Вы находитесь на странице: 1из 5

Tincin de Gram

La tincin de Gram o coloracin Gram es un tipo de tincin diferencial empleado


en microbiologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas.
Debe su nombre al bacterilogo dans Christian Gram, que desarroll la tcnica en
1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana como
para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana,
considerndose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color
violeta y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa.
Bacterias resistentes a la tincin Gram
La siguientes bacterias de naturaleza grampositiva, tien como gramnegativas:

Mycobacterias (estn encapsuladas)

Mycoplasmas (no tienen pared)

Formas L (prdida ocasional de la pared)

Protoplastos y esferoplastos (eliminacin total y parcial de la pared,


respectivamente)

Utilidades
En el anlisis de muestras clnicas suele ser un estudio fundamental por cumplir varias
funciones:

Identificacin preliminar de la bacteria causal de la infeccin.

Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los morfotipos


bacterianos identificados en la tincin de Gram se deben de corresponder con
aislamientos bacterianos realizados en los cultivos. Si se observan mayor
nmero de formas bacterianas que las aisladas hay que reconsiderar los medios
de cultivos empleados as como la atmsfera de incubacin.

A partir de la tincin de Gram pueden distinguirse varios morfotipos distintos: Los


cocos son de forma esfrica. Pueden aparecer aislados despus de la divisin celular
(Micrococos), aparecer por pares (Diplococos), formar cadenas (Estreptococos), o
agruparse de manera irregular (Estafilococos).
Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena
(Estreptobacilos) o en empalizada.
Tambin pueden distinguirse los espirales, que se clasifican en espirilos si son de
forma rgida o espiroquetas si son blandas y onduladas. Si por el contrario, poseen
forma de "coma", o curvados, entonces se los designa vibriones.

Fundamentos de diferenciacin de Gram positivo y Gram negativo


Los fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares
de las bacterias Gram positivas y Gram negativas
La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de
peptidoglucano, adems de dos clases de cidos teicoicos: Anclado en la cara interna
de la pared celular y unido a la membrana plasmtica, se encuentra el cido
lipoteicoico, y ms en la superficie, el cido teicoico que est anclado solamente en el
peptidoglucano (tambin conocido como murena)
Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se
encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (de composicin
distinta a la interna) por medio de lipoprotenas. Tiene una capa delgada de
peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoprotenas. La membrana
exterior est hecha de protena, fosfolpido y lipopolisacrido.
Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien diferencialmente debido a estas
direrencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el
material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo
poseen en mucha mayor proporcin que las Gram negativas.
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin, se debe a que la
membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgnicos, como
por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es
demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que
se form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdindose la
coloracin azul-violcea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared
celular ms resistente y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son susceptibles
a la accin del solvente orgnico, sino que este acta deshidratando los poros
cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y
manteniendo la coloracin azul-violcea.
Tincin de gram
A pesar de que fue desarrollada en el siglo XIX la tincin de gram es la ms
utilizada en el diagnstico microbiolgico. De hecho la informacin que ofrece
relativa a la composicin de la pared bacteriana es la base de todas las
taxonomas en este reino.
Se trata de una tincin diferencial que distingue entre bacterias con pared gruesa
(gram positivas) y bacterias con pared fina y membrana externa (gram
negativas). La mayora de las bacterias presentan una de estas dos morfologas
generales.

La tincin de gram utiliza violeta de genciana como colorante primario. Tras su


aplicacin todos los microorganismos se tien de violeta. Despus el lugol acta como
mordiente, acentuando la penetracin del colorante primario. El tercer paso consiste
en la aplicacin del decolorante, una mezcla de alcohol y acetona que elimina el
violeta excepto en las bacterias con pared gruesa. Por ltimo el colorante secundario o
de contraste, la safranina, tie de rojo las bacterias decoloradas, es decir las de pared
fina. En resumen las bacterias gram positivas quedan teidas de violeta y las gram
negativas de rojo
Tincin de Ziehl Neelsen
Mycobacterium tuberculosis visualizacin usando la tincin de Ziehl-Neelsen.
La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin diferencial rpida y
econmica, para la identificacin de microorganismos patgenos, por ejemplo M.
tuberculosis.
Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes, Franz Ziehl (1859 a 1926), un
bacterilogo y Friedrich Neelsen (1854 to 1894), un patlogo.
Fundamento [editar]
Este mtodo se basa en que las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias
contienen cido graso|cidos grasos (por ejemplo, el cido miclico) de cadena larga
(50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin
con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se
denominan cido-alcohol resistencia|bacilos cido-alcohol resistentes o BAAR. Las
Mycobacterium|micobacterias como Mycobacterium tuberculosis|M. tuberculosis y
Mycobacterium marinum|M. marinum y los parsitos cocoLa coloracin clsica de
Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras
Tincin de Ziehl-Neelsen
Tambin es una tincin diferencial. Se denomina tincin cido-alcohol resistente y
es especfica para una serie de bacterias con estructura de pared particular, las
micobacterias. La pared de las micobacterias no est basada en peptidoglicano
como las bacterias gram positivas y gram negativas, sino en cidos miclicos.
Esta particularidad las hace resistentes a la decoloracin con cido y alcohol que
no se produce en casi ningn otro tipo bacteriano.

La tincin de Ziehl-Neelsen utiliza tres reactivos. El colorante primario es la


fucsina que tie toda la preparacin de rojo brillante. Como mordiente se utiliza
flameado de la preparacin con el colorante. La solucin decolorante elimina el
colorante primario excepto el los bacilos cido alcohol resistentes. (BAAR). Por
ltimo el azul de metileno tie de azul el resto de la preparacin.
Esta tincin es til en la deteccin de bacterias del gnero Micobacterium en
muestras de esputo. La presencia de bacilos rojos sobre fondo azul constituye un
diagnstico casi definitivo de tuberculosis.

Tincin de esporas
Alunas bacterias son capaces de desarrollar formas de resistencia denominadas
esporas como mecanismo de defensa a agresiones ambientales. Son estructuras
de pared gruesa en las que el microorganismo logra soportar las condiciones
desfavorables de calor, desecacin, acidez, etc. Cuando las condiciones
ambientales vuelven a ser favorables las esporas "germinan" y vuelven a
generarse formas vegetativas. Slo algunas bacterias son capaces de formar
esporas y esta caracterstica puede en algunos casos orientar el diagnstico.

Estn descritos varios mtodos para teir esporas. Quizs el ms utilizado sea el
de Wirtz-Conklin o tincin con verde malaquita. Este colorante se une fuertemente
a las esporas gracias a la utilizacin de calor como mordiente. La fase de
decoloracin en este caso se realiza con agua abundante. Las formas vegetativas
pierden el color verde y se tien con el colorante de contraste (fucsina o
safranina).
La deteccin de esporas debe realizarse en cultivos con condiciones estresantes
para la clula. Suelen utilizarse cultivos viejos en los que la escasez de nutrientes
provoca la esporulacin de las bacterias.
La presencia de esporas en el mbito clnico no dirige hacia los gneros
Clostridium y Bacillus. Algunas esporas se desarrollan sin deformar a la clula
vegetativa. Otras si lo hacen y generan segn la disposicin formas centrales o

terminales (palillo de tambor). La posicin relativa y la morfologa de la espora


constituyen caracteres taxonmicos en las especies de ambos gneros.