INFORME PRACTICO BIOQ121

NOMBRE: Ma Francisca Bastas Sols

FECHA: 13/09/12

1.- Resultados propiedad amortiguadora del pH de las protenas plasmticas

Expresin de los Resultados en el informe
ml HCl 0.01 M

ml gastados blanco

mmoles
gastados/ml
suero

mmoles HCL
gastados

Suero de Bovino

2,7

2,6

0,026

0,052

Suero
desproteinizado
de Bovino

1,4

1,3

0,013

0,013

agua

0,1

0,0

Cuantos mmoles / ml de suero se gastan por efecto de la protena presente= 0,039

2.- Resultados de determinacin del punto isoelctrico de la Casena

La solubilidad de la casena se evala en funcin del precipitado y la turbidez de la solucin:

De los resultados se puede concluir que el pI de la casena es = 4,9

Complete esta tabla con los datos de pH anteriores y como seran los resultados con una
protena distinta de pI=6
Tubos

5,96

5,65

5,35

5,05

4,75

4,45

4,15

3,85

3,55

10 minutos

20 minutos

pH

I) Separacin por salazn de las protenas del suero sanguneo.

De los resultados obtenidos se puede concluir que cuando a un 1 ml de suero de bovino se le

agrega 1 ml de sulfato de amonio saturado, obtenemos una solucin a media saturacin, con esto
y posterior a centrifugar, se observa un precipitado el cual corresponde a las seroglobulinas y las
seroalbuminas se mantienen disueltas en el sobrenadante, esto se debe porque el sulfato de
amonio es una sal neutra que provoca que el agua se organice alrededor de los iones de la sal,
disminuyendo alrededor de las molculas de protenas provocando su precipitacin. Posterior a
esto se agrega gotas de TCA al sobrenadante y se obtiene una solucin saturada con lo que
precipitan ambas protenas tanto las seroglobulinas como las seroalbuminas, debido a que el
Acido Tricloroacetico elimina las interacciones electrostticas, precipitando las proteinas. En
cuanto a la solubilidad de estas protenas en una solucin saturada de sulfato de sodio se observa
que solo precipitan las seroglobulinas, mantenindose solubles las seroalbuminas, con esto se
concluye que dependiendo del acido usado las solubilidad de las protenas ser distinta y la fuerza
ionica a la cual precipitan las protenas es caracterstica para cada una de ellas. Por otra parte
las protenas del plasma sanguneo en una solucin de Cloruro de Sodio son estabilizadas al ser
este una sal monovalente, por lo que las protenas no precipitan, si no que se disuelven ya que
el NaCl aumenta la constante dielctrica del medio.

II) Accin del alcohol a diferentes temperaturas sobre las protenas del suero
sanguneo.
Para estudiar la precipitabilidad y el efecto de la temperatura sobre la desnaturacin de las
protenas por solventes orgnicos se toman dos muestras de suero sanguneo en diferentes
tubos, se les agrega 3 volmenes de un solvente orgnico como el etanol de 95, y se equilibran
las temperatura, uno estar a temperatura ambiente (20C aprox) y el otro a la temperatura de
una mezcla frigorfica (-10C aprox) se deja as 30 minutos. Se observa precipitacin de
protenas en ambos tubos, debido a que el solvente orgnico baja la constante dielctrica del
medio y con esto disminuye adems la concentracin efectiva del agua, por ende se favorece la
interaccin de los iones proteicos entre si y ocurre la precipitacin. Posterior a los 30 minutos se
agrega Cloruro de Sodio a ambos tubos el cual aumenta nuevamente la constante dielctrica y
anula el efecto del solvente orgnico, se observa que el tubo que estaba a temperatura
ambiente sigue con precipitado, de esto se concluye que las protenas por efecto del etanol se
desnaturalizaron y este es un proceso irreversibles, a diferencia del tubo que estaba a una
temperatura de -10C, el que agregado del Cloruro de sodio se solubiliza nuevamente la
protena, aqu tenemos un proceso reversible, se concluye finalmente que este fenmeno
disminuye a bajas temperaturas

BIOQ121

INFORME BIOQUMICA
PROPIEDADES DE LAS PROTENAS
M Francisca Bastas, Miriam Fuentealba, Escuela de Qumica y Farmacia,
Universidad Austral de Chile.

