UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA UFSC

CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS

DEPARTAMENTO DE FITOTECNIA
Programa de Ps-Graduao em Recursos Genticos Vegetais

DESENVOLVIMENTO ESTRUTURAL ASSOCIADO

BIOLOGIA REPRODUTIVA DE Campomanesia xanthocarpa O.
Berg (MYRTACEAE)

Florianpolis - SC
2013

CRISTINA MAGALHES RIBAS DOS SANTOS

DESENVOLVIMENTO ESTRUTURAL ASSOCIADO

BIOLOGIA REPRODUTIVA DE Campomanesia xanthocarpa O.
Berg (MYRTACEAE).

Programa de Ps-graduao em
Recursos Genticos Vegetais, rea de
Concentrao em Recursos Genticos
Vegetais: Doutorado, no Centro de
Cincias Agrrias da Universidade
Federal de Santa Catarina (UFSC).
Orientador: Prof. Dr. Miguel Pedro
Guerra
Co-orientadora: Profa. Dra. Marisa
Santos

Florianpolis - SC
2013



Hoje me dou conta de que todas as coisas tm seu prprio momento

e que todo momento chega ao fim. Hoje me dou conta de que todas
as coisas desempenham um papel divino em nossas vidas e nos
enriquecem. Hoje me dou conta de que existe um novo agora,
com novos momentos, com outros objetivos. Nesse
momento encho-me de luz e alegria e agradeo
por tudo o que vivi! (Iyanla Vanzant)

Para Carlos Fernando e Ana Laura,

fiis e valentes companheiros
nesta caminhada.
Com todo meu amor!

AGRADECIMENTOS
Ao Programa de Ps-Graduao em Recursos Genticos
Vegetais, da Universidade Federal de Santa Catarina.
Ao Professor Dr. Miguel Pedro Guerra por ter acolhido e
orientado este trabalho, oportunizando meu crescimento profissional.
Professora Dra. Marisa Santos pela pacincia e orientao
competente neste processo de aprendizagem.
Familia Agapito, proprietria do stio onde esto as plantas de
Campomanesia xanthocarpa. Sem a oportunidade para as coletas, seria
muito difcil desenvolver todas as etapas deste trabalho.
Para Cres A. Ribas Hubner, porque sempre est presente nos
momentos importantes da minha vida.

RESUMO
Os recursos genticos de um pas, com rica diversidade biolgica como
o Brasil, possuem expressivo potencial de uso para a alimentao
humana e animal, obteno de fibras, pigmentos, condimentos, energia,
princpios ativos para produo de medicamentos, alm de
representarem um reservatrio de adaptabilidade gentica frente s
mudanas ambientais. As Mirtceas nativas destacam-se como fonte
potencial para diversos usos, por isso, existe a necessidade de melhor
estudar esses recursos. Neste sentido, o presente trabalho buscou
elucidar aspectos ligados biologia reprodutiva da Guabirobeira
(Campomanesia xanthocarpa O. Berg.) associados ao desenvolvimento
estrutural dos botes florais, elucidar os aspectos estruturais da
fecundao cruzada e de um possvel mecanismo de
autoincompatibilidade atuante, bem como estudar o desenvolvimento de
frutos, sementes e embries. Os resultados mostraram que a etapa de
florescimento dura, em mdia, 18 dias podendo-se dividir os estdios de
desenvolvimento dos botes florais em B, C, D1, D2, E (estdio balo) e
F (antese). O desenvolvimento dos andrfitos mostrou que os mesmos
so capazes de emitir o tubo polnico a partir do estdio D1. Em relao
ao desenvolvimento dos rudimentos seminais, a partir do estdio D1
ocorreu a intensificao da formao das estruturas de proteo e a
formao do saco embrionrio, embora este se complete somente no
estdio E. A espcie investe em estruturas de proteo nas spalas
(cutcula, glndulas de leo e tricomas) e em mecanismos ligados rota
transpiratria estomtica e fotossntese (abundncia de complexos
estomticos e cloroplastos). As ptalas servem de mecanismo de
proteo ao androceu e ao gineceu at a antese, devido presena de
glndulas de leo e ao formato convexo das clulas. O androceu
polistmone provavelmente assume papel de atrao aos polinizadores
pela abundncia de plen e material proteico que produz, alm de
desenvolver as anteras que garantem a produo de gametas funcionais
e facilitam a sua disperso no momento da antese, favorecendo a
polinizao cruzada. O gineceu estrutura-se de forma a facilitar a adeso
e a germinao dos gros de plen compatveis, o crescimento dirigido
dos tubos polnicos, a cpula e a descarga dos gametas nos rudimentos
seminais, com a consequente singamia, promovendo, assim a
fecundao. As glndulas de leo e os tricomas secretores so
estratgias extras adotadas pela espcie, no sentido de preservar as
partes florais dos estresses ambientais, biticos e abiticos, a fim de
garantir a perpetuao e a ocupao de novos espaos em seu hbitat

natural. O plen coletado na fase balo de desenvolvimento dos botes

florais pode ser utilizado em polinizaes controladas e esta espcie
apresenta alta eficincia reprodutiva, pois os tubos polnicos germinam
duas horas aps a polinizao cruzada, crescendo rapidamente e de
forma organizada, do estigma ao ovrio, com a penetrao nos
rudimentos seminais trs dias depois. Devido ao comportamento dos
tubos polnicos depois da polinizao geitonogmica pode-se concluir
que existe barreira autofecundao, sendo a Incompatibilidade
Homomrfica Gametoftica o mecanismo que melhor explica este
comportamento. Os frutos levam, cerca de, 42 dias para se
desenvolverem num padro sigmoidal que pode ser dividido em 5
estdios. Devido s estruturas ovarianas formadoras do fruto j estarem
presentes na pr-antese, esta fase de desenvolvimento da flor foi
includa como estdio I. O estdio II o mais longo (30 dias) e abrange
eventos como a fecundao e a embriognese (proembries, embries
globulares, embries nos estdios cordiforme e de torpedo, at sua
forma mirtide definitiva). O estdio III marca o incio do
amadurecimento perceptvel dos frutos atravs da mudana de colorao
e aumento em dimetro. O estdio IV um perodo de 2 dias com
amadurecimento pleno dos frutos e aprimoramento de padres
sensoriais. O estdio V o incio da rpida senescncia dos frutos da
espcie. Os frutos apresentam estruturas de proteo desde a epiderme
(tricomas e glndulas de leo) at as regies mais internas. Para garantir
a disperso das sementes, a espcie investiu na regio mediana do
pericarpo, formada por tecido parenquimtico rico em substncias
nutritivas que garantem a recompensa para os dispersores. As sementes
esto estruturadas de modo a proteger o embrio (cobertura com
mucilagem e substncias oriundas das glndulas de leo, reserva
alimentar no eixo hipoctilo-radicular e na hipstase), mas a
caracterstica recalcitrante e o curto perodo de viabilidade dificultam
sua utilizao.
Palavras-chave: Campomanesia xanthocarpa, biologia reprodutiva,
desenvolvimento estrutural, polinizao cruzada, autoincompatibilidade.

ABSTRACT
Genetic resources of a rich biodiversity country such as Brazil, have
high use potential for human and animal consumption, obtaining fibers,
pigments, spices, active principles for drug production, and represent a
pool of genetic adaptability in relation to environmental changes. Native
Mirtaceae species stand out as a potential source for several uses.
Taking this into account the present work seeks to elucidate aspects of
the reproductive biology of Guabirobeira (Campomanesia xanthocarpa
O. Berg) associated to the structural development of the flower buds, as
well as to elucidate the structural aspects of cross-fertilization and a
possible mechanism of self-incompatibility active and to follow the
development of fruits, seeds and embryos. The results showed that the
flowering stage takes about 18 days, dividing the development of floral
buds in B, C, D1, D2, E (balloon stage) and F (total opening of the
flower) stages. The pollen grains are able to emit the pollen tube starting
from D1 stage. After the stage D1 it takes place the intensification of
protective structures and the formation of the embryo sac, although this
is complete only in E stage. The species invests in protective structures
on the sepals (cuticle, oil glands and trichomes) and mechanisms related
to transpiratory, photosynthetic and stomatal routes (stomatal complexes
and chloroplasts). The petals are protection mechanisms for the
androecium and the gynoecium until the complete flower opening, due
to the presence of the oil glands and the convex shape of the cells that
form a barrier around the reproductive organs. The androecium polystaminate probably assumes the role of pollinator attraction due to the
abundance of pollen and protein material, in addition to developing
anthers which guarantee the production of functional gametes and
facilitate their dispersion at the anthesis, favoring cross pollination. The
gynoecium is structured to facilitate the adhesion and the germination of
the compatible pollen grains, directing the growth of pollen tubes, thus
facilitating coupling and the discharge of the gametes in the seminal
rudiments with consequent syngamy and fertilization. Oil glands and
trichomes are other strategies adopted by the C. xanthocarpa in order to
preserve the flowers of environmental, biotic and abiotic stresses, to
ensure the perpetuation of this species and the occupation of new spaces
in their natural habitat. The pollen collected in the balloon stage of
flower buds can be used in controlled pollinations. This species shows
high reproductive efficiency because the pollen tubes germinate two
hours after cross-pollination, growing rapidly and in an organized
manner, the stigma to the ovary with penetration, three days later, in the

seminal rudiments. Due to the behavior of pollen tubes after selfpollination, it can be concluded that there is a barrier to self-fertilization
and homomorphic gametophytic incompatibility is the mechanism that
best explains this behavior. The fruits take approximately 42 days to
develop, following a sigmoid pattern that can be divided into 5 stages.
The pre anthesis already had ovarian structures formative of the fruit
and thus this phase of flower development was adopted as stage I. The
stage II is the longest (30 days) and encompasses events like as
fertilization and embryogenesis (pro embryos, globular embryos, the
embryos in the cordate and torpedo stages, until its final form mirtide).
The III stage marks the beginning of the perceptible ripening of fruits by
changing color and increase in diameter. The stage IV is a rapid period
(2 days) for full ripening of fruits with enhancement of sensory patterns.
The V is the beginning stadium of rapid senescence of the fruits of this
species. The fruits have protective structures from the epidermis
(trichomes and oil glands) to the more internal regions of the pericarp.
In order to ensure seed dispersion, this species has invested in the
median region of the pericarp, through the presence of the parenchymal
tissue rich in nutrients, ensuring rewards for dispersers. The seeds are
structured to protect the embryo (covering it with mucilage and
substances contained in the oil glands and through the food reserves in
the root-hypocotyl axis and hypostasis) but the recalcitrant characteristic
and short viability of the seeds, hinders its use.
Keywords: Campomanesia xanthocarpa, reproductive biology,
structural development, cross-pollination, self-incompatibility.

