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Anlise morfomtrica e quantitativa dos neurnios...

MUNIZ et al.

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ANLISE MORFOMTRICA E QUANTITATIVA DOS NEURNIOS DO


PLEXO MIENTRICO DO CECO DE RATOS SUBMETIDOS A INTENSA
CARNCIA DE PROTENA
Eliane Muniz1
Dbora de Mello Gonlves SantAna2
Eduardo Jos de Almeida Arajo3
MUNIZ1, E; SANTANA2, D. M. G; ARAJO3, E. J. A. Anlise morfomtrica e quantitativa dos nernios do plexo mientrico
do ceco de ratos submetidos a intensa carncia de protepna. Arq. Cinc. Vet. Zool. Unipar, Umuarama, v. 10, n. 2, p. 77-84,
jul./dez. 2007
RESUMO: Avaliaram-se os efeitos crnicos de uma dieta severamente hipoprotica, sobre aspectos quantitativos e
morfomtricos de neurnios mientricos, NADPH-diaforase positivos do ceco de ratos jovens. Oito ratos foram divididos
em dois grupos, sendo que para um dos grupos foi oferecida rao com teor protico de 26% (controle) e, para o outro, rao
com o teor protico de 4%, mantendo-se o balano vitamnico e mineral durante 12 semanas. Aps eutansia, o ceco de
cada animal foi coletado e dissecado para confeco de preparados de membrana, os quais foram submetidos tcnica da
NADPH-diaforase. Para contagem e mensurao destes neurnios, o ceco foi dividido em quatro regies: apical mesentrica;
apical antimesentrica; basal antimesentrica; prxima ampola cecal. No se observou alterao signicativa para o peso
dos animais, rea do ceco e densidade populacional dos neurnios mientricos no nal do experimento. Por outro lado, em
algumas regies do ceco, os neurnios tiveram reduo da rea nuclear, com conseqente reduo da rea do pericrio.
PALAVRAS-CHAVE: Sistema Nervoso Entrico. M-Nutrio Protico-Energtica (MPE). Neurnios Nitrrgicos.
Plasticidade Neuronal.
QUANTITATIVE AND MORPHOMETRIC ANALYSIS OF MYENTERIC NEURON FROM THE CECUM OF
RATS SUBMITTED TO INTENSIVE PROTEIN DEFICIENCY
ABSTRACT: The chronicle effects of a severe hypoproteic diet on quantitative and morphometric aspects of NADPHdiaphorase-positive myenteric neurons from the cecum of young rats were assessed. Eight rats were divided into two groups.
One group (control) was fed with 26%-protein chow and the other with 4%-protein chow during 12 weeks. The vitamin
and mineral balance was kept. After euthanasia, the cecum of each animal was collected and dissected for the whole-mount
preparation, which were submitted to NAPDH-diaphorase. The cecum was divided into four regions for counting and
measurement of neurons: apical mesenteric, antimesenteric apical, basal antimesenteric, and next to the cecal ampulla.
Signicant alterations were not noted with respect to the weight of the animals, cecum area, and population density of
myenteric neurons at the end of the experiment. On the other hand, in some regions of the cecum, the neurons presented a
reduction of the nuclear area with resulting reduction of the soma area.
KEYWORDS: Enteric Nervous System. Energetic-Protein Malnutrition. Nitrergic Neurons. Neuronal Plasticity.
ANLISIS MORFOMTRICA Y CUANTITATIVA DE LAS NEURONAS DEL PLEXO MIENTRICO DEL
CECO DE RATAS SOMETIDOS A UNA INTENSA CARENCIA DE PROTENA
RESUMEN: Se evaluaron los efectos crnicos de una dieta severamente hipoprotica, sobre aspectos cuantitativos y
morfomtricos de neuronas mientricos, NADPH-diaforase positivos del ceco de ratas jvenes. Ocho ratas fueron divididas
en dos grupos, siendo que para uno de los grupos fue ofrecida racin con tenor proteico de 26% (control) y, para el otro,
racin con el tenor proteico de 4%, mantenindose el balance vitamnico y mineral durante 12 semanas. Tras eutanasia, el
ceco de cada animal fue recolectado y disecado para confeccin de preparados de membrana, los cuales fueron sometidos a
la tcnica de la NADPH-diaforase. Para recuento y mensuracin de estas neuronas, el ceco fue dividido en cuatro regiones:
apical mesentrica, apical antimesentrica, basal antimesentrica y prxima a la ampolla cecal. No se observ alteracin
signicativa en el peso de los animales, rea del ceco y densidad poblacional de las neuronas mientricas al nal del
experimento. Por otro lado, en algunas regiones del ceco las neuronas tuvieron reduccin del rea nuclear, con consecuente
reduccin del rea del pericario.
PALABRAS CLAVE: Sistema Nervioso Entrico. Mala Nutricin Proteico-Energtica (MPE). Neuronas Nitrrgicas.
Plasticidad Neuronal.
Formanda do Curso de Enfermagem UNIPAR Umuarama - PR.
Dbora de Mello Gonales SantAna. Laboratrio de Neurogastroenterologia Experimental. Universidade Paranaense (UNIPAR). Praa Mascarenhas de
Moraes, s/n. Umuarama-PR. 87520-210. E-mail: debora@unipar.br
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Eduardo Jos de Almeida Arajo. Laboratrio de Neurogastroenterologia Experimental. Universidade Paranaense (UNIPAR). Praa Mascarenhas de
Moraes , s/n. Umuarama-PR. 87520-210. E-mail: eduardoaraujo@unipar.br
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Anlise morfomtrica e quantitativa dos neurnios...

