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Fecha de emisin:

07.04.2015

Microbiologa Bsica

INSTRUCTIVO DE
RECOLECCION Y
RECUPERACION DE LAS
CEPAS ATCC

Revision: 0
Revision: Abril 2015
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INSTRUCTIVO DE
RECOLECCION Y
RECUPERACION DE LAS
CEPAS ATCC
Universidad Santo Toms Sede La Serena
Escuela de Tecnologa Mdica
Microbiologa Bsica

Elaborado por

Aprobado por

Firma
Nombre

Francisca Arcos Vergara

Cargo
Fecha

Francisca Arcos Vergara

07.04.2015

Microbiologa Bsica

07 de abril de 2015

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07.04.2015

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1. LAS CEPAS ATCC


Son microorganismos certificados por la American Type Culture Collection. Rockville, EU, los que
suministran un cultivo puro de microorganismo y del cual garantizan que se cuentan con unas
caractersticas especificas que han sido comprobadas por pruebas morfolgicas, bioqumicas y
moleculares. Estas se utilizan para el anlisis de medios de cultivo, cepas, kits y reactivos de
diagnostico, en el mantenimiento de cultivos y en la evaluacin de procedimientos bacteriolgicos.

2. Materiales, Reactivos y Equipos


2.1 Materiales de laboratorio.
Criotubos de 2mL
Cajas para criotubos
Torulas estriles
Portaobjetos
Pipetas Pasteur o jeringas.

2.2 Reactivos.
Asas de siembra desechables (Culti-Loops)
Medios de cultivo (agar sangre).
Caldo de triptona de soja o de tioglicolato.
Caldo glicerol 20%.
Kit de tincin Gram.
Suero Fisiolgico.

2.3 Equipos

Freezer a -70C/ -20C.


Refrigerador.
Estufa a 36C.
Microscopio.

3. Desarrollo
3.1 RECOLECCION
Las asas de siembra desechables (Culti-Loops) derivan de American Type Culture Collection
(ATCC) u otras fuentes de referencia. Culti-Loops se fabrican en una planta certificada ISOutilizando una tcnica de preservacin de propiedad, garantizando la recuperacin mejorada y
reproducibilidad.
Francisca Arcos Vergara

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3.2 RECUPERACION asas de siembras desechables (Culti-Loops)


La pelcula de las asas se ha fabricado con una formulacin de gelatina secada mediante un
procedimiento especial. Para volver a hidratar la pelcula, las asas deben entrar en contacto tanto
con el calor como con la humedad.
Para elegir el medio en el cual se sembrara la cepa ATCC se debe tener en cuenta que si se elige
un medio selectivo puede dar lugar a un crecimiento de las colonias lento o inexistente. Por tanto
se recomienda elegir un medio no selectivo como lo es el de agar sangre o tambin como lo son
los caldos de triptona de soja, caldo de tioglicolato.

3.2.1 PROCEDIMIENTO

Retire el envoltorio del asa.

Corte el eje del asa del mango con unas tijeras esterilizadas e introdzcalos en un tubo con
unos 0.5 o 1 mL de medio liquido. Ya sea caldo de triptona de soja, un caldo de tioglicolato

Introduzca el tubo a la incubadora a 36C durante el tiempo suficiente para que la pelcula
se disuelva completamente fuera del asa. Agite el tubo con suavidad para suspender el organismo.

Con una pipeta Pasteur, siembre por agotamiento en placas de agar sangre con varias gotas.

Incube las placas a 36C por 18- 24hrs.

Revisar crecimiento y pureza de las colonias.

Una vez realizada la recuperacin de las cepas ATCC en el caldo, luego el paso a la placa de agar
sangre con una previa incubacin de all se tomaran semillas de colonias que estarn aisladas con un
asa previamente esterilizada o torula estril tomar de forma abundante y aplicar en los criotubos que
contienen 0,5 a 1mL de glicerol al 20% o Suero Fisiolgico. El criotubo se tapa y se agita
fuertemente para emulsionar bien el crioprotector con la suspensin. Luego con una pipeta o jeringa
se aspira el exceso de lquido, procurando dejar las perlas casi secas. Es importante que las cuentas
se peguen lo menos posible unas a otras.
Cada vial se debe etiquetar y guardar congelado idealmente a -70C (con duracin indefinida) o a
20C (con duracin de 1 ao).
Marcar los tubos con:

Nombre de la cepa.