SUMRIO
INTRODUO ................................................................................... 19
1- JUSTIFICATIVA ........................................................................... 21
2 - REVISO BIBLIOGRFICA...................................................... 25
2.1 FAMLIA MYRTACEAE: .......................................................... 25
2.2 CAMPOMANESIA XANTHOCARPA O. BERG .......................... 25
2.3 RGOS REPRODUTIVOS DAS ANGIOSPERMAS ............. 27
2.3.1 - Flores ......................................................................................... 27
2.3.1.1 Perianto (spalas e ptalas)..................................................... 27
2.3.1.2 Androceu (estames) ................................................................ 28
2.3.1.3 Gineceu (carpelos).................................................................. 28
2.3.2 Frutos ....................................................................................... 29
2.3.3 Sementes ................................................................................... 29
2.4 - CICLO BIOLGICO DAS ANGIOSPERMAS ........................... 30
2.5 FECUNDAO........................................................................... 30
2.6 - AUTOINCOMPATIBILIDADE (AI) ........................................... 31
2.6.1 - Autoincompatibilidade homomrfica gametoftica (AIG) ... 31
2.6.2 - Autoincompatibilidade homomrfica esporoftica (AIE) ..... 32
2.6.3 - Autoincompatibilidade heteromrfica (AIH) ........................ 32
2.6.4 - Autoincompatibilidade crptica (AIC) ................................... 33
2.6.5 - Autoincompatibilidade de ao tardia (AIT) ........................ 33
2.7 POLINIZAO CRUZADA ....................................................... 34
2.8 AUTOINCOMPATIBILIDADE EM C. XANTHOCARPA ......... 34
2.9 BIODIVERSIDADE .................................................................... 35
2.10 DOMESTICAO DE PLANTAS ........................................... 35
2.11 CULTIVO DE PLANTAS ......................................................... 36
2.12 CONSERVAO DE RECURSOS GENTICOS ................... 36
3 OBJETIVOS DA TESE ................................................................ 37
3.1 - OBJETIVO GERAL ..................................................................... 37
3.2 - OBJETIVOS ESPECFICOS ........................................................ 37
4 - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ......................................... 39
SEO I
DESENVOLVIMENTO DO PERIANTO, DO ANDROCEU E DO
GINECEU
DE
Campomanesia
xanthocarpa
O.
Berg
(MYRTACEAE) .................................................................................. 45

RESUMO ............................................................................................. 51
INTRODUO ................................................................................... 53
1. METODOLOGIA ........................................................................... 55
1.1. LOCAL DE REALIZAO DAS ATIVIDADES: ...................... 55
1.2 COLETA DOS RAMOS FLORAIS DE C. XANTHOCARPA .... 55
1.3 - ANLISE MORFOLGICA DO DESENVOLVIMENTO DO
PERIANTO, DO ANDROCEU E DO GINECEU DE C.
XANTHOCARPA................................................................................... 56
1.4 ANLISES ESTRUTURAIS DO DESENVOLVIMENTO DO
ANDROCEU E DO GINECEU DE C. XANTHOCARPA .................. 56
2 RESULTADOS E DISCUSSO .................................................. 61
2.1 ANLISES MORFOLGICAS DO DESENVOLVIMENTO DO
PERIANTO, DO ANDROCEU E DO GINECEU DE C.
XANTHOCARPA................................................................................... 61
2.2 ANLISES ESTRUTURAIS DO DESENVOLVIMENTO DO
ANDROCEU E DOS GROS DE PLEN DE C. XANTHOCARPA.. 67
2.2.1 Desenvolvimento do androceu ............................................... 67
2.2.2 Desenvolvimento dos andrfitos (gros de plen) ................ 70
2.3 ANLISES ESTRUTURAIS DO DESENVOLVIMENTO DO
GINECEU E DOS RUDIMENTOS SEMINAIS (VULOS) DE C.
XANTHOCARPA................................................................................... 73
2.3.1 Desenvolvimento do gineceu .................................................. 73
2.3.2 Desenvolvimento dos rudimentos seminais (vulos) ............ 76
3- CONCLUSO................................................................................. 81
4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ........................................ 83
SEO II
ANLISE ESTRUTURAL DAS PARTES FLORAIS DE
Campomanesia xanthocarpa O. Berg. (MYRTACEAE) .................. 87
RESUMO ............................................................................................. 91
INTRODUO ................................................................................... 93
1. METODOLOGIA ........................................................................... 95
1.1. LOCAL DE REALIZAO DAS ATIVIDADES ....................... 95

1.2 COLETA DOS RAMOS FLORAIS DE C. XANTHOCARPA..... 95

1.3 - ANLISES ESTRUTURAIS DO PERIANTO, DO ANDROCEU,
DO GINECEU E DAS ESTRUTURAS SECRETORAS DE C.
XANTHOCARPA ................................................................................... 95
2 RESULTADOS E DISCUSSO .................................................. 99
2.1 FLOR DE CAMPOMANESIA XANTHOCARPA ..................... 99
2.2 PERIANTO (CLICE E COROLA) DE C. XANTHOCARPA.... 99
2.3 ANDROCEU DE C. XANTHOCARPA ...................................... 104
2.4 GINECEU DE C. XANTHOCARPA .......................................... 108
2.5 ESTRUTURAS SECRETORAS EM C. XANTHOCARPA ....... 113
3- CONCLUSO ............................................................................... 117
4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ...................................... 119
SEO III
ANLISE DO PLEN, DA POLINIZAO CRUZADA E DA
POLINIZAO
GEITONOGMICA
EM
Campomanesia
xanthocarpa O. Berg. (MYRTACEAE): IMPLICAES PARA A
CONSERVAO E A DOMESTICAO.................................... 123
Abstract .............................................................................................. 131
INTRODUCTION ............................................................................. 133
MATERIAL AND METHODS ........................................................ 134
RESULTS AND DISCUSSION........................................................ 136
CONCLUSIONS ............................................................................... 151
REFERENCES .................................................................................. 153
SEO IV
DESENVOLVIMENTO
ESTRUTURAL
DE
EMBRIES,
SEMENTES E FRUTOS DE Campomanesia xanthocarpa O. Berg.
(MYRTACEAE) ................................................................................ 159
RESUMO ........................................................................................... 165

INTRODUO ................................................................................. 167

1. METODOLOGIA ......................................................................... 169
1.1. LOCAL DE REALIZAO DAS ATIVIDADES ..................... 169
1.2 COLETA DE RAMOS E DE BOTES FLORAIS DE C.
XANTHOCARPA................................................................................. 169
1.3 POLINIZAO CRUZADA CONTROLADA EM C.
XANTHOCARPA................................................................................. 169
1.4 - COLETA DE FRUTOS E EXTRAO DE SEMENTES E
EMBRIES ORIUNDOS DA POLINIZAO CRUZADA
CONTROLADA EM C. XANTHOCARPA......................................... 171
1.5 - ANLISE ESTRUTURAL DE EMBRIES, SEMENTES E
FRUTOS DE C. XANTHOCARPA ..................................................... 171
2 RESULTADOS E DISCUSSO ................................................ 175
2.1 ESTDIOS DE DESENVOLVIMENTO DOS FRUTOS DE C.
XANTHOCARPA................................................................................. 175
2.2 DESENVOLVIMENTO MORFOLGICO DE EMBRIES E
SEMENTES CORRELACIONADOS AO DESENVOLVIMENTO
DOS FRUTOS DE C. XANTHOCARPA ............................................ 178
2.3 ANLISE ESTRUTURAL DO DESENVOLVIMENTO DE
EMBRIES
E
SEMENTES
CORRELACIONADOS
AO
DESENVOLVIMENTO DOS FRUTOS DE C. XANTHOCARPA .... 182
2.3.1 Anlise estrutural aos cinco dias aps a polinizao
cruzada ............................................................................................... 182
2.3.2 Anlise estrutural aos dez dias aps a polinizao
cruzada ............................................................................................... 184
2.3.3 Anlise estrutural aos trinta e sete dias aps a polinizao
cruzada ............................................................................................... 187
2.3.4 Anlise estrutural do fruto maduro de C. xanthocarpa ..... 189
2.4 ANLISE MORFOLGICA DA SEMENTE E DO EMBRIO
MADURO DE C. XANTHOCARPA ................................................... 194
3 CONCLUSO ............................................................................. 199
4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ...................................... 201

19

INTRODUO
Esta tese contm o trabalho desenvolvido com a espcie nativa
Campomanesia xanthocarpa O. Berg. que buscou elucidar aspectos do
desenvolvimento estrutural associado biologia reprodutiva da planta.
Atravs de coletas em reas remanescentes de mata nativa de altitude,
no interior do municpio de Alfredo Wagner/Santa Catarina e utilizando
diferentes tcnicas disponveis em laboratrios da Universidade Federal
de Santa Catarina, foi analisado o desenvolvimento do perianto, do
androceu, dos andrfitos, do gineceu e dos rudimentos seminais desta
espcie. Procurou-se determinar o comportamento reprodutivo atravs
das polinizaes cruzada e geitonogmica controladas, alm de
acompanhar o desenvolvimento estrutural de frutos, sementes e
embries. Este documento foi dividido em uma parte introdutria
contendo uma reviso bibliogrfica e em sees que abordam de forma
detalhada o trabalho conduzido durante a realizao do Curso de
Doutorado em Cincias no Programa de Ps-Graduao em Recursos
Genticos Vegetais da Universidade Federal de Santa Catarina, no
estado de Santa Catarina, Florianpolis, Brasil.

20

21

1- JUSTIFICATIVA
Os recursos genticos de um pas, com rica diversidade biolgica
como o Brasil, possuem alto potencial de uso, especialmente no que diz
respeito criao de novas opes voltadas alimentao humana e
animal, obteno de fibras, madeira, pigmentos, condimentos, energia e
fornecimento de princpios ativos para produo de medicamentos.
Representam tambm, o reservatrio de adaptabilidade gentica, o qual
permite s espcies adaptaes s mudanas ambientais que se
manifestam de forma crescente em todo o planeta (RIDGEN &
CAVALCANTI, 2002).
Reconhece-se a importncia da grande variabilidade morfolgica
e fisiolgica das espcies nativas, no que se refere tolerncia s
condies edafoclimticas adversas, pois a flora nativa, milhares de
anos interagindo com o ambiente, passou por um rigoroso processo de
seleo natural que gerou espcies geneticamente resistentes e adaptadas
ao nosso meio (LORENZI, 1992).
Na lista da flora do Brasil publicada recentemente, esto
relacionadas 40.989 espcies (FORZZA et al., 2010). A despeito desta
riqueza de espcies vegetais nativas, a agricultura brasileira est apoiada
na explorao de poucas espcies exticas domesticadas (LEITE &
CORADIN, 2011). O setor agrcola um dos mais competitivos da
economia brasileira, produzindo em torno de 40% do produto interno
bruto do pas. Este segmento compreende todas as atividades e interrelacionamentos que ocorrem neste complexo de negcios, do qual
participam desde o consumidor final dos produtos agropecurios e seus
derivados at chegar s instituies de pesquisa e universidades que so
as bases de apoio desta cadeia. Quando se fala em complexo de
negcios, no se refere somente produo de alimentos, mas a outras
reas, como produo de ornamentais, reflorestamento, produo de
sementes, arborizao urbana, bem como ao novo Mercado
Ecolgico, que engloba os produtos verdes, como os fitoterpicos, a
conservao de germoplasma, a recuperao de reas degradadas, os
bioinseticidas, os cosmticos e os corantes (ALMEIDA, 1998).
Uma tendncia bsica, na sociedade moderna, a de explorar a
natureza, destruindo as riquezas naturais. O conceito de Agronegcio
remete a esta tendncia exploratria da natureza humana. Nos ltimos
anos, contudo, observa-se uma mudana neste conceito, quando se v a
modificao do pensamento humano na direo de uma melhor
qualidade de vida, sade e segurana alimentar, baseadas na
conservao e respeito natureza (MAIA, 2000). Para que o potencial

22

dos recursos genticos nativos seja efetivamente utilizado, necessrio

aprofundar o conhecimento das espcies e de seus usos, bem como
adotar estratgias apropriadas e iniciativas voltadas valorizao e ao
estmulo do uso dos componentes da flora nativa brasileira, por parte de
outros segmentos da sociedade, incluindo a indstria, o comrcio e as
populaes urbanas em geral (LEITE & CORADIN, 2011).
Ainda, segundo Leite & Coradin (2011), na Regio Sul do Brasil,
o uso dos recursos genticos vegetais nativos foi muito influenciado
pelo processo histrico de ocupao territorial. Os migrantes europeus
tiveram papel importante na introduo e disseminao de cultivos
comuns nos seus pases de origem, tais como centeio, cevada, aveia,
uva, ma, pra, ameixa e pssego, entre outras. No final do sculo XIX
e incio do sculo XX, a utilizao de recursos florestais nativos
alavancou o desenvolvimento dos trs estados do sul (Paran, Santa
Catarina e Rio Grande do Sul).
A despeito das constantes perdas nas reas de matas e campos, a
vegetao caracterstica da regio sul ainda persiste, bem como, ainda
persiste certa diversidade de espcies com potencial de uso pela
populao. Espcies frutferas como ing-banana (Inga uruguensis
Hook. & Arn.), buti (Butia capitata (Mart.) Becc.), araticum (Annona
sp.), amora (Rubus sp.), so utilizadas localmente, fazendo parte da dieta
das comunidades locais, especialmente da zona rural (RIZZINI &
MORS, 1995). O caraguat (Bromelia antiacantha Bertol.), a
guaatonga (Casearia sylvestris Sw.), a espinheira-santa (Maytenus
ilicifolia Mart. Ex Reissek), o pau-andrade (Persea major (Nees)
L.E.Kopp), a cataia (Drimys brasiliensis Miers), o jeriv (Syagrus
romanzoffiana (Cham.) Glassman), a bracatinga (Mimosa scabrella
Benth.), o catigu (Trichilia catigua A.Juss.), a taquara (Merostachys
multiramea Hack.), o cincho (Sorocea bonplandii (Baill.)W.C.Burger,
Lanj. & Wess Boer) e o bacupari (Garcinia gardneriana (Planch. &
Triana) Zappi) so exemplos de plantas nativas associadas a diversos
usos nas propriedades rurais da regio (LEITE & CORADIN, 2011).
As Mirtceas nativas destacam-se como fonte potencial para
diversos usos, especialmente alimentar, medicinal, ornamental,
reflorestamento, recuperao de reas degradadas e arborizao urbana,
podendo ser citadas a goiabeira-serrana (Acca sellowiana (O.Berg)
Burret), o sete-capotes (Campomanesia guazumifolia (Cambess.) O.
Berg), a guabirobeira (C. xanthocarpa O. Berg), a cerejeira-do-mato
(Eugenia involucrata DC.), a batinga (E. rostrifolia D. Legrand), a
pitangueira (E. uniflora L.), o araazeiro-do-mato (Myrcianthes
gigantea (D. Legrand) D. Legrand), o guabij (M. pungens (O. Berg) D.

