UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

ASIGNATURA - FISIOLOGA MICROBIANA
DOCENTE-JUAN CARLOS PRADA HERRERA
PROGRAMA MICROBIOLOGA

IDENTIFICACIN DE ENTEROBACTERIAS A TRAVS DE PRUEBAS

BIOQUIMICAS CONVENCIONALES

GRELYS JOHANA TERNERA MEJIA

GINO FRANCHESCO OLIVIERI SALAS
KATHY GRISALES HERNANDEZ
IVONN CAROLINA SIMANCA MEDINA
HERNILDA HOYOS ANGULO
IDEZARETH HERNANDEZ MESTRE

VALLEDUPAR CESAR
2015

INTRODUCCIN

Los microrganismos son capaces de crear materia orgnica a partir de elementos

inorgnicos por eso deben nutrirse de acuerdo al medio en que se encuentren y
que en el interior del medio ocurran una serie de reacciones de sntesis y
descomposicin de sustancias orgnicas para su adecuado desarrollo. A partir de
estas caractersticas se realizan pruebas para la identificacin, para conocer su
metabolismo y su comportamiento frente a ellas. Las pruebas bioqumicas
convencionales siempre han representado un camino muy rpido para la
detencin directa de Enterobacterias porque son fciles de usar y revelar, el
tiempo que manejan es de 24h-48h y se proporcionan como herramienta til para
la caracterizacin de cada microrganismo.

OBJETIVOS

Realizar y analizar las diferentes pruebas bioqumicas convencionales que

se realizan para la identificacin de Enterobacterias.
Identificar el microrganismo estudiado, puesto que el equipo de trabajo no
lo conoca.
Analizar los respectivos resultados y por medio de ellos hacer una previa
interpretacin.

MARCO TEORICO
La capacidad de utilizar y transformar la energa es una de las propiedades
fundamentales de los sistemas vivientes. La energa puede hallarse en
muchas formas, pero aprovechables a los organismos vivos solo muy

pocas. La energa mecnica se libera por ejemplo, durante movimiento

celular, agitacin de cilios y flagelos, y las alteraciones de la forma celular;
la energa electromagntica se encuentra en forma de radiaciones (la luz es
la fuente de energa primaria para los organismos sintticos como las algas
y las plantas), la energa trmica es producida por la agitacin molecular y,
la energa qumica que es la contenida en los enlaces de sustancias y
puede ser liberada de los compuestos orgnicos e inorgnicos a travs de
ciertas reacciones. Las reacciones qumicas son acompaadas por cambios
en el nivel energtico. La energa requerida para que una reaccin inicie se
llama energa de activacin. Otros aspectos importantes a considerar es la
necesidad de la clula de poseer, adems de catalizadores, una reserva de
energa, esta servir para los procesos de sntesis celular y en la
conversin de sustratos a formar actividades. En la clula ocurre dos
importantes y opuestos procesos, y la generacin de energa y utilizacin
de ella en los procesos de sntesis celular, los cuales constituyen el
metabolismo, este es la suma de transformaciones de la materia que ocurre
en el interior de las clulas y que da lugar a la sntesis de material celular a
partir de sustancias nutritivas .El metabolismo puede dividirse para su mejor
estudio en tres aspectos diferentes pero ntimamente ligados; el
catabolismo que es la suma de reacciones exergnicas que permiten liberar
la energa contenida en los nutrientes o sustratos y ser acumuladas en
forma de ATP, u otros compuestos, el metabolismo intermedio que es el
conjunto de reacciones de los productos de hidrlisis del catabolismo y
algunos nutrientes son transformados en cidos orgnicos, esteres
fosfricos y otros compuestos como aminocidos, y el anabolismo que es la
parte del metabolismo implicado en la sntesis de macromolculas (cidos
nucleicos, protenas, sustancias de reserva y otros, todos reacciones
endergnicas). (Koneman, 2006).

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La
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identificacin
NcCGSpHcZxG2ZkctFaZcbVgh5tai1Q

http://www.elpais.com/recorte/2011
0526elpepusoc_5/SCO250/Ies/Bact
eria_mortal.jpg

de
un
aislamiento
bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de

caractersticas y diferentes criterios en la evaluacin de similitudes. Los

ensayos bioqumicos tradicionalmente utilizados, llamadas pruebas
bioqumicas convencionales, generalmente determinan la actividad de una
va metablica (conjunto de reacciones qumicas) a partir de un sustrato
que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer
transforma o no. Existen diferentes sistemas que facilitan la realizacin de
tales ensayos, porque proponen el mejor conjunto de pruebas bioqumicas
para la identificacin de un grupo bacteriano, porque simplifican la
interpretacin de un resultado utilizando un valor numrico, porque proveen
los reactivos listos para su uso o porque son totalmente automatizables.
Las pruebas o ensayos bioqumicos, son pruebas simples que se han
desarrollado para demostrar en forma clara una determinada caracterstica
bioqumica como presencia o ausencia de una determinada actividad
enzimtica, grupo de enzimas o determinada va metablica, crecimiento a
una determinada temperatura, crecimiento en presencia de inhibidores, etc.
No significan de ninguna manera un estudio profundo del metabolismo
bacteriano. Para llevarlas a cabo, se pueden utilizar diferentes sistemas de
trabajo (medio de cultivo, indicador, revelador, etc.) que puede ser diferente
an para el mismo ensayo si se trata de diferentes microrganismos. Por
ejemplo se debe suplir con factores de crecimiento el medio de cultivo para
estudiar la fermentacin de distintos azcares cuando se sabe que el
microrganismo en estudio es exigente.

