maior parte dos casos, a
relao matemtica entre o sinal e a concentrao ou massa da espcie de
interesse deve ser determinada empiricamente, a partir de sinais medidos para
massas ou concentraes conhecidas dessa espcie, Essa relao matemtica,
muitas vezes, pode ser expressa como uma equao de reta chamada de curva
analtica.
Preciso
Representa a disperso de resultados entre ensaios independentes, repetidos

de uma mesma amostra, amostras semelhantes ou padres, sobre condies
definidas. A preciso avaliada pelo desvio padro absoluto (), que utiliza um
nmero significativo de medies, normalmente maior que 20. Na prtica, em
validao de mtodos, o nmero de determinaes geralmente pequeno e o que
se calcula a estimativa do desvio padro absoluto (s).
48
s=
(x x )
n 1
x a mdia aritmtica de um pequeno nmero de medies (mdia das

determinaes), sendo uma estimativa de a mdia verdadeira (mdia da
populao); xi o valor individual de uma medio e n o nmero de medies.
A preciso tambm pode ser expressa atravs do intervalo de uma confiana

da mdia que uma faixa de valores no qual existe uma determinada probabilidade
de se encontrar um certo valor de uma varivel, calculada pela equao:
Intervalo de confiana da mdia = x t n -1
em que: t
n -1
s
n
= valor crtico da distribuio de Student com n-1 graus de
liberdade. O valor t tabelado e apresenta valores para diferentes nveis de

confiana.
Outra expresso da preciso atravs da estimativa do desvio padro

relativo (DPR) ou (RSD), tambm conhecido como coeficiente de variao (CV) ou
DPR% ou RSD%.
RSD (%) ou CV(%) =
s
X 100
x
Normalmente, mtodos que quantificam compostos em macro quantidades

requerem um RSD ou DPR de 1 a 2%. Em mtodos de anlise de traos ou
impurezas, so aceitos RSD ou DPR de at 20%, dependendo da complexidade da
amostra. Uma maneira simples de melhorar a preciso aumentar o nmero de
replicatas.
49
A preciso em validao de mtodos considerada em trs nveis diferentes:

repetitividade; preciso intermediria; reprodutibilidade.
Repetitividade: representa a concordncia de resultados de medies

sucessivas de um mesmo mtodo, efetuadas sob as mesmas condies de
medies: mesmo procedimento; mesmo analista; mesmo instrumento usado sob as
mesmas condies; mesmo local; repeties em um curto intervalo de tempo.
Preciso intermediria: reconhecida como a mais representativa da

variabilidade dos resultados em um nico laboratrio e, como tal, mais aconselhvel
de ser adotada. O objetivo da validao da preciso intermediria verificar que no
mesmo laboratrio o mtodo fornecer os mesmos resultados.
Reprodutibilidade: o grau de concordncia entre os resultados das

medies de uma mesma amostra, efetuadas sob condies variadas (mudanas de
operador, local, equipamento, etc.). A reprodutibilidade refere-se aos resultados dos
estudos de colaborao entre laboratrios e deve ser considerada em situaes
como a padronizao de procedimentos analticos a serem includos, por exemplo,
em farmacopias, procedimentos do CODEX, etc.
Exatido
Representa o grau de concordncia entre os resultados individuais

encontrados em um determinado ensaio e um valor de referncia aceito como
verdadeiro. importante observar que um valor exato ou verdadeiro o valor obtido
por uma medio perfeita e este valor indeterminado por natureza. (RIBANI, M. et
al.,2004).
O teste de recuperao efetuado para comprovar a exatido do mtodo

proposto. O procedimento usual consiste em adicionar amostra quantidades
conhecidas da substncia padro em estudo, empregando-se em seguida, o mtodo
proposto para anlise e verificando-se o percentual recuperado.
50
Limite de deteco
Representa a mais baixa concentrao da substncia em exame que pode

ser detectada com um certo limite de confiabilidade utilizando um determinado
procedimento experimental.
Limite de quantificao
Representa a mais baixa concentrao da substncia em exame que pode

ser determinada de forma quantitativa com preciso e exatido aceitveis utilizando
um determinado procedimento experimental
Robustez
A robustez de um mtodo mede a sensibilidade que este apresenta face a

pequenas variaes. Diz-se que um mtodo robusto quando ele no afetado por
uma modificao pequena e deliberada em seus parmetros (RIBANI, M. et
al.,2004).
51
3. OBJETIVOS
- Desenvolvimento de mtodos analticos para a determinao de dipirona

sdica e cloridrato de papaverina isolados e em associao em formulaes
farmacuticas;
- Validao e padronizao da metodologia analtica por cromatografia lquida

de alta eficincia para a determinao de dipirona sdica e cloridrato de papaverina
isolados e em associao em formulaes farmacuticas;
- Validao e padronizao da metodologia analtica empregando a

espectrofotometria no ultravioleta para a determinao de dipirona sdica e
cloridrato de papaverina em associao, utilizando a calibrao multivariada.
52
4. MATERIAL E MTODOS
4.1 Material
Todos os reagentes utilizados foram de grau analtico ou grau cromatogrfico

(HPLC).
4.1.1 Reagentes e solventes
- acetonitrila (Merck)
- acetato de amnio (Merck)
- acetato de sdio (Merck)
- cido actico glacial (Merck)
- cido ortofosfrico (Merck)
- fosfato de sdio monobsico (Merck)
- fosfato de potssio dibsico (Merck)
- fosfato monobsico de potssio (Merck)
- metanol para cromatografia (Merck)
- trietilamina (Merck)
53
4.1.2 Substncias qumicas de referncia
Os frmacos empregados como substncias qumicas de referncia, foram

gentilmente
cedidos
por
laboratrios
farmacuticos.
Os
frmacos
vieram
identificados com as respectivas porcentagens de pureza e foram utilizados sem

ulterior purificao:
- dipirona sdica grau de pureza 100,80 % (Furp)

- cloridrato de papaverina grau de pureza 99,80 % (Cristlia)
4.1.3 Equipamentos e acessrios
-Balana analtica- OHAUS

-Balana eletrnica BG 200 GEHAKA
-Banho ultrasnico Thornton T14
-Coluna cromatogrfica Merck LiChrospher 100 RP - 18 (125 X 4,6 mm,5m)
-Coluna cromatogrfica Supelcosil C18 LC - PAH (250 mm X 4,6 mm, 5m) Supelco,
Bellefonte, USA e pr coluna C 18 (20 X 4,6 mm ,5m) Supelco
- Coluna Nova Pack C18 (300 x 3,9mm)
- Coluna Cromatogrfica Merck LiChrospher 100 RP - 8 (125 X 4,6 mm, 5m)
54
- Sistema de cromatografia lquida de alta eficincia, modelo Varian 5000 (Varian

Associates, CA, USA)
- Vlvula giratria de injeo, modelo 7125, Rheodyne com um loop de 20L
- Detector de ultravioleta varivel, Varian modelo 4000
- Integrador modelo 4000, (Varian Associates, CA, USA)
- Espectrofotmetro UV/Visvel Shimadzu UV 1601, acoplado a computador Intel e
impressora HP 660 C, com cubetas de quartzo de 1cm de caminho tico
-Medidor de ponto de fuso (Melting Point SMP1 Stuart Scientific)
-Membrana Millipore
-Milli - Q Plus Milipore obteno de gua
-pHmetro DM 21 Digimed TE 901
- programa MATLAB
TM
, verso 6.5 ( The MathWorks, Natick, EUA) PLS Toolbox,
verso 3.5 (Eigenvector Technologies, Manson, EUA), para as anlises com o PLS.
4.1.4 Amostras
- Amostra 1 Melpaz Soluo oral Frasco com 15 mL

Dipirona sdica.................................... 250 mg
Cloridrato de papaverina........................ 10 mg
Veculo
(sacarina
sdica;
metilparabeno;
qsp........................................................... 1mL
lcool
etlico
gua
destilada)
55
- Amostra 2 - Dipirona gotas:

Dipirona sdica.................................... 500mg
Veculo (gua destilada; edetato de sdio; metabissulfito de sdio e sorbitol)
qsp ...........................................................1mL
- Amostra 3 - Dipaverina injetvel:

Cloridrato de papaverina.................... 100 mg
Veculo (lcool etlico; metabissulfito de sdio; cloreto de sdio; gua para injetveis)
qsp.......................................................... 2 mL
- Amostra 4 Placebo da soluo oral (Amostra 1)
Sacarina sdica........................... 0,5 g

Metilparabeno.............................. 0,2 g
lcool etlico................................. 10 mL
gua destilada qsp...................... 100 mL
- Amostra 5 placebo da soluo oral (Amostra 2)

Edetato de sdio.................................... 0,5 g
Metabissulfito de sdio........................... 0,5g
Sorbitol................................................... 2,5 g
gua destilada qsp............................... 50 mL
56
- Amostra 6 placebo da soluo injetvel (Amostra 3)

lcool etlico............................... 6 mL
Metabissulfito de sdio............... 0,1 g
Cloreto de sdio.......................... 0,9 g
gua para injetveis qsp............. 100 mL
4.2 Mtodos
4.2.1 Testes preliminares
A substncia de referncia cloridrato de papaverina foi submetida a alguns

ensaios farmacopicos descritos em compndios oficiais.
Foram realizados os
testes de solubilidade, presena de cloretos, aparncia e pH da soluo, perda por

dessecao a 105C, cinzas sulfatadas, doseamento atravs de titulao
potenciomtrica e verificou-se o seu aspecto. (BRITISH Pharmacopoeia, 2002). Foi
preparada uma soluo de cloridrato de papaverina a 5,0 g/mL em HCl 0,1 M e
efetuou-se leitura por espectrofotometria no UV. A substncia de referncia de
dipirona sdica foi submetida aos testes de solubilidade, identificao atravs de
reao com perxido e teste de sdio, perda por dessecao a 105C, aspecto de
uma soluo de 2g em 40 mL de gua livre de dixido de carbono e doseamento por
titulao com iodo.( BRITISH Pharmacopeia, 2002). Preparou-se uma soluo da
substncia de referncia dipirona sdica a 20 g/mL em HCl 0,1 M e fez-se leitura
por espectrofotometria no UV, tambm como ensaio de identificao, seguindo
dados da literatura, que preconiza como pico mximo de absoro, nestas
condies, 258 nm( CLARKE, E.C.G., 1986).
57
4.2.2 Ensaios cromatogrficos preliminares para a anlise de dipirona sdica e

As Tabelas 1, 2 e 3 descrevem as condies cromatogrficas que foram
testadas em diferentes colunas cromatogrficas.
58
Tabela 1 - Condies utilizadas nos testes com uma coluna cromatogrfica Merck
LiChrospher 100 RP - 8 (125 X 4,6 mm, 5m)
Fase
Vazo(mL/min)
mvel
Detector UV
(nm)
gua
Acetonitrila
Metanol
Trietilamina
pH
75
15
0,3%
3,0
1,0
254
65
20
15
0,3%
3,0
1,0
254
40
60
3,0
1,0
254
50
50
3,0
1,0
254
50
50
0,1%
3,0
1,0
254
50
50
0,05%
3,0
1,0
254
60
30
10
0,3%
3,0
1,0
254
80
10
10
0,3%
3,0
1,0
254
80
10
10
0,3%
3,0
0,5
254
70
20
10
0,3%
3,0
1,0
254
70
20
10
0,3%
3,0
0,5
254
75
15
10
0,3%
3,0
1,0
254
80
10
10
0,4%
3,0
1,0
254
70
20
10
0,3%
4,9
1,0
254
70
20
10
0,3%
5,5
1,0
220
70
20
10
0,3%
5,5
1,0
254
70
20
10
0,3%
5,5
1,0
275
70
20
10
0,3%
4,7
1,0
254
70
20
10
0,3%
4,7
0,8
254
70
20
10
0,3%
4,5
1,0
254
Tampo acetato de
Acetonitrila
Metanol
Trietilamina
pH
70
20
10
0,3%
4,5
1,0
254
Tampo acetato de
Acetonitrila
Metanol
Trietilamina
pH
70
20
10
0,3%
5,5
1,0
285
70
20
10
0,3%
4,5
1,0
254
Tampo fosfato
Acetonitrila
Metanol
Trietilamina
pH
80
16
0,28%
4,5
1,0
254
80
16
4,5
1,0
254
80
10
10
4,5
1,0
254
80
20
4,5
1,0
254
80
12
3,0
1,0
220
60
40
1,0
220; 234; 254
amnio 0,01 M
sdio 0,01 M
59
Tabela 2 - Condies utilizadas nos testes com uma coluna Nova Pack C18 (300 x 3,9mm)
Fase mvel
Vazo(mL/min)
Detector UV (nm)
gua
Acetonitrila
Metanol
Trietilamina
pH
70
20
10
3,0
0,8
215
70
20
10
3,0
0,8
273
70
20
10
3,0
0,6
254
Tabela 3 - Condies utilizadas nos testes com uma coluna Merck LiChrospher 100 RP - 18
(125 X 4,6 mm,5m)
Fase mvel
Vazo(mL/min)
Detector UV (nm)
gua
acetonitrila
metanol
trietilamina
pH
70
20
10
0,3%
6,5
1,0
254
25
60
15
3,38
1,0
254
15
70
15
3,1
1,0
254
70
15
15
6,86
0,5
254
70
30
6,0
0,8
254
70
30
6,0
0,5
254
75
20
0,3%
3,3
1,0
254
70
20
10
3,3
1,0
254
50
35
15
3,5
1,0
254
70
20
10
0,3%
4,4
1,0
254
70
20
10
0,3%
3,0
0,8
254
75
15
10
0,3%
3,3
1,0
254
75
20
0,3%
3,3
1,0
254
78
20
0,3%
3,3
1,0
254
70
30
0,4%
5,0
1,0
254
50
50
3,0
1,0
254
80
20
0,3%
3,4
1,0
254
Tampo fosfato
Acetonitrila
Metanol
trietilamina
pH
60
30
10
0,3%
4,5
1,0
254
70
20
10
0,3%
4,5
1,0
254
70
28
0,3%
4,5
1,0
254
50
40
10
4,5
1,0
254
95
3,4
1,0
254
80
20
0,3%
7,0
1,0
254
80
20
0,3%
5,0
1,0
254
80
16
0,28%
4,5
1,0
254
60
Nas condies cromatogrficas citadas nas Tabelas 1,2 e 3 o pH foi ajustado

