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Tema :
ACCIN BASTERIOSTATICA DEL
CRISTAL VIOLETA ACCION
OLIGODINAMICA DE LOS METALES
PESADOS

Profesor :
TELLO CEBREROS
JORGE GILBERTO
Alumnos :
OYARDO RUIZ JAVIER
20051299H

2015 I
INDICE

OBJETIVO

FUNDAMENTO TEORICO

PROCEDIMIENTO

RESULTADOS

CONCLUSIONES

10

RECOMENDACIONES
.

11

CUESTIONARIO
..

11

BIBLIOGRAFIA
..

15

1. OBJETIVO:
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Demostrar el efecto de diferentes concentraciones de cristal violeta
sobre bacterias Gram positivas y gram negativas.
Tambin es demostrar como las concentraciones en que se
diferencia cada crisol varia el crecimiento de microorganismos
Hacer la tincin gram para determinar si dicha bacteria es cocos o
bacilos segn los pasos que habamos hecho con anterioridad
Otro tambin es saber a qu tipo de agrupacin pertenece dicha
bacteria

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS

Demostrar la accin oligodinmica de algunos metales
Determinar el por qu no presenciamos crecimiento cerca a la
moneda pero si lo hubo alrededor, mientras ms lejano a la moneda
ms crecimiento se notara
Tener bien presente los pasos a seguir ya que cualquier error nos
podra llevar a unos resultados errneos.
Denotar las diferencias de cada grupo para ver las diferencias y
similitudes y as poder saber en qu se equivoco cada grupo.

2. FUNDAMENTO TEORICO:

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

Los colorantes del grupo trifenilmetano presentan una marcada
accin bacteriosttica selectiva sobre las bacterias Gram positivas,
en diluciones que aparentemente no afectan a las Gram negativas.
Esta propiedad se aprovecha mediante la incorporacin de alguno de
esos colorantes en medios de cultivo con el fin de facilitar el
aislamiento de bacterias Gram negativas.
Entre los colorantes usados con estos propsitos estn: cristal

violeta, fucsina bsica, verde brillante y verde malaquita .

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS

Los iones de algunos metales pesados en altas diluciones son
capaces de ejercer una accin txica sobre las bacterias y otros
microorganismos. Si se coloca una moneda o un trozo de cobre
debajo o sobre un medio de cultivo slido recin inoculado con un
microorganismo, luego de incubar se puede observar que no hay
crecimiento en la zona alrededor del metal. Esta es la zona
oligodinmica; con frecuencia las colonias en el borde del halo de
inhibicin son de mayor tamao que en el resto de la placa, debido a
que tuvieron una mayor disponibilidad de nutrientes que no fueron
utilizados en la zona sin crecimiento.
Accin oligodinmica, son activos en muy bajas concentraciones
(ppm). Inactiva especficamente enzimas claves al reaccionar con
grupos SH. Son muy txicos y su actividad disminuye con la
existencia de fluidos biolgicos.

3. PROCEDIMIENTO:
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Primero tuvimos que haber preparado el agar nutritivo:

Primero pesamos y trituramos el agar nutritivo.

Vertimos el agar en un vaso precipitado y agregar 375ml de
agua y mover con la bagueta.
Continuamos con la dilucin del agar, como no se disuelve
todo aumentamos la temperatura para aumentar la solubilidad
de la solucin y despus de ello los separamos en 25 tubos
de prueba de 15ml y tapamos los tubos con algodn
Despus se colocan los tubos en una canastilla y luego se
coloca en el autoclave.
Esterilizar los materiales a usar en el horno. Esterilizacin del
Agar en el autoclave a 121C por 15 min.