I -. PROPIEDAD AMORTIGUADORA DEL pH DE LAS PROTENAS PLASMTICAS

OBJETIVO:
Estudiar la propiedad amortiguadora del pH de las protenas por medio de la determinacin del punto
final de una titulacin con cido y diferentes tipos de soluciones.
RESULTADOS:
Se realizaron tres titulaciones con HCl 0,01M: con suero sanguneo diluido, suero sanguneo
desproteinizado y agua, 2 mL de solucin en cada una.

Solucin

mL HCl
0,01M

mL gastados blanco

mmoles HCL
gastados

mmoles gastados
HCl/mL suero

Suero de bovino
Suero de bovino
desproteinizado
Agua

2,05mL
1mL

2,00mL
0,95mL

0,0200 mmol
0,0095 mmol

0,04 mmol/mL
0,0095 mmol/mL

0,05mL

0,00mL

Al titular el suero sanguneo diluido, se presento una solucin de color amarilla que al titular cambia a
color anaranjado despus de agregados 2,05mL de cido. Luego en la titulacin del suero previamente
desproteinizado por medio de calentamiento a bao mara por unos minutos, se observa cambio de
coloracin amarilla a anaranjada al agregar 1mL de cido. Por ltimo, en la valoracin con agua, al agregar
1 gota de acido se observa el cambio de color, desde rojo a anaranjado.
CONCLUSIN:
De acuerdo a los resultados obtenidos se concluye que las protenas tienen propiedad amortiguadora
de pH, esto se verifica por la cantidad de mmoles de HCl/mL de suero utilizados en cada titulacin. Por
tanto en la valoracin con suero donde estn presentes las protenas, es donde ms cantidad de cido se
ocupa para lograr el cambio de coloracin, correspondiente a 0,04 mmol de HCl/mL de suero, doblando
aproximadamente a la cantidad utilizada en el suero donde no hay presencia de protenas que puedan
amortiguar el cambio de pH.

II -. DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELCTRICO DE LA CASENA

OBJETIVO:
Determinar el punto isoelctrico de la protena casena a partir de su comportamiento en medios con
diferentes pH.

RESULTADOS:
Tabla de procedimiento:
Tubos
Sol. Casena
Agua destilada
0,01M c. actico
0,10M c. actico
1,00M c. actico

0,5
4,190
0,310
-

0,5
3,875
0,625
-

0,5
4,375
0,125
-

0,5
4,250
0,250
-

0,5
4,000
0,500
-

0,5
3,500
1,000
-

0,5
2,500
2,000
-

0,5
0,500
4,000
-

0,5
3,700
0,800

Se utiliza distinta molaridad de cido actico para obtener distintos pH en cada solucin y la casena 6
mg/mL se encuentra en una solucin de 0,1M de acetato de sodio, molaridad que se usa como
concentracin bsica.
Tubo
pH
10 min.
20 min.

5,95

5,64

4,74

4,44

X
X

X
X

X
X

4,14
+
+

3,84
+
+

3,54

O
O

5,34
+
+

5,04

O
O

O
O

Se evala en vista del precipitado y turbidez de la solucin.

O = sin cambio, solucin traslcida
+ = turbidez, opalescencia
X = precipitado
Se observ que la casena precipita en un rango de pH de 5,04 a 4,44.
Los pH se obtuvieron a travs de la ecuacin de Henderson-Hasselbalch.
CONCLUSIN:
En base a la observacin del precipitado y turbidez de las diferentes soluciones, concluimos que el punto
isoelctrico se encuentra en el rango de pH que va desde 5,04 a 4,44. Como en el punto isoelctrico, la
carga neta es cero, la protena tiene solubilidad mnima y precipita, por tanto se identifica que dicho punto
es 4,74 para la casena, pues en l hay mayor presencia de precipitado.
A pH sobre el rango los grupos ionazables se encuentran desprotonados con lo cual la carga neta es
negativa, por lo que la protena se hace soluble, y por debajo del rango de pH encontramos los grupos
ionazables protonados, otorgando una carga positiva a la protena hacindola tambin soluble.