23

Legrand), o araazeiro-vermelho (Psidium cattleyanum Sabine), dentre

outros (SANTOS, 2003). Atualmente, o uso das mirtceas nativas da
Regio Sul est fortemente associado s comunidades locais, sobretudo
em pequenas propriedades agrcolas, e s comunidades caiaras,
quilombolas e indgenas, especialmente no que se refere ao uso desses
recursos para fins energticos (lenha), para o consumo espordico de
frutas, alm do uso para fins medicinais (LEITE & CORADIN, 2011).
Por isso, existe a necessidade de gerar e disponibilizar tecnologia
de uso sustentvel, de forma a viabilizar a utilizao comercial desses
recursos. Para tal, necessrio o desenvolvimento de ferramentas
biotecnolgicas, para a conservao de germoplasma, a facilitao de
intercmbio de material vegetal e a multiplicao massal das espcies,
com o objetivo de valorizar e reintroduzir os recursos vegetais nativos
nos sistemas produtivos da regio, tais como as espcies nativas de
Myrtaceae. Neste sentido, o presente trabalho busca elucidar aspectos
ligados biologia reprodutiva de Campomanesia xanthocarpa, espcie
negligenciada da famlia Myrtaceae, classificada como prioritria e
apontada com uma Planta para o Futuro pelo projeto do Ministrio do
Meio Ambiente.

24

25

2 - REVISO BIBLIOGRFICA
2.1 FAMLIA MYRTACEAE:
Os sistemas de classificao botnica vm sofrendo mudanas ao
longo do tempo. No presente estudo, adotou-se o sistema Angiosperm
Phylogeny Group III (APG III, 2009). Desta forma, a famlia Myrtaceae
pertence Angiosperma, Eudicotiledoneas Nucleares, Rosideae, clado
das Malvdeas, ordem Myrtales. A famlia compreende cerca de 100
gneros e 3.000 espcies de rvores e arbustos, com distribuio por
todos os continentes, exceo da Antrtida, mas com ntida
predominncia nas regies tropicais e subtropicais do mundo
(MARCHIORI & SOBRAL, 1997). Constitui-se numa das famlias de
melhor representatividade nas diferentes formaes vegetacionais do
Brasil. Diversos autores (MORI et al., 1983; KLEIN, 1984; LEITOFILHO, 1993; BARROSO & PERON, 1994; SOARES-SILVA, 2000)
tm ressaltado a elevada riqueza especfica da famlia e a importncia
fitossociolgica de suas espcies para as florestas do Sul e Sudeste do
Brasil.
Os representantes das mirtceas esto distribudos em duas
subfamlias, Myrtoideae e Psiloxyloideae (WILSON et al, 2005).
Myrtoideae inclue todas as espcies americanas e brasileiras, sendo que
na vegetao do nosso Pas, elas abrangem 24 gneros: Acca O. Berg,
Blepharocalyx O. Berg, Calyptranthes SW, Campomanesia Ruiz &
Pav., Eugenia L., Gomidesia O. Berg, Hexachlamys O. Berg, Marlierea
Cambess, Myrceugenia O. Berg, Myrcia DC., Myrcianthes O. Berg,
Myrciaria O. Berg, Myrrhinium Schott, Neomitranthes D. Legrand,
Paramyrciaria Kausel, Plinia L., Psidium L. e Siphoneugena O. Berg).
As mirtceas nativas ocupam uma posio de destaque na fisionomia
das florestas sul-riograndenses, estando melhores representadas nas
Florestas Ombrfila Mista, Pluvial da Encosta Atlntica e, com menor
freqncia, nas Florestas Estacionais do Alto Uruguai ou da Serra Geral
(MARCHIORI & SOBRAL, 1997).
2.2 CAMPOMANESIA XANTHOCARPA O. BERG
Sinonmia: Campomanesia malifolia O. Berg
Nomes Comuns: Guavirova, guabiroba, gabiroba, guabirobeirado-mato.

26

A guabirobeira uma rvore de 10 a 25m de altura, com tronco

provido de caneluras, copa arredondada em indivduos isolados, com
densa folhagem verde-clara, semidecidual e ramos glabros. Folhas
opostas, simples, inteiras, longamente peciolodas e com odor
caracterstico. Flores solitrias ou em grupos, brancas, axilares,
hermafroditas, pentmeras. Frutos amarelos, globosos e coroados de
spalas, contendo numerosas sementes oval-achatadas com embries
mirtoides. Possui ampla rea de distribuio natural, que se estende
desde Minas Gerais e Mato Grosso do Sul, at o norte do Uruguai e
Provncia de Corrientes (Argentina). Habita, preferencialmente, stios
midos, na Floresta Estacional Caduciflia e Floresta Ombrfila Densa
(MARCHIORI & SOBRAL, 1997). planta decdua, mesfita e at
helifita e seletiva higrfita. Abundante nas partes midas das matas de
altitude (semidecduas e de pinhais), comum na floresta latifoliada
semidecdua da bacia do Paran e rara na mata pluvial da encosta
atlntica. Amplamente disseminada pela avifauna que ingere seus frutos
(LORENZI, 1992).
A madeira empregada para tabuado em geral, para confeco de
instrumentos musicais e cabos de ferramentas. A rvore apresenta copa
piramidal densa bastante decorativa podendo ser empregada no
paisagismo em geral. tima para o plantio em reas degradadas de
preservao permanente (LORENZI, 1992). A lenha apreciada para
sapecagem e torrefao da erva mate, pois desprende um aroma
agradvel durante a combusto (CORRA, 1984).
Em termos de morfologia e anatomia, a maioria dos trabalhos
aborda estudos das partes vegetativas adultas (ramos e folhas), da
germinao, das diferentes partes das plntulas da guabiroba ou
relacionados ao gnero Campomanesia. Neste sentido, salientam-se os
trabalhos de Gogosz et al. (2010), investigando a germinao e a
estrutura das plntulas de C. xanthocarpa crescendo em solo
contaminado com petrleo e solo bioremediado, e os de Slis (2000),
com estudos morfolgicos e anatmicos de folhas com domcias em C.
guaviroba (DC.) Kiaersk, entre outros.
A maioria dos estudos de composio bioqumica, em C.
xanthocarpa, concentra as anlises nos frutos, tanto em termos de
composio nutricional, como de potencial tecnolgico, e nas folhas,
relacionando o potencial medicinal da guabiroba. Como exemplos,
temos os trabalhos de Vallilo (2008), tratando da composio qumica
dos frutos, e os de Klafke (2009), abordando os efeitos em parmetros
bioqumicos, hematolgicos e de estresse oxidativo em pacientes
hipercolesterolmicos.

27

2.3 RGOS REPRODUTIVOS DAS ANGIOSPERMAS

2.3.1 - Flores
A flor um ramo altamente modificado constitudo de uma haste
(pedicelo) e de um receptculo, de onde emergem os apndices
modificados: spalas, ptalas, estames e carpelos. Pode apresentar-se
solitria ou agrupada em inflorescncias. composta por trs conjuntos
de rgos apendiculares: o perianto (apndices externos de proteo
e/ou atrao de polinizadores), o androceu e o gineceu. O perianto pode
ser diferenciado em clice (spalas) e corola (ptalas). O androceu
compreende o conjunto de estames (antera e filete) e o gineceu
compreende os carpelos (estigma, estilete e ovrio) (MARIATH et al.,
2006).
O crescimento da flor determinado, pois o meristema apical
cessa a atividade aps produzir todas as partes florais (ESAU, 1976).
Como estrutura, na qual a reproduo ocorre nas Angiospermas, a flor
sofreu vrias modificaes, durante a coevoluo com polinizadores
como insetos e pssaros. Estas modificaes envolvem estruturas como
o perianto e os nectrios (BECK, 2009). As flores tm sido estudadas
principalmente como fonte de caracteres de importncia taxonmica e
com relao a filogenia e a evoluo, porm, ressaltam Cutler et al.
(2007), sua funo primordial na reproduo tambm tem sido objeto de
muitas investigaes morfolgicas e fisiolgicas.
Esses autores
acrescentam que os estudos combinados de microscopia eletrnica de
varredura e ptica contribuem para esclarecer a evoluo das flores e de
outras caractersticas, como s relacionadas aos nectrios florais.
2.3.1.1 Perianto (spalas e ptalas)
As spalas so denominadas coletivamente de clice. Em muitas
flores so verdes e fotossintetizantes (BECK, 2009). Lembram folhas
quanto estrutura interna (parnquima fundamental, sistema vascular
mais ou menos ramificado e epiderme). Clulas portadoras de cristais,
laticferos, clulas taninferas e outros idioblastos podem estar presentes.
As spalas verdes contm cloroplastos, mas raras vezes mostram
diferenciao em parnquima palidico e esponjoso (ESAU, 1976).
As ptalas so denominadas coletivamente de corola e, junto com
o clice, formam o perianto. No so fotossinteticamente ativas, mas na
forma e na vascularizao so muito semelhantes s folhas.

28

Frequentemente contm pigmentos e fragrncias que atraem os

polinizadores (BECK, 2009). A cor das ptalas resulta de pigmentos
contidos em cromoplastos (carotenoides) e no suco vacuolar
(antocianinas) e de diversos outros fatores, como acidez do suco celular.
As paredes externas das clulas epidrmicas das ptalas podem ser
convexas ou papilosas, especialmente na face adaxial. Tanto spalas
quanto ptalas podem apresentar estmatos e tricomas na epiderme
(ESAU, 1976).
2.3.1.2 Androceu (estames)
O estame consiste em um filamento longo e frequentemente fino,
o filete, que termina numa antera a qual contm, normalmente, quatro
microesporngios. Sua principal funo a produo de gros de plen,
que aps a germinao, produzem tubos polnicos que contm dois
gametas (BECK, 2009).
O filete, haste delgada, provido de um nico feixe vascular, que
pode ser anficrival, sendo envolvido por parnquima. Este feixe vascular
termina no conetivo, regio localizada entre as duas tecas da antera. A
epiderme destas estruturas cutinizada e pode ter tricomas e estmatos.
A antera contm os microesporngios (sacos polnicos) e outras
camadas relacionadas com o desenvolvimento e liberao dos gros de
plen (ESAU, 1976).
2.3.1.3 Gineceu (carpelos)
Os carpelos constituem o gineceu que forma o ovrio, estilete e
estigma. O estigma o receptor do plen e a estrutura sobre a qual o
plen germina. O estilete ou estilo uma extenso fina que une o
estigma ao ovrio. uma estrutura especializada na conduo dos tubos
polnicos em crescimento (MARIATH et al., 2006). Estes autores ainda
acrescentam que o estigma e o estilete exercem frequentemente
importantes funes no processo de reconhecimento e seleo dos
andrfitos nos sistemas de incompatibilidade. O ovrio, poro basal,
contm os vulos que, aps fecundados, se desenvolvem formando as
sementes (BECK, 2009).
No ovrio distinguimos a parede e o lculo (cavidade), um ou
vrios, neste caso os ovrios multiloculados so separados por septos.
Os vulos originam-se na face interna ou adaxial da parede do ovrio,
regio que constitui a placenta, a qual pode ser uma excrescncia