Introduo
O intestino grosso a poro terminal do canal
alimentar. Inicia-se na papila ileal e termina no nus, sendo
dividido em: ceco, clons, reto e nus. O ceco a primeira
parte do intestino grosso e ca situada posteriormente
papila ileal, que faz profuso na luz intestinal (BANKS,
1992; VASCONCELLOS, 1998; SEYFERT, 2003).
A morfologia do ceco varia nas diferentes espcies,
principalmente entre herbvoros e carnvoros. O ceco de
herbvoros apresenta-se sacciforme, semelhante a uma
vrgula, de parede delgada, possuindo uma curvatura maior
livre e uma menor presa parede pelo mesocolo. No meio do
rgo h uma leve constrio, sendo divido em duas pores,
uma apical e outra basal. Na poro apical encontra-se uma
massa distinta de tecido linfide em sua parede lateral, sendo
este tecido ausente na poro basal (VASCONCELLOS,
1998; ZANONI et al., 1998; SEYFERT, 2003; GUYTON;
HALL, 2006).
Na cavidade abdominal do rato o ceco est situado
esquerda do intestino delgado e possui duas curvaturas:
a menor localizada na borda mesentrica e a maior na
borda antimesentrica. Divide-se em trs regies distintas:
corpo, pice cranial e base caudal e no apresenta tnias
(SMELTZER; BARE, 2002; SEYFERT, 2003; GUYTON;
HALL, 2006). Nos animais herbvoros o ceco tem como
funes a absoro de gua e dos eletrlitos do quimo para
formao das fezes, alm de sntese de vitaminas do complexo
B (TAYLOR et al., 1942; KOLB, 1987; SEYFERT, 2003;
GUYTON; HALL, 2006). No rato o ceco responsvel pela
digesto da celulose, e absoro dos carboidratos, protenas,
gua e outros produtos da digesto.
Histologicamente, na parede do ceco identica-se
a tnica mucosa, tela submucosa, tnica muscular e tnica
serosa (ZANONI et al., 1998; SEYFERT, 2003; GUYTON;
HALL, 2006). Entre os estratos da tnica muscular,
encontra-se o plexo mientrico, formado por gnglios de
formatos triangulares, poligonais e alongados e feixes de
bras nervosas que os interconectam (ZANONI et al., 1997;
1998; SEYFERT, 2003). Os neurnios do plexo mientrico
esto distribudos de forma heterognea no ceco, sendo que
a regio prxima ampola cecal apresenta maior quantidade
de gnglios e neurnios quando comparada s demais
regies. Assim, os neurnios desta regio tendem a ser mais
volumosos e com diversos formatos (ZANONI et al., 1997;
SEYFERT, 2003).
A desnutrio protica uma das situaes clnicas
que freqentemente levam a alteraes intestinais, podendo
causar constipao ou diarria (WATERLOW, 1996).
Diversos estudos vm sendo realizados atravs de modelos
experimentais de desnutrio protica, para avaliar sua
repercusso nos diferentes segmentos do tubo digestrio.
Neste sentido, a maioria se concentra em avaliar
o intestino delgado (SANTER; BAKER, 1988; NATALI;
MIRANDA-NETO, 1996; NATALI et al., 2003; BRANDO
et al., 2003; MELLO et al., 2004; TORREJAIS et al.,
1995; MEILUS et al., 1998; MIRANDA-NETO et al.,
1999). Em menor nmero existem trabalhos que avaliam o
intestino grosso (MELLO et al., 1995; SANTANA et al.,
1997; SANTANA et al., 2001; CASTELUCCI et al., 2002;
RECINOS, 1996; ARAJO et al., 2003a). Portanto, ainda