III -. SEPARACIN POR SALAZON DE LAS PROTENAS DEL SUERO SANGUNEO

OBJETIVO:
Estudiar la precipitabilidad de las protenas provocada por la accin de las sales neutras.
RESULTADOS:
Suero sanguneo a media saturacin
con (NH4)2SO4
Sobrenadante
Precipitado (solubilizado)

Precipitacin por CCl3COOH

presencia de precipitado
presencia de precipitado

Al agregar sulfato de amonio a un tubo que tiene una solucin de suero se obtiene precipitado. De este
precipitado se separ el sobrenadante y se solubiliz el residuo. Al agregar cido tricloroactico a ambos
tubos se comprueba presencia de protena, ya que en ambos se obtiene precipitacin.
CONCLUSIN:
Al agregar cloruro de sodio 0,15M al suero de bovino que contiene seroalbminas y seroglobulinas, se
logra la precipitacin de las protenas seroglobulinas y no de las seroalbminas que queda en solucin.
Cuando se agrega sulfato de amonio a la solucin de suero sanguneo hasta lograr una saturacin media
se observa precipitado de las protenas seroglobulinas, pero no de las seroalbminas que quedan en el
sobrenadante en solucin. Para lograr la precipitacin de las seralbminas es necesario llegar a saturacin
completa de la solucin con sulfato de amonio.

IV -. ACCIN DEL ALCOHOL A DIFERENTES TEMPERATURAS SOBRE LAS PROTENAS

DEL SUERO SANGUNEO
OBJETIVO:
Estudiar la precipitabilidad de las protenas por accin de solventes orgnicos, y estudiar el efecto de
la temperatura sobre la desnaturacin de las protenas en presencia de dichos solventes orgnicos.
RESULTADOS:
Temperatura aproximada (C)

Presencia de precipitado

Resolubilizacin con NaCl 0,15M

-10
20

S
S

S
No

Al agregar etanol a dos soluciones proteicas sometidas a diferentes temperaturas, se obtiene en ambas
precipitacin de las protenas. Luego al agregar cloruro de sodio, se obtiene resolubilizacin en la solucin
sometida a baja temperatura, porque sta evit el segundo agente desnaturalizante que por naturaleza es
la temperatura, por el contrario a la solucin proteica que se mantuvo a temperatura ambiente, donde
por accin del solvente orgnico y de la temperatura las protenas fueron desnaturadas y coaguladas.
CONCLUSIN:
Al adicionar solventes orgnicos muy solubles en agua, tales como el etanol y la acetona, a una solucin
acuosa de protenas del suero sanguneo de bovino a temperatura ambiente, se provoca la disminucin de
la solubilidad de stas, debido a la baja constante dielctrica que poseen los solventes orgnicos, ya que
favorecen la interaccin de los iones proteicos entre s y con ellos su precipitacin. Por otro lado los
solventes orgnicos interaccionan con el interior hidrofbico de las protenas, y desorganizan la estructura
terciaria, provocando su desnaturalizacin y precipitacin. Este proceso de desnaturalizacin de las
protenas puede ser reversible o irreversible, dependiendo de la temperatura a la cual es sometida la
solucin proteica, por ende a una baja temperatura se evita la desnaturalizacin irreversible, debido a que
aumenta la solubilidad de las protenas lo que provoca que no precipiten en forma radical.