Una vez obtenido el agar nutritivo comenzamos con las soluciones

del cristal.
Para la solucin 1/10000, transferimos 1 ml del cristal violeta de una
concentracin de 1/1000 a un tubo de 9 ml de agua

Para la solucin 1/100000, transferimos 1 ml de cristal violeta de una

concentracin de 1/10000 a un tubo de 9 ml de agua
Para la solucin 1/1000000, transferimos 1 ml de cristal violeta de
una concentracin de 1/100000 a un tubo de 9 ml de agua

Luego mezclamos las

el agar nutritivo,
tubos de ensayo y echar
agua
destilada,
ayudados
pipeta

diluciones con
tomamos 3
9 ml de

con una
de
1ml.
Sacar
con
una
pipeta
y una

bombilla 1ml del cristal violeta (0.1%) y echarlo en el tubo N1.

Proceder a sacar 1ml del tubo N1 con pipeta de 1ml y echarlo en el
tubo N2. Proceder a sacar 1ml del tubo N2 ayudado de una pipeta
limpia de 1ml y echarlo en el tubo N3.
Flameamos el tubo con agar nutritivo y echamos en una placa petri,
este primer tubo se echara en la placa N1 que no contiene colorante
y nos servir de control.

Luego vertir el agar fundido en las tres placas petri restantes y

mezclar bien el colorante con el agar rotando suavemente la placa,
para obtener una distribucin uniforme de colorante.

Cuando ha solidificado el agar, dividir las placas en dos regiones

iguales y nombrarlos A y B.
Divisin de las placas en zonas A y B para inocular con los
microorganismos.
Incubar las placas a 37C durante 48 horas.

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS

Limpiamos la moneda de diez cntimos dentro de una solucin cuya

concentracin es del 10% de acido ntrico
Lavar la moneda con agua para quitarle lo acido
Colocar la moneda en el centro de la placa petri

Tomar un tubo con agar nutritivo fundido mantenido a 45c

Inocular el tubo con agar con una gotita del cultivo, tomada con el
asa del inoculador
Rotar el tubo alrededor de la palmas para tener una distribucin
uniforme
Verter el agar dentro de la placa petri que contiene la moneda
Dejar que solidifique el agar, invertir la placa e incubarla a 37 C por
48 horas

4. RESULTADOS :
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

Grupo N 1

Grupo N
2
A
B

Grupo N
3
A
B

Dilucin

1/10000

1/100000

1/100000
0
Sin
Colorante

(+)
(-)

Grupo N 4

Grupo N
5
A
B

Hay crecimiento
No se puede determinar

Haciendo la tincin identificamos con el microscopio si es gran positiva o gran

negativa y tambin determinar el grupo al que pertenece
Grupo

Colonia A

Colonia B

N 1

Gram positivo

Estreptobacilos

Gram positivo

Estreptobacilos

N 2

Gran positivo

Estafilococos

Gram positivo

---

N 3

Gram positivo

Estafilococos

Gram positivo

Estreptobacilos

N 4

Gram negativo

Estreptobacilos

Gram positivo

--

N 5

Gram negativo

Cocos

Gram negativo

Estreptococos

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS

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Grupos
Grupo N 1

Crecimiento
Hubo crecimiento escaso alrededor de la moneda

Grupo N 2

Experimento fallido

Grupo N 3

Hubo crecimiento escaso alrededor de la moneda

Grupo N 4

Experimento fallido

Grupo N 5

Hubo crecimiento abundante y uniforme alrededor de la moneda

GRUPO N1, 2, 3, 5:

5. CONCLUSIONES

ACCION

BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

Una de nuestras conclusiones a la que podamos llegar es como
varia la cantidad de microorganismos en las diluciones utilizadas

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Tambin llegamos a la conclusin de algo que ya sabamos por

medio de la teora, por ejemplo que en 1/10000 no bamos a notar
ninguna de las dos bacteria (Escherichia Coli y Bacillus Subtilis), en
cambio que en 1/100000 bamos a notar solo el crecimiento de la
Escherichia Coli y que en 1/1000000 iba haber crecimiento de
ambos.
A esa conclusin fuimos capaces de llegar, ya que utilizamos la
tincin gram y combinado con el microscopio (objetivo 97) para
determinar a la bacteria, no solo para saber si era cocos o bacilus,
sino que tambin para poder afirmar que agrupacin pertenece.