Nombre de coleccin de origen.

Numero de la cepa.

Guardar en caja y mantener en Freezer a -20C. Registrar.

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3.3 Mantencin de las cepas ATCC para realizar controles

Recuperar uno de los viales congelados y tomar solo una de las perlas que se deposita en
la placa de agar sangre y con ayuda de un asa esterilizada anteriormente rodar hasta que
se descongele completamente y luego esto se incuba por 24.48hrs, volver a congelar el
criotubo rpidamente y nunca volver a congelar una perla una vez descongelada.
Tener cuidado de no descongelar el criotubo ya que las cepas perdern viabilidad.
Los subcultivos pueden mantenerse de 1 a 2 semanas para realizar los controles
correspondientes, indicando el nombre de la cepa y fecha de traspaso. Luego de este
periodo hacer traspaso nuevamente para obtener cultivo fresco.
No se deben realizar ms de 4 subcultivos de estos traspasos, para que la cepa no pierda
sus caractersticas.
Cuando se tengan los 4 subcultivos es necesario volver a sembrar desde las copias
congeladas en los Criotubos.
4. CONTROL DE CALIDAD
Objetivo: Mantener la recoleccin y recuperacin de las cepas controles en condiciones
optimas para utilizarlas como material de referencia.
Este control se realizara cada dos semanas, para evaluar la viabilidad y confiabilidad de las cepas
ATCC cada vez que se realice un subcultivo.
Si la siembra en el agar sangre crece, forma colonias, esto es un signo de que la cepa
sigue viable.
Realizar tincin de Gram a las distintas cepas ATCC evaluando su resultado si coincide con
los conocidos. As se podr evaluar si las cepas a controlar no han cambiado su viabilidad y
caractersticas generales.
Cepa

Tipo y numero de
coleccin

Enterococcus
ATCC 29212
faecalis
Staphylococcus
ATCC 25923
aureus

Resultado esperado (Gram)


Cocacea grampositivo en diplococos o en cadena
Cocacea grampositivo en racimo

Positivo (+); negativo (-).


Resultados esperados luego de aplicar la tincin gram con una
previa incubacin de la cepa en agar sangre por 24hrs. a 36C

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4.1 INDICADORES
Cantidad de cepas ATCC que no formo colonias en las placas de agar sangre en
relacin al total de las cepas que si formaron.
Rango: 1 a cepa que no formo colonias en placa de agar sangre.
Valor optimo: 0 cepa que no forma colonias en placa de agar
sangre. Valor aceptable: 1 cepa que no formo colonias en placa de
agar sangre. Valor crtico: 2 cepas que no forman colonias en placas
de agar sangre.
Porcentaje de las cepas que dieron cocaceas grampositivo sobre el total de las
cepas a las cuales se les aplico la tincin.
Rango: 1% a 100% de cepas que dieron cocaceas grampositivos en tincin gram
Valor ptimo: 100% de las cepas que dieron cocaceas grampositivos en tincin
gram. Valor aceptable: 99% de las cepas que dieron cocaceas grampositivo en
tincin gram. Valor crtico: 98% de las cepas dieron cocaceas gram positivas en
tincin gram.

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Anexo n1
Stock de cepas ATCC que se encuentran en el Laboratorio de Microbiologa de la Universidad
Santo Tomas La Serena.
Cepa
Staphylococcus
aureus
Pseudomonas
aeruginosas
Enterococcus
faecalis
Klebsiella
pneumoniae
Escherichia coli

Francisca Arcos Vergara

Tipo y numero de
coleccin

N de lote

Fecha de caducidad

ATCC 25923

528877

31/01/2016

ATCC 27853

563195

30/04/2016

ATCC 29212

512632

31/12/2015

ATCC 700603

493554

30/11/2015

ATCC 25922

482944

31/10/2015

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