2
INFORME PRACTICO BIOQ121
NOMBRE: OSCAR ALARCN URIBE

FECHA: 12/09/2012

1.- Resultados propiedad amortiguadora del pH de las protenas plasmticas

Expresin de los Resultados en el informe
ml gastados blanco

ml HCl 0.01 M

mmoles HCL
gastados

mmoles
gastados/ml
suero

Suero de Bovino

3,2

3,1

0,031

0,062

Suerodesproteinizado
de Bovino

1,2

1,1

0,011

0,0055

agua

0,1

0,0

La cantidad de mmoles / ml de suero se gastan por efecto de la protena presente es

0,0565.

2.- Resultados de determinacin del punto isoelctrico de la Casena

La solubilidad de la casena se evala en funcin del precipitado y la turbidez de la solucin:
O = sin cambio, solucin traslcida
+ = turbidez, opalescencia
X = precipitado
Complete esta tabla con los datos de pH anteriores y como seran los resultados con una
protena distinta de pI=6
Tubos
pH
10 minutos
20 minutos

1
5,96
0
0

2
3
4
5
6
7
8
9
5,65 5,35 5,05 4,75 4,45 4,15 3,85 3,55
0
0
+
+
+
0
0
0
0
+
X
X
+
+
0
0

De los resultados se puede concluir que el pI de la casena es = 4,90.

Con respecto a el caso de la protena distinta con un pI = 6 los resultados seran distintos,
ya que como dice, tiene otro punto isoelctrico y otras caractersticas distintas a la casena,
la cul fue analizada en el practico.

INFORME PRACTICO BIOQ121

NOMBRE: OSCAR ALARCN URIBE

FECHA: 28/09/2012

1.- Resultado de la separacin por salazn de las protenas del suero sanguneo.
En la realizacin del prctico, despus de agregado 1 ml de Sulfato de Amonio a 1 ml de suero
pasado unos minutos y posterior centrifugado se puede observar la aparicin de precipitado. Al
mezclar el suero con Sulfato de Amonio se obtiene una solucin a media saturacin, por lo cual
se puede deducir que la protena precipitada es la seroglobulina ya que como el Sulfato de Amonio
al ser una sal neutra provoca que el agua se organice alrededor de los iones de la sal
disminuyendo la presencia del solvente alrededor de las protenas las que se asocian a una fase
solida y precipitan. Al separar sobrenadante del precipitado se agreg al primero unas gotas de
TCA lo cual provoc una precipitacin de protenas debido a su desnaturacin, ya que el TCA
(cido tricloroactico) elimina sus interacciones electrostticas estabilizando su estructura
terciaria y provocando precipitacin, las cuales en este caso corresponden a las seroalbminas.
Si agregramos agua al suero las protenas se mantendran en solucin, ya que no tiene
propiedades que modifiquen la solubilidad de la solucin, al trabajar con NaCl podemos
percatarnos que tiene una alta constante dielctrica, lo cual ayuda a la mantencin de las
protenas en solucin acuosa, en cambio, al agregar una solucin saturada de Sulfato de Sodio
podemos observar la precipitacin de solo las seroglobulina, pero no las seroalbminas.
2.- Resultado de la Accin del alcohol a diferentes temperaturas sobre las temperaturas
del suero sanguneo.
En el siguiente practico se trabaj con dos tubos de ensayo que contenan una muestra de suero
sanguneo y tres volmenes de etanol de 95, la diferencia es que uno se mantuvo a temperatura
ambiente (20 C aproximadamente) y el otro se equilibr con una muestra frigorfica (-10 C
aproximadamente). En ambos tubos se observ la aparicin de precipitado tras el paso de 30
min, la diferencia es que al agregar NaCl 0.15 M las protenas que se encontrabas precipitadas a
-10 C se volvieron a solubilizar, mientras que las trabajadas a temperatura ambiente se
mantuvieron precipitadas.
La precipitacin de las protenas ocurre por la disminucin de la cte. dielctrica de la solucin
acuosa al agregar un compuesto orgnico, lo cual puede llegar a ser til si se quiere separar y
reconocer distintos tipos de protenas mediante la regulacin de esta constante.
Esto demuestra que es posible evitar la desnaturacin de protenas cuando se trabaja a
temperaturas bajas.