MUNIZ et al.

h uma real lacuna na literatura, em relao a estudos do


plexo mientrico do ceco de ratos desnutridos. Em funo
disso, o experimento foi realizado submetendo ratos a dieta
intensamente pobre em protenas, avaliando-se quantitativa
e morfometricamente os neurnios NADPH-diaforase
positivos do plexo mientrico do ceco destes animais.
Material e Mtodos
O protocolo experimental foi previamente
aprovado pelo Comit de tica em Pesquisa Envolvendo
Experimentao Animal da Universidade Paranaense
(UNIPAR) em reunio realizada em 22/03/2007.
Foram utilizados oito ratos (Rattus novergicus)
Wistar machos, com 90 dias de idade (peso corporal
283,938,7g), os quais foram separados aleatoriamente e
mantidos em gaiolas individuais num biotrio setorial, com
temperatura controlada e ciclo claro/escuro de 12 horas.
Os animais foram divididos em dois grupos: o grupo
controle (GC; n=4) e o grupo experimental (GE; n=4). O GC
recebeu rao comercial NUVILAB com 26% de protena,
e o GE recebeu rao preparada com 4%, pela adio de
amido de milho como descrito por Arajo et al. (2005).
Ambos receberam rao e gua ad libitum por um perodo de
90 dias, avaliando-se o peso corporal mensalmente. Ao nal
deste perodo, os ratos dos dois grupos foram anestesiados
por intermdio da seguinte associao: Acepromazina 1%
(1,26 mL/Kg), Ketamina-10% (1,26 mL/Kg), Xilazina-2%
(0,42 mL/Kg) e Atropina-1% (0,22 mL/Kg), por injeo
intramuscular (PACHALY et al., 2003). Depois de constatada
ausncia de reexos a estmulos dolorosos e miorrelaxamento,
realizou-se a laparotomia pela linha mdia e removeu-se o
ceco de cada rato com auxlio de pina e tesoura e a eutansia
por aprofundamento anestsico. Realizou-se o decalque do
ceco de cada animal sobre papel branco, o qual foi escaneado
para que a rea fosse determinada utilizando o software
Motic Image Plus verso 2.0.
Os cecos dos animais de ambos os grupos foram
submetidos tcnica histoqumica da NADPH-diaforase,
segundo Scherer-Singler et al. (1983). Para tanto, os rgos
foram lavados e preenchidos com tampo fosfato (PBS; pH
7,4) formando bexigas, imersos e xados em paraformaldedo
a 4%, preparado em tampo fosfato 0,1M (PBS; pH 7,4) por
30 min, imersos em soluo Triton X-100 0,3%, dissolvido
em tampo fosfato salinado (PBS, pH 7,4) por 10 minutos,
e posteriormente lavados dez vezes (dez minutos cada) em
PBS 0,01M pH 7,4. Em seguida, foram imersos no meio de
incubao, para a evidenciao neuronal contendo -NADPH
e NBT (soluo de 200 mL contm: 200 mL de tampo TrisHCl; 0,05 g de NBT; 0,1 g de -NADPH e 0,6 mL de Triton
X-100), durante 60 minutos. A reao foi monitorada sob
estereomicroscpio. Os segmentos foram lavados em soluo
tampo PBS 0,01M pH 7,4 (trs vezes de cinco minutos), e a
interrupo da reao ocorreu com paraformaldedo 4% em
soluo tampo PBS 0,01M pH 7,4.
Realizou-se
a
microdisseco
sob
estereomicroscpio com transluminao, retirando-se a
tnica mucosa e a tela submucosa. Em seguida, os preparados
totais foram desidratados em srie ascendente de lcoois,
diafanizadas em xilol e montadas entre lmina e lamnula.