com cido ortofosfrico, quando foi necessrio.
A coluna cromatogrfica Supelcosil C18 LC - PAH (250 mm X 4,6 mm , 5m)
e pr coluna C 18 (20 X 4,6 mm, 5m) foi testada utilizando-se as seguintes
condies:
- Fase mvel: gua: acetonitrila: metanol (70: 20: 10) trietilamina 0,3% e pH:
3,0 ajustado com cido ortofosfrico; vazo de 0,7 mL/min e detector de UV a 254
nm.
As amostras foram dissolvidas e diludas em cada fase mvel utilizada,
variando-se as concentraes de 250,0 a 50,0 g/mL para a dipirona sdica e de
50,0 a 1,0 g/mL para cloridrato de papaverina.
Foram preparadas solues de dipirona sdica padro e cloridrato de
papaverina padro nas concentraes de 20,0 g/mL e 10 g/mL, respectivamente
na fase mvel: gua: acetonitrila: metanol (70: 20: 10) trietilamina 0,3% e pH: 3,0
ajustado com cido ortofosfrico e efetuadas leituras por espectrofotometria no UV
para seleo de melhor comprimento de onda.
4.2.3 Validao da metodologia analtica para a cromatografia lquida de alta

eficincia
4.2.3.1 Padronizao do mtodo cromatogrfico para a associao de dipirona

Aps vrios experimentos, foram fixados os seguintes parmetros:
Fase mvel: gua: acetonitrila: metanol (70: 20: 10) trietilamina 0,3% e pH: 3,0,
ajustado com cido ortofosfrico.
61
A fase mvel foi filtrada em membrana para filtrao Millipore de 0,5m e

desgaseificada antes de ser utilizada.
Vazo: 0,7 mL/min
Deteco no UV: 254 nm
Atenuao: 2 A.U.F.S.
Temperatura ambiente (25C 1C)
Volume de injeo: 20 L
Coluna cromatogrfica Supelcosil C18 LCPH 250 mm X 4,6 mm (5m) Supelco
e pr coluna C 18 20 X 4,6 mm(5m) Supelco
Solvente: fase mvel
As solues foram filtradas em unidades filtrantes HV MILLEX 0,45 m,

antes de serem injetadas no cromatgrafo.
a) Preparao da soluo padro de dipirona sdica
Foram pesados exatamente cerca de 50,0 mg de dipirona sdica e

transferidos para balo volumtrico de 100 mL, dissolvendo-se e completando-se o
volume com fase mvel, obtendo-se soluo de concentrao final de 500,0 g/mL
de dipirona sdica.
62
b) Preparao da soluo padro de cloridrato de papaverina
Foram pesados exatamente cerca de 40,0 mg de cloridrato de papaverina e

volume com fase mvel, em seguida foi tomada uma alquota de 10,0 mL desta
soluo e transferida para balo volumtrico de 100 mL obtendo-se uma soluo de
concentrao final de 20,0 g/mL de cloridrato de papaverina.
c) Preparo da soluo padro de mistura de dipirona sdica e cloridrato de

papaverina
Foi transferida uma alquota de 10,0 mL da soluo final de (a) e uma alquota
de 10,0 mL da soluo final de (b) para um balo de 50 mL e completou-se o volume
do balo com fase mvel. Obtendo-se uma soluo com concentraes finais de
100,0 g/mL de dipirona sdica e 4,0 g/mL de cloridrato de papaverina.
d) Procedimento
Alquotas de 4,0; 4,5; 5,0; 5,5; 6,0 e 6,5 mL da soluo padro de (c) foram
transferidas para bales volumtricos de 10,0 mL e completou-se o volume de cada
balo com fase mvel, obtendo-se solues com concentraes de 40,0; 45,0; 50,0;
55,0; 60,0 e 65,0 g/mL de dipirona sdica e 1,6; 1,8; 2,0; 2,2; 2,4 e 2,6 g/mL de
cloridrato de papaverina, respectivamente.
63
Especificidade
a) Preparao da soluo padro de dipirona sdica e cloridrato de papaverina
Primeiramente foi preparada uma soluo seguindo o procedimento do item

4.2.3.1.1 c., obtendo-se uma soluo padro de 100 g/mL de dipirona sdica e 4
g/mL de cloridrato de papaverina. Desta soluo transferiu-se uma alquota de 5,0
mL para balo volumtrico de 10 mL, completou-se o volume com fase mvel e
obteve-se uma concentrao final de 50,0 g/mL de dipirona sdica e 2,0g/mL de
cloridrato de papaverina.
b) Preparao da soluo da Amostra 1
Foi transferida uma alquota de 2,0 mL da soluo oral do medicamento que

contm 250 mg/mL de dipirona sdica e 10 mg/mL de cloridrato de papaverina para
balo volumtrico de 1000 mL e diluiu-se com gua Milli - Q, obtendo-se uma
soluo com concentrao de 500,0 g/mL de dipirona sdica e 20,0 g/mL de
cloridrato de papaverina. Desta soluo foi transferida uma alquota de 10,0 mL para
balo volumtrico de 100 mL, completou-se o volume com fase mvel, obtendo-se
concentraes finais de 50,0 g/mL de dipirona sdica e 2,0 g/mL de cloridrato de
papaverina.
c) Preparao da Amostra 4 (soluo placebo da Amostra 1)
64
Foram feitas diluies com a soluo da Amostra 4, seguindo o mesmo

procedimento do item 4.2.3.1.2 b.
Desvio padro relativo - Preciso
Foram preparadas trs solues padro conforme item 4.2.3.1.2 a. e

efetuadas trs leituras de cada soluo padro. Utilizou-se a mdia aritmtica
dessas leituras como valor do padro.
A soluo da Amostra 1 foi preparada conforme descrito no item 4.2.3.1.2b.

Foram realizadas 9 determinaes para cada amostra e os resultados foram
analisados estatisticamente.
Teste de recuperao - Exatido
65
Foi preparada uma soluo seguindo o mesmo procedimento do item

4.2.3.1.1 c, obtendo-se uma soluo padro de 100 g/mL de dipirona sdica e 4
g/mL de cloridrato de papaverina.
Foi transferida uma alquota de 2,0 mL da soluo oral do medicamento

contendo 250,0 mg/mL de dipirona sdica e 10,0 mg/mL de cloridrato de papaverina
para balo volumtrico de 1000 mL e diluiu-se com gua Milli - Q, obtendo-se uma
balo volumtrico de 25 mL, obtendo-se solues com concentraes finais de
Procedimento:
Alquotas de soluo padro e de amostra comercial foram transferidas para
balo volumtrico de 10 mL, conforme procedimento que segue:
Amostra comercial
Padro
Concentrao
Concentrao
dipirona sdica
dipirona sdica
final de
final de
(100,0g/mL)
(100,0g/mL) dipirona sdica cloridrato papaverina
cloridrato
cloridrato
de papaverina
de papaverina
(4,0g/mL)
(4,0g/mL)
4,0 mL
________
40,0 g/mL
1,6 g/mL
________
4,0mL
40,0 g/mL
1,6 g/mL
4,0 mL
1,0 mL
50,0 g/mL
2,0 g/mL
4,0 mL
1,5 mL
55,0 g/mL
2,2 g/mL
4,0 mL
2,0 mL
60,0 g/mL
2,4 g/mL
66
Em todos os bales volumtricos o volume foi completado com fase mvel.
Especificidade
Foram pesados exatamente cerca de 50,0 mg de padro de dipirona sdica e

transferidos para balo volumtrico de 100 mL, obtendo-se uma soluo padro de
500,0 g/mL de dipirona sdica. Desta soluo transferiu-se uma alquota de 10,0
mL para balo volumtrico de 100 mL, completou-se o volume com fase mvel e
obteve-se uma concentrao final de 50,0 g/mL de dipirona sdica.

contm 500,0 mg/mL de dipirona sdica para balo volumtrico de 2000 mL e diluiuse com gua Milli - Q, obtendo-se uma soluo com concentrao de 500,0 g/mL
de dipirona sdica. Desta soluo foi transferida uma alquota de 5,0 mL para balo
volumtrico de 100 mL, completou-se o volume com fase mvel, obtendo-se
concentrao final de 50,0 g/mL de dipirona sdica.
c) Preparao da Amostra 5 (soluo placebo da Amostra 2)
67
Foram preparadas diluies com a soluo da amostra 5, seguindo-se o

mesmo procedimento do item 4.2.3.1.4 b
Desvio padro relativo Preciso
Foram preparadas trs solues padro conforme item 4.2.3.1.4a. e

efetuadas trs leituras dessa soluo. Utilizou-se a mdia aritmtica dessas leituras
como valor do padro.
A soluo de amostra comercial foi preparada conforme descrito no item

4.2.3.1.4b. Foram realizadas 10 determinaes e os resultados foram analisados
estatisticamente.
68
Foram pesados exatamente cerca de 25,0 mg de padro de dipirona sdica e

transferidos para balo volumtrico de 25 mL, obtendo-se uma soluo padro de
1000,0 g/mL de dipirona sdica. Desta soluo foram transferidos 10 mL para
balo volumtrico de 100 mL e completou-se o volume com fase mvel, obtendo-se
uma concentrao final de 100,0 g/mL.

contm 500,0 mg/mL de dipirona sdica para balo volumtrico de 1000 mL e diluiuse com gua Milli Q, obtendo-se uma soluo com concentrao de 1000,0 g/mL
de dipirona sdica. Desta soluo foi transferida uma alquota de 5,0 mL para balo
volumtrico de 50 mL, obtendo-se soluo com concentrao final de 100,0 g/mL
de dipirona sdica.
Procedimento:

Amostra comercial
Padro
Concentrao
dipirona sdica
dipirona sdica
final de
(100,0g/mL)
(100,0g/mL) dipirona sdica
4,0 mL
________
40,0 g/mL
________
4,0mL
40,0 g/mL
4,0 mL
1,0 mL
50,0 g/mL
4,0 mL
1,5 mL
55,0 g/mL
4,0 mL
2,0 mL
60,0 g/mL
69
4.2.3.2 Padronizao do mtodo cromatogrfico para o cloridrato de papaverina

isolado
Parmetros utilizados:
Fase mvel: gua: acetonitrila: metanol (70: 20: 10) trietilamina 0,3% e pH: 3,0
ajustado com cido ortofosfrico.

A fase mvel foi filtrada em membrana para filtrao Millipore de 0,5 m e
desgaseificada antes de ser utilizada.
Vazo: 1,0 mL/min
Deteco no UV: 254 nm
Atenuao: 2 A.U.F.S.
Temperatura ambiente( 25C 1C)
Volume de injeo: 20 L
Coluna cromatogrfica Merck LiChrospher 100 - RP 18 (125 X 4,6 mm, 5m)
Solvente: fase mvel
As solues foram filtradas em unidades filtrantes HV MILLEX 0,45 m,

antes de serem injetadas no cromatgrafo.
70
a) Preparao da soluo padro de cloridrato de papaverina

Procedimento
Alquotas de 10,0; 11,0; 12,0; 13,0; 14,0 e 15,0 mL da soluo padro de

cloridrato de papaverina foram transferidas para bales volumtricos de 25 mL e
completou-se o volume de cada balo com fase mvel, obtendo-se solues com
concentraes de 8,0; 8,8; 9,6; 10,4; 11,2 e 12,0 g/mL de cloridrato de papaverina.
4.2.3.2.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes
Especificidade
71
Foram exatamente pesados cerca de 10,0 mg de cloridrato de papaverina e

Foi transferida uma alquota de 5,0 mL da soluo injetvel do medicamento

que contm 100,0 mg/2mL de cloridrato de papaverina para balo volumtrico de
100 mL e diluiu-se com gua Milli Q, obtendo-se uma soluo com concentrao de
2,5 mg/mL de cloridrato de papaverina. Desta soluo foi transferida uma alquota
de 5,0 mL para balo volumtrico de 250 mL, completou-se o volume com fase
mvel, obtendo-se 50,0 g/mL de cloridrato de papaverina. Desta soluo transferiuse uma alquota de 2,0 mL para balo volumtrico de 10 mL, completando-se o
volume com fase mvel, obtendo-se uma concentrao final de 10,0 g/mL de
Foram realizadas leituras em triplicata.
c) Preparao da Amostra 6 ( soluo placebo da Amostra 3 )
Foi transferida uma alquota de 5,0 mL da soluo da Amostra 6 para balo

volumtrico de 100 mL e diluiu-se com gua Milli Q. Desta soluo foi transferida
uma alquota de 5,0 mL para balo volumtrico de 250 mL, completou-se o volume
com fase mvel. Em seguida, transferiu-se uma alquota de 2,0 mL desta ltima
diluio para
balo volumtrico de 10 mL, completando-se o volume com fase
mvel. Foram realizadas leituras em triplicata.
72

Foram preparadas trs solues padro e efetuadas trs leituras de cada
soluo padro. Utilizou-se a mdia aritmtica dessas leituras como valor do padro.