http://www.elpais.com/recorte/20110605elpepisoc_4/XLCO/Ies/Bacterias_coli_
vistas_traves_microscopio.jpg

MATERIALES

Cepa bacteriana.
Microscopio.
Batera de pruebas bioqumicas convencionales (TSI, SIM, LIA,
CITRATO, RM, VP, UREA, FEA).
Gradilla.
Asas para siembra (redonda y en punta).
Mechero.
Fsforos
Reactivos para tincin de Gram (Cristal violeta, Lugol, alcohol
cetona, safranina, aceite de inmersin).
Alcohol
Algodn
Cinta para rotular
Lminas

PROCEDIMIENTO

Se toma una cepa bacteriana como parte del anlisis cuya finalidad es lograr
identificar que microorganismo est presente a travs del uso de una batera de
pruebas bioqumicas convencionales, no obstante la caracterizacin macroscpica
y la tincin de Gram hacen parte del anlisis.

Se ingres al laboratorio de microbiologa manteniendo las normas de

bioseguridad.
Se procedi a escuchar una breve introduccin de lo que ser la prctica a
realizar (pruebas bioqumicas de identificacin).
Escuchar con atencin las pautas, recomendaciones y normas para realizar
la prctica (indicaciones) por parte del profesor.
Observar con detenimiento y anotar todos los pasos realizados por el
docente al realizar una demostracin rpida de lo que ser la prctica a
realizar (pruebas bioqumicas de identificacin).
Preparar el rtulo respectivo para los tubo asignado (8 tubos por grupo)
(Fecha, agar, tcnica, muestra, T, nombre, grupo).
Plaquear los tubos asiganados, ya con los medios (agares) dentro de ellos,
para realizar la siembra.
Se realiz la identificacin de la morfologa colonial de la cepa tal y como se
percibe y se pudo observar que las colonias eran mediadas blanquecinas,
con una forma redonda u ovalada.
Luego se realiz la tincin de Gram con los respectivos reactivos y
respetando el tiempo para cada uno.
Se observ en el microscopio y se hizo una posible identificacin puesto
que se encontraron Bacilos cortos de color rosado.
Se tomaron fotografas y se anotaron los resultados.
Se procedi a inocular el microorganismo en las diferentes pruebas
bioqumicas para incubar a 37C y as determinar el nombre del
microorganismo teniendo en cuenta los resultados al revelar.

SIEMBRA EN AGAR HIERRO TRES AZUCARES (T.S.I)

Se tom de la placa con el medio de cultivo una muestra del

microorganismo con el asa de platino en forma de punta, previamente

flameada.
Luego el tubo de ensayo con tapa previamente rotulado en donde se

encuentra el Agar Hierro Tres Azucares.

Luego flamear el tubo al abrir y sembramos con el asa utilizando el metodo

de siembra por puncin.

Una vez realizada la siembra por puncin, antes de sacar el asa, de manera
inmediata, con mucho cuidado se realiz la siembra por estria de superfie,

guardando mucho cuidado para no romper el agar.

Cerrar despus de sembrar y colocar en la gradilla.

SIEMBRA EN UREA

Se tom de la placa con el medio de cultivo una muestra con el asa de

platino en forma de punta, previamente flameada.

luego el tubo de ensayo con tapa previamente rotulado en donde se

encuentra el urea agar.

Despus se flame el tubo al abrir y sembramos con el asa utilizando el

metodo de siembra por puncin.

Cerrar despus de sembrar y colocar en la gradilla.

SIEMBRA EN MR-VP MEDIO

Se tomaron de la placa con el medio de cultivo dos muestra del

microorganismo con el asa de platino en forma de punta, previamente

flameada.
Se tomaron los tubos de ensayo con tapa previamente rotulado en donde

se encuentra el MR-VP.
Luego se flamearon los tubos al abrir y se sembr con el asa utilizando el

metodo de siembra por resuspensin.

Cerrar despus de sembrar y colocar en la gradilla.

SIEMBRA EN AGAR CITRATO

Se tom de la placa con el medio de cultivo una muestra del

microorganismo con el asa de platino en forma de punta, previamente

flameada.
Se tom el tubo de ensayo con tapa previamente rotulado en donde se

encuentra el Agar Citrato.

