I-

INTRODUCCION

El estudio detallado de los componentes de clulas y tejidos animales o

vegetales, por el tamao que poseen, requiere el uso de instrumentos
que permitan ampliar muchas veces ms la imagen de las estructuras
que los constituyen.
El instrumento que fue empleado por los primeros bilogos para
estudiar la clula y los tejidos, es el microscopio. El nombre deriva
etimolgicamente de dos races griegas: mikrs, que significa pequeo y
skopoo, que significa observar. Es decir el microscopio es un
instrumento que sirve para observar objetos o estructuras pequeas.

II-

OBJETIVOS

Al finalizar la prctica el estudiante estar en condiciones de:

1- Manejar correctamente el microscopio y reconocer sus partes,
as como observar preparados en fresco y seco.
2- Obtener correctamente un preparado en fresco y en seco y usar
adecuadamente los colorantes cidos, bsicos y neutros en las
preparaciones microscpicas.

III-

MATERIAL Y METODOS

Microscopio
Mechero
Azul de metileno
Gradillas
Asa de koll
Wright
Pipetas
Eosina
Leishman
Materiales que debe traer el alumno.

Agua estancada
Laminas y laminillas
Algodn
Alcohol
Lanceta
Gotero
Fosforo

1- Preparados en Fresco:
Son aquellos en donde la sustancia examen no se encuentra fija en la
lmina porta-objeto, est sumergida en una sustancia liquida y

generalmente se utiliza una laminilla cubre-objetos para las

observaciones. Esta clase de preparados se observa comnmente con
objetivos a seco y el microscopio en posicin normal (vertical).
2- Preparados en Seco:
Son aquellos donde la sustancia examen se encuentra fija a la lmina
portaobjeto
La observacin de estos preparados, se hace generalmente con el
objetivo de inmersin, aunque inicialmente se utilizan objetivos de
menor aumento.
Los preparados en seco se hacen por extensin o frotis.
-

Extensin:
Consiste en extender la sustancia examen en la lmina
portaobjeto, tratando de hacerlo en el centro, uniformemente
posible, utilizando para ello un asa de koll, monta dientes.

Frotis
Consiste en extender la sustancia examen en el portaobjeto,
utilizando para ellos dos laminas portaobjeto, utilizando para ello
dos laminas portaobjetos. En el tercio externo de una de ellas se
coloca la sustancia examen, sobre el cual se coloca el borde de la
otra lamina, de tal manera que forma un ngulo de 45gracos
aproximadamente. Despus de observar que la sustancia examen
se extienda en todo el borde de la lmina superior, deslizar esta
hasta el otro extremo, mediante un movimiento rpido, tratando
de obtener un frotis fino y uniforme.

Fijacin
Consiste en matar la clula, tratando de conservar su estructura
morfolgicamente mantenindola adherida a la lmina
portaobjeto.

IV-

DESARROLLO

PROCEDIMIENTO
A- Preparados en Fresco
1- Limpiar una lmina portaobjeto con un pedazo de lino o con papel
para lentes
2- Con un gotero, colocar una gota de agua estancada en el centro
de la lmina portaobjetos y sobra la muestra el cubre objeto
(laminilla).
3- Efectuar la iluminacin del microscopio.
4- Colocar el portaobjetos en la platina del microscopio, fijarla con las
pinzas, La parte que contiene el cubreobjetos y la preparacin,
deber estar sobre el orificio de la platina.
5- Enfocar, mientras observa por el ocular eleve ligeramente el tubo
con el tornillo micromtrico hasta que se visualice el preparado,
haga la imagen ms ntida con el tornillo micromtrico
6- Ajuste el ajuste de la intensidad de la luz se har con diafragma
7- Se enfoca girando el tornillo micromtrico lentamente hacia
delante para obtener detalles en varios niveles.
8- Las observaciones se inician con el objeto de pequeo aumento
procurando enfocarlo bien.

B- Preparado en Seco
a) Coloracin Simple:
Cuando se emplea un solo colorante acido o bsico
PROCEDIMIENTO
1- Extincin o frotis sustancia examen, sarro
2- Fijacin: al alcohol, etc.
3- Agregar de una o tres gotas con un colorante acido o bsico
dejar reposar por 2minut.
4- Lavar: en agua corriente hasta que salga incolora
5- Secar: al medio ambiente o a calor moderado
6- Observar a objetos de menor a mayor aumento
7- Observar a inmersin: colocar una gota de aceite de cedro

b) Coloracin Neutra
Cuando se emplea un colorante, que se va a disociar en su parte
acida y bsica
PROCEDIMIENTO
1- Obtencin de muestra: con una lanceta estril realizar una
puncin en el dedo medio
2- Frotis: sustancia examen, sangre.
3- Colorear con o tres gotas de colorante Leishman,
inmediatamente agregar las mismas gotas de agua destilada.
4- Lavar: con agua destilada.
5- Secar: al medio ambiente.
6- Observar: objetivos de pequeo, mediano y gran aumento.
7- Observar a inmersin colocar una gota de aceite de cedro .
9-

V-

CUESTIONARIO

1- Cul es la diferencia entre un microscopio ptico y uno

electrnico?