que contm 100,0 mg/2mL de cloridrato de papaverina para balo volumtrico de
100 mL e diluiu-se com gua Milli Q, obtendo-se uma soluo com concentrao de
2,5 mg/mL de cloridrato de papaverina. Desta soluo foi transferida uma alquota
de 5,0 mL para balo volumtrico de 250 mL, completou-se o volume com fase
mvel, obtendo-se 50,0 g/mL de cloridrato de papaverina. A partir desta soluo
foram tomadas 10 alquotas de 2,0 mL para 10 bales volumtricos de 10 mL, cada
balo contendo uma concentrao final de 10,0 g/mL de cloridrato de papaverina.
Foram realizadas leituras em triplicata para cada amostra e os resultados
foram analisados estatisticamente.
73
Teste de recuperao Exatido

volume com fase mvel, obtendo-se uma soluo com concentrao de 100,0 g/mL
de cloridrato de papaverina. Desta soluo foi transferida uma alquota de 10,0 mL
para balo volumtrico de 100 mL, completou-se o volume com fase mvel,
obtendo-se concentrao final de 10,0 g/mL de cloridrato de papaverina.

que contm 100 mg/2 mL, ou seja 50,0 mg/mL de cloridrato de papaverina para
balo volumtrico de 1000 mL e diluiu-se com gua Milli Q, obtendo-se uma soluo
com concentrao de 250,0 g/mL de cloridrato de papaverina. Desta soluo foi
transferida uma alquota de 10,0 mL para balo volumtrico de 25 mL, completou-se
o volume do balo com fase mvel obtendo-se concentraes final 100,0 g/mL de
74
Procedimento:
balo volumtrico de 25,0 mL, conforme procedimento que segue:
Amostra comercial
Padro
Concentrao
cloridrato
cloridrato
final de
de papaverina
de papaverina cloridrato papaverina
(100,0g/mL)
(10,0g/mL)
2,0 mL
________
8,0 g/mL
________
20,0mL
8,0 g/mL
2,0 mL
2,5 mL
9,0 g/mL
2,0 mL
5,0 mL
10,0g/mL
2,0 mL
10,0 mL
12,0 g/mL
4.3 Ensaios preliminares utilizando a espectrofotometria no UV com aplicao do

PLS (Partial Least Squares) para a anlise de dipirona sdica e cloridrato de
papaverina
Primeiramente foram preparadas solues de dipirona sdica padro a 20,0

g/mL e cloridrato de papaverina padro a 4,0 g/mL em metanol separadamente e
analisadas por espectrofotometria no UV. Em seguida foram preparadas misturas
das solues de dipirona sdica a 25,0 g/mL , cloridrato de papaverina a 1,0 g/mL
e do placebo( todos os componentes do veculo) da Amostra 1 em metanol e em
cido clordrico 0,1 M, respectivamente.
75
As solues foram preparadas seguindo a proporo dos medicamentos na

amostra comercial 1 (250,0 mg de dipirona sdica, 10,0 mg de cloridrato de
papaverina).
Aps a anlise dos resultados foram padronizados os seguintes parmetros:
- Solvente: metanol
- Faixa de leitura: 210 a 300 nm (passo ou intervalo de 0,5 nm)
4.3.1 Modelo de calibrao para a espectrofotometria no UV com aplicao do PLS
Preparao das solues
Foram pesados exatamente cerca de 25,0 mg de dipirona sdica e

transferidos para balo volumtrico de 250 mL e completou-se o volume com
metanol, obtendo-se uma soluo na concentrao de 100,0 g/mL. Em seguida,
foram pesados exatamente cerca de 25,0 mg de cloridrato de papaverina e
transferidos para balo volumtrico de 250 mL, o volume foi completado com
metanol. Desta soluo a 100,0 g/mL de cloridrato de papaverina, foi transferida
uma alquota de 5,0 mL para balo volumtrico de 100 mL, obtendo-se uma soluo
de concentrao final de 5,0 g/mL de cloridrato de papaverina.
Destas solues foram preparadas 25 solues em bales volumtricos de 10
mL contendo misturas de dipirona sdica e cloridrato de papaverina da seguinte
maneira:
76
Soluo n
Alquota de
Concentrao de
Alquota de
Concentrao de
soluo de
dipirona sdica
soluo de
cloridrato de
dipirona sdica
cloridrato de
papaverina
(100,0 g/mL)
papaverina
mL
(5,0 g/mL)
mL
1,5
15,00
1,0
0,50
2,0
20,00
1,0
0,50
2,5
25,00
1,0
0,50
3,0
30,00
1,0
0,50
3,5
35,00
1,0
0,50
1,5
15,00
1,5
0,75
2,0
20,00
1,5
0,75
2,5
25,00
1,5
0,75
3,0
30,00
1,5
0,75
10
3,5
35,00
1,5
0,75
11
1,5
15,00
2,0
1,00
12
2,0
20,00
2,0
1,00
13
2,5
25,00
2,0
1,00
14
3,0
30,00
2,0
1,00
15
3,5
35,00
2,0
1,00
16
1,5
15,00
2,5
1,25
17
2,0
20,00
2,5
1,25
18
2,5
25,00
2,5
1,25
19
3,0
30,00
2,5
1,25
20
3,5
35,00
2,5
1,25
21
1,5
15,00
3,0
1,50
22
2,0
20,00
3,0
1,50
23
2,5
25,00
3,0
1,50
24
3,0
30,00
3,0
1,50
25
3,5
35,00
3,0
1,50
Todas as solues foram transferidas para bales volumtricos de 10 mL

atravs de bureta calibrada e os volumes foram completados com metanol.
Todos os espectros de absorbncia das solues acima foram tratados pelo
programa MATLAB
TM
, aplicando-se o mtodo de calibrao multivariada PLS
(Partial Least Squares) ou mtodo dos mnimos quadrados parciais.
77
4.3.1.1 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes
Especificidade
Inicialmente pesou-se exatamente cerca de 25,0 mg de dipirona sdica e

transferiu-se para balo volumtrico de 100 mL, diluindo-se e completando-se o
volume com metanol, obtendo-se uma soluo padro de 250,0 g/mL de dipirona
sdica. Em seguida foram pesados exatamente cerca de 20,0 mg de cloridrato de
papaverina e transferidos para balo volumtrico de 200 mL, diluiu-se e completouse o volume, obtendo-se uma concentrao de 100,0 g/mL de cloridrato de
papaverina. Desta soluo transferiu-se uma alquota de 5,0 mL para balo
volumtrico de 50 mL, completou-se o volume com metanol e obteve-se uma
concentrao final de 10,0 g/mL de cloridrato de papaverina. Desta soluo foi
transferida uma alquota de 5,0 mL para balo volumtrico de 50 mL, neste mesmo
balo foi transferida uma alquota de 5,0 mL da soluo de dipirona sdica a 250,0
g/mL, completou-se o volume deste balo com metanol, obtendo-se uma soluo
com concentrao final de 25,0 g/mL de dipirona sdica e 1,0 g/mL de cloridrato
de papaverina.

contm 250,0 mg/mL de dipirona sdica e 10,0 mg/mL de cloridrato de papaverina
78
balo volumtrico de 100 mL, completou-se o volume com metanol, obtendo-se

concentraes finais de 25,0 g/mL de dipirona sdica e 1,0 g/mL de cloridrato de
papaverina.
c) Preparao da Amostra 4 ( soluo placebo da Amostra 1 )
Foi transferida uma alquota de 2,0 mL da soluo da Amostra 4 para balo

volumtrico de 1000 mL e diluiu-se com gua Milli Q. Desta soluo foi transferida
uma alquota de 5,0 mL para balo volumtrico de 100 mL e completou-se o volume
com metanol.
Os espectros de absorbncia de todas as solues foram tratados pelo
programa MATLAB TM, aplicando-se o PLS.
4.3.1.2 Aplicao do mtodo padronizado Amostra 1
Foram preparadas trs solues padro conforme item 4.3.1.1a. e efetuadas

trs leituras de cada soluo padro. Utilizou-se a mdia aritmtica dessas leituras
como valor do padro.
79
b) Preparao da soluo de amostra comercial - Amostra 1
A soluo de amostra comercial foi preparada conforme descrito no item

4.3.1.1b. Foram realizadas 9 determinaes para cada amostra e os resultados
foram analisados estatisticamente.
Pesou-se exatamente cerca de 25,0 mg de dipirona sdica e transferiu-se

para balo volumtrico de 100 mL, diluindo-se e completando-se o volume com
metanol, obtendo-se uma soluo padro de 250,0 g/mL de dipirona sdica. Em
seguida foram pesados 10,0 mg de cloridrato de papaverina e transferidos para
balo volumtrico de 200 mL, diluiu-se e completou-se o volume, obtendo-se uma
concentrao de 50,0 g/mL de cloridrato de papaverina. A partir destas solues
foram transferidos 25,0 mL e 5,0 mL para um balo volumtrico de 50 mL,
respectivamente, completou-se o volume com metanol e obteve-se concentraes
de 125,0 g/mL de dipirona sdica e 5,0 g/mL de cloridrato de papaverina.
b) Preparao da soluo de amostra comercial 1

contm 250,0 mg/mL de dipirona sdica e 10,0 mg/mL de cloridrato de papaverina
80
balo volumtrico de 50 mL, obtendo-se solues com concentraes finais de
Procedimento:

Amostra comercial
Padro
Concentrao
Concentrao
dipirona sdica
dipirona sdica
final de
final de
(250,0g/mL)
(125,0g/mL) dipirona sdica cloridrato papaverina
cloridrato
cloridrato
de papaverina
de papaverina
(10,0g/mL)
(5,0g/mL)
4,0 mL
________
20,0 g/mL
0,8 g/mL
________
8,0mL
20,0 g/mL
0,8 g/mL
4,0 mL
1,0 mL
22,5 g/mL
0,9 g/mL
4,0 mL
2,0 mL
25,0 g/mL
1,0 g/mL
4,0 mL
3,0 mL
27,5 g/mL
1,1 g/mL

81
5. RESULTADOS
5.1 Testes preliminares com as substncias de referncia
5.1.1 Testes descritos pela Farmacopia Britnica
Tabela 4 Testes da Farmacopia Britnica aplicados substncia de referncia Cloridrato de papaverina

Teste
Especificaes
Resultados
Aspecto
P cristalino, branco, inodoro
De acordo
Solubilidade
gua (1:30) - solvel, metanol-solvel,
De acordo
lcool-fracamente solvel, clorofrmio-insolvel,

ter-insolvel
Cloretos
Presena de cloretos
De acordo
pH
3 a 4,5
3,18
Doseamento
98,5 a 100,5%
99,72%
Cinzas sulfatadas
0,1%
0,09%
82
Tabela 5 Testes da Farmacopia Britnica aplicados substncia de referncia Dipirona sdica

Teste
Especificaes
Resultados
Aspecto
P cristalino, branco, inodoro
De acordo
Solubilidade
gua-solvel; lcoolsolvel,
De acordo
clorofrmio-insolvel,
ter-insolvel
Identificao
Presena de sdio chama amarela

Reao com perxido cor azul altera-se para
Positivo
vermelha
Perda por
4,9 a 5,3%
5,0%
Doseamento
98,0 a 101,2%
101,0%
Aparncia da
amarelada
De acordo
dessecao
soluo
83
5.1.2 Teste de identificao por Espectrofotometria no UV
Figura 5 Espectro de absoro do cloridrato de papaverina a 5,0 g/mL em HCl 0,1 M.

mximo: 250 nm.
Figura 6 Espectro de absoro da dipirona sdica padro a 20,0 g/mL em HCl 0,1 M ,
mximo: 258 nm.
84
4
5.2 Ensaios cromatogr

c
ficos pre
eliminares para a anlise
a
dee dipirona sdica e
clorid
drato de papaverina
1 Testes preliminares
s com a Co
oluna Crom
matogrfica Merck
5.2.1
LiCh
hrospher 100RP1
8 (125
(
X 4,6 mm , 5m
m)
Figurra 7 - Crom
matogramas
s da dipiron
na a 50,0 g/mL
e do cloridrato de papaverina a 25,0

0
g/m
mL diludos em fase m
vel. Condiies croma
atogrficas:: Fase mvvel: tampo acetato de
e
sdio
o 0,01M:ace
etonitrila:me
etanol (70:2
20:10) trietilamina 0,3%
% e pH 5,5;; vazo de 1 mL/min e
detecctor de UV a 285 nm. Coluna Cro
omatogrfica Merck LiC
Chrospher 100RP - 8 (125 X 4,6
6
mm , 5m)
85
5
Figurra 8 - Crom
matogramas
s da dipiron
na a 50,0 g/mL
e do cloridrato de papaverina a 25,0

0
g/m
mL diludos em fase m
vel. Condiies croma
atogrficas:: Fase mvvel: tampo acetato de
e
amn
nio 0,01M:a
acetonitrila:metanol (70
0:20:10) trie
etilamina 0,3% e pH 4,,5; vazo de 1 mL/min
n
e detector de UV
U a 254 nm
m. Coluna C
Cromatogr
fica Merck
k LiChrosphher 100RP - 8 (125 X
mm , 5m)
4,6 m
86
5.2.2 Testes preliminares com a Coluna Cromatogrfica Merck LiChrospher

100 RP -18 (125 X 4,6 mm, 5m)
Figura 9 - Cromatograma da dipirona a 50,0 g/mL diluda em fase mvel. Condies

cromatogrficas: Fase mvel :gua:acetonitrila (50:50) pH: 3,0; vazo de 1mL/min e detector
de UV a 254 nm. Coluna Cromatogrfica Merck LiChrospher 100 RP -18 (125 X 4,6 mm,
5m)
87
Figura 10 - Cromatogramas da dipirona a 50,0 g/mL e do cloridrato de papaverina a 15,0

g/mL
diludos
em
fase
mvel.
Condies
cromatogrficas:
Fase
mvel:
gua:acetonitrila:metanol (70:20:10) trietilamina 0,3% e pH: 6,5; vazo de 1,0 mL/min e

detector de UV a 254 nm. Coluna Cromatogrfica Merck LiChrospher 100 RP -18 (125 X
4,6 mm, 5m)
88
5.2.3 Testes preliminares com a Coluna Cromatogrfica Nova Pack C18