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Anlise morfomtrica e quantitativa dos neurnios...

A anlise do laminrio foi realizada em quatro


regies do ceco: apical mesentrica (AM), apical
antimesentrica (AA), prximo ampola cecal (PA) e regio
basal antimesentrica (BA) conforme demonstrados na
Figura 1.

MUNIZ et al.

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como nvel de signicncia.


Resultados
Durante o perodo experimental, os animais de
ambos os grupos desenvolveram alterao visvel, mantendose saudveis at a eutansia. No nal do experimento, o
grupo controle teve peso corporal de 347,63g 35,75g e o
grupo experimental de 277,5g 40,15g (p > 0,05). A rea
do ceco do grupo controle foi 2,25 0,13 cm2 e do grupo
experimental 1,21 0,27 cm2 (p > 0,05).
A densidade populacional de neurnios encontrada
em cada regio do ceco dos animais de ambos os grupos est
apresentada na Tabela 1.
Tabela 1 Nmero dos neurnios mientricos NADPH-d
positivos em 8,4 mm2 nas diferentes regies do ceco de ratos
adultos normoalimentados (grupo controle) e submetidos
desnutrio protica (grupo experimental).

Figura 1 Desenho esquemtico do ceco do rato, observado


por sua face ventral. Regies: apical antimesentrica (AA),
basal antimesentrica (BA), apical mesentrica (AM) e
prximo ampola cecal (PA). leo (I) e colo (C) e ampola
cecal (AC).
A quanticao dos neurnios mientricos foi
realizada por amostragem em 40 campos microscpios de
cada uma das regies supracitadas, utilizando-se microscpio
fotnico1, com objetiva de 40X. Todos os neurnios de cada
campo foram contados, considerando-se os meio-neurnios
de campos alternados. A rea de cada campo microscpico
era de 0,21 mm.
Para a anlise morfomtrica, realizou-se a
mensurao da rea do pericrio e do ncleo de 100 neurnios
de cada regio supracitada de todos os animais de ambos
os grupos, por intermdio de um software de anlise de
imagem2. As imagens utilizadas foram capturadas por uma
cmera de vdeo digital3, acoplada a um microcomputador e
a um microscpio fotnico trinocular4, utilizando a objetiva
de 40X. Para complementar esta avaliao, calculou-se (1) a
rea do citoplasma por diferena entre a rea do pericrio e a
rea do ncleo e (2) a razo entre rea do ncleo e a rea do
pericrio de cada neurnio mensurado; (3) realizou-se uma
anlise de correlao entre as reas mensuradas dos neurnios
de cada grupo e (4) classicaram-se os neurnios quanto
rea do pericrio, quanto razo entre a rea do pericrio e
do ncleo, e realizou-se um histograma de freqncia.
A normalidade dos dados foi avaliada por
intermdio do mtodo de Kolmogorov e Smirnov. Assim,
dados considerados normais foram apresentados como
mdia e desvio padro e comparados pelo teste Anlise
de Varincia (ANOVA). Os dados no considerados com
distribuio normal foram apresentados como mediana e
percentis 25 e 75 (P25 e P75) e foram comparados por testes
no paramtricos. Na inferncia estatstica, delimitou 5%

Regies

Grupo Controle (n= 4)

AA
BA
AM
PA

196,5 (179,5; 206,0)


179,5 (152,5; 183,5)
274,0 (218,0; 325,0)
275,0 (220,5; 378,0)

Grupo Experimental
(n=4)
226,8 (215,8; 283,5)
205,5 (193,0; 241,0)
292,0 (273,0; 307,0)
405,0 (332,5; 443,5)

Mediana
geral

204,0 (183,5; 274,0)

260,5 (220,8; 307,0)

Valores expressos como mediana (P25; P75). AA Regio Apical


Antimesentrica. AM regio Apical mesentrica. BA Regio Basal
Antimesentrica. PA- Prximo ampola cecal. No houve diferena
signicativa entre os grupos.