29

conspcua e, em alguns casos, chega quase a obstruir o lume da cavidade

ovariana (ESAU, 1976).
Do ponto de vista histolgico, j na fase de antese, o ovrio e o
estilete apresentam epiderme, tecido fundamental parenquimtico e
feixes vasculares. A epiderme externa cutinizada, podendo apresentar
estmatos. Os vulos so formados pelo nucelo envolvendo o tecido
esporgeno, um ou dois tegumentos de origem epidrmica e um
pednculo, denominado funculo. Na antese, so formados por
parnquima, contendo um sistema vascular (ESAU, 1976). O nucelo o
esporngio, onde ocorre a esporognese, processo seguido pela
transformao do esporo vivel em gametfito feminino, que, aps
fecundado origina o embrio e o endosperma (MARIATH et al., 2006).
2.3.2 Frutos
As angiospermas apresentam grande variao na natureza e na
origem de seus frutos. H frutos carnosos e secos quando maduros, que
provm somente do ovrio da flor. Outros envolvem na sua formao
partes florais, como o receptculo, spalas, ptalas, estames e o eixo das
inflorescncias. Porm, o termo fruto o resultado do desenvolvimento
ou amadurecimento do ovrio. composto por duas partes: o pericarpo
e a semente. Existe entre o pericarpo e a semente uma relao de
dependncia fisiolgica, estrutural e ecolgica (SOUZA et al., 2006).
2.3.3 Sementes
O termo semente usado para designar o conjunto formado por
um esporfito jovem (embrio), um tecido de reserva alimentar
(endosperma) e um envoltrio protetor (BELTRATI et al., 2006).
Constitui a unidade reprodutiva das espermatfitas, cuja funo
relaciona-se com a disperso e a sobrevivncia das espcies. Nas
angiospermas, segundo os mesmos autores, a semente provm do vulo
como resultado de um processo conhecido como dupla fecundao, em
que um dos gametas masculinos une-se ao ncleo da oosfera dando
origem ao zigoto diploide e, posteriormente, ao embrio (novo
esporfito), enquanto o outro se funde com os dois ncleos polares do
saco embrionrio dando origem ao endosperma triploide.

30

2.4 - CICLO BIOLGICO DAS ANGIOSPERMAS

Na maioria das plantas, o ciclo biolgico envolve duas fases ou
geraes: a esporoftica (diploide) e a gametoftica (haploide), com
caractersticas alternantes (MARIATH et al., 2006). Nas Angiospermas,
a gerao assexuada, chamada de esporfito, esclarecem os autores,
desenvolve-se a partir de uma oosfera fecundada (zigoto) culminando
com a formao de uma flor ou inflorescncia, produzindo dois tipos de
esporos: andrsporos (micrsporos, andrfito= gro de plen) e
ginsporos (megsporos, saco embrionrio), em seus respectivos
esporngios androsporngio (microsporngios, saco polnico) e
ginosporngios (megasporngio, nucelo). A gerao sexuada,
denominada gametfito, pode ser masculina ou feminina. Os
gametfitos masculinos so os andrfitos (gros de plen) e os
femininos so os ginfitos (sacos embrionrios). Nas plantas com
sementes, complementam os autores, os gametfitos so plantas
sexuadas que dependem nutricionalmente do esporfito e que produzem
apenas gametas masculinos ou apenas femininos.
A evoluo das plantas vasculares em direo heterosporia
estabelece o carter unissexual dos gametfitos para todas as plantas
com sementes. As geraes gametofticas passam a ser nutricionalmente
esporfito-dependentes, isto , adquirem a condio parastica
(COCUCCI & MARIATH, 1995).
2.5 FECUNDAO
A aproximao dos dois gametas do andrfito aos dois gametas
do ginfito efetiva-se em cinco etapas: polinizao, acoplamento,
cpula, descarga dos gametas e singamia (MARIATH et al., 2006). A
polinizao consiste no transporte dos andrfitos (gros de plen) das
anteras at o gineceu da flor. O acoplamento a fase de aproximao
dos gametfitos, desde o estigma, atravs do tecido transmissor do
estilete, at o contato do tubo polnico com o aparelho filiforme das
sinrgides. A cpula consiste na penetrao de uma sinrgide, mediante
o desenvolvimento de um tubo copulador na extremidade do tubo
polnico. A descarga dos gametas ocorre aps a liberao do contedo
do tubo polnico no interior da sinrgide. Finalmente, esclarecem os
autores, a singamia compreende a fuso de um gameta com a oosfera
para formar o zigoto esporoftico (diploide), enquanto o outro gameta
fecunda as duas clulas mdias para formar o endosperma (geralmente
triploide).

31

2.6 - AUTOINCOMPATIBILIDADE (AI)

A autoincompatibilidade um dos mais importantes fenmenos
observados em angiospermas e sua ocorrncia evita a autofecundao e
possibilita
manter
uma
alta
diversidade
intraespecfica
(BARRETT,1988).
Brewbaker
(1959)
registrou
a
ocorrncia
da
autoincompatibilidade em, pelo menos, 71 famlias e em 250 de 600
gneros estudados. Estudos, realizados em cinco diferentes tipos de
florestas neotropicais, indicam uma percentagem variando entre 76 a
86% de espcies autoincompatveis (GIBBS, 1990).
Em casos extremos, plantas fortemente autoincompatveis no
formam frutos e sementes a partir de flores autopolinizadas, porm, na
maioria dos casos, a autoincompatibilidade se expressa por uma baixa
produtividade de frutos e sementes em resposta autopolinizao,
quando comparado ao nmero de sementes e frutos formados em
resposta polinizao cruzada (BITTENCOURT JR, 2003).
Entre os sistemas de autoincompatibilidade, mais frequentemente
estudados nas diversas espcies vegetais, destacam-se: a
autoincompatibilidade homomrfica gametoftica (AIG), a homomrfica
esporoftica (AIE) e a heteromrfica (AIH). Estes sistemas so
geneticamente controlados por mecanismos que previnem a germinao
do prprio plen sobre o estigma, ou impedem o desenvolvimento do
tubo polnico at o ovrio, caracterizando, neste caso, sistemas de
autoincompatibilidade pr-zigtica (GIBBS & BIANCHI, 1999). No
entanto, existe um sistema diferenciado de autoincompatibilidade no
qual, frutos provenientes de flores autopolinizadas so abortados,
determinando um sistema de autoincompatibilidade tardia ou pszigtica (SEAVEY & BAWA, 1986).
2.6.1 - Autoincompatibilidade homomrfica gametoftica (AIG)
O termo homomrfico refere-se s flores das espcies que
apresentam tal sistema de AI, as quais so morfologicamente
homogneas, ou seja, no variam quanto altura das anteras e do
estigma. Na AIG, os tubos polnicos s iro crescer e s ir ocorrer
fecundao se o alelo presente no gro de plen no estiver presente no
tecido diploide do estilete. Nesse processo, o gro de plen germina e a
reao de incompatibilidade ocorre entre o tubo polnico e o estilete
(BITTENCOURT JR, 2003). Newbigin et al. (1993) supem que a ao

32

dos genes S seja ativada aps a meiose, havendo envolvimento de

RNAses e glicoprotenas. Os tubos polnicos compatveis apresentam
estrutura normal, com deposio reticulada de calose, e os
autoincompatveis desenvolvem um depsito irregular de calose (DE
NETTANCOURT, 2000). Existe uma relao entre RNAses e Sglicoprotenas e, portanto, com a reao de incompatibilidade. As
RNAses esto presentes desde a superfcie das papilas estigmticas,
tecido condutor do estilete, at o ovrio, o que coincide com o trajeto do
tubo polnico. Supe-se que as RNAses suspendam o crescimento do
tubo polnico por meio da degradao do RNA, mas os processos
celulares que levam ao reconhecimento e eliminao dos tubos
incompatveis ainda no esto claros (HARING et al., 1990; DE
NETTANCOURT, 2000). Um gradiente de Ca+2 tambm est associado
reao de AI (WHEELER et al., 1999).
2.6.2 - Autoincompatibilidade homomrfica esporoftica (AIE)
Neste sistema de autoincompatibilidade, a especificidade do
plen determinada pelo gentipo diploide do esporfito, isto , do
genitor materno do gro de plen. Portanto, o que determinar a
ocorrncia ou no de autoincompatibilidade no ser o alelo que o plen
carrega, mas sim os alelos presentes no tecido diplide da planta
(SHIFINO-WITTMANN & DALLAGNOL, 2002). Assim como no
sistema homomrfico gametoftico (AIG), o controle gentico da
incompatibilidade em plantas com AIE exercido por apenas um lcus
S, com alelismo mltiplo em uma populao e as hibridaes resultam
em autoincompatibilidade total ou compatibilidade total, no existindo
cruzamentos semicompatveis (RICHARDS, 1997).
2.6.3 - Autoincompatibilidade heteromrfica (AIH)
Este sistema de autoincompatibilidade est frequentemente
associado heterostilia, a qual se caracteriza pelas flores apresentarem
diferenas quanto ao comprimento dos estames. Assim, na distilia, os
indivduos de uma populao esto divididos em dois grupos, conforme
apresentem flores com estilete longo ou curto. Na tristilia os indivduos
de uma populao so enquadrados em trs diferentes grupos, uma vez
que suas flores podem apresentar trs diferentes comprimentos do
estilete (RICHARDS, 1986).
A heterostilia interpretada como um mecanismo que reduz a
geitonogamia (polinizao entre flores de um mesmo indivduo),

33

interferncia sexual e desperdcio de plen em plantas zofilas (WEBB

& LLOYD, 1986), alm de promover a transferncia mais precisa de
plen entre formas florais (BARRETT, 2002). Espcies heterostlicas
muito frequentemente apresentam autoincompatibilidade entre flores de
um mesmo indivduo e entre formas florais semelhantes (BARRETT &
CRUZAN, 1994). O dimorfismo floral, associado aos mecanismos de
autoincompatibilidade, potencializaria os nveis de polinizao cruzada
entre formas florais, em espcies heterostlicas (CHARLESWORTH,
1979). Devido associao entre heterostilia e a AIH, este sistema
mais facilmente reconhecido na natureza.
2.6.4 - Autoincompatibilidade crptica (AIC)
Este tipo de autoincompatibilidade ocorre quando observada
competio de plen, ou seja, a presena simultnea do auto e alo-plen,
no mesmo estigma/estilete, e resulta na produo de elevado nmero de
sementes provenientes do alo-plen em detrimento do auto-plen
(BATEMAN, 1956).
A autoincompatibilidade crptica geralmente ocorre no estdio de
alongamento do tubo polnico, no estilete, ocasionando um
desenvolvimento mais rpido dos tubos polnicos provenientes do aloplen (BATEMAN, 1956). No entanto, acrescenta o autor, quando as
flores so autopolinizadas, na ausncia da competio com o alo-plen,
as plantas que apresentam AIC tem sucesso na fertilizao e formao
de sementes.
2.6.5 - Autoincompatibilidade de ao tardia (AIT)
Neste tipo de autoincompatibilidade os tubos polnicos penetram
nos vulos autopolinizados, mas estes no formam sementes. Este tipo
de autoincompatibilidade tambm chamado autoincompatibilidade
ovariana (AIO) e foi observada pela primeira vez por Crowe (1971), em
Borago officinalis L. (Boraginaceae). Seavey e Bawa (1986)
comprovaram a existncia de barreiras do sistema de incompatibilidade
operando no ovrio de muitas espcies vegetais e denominaram este
sistema de autoincompatibilidade de ao tardia (AIT). Segundo estes
autores, existem quatro diferentes categorias de AIT: i) quando a
inibio dos tubos polnicos incompatveis processa-se no ovrio, porm
antes dos mesmos alcanarem os vulos; ii) quando a inibio dos tubos
incompatveis tem lugar aps a penetrao dos vulos, mas sem que
ocorra a singamia; iii) quando a rejeio dos tubos polnicos