(300 x 3,9mm)
Figura 11 - Cromatogramas da dipirona a 50,0 g/mL e do cloridrato de papaverina a 15,0

g/mL
diludos
em
fase
mvel.
Condies
cromatogrficas:
Fase
mvel:
gua:acetonitrila:metanol (70:20:10) pH = 3,0 ajustado com cido ortofosfrico= 3,0; vazo

de 0,8 mL/min e detector de UV a 273 nm. Coluna Cromatogrfica Nova Pack C18(300 x
3,9mm)
5.2.4 Seleo de melhor comprimento de onda atravs de espectros de

absorbncia
Foram desenvolvidos espectros de absoro na regio do UV de cada

frmaco, para verificar qual o melhor comprimento de onda empregado na
cromatografia. As figuras 12 e 13 ilustram os espectros de absoro das solues de
dipirona sdica e cloridrato de papaverina, respectivamente.
89
Figura 12 Espectro de absoro de dipirona sdica a 20,0 g/mL em fase mvel:

gua:acetonitrila:metanol (70:20:10) pH = 3,0 ajustado com cido ortofosfrico.
Figura 13 Espectro de absoro de cloridrato de papaverina a 10,0 g/mL em fase mvel:

gua:acetonitrila:metanol (70:20:10) pH = 3,0 ajustado com cido ortofosfrico.
90
5.3 Padronizao do mtodo cromatogrfico para a associao de dipirona sdica e

A Figura 14 representa a curva analtica da dipirona sdica. Os valores

experimentais obtidos para a construo da curva analtica so descritos na
Tabela 6 e anlise estatstica na Tabela7.
Figura 14 - Curva analtica da dipirona sdica. Concentraes de 40,0; 45,0; 50,0; 55,0; 60,0
e 65,0 g/mL de dipirona sdica. Condies cromatogrficas: Coluna cromatogrfica:
Supelcosil C18 - LCPH (250 mm X 4,6 mm, 5m) Supelco e prcoluna C -18 (20 X 4,6 mm,
5m) Supelco. Fase mvel: gua:acetonitrila:metanol (70:20:10 ) trietilamina 0,3% e pH: 3,0
ajustado com cido ortofosfrico.Vazo: 0,7 ml/min. Deteco no UV: 254 nm.
91
Tabela 6 Valores experimentais obtidos na determinao da curva analtica da dipirona

sdica, por cromatografia lquida de alta eficincia, empregando Coluna cromatogrfica:
Supelcosil C18 - LCPH (250 mm X 4,6 mm, 5m) e pr coluna C18 (20 X 4,6mm,
5m) Supelco.
Concentrao rea Mdia (a)
(g/mL)
( mV.min)
40,0
29058
45,0
32671
50,0
36137
55,0
40637
60,0
43572
65,0
46980
(a)
Mdia de trs leituras
Tabela 7 Anlise estatstica dos resultados obtidos na determinao da curva analtica

da dipirona sdica pela cromatografia lquida de alta eficincia
Parmetros
Resultados obtidos
Interseco da reta (a)
131,93
Coeficiente angular (b)
724,65
Desvio da interseco da reta(a)
941,22
Desvio do coeficiente angular(b)
17,70
Coeficiente de correlao (r)
0,9988
Desvio padro
370,13
A Figura 15 representa a curva analtica do cloridrato de papaverina. Os valores

experimentais obtidos para a construo da curva analtica so descritos na
Tabela 8 e anlise estatstica na Tabela 9.
92
Figura 15 - Curva analtica do cloridrato de papaverina. Concentraes de 1,6; 1,8; 2,0;

2,2; 2,4 e 2,6 g/mL de cloridrato de papaverina. Condies cromatogrficas: Coluna
cromatogrfica: Supelcosil C18 - LCPH 250 mm X 4,6 mm, 5m) Supelco e pr coluna
C - 18 (20 X 4,6 mm, 5m) Supelco. Fase mvel: gua:acetonitrila:metanol (70:20:10)
trietilamina 0,3% e pH: 3,0 ajustado com cido ortofosfrico. Vazo: 0,7 ml/min. Deteco
no UV: 254 nm.
Tabela 8 Valores experimentais obtidos na determinao da curva analtica do

cloridrato de papaverina, por cromatografia lquida de alta eficincia, empregando Coluna
cromatogrfica: Supelcosil C18 - LCPH (250 mm X 4,6 mm , 5m) e pr coluna C - 18
(20 X 4,6mm, 5m) Supelco.
(a)
(g/mL)
(mV.min)
1,6
4906
1,8
5503
2,0
6120
2,2
6734
2,4
7387
2,6
8115
93
Tabela 9 Anlise estatstica dos resultados obtidos na determinao da curva analtica

do cloridrato de papaverina pela cromatografia lquida de alta eficincia
Parmetros
Resultados obtidos
-232,47
3187,29
118,17
55,54
0,9993
Desvio padro
46,47
5.3.2 - Pesquisa de interferentes a partir de excipientes para a Amostra 1 Especificidade
A Figura 16 mostra os cromatogramas do placebo Amostra 4 (todos os

componentes do veculo) (A), padro de dipirona sdica e cloridrato de
papaverina(B) e Amostra 1(C):
94
Figura 16 Cromatogramas A placebo Amostra 4, B - padro de dipirona sdica a

50,0 g/mL ( tr = 2,30 min ) e cloridrato de papaverina a 2,0 g/mL ( 8,68 min ) e C
Amostra 1 - contendo dipirona sdica a 50,0 g/mL ( 2,32 min ) e cloridrato de papaverina
a 2,0 g/mL ( 8,72 min ). Condies cromatogrficas: Coluna cromatogrfica: Supelcosil
C18 - LCPH (250 mm X 4,6 mm, 5m) Supelco e pr coluna C - 18 (20 X 4,6 mm, 5m)
Supelco .Fase mvel: gua:acetonitrila:metanol (70:20:10) trietilamina 0,3% e pH: 3,0
ajustado com cido ortofosfrico. Vazo: 0,7 mL/min. Deteco no UV: 254 nm.
95
Os valores experimentais obtidos na determinao quantitativa da Amostra 1

contendo dipirona sdica e cloridrato de papaverina atravs da cromatografia
lquida de alta eficincia (CLAE) podem ser observados nas Tabelas 10 e 11.
Tabela 10 - Valores experimentais obtidos na determinao quantitativa da dipirona

sdica na amostra comercial por CLAE e anlise estatstica dos resultados
Amostra
Concentrao
Porcentual
Desvio
Desvio padro
de dipirona sdica
obtido
Padro
relativo
( 50,0 g/mL )
Absoluto
DPR
50,17
100,35
50,08
100,15
50,12
100,24
49,13
98,26
50,25
100,51
1,008
0,010
48,90
97,81
50,32
100,63
49,89
99,78
49,96
99,92
DPR %
Intervalo de confiana
1,01
99,73 0,78
96
Tabela 11 - Valores experimentais obtidos na determinao quantitativa da cloridrato de

papaverina na amostra comercial por CLAE e anlise estatstica dos resultados
Amostra
Concentrao
Porcentual
Desvio
Desvio padro
DPR
obtido
padro
relativo
(2,0 g/mL )
2,03
101,42
1,99
99,66
1,98
98,90
1,95
97,60
1,97
98,35
1,97
98,35
1,99
99,73
2,01
100,29
1,99
99,66
DPR
1,15
0,012
1,16
99,29 0,88
Teste de recuperao para o mtodo cromatogrfico Exatido
As Tabelas 12 e 13 apresentam os resultados do teste de recuperao para a

dipirona sdica e para o cloridrato de papaverina, respectivamente na Amostra
comercial 1.
Tabela 12 - Resultados obtidos para o teste de recuperao pelo mtodo
cromatogrfico para a dipirona sdica na Amostra 1.
Amostra
Quantidade de padro adicionado
Quantidade de padro
Recuperao
(g/mL)
recuperado*(g/mL)
(%)
10,00
10,22
102,18
15,00
15,34
102,24
20,00
20,27
101,92
*mdia de trs determinaes
97

cromatogrfico para o cloridrato de papaverina na Amostra 1.
Amostra
Quantidade de padro
Recuperao
(g/mL)
recuperado*(g/mL)
(%)
0,40
0,39
98,75
0,60
0,59
99,03
0,80
0,79
98,50
5.3.4 - Pesquisa de interferentes a partir de excipientes para a Amostra comercial 2

Especificidade
A Figura 17 mostra os cromatogramas do placebo Amostra 5 (A), padro de

dipirona sdica (B) e Amostra 2 (C):
98
Figura 17 Cromatogramas A placebo Amostra 5, B - padro de dipirona sdica a 50,0

g/mL (tr = 2,30 min ) e C Amostra 2 contendo dipirona sdica a 50,0 g/mL ( tr = 2,35
min ). Condies cromatogrficas: Coluna cromatogrfica: Supelcosil C18 - LCPH (250
mm X 4,6 mm, 5m) Supelco e pr coluna C - 18 (20 X 4,6 mm, 5m) Supelco. Fase
mvel: gua:acetonitrila:metanol (70:20:10) trietilamina 0,3% e pH: 3,0. Vazo: 0,7
ml/min. Deteco no UV: 254 nm.
99
Os valores experimentais obtidos na determinao quantitativa da amostra

comercial (Amostra 2) de soluo oral contendo dipirona sdica atravs da
cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) podem ser observados na Tabela
14.
sdica na amostra comercial por CLAE e anlise estatstica dos resultados
Amostra
Concentrao
Porcentual
Desvio
Desvio
Desvio
Intervalo
de dipirona sdica
obtido
padro
padro
padro
de confiana
(50,0 g/mL)
absoluto
relativo
relativo
DPR
DPR
%
50,10
100,20
50,08
100,16
50,10
100,20
50,04
100,07
50,09
100,17
50,13
100,26
50,13
100,26
50,11
100,22
50,04
100,07
10
50,04
100,07
0,071
0,000708
0,071
100,17 0,06
100
A Tabela 15 apresenta os resultados do teste de recuperao para a dipirona

sdica na amostra comercial 2.

cromatogrfico para a dipirona sdica na Amostra 2
Amostra
Quantidade de padro
Recuperao
(g/mL)
recuperado*(g/mL)
(%)
10,0
10,11
101,10
15,0
15,04
100,23
20,0
20,01
100,07
5.4 Padronizao do mtodo cromatogrfico para o cloridrato de

papaverina em amostra isolada
A Figura 18 representa a curva analtica do cloridrato de papaverina. Os

valores experimentais obtidos para a construo da curva de analtica so
descritos na Tabela 16 e anlise estatstica na Tabela 17.
101
Figura 18 - Curva de calibrao da cloridrato de papaverina. Concentraes de 8,0; 8,8; 9,6;

10,4; 11,2 e 12,0 g/mL de cloridrato de papaverina. Condies cromatogrficas: Coluna
cromatogrfica Merck LiChrospher 100 RP - 18 (125 X 4,6 mm, 5m). Fase mvel:
gua:acetonitrila:metanol (70:20:10) trietilamina 0,3% e pH: 3,0 ajustado com cido
ortofosfrico. Vazo: 1,0 ml/min. Deteco no UV: 254 nm.
102
Tabela 16 Resultados experimentais obtidos na determinao da curva de calibrao

do cloridrato de papaverina, por cromatografia lquida de alta eficincia, empregando
Coluna cromatogrfica: Merck LiChrospher 100 RP - 18 (125 X 4,6 mm, 5m)

(g/mL)
( mV.min)
8,0
20231
8,8
22235
9,6
24100
10,4
26117
11,2
28505
12,0
30653
(a)
Tabela 17 - Anlise estatstica dos resultados obtidos na determinao da curva analtica

do cloridrato de papaverina pela cromatografia lquida de alta eficincia
Parmetros
Resultados obtidos
-742,10
2604,89
534,41
52,95
0,9992
Desvio padro
177,20
103
Especificidade
A Figura 19 mostra os cromatogramas do placebo Amostra 6 (A), padro de

cloridrato de papaverina(B) e amostra comercial Amostra 3 (C):
placebo
papaverina padro
amostra
Figura 19 Cromatogramas A placebo da soluo injetvel Amostra 6, B - padro de

cloridrato de papaverina a 10,0 g/mL ( tr = 4,40 min ) e C Amostra 3 contendo cloridrato
de papaverina a 10,0 g/mL ( tr = 4,40 min )
cromatogrfica Merck LiChrospher
. Condies cromatogrficas: Coluna
100 RP - 18 (125 X 4,6 mm, 5m). Fase mvel:
gua:acetonitrila:metanol (70:20:10) trietilamina 0,3% e pH: 3,0. Vazo: 1,0 mL/min.