Os resultados quanto anlise morfomtrica da rea


do pericrio, do ncleo, do citoplasma, assim como da razo
entre a rea do ncleo e do pericrio, esto apresentados,
respectivamente, nas Tabelas 2, 3, 4 e 5.
Tabela 2 rea do pericrio (m2) de neurnios
mientricos NADPH-diaforase positivos do ceco de ratos
normoalimentados (Grupo Controle) e submetidos
desnutrio protica (Grupo Experimental).
Regies
AA
BA
AM
PA

Grupo Controle
107,55 (68,1; 149,7)
103,6 (72,4; 137,7)
94,9 (64,7; 137,3)*
89,1 (63,9; 126,4)

Grupo Experimental
100,1 (72,85; 144,45)
96,1 (70,8; 138,5)
79,35 (61,4; 109,85)*
83,6 (67,15; 110,25)

Mediana
geral

97,8 (66,9; 137,7)*

89,0 (67,3; 126,6)*

Valores expressos como mediana (P25; P75). AA Regio Apical


Antimesentrica. AM regio Apical mesentrica. BA Regio Basal
Antimesentrica. PA- Prximo ampola cecal. Valores marcados numa
mesma linha com asterisco (*) so signicativamente diferentes (p<0,05).

Motic B1.
Motic Imagem Plus 2.0.
3
Moticam 2000.
4
Motic B5.
1
2

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Tabela 3 rea do ncleo (m2) de neurnios


mientricos NADPH-diaforase positivos do ceco de ratos
normoalimentados (Grupo Controle) e submetidos
desnutrio protica (Grupo Experimental).
Regies
Grupo Controle
Grupo Experimental
AA
29,6 (21,6; 37,4)*
25,3 (20,0; 32,9)*
BA
29,4 (22,4; 39,5)
27,5 (21,7; 35,5)
AM
29,7 (21,0; 37,5)*
24,7 (19,0; 31,5)*
PA
29,1 (22,5; 37,9)*
27,8 (19,8; 31,5)*
27,0 (20,0; 32,6)*
M e d i a n a 31,5 (21,8; 38,0)*
geral
Valores expressos como mediana (P25; P75). AA Regio Apical
Antimesentrica. AM regio Apical mesentrica. BA Regio Basal
Antimesentrica. PA- Prximo ampola cecal. Valores marcados numa
mesma linha com asterisco (*) so signicativamente diferentes (p<0,05).

Tabela 4 rea do citoplasma (m2) de neurnios


mientricos NADPH-diaforase positivos do ceco de ratos
normoalimentados (Grupo Controle) e submetidos
desnutrio protica (Grupo Experimental).
Regies Grupo Controle
Grupo Experimental
AA
72,85 (42,0; 115,1)
74,45 (48,35; 113,6)
BA
73,5 (44,6; 104,4)
68,5 (45,3; 103,5)
AM
61,8 (41,5; 98,2)
56,6 (37,5; 79,1)
PA
57,1 (37,8; 90,8)
59,2 (42,3; 81,4)
Mediana
geral

66,2 (40,4; 101,75)

62,5 (42,7; 95,6)

Valores expressos como mediana (P25; P75). AA Regio Apical


Antimesentrica. AM regio Apical mesentrica. BA Regio Basal
Antimesentrica. PA- Prximo ampola cecal. A comparao das mdias
no apresenta diferenas signicativa com 0,005% de signicncia.