Luego se flame el tubo al abrir y sembramos con el asa utilizando el
metodo de siembra por puncin para luego incubar.

SIEMBRA EN AGAR SIM

Se tom de la placa con el medio de cultivo una muestra del

microorganismo con el asa de platino en forma de punta, previamente

flameada.
Se tom el tubo de ensayo con tapa previamente rotulado en donde se

encuentra el agar SIM.

Luego se flame el tubo al abrir y se sembr con el asa utilizando el metodo

de siembra por puncin.

Cerrar despus de sembrar y colocar en la gradilla.
Luego de sembrar se llev a incubar a37C por 24h.

RESULTADOS
ANTES DE INOCULAR E INCUBAR

DESPUS DE INCUBAR A 37C DURANTE 24H

CEPA BACTERIANA

CARACTERIZACIN MICOSCPICA

ANLISIS DE RESULTADO
POSIBLES
MICROORGANISMOS

PRUEBA

RESULTADO

AGAR TRIPLE HIERRO Y

AZUCAR (TSI)
Color: rojo ladrillo
Inhibidores: no tiene
Indicador: rojo fenol
Sustratos Principales:
Lactosa, sacarosa y glucosa

A/A: El
microorganismo
fermenta glucosa,
lactosa y/o sacarosa.
Se present ruptura
del medio de cultivo lo
cual indica que hubo
produccin de gas.

E. coli
Klebsiella

K/K: El
microorganismo
descarboxila la lisina

Salmonella
E. coli

MEDIO LIA (LISINA HIERRO

AGAR)
Color: lila
Inhibidores: no tiene
Indicador: prpura de
bromocresol
Sustratos principales: lisina
y glucosa
SULFITO INDOL MOTILIDAD
(SIM)
Color: crema
Indicador: no tiene
Inhibidor: no tiene
Sustrato principal: peptona
Sustrato secundario:
tiosulfato sodico, hierro y
amanio
CITRATO
Color: verde
Inhibidor: no tiene
Indicador: azul de
bromocresol
Sustrato principal: citrato de
sodio
UREA
Color: Amarillo
Indicador: rojo fenol
Inhibidor: no tiene

ACIDO
SULFHIDRICO :
Negativo
E. coli
INDOL: Positivo
MOTILIDAD : Positivo
NEGATIVO: El
microorganismo ni
tiene la capacidad de
usar citrato como
nica fuente de
carbono y energa.

E. coli
Citrobacter
Klebsiella

NEGATIVO : El
microorganismo no
hidroliza la urea

E. coli
Salmonella
Klebsiella

 Sustrato principal: urea

FENILALANINA (FEA)
Determina la capacidad de un
organismo para desaminar el
aminocido fenilalanina en ci
do fenilpirvico
ROJO DE METILO
Para revelar la presencia de
productos cidos, y por la
adicin de alfa naftol e
hidrxido de potasio para
evidenciar la presencia de
productos finales neutros.
VOGES- PROSKAUER
La oxidacin del acetilmetil
carbinol a diacetilo el cual
reacciona con la peptona del
medio.

NEGATIVO: El
microrganismo no
tiene la capacidad de
desaminar la
fenilalanina

Klebsiella pneumoniae
E.coli

POSITIVO:
disminucin a un pH
acido en el medio

E. coli
Proteus mirabilis

NEGATIVO : El
microorganismo no
oxida la acetoina

Klebsiella
E. coli
Proteus mirabilis

Los resultados del anlisis de Enterobacterias despus de haber sido aisladas y

sometidas a diferentes pruebas bioqumicas se pudo clasificar en E. coli y lo que
se observ en el microscopio tambin fue fundamental para poder reconocer este
microorganismo. Se logr cumplir el tercer objetivo de esta prctica.

CONCLUSIN
Siempre es importante contar con las herramientas necesarias que faciliten
la identificacin de los microorganismos y las pruebas bioqumicas
convencionales son bastante til para esa identificacin, puesto que segn
los resultados que se obtengan imparten informacin clara y precisa sobre
el comportamiento de los microorganismos y la actividad enzimtica que
ellos posean.

BIBLIOGRAFIA

Elmer W. Koneman, Stephen Allen. Diagnostico Microbiolgico. Capitulo 6

pg. 280. Editorial Mdica panamericana. Ao 2006. Argentina, Espaa,
Mxico, Venezuela.
https://biotaetscientia.wordpress.com/2011/06/15/pruebas-microbiologicas-para-e-coli/
Da: 28-05-2015
Hora: 12:02 pm
http://es.slideshare.net/nataliaizurieta/laboratorio-no-5-pruebas-bioqumicas-8146300?
next_slideshow=2
Da: 28-05-2015
Hora: 11:30 am
file:///C:/Users/gifra/Downloads/1682472836.Bact_identificaci%C3%B3n_bioqu
%C3%ADmica_enterobacterias.pdf.
Da: 28-05-2015
Hora: 11:30 am