Deteco no UV: 254 nm.
104
Os valores experimentais obtidos na determinao quantitativa da Amostra 3

de soluo injetvel contendo cloridrato de papaverina atravs da cromatografia
lquida de alta eficincia (CLAE) podem ser observados na Tabela 18.
Tabela 18 - Valores experimentais obtidos na determinao quantitativa do cloridrato de

papaverina na Amostra 3 por CLAE e anlise estatstica dos resultados
Amostra
Concentrao de
Porcentual
Desvio
Desvio
Desvio padro
Intervalo de
cloridrato de
obtido %
padro
padro
relativo
confiana
absoluto
relativo
DPR
DPR
0,0069
0,67
papaverina
( 10,0 g/mL )
1
9,97
99,70
9,98
99,80
10,02
100,20
10,13
101,30
9,97
99,70
10,13
101,30
9,95
99,50
9,97
99,70
10,04
100,40
10
9,96
99,60
0,67
100,12 0,48
105
A Tabela 19 apresenta os resultados do teste de recuperao para o

cloridrato de papaverina na Amostra 3.
Tabela 19 - Resultados obtidos para o teste de recuperao pelo mtodo cromatogrfico

para cloridrato de papaverina na Amostra 3.
Amostra
Quantidade de padro
Recuperao
(g/mL)
recuperado*(g/mL)
(%)
9,00
9,05
100,60
10,00
9,84
98,35
12,00
11,98
99,85
106
5.5 Ensaios preliminares utilizando a espectrofotometria no UV com aplicao do

PLS para a anlise de dipirona sdica e cloridrato de papaverina
Figura 20 Espectro de absoro da dipirona sdica padro a 20,0 g/mL em metanol.

mximos: 234 e 263 nm.
Figura 21 - Espectro de absoro do cloridrato de papaverina padro a 4,0 g/mL em

metanol. mximo: 238 nm.
107
Figura 22 - Espectros de absoro no UV da dipirona sdica a 25,00 g/mL (em preto), do

cloridrato de papaverina a 1,00 g/mL (vermelho) e do placebo (azul) em metanol
Figura 23 Espectros de absoro no UV da dipirona sdica a 25,00 g/mL (em verde), do

cloridrato de papaverina a 1,00 g/mL (preto) e do placebo (vermelho) em cido clordrico
0,1 M
108
Figura 24 Espectros de absoro no UV (derivada de primeira ordem) da dipirona sdica a

25,00 g/mL (em azul) e do cloridrato de papaverina a 1,00 g/mL (vermelho) em metanol
Figura construda pelo programa MATLAB
sdica e do cloridrato de papaverina.
TM
a partir dos espectros diretos da dipirona
109
Especificidade
A Figura 25 mostra o espectro do placebo Amostra 4, do padro de

cloridrato de papaverina e da amostra comercial Amostra 1:
Figura 25 Espectros de absoro no UV do padro de dipirona sdica a 25,0 g/mL e

do cloridrato de papaverina a 1,0 g/mL em associao; da amostra comercial Amostra
1 e do placebo Amostra 4. Solvente: metanol.
110
Aplicao do mtodo padronizado Amostra 1
Os valores experimentais obtidos na determinao quantitativa da amostra

comercial (amostra 1) de soluo oral contendo dipirona sdica e cloridrato de
papaverina atravs da espectrofotometria no UV, com aplicao do PLS podem
ser observados nas Tabelas 20 e 21.

sdica na amostra comercial por espectrofotometria no UV com aplicao da
quimiometria e anlise estatstica dos resultados
Amostra
Concentrao de
Porcentual
Desvio
Desvio padro
DPR
Intervalo de
dipirona sdica
obtido %
padro
relativo
confiana
absoluto
DPR
1,04
0,011
1,05
99,02 0,80
( 25,0 g/mL )
1
24,49
97,95
24,71
98,82
24,64
98,55
25,11
100,44
24,99
99,97
24,40
97,62
24,70
98,78
24,64
98,57
25,11
100,44
111
Tabela 21 - Valores experimentais obtidos na determinao quantitativa do cloridrato de

papaverina na amostra comercial por espectrofotometria no UV com aplicao do PLS e
anlise estatstica dos resultados
Amostra
Concentrao de
Porcentual
Desvio
Desvio padro
obtido %
padro
relativo
absoluto
DPR
1,53
0,016
(1,0 g/mL)
1
0,96
96,00
0,97
97,00
0,98
98,00
0,99
99,00
1,00
100,00
0,97
97,00
0,99
99,00
1,00
100,00
1,002
100,20
DPR %
1,55
98,48 1,18
Teste de recuperao para o mtodo espectrofotomtrico Exatido
As Tabelas 22 e 23 apresentam os resultados do teste de recuperao para a

dipirona sdica e para o cloridrato de papaverina, respectivamente na amostra
comercial 1.

espectrofotomtrico para a dipirona sdica na Amostra 1.
Amostra
Quantidade de padro recuperado*
Recuperao
(g/mL)
(g/mL)
(%)
2,50
2,37
97,10
5,00
4,77
95,30
7,50
7,14
95,20
112

espectrofotomtrico para o cloridrato de papaverina na amostra comercial 1.
Amostra
Quantidade de padro recuperado*
Recuperao
(g/mL)
(g/mL)
(%)
0,10
0,095
95,1
0,20
0,189
94,6
0,30
0,288
96,0
A Tabela 24 mostra algumas figuras de mrito que foram calculadas pelo

programa MATLAB TM .
Tabela 24 Figuras de mrito usando o PLS e calculadas pelo programa MATLAB TM

Figura de mrito
R
Dipirona sdica
Cloridrato de papaverina
0.9982
0.9970
Sinal rudo (S/N)

mnimo
50.4480
19.1753
mximo
114.6085
116.2875
Sensibilidade (SEN)
0,002
0,024
RMSEP*
0,5709
0,0163
* Root Mean Square Error of Prediction (raiz quadrada dos erros mdios quadrados de previso)
113
5.6 Comparao estatstica dos mtodos de cromatografia lquida (CLAE) e

espectrofotometria na regio do ultravioleta (UV) com aplicao do PLS
As Tabelas 25, 26, 27 e 28 apresentam os parmetros estatsticos envolvidos

nos clculos efetuados para a comparao da preciso e da exatido dos mtodos
propostos, para a determinao de dipirona sdica e cloridrato de papaverina em
Amostra comercial.
Tabela 25 Resultados experimentais obtidos a partir da determinao de dipirona sdica e

cloridrato de papaverina em Amostra comercial.
Frmaco
Parmetro
Espectrofotometria
Cromatografia Lquida de alta
estatstico
UV/PLS
eficincia
(CLAE)
dipirona
99,02
99,74
1,035
1,008
98,48
99,29
1,528
1,1504
sdica
cloridrato de
papaverina
X = mdia dos valores experimentais obtidos na determinao do teor de dipirona

sdica e cloridrato de papaverina em soluo oral em %
S = desvio padro
n = nmero de determinaes
114
Tabela 26 Resultados obtidos na comparao da mdia dos mtodos propostos para a

determinao de dipirona sdica e cloridrato de papaverina na Amostra 1
Frmaco
Mtodos
Espectrofotometria UV/PLS
e CLAE
Valor calculado de t
dipirona sdica
1,495
1,271
Valor da Tabela t de student para 16 graus de liberdade e P = 95% 2,12.
Tabela 27 Resultados obtidos na comparao da preciso dos mtodos propostos para a

determinao de dipirona sdica e cloridrato de papaverina na Amostra 1.
Frmaco
Mtodos
Espectrofotometria UV/PLS
e CLAE
Valor calculado de F
dipirona sdica
1,054
0,567
Valor da Tabela F de Snedecor, 8/8 graus de liberdade e P = 95% 4,43.
115
Tabela 28 Resultados obtidos na comparao da exatido dos mtodos propostos para a

determinao de dipirona sdica e cloridrato de papaverina na Amostra 1.
Frmaco
Mtodos
Espectrofotometria UV/Quimiometria
e CLAE
Valor calculado de t
dipirona sdica
10,59
6,79
Valor da Tabela t de student para 2 graus de liberdade e P = 95% 4,30.
116
6 DISCUSSO
6.1. Aspectos Gerais

A dor uma sensao desagradvel e s vezes insuportvel, que atinge toda
a humanidade, desde a sua existncia, pode atingir crianas, adultos e idosos. A dor
a causa principal de sofrimento, incapacitao para o trabalho e ocasiona graves
conseqncias
psicossociais
econmicas.
Com
ao
de
frmacos,
principalmente os analgsicos, temos conseguido muitas vezes superar a dor.

Os analgsicos so um dos medicamentos mais consumidos por todo o
mundo. No Brasil h um alto consumo de analgsicos na forma isolada ou em
associao com outros frmacos
Dentre estes medicamentos est a dipirona sdica, que um medicamento
muito utilizado em todo o Brasil, e em muitos outros pases, tanto na sua forma
isolada, quanto em associao. Sua monografia no consta da Farmacopia
Americana. Alguns artigos expressam que a dipirona no comercializada nos
Estados Unidos, pois foram os alemes que a sintetizaram. Pesquisadores
americanos alegam que a dipirona causa agranulocitose e anemia aplstica, mas
segundo dados do Painel de Segurana do uso da dipirona, realizado em Braslia
DF, no Brasil, no h comprovaes cientficas para retirar a dipirona do mercado,
pois houve casos de pessoas que tiveram essas doenas, utilizando outros
analgsicos, como o cido acetil saliclico, o paracetamol e outros. Acredita-se que
algumas pessoas j tenham predisposio a ter anemia aplstica e agranulocitose,
ou que sejam pessoas que fazem uso indiscriminado desse medicamento e de
outros analgsicos que em excesso possam causar discrasias sangneas.
(BENSENOR, I.M., 2001).
A dipirona sdica um medicamento muito polmico, mas continua sendo um
dos analgsicos mais utilizados em todo o mundo, faz parte da lista dos dez
medicamentos mais vendidos no Brasil.
O cloridrato de papaverina um frmaco derivado do pio, como a morfina,
mas no causa efeito entorpecente. Sua ao farmacolgica mais explorada a
antiespasmdica, porm pode ser utilizado em casos de disfuno ertil e outros
distrbios vasculares.
117
A dipirona sdica em associao com o cloridrato de papaverina resulta em

um medicamento muito utilizado para o alvio de dores, causadas principalmente por
clicas renais, biliares e menstruais.
Os compndios oficiais praticamente no apresentam metodologias analticas
para medicamentos em associao.
Consultando a literatura cientfica no encontram-se metodologias analticas
para a determinao simultnea da dipirona sdica e cloridrato de papaverina.
Somente foi verificado um trabalho em que analisou-se amostras contendo
papaverina e dipirona sdica, mas a dipirona passou por um processo de extrao,
pois o objetivo era quantificar somente a papaverina, que foi determinada por
espectrofotometria no UV, mas no houve determinao da dipirona (MOUSSA,
A.F.A,1978).
Atualmente as metodologias oficiais para o doseamento de dipirona sdica
a titulao iodomtrica, que consta tanto da Farmacopia Britnica quanto da
Farmacopia Brasileira. Para o doseamento do cloridrato de papaverina as
metodologias so a potenciometria, que consta em sua monografia na Farmacopia
Britnica e a titulao em meio no aquoso pela Farmacopia Brasileira. Ainda na
Farmacopia Britnica descrito o teste de doseamento por CLAE para um
medicamento injetvel que contm a associao de papaverina, morfina e codena.
O objetivo deste trabalho foi desenvolver metodologias analticas para
medicamentos que contm dipirona sdica e cloridrato de papaverina, isolados e em
associao.
As matrias-primas dipirona sdica e cloridrato de papaverina foram
submetidas aos testes farmacopicos contidos na Farmacopia Britnica para
poderem ser utilizadas como substncia qumica de referncia. Atravs dos
resultados apresentados pelas Tabelas 4 e 5 pde-se utiliz-las com essa finalidade.
Foram aplicados como teste de identificao a avaliao dos espectros de absoro
no UV, as matrias-primas mostraram resultados condizentes com a literatura.
Foram desenvolvidas as metodologias analticas para a determinao
simultnea de dipirona e papaverina atravs da CLAE e espectrofotometria no UV
com aplicao da calibrao multivariada. A CLAE tambm foi utilizada para a
determinao de dipirona e papaverina em medicamentos que contm estes
frmacos isolados.
118
6.2 Cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE)

Para a realizao dos testes envolvendo a CLAE, foi utilizado um
equipamento mais simples, que no possui sistema gradiente, nem arranjo de
fotodiodos. Com o objetivo de se chegar a condies adequadas e possveis de
serem padronizadas e validadas foram testadas diferentes fases mveis, vrios
comprimentos de onda e algumas colunas cromatogrficas.
As colunas cromatogrficas testadas, so colunas de fase reversa
comumente encontradas em laboratrios qumicos e farmacuticos que fazem
anlise de rotina, no so colunas to caras e podem ser utilizadas para a anlise
de inmeras substncias.
Inicialmente foram testadas diferentes condies cromatogrficas com a
Coluna Merck LiChrospher 100 RP - 8 (125 X 4,6 mm, 5m). Fases mveis
contendo solues tampo foram usadas no intuito de aprimorar condies j
padronizadas e publicadas em artigos cientficos, mas no foram obtidos bons
resultados. A fase mvel que mostrou melhores resultados foi a mistura de gua:
acetonitrila:metanol nas respectivas propores 70:20:10. Misturas de gua com os
solventes acetonitrila e metanol so as de primeira escolha quando se est
padronizando uma metodologia de cromatografia lquida com coluna de fase
reversa. Houve uma variao de pH de 3,0 at 5,5 e ficou constatado que para uma
melhor separao entre a dipirona e a papaverina, o pH deve manter prximo de
3,0. A trietilamina, que provoca um pareamento inico, tirou a cauda que aparecia
nos picos da papaverina. Os cromatogramas que merecem comentrios mais
relevantes podem ser visualizados no captulo de Resultados. Observando-se a
Figura 7 pode se verificar que o uso de tampo de acetato de sdio 0,01 M, pH = 5,5
e deteco no UV a 285 nm, provocou a separao da dipirona em dois picos e a
papaverina ficou retida por quase 19 minutos. J pela Figura 8 observa-se uma
separao da dipirona em dois picos, utilizando-se na fase mvel tampo acetato de
amnio.
Posteriormente foram analisadas diferentes condies cromatogrficas com a
coluna Merck LiChrospher 100 RP - 18 (125 X 4,6 mm,5m). Foram testadas fases
mveis contendo diferentes propores da mistura gua, acetonitrila e metanol, foi
acrescentado tampo fosfato nesta mistura, variou-se o pH de 3,0 at 6,86, a
deteco no UV manteve em 254 nm. Atravs da Figura 7, onde a fase mvel
119
continha mistura de gua e acetonitrila, sem metanol, a dipirona apresentou dois