Tabela 5 Razo entre a rea do ncleo e a rea do pericrio


de neurnios mientricos NADPH-diaforase positivos do ceco
de ratos normoalimentados (Grupo Controle) e submetidos
desnutrio protica (Grupo Experimental).
Regies
Grupo Controle
Grupo Experimental
AA
0,26 (0,21; 0,37)*
0,25 (0,19; 0,33)*
BA
0,29 (0,23; 0,39)
0,28 (0,21; 0,36)
AM
0,32 (0,24; 0,39)
0,30 (0,23; 0,38)
PA
0,34 (0,25; 0,42)*
0,29 (0,23; 0,37)*
Total

0,30 (0,23; 0,39)*

0,28 (0,22; 0,36)*

Valores expressos como mediana (P25; P75). Valores marcados numa


mesma linha com asterisco (*) so signicativamente diferentes (p<0,05).
AA Regio Apical Antimesentrica. AM regio Apical mesentrica. BA
Regio Basal Antimesentrica. PA- Prximo ampola cecal.

O resultado da anlise de correlao, entre as reas


mensuradas dos neurnios do grupo controle e do grupo
experimental, encontra-se apresentado nos grcos de
disperso das guras 2 e 3, respectivamente.

Figura 2 Grco de disperso entre a rea do pericrio e a


rea do ncleo (A, r = 0,57, p<0,05), rea do pericrio e do
citoplasma (B, r = 0,98, p<0,05) e rea do citoplasma e do
ncleo (C, r = 0,37, p<0,05) de neurnios mientricos NADPHdiaforase positivos do ceco de ratos normoalimentados
(Grupo Controle).

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Figura 4 Histograma da rea do pericrio de neurnios


mientricos NADPH-diaforase positivos do ceco de
ratos normoalimentados (Grupo Controle) e submetidos
desnutrio protica (Grupo Experimental). Colunas
da mesma classe marcadas com asterisco se diferem
signicativamente (*p < 0,05).

Figura 5 Histograma da razo entre a rea do ncleo e


a rea do pericrio de neurnios mientricos NADPHdiaforose positivos do ceco de ratos normoalimentados
(Grupo Controle) e submetidos desnutrio protica
(Grupo Experimental). Colunas da mesma classe marcadas
com asterisco se diferem signicativamente (*p < 0,05).
Discusso

Figura 3 Grco de disperso entre a rea do pericrio


e a rea do ncleo (A, r = 0,58, p<0,05), rea do pericrio
e do citoplasma (B, r = 0,98, p<0,05) e rea do citoplasma
e do ncleo (C, r = 0,41, p<0,05) de neurnios mientricos
NADPH-diaforase positivos do ceco de ratos desnutridos
(GC).
O histograma de freqncia com dados relacionados
rea do pericrio, razo da rea do ncleo e do pericrio,
est apresentado, respectivamente, nas Figuras 4 e 5.

Estudos relacionados m-nutrio protica so


importantes e atuais, e visam a elucidar seus efeitos sobre
a estrutura e funcionamento das diversas partes do sistema
digestrio. Portanto, a realizao de estudos sobre este tema,
em diferentes espcies de animais, contribui para o aumento
do conhecimento a respeito da m nutrio humana.
A reduo no aporte e sntese de protenas provoca
alteraes estruturais dos diversos rgos que compem o
sistema digestrio, podendo resultar em alteraes do trnsito
intestinal, constipao, inamaes e diarria (WATERLOW,
1996; SOUZA; ARAJO, 2004).
Uma das alteraes clnicas mais freqentes entre
animais desnutridos o menor ganho ou a perda de peso
corporal. Arajo et al. (2005), estudando animais submetidos
a desnutrio severa (4% protena), pelo mesmo modelo
experimental deste estudo, vericaram que os animais
experimentais apresentaram peso corporal 54,23% menor do
que os do grupo controle, desenvolvendo menor quantidade

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Anlise morfomtrica e quantitativa dos neurnios...