Elemento

Microscopio
ptico
De cristal o vidrio,
con distancias
focales fijas

LENTES

AUMENTO

ALTO VACO

Magnticas, a partir de
metales magnticos,
alambre de cobre
enrollado, cuya distancia
focal vara en relacin con
la corriente que pasa por la
bobina de cobre

Se consigue
El aumento del objetivo es
cambiando los
fijo (distancia focal)
objetivos, rotando el mientras que la distancia
revlver
focal de la lente proyectora
vara para lograr los
aumentos

Pequea, por lo que

se pueden ver
PROFUNDIDA diferentes planos de
D DE CAMPO enfoque al mover el
tornillo
micromtrico

FUENTE DE
LA
RADIACIN

Microscopio electrnico

Mayor, por lo que se puede

ver enfocado todo el
espesor del corte ultra fino
del espcimen

Haz de luz: fotones.

Generalmente
situada por debajo
del espcimen
(aunque hay
excepciones)

Haz de electrones.
Ubicada siempre en lo alto
del instrumento, por
encima del espcimen

No es necesario

Imprescindible, para
facilitar el desplazamiento
de los electrones

RESOLUCIN 0,2 m

0,2nm

2- Porque se utiliza el aceite de cedro en la observacin con

los objetos de inmersin?
Es una tcnica de observacin que no compete a la preparacin misma
de la placa, sino a la correccin de un problema de difraccin de la luz
en el microscopio. Para ello se utiliza en aceite de cedro o de inmersin,
una gota del cual debe ir colocado entre el objeto y el objetivo de 100x,
necesitando estos, estar en contacto directo.
Funcin del aceite de inmersin
Sabemos que el aire tiene tambin un ndice de difraccin de la luz
aunque no muy considerable. En el microscopio, la luz que sale de la
fuente y atraviesa el condensador, llega al objeto al cual debe iluminarlo
a trasluz, para luego recorrer una columna de aire hasta llegar al lente
objetivo. Este ltimo tiene un ndice de difraccin de la luz equivalente a
1.1515, muy superior al de la columna de aire, lo cual produce una
alteracin en la visualizacin del objeto. El aceite de cedro que tiene un
ndice muy parecido al del objetivo, es colocado desplazando a la
columna de aire y resolviendo este problema en forma aceptable. Slo
debe usarse, sin embargo, con el objetivo de inmersin.

3- Qu tipo de imagen da el ocular y el objetivo

El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una imagen real
aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios estn
dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto focal del
ocular. Cuando se mira a travs del ocular se ve una imagen virtual

aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende

de las longitudes focales de los dos sistemas de lentes.

4- Como se calcula el nmero de aumento de una muestra?

Ejemplos
1- Observa por el ocular del microscopio. Esta impreso en la parte
superior cerca del lado, la potencia del lente ocular. Este ser un
nmero seguido de una "X", el nmero antes de la "X" es la
potencia del lente.
2- Observa el objetivo a travs de la lente ubicada en la base del
microscopio. Por lo general es un metal que se coloca justo encima
de la diapositiva. Determina el objetivo de la exploracin mediante
la observacin de los nmeros impresos en el lado de la lente. El
objetivo de la exploracin ser el primer nmero de la lente, antes
de la barra. Usa una lupa para encontrar el objetivo, si es
demasiado pequeo.
3- Multiplica la potencia del lente ocular por el objetivo de
exploracin, con una calculadora si fuera necesario. El nmero
resultante es el aumento total.
-

Muestra de orina:
Numero de ocular: 5x
Potencia de objetivo: 40x
Lente ocular x objetivo de exploracin = 200x

Muestra de hongo
Numero de ocular: 10x
Numero de objetivo: 4ox
Lente ocular x objetivo de exploracin = 400x

5- Esquematice comparativamente la formacin de imagen del

microscopio ptico con el microscopio electrnico.

VI-

BIBLIOGRAFIA

http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOW
EB/capitulo5_7.htm
http://www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/PDF/Portal%20de
%20Recursos%20en%20Linea/Apuntes/2_microscopia.pdf