picos mal definidos, um deles com baixssimo tempo de reteno, provavelmente
prximo do volume morto da coluna. Na Figura 8, pode se verificar que valor de pH
em torno de 6,5, a papaverina permanece retida na coluna, mesmo aps vinte
minutos de corrida.
Foram testadas poucas condies com a coluna Nova Pack C18 (300 x
3,9mm), mas pde-se constatar que colunas de comprimento menor, ou seja,
prximo de 125 mm, no so favorveis para a anlise de dipirona, pois ela se divide
em dois picos. Pela Figura 11, observa-se um bom tempo de reteno para a
dipirona, com um pico bem definido, mas para a papaverina o tempo de reteno foi
muito alto e o pico apresentou-se com cauda, podendo ser pela ausncia de
trietilamina.
Finalmente foi testada uma coluna com tamanho intermedirio, a coluna
cromatogrfica Supelcosil C18 LC - PAH (250 mm X 4,6 mm , 5m) e pr coluna C
18 (20 X 4,6 mm, 5m) e os outros parmetros foram: fase mvel:
gua:acetonitrila:metanol (70:20:10) trietilamina 0,3% e pH: 3,0 ajustado com cido
ortofosfrico; vazo de 0,7 mL/min e detector de UV a 254 nm.
Conseguiu-se, atravs desta coluna a padronizao e a validao da
metodologia analtica para a determinao simultnea da dipirona sdica e cloridrato
de papaverina. A fase mvel j tinha sido ajustada com o uso de outras colunas. A
deteco no UV a 254 nm foi confirmada traando-se os espectros de solues
contendo dipirona sdica e cloridrato de papaverina em fase mvel, separadamente,
por espectrofotometria na regio do UV. Pela observao dos espectros pde-se
confirmar que a deteco em 254 nm para a CLAE a mais adequada, pois os dois
compostos tm picos mximos de absoro nesta regio. Foi possvel uma boa
separao cromatogrfica para os dois frmacos, picos bem definidos, com tempos
de reteno de 2,30 minutos para a dipirona e 8,68 minutos para papaverina,
mostrando a rapidez desta metodologia. Os resultados obtidos pela construo das
curvas analticas, mostraram que a metodologia apresenta linearidade, com valores
de correlao linear r = 0,99881 para a dipirona sdica e de 0,99939 para o
cloridrato de papaverina (Figuras 14 e 15). A especificidade do mtodo pode ser
verificada pela no interferncia dos excipientes (Figura 17). O mtodo apresentou
preciso, com os resultados de desvio padro relativo de 1,01% para a dipirona e
1,16% para a papaverina. A exatido da metodologia pode ser verificada pelos
120
valores do teste de recuperao, mdia de 102,11% para a dipirona e 98,76% para a

papaverina.
Essa metodologia padronizada e validada foi aplicada anlise do
medicamento contendo dipirona sdica isolada. No houve interferncia dos
excipientes, comprovando a especificidade do mtodo (Figura 14). A preciso foi
determinada pelo valor de desvio padro relativo de 0,0708%. A exatido do mtodo
foi verificada pela mdia de recuperao de 100,47%.
Para a determinao de cloridrato de papaverina na forma farmacutica
injetvel, foi padronizada e validada a CLAE com os seguintes parmetros: Coluna
cromatogrfica Merck LiChrospher 100 RP - 18 (125 X 4,6 mm, 5m); vazo: 1,0
mL/min; deteco no UV: 254 nm. O tempo de reteno foi de 4,40 minutos, mais
rpido que o tempo da metodologia por CLAE para a determinao simultnea com
dipirona, tornando essa metodologia mais vantajosa quando o cloridrato de
papaverina for analisado na forma isolada. A metodologia apresentou linearidade
com valor de r = 0, 99917, os excipientes no interferiram no mtodo, comprovando
a especificidade do mtodo, a preciso foi verificada pelo valor de desvio padro
relativo de 0,669% e a exatido pela mdia de recuperao de 99,6%.
6.2 Espectrofotometria no ultravioleta (UV) com aplicao do PLS
Analisando os espectros de absoro no UV de solues de dipirona sdica e

cloridrato de papaverina em metanol (Figuras 20 e 21), separadamente, pde-se
observar que atravs dessa metodologia no seria possvel analisar os dois
frmacos simultaneamente, pois nos picos mximos de cada um, o outro frmaco
tambm absorve. Para possibilitar o uso desta metodologia foi aplicada a calibrao
multivariada, utilizando o mtodo PLS (Partial Least Squares) ou mtodo dos
mnimos quadrados parciais sobre os dados fornecidos pelos espectros de absoro
da mistura dos dois frmacos na faixa de comprimento de onda de 210 a 300 nm,
com intervalo de 0,5 nm. Todos os dados provenientes dos espectros foram tratados
pelo programa MATLAB
TM
, por isso pode-se dizer que foi aplicada a quimiometria
neste trabalho, pois quimiometria uma rea que se refere aplicao de mtodos
estatsticos e matemticos, assim como aqueles baseados em lgica matemtica, a
problemas de origem qumica. A quimiometria e a calibrao multivariada, tm sido
121
usadas por diversos pesquisadores para um melhor aproveitamento de dados

gerados por anlises qumicas e farmacuticas, principalmente em mtodos
espectroscpicos, como a absoro no UV e infravermelho.
Durante a escolha do melhor solvente, foram preparadas solues de dipirona
sdica, cloridrato de papaverina e do placebo (Amostra 6) nos solventes metanol e
cido clordrico 0,1 M. Com o uso do solvente metanol, no houve praticamente
interferncia dos excipientes, sendo este o solvente escolhido.
A validao de metodologias que aplicam a calibrao multivariada est em
fase de estudo, ainda no uma tcnica reconhecida pelos compndios oficiais
como as farmacopias, mas existem inmeras publicaes em peridicos
importantes para a rea qumica e farmacutica, utilizando essa tcnica.
Foi preparado um modelo da calibrao e foram realizadas leituras de 25
solues contendo misturas desses dois frmacos. Os resultados obtidos foram
tratados pelo programa MATLAB TM.
Durante a anlise dos resultados pelo programa MATLAB
TM
, constatou-se
que uma diminuio no intervalo de leitura para 218,5 a 300 nm e a aplicao da

espectrofotometria derivada de primeira ordem sobre os espectros (Figura24),
possibilitou um melhor aproveitamento dos dados e aumentou-se a sensibilidade do
mtodo.
A metodologia foi padronizada e validada. Os valores de correlao linear
foram calculados pelo programa MATLAB
TM
, sendo r = 0,9998 para a dipirona
sdica e r =0,9976 para o cloridrato de papaverina. A especificidade do mtodo foi

confirmada pela ausncia de interferncia dos excipientes (Figura 23). A preciso do
mtodo foi comprovada pelos valores de desvio padro relativo de 1,05% para a
dipirona sdica e 1,55% para o cloridrato de papaverina. A exatido verificada pelas
mdias de recuperao, sendo 95,87% para a dipirona sdica e 95,2 para o
cloridrato de papaverina. Foram calculadas algumas figuras de mrito por este
programa, comprovando a sensibilidade do mtodo (Tabela 24).
122
6.3. Comparao estatstica dos resultados

Os resultados de mdia e preciso das duas metodologias comparadas foram
calculados estatisticamente seguindo diversos autores. (PRADO, M.S.A. et. al.,
2005; FEIGENBAUM, A.V., 1994 e OHLWEILER, O.A., 1976).
Para a comparao das mdias dos valores de teor das amostras e sobre a
preciso chegou-se s seguintes constataes:
sendo t calculado < t tabelado(1,495<2,12) para a dipirona sdica , pode aceitar - se

que as mdias dos dois mtodos so iguais e portanto as mdias dos dois
mtodos( CLAE e Espectrofotometria UV) no apresentam diferena
significativa para a dipirona sdica;
sendo t
calculado
< t
tabelado(1,271<2,12)
para o cloridrato de papaverina, pode
aceitar - se que as mdias dos dois mtodos so iguais e portanto as mdias

dos dois mtodos( CLAE e Espectrofotometria UV) no apresentam diferena
significativa para o cloridrato de papaverina;
como Fcalculado<Ftabelado(1,054<4,43) para a dipirona sdica , pode aceitar - se

que as varincias dos dois mtodos so iguais e portanto os mtodos( CLAE
e Espectrofotometria UV) no apresentam diferena significativa na preciso
para a dipirona sdica;
como Fcalculado<Ftabelado(0,567<4,43) para o cloridrato de papaverina, pode

aceitar - se que as varincias dos dois mtodos so iguais e portanto os
mtodos( CLAE e Espectrofotometria UV) no apresentam diferena
significativa na preciso para o cloridrato de papaverina.
A comparao estatstica dos resultados de exatido obtidos pelo teste de
recuperao foi realizada seguindo dados da literatura. (MILLER, J.C.; MILLER, J.N.,
1993). Usou-se o teste t e verificou-se que:
123
como t
calculado
>t
tabelado(10,59>4,30)
para a dipirona sdica, pode aceitar - se
que as mdias de recuperao dos dois mtodos so diferentes e portanto os

mtodos( CLAE e Espectrofotometria UV) apresentam diferena significativa
na exatido para a dipirona sdica;
como t
calculado
> t
tabelado(6,79>4,30)
para o cloridrato de papaverina, pode
aceitar - se que as mdias de recuperao dos dois mtodos so diferentes e

portanto os mtodos( CLAE e Espectrofotometria UV) apresentam diferena
significativa na exatido para o cloridrato de papaverina.
Pela comparao dos mtodos verifica-se que os dois podem ser usados para
a determinao simultnea de dipirona sdica e cloridrato de papaverina em
formulaes farmacuticas, mas como a calibrao multivariada est em fase de
implantao de sua validao, pode ser necessrio fazer alguns ajustes a este
mtodo. Porm j pode ser considerado um mtodo alternativo para laboratrios que
analisam esses tipos de medicamentos.
124
7. CONCLUSES
A CLAE atravs dos resultados de desvio padro relativo, teor de recuperao,

interferncia dos excipientes e coeficiente de correlao linear apresentou
preciso,
exatido,
especificidade
linearidade
para
determinao
simultnea de dipirona sdica e cloridrato de papaverina na formulao

farmacutica soluo oral (Amostra 1) ;
A Espectrofotometria no UV com a aplicao da calibrao multivariada atravs

dos resultados de desvio padro relativo, teor de recuperao, interferncia dos
excipientes e coeficiente de correlao linear apresentou preciso, exatido,
especificidade e linearidade para a determinao simultnea de dipirona sdica
e cloridrato de papaverina na formulao farmacutica soluo oral (Amostra
1);
Para a determinao de dipirona sdica na formulao farmacutica soluo

oral (Amostra 2) contendo somente este frmaco foi utilizada a CLAE j
padronizada para a determinao simultnea de dipirona sdica e cloridrato de
papaverina, com timos resultados de desvio padro relativo, teor de
recuperao, interferncia dos excipientes, apresentando preciso, exatido e
especificidade;
A CLAE atravs dos resultados de desvio padro relativo, teor de recuperao,

interferncia dos excipientes e coeficiente de correlao linear apresentou
preciso, exatido, especificidade e linearidade para a determinao do
cloridrato de papaverina na formulao farmacutica injetvel (Amostra 3) ;
A comparao estatstica dos mtodos para a determinao simultnea de

dipirona sdica e cloridrato de papaverina pode-se observar que no existe
diferena significativa nas mdias de teores e na preciso, mas h diferena
significativa na exatido para um nvel de significncia de 95%;
125
A calibrao multivariada, atravs da aplicao do PLS foi uma tcnica que

possibilitou
um
maior
aproveitamento
dos
dados
gerados
pela
espectrofotometria no UV para a determinao simultnea de dipirona sdica e

cloridrato de papaverina;
Todos os mtodos propostos podem ser aplicados para a anlise de rotina de

formulaes farmacuticas que contenham dipirona sdica e cloridrato de
papaverina isolados ou em associao.
126
8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS*
ABDEL-GHANI, N.T.; SHOUKRY, A.F.; ISSA, Y.M.; WAHDAN, O.A. Spectrophotometric

determination of meclozine HCl and papaverine HCl in their pharmaceutical
formulations. J. Pharm. Biomed. Anal., Amsterdam, v.28, p.373-378, 2002.
ABDOU, H.; HANNA, S.; MUHAMMAD, N. Mtodos instrumentais de anlise. In:

REMINGTON: a cincia e a prtica da farmcia. 20.ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 2004. cap.34, p.633-673.
ABOUNASSIF, M.A.; GAD-KAREIM, E.A.; WAHBI, A.M. High-performance liquid

chromatography. Farmaco, Paris, v.45, n.4, p.465-472, 1990.
ABURJAI, T.; AMRO, B.I.; AIEDEH, K.; ABUIRJEIE, M.; AL-KHALIL, S. Second
derivative
ultraviolet
spectrophotometry
and
HPTLC
for
the
simultaneous
determination of vitamin C and dipyrone. Pharmazie, Eschborn, v.55, n.10, p.751752, 2000.
ALTUN, M.L. HPLC method for the analysis of paracetamol, caffeine and dypirone. Turk.
J. Chem., Ankara, v.26, p.521-528, 2002.
*As referncias bibliogrficas esto de acordo com a norma NBR6023/2000 preconizada

pela Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT), e as abreviaturas dos
ttulos dos peridicos seguem o Chemical Abstracts Service Source Index (CASSI)
2004.
127
ALVES, D.; DUARTE, I. Involvement of ATP-sensitive K(+) channels in the peripheral

antinociceptive effect induced by dipyrone. Eur. J. Clin. Pharmacol., Heidelberg,
v.444, p.47-52, 2002.
ANDRADE, M.P Aspectos atuais do uso da dipirona no tratamento da dor. Prt. Hosp.,
So
Paulo,
v.7,
n.40,
2005.
Disponvel
em:
http://www.praticahospitalar.com.br/pratica%2040/pgs/materia%2022-40.html.
Acesso em: 01 out. 2005.
ASMARDI, G.; JAMALI, F. High-performance liquid chromatography of dipyrone and its

active metabolite in biological fluids. J. Chromatogr., Amsterdam, v.277, p.183-189,
1983.
AYYANGAR, N.R.; BHIDE, S.R. Separation of eight alkaloids and meconic acid and
quantitation of five principal alkaloids in gum opium by gradient reversed-phase highperformance liquid chromatography. J. Chromatogr., Amsterdam, v.436, p.455-465,
1988.
BENSENOR, I.M. To use or not use dipyrone? Or maybe, Central Station versus ER?
That is the question. So Paulo Med. J., So Paulo, v.119, p.190-191, 2001.
BERLIN, C. Are we losing good drugs? Clin. Pediatr., Hagerstown, v.40, p.325-326,
2001.
128
BIGAL, M.E.; BORDINI, C.A.; SPECIALI, J.G. Intravenous dipyrone for the acute
treatment of episodic tension-type headache: a randomized, placebo-controlled,
double-blind study. Braz. J. Med. Biol. Res., Ribeiro Preto, v.35, n.10, p.11391145, 2002.
BJORNSDOTTIR, I., HANSEN, S.H. Determination of opium alkaloids in crude opium

using non-aqueous capillary electrophoresis. J. Pharm. Biomed. Anal., Amsterdam,
v.13, p.1473-1481, 1995.
BOBERIC BOROJEVIC, D.; RADULOVIC, D.; IVANOVIC, D.; RISTIC, P. Simultaneous

assay of ephedrine hydrochloride, theophylline, papaverine hydrochloride and
hydroxyzine hydrochloride in tablets using RP-LC. J. Pharm. Biomed. Anal.,
Amsterdam, v.21, n.1, p.15-22, 1999.
BRAGA, J.W.B.; POPPI, R.J. Validao de modelos de calibrao multivariada: uma

aplicao
na
determinao
de
pureza
polimrfica de carbamazepina por
espectroscopia no infravermelho prximo. Qum. Nova, So Paulo, v.27, n.6,

p.1004-1011, 2004.
BRASIL. Ministrio da Sade. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. reas de

Atuao. Medicamentos. Relao Nacional de medicamentos essenciais. Disponvel
em: http://www.anvisa.gov.br/medicamentos/essencial.htm. Acesso em: 27 ago.
2005.
BRERETON, R.G. Introduction to multivariate calibration in analytical chemistry.