de massa gorda e massa magra. SantAna et al. (2006)


relataram que ratos adultos alimentados com teor de 8%
de protenas, apresentaram peso corporal 14,8% menor que
os controle. Neste estudo, no entanto, no houve diferena
estatstica signicativa entre os animais do grupo controle
e experimental, apesar de o grupo experimental apresentar
peso corporal mdio 20,17% menor que o controle.
Possivelmente, nestes animais o menor aporte de
protenas tenha sido suciente para manter a taxas metablicas
dos mesmos, no acarretando perda de peso, semelhante ao
vericado por Schoffen et al. (2005), estudando ratos velhos
com desnutrio protica de 8%.
Estudos com restrio protica, realizados com
ratos germfree, demonstraram que estes animais tm retardo
na degradao e reabsoro protica no ceco, reduzindo
inclusive a renovao de clulas intestinais deste rgo
(LOESCHE, 1968). Estudos experimentais no intestino
grosso demonstraram que a desnutrio protica (8% de
teor de protenas na dieta), levou a uma alterao no nmero
de neurnios mientricos do colo ascendente de rato,
independentemente da regio da circunferncia intestinal
analisada e das subpopulaes quanticadas (SANTANA
et al., 2001; SANTANA et al., 2006). J em estudos com
reduo do teor protico a 4% no houve alterao no nmero
de neurnios mientricos do coln descendente (ARAJO et
al., 2005).
No ceco, os neurnios mientricos esto
distribudos de forma distinta nas diferentes regies, sendo
mais concentrados na regio prxima ampola cecal,
possivelmente por ser uma regio de transio, tendo a
necessidade de maior concentrao de bras nervosas e
neurnios, diferena esta especialmente vericada entre os
neurnios da via colinrgica (SEYFERT, 2003). Este mesmo
autor, ao analisar as subpopulaes de neurnios NADHdiaforase e NADPH-diaforase positivos, no encontrou
diferena signicativa entre as regies. Igualmente, neste
estudo, no foi observada diferena no nmero de neurnios
mientricos NADPH-d positivos entre as regies do ceco,
possivelmente por se tratar de uma subpopulao neuronal,
que desempenha papel semelhante em todas as reas do
rgo.
Zanoni et al. (1997) demonstraram que o nmero de
neurnios no ceco de animais controle foi em mdia de 4784/
cm2, quando evidenciados com azul de metileno, semelhante
ao nmero encontrado por Seyfert (2003), com a tcnica
da ACHE (4673/cm2). Este autor sugeriu que a maioria da
populao neuronal deste rgo est envolvida com a via
colinrgica e demonstrou que a subpopulao de neurnios
NADPH-diaforase representou apenas 16,22% da populao
total de neurnios. A NADPH-diaforase uma enzima colocalizada com a NO-sintase e os neurnios demonstrados
pela histoqumica de evidenciao desta enzima representam
a subpopulao neuronal envolvida com a via nitrrgica, que
possuiem potencial inibitrio para a contrao muscular
(SCHERER-SINGLER et al., 1983).
Neste estudo no foi observada diferena numrica
entre os neurnios dos animais do grupo controle e desnutrido,
demonstrando que a restrio protica a 4%, por 90 dias,
no foi suciente para levar morte de neurnios nesta
subpopulao, em nenhuma das regies do ceco. SantAna
et al. (2001, 2006) demonstraram que os neurnios NADPH-

MUNIZ et al.