34

incompatveis processa-se aps a formao do zigoto; iv) quando se

sabe que a reao de auto-incompatibilidade ovariana, mas se
desconhece os detalhes histolgicos do processo de rejeio.
Stephenson et al. (2003) sugeriram que a plasticidade dos
sistemas de AI visto como um mecanismo que promove a fecundao
cruzada, flexibilizando a intensidade com a qual impede o
desenvolvimento do auto-plen.
2.7 POLINIZAO CRUZADA
A polinizao ocorre com a chegada do plen ao estigma das
flores, a qual pode ocorrer por contato direto da antera com o estigma,
ou por agentes polinizadores, como o vento (anemofilia), a gua
(hidrofilia), aves (ornitofilia) e insetos (entomofilia) (JOHRI et al.,
2001). Esta ltima a forma mais comum em fruteiras, realizada,
principalmente, por abelhas (RODRIGO & HERRER0, 2000).
No estigma, os gros de plen encontram um substrato adequado
para a germinao (JOHRI et al., 2001). Aps a hidratao, ocorre a
germinao do gro de plen. O tubo polnico cresce atravs do estigma
em direo ao tecido transmissor do estilete e dependente destas
estruturas. Estas estruturas produzem secrees que tem funo de guiar
e nutrir os tubos polnicos durante o seu trajeto at o ovrio (RODRIGO
& HERRER0, 2000). Quando chega ao ovrio, o tubo polnico encontra
o vulo e entra pela micrpila, penetrando no nucelo e atingindo o saco
embrionrio (HERRERO, 2003).
2.8 AUTOINCOMPATIBILIDADE EM C. XANTHOCARPA
Estudos com espcies de Campomanesia (no incluindo C.
xanthocarpa) mostraram presena de autoincompatibilidade.
Campomanesia velutina apresentou evidncias de mecanismos de
autoincompatibilidade de ao tardia (AIT), sendo que as plantas com
fecundao cruzada alcanaram uma produo de frutos de cerca de
75%, enquanto, nas plantas auto-polinizadas, a produo no passou de
7% (PROENA & GIBBS, 1994). Almeida et al. (2000), trabalhando
com outras espcies do gnero, constataram a importncia da presena
das abelhas (Apis mellifera) para a produo de frutos, indicando a
necessidade da polinizao cruzada e a presena de possvel mecanismo
de autoincompatibilidade.
Bruckner et al. (2005) referem a inexistncia de trabalhos
abordando a ocorrncia de autoincompatibilidade em C. xanthocarpa, e

35

salientam que este aspecto de extrema relevncia para a melhor

compreenso da biologia reprodutiva e viabilizao da produo
comercial da espcie. Os autores complementam que a presena de
autoincompatibilidade, em espcies frutferas cultivadas, implica na
constituio dos pomares, onde as cultivares devem conter suficiente
diversidade gentica para que exista maior eficincia na polinizao, e
consequentemente, seja obtida elevada produo de frutos .
2.9 BIODIVERSIDADE
Diversidade biolgica refere-se variedade de vida no planeta
Terra, incluindo: a variedade gentica dentro das populaes e espcies
da flora, fauna, e dos microrganismos; a variedade de interaes e
funes ecolgicas desempenhadas pelos organismos nos ecossistemas;
a variedade de comunidades, hbitats e ecossistemas formados pelos
organismos (DIAS, 1996). Para os propsitos da Conveno sobre
Biodiversidade Biolgica (UNCED, 1992) diversidade biolgica
significa a variabilidade de organismos vivos de todas as origens,
compreendendo, os ecossistemas terrestres, marinhos e outros
ecossistemas aquticos e os complexos ecolgicos de que fazem parte;
compreendendo ainda a diversidade dentro de espcies, entre espcies e
de ecossistemas.
2.10 DOMESTICAO DE PLANTAS
A domesticao das plantas tem um relacionamento direto de
interao com o homem, pois um processo que envolve mudanas
mtuas entre os dois grupos e foi decisiva na mudana do
comportamento humano, sendo considerado um pr-requisito para o
surgimento das civilizaes (SERENO et al., 2008). Pode ser
conceituada como um processo de seleo gentica que, por alterar
traos chaves, transforma formas silvestres em variedades
domesticadas (SALAMINI et al., 2002). um processo de
modificao do gentipo de maneira contnua, evolutiva, efetuado
inconscientemente pelo homem (EVANS, 1993).
Ainda segundo Evans (1993), a sndrome da domesticao pode
ser definida como o resultado do processo de domesticao das plantas,
resultando em modificaes das caractersticas originais. As principais
caractersticas envolvidas so: a supresso de mecanismos de disperso
das sementes; mudanas de forma e condensao, formando estruturas
mais compactas; germinao mais rpida e eficiente das sementes;

36

sincronismo no florescimento e na maturao; perda de substncias

amargas e txicas; gigantismo de rgos; ciclo de vida perene, que se
torna anual; e a troca da fecundao cruzada pela autofecundao.
2.11 CULTIVO DE PLANTAS
O cultivo das plantas considerado o hbito de desenvolver
plantas para o prprio uso ou o particular e persistente interesse por
uma cultura, implicando em maior desenvolvimento humano (EVANS,
1993). Os termos, domesticao e cultivo, no so sinnimos, pois a
domesticao envolve mudanas na resposta gentica, enquanto o
cultivo relaciona-se com a atividade humana de plantio e colheita, tanto
na forma silvestre quanto na domesticada (SALAMINI et al. , 2002).
2.12 CONSERVAO DE RECURSOS GENTICOS
Os recursos genticos so definidos como espcies de plantas,
animais e microrganismos de valor atual ou potencial. Constituem-se
na parte essencial da biodiversidade, que usada pelo homem para a
promoo do desenvolvimento sustentvel da agricultura e produo de
alimentos (GOEDERT, 2007). O artigo 2o da Conveno sobre
Diversidade Biolgica CDB (UNCED, 1992) define duas estratgias
para a conservao dos recursos genticos: ex situ e in situ. A
conservao ex situ que adotaria diferentes tcnicas de conservao dos
componentes da diversidade biolgica fora de seus hbitats naturais e a
conservao in situ, que significa a conservao dos ecossistemas e
hbitats naturais e a manuteno e recuperao de populaes viveis de
espcies em seus ambientes naturais e, no caso de espcies domesticadas
ou cultivadas, nos ambientes onde elas desenvolveram suas
propriedades distintas. Nenhuma estratgia sozinha pode responder pela
adequada conservao e, como ambas so complementares, devem ser
utilizadas em conjunto para o sucesso da conservao.

37

3 OBJETIVOS DA TESE
3.1 - OBJETIVO GERAL
O projeto de tese teve como objetivo geral elucidar aspectos do
desenvolvimento estrutural associado biologia reprodutiva de
Campomanesia xanthocarpa O. Berg (Myrtaceae).
3.2 - OBJETIVOS ESPECFICOS
Acompanhar o desenvolvimento estrutural dos botes florais.
Aprofundar os conhecimentos anatmicos acerca da estrutura das
partes florais.
Elucidar os aspectos estruturais da fecundao cruzada e de um
possvel mecanismo de autoincompatibilidade atuante.
Acompanhar o desenvolvimento de frutos, sementes e embries a
partir da fecundao cruzada controlada.

38

39

4 - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ALMEIDA,M. ,J. O. de F., NAVES, R. V., XIMENES, P. A. Influncia
das abelhas (Apis mellifera) na polinizao da gabiroba (Campomanesia
spp.). Pesquisa Agropecuria Tropical, 30 (2): 25-28, jul/dez. 2000.
ALMEIDA, F.J. Marketing de Sementes. Curso de Tecnologia de
Sementes. Mdulo 10. UFPEL\ABEAS. Braslia, D.F. 1998.
APG III. An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification
for the orders and families of flowering plants: APG III. Botanical
Journal of the Linnean Society, v. 161, n. 2, p. 105-121. 2009.
BARRETT, S. C. H. The evolution maintenance, and loss of selfincompatibility systems. In. DOUST J. L. e DOUST, L. L. (eds), Plant
reproductive ecology: patterns and strategies. p.98124. Oxford
University Press, Oxford 2002.
BARRETT, S. C. H.; CRUZAN, M. B. Incompatibility in heterostylous
plants. In. Genetic control of self-incompatibility and reproductive
development in flowering plants (WILLIAMS, E. G., CLARKE, A. E.
e KNOX, R. B. (eds.). Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, p. 189219. 1994.
BARROSO, G.M. & PERON, M.V. Myrtaceae- Pp. 261-302. In:
M.P.M. LIMA & R.R.G. BRUNI (orgs.). Reserva Ecolgica de Maca
de Cima, Nova Friburgo: RJ. Aspectos Florsticos das Espcies
Vasculares. Jardim Botnico v.1. Rio de Janeiro. 1994.
BATEMAN, A. J. Cryptic self-incompatibility in the wallflower:
Cheiranthus cheiri L. Heredity. v.10, p.257-261, 1956.
BECK, C.B. An introduction to plant structure and development.
Cambridge University Press. New York. United States of America.
2009.
BELTRATI, C.M. & PAOLI, A.A.S. Sementes. In: APPEZZATO-DAGLRIA, B. & CARMELLO-GUERREIRO, S.M. Anatomia vegetal.
Viosa, UFV. 2003.

40

BITTENCOURT JR, N. S. Auto-incompatibilidade de ao tardia e

outros sistemas reprodutivos em Bignoniaceae. Tese (Doutorado).
Universidade Estadual de Campinas Instituto de Biologia. Campinas,
SP, 2003, 286p.
BREWBAKER, J. L. Biology of the angiosperm pollen grains. Indian
Journal of Genetics & Plant Breeding, v.19, p.121-33, 1959.
BRUCKNER C. H.; SUASSUNA, T. M. F.; RGO, M. M. do; NUNES
E. S. Autoincompatibilidade do maracuj implicaes no
melhoramento gentico In: FALEIRO, F.G.; JUNQUEIRA, N.T.V.;
BRAGA, M.F. (Eds.) Maracuj: germoplasma e melhoramento
gentico. Planaltina, DF: Embrapa Cerrados, 2005.
CHARLESWORTH, D.; CHARLESWORTH, B. A model for the
evolution of distyly. The American Naturalist, v.114, n.4, p. 467- 498,
1979.
COCUCCI, A.E.; MARIATH, J.E.A. Sexualidade das plantas. Cincia
Hoje, v.18, n.106. 1995.
CORRA, M.P. Dicionrio das plantas teis do Brasil e das exticas
cultivadas. V.III. Ministrio da Agricultura, Instituto Brasileiro de
Desenvolvimento Florestal. 1984.
CROWE, L. K. The polygenic control of outbreeding in Borago
officinalis. Heredity, v.27, p.111 - 118, 1971.
CUTLER, D.F.; BOTHA, T.; STEVENSON, D.W. Plant Anatomy
An applied approach. Blackwell Publishing. 2007.
DE NETTANCOURT, D. Incompatibility and incongruity in wild
and cultivated plants. Berlin : Springer, 2000. 320p.
DIAS, B. F. S. A implementao da conveno sobre diversidade
biolgica no Brasil: desafios e oportunidades. In: Workshop
Biodiversidade: perspectivas e oportunidades tecnolgicas.
Campinas, 29 de abril a 1o de maio de 1996. 10p.
ESAU, K. Anatomia das plantas com sementes. Ed. Edgard Blcher.
So Paulo - SP. 1976.

41

EVANS, L. T. The domestication of crop plants. In: EVANS, L. T.

Crop evolution adaptation and yield. Cambridge: Cambridge
University Press. p. 62-112. 1993.
FORZZA, R.C. ET AL. (Edt.). Catlogo de plantas e fungos do
Brasil. Rio de Janeiro: Andrea Jakobsson Estdio: Instituto de Pesquisa
Jardim Botnico do Rio de Janeiro. Volume 2. 2010.
GIBBS, P. E. Self-incompatibility in flowering plants: a neotropical
perspective. Revista Brasileira de Botnica, v.13, p.125-136, 1990.
GIBBS, P.E.; BIANCHI, M.B. Does Late-acting self-incompatibility
(LSI) Show family Clustering? Two more species of Bignoniaceae with
LSI: Dolichandra cynanchoides and Tabebuia nodosa. Annals of
Botany, v. 84, p.449-457, 1999.
GOGOZS, A.M.; COSMO, N.L.; BONA, C.; SOUZA, L.A.
Morfoanatomia da plntula de Campomanesia xanthocarpa O. Berg.
(Myrtaceae). Acta Botnica Brasileira. 24(3). 2010.
HARING, V., GRAY, J.E., McCLURE, A., et al. Selfincompatibility: a
self-recognition system in plants. Science, v.250, p.937-941, 1990.
HERRERO, M. Male and female synchrony and regulation of mating in
flowering plants. Philosophical transactions of the royal society B:
biological sciences, London, v. 358, 2003.
JOHRI, B.M., SRIVASTAVA, P.S., SINGH, N. Reproductive biology
of angiosperms. In: JOHRI, B.M., SRIVASTAVA, P.S. Reproductive
Biology of Plants. New Delhi: Narosa Publishing House, 2001.
KLAFKE, J.Z. Efeitos da Campomanesia xanthocarpa em parmetros
bioqumicos, hematolgicos e de estresse oxidativo em pacientes
hipercolesterolmicos. Dissertao (Mestrado em Cincias
Biolgicas: Bioqumica Toxicolgica). Santa Maria/RS. Universidade
Federal de Santa Maria (UFSM). 2009.
KLEIN, R.M. A importncia sociolgica das mirtceas nas florestas riograndenses. Pp. 367-375. In: Anais do 24 Congresso Nacional De
Botnica. Sociedade Botnica do Brasil. Porto Alegre.1984.