Analyst, Cambridge, v.125, p.2125, 2000.
129
BRITISH Pharmacopeia. London: Her Majestys Stationary Office, 2002. v.1, 2, 2623 p.
BUCHALLA, A.P.; POLES, C. Os avanos da cincia no combate dor crnica, mal que
aflige
seis
em
cada
dez
brasileiros.
Disponvel
em:
http://www.vejaonline.abril.uol.com.br. Acesso em: 06 fev. 2002.
BUDVARI-BARANY, Z.; SZSZ, G.; GYIMESI-FORRS, K. Optimized and validated

hplc methods for compendial quality assessment. II. Opium alkaloids. J. Liq.
Chromatogr. Relat. Technol., Philadelphia, v.20, n.19, p.3257-3268, 1997.
CAMU, F.; VANLERSBERGHE, C. Pharmacology of systemic analgesics. Best Pract.

Res., Clin. Anaesthesiol., Amsterdam, v.16, n.4, p.475-488, 2002.
CARDOSO, T.F.M.; KANIS, L.A.; SILVA, W.B.; GALATO, D. Doseamento da dipirona

por espectroscopia de ultravioleta em diferentes solventes. In: REUNI ANUAL DA
SOCIEDADE BRASILEIRA DE QUMICA, 23, Poos de Caldas, 2000. Livro de
resumos. Poos de Caldas: Sociedade Brasileira de Qumica, 2000. res.QA084.
CASS, Q.B.; DEGANI, A.L.G. Desenvolvimento de mtodos por HPLC: fundamentos,

estratgias e validao. So Carlos: EdUFSCar, 2001. 77p. (Apontamentos).
CIOLA, R. Fundamentos da cromatografia a lquido de alto desempenho: HPLC.

So Paulo: Edgard Blcher, 1998. 179p.
130
CHIVANOV, V.D.; EREMENKO, I.A.; AKSENOV, S.A.; GREBENIK, L.I. EREMENKO,

V.I.; KALINICHENKO, T.G.; TATARINOVA, V.I.; ZDOIMA, N.G.; SKLYAROVA, Z.V.,
KURAEV, V.V.; KNYSH, A.N.; MISHNEV, A.K. Rapid method dor detecting
papaverine in biological fluids by plasma desorption mass spectrometry with
ionization by
252
Cf fission fragments. Anal. Chem., Columbus, v.52, n.9, p.902-905,
1997.
CLARKE, E.C.G. Clarkes isolation and identification of drugs in pharmaceutical

body fluids and post-mortem material. 2.ed. London: Pharmaceutical Press, 1986.
p.563.
DEF 2003/2004: dicionrio de especialidades farmacuticas. 32.ed. Rio de Janeiro:

EPUC, 2004. p.120, 252, 740.
DEF 2005/2006: dicionrio de especialidades farmacuticas. 34.ed. Rio de Janeiro:

EPUC, 2006. p.37, 106, 120.
DIN, E.; BALEANU, D.; ONUR, F. Spectrophotometric multicomponent analysis of

mixture of metamizol, acetaminophen and caffeine in pharmaceutical formulations by
two chemometrics techniques. J. Pharm. Biomed. Anal., Amsterdam, v.26, n.5,
p.949-957, 2001.
DIN, E.; ONUR, F. Application of a new spectrophotometric method for the analysis of a
ternary mixture containing metamizol, paracetamol and caffeine in tablets. Anal.
Chim. Acta, Amsterdam, v.359, p.93-106, 1998.
131
DOGAN, H.N. Simultaneous determination of acetaminophen, dipyrone and caffeine in

pharmaceutical preparations by the absorbance ratio technique. Pharmazie,
Eschborn, v.51, n.10, p.773-774, 1996.
EDDINE, N.H.; BRESSOLE, F.; MANDROU, B.; FABRE, H. Stability indicating assay for
dipyrone. Part II. Separation and quantitative determination of dipyrone and its
degradation
products
by
high-performance
liquid
chromatography.
Analyst,
Cambridge, v.107, p.67-70, 1982.
EDWARDS, J.E.; MCQUAY, H.J. Dypirone and agranulocytosis. Lancet, London, v.360,
p.1438, 2002. [Letter].
EL-GINDY, A.
HPLC and chemometric assisted spectrophotometric methods for
simultaneous determination of diprophylline, phenobarbitone and papaverine

hydrochloride. Farmaco, Paris, v.60, n.9, p.745-753, 2005.
ERGN, H.; FRATARELLI, D.A.C.; ARANDA, J.V. Characterization of the role of

physicochemical factors on the hydrolysis of dypirone. J. Pharm. Biomed. Anal.,
Amsterdam, v.35, p.479487, 2004.
ERK, N.; ONUR, F. Simultaneous determination of analgine and paracetamol in tablets

by spectrophotometric methods. Anal. Lett., Philadelphia, v.30, n.6, p.1201-1210,
1997.
132
FABRE, H.; EDDINE, N.H.; BRESSOLE, F.; MANDROU, B. Stability indicating assay for
dipyrone. Part I. Separation and quantitative determination of dipyrone and its
degradation products by thin-layer chromatography. Analyst, Cambridge, v.107,
p.61-66, 1982.
FARMACOPEIA Brasileira. 3.ed. So Paulo: Organizao Andrei, 1977. p.315317, 406-408.
FEIGENBAUM, A.V. Controle de qualidade total: mtodos estatsticos aplicados

qualidade. So Paulo: Makron Books, 1994. p.288-289.
GARCIA-ALONSO, F.; GONZALES DES SUSO, M.J.; LOPEZ-ALVAREZ, M.; PALOP,

R.; LUCENA, M.I.; MARIN, R. Comparative study of the efficacy of dipyrone,
diclofenac sodium and pethidine in acute renal colic. Eur. J. Clin. Pharmacol.,
Heidelberg, v.40, p.543-546, 1991.
GAUTAM, S.R.; NAHUM, A.; BAECHLER, J.; BOURNE, D.W.A. Determination of

papaverine in plasma and urine by high-performance liquid chromatography. J.
Chromatogr., Amsterdam, v.182, n.3/4, p.482-486,1980. [Note].
GAZETA
Mercantil.
Dipirona:
analgsico
mais
vendido.
Disponvel
em:
http://www.gazetamercantil.com.br/22/05/2001. Acesso em: 12 maio 2003.
GOLKIEWICZ, W.; KUCZYNSKI, J.; MARKOWSKI, W.; JUSIAK, L. High-performance

liquid chromatography of some alkaloids on unmodified silica gel with aqueousorganic solvent mixtures. J. Chromatogr., A, Amsterdam, v.686, n.1, p.85-91, 1994.
133
GIRRESER, U.; HERMANN, T.W.; PIOTROWSKA, K. Oxidation and degradation

products of papaverine. Part II [1]: Investigations on the photochemical degradation
of papaverine solutions. Arch. Pharm., Weinheim, v.336, n.9, p.401-405, 2003.
HABASHY, G.M.; FARID, N.A. Thin-layer chromatographic method for separation and
determination of papaverine and its oxidation products. Talanta, Amsterdam, v.20,
p.699-702, 1973.
HOOGEWIJS, G.; MICHOTTE, Y.; LAMBRECHT, J.; MASSART, D.L. High-performance

liquid chromatographic determination of papaverine in whole-blood. J. Chromatogr.,
Amsterdam, v.226, n.2, p.423-430, 1981.
IBANEZ, L.; VIDAL, X.; BALLARIN, E.; LAPORTE, J.R. Agranulocytosis associated with
dipyrone (metamizol). Eur. J. Clin. Pharmacol., Heidelberg, v.60, n.11, p.821-829,
2005.
IZOLANI, A.O.; MORAES, M.T.; TLLEZ, C.A. Fourier transform Raman spectroscopy of
drugs:
quantitative
analysis
of
1-phenyl-2,3-dimethyl-5-pyrazolone-4-
methylaminomethane sodium sulfonate: (dipyrone). J. Raman Spectrosc., Bognor

Regis, v.34, p.837-843, 2003.
KATZ, E.Z.; GRANIT, L.; DRAYER, D.E.; LEVY, M. Simultaneous determination of

dipyrone metabolites in plasma by high-performance liquid chromatography.
J.Chromatogr., Amsterdam, v.305, n.2, p.477-484, 1984. [Note].
134
KESSELRING,
G.L.
Antipyretic
effects
of
dipyrone
versus
ibuprofen
versus
acetaminophen in children: results of a multinational, randomized, modified double

blind study. Clin. Pediatr., Hagerstown, v.40, p.313-324, 2001.
KOROLKOVAS, A.; BURCKHALTER, J.H. Qumica farmacutica. Rio de Janeiro:

Guanabara Koogan, 1988. p.181, 182, 193, 302, 303, 309, 399.
KOROLKOVAS, A.; FRANA, F.F.A.C. Dicionrio teraputico Guanabara. Rio de

Janeiro: Guanabara Koogan, 2002. p.1.24-1,40; 6.5.
LAU, O.-W.; MOK, C.-S. High-performance liquid chromatographic determination of

active ingredients in cough-cold syrups with indirect conductometric detection. J.
Chromatogr., A, Amsterdam, v.693, p.45-54, 1995.
LEVY, M.; FLUSSER, D.; ZYLBER-KATZ, E.; GRANIT, L. Plasma kinetics of dipyrone
metabolites in rapid and slow acetylators. Eur. J. Clin. Pharmacol., Heidelberg,
v.27, n.4, p.453-458, 1984.
LINDBERG, W.; JOHANSSON, E.; JOHANSSON, K. Application of statistical

optimization methods to the separation of morphine, codeine, noscapine and
papaverine
in
reversed-phase
ion-pair
chromatography.
J.
Chromatogr.,
Amsterdam, v.211, p.201-212, 1981.
LIMA, J.L.F.C.; S, S.M.O.; SANTOS, J.L.M.; ZAGATTO, E.A.G. Multi-pumping flow

system for the spectrophotometric determination of dipyrone in pharmaceutical
preparations. J. Pharm. Biomed. Anal., Amsterdam, v.32, p.1011-1017, 2003.
135
LIU, H.M.; TU, Y.K. The efficacy of papaverine administration by different routes for the
treatment of experimental acute cerebral vasospasm. J. Clin. Neurosci.,
Amsterdam, v.9, n.5, p.561-565, 2002.
LORENZETTI, B.B.; FERREIRA, S.H. Activation of the arginine-nitric oxide pathway in

primary sensory neurones contributes to dipyrone-induced spinal and peripheral
analgesia. Inflammation Res., Heidelberg, v.45, p.308-311, 1996.
LORENZETTI, B.B.; FERREIRA, S.H. Mode of analgesic action of dipyrone: direct

antagonism of inflammatory hyperalgesia. Eur. J. Pharmacol., Amsterdam, v.114,
p.375-381, 1985.
MAJLAT,
P.;
HELBOE,
P.;
KRISTENSEN,
A.K.
Separation
and
quantitative
determination of homatropine methylbromide and opium alkaloids in admixture in

pharmaceutical
preparations
by
gas-liquid
and
high-performance
liquid
chromatography. Int. J. Pharm., Amsterdam, v.9, p.245-255, 1981.
MARQUEZ, J.O. Dor diagnostico e tratamento. v.1. Disponvel em: http://www.dor.org.br.

Acesso em: 07 set. 2005.
MAURICH, V.; MONEGHINI, M. Sepazione hplc della papaverina cloridrato dai suoi
prodotti di degradazione papaveraldina e papaverinolo: determinazione quantitativa
em fiale e granuli. Boll. Chim. Farm., Milan, v.122, p.322-329, 1983.
136
MILLER, J.C.; MILLER, J.N. Estadistica para qumica analtica. 2.ed. Delaware:
Addison-Wesley Iberoamerican, 1993. 211p.
MIRZAEVA, K.A.; AKHMEDOVA, M.S.; RAMAZANOV, A.S.; AKHMEDOV, S.A.