diaforase positivos foram os que apresentaram menor perda,


no colo ascendente, de animais submetidos a uma dieta
contendo 8% de protenas. J no colo descendente, com esta
mesma dieta, Arajo et al. (2003a) demonstraram haver uma
reduo de 24,2% desta subpopulao de neurnios. Assim,
este resultado acentuado quando ratos so submetidos a
uma dieta com um nvel ainda menor de protenas (o mesmo
nvel utilizado no presente estudo: 4%), visto que 37,8% dos
neurnios NADPH-diaforase positivos de colo descendente
so perdidos (ARAJO et al., 2006).
Segundo Cowen et al. (2000), a restrio diettica
parece atingir especialmente neurnios colinrgicos, que
demonstram ser a subpopulao neuronal mais vulnervel
aos efeitos da dieta, o que contribui para a explicao das
alteraes de motilidade intestinal. Estes autores encontraram
aumento na proporo de neurnios NOS positivos,
enfatizando que os mesmos caracterizam uma subpopulao,
menos vulnervel morte celular, possivelmente por terem
aprimorado os mecanismos de defesa contra os danos dos
radicais livres.
A partir da anlise morfomtrica, revelou-se que
as reas do pericrio e do ncleo, de uma maneira geral,
tendem a decrescer em funo da dieta hipoprotica. Este
fato ca explcito quando observado o aumento signicativo
do nmero de neurnios que tinham pericrio com rea
entre 51 a 100 m2, a despeito do nmero de neurnios
com pericrio de maiores reas nos animais do grupo
experimental. Considerando que no houve perda neuronal,
estas alteraes so indicativas de modulaes celulares
bioqumicas, que reetiram na morfologia celular, sinais que
demonstram a busca da sobrevivncia dos neurnios, durante
o momento de hostilidade. Isto corroborado pelo fato de que
a manuteno das correlaes entre as reas do pericrio, do
citoplasma e do ncleo, demonstra que a proporcionalidade
entre essas estruturas celulares estava sendo mantida. Assim,
nos permite sugerir que os neurnios estavam modulandose adequadamente, mesmo frente menor disponibilidade
de aminocidos para sntese de novas protenas. possvel
tambm considerar que o uxo deste monmero estava sendo
direcionado para tecidos mais nobres, ou seja, com menor
capacidade de regenerao, como o caso das clulas objeto
deste estudo.
curioso tambm perceber que o nmero de
neurnios com ncleo ocupando uma menor parte do pericrio
(21 a 25%), aumentou, em detrimento do nmero de neurnios
em que o ncleo ocupava entre 46 a 55% do pericrio. Este fato
foi observado em praticamente toda extenso do rgo, com
exceo na regio basal antimesentrica. Considerando que o
experimento no alterou a rea do citoplasma dos neurnios
deste estudo, sugere-se que essa reduo da rea nuclear seja
a principal responsvel pela reduo da rea do pericrio,
observada na regio apical mesentrica do ceco nos animais
do grupo experimental. Considerando, ainda, que o tamanho
do ncleo est diretamente relacionado ao metabolismo
celular (ANDRADE; JORDO, 2005), sobretudo sntese
protica, pode-se inferir que os neurnios, os quais tinham
ncleos que ocupavam 46 a 55% do pericrio, pertenciam
a uma subpopulao de neurnios metabolicamente ativa,
e que o organismo dos animais do grupo experimental
compreendeu que poderia ser inibida num momento de
privao de aminocidos de fonte exgena. Possivelmente,

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Anlise morfomtrica e quantitativa dos neurnios...

este grupo tambm deve representar o aumento do nmero


de neurnios com pericrio entre 51 e 100 m2.
No foram encontrados, na literatura, outros
estudos que vericassem os efeitos da desnutrio sobre a
rea do corpo e do ncleo celular de neurnios do ceco. Por
outro lado, considerando outros segmentos intestinais, Natali
et al. (2005) demonstram que no houve alterao da rea
do pericrio de neurnios mientricos do duodeno de ratos
alimentados com rao contendo 8% de protenas. Quando
ratos so submetidos a restrio protica ainda maior (4%),
observou-se aumento do pericrio de neurnios NADHdiaforase positivos do colo ascendente (HERMES et al.,
2006). Estudos avaliando neurnios mientricos do ceco,
sob outras condies experimentais, tm demonstrado que
a idade no interfere no fato de que o pericrio de neurnios
NADPH-diaforase positivos da regio apical, tendam a ser
maior do que os da regio basal, exceto quando os animais
so submetidos atividade fsica (SILVA, 2006). Alm
disso, em ratos diabticos, o nmero de neurnios NADHdiaforase positivos, com pericrio de valores intermedirios,
tendem a aumentar (ZANONI et al., 1997).
Concluso
A dieta intensamente pobre em protenas, fornecida
a ratos jovens, durante 90 dias, no provoca alterao no
nmero de neurnios NADPH-diaforase positivos do ceco.
Por outro lado, esta condio experimental induz reduo do
pericrio e do ncleo desses neurnios em algumas regies
do ceco.
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Recebido em: 14/09/2007
Aceito em: 09/04/2008