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FACULTAD DE AGRONOMA
POR
CHILLN CHILE
2010
UNIVERSIDAD DE CONCEPCIN
FACULTAD DE AGRONOMA
POR
CHILLN CHILE
2010
Aprobada por:
____________________
Gua
____________________
Asesor
____________________
Asesor
____________________
Decano
TABLA DE CONTENIDOS
Resumen...................................................................................
Summary.......
Introduccin..........
Materiales y Mtodos............................
Resultados y Discusin............................
Conclusiones.....................................
Referencias..........
Pgina
1
1
2
5
9
26
26
10
11
12
13
14
25
Tabla 2
Tabla 3
Tabla 4
Tabla 5
Tabla 6
Tabla 7
Tabla 8
Tabla 9
Figuras
Palabras ndice
estratificacin.
adicionales:
germinacin,
dormancia,
escarificacin,
RESUMEN
Con el propsito de identificar un mtodo efectivo para obtener un alto porcentaje
de
germinacin
enraizamiento,
en
semillas
estacas
de
Sphacele
mediante
Microscopio
Electrnico
de
Barrido
(MEB),
estas
(1985) los constituyentes basados en las hojas de la planta seran aceite esencial:
7.35 g/kg, con un 3 % de alfa pineno, 3.2 % de beta pineno, 15.2 % de falandreno,
32.4 % de limoneno-eucaliptol, 9.3 % de timol y en menos proporcin linalol,
alcanfor, terpineol y borneol.
La germinacin de esta especie, comienza con la imbibicin de agua por parte
de la semilla y culmina con la emergencia de la plntula a travs de las cubiertas
(Azcon-Bieto y Taln, 1993; Bewley y Black, 1994), pero esto slo ocurre cuando
las semillas han madurado y las condiciones ambientales son adecuadas, algunas
no germinan hasta pasado un tiempo, incluso si disponen de condiciones
ambientales favorables, ya que experimentan un perodo de dormancia (Meyer et
al., 1960; Baldini, 1992). La dormancia en las semillas se puede deber a varios
factores. Hartmann y Kester (1987), Hess (1980) y Meyer et al. (1960), sealan
factores como: impermeabilidad de la cubierta seminal a los gases y agua,
cubiertas de semillas duras y presencia de inhibidores de la germinacin.
Hartmann y Kester (1987) sealan diversos tratamientos para superar el letargo de
las semillas, como escarificacin mecnica con agua caliente y con cido,
estratificacin de la semilla a bajas temperaturas, lixiviacin de inhibidores, o
combinacin de los anteriores. Tambin sealan tratamientos para facilitar la
germinacin, como lo son el uso de hormonas y otros estimulantes qumicos como
giberelinas. Cualquiera de los tratamientos anteriores sirve para superar letargos
mecnicos, por presencia de pericarpios lignificados.
S. chamaedryoides, tambin se puede propagar, mediante reproduccin
asexual o vegetativa. Segn Baldini (1992) y Felipe (1999), a partir de porciones
de plantas, se obtienen descendencia homognea desde el punto de vista
gentico e idnticas a la planta de la que se ha tomado el material de propagacin.
La regeneracin por estacas es el medio ms utilizado e importante de
propagacin de muchas especies agrcolas y ornamentales (Hartmann et al.,
1990; Azcn-Bieto y Taln, 2008).
0 min
A1
A5
30 das
A9
A 11
30 min
A4
A8
A 12
Lixiviacin de
inhibidores (agua)
0 mg L
250 mg L-1
500 mg L-1
1.000 mg L-1
B1
B2
B3
B4
25 oC
50 oC
B5
B9
B6
B 10
B7
B 11
B8
B 12
-1
0 das
15 das
30 das
15 C
C1
C5
C9
30 oC
C2
C6
C 10
70 oC
C3
C7
C 11
100 oC
C4
C8
C 12
Ensayo IV: Se tomaron 1.200 nculas y fueron tratadas con cido giberlico, en
concentraciones de 1.000, 2.500 y 5.000 mg L -1, ms un tratamiento testigo sin
giberelinas (Tabla 4). Se mantuvo el mismo procedimiento que el ensayo II.
Tabla 4: Tratamientos de ensayo IV (D), aplicacin de giberelinas.
-1
0 mg L
5.000 mg L-1
D1
D2
D3
D4
Para los 4 ensayos, una vez listos los tratamientos, las nculas fueron colocadas
en placas petri de 10 cm de dimetro, con una lmina de papel filtro y en una
cmara de germinacin a 24 oC, a humedad constante y 12 horas alternadas de
luz y oscuridad para evaluar la germinacin de las semillas.
Se consider la semilla germinada cuando la radcula emergida alcanz 1 mm
de longitud.
Descripcin morfolgica de nculas, y cambios observados durante la
germinacin de la semilla
Las observaciones morfolgicas de la semilla en el trascurso del proceso de
germinacin, se realizaron con nculas maduras, fijadas en glutaraldehido y buffer
cacodilato de sodio, por un mnimo de 24 horas, postfijadas en tetrxido de osmio
y sometidas a secado de punto crtico. Este material, se mont en portas y se
metaliz con oro-paladio y posteriormente se examin con Microscopio Electrnico
de Barrido (MEB), en el Laboratorio de Microscopa Electrnica de la Universidad
de Concepcin.
Las evaluaciones y los registros se realizaron diariamente desde el da 0.
Propagacin vegetativa
Se utilizaron estacas de tallo leoso de S. chamaedrioydes recolectadas de
plantas en ambiente natural. Se emple una cmara de proteccin de 2,4 m 1,6
m y 4 bandejas speedling. El agua fue suministrada de forma manual mediante un
pulverizador, dependiendo de las condiciones observadas.
El sustrato utilizado consisti en 2/3 de arena, ms 1/3 de tierra de hoja,
material proveniente de la Universidad de Concepcin, Campus Chilln. El
sustrato fue esterilizado mediante autoclave a 121 oC por 1 hora, para eliminar
semillas de malezas y patgenos.
Tabla 5: Tratamientos propagacin vegetativa (E), aplicacin de cido indolbutrico
(IBA).
125
250
500
750
1.000
2.000
4.000
E1
E2
E3
E4
E5
E6
E7
E8
Germinacin
Ensayo I: No se observ diferencias significativas en el porcentaje de germinacin
entre los tratamientos, mediante el anlisis de varianza. El mayor porcentaje de
germinacin obtenido (2 %), fue en el tratamiento con 15 das de estratificacin y
sin escarificacin qumica con cido sulfrico (Tabla 6).
El efecto abrasivo del H2SO4 sobre la cubierta seminal de diferentes especies,
mejora la aireacin e hidratacin de la semilla, lo que se traduce en una mayor
eficiencia del proceso germinativo (Prez y Martnez-Laborde, 1994). Segn
Hartman y Kester (1987) la duracin del tratamiento con cido sulfrico depende
del tipo de semilla, pudiendo variar desde 10 minutos en algunas especies, hasta
6 horas o ms en otras, y al tratarse de semillas con tegumentos gruesos, los
perodos de tratamientos en estos casos son largos. Para esta especie, los
tratamientos son destinados a escarificar el pericarpio de las nculas. De acuerdo
a los resultados podemos deducir que los tiempos destinados a la escarificacin,
posiblemente no fueron los correctos, debido a que el pericarpio de los frutos de
S. chamaedryoides est formado por una capa de clulas esclereidas dispuestas
en empalizada, constituyendo un factor de latencia importante, dejando en
evidencia la impermeabilidad de la semilla. Esto se concluye, ya que las semillas
que fueron tratadas con acido sulfrico y el control, no presentaron diferencias de
volumen, lo que indica que no embebieron agua. La imbibicin de agua es un
fenmeno fsico y puede efectuarse an en semillas muertas (Hartmann y Kester,
1987; Sivori et al., 1980). Tambin es importante destacar, que la accin
escarificante del cido sulfrico sobre nculas de la familia Labiatae, vara
dependiendo de la especie, esto se fundamenta en estudios realizados por
Cabello et al. (1998), en nculas de Lavandula stoechas, en donde obtuvo 83 %
de germinacin utilizando cido sulfrico.
sulfrico y estratificacin.
Estratificacin (4 oC)
0 das
15 das
30 das
30 min
0
1
0
en
el
porcentaje
de
germinacin,
segn
las
diferentes
-1
250 mg L-1
3
2
1
500 mg L-1
3
3
1
1.000 mg L-1
3
0
1
Barcel et al. (2001), seala que los tejidos reproductores contienen mayores
cantidades de giberelina, sin embargo, el contenido de la hormona vara en
relacin con el crecimiento, edad de la planta, floracin, desarrollo del fruto,
dormancia y germinacin. Aparentemente las giberelinas se producen cuando se
necesitan, ya que en semillas en germinacin hay un aumento brusco al aumentar
estas de tamao. Jensen-Salisbury (1988), indica que las concentraciones de
giberelina aumentan durante la primavera en semillas latentes, y es posible que
participen en condiciones normales para romper el estado de latencia. Barcel et
al. (2001) y Sivori et al. (1980), seala que la aplicacin de giberelinas puede
romper el perodo de dormancia en semillas, ya que puede sustituir tratamientos
de estratificacin, que es donde aumenta el contenido de giberelinas.
Basndose en los resultados anteriores, se puede determinar que la giberelina
no pudo penetrar en la semilla, debido a la dureza e impermeabilidad del
pericarpio, an cuando se esperaba tener un efecto de escarificacin trmica
sobre ste, al realizar lixiviacin de inhibidores con agua a 50 oC.
Ensayo III: El anlisis de varianza detect diferencias (P 0,05) entre los
tratamientos de este ensayo. El mayor porcentaje de germinacin (65 %), se
obtuvo con escarificacin trmica a 100 oC y estratificacin por 30 das (Tabla 8).
El efecto abrasivo de la escarificacin trmica, tiene como objetivo, al igual que el
cido sulfrico, mejorar la permeabilidad de la semilla y de la ncula, en este caso
por medio de lesiones fsicas provocadas por la temperatura del agua, y facilitar
por medio de stas segn Prez y Martnez-Laborde (1994), el ingreso de agua y
el intercambio gaseoso de la semilla, de modo que el embrin pueda iniciar su
actividad metablica.
Tabla 8. Porcentajes de germinacin en ensayo 3: escarificacin trmica y
estratificacin.
Estratificacin (4 oC)
o
0 das
15 das
30 das
15 C
0a
0a
5 ab
100 oC
0a
0a
65 b
Tratamientos con letras distintas indican diferencias significativas. Test de Conover (P < 0,05).
-1
5.000 mg L-1
2
se
encuentra
la
esclerificacin.
En
esta
especie,
las
Propagacin vegetativa
Al analizar la Tabla 10, se puede apreciar que no hubo efecto del cido
indolbutrico aplicado, sobre el enraizamiento de estacas de S. chamaedryoides,
ya que no se presentaron diferencias significativas entre los tratamientos, segn
anlisis de varianza. Los mejores resultados de enraizamiento (25 %) se
obtuvieron con 1.000 y 4.000 mg L-1 de cido indolbutrico (IBA).
Se puede apreciar que existi una capacidad natural de enraizamiento de un
6,25 % en las estacas, sin aplicacin de hormona. Esto indica que el nivel
endgeno de promotores de enraizamiento no sera un factor limitante en la
rizognesis. Resultados similares apreci Cornejo (1997), en propagacin
vegetativa en olivo, donde obtuvo un 5 % de capacidad natural de enraizamiento,
sin la aplicacin de IBA.
Estos resultados son similares a los informados por Palma (2001), quien
realiz ensayos, para inducir enraizamiento de estacas de plantas femeninas de
maqui, empleando cuatro concentraciones de AIB (0, 1.000, 2.000 y 4.000 mg L -1).
Al analizar los resultados, concluy que el mayor porcentaje de enraizamiento
(36.6 %) se obtuvo con aplicacin de 1.000 mg L -1 de IBA. De igual manera,
Cornejo (1997) en propagacin vegetativa de olivo, obtuvo sus mejores resultados
125
2.000
4.000
6,25
6,25
12,5
0
0
25
18,7
25
No se presentan diferencias significativas mediante anlisis de varianza. (P<
Segn Hartmann y Kester (1987), los factores que afectan el enraizamiento de
estacas son muy numerosos, ya que influyen caractersticas fisiolgicas,
morfolgicas y genticas, junto a condiciones ambientales. El estado nutricional
del material pudo haber influido directamente en el porcentaje de enraizamiento,
ya que las estacas no fueron uniformes, variando los dimetros de estas entre 0.2
y 0.7 cm y por tanto obtenindose estacas con diferentes suministros de
carbohidratos. Otro factor mencionado por Baldini (1992), corresponde a la poca
de recoleccin del material, indicando que estacas colectadas en otoo enrazan
mejor que aquellas recolectadas en invierno. Las estacas utilizadas en este
trabajo, se recolectaron en primavera, siendo esta una posible razn de la
obtencin de resultados insatisfactorios de enraizamiento, por lo cual se
recomendara otra fecha de recoleccin.
No fue posible evaluar la formacin de callos en las estacas, debido a que no
hubo resultados. Con frecuencia, el proceso de rizognesis puede venir
acompaado de la formacin de callo, pero la presencia de este, no tiene
influencia sobre el proceso mencionado (Baldini, 1992; Hartmann y Kester, 1987).
Muoz y Solanes (1983), sealan que las estacas tienen la capacidad de formar
callo, siempre y cuando sean recolectadas en la poca oportuna. Por lo tanto la
ausencia de callo podra deberse a la fecha no adecuada de recoleccin del
material, reafirmando lo indicado por Baldini anteriormente.
CONCLUSIONES
REFERENCIAS
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