Extraction-photometric determination of dimedrol and papaverine in pharmaceutical
dosage forms. Anal. Chem., Columbus, v.59, n.3, p.215-218, 2004.
MORELLI, B. Determination of binary mixtures of analgesic and spasmolytic drugs in

pure and dosage forms by derivative spectrophotometry. J. Pharm. Biomed. Anal.,
Amsterdam, v.33, p.423-433, 2003.
MOUSSA,
A.F.A.
Spectrophotometric
determination
of
papaverine
in
some
pharmaceutical preparations containing noramidopyrine methansulfonate sodium.

Pharmazie, Eschborn, v.33, n.7, p.46-461,1978.
MUOZ, R.A.A.; MATOS, R.C.; AGNES, L. Amperometric determination of dipyrone in

pharmaceutical formulations with a flow cell containing gold electrodes from
recordable compact discs. J. Pharm. Sci., Hoboken, v.90, n.12, p.1972-1977, 2001.
NEUGEBAUER, V.; SCHAIBLE, H.G.; HE, X.; LCKE, T.; GNDLING, P.; SCHMIDT,
R.F. Electrophysiological evidence for a spinal antinociceptive action of dipyrone.
Agents Actions, Basel, v.41, p.62-70, 1994.
OHLWEILER, O.A. Qumica analtica quantitativa. 2.ed. Rio de Janeiro: Livros

Tcnicos e Cientficos, 1976. v.1, p.346-358.
137
POSSO, I.; ABRAMOF, S.; CRISCUOLO, D. Comparative double-blind randomized

study of the analgesic effect of three doses of dipyrone upon pain following
abdominal surgery. In: WORLD CONGRESS ON PAIN, 8, Vancouver, 1996.
Abstracts. Seattle: IASP Press, 1996. p.261.
PRADO, M.S.A.; STEPPE, M.; TAVARES, M.F.M.; KEDOR-HACKMAN, E.R.M.;

SANTORO, M.I.R.M. Comparison of capillary electrophoresis and reserved-phase
liquid
chromatography
methodologies
for
determination
of
diazepam
in
pharmaceutical tablets. J. Pharm. Biomed. Anal., v.37, n.2, p.273-279, 2005.
QUERSHI, S.Z.; SAEED, A.; HASAN, T. Spectrophotometric determination of novalgin in

tablets by use of potassium iodate. Talanta, Amsterdam, v.36, n.8, p.869-871, 1989.
QUIMICA vs dor. In: UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA. Informaes.

Rev.
Eletrn.
QMCWEB,
ano.5.
Disponvel
em:
http://quark.qmc.ufsc.br/qmcweb/artigos/dor/index.html. Acesso em: 22 abr. 2005.
RIBANI, M.; BOTTOLI, C.B.G.; COLINS, C.H.; JARDIM, I.C.S.F.; MELO, L.F.C.
Validao de mtodos cromatogrficos e eletroforticos. Qum. Nova, So Paulo,
v.27, n.5, p.771-780, 2004.
RODRIGUEZ, M.; BARUTELL, C.; RULL, M.; GALVEZ, R.; PALLARES, J.; VIDAL, F.;
ALIAGA, L. Efficacy and tolerance of oral dipyrone versus oral morphine for cancer
pain. Eur. J. Cancer, Amsterdam, v.30A, p.584-587, 1994.
138
ROHDEWALD, P.; DREHSEN, G.; MILSMANN, E.; DERENDORF, H. Relationship

between saliva levels of metamizol metabolites, bioavailability and analgesic efficacy.
Arzneim. Forsch., Aulendorf, v.33, n.7, p.985-988, 1983.
SACHS, D; CUNHA, F.Q.; FERREIRA, S.H. Peripheral analgesic blockade of

hypernociception: activation of arginine/NO/cGMP/protein kinase G/ATP-sensitive K+
channel pathway. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., Washington, v.101, n.10, p.36803685, 2004.
SAKIARA,
K.A.;
PEZZA,
L.;
MELIOS,
C.B.;
PEZZA,
H.R.;
MORAES,
M.
Spectrophotometric determination of dipyrone in pharmaceutical preparations by

using chromotropic acid. Farmaco, Paris, v.54, p.629-635, 1999.
SCHUG, S.A.; ZECH, D.; DRR, U. Cancer pain management according to WHO
analgesic guidelines. J. Pain Symptom Manage., New York, v.5, n.1, p.27-32, 1990.
SENA, M.M. Aplicao de mtodos quimiomtricos de primeira e segunda ordem

na determinao direta de frmacos por espectroscopia molecular. Campinas,
2004. 122p. Dissertao de Mestrado Instituto de Qumica Universidade Estadual
de Campinas.
SENYUVA, H.Z.; AKSAHIN, I.; OZCAN, S.; KABASAKAL, B.V. Rapid simple and
accurate liquid chromatography-diode array detection validated method for the
determination of dipyrone in solid and liquid dosage forms. Anal. Chim. Acta,
Amsterdam, v.547, p.73-77, 2005.
139
SHAPIRO. Risks of agranulocytosis and aplastic anemia: a first report of their relation to
drug use with special reference to analgesics. JAMA, J. Am. Med. Assoc., Chicago,
v.256, n.13, p.1749-1757, 1986.
SHESTEROVA, I.P.; KARIBYAN, E.E.; TURAEVA, S.Sh.; PENZINA, M.M. Ionometric

determination of alkaloids. Chem. Nat. Compd., Norwell, v.31, n.1, p.175-177, 1995.
SILVA, P. Farmacologia. 6.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2002. p.142, 433453, 695-697.
SINGH, D.V.; PRAJAPATI, S.; BAJPAI, S.; VERMA, R.K.; GUPTA, M.M.; KUMAR, S.
Simultaneous determination of important alkaloids in Papaver somniferum using
reversed phase high performance liquid chromatography. J. Liq. Chromatogr. Relat.
Technol., Philadelphia, v.23, n.11, p.1757-1764, 2000.
SOCIEDADE BRASILEIRA PARA O ESTUDO DA DOR. DOR Informaes Gerais.

Classificao.
DOR
Classificao.
Disponvel
em:
http://www.dor.org.br/dor_classificacao.asp. Acesso em: 07 set. 2005.
SPACEK, A.; GORAJ, E.; NEIGER, F.X.; JAROSZ, J.; KRESS, H.G. Superior
postoperative analgesic efficacy of a continuous infusion of tramadol and dipyrone
(metamizol) versus tramadol alone. Acute Pain, Amsterdam, v.5, p.3-9, 2003.
SPIGSET, O.; HAGG, S. Analgesics and breast-feeding: safety considerations. Paediatr.

Drugs, Auckland, v.2, p.223-238, 2000.
140
STANKOW, G.; SCHMIEDER, G.; LECHNER, F.J.; SCHINZEL, S. Observer-blind

multicentre study with dipyrone versus tramadol in postoperative pain. Eur. J. Pain,
Amsterdam, v.16, p.56-63, 1995.
SKOOG, D.A.; HOLLER, F.J.; NIEMAN, T.A. Princpios de anlise instrumental. 5.ed.
So Paulo: Bookman, 2002. p.276.
TEIXEIRA, M.J. Dor. In: SOCIEDADE BRASILEIRA PARA ESTUDO DA DOR. Dor
Informaes Gerais. Disponvel em: http://www.dor.org.br. Acesso em: 07 set.
2005.
TEMPEL, G.; VON HUNDELSHAUSEN, B.; REE-KER, W. The opiate-sparing effect of

dipyrone in postoperative pain therapy with morphine using a patient-controlled
analgesic system. Intensive Care Med., Berlin, v.22, p.1043-1047, 1996.
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS. Instituto de Qumica. Laboratrio de

Quimiometria em Qumica Analtica. Pesquisa. 1. Anlise Multivariada: Anlise
Exploratria
de
Dados:
Calibrao
Multivariada.
Mtodos
de
calibrao
multivariada. Disponvel em: http://laqqa.iqm.unicamp.br/calmuthpg.htm. Acesso

em: 01 out. 2005.
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS. Instituto de Qumica. Laboratrio de

Quimioterapia
em
Qumica
Analtica.
Quimiometria.
http://laqqa.iqm.unicamp.br/. Acesso em: 01 out. 2005.
Disponvel
em:
141
VAN TULDER, M.; KOES, B. Low back pain and sciatica. Clin. Evid., London, v.6.
Disponvel em: http://www.clinicalevidenceonline.com. Acesso em: 12 dez. 2001.
VAZQUEZ, E.; HERNANDEZ, N.; ESCOBAR, W.; VANEGAS, H. Antinociception

induced by intravenous dipyrone (metamizol) upon dorsal horn neurons: Involvement
of endogenous opioids at the periaqueductal gray matter, the nucleus raphe magnus,
and the spinal cord in rats. Brain Res., Amsterdam, v.1048, p.211-217, 2005.
VOGEL, A.I.; Anlise qumica quantitativa / Arthur I. Vogel; reviso de J. Mendham et al.;
traduo de Julio Carlos Afonso et al.
6.ed. Rio de Janeiro: Livros Tcnicos e
Cientficos, 2002. p.351-354.
WEITHMANN, K.U.; ALPERMANN, H.G. Biochemical and pharmacological effects of

dipyrone and its metabolites in model systems related to arachidonic acid cascade.
Arzneim. Forsch., Aulendorf, v.35-1, n.6, p.947-952, 1985.
YAN, J.; MI, J.Q.;HE, J.-T.; GUO, Z.-Q.; ZHAO, M.-P.; CHANG, W.-B. Development of
an indirect competitive ELISA for the determination of papaverine. Talanta,
Amsterdam, v.66, p.1005-1011, 2005.

TESE Andreia Peraro Nascimento

Загружено:

Сведения о документе

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

TESE Andreia Peraro Nascimento

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

UNIVERSIDADE DE SO PAULO

FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS

Desenvolvimento e validao de metodologia para medicamentos

Andria Peraro do Nascimento

Tese para obteno do grau de

Ficha Catalogr fica

Nascimento, Andria Peraro do

Andria Peraro do Nascimento

Profa. Dra. Erika Rosa Maria Kedor-Hackmann

Profa. Dra. Magali Benjamim de Arajo

Profa. Dra. Maria Palmira Daflon Gremio

Profa. Dra. Veni Maria Andres Felli

Profa. Dra. Maria Ins Rocha Miritello Santoro

So Paulo, 31 de janeiro de 2006.

A glria no consiste em jamais cair, mas sim de erguer-se

Aos meus pais Ademar Peraro e Durvalina Cricco Peraro pela

Ao meu irmo Luciano Cricco Peraro e Maria Helena pelo

Ao meu marido Lafaiete Marcos pela sua

professora Erika Rosa Maria Kedor-Hackmann, pela

Coordenadoria do Programa de Ps-Graduao em Frmaco e Medicamentos do

Ao prof Dr Anil Kumar Singh, pela amizade, incentivo e sugestes.

Ao amigo Marcello Garcia Trevisan do Instituto de Qumica da Unicamp, pelos

Ao Prof. Dr Ronei Jesus Poppi do Instituto de Qumica da Unicamp, pelo uso do

Ao Prof Dr Martin Steppe, pelas amostras de Dipaverina.

Ao Coordenador do curso de Farmcia do Centro Universitrio de Lavras-Unilavras

Ao amigo Dr. Matheus Puggina de Freitas, pela preciosa sugesto.

Ao amigo Diogo Teixeira Carvalho, pelas correes e incentivo.

Aos colegas do Laboratrio de Controle de Qualidade Fsico-Qumico Tatiana de

funcionria Iria Raimunda da Silva pelo carinho, compreenso e colaborao.

Ktia Botelho, pela amizade e colaborao.

Eliane Silva de Sousa, bibliotecria do Centro Universitrio de Lavras-Unilavras,

Ao prof Dr Jorge Seferin Martins pelo apoio.

s funcionrias Raquel e Regina Maura Rojas, pela colaborao.

Elizabete C. S. Paiva, secretria do Programa de Ps-Graduao em Frmaco e

Aos funcionrios da Secretaria de Ps-Graduao da Faculdade de Cincias

Fundao de apoio para o remdio popular Furp, pelo fornecimento de matriasprimas.

Indstria Cristlia Produtos Qumicos e Farmacuticos pelo fornecimento de

A todos que direta e indiretamente colaboraram pela realizao deste trabalho.

A dipirona sdica em associao com o cloridrato de papaverina usada

espectrofotometria na regio do ultravioleta (UV) e calibrao multivariada. Neste

Dipyrone sodium and papaverine hydrochloride are used as an analgesic and

hydrochloride in pharmaceutical preparations.

5.3.4 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes para a Amostra 2

A dor , em geral, um grande aliado do ser humano, um indicador de que

De acordo com dados aceitos e divulgados por diversas entidades mdicas

Os dados referentes incidncia da dor crnica, aquela cuja durao igual ou

O aumento dos casos de dor registrados em todo o mundo, especialmente os de

longevidade dos indivduos, prolongamento da sobrevida de pessoas com males

As dores que mais atingem a populao so a cefalia, quase 30 % dos

A lombalgia, tradicional dor nas costas, vitima cerca de 20 % da populao.

Outras causas de dor crnica so a artrose (desgaste da cartilagem de uma

Dentre os 5 frmacos mais vendidos em todo o mundo, 4 so analgsicos: a dor

A produo de analgsicos e antiinflamatrios o ramo que mais cresce em toda

A dipirona , em verdade, o principal analgsico da teraputica brasileira, com

Farmacuticos), entre outros (DEF, 2004; DEF, 2005).

H tambm outras associaes entre analgsicos, por exemplo: dipirona sdica e

Nos compndios oficiais no constam monografias de medicamentos analgsicos

A cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) um dos mtodos analticos

Alguns laboratrios de pesquisas tm procurado tcnicas alternativas quando no

Um grande avano nas tcnicas instrumentais analticas foi impulsionado pela

mais complexas do ponto de vista matemtico e estatstico, surgindo uma nova

A quimiometria (do ingls chemometrics) descreve as tcnicas e operaes

A espectroscopia molecular tem sido a rea da qumica analtica, onde mais a

Para a determinao direta de frmacos tem sido aplicada a combinao de