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS

Se observa la accin oligodinmica de los metales pesados, ya que
se nota que el crecimiento de microorganismos en un cultivo, es
afectado por la presencia de metales pesados. por lo que se logra
diferenciar tres zonas: la zona oligodinmica, zona de estimulacin y
de crecimiento normal.
Se pudo notar un crecimiento de bacterias pero alejados de la
moneda de diez cntimos en las zonas de estimulacin y de
crecimiento normal
Se diferencian tres zonas: la zona oligodinmica (que es una zona
despejada donde no aparecen colonias), zona de estimulacin (zona
angosta donde se presenta un crecimiento abundante) y la zona de
crecimiento normal (se presenta en todo el resto del agar).debido a
eso las cantidades diminutas de iones metlicos estimulan el
crecimiento mientras que concentraciones mayores producen
inhibicin.

6. RECOMENDACIONES:
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Al extraer el agar nutritivo de la autoclave debemos mantenerlo a
una temperatura de 45 C para evitar que se solidifique, ya que si
este se solidifica perjudicara en los resultados del experimento.

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Se debe esterilizar correctamente el inoculador antes de usarlo para

extraer el cultivo.
Tener cuidado cuando se utiliza el acido ntrico en la limpieza de la
moneda, evitar el contacto directo con este, haciendo uso de
instrumentos adecuados como guantes, mascarillas para no
respirara el gas del acido , ya que este puede causar quemaduras o
irritaciones en los ojos,etc.
La realizacin del estriado en las zonas A y B de cada placa deben
tratar de realizarse en forma uniforme para poder notar las posibles
diferencias entre las placas conteniendo diluciones del cristal violeta
y la placa correspondiente al control (1/1000). Y con la menor
cantidad de microorganismo posible.

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS

Cuando desinfectamos la moneda de diez cntimos nos hizo falta la
seguridad de que en el momento de que nosotros pongamos en las
placas petri siga estando estril ya que en el trayecto estuvo
expuesto al aire
Otro tambin fue nuestras manos, las cuales no estaban
desinfectadas y as cogimos la moneda de diez cntimos, es por eso
que notamos un leve crecimiento de microorganismos.

7. CUESTIONARIO
1. Explicar qu es un agente bacteriosttico.
Un efecto bacteriosttico es aquel que aunque no produce la muerte a una
bacteria, impide su reproduccin; la bacteria envejece y muere sin dejar
descendencia. Un efecto bacteriosttico est producido por sustancias
bacteriostticas. Estas sustancias son secretadas por los organismos como
medios defensivos contra las bacterias.
2. Qu es una accin bacteriosttica selectiva?, Indique algunas aplicaciones
prcticas de este fenmeno.

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3. A qu se debe la accin oligodinmica? Indique algunas aplicaciones:

ACCION OLIGODINAMICA: Es la propiedad que tienen ciertos metales,
especialmente la plata, de ejercer efectos letales sobre las bacterias
COMPUESTOS DE PLATA: en cantidades pequesimas. El mecanismo de accin
de la plata est estrechamente relacionado a la interaccin de los iones plata con
grupos suldhidrilo (SH-), y esta actividad antimicrobiana va a depender de la
acumulacin intracelular de bajas concentraciones de iones plata, que interactan
con las enzimas, protenas y cidos nucleicos produciendo cambios estructurales
en la pared celular bacteriana, membranas y cidos nucleicos afectando su
viabilidad.

8. BIBLIOGRAFIA:
PELCZAR, Michael J. et al. Microbiologa. Mexico, Ed. Mc GrawHill,
1982.
FRAZIER, W.C. y D.C. Westhoff, Microbiologa de los Alimentos
THATCHER, F. S. y D. S Clark. Anlisis microbiolgicos de los
alimentos.
Espaa. Acribia, 197
Bacteriologa A. J. Salle 4ta edicin ao 1960
MICROBIOLOGIA, Autor: Thomas D. Brock, Michael T. Madigan
Sexta Edicin 1991

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