42

LEITO FILHO, H.F. Ecologia da Mata Atlntica de Cubato (So

Paulo). Editora da Universidade Estadual de So Paulo, Campinas.
1993.
LEITE, L.L.; CORADIN, L. In: Espcies nativas da flora brasileira
de valor econmico atual ou potencial: plantas para o futuro
Regio sul. Braslia: MMA. 2011.
LORENZI, H. rvores brasileiras: manual de identificao e cultivo
de plantas arbreas nativas do Brasil. Ed. Plantarum. Nova
Odessa/SP. 368 p. 1992.
MAIA, G.N. A relao entre o ser humano e a natureza: reflexo do
nosso pensamento. Tpicos atuais em Botnica Palestras: 51
Congresso Nacional de Botnica SBB. Braslia. D.F. p. 263-267.
2000.
MARCHIORI, J.N.C. & SOBRAL, M. Dendrologia das
angiospermas: Myrtales. Ed. Da UFSM. Santa Maria: 304 p. 1997.
MARIATH, J. E. A.; SANTOS, R. P.; BITTENCOURT JR. N. S. Flor.
In. Anatomia vegetal. Ed. APEZZATO-DA-GLORIA, B.;
CARMELLO-GURREIRO, S. M.; Viosa, UFV, 437p. 2006.
MORI, S.A.; BOOM, B.M.; CARVALHO, A.M. & SANTOS, T.S.
Ecological Importance of Myrtaceae in an Eastern Brazilian Wet Forest.
Biotropica 15: 68-70. 1983.
NEWBIGIN, E., ANDERSON, M.A., CLARKE, A. E. Gametophytic
self-incompatibility systems. The Plant Cell, v.5, p.1315-1324, 1993.
PROENA, C., GIBBS, P. E. Reproductive biology of eight sympatric
Myrtaceae from central Brazil. New Phytologist, v.126, p. 343-354,
1994.
RICHARDS, A. J. Plant Breeding Systems. George Allen & Unwin
(Publishers) Ltd,
London, UK. 1986, 528p.

43

RICHARDS, A. J. Plant Breeding Systems. Second Edition, Chapman

& Hall, USA, 1997, 529p.
RIDGEN, L. V.; CAVALCANTI, T.B.A. A conservao e utilizao de
recursos genticos vegetais. In: BENSUSAN, N. (ORG). Seria melhor
mandar ladrilhar? Biodiversidade: como, para que, por qu.
Braslia: Editora UnB. 2002.
RIZZINI, C.T. & MORS, W.B. Botnica econmica brasileira. 2 ed.
mbito Cultural Edies Ltda. Rio de Janeiro. 248 p. 1995.
RODRIGO, J., HERRERO, M. Cuajados errticos en albaricoquero.
Polinizacion y calidad de flor. Zaragoza: instituicion Fernando el
Catlico. 2000.
SALAMINI, F., OZKAN, H., BRANDOLINI, A., SCHAFER-PREGI,
R., MARTIN, W. Genetics and geography of wild cereal domestication
in the Near East. Nature Reviews, New York, v. 3, n. 6, p. 429-441.
2002.
SANTOS, C.M.R. Myrtaceae: anlises morfolgicas e do efeito da
temperatura e da luz na germinao de sementes de espcies nativas do
Rio Grande do Sul. Dissertao (Mestrado em Botnica). Porto
Alegre. Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS). 2003.
SCHIFINO-WITTMANN, M. T.; DALLAGNOL, M. Autoincompatibilidade em Plantas, Cincia Rural, Santa Maria, v.32, n.6,
p.1083-1090, 2002.
SEAVEY. S.R.; BAWA, K.S. Late-Acting Self-Incompatibility in
Angiospems. The Botanical Review. v.52, p.195-219, 1986.
SERENO, M. J. C. de M., WIETHOLTER, P., TERRA, T. F.
Domesticao das plantas a sndrome que deu certo. In: BERBIERI, R.
L., STUMPF, E. R. T. (ed.) Origem e evoluo das plantas cultivadas.
Braslia, DF: Embrapa Informao Tecnolgica, p. 37-58. 2008.
SOARES-SILVA, L.H. A Famlia Myrtaceae - Subtribos: Myrciinae e
Eugeniinae na Bacia Hidrogrfica do Rio Tibagi, Estado do Paran,
Brasil. Tese de Doutorado. Universidade Estadual de Campinas,
Campinas. 2000.

44

SLIS, S.M. Estdios morfolgicos y anatmicos em hojas com

domacios de Campomanesia guaviroba (DC) Kiaersk. Universidad
Nacional Del Nordeste. Comunicaciones Cientficas y Tecnolgicas.
2000.
SOUZA, M.A.D. de. Biologia reprodutiva de onze espcies de
Myrtaceae em floresta de terra firme na Amaznia Central. Dissertao
(Mestrado em Cincias Biolgicas), Universidade Federal do
Amazonas. Manaus, AM. 1996.
STEPHENSON, A. G.; TRAVERS, S. E.; MENA-ALI, J. I.; WINSOR,
J. A. Pollen
performance before and during the autotrophic-heterotrophic transition
of pollen tube growth. Philosophical Transactions of the Royal
Society of London, v.358, p.1009-1018, 2003.
UNCED. Biodiversity convention. Geneva: United Nations, 1992.
VALLILO, M.I.; MORENO, P.R.H.; OLIVEIRA, E. de; LAMARDO,
L.C.A.; GARBELOTTI, M.L. Composio qumica dos frutos de
Campomanesia xanthocarpa Berg. (Myrtaceae). Cincia Tecnologia
Alimentos. v. 28. Sppl.0. Campinas. SP. 2008.
WEBB, C. J.; LLOYD, D. G. The avoidance of interference between the
presentation of pollen and stigmas in angiosperms. New Zealand
Journal of Botany. v.24, p.63-178, 1986.
WHEELER, M.J., ALLAN, A. C., JORDAN, N.D., et al. The
intracellular events triggered by the self-incompatibility response in
Papaver rhoeas. Protoplasma, v.208, p.99-106, 1999.
WILSON, P. G., OBRIEN, M. M., HESLEWOOD, M. M., QUINN, C.
J. Relationships within Myrtaceae sensu lato based on a matK
phylogeny. Plant Systematics and Evolution, 251: 3-19. 2005.

45

SEO I

DESENVOLVIMENTO DO PERIANTO, DO ANDROCEU E DO

GINECEU DE Campomanesia xanthocarpa O. Berg
(MYRTACEAE)

CRISTINA MAGALHES RIBAS DOS SANTOS

46

47

LISTA DE QUADROS SEO I

Quadro 1 - Estdios de desenvolvimento das flores de C. xanthocarpa
(Adaptado de Ducroquet & Hickel, 1991) ............................................ 56
Quadro 2 - Etapas da androsporognese e da androgametognese,
segundo os critrios de Rodrigues et al. (2007) .................................... 57

48

49

LISTA DE FIGURAS SEO I

Figura 1 - Metodologias utilizadas para as anlises dos botes florais de
C. xanthocarpa ...................................................................................... 59
Figura 2 - Perodo de desenvolvimento dos botes florais de C.
xanthocarpa........................................................................................... 64
Figura 3 - Estdios de desenvolvimento do perianto de C. xanthocarpa.
............................................................................................................... 65
Figura 4 - Relao entre os estdios de desenvolvimento do perianto, do
androceu e gineceu de C. xanthocarpa. ................................................ 66
Figura 5 - Estdios de desenvolvimento do androceu de C.
xanthocarpa........................................................................................... 69
Figura 6 - Relao entre os estdios de desenvolvimento das anteras e
dos andrfitos de C. xanthocarpa.......................................................... 72
Figura 7 - Relao entre os estdios de desenvolvimento dos botes
florais e do gineceu de C. xanthocarpa. ................................................ 75
Figura 8 - Relao entre os estdios de desenvolvimento dos botes
florais e dos rudimentos seminais de C. xanthocarpa. .......................... 78

50

51

RESUMO
Botes florais de Campomanesia xanthocarpa foram analisados at a
fase de antese. Foram realizadas anlises estruturais no perianto,
androceu e gineceu, acompanhando o processo de maturao do
andrfito, ovrio e rudimentos seminais.
Seis estdios de
desenvolvimento B, C, D1, D2, E e F foram caracterizados. Os
botes florais, nesta espcie, levam cerca de 18 dias a partir do estdio B
at a completa abertura da flor. O acompanhamento da
androsporognese e androgametognese revela a presena de ttrades,
andrsporos e andrfitos. No estdio D1, os andrfitos j esto aptos
desenvolver os tubos polnicos e os rudimentos seminais intensificam a
diferenciao das estruturas de proteo e esporognicas. Entretanto, o
saco embrionrio s completa sua constituio no estdio E (fase balo).
O detalhamento de como se desenvolvem os rgos reprodutivos, os
estdios de desenvolvimento dos gros de plen e dos rudimentos
seminais, relacionados ao tamanho dos botes florais, so de grande
relevncia para embasar os programas de melhoramento e conservao
desta espcie subutilizada, mas com grande potencial agrcola,
nutricional e medicinal.

52

53

INTRODUO
Campomanesia xanthocarpa considerada uma das plantas para
o futuro da regio sul do pas, havendo a recomendao do incentivo
pesquisa, especialmente por serem os frutos uma opo promissora no
mercado de bebidas artesanais e industriais, alm do potencial para
produo de polpa concentrada e congelada sendo tambm considerada
espcie medicinal (BIAVATTI et al., 2004; KINUPP, 2007). H
carncia de informao sobre plantios comerciais desta espcie, que
vem sendo explorada por meio de extrativismo por comunidades locais.
A sua conservao depende, exclusivamente, da manuteno de seus
hbitats naturais (LISBOA et al., 2011).
Para que essa espcie possa entrar em sistemas de produo
agrcola, muitos aspectos estruturais de sua biologia reprodutiva
precisam ser elucidados. Neste sentido, h poucos trabalhos sobre
espcies de Campomanesia, sendo a maioria com abordagens sobre as
partes vegetativas adultas (SOLS, 2000), germinao das sementes e a
estrutura das plntulas em desenvolvimento (GOGOSZ, 2008, 2010).
Em relao biologia reprodutiva, em especial aos rgos reprodutivos,
no existem registros mais detalhados na literatura. Por este motivo, o
presente trabalho busca aprofundar os estudos caracterizando o
desenvolvimento estrutural do perianto, do androceu e do gineceu, uma
vez que este conhecimento de fundamental importncia para o manejo,
bem como em programas de melhoramento e conservao desta espcie
nativa.

54

55

1. METODOLOGIA
1.1. LOCAL DE REALIZAO DAS ATIVIDADES:
Acompanhamento e Coleta de Material Vegetal:
A coleta de ramos florais foi realizada em plantas de reas
remanescentes de mata nativa do Estado de Santa Catarina, no interior
do municpio de Alfredo Wagner, latitude 27o4201, longitude
49o2001, altitude 480m, distante 111Km de Florianpolis (capital do
estado).
Anlises Laboratoriais:
Foram realizadas no Laboratrio de Fisiologia do
Desenvolvimento e Gentica Vegetal (LFDGV), do Departamento de
Fitotecnia, integrado ao Centro de Cincias Agrrias; no Laboratrio
Central de Microscopia Eletrnica (LCME) e no Laboratrio de
Anatomia Vegetal (LAVEG) do Departamento de Botnica, Centro de
Cincias Biolgicas da Universidade Federal de Santa Catarina, em
Florianpolis, Santa Catarina, Brasil.
1.2 COLETA DOS RAMOS FLORAIS DE C. XANTHOCARPA
Foram coletados 6 ramos florais de 1,5m de comprimento, de
uma rvore adulta de C. xanthocarpa (matriz S1), com botes florais em
diferentes estdios de desenvolvimento. O material vegetal foi
acondicionado em baldes plsticos contendo gua, para transporte e
manuteno no laboratrio, sendo deixados em ambiente protegido
durante 10 dias, seguindo metodologia proposta por Franzon (2008).
Para as anlises do desenvolvimento morfolgico e estrutural
(morfohistodiferenciao) foram retirados os botes florais diretamente
dos ramos, para identificao dos estdios de desenvolvimento (Tabela
1), conforme os critrios estabelecidos por (DUCROQUET & HICKEL,
1991).
Amostras de material retiradas do indivduo S1 foram depositadas
no herbrio Flor da Universidade Federal de Santa Catarina, nmero
FLOR 40926 e identificados por Cristina Magalhes Ribas dos Santos.

56

Quadro 1 - Estdios de desenvolvimento das flores de C. xanthocarpa

(Adaptado de Ducroquet & Hickel, 1991)
Estdios de

Critrios morfolgicos

desenvolvimento
B
C

E
F1
F2

Botes globosos envoltos por brcteas

Primeiro par de spalas comea a se afastar, mas no
aparecem as ptalas. Botes com o dobro de tamanho.
Comeam a aparecer as ptalas e ocorre maior afastamento
das spalas.
Estdio balo. Ptalas descompactadas e prestes a abrir
para expor as anteras e o estigma.
Flor com pistilo exposto e afastamento parcial das ptalas.
Flor completamente aberta, com ptalas na posio
horizontal, expondo anteras e estigma. Liberao de plen.

1.3 - ANLISE MORFOLGICA DO DESENVOLVIMENTO DO

PERIANTO, DO ANDROCEU E DO GINECEU DE C.
XANTHOCARPA
Para estas anlises, 200 botes florais, de diferentes tamanhos,
foram retirados dos ramos vegetais, aleatoriamente. Os botes florais
foram colocados sobre papel milimetrado e analisados sob o
microscpio estereoscpio Olympus SZH10 com a unidade de controle
DP, Control 71 da Olympus e a cmara fotogrfica acoplada. Com base
em critrios visuais relativos aos aspectos morfolgicos, as amostras
foram classificadas nos diferentes estdios de desenvolvimento referidos
na Tabela 1. A seguir amostras de botes florais de cada fase foram
analisadas para descrio morfolgica do androceu e do gineceu. Vinte
botes florais foram mantidos nos ramos, no laboratrio, sendo
marcados com fitas coloridas, para acompanhar os intervalos de tempo
(em horas) entre os diferentes estdios.
1.4 ANLISES ESTRUTURAIS DO DESENVOLVIMENTO DO
ANDROCEU E DO GINECEU DE C. XANTHOCARPA
Para a caracterizao estrutural do androceu e do gineceu, nas
diferentes fases de desenvolvimento, 20 botes florais de cada estdio

57

foram analisados por meio de diferentes tcnicas, sendo analisados em

microscopia ptica e eletrnica de varredura.
Cinco botes florais foram seccionados transversal e
longitudinalmente, mo livre. As seces foram colocadas sobre
lminas histolgicas, hidratadas e cobertas por lamnula. Outros cinco
botes florais, de cada estdio, foram separados para anlise do
desenvolvimento dos gros de plen. Nestes botes florais, a anteras
foram removidas, esmagadas sobre lmina histolgica, coradas com
carmim actico 0,5% e cobertas por lamnula. As anlises foram
realizadas em quatro campos de observao escolhidos de forma
aleatria. As categorias relativas androsporognese e
androgametognese (Tabela 2) foram registradas em planilha e imagens,
sendo relacionadas aos tamanhos dos botes florais, conforme os
critrios de Rodrigues et al. (2007). Estes dois procedimentos foram
analisados em microscpio ptico Olympus DP40F, com a unidade de
controle DP Control 71 da Olympus e a cmara fotogrfica acoplada.
Quadro 2 - Etapas da androsporognese e da androgametognese,
segundo os critrios de Rodrigues et al. (2007)
Etapa
CMM

Critrios
Clulas-me dos andrsporos ou clulas arquesporiais

Meicitos

Clulas em qualquer fase da meiose

Ttrades

Quatro esporos revestidos por calose

Andrsporos

Esporos livres com um ncleo no polarizado

Andrfitos I

Gametfitos com um ncleo polarizado, antes da primeira mitose

Gametfitos com duas clulas, generativa e vegetativa, aps a

Andrfitos II

primeira

mitose

incluindo

os

diversos

estdios

de

desenvolvimento dos ncleos

Nota: Andrfitos apresentam citoplasma denso, com depsitos de amido, e

desenvolvimento completo da exina e da intina.

Outros cinco botes florais de cada estdio foram fixados em

glutaraldedo (1%) + formaldedo (4%) (MCDOWELL & TRUMP,
1976), infiltrados com historesina (Leica), sendo colocados em
soluo de pr-infiltrao (historesina: etanol 95%, 1:1, v/v), durante 24
horas, sob vcuo, e, em seguida, transferidos para a soluo de
infiltrao (historesina pura), por quatro horas, sob vcuo. A seguir,
foram colocados em moldes que continham a soluo de incluso

58

(historesina adicionada de endurecedor). A seces foram feitas em

micrtomo de rotao, distendidas em lminas histolgicas e submetidas
colorao com azul de toluidina (OBRIEN et al. 1964). Os registros
fotogrficos e as anlises foram realizados em microscpio ptico
Olympus DP40F, com a unidade de controle DP, Control 71 da
Olympus e a cmara fotogrfica acoplada.
A anlise ultraestrutural de superfcie, em microscopia eletrnica
de varredura (MEV) foi realizada em amostras retiradas de cinco botes
florais, de cada estdio de desenvolvimento, que haviam sido fixadas em
glutaraldedo e desidratadas em srie etlica crescente (at lcool 100%
PA) para a obteno das seces transversais e longitudinais. As seces
foram colocadas em tubos eppendorfs contendo lcool 100%, por 30
minutos, e, posteriormente, foram submetidas ao ponto crtico de CO2
Leica EM CPD 030, seguindo procedimento de Horrige & Tamm
(1969). Depois da secagem, o material foi aderido sobre suportes de
alumnio, com auxlio de uma fita carbono dupla-face e numerado
conforme planejamento prvio. Estes suportes foram postos sobre
isopor, numa caixa plstica transparente contendo slica gel. A caixa foi
vedada com PVC e colocada dentro de um desumidificador at ser
coberto com 20nm de ouro, em metalizador Leica EM CPD 030, modelo
CPD 030. A anlise e documentao foram efetuadas em microscpio
eletrnico de varredura JEOL JSM-6390LV.

59

Figura 1 - Metodologias utilizadas para as anlises dos botes florais de

C. xanthocarpa A) Indivduo S1 (seta). B) Ramos com botes florais retirados
de S1. C e D) Transporte e acondicionamento dos ramos florais em baldes
contendo gua. E) Botes florais retirados dos ramos no laboratrio. F)
Microscpio eletrnico de varredura (seta) JEOL JSM-6390LV (LCME/UFSC).
G) Microscpio estereoscpio Olympus SZH10 (seta) com a unidade de
controle DP. Control 71 da Olympus e a cmara fotogrfica acoplada
(LFDGV/UFSC).

60

61

2 RESULTADOS E DISCUSSO
2.1 ANLISES MORFOLGICAS DO DESENVOLVIMENTO DO
PERIANTO, DO ANDROCEU E DO GINECEU DE C.
XANTHOCARPA
Nesta espcie o perianto, o androceu e o gineceu passaram por
modificaes de fcil visualizao durante o desenvolvimento dos
botes florais, com formao de estruturas, tais como os gros de plen,
ovrios e rudimentos seminais, diretamente ligados formao de frutos
e sementes. Para garantir que as estruturas de disperso (frutos e
sementes) e os novos indivduos (embries) se formem C. xanthocarpa
investiu na arquitetura floral. Foram detectados os estdios B, C, D1,
D2, E e F de desenvolvimento (Figuras 3A e 4A).
Nos estdios B e C, as estruturas reprodutivas (androceu e
gineceu) mostraram-se protegidas pela cpsula floral formada por
spalas e ptalas (perianto) e apresentavam modificaes discretas de
volume e forma, especialmente do androceu. No estdio B de
desenvolvimento, o perianto apresentou um par de brcteas verde claras,
na base de um boto floral globoso, com spalas bem compactadas de
cor verde escura (Figura 3B). O androceu mostrou estames com anteras
de aspecto translcido, agrupadas em torno e abaixo do estilete, e com
estigma esverdeado (Figura 4B). O estdio C caracterizou-se pela
ausncia do par de brcteas, apresentando um afastamento do primeiro
par de spalas, sem mostrar as ptalas (Figura 3C). Os estames cobriam
parcialmente o estigma e as anteras perderam o aspecto translcido
(Figura 4C).
Em D1 e D2, foram detectadas as maiores mudanas nos botes
florais ao longo do desenvolvimento. O pleno desenvolvimento das
ptalas comeou a ser visualizado a partir do estdio D1, alm do
androceu e do gineceu mostrarem expressivas diferenas de volume e
forma. No estdio D1, foi possvel identificar as ptalas devido
colorao branca contrastante com a cor verde das spalas, estas
ligeiramente afastadas (Figura 3D). Assim, estas flores podem ser
classificadas como heteroclamdeas, com clice e corola de coloraes
diferenciadas. Os estames apresentaram anteras agrupadas ao redor do
estilete, na altura das spalas, permitindo a visualizao do estigma
(Figura 4D). O estdio D2 mostrou a presena de ptalas bem
desenvolvidas, mas ainda dobradas umas sobre as outras, evidentes
acima das spalas (Figura 3E). Nos estames, os filetes exibiram
crescimento livre e acima das spalas, com cerca de 4mm de

62

comprimento, sustentando as anteras. O estilete e o estigma mostraramse evidentes acima dos estames (Figura 4E). At o estdio D2 foi
possvel perceber indcios de cuidado da espcie com relao s
estruturas reprodutivas, tendo em vista que estas se desenvolvem
protegidas pelo perianto, cujas partes constituintes foram sendo,
gradativamente, flexibilizadas.
No estdio E, o perianto mostrou a presena de ptalas bem
desenvolvidas, descompactadas e prestes a se abrir (Figura 3F). Os
estames dispuseram-se afastados e ao redor do pistilo exibindo a poro
superior do ovrio (Figuras 4F e 4G). O estdio F mostrou o perianto
formado por cinco ptalas de colorao branca completamente abertas e
livres entre si (corola dialiptala) rodeadas por cinco spalas de cor
verde, parcialmente unidas entre si (clice gamosspalo). Os numerosos
estames (flores polistmones) encontravam-se estendidos, posicionandose afastados do estigma e do estilete (Figuras 3G e 3H). O estdio E
(fase balo) e o estdio F constituram o perodo em que C. xanthocarpa
exps as estruturas reprodutivas. Nestes estdios a abertura das ptalas e
a expanso dos estames, posicionando-se de forma a permitir o acesso
ao estigma das flores, so indicativos de facilitao polinizao e s
subsequentes cpula e singamia.
Em relao ao tempo de desenvolvimento dos botes florais, nas
condies deste experimento, a passagem do estdio B para C levou
cerca de setenta e duas horas (3 dias). A transio do estdio C para o
D1 foi o perodo mais prolongado, levando cerca de duzentas e
dezesseis horas (9 dias). Considerando as modificaes ocorridas no
androceu e gineceu, o intervalo D, originalmente estabelecido por
Ducroquet e Hickel (1991), neste estudo, foi dividido em D1 e D2,
levando, em mdia, noventa e seis horas (4 dias). A passagem de D2
para E foi de apenas vinte e quatro horas (1 dia). Para passar da fase
balo para a completa abertura da flor, o intervalo foi de cerca de oito
horas, o que possibilitou a classificao como estdio F. Estes resultados
diferiram de Ducroquet & Hickel (1991) que observaram em Feijoa
sellowiana uma antese gradual, ao longo de dois dias, levando a
subdiviso da antese em F1 e F2 (Tabela 1). Os autores definiram F1
como sendo o estdio em que o boto floral estava entreaberto, com
emergncia do estigma e anteras visveis; e F2 como sendo o estdio em
que o boto floral estava completamente aberto, com as ptalas na
posio horizontal. A Figura 2 mostra os intervalos de tempo entre os
estdios de desenvolvimento da flor de C. xanthocarpa. Os botes
florais despenderam 18 2 dias para passarem do estdio B at o F
(Figuras 3A e 4A).

63

Para outras mirtceas sul americanas, como Acca sellowiana (O.

Berg.) Burret foram estabelecidos os estdios B, C, D, E, F1 e F2 de
desenvolvimento, levando cerca de 30 dias para a completa abertura da
flor (STEWART, 1987; DUCROQUET & HICKEL, 1991; FRANZON,
2004). Eugenia uniflora L. apresentou os estdios B, C, D, E e F de
desenvolvimento, levando cerca de 23 dias para completar este ciclo
(FRANZON, 2004). Para Eugenia involucrata DC. os estdios B, C, D,
E e F se desenvolveram ao longo de 19 dias (DONADIO et al., 2002;
FRANZON, 2004). J Eugenia pyriformis Camb. apresentou os estdios
B, C, D, E e F de desenvolvimento num perodo de 46 dias (FRANZON,
2004). Comparativamente C. xanthocarpa foi a que apresentou
completa abertura da flor num tempo menor, havendo uma maior
complexidade de estdios de desenvolvimento entre as fases D1 e D2.
Estes dados so importantes quando se pretende trabalhar em programas
de melhoramento, pois se sabe o momento ideal de efetuar as
polinizaes controladas. Alm disso, facilita o manejo produtivo da
espcie, marcando as fases iniciais de produo potencial de frutos e
sementes.
Segundo Bergamaschi (2002), as subdivises dos estdios de
desenvolvimento permitem caracterizar as exigncias ecoclimticas e
manejar as espcies quanto ocorrncia de pragas, molstias e
reproduo com vistas ao melhoramento e produo. Assim, para C.
xanthocarpa a subdiviso do estdio D foi de grande relevncia, pois em
termos de desenvolvimento floral, podemos apontar, como fase mais
crtica para estresses de qualquer natureza, o perodo entre o estdio C e
o estdio D2, devido s modificaes mais efetivas no androceu e no
gineceu.

64

Figura 2 - Perodo de desenvolvimento dos botes florais de C.

xanthocarpa: do estdio B para C temos um intervalo de 72 horas. De C
para D1, 216 horas. Entre D1 e D2 so 96 horas. Do estdio D2 para E
(estdio balo) so 24 horas. De E para a antese (estdio F) passam-se
cerca de 8 horas totalizando cerca de, 416 horas para a completa
abertura da flor (em mdia 18 dias).

65

Figura 3 - Estdios de desenvolvimento do perianto de C. xanthocarpa.

A) Estdios B, C, D1, D2, E e F; B) Boto globoso de colorao verde escura e
spalas bem compactadas. Presena de brctea verde clara (seta); C) Boto
floral apresentando afastamento do primeiro par de spalas, sem aparecerem as
ptalas. Par de brcteas ausente; D) Ptalas de colorao branca contrastantes
com a cor verde das spalas (seta); E) Botes florais com ptalas bem
desenvolvidas (seta); F) Boto formado por ptalas descompactadas e prestes a
se abrir (seta); G) Boto floral com 5 ptalas brancas na posio horizontal,
expondo os numerosos estames; H) Boto floral evidenciando 5 spalas verdes
contrastantes com as ptalas brancas. (Barra = 2mm, exceto em G e H). B, C,
D1, D2, E, F = estdios de desenvolvimento.

66

Figura 4 - Relao entre os estdios de desenvolvimento do perianto, do

androceu e gineceu de C. xanthocarpa. A) Estdios B, C, D1, D2 e E de
desenvolvimento; B) Estames com anteras de aspecto translcido, agrupados em
torno do estilete e do estigma (seta); C) Estames cobrindo parcialmente o
estigma (seta); D) Estames com filetes desenvolvidos sustentando as anteras,
agrupados ao redor do estigma bem evidente (seta); E) Estames com filetes
crescendo livres acima das spalas, sustentando as anteras que rodeiam o
estilete e o estigma; F) Androceu com estames formados por filetes alongados e
anteras rodeando o estigma e o estilete deixando ver a poro superior do ovrio
(seta); G) Gineceu formado por estigma, estilete e poro superior do ovrio.
(Barras = 2mm). An = antera, Ft = filete, Eg = estigma, Ei = estilete, Ov =
ovrio, B, C, D1, D2, E = estdios de desenvolvimento.

67

2.2 ANLISES ESTRUTURAIS DO DESENVOLVIMENTO DO

ANDROCEU E DOS GROS DE PLEN DE C. XANTHOCARPA
2.2.1 Desenvolvimento do androceu
Foi possvel acompanhar e registrar as etapas de desenvolvimento
do androceu relacionadas aos estdios de desenvolvimento dos botes
florais (Figura 5A). No estdio B, os estames apresentaram filetes
formados por um feixe vascular nico, com prolongamento at as
anteras, cujos tamanhos eram superiores ao dos filetes. Nas anteras, era
evidente o prolongamento do feixe vascular at o conectivo e a
separao entre os lculos (Figura 5B). Seces transversais, no estdio
C de desenvolvimento, mostraram anteras tetrasporangiadas,
constituindo os androsporngios. O conectivo era evidente, na poro
central das anteras (Figura 5C). O estdio D1 caracterizou-se pelo
aumento do comprimento dos filetes basifixos que sustentavam as
anteras prximas s ptalas (Figura 5D). Atravs de seces transversais
nas anteras, o estdio D2 foi caracterizado pelo aumento no tamanho
dos androsporngios, alm de ter sido possvel identificar as clulas do
tapete e do endotcio, o qual no mostrou distino celular em relao
s clulas da epiderme, indicando a imaturidade da antera. No
conectivo, era visvel o feixe vascular central (Figura 5E). A fase balo
(estdio E) apresentou anteras desenvolvidas, sustentadas pelo filete
longo, onde eram evidentes o feixe vascular e o parnquima (Figura 5F).
A anlise em microscopia eletrnica de varredura revelou que a antera
estava constituda por 4 lculos, com deiscncia longitudinal na regio
do estmio, para liberao dos gros de plen (Figura 5G). As anlises
estruturais do androceu permitiram detectar que do estdio C at o
estdio D2 ocorrem as principais modificaes nas estruturas
formadoras, sendo o perodo crtico para estresses de qualquer natureza
nesta espcie.
O estame formado por duas partes morfologicamente distintas:
a antera e o filamento. O filamento liga o estame flor e formado por
tecido vascular que transloca gua e nutrientes para os tecidos
estaminais. A antera contm tecidos reprodutivos e no reprodutivos e
responsvel por produzir e liberar os andrfitos para que os processos de
polinizao e fertilizao possam ocorrer na flor (GOLDBERG et al,
1993). Segundo Esau (1976), a parede externa da antera a epiderme e a
camada subepidrmica (endotcio) pode apresentar faixas ou arestas de
material depositado. A camada mais interna o tapete, tecido nutritivo
constitudo de clulas multinucleadas. Geralmente as anteras sofrem

68

deiscncia e, em muitas espcies, a deiscncia precedida pela

destruio da parede divisria entre os lculos da mesma teca. Mais
tarde, o tecido externo desta regio tambm sofre rompimento e o plen
libertado atravs da abertura ou estmio. Estudos realizados com a
datura (Datura stramonium) mostrou que o meristema floral formado
por trs "camadas germinativas", designadas L1, L2 e L3 (SATINA et
al., 1940) que do origem a diferentes tecidos das anteras. Assim, uma
vez especificadas, o destino de desenvolvimento das camadas L1, L2,
L3 e derivados fixo. Por exemplo, a camada L1 d origem a epiderme
e ao estomio; a camada L2 d origem s clulas arquesporiais, s clulas
me de micrsporos, ao endotcio e s camadas mdias que se
encontram entre a epiderme e o tapete. A camada L3 d origem ao
tecido conjuntivo, ao feixe vascular e ao agrupamento celular circular
adjacente ao estomio (SATINA & BLAKESLEE, 1941).
O desenvolvimento da antera pode ser dividido em duas fases
gerais. Durante a fase 1, a morfologia da antera estabelecida, ocorre a
diferenciao das clulas dos tecidos e as clulas me dos micrsporos
sofrem meiose. No final da fase 1, a antera contm a maioria das suas
clulas e tecidos especializados, alm das ttrades estarem presentes
dentro dos sacos polnicos. Durante a fase 2, os gros de plen se
diferenciam, a antera aumenta de tamanho e empurrada para cima pelo
crescimento em extenso dos filetes, ocorre degenerao de tecidos com
deiscncia da antera e liberao do plen (GOLDBERG et al, 1993).
Estas fases foram detectadas neste estudo, pois durante o estdio B de
desenvolvimento dos botes florais de C. xanthocarpa estava ocorrendo
a finalizao da fase 1 e o incio da fase 2 de desenvolvimento das
anteras. Os eventos que conduzem ao desenvolvimento das anteras e
formao e liberao de plen so rigorosamente programados. A
diferenciao celular e a deiscncia ocorrem numa ordem cronolgica
precisa que se correlaciona com o tamanho da gema floral
(KOLTUNOW et al, 1990; SCOTT et al, 1991). Estes eventos puderam
ser correlacionados neste trabalho, sendo possvel estabelecer a conexo
entre os estdios de desenvolvimento dos botes florais e as diferentes
fases de desenvolvimento das anteras.

69

Figura 5 - Estdios de desenvolvimento do androceu de C. xanthocarpa.

A) Estdios B, C, D1, D2 e E de desenvolvimento do androceu; B) Estames
formados por filetes com feixe vascular central (seta) sustentando anteras com
diviso evidente entre os lculos, mostrando o prolongamento do feixe vascular
vindo do filete (seta); C) Seco transversal da antera mostrando 4 lculos
(androsporngios). Conectivo na regio central da antera (seta); D) Filetes e
anteras mais longos, denotando aumento de tamanho do androceu (setas); E)
Seco transversal da antera mostrando androsporngios ocupando um volume
maior da antera. Pode-se observar as clulas do endotcio (clulas mais
alongadas). No conetivo (poro central da antera) evidencia-se o feixe vascular
(seta); F) Antera bem desenvolvida sustentada por filete delgado e longo. Podese visualizar o feixe vascular (seta) e as clulas do parnquima no filete; G)
Eletromicrografia de varredura mostrando anteras tetraloculadas, cujas paredes
divisrias entre os lculos formam o estmio. (Barras = 200 m em B e C;
Barra = 500m em D, E, F e G; Barras = 2mm em A). An = antera, Ft = filete,
Ad = androsporngio, En = endotcio, Lo = lculo, Es = estmio, B, C, D1, D2,
E = estdios de desenvolvimento.

70

2.2.2 Desenvolvimento dos andrfitos (gros de plen)

As anlises do material oriundo das anteras de cada estdio de
desenvolvimento do androceu (Figura 6A) permitiram acompanhar o
desenvolvimento dos andrfitos desde a formao das ttrades, ainda na
etapa da androsporognese (critrios sumarizados na Tabela 2). O
estdio B de desenvolvimento apresentou ttrades (andrsporos) (Figura
6B) em incio de dissoluo da parede calsica para liberao dos
andrsporos (Figura 6C). No estdio C de desenvolvimento, verificou-se
a passagem da androsporognese para a androgametognese, com a
liberao dos andrsporos das ttrades. Os andrsporos livres
aumentaram de volume, havendo a formao de um grande vacolo
(Figura 6D) . Em seguida, as clulas sofreram mitose assimtrica,
originando duas clulas desiguais, separadas por uma delgada parede
pectocelulsica, a clula vegetativa e a clula generativa (Figura 6E). Na
continuidade do processo, ocorreu o desaparecimento da vacuolao
pr-mittica e a formao do Andrfito I, com citoplasma denso e
esporoderme (Figura 6F). Os estdios D1 e D2 mostraram andrfitos,
provavelmente do tipo II, pois j eram funcionais e capazes de emitir o
tubo polnico (Figuras 6G e 6H). No estdio balo, os andrfitos II
mostraram tubos polnicos bem desenvolvidos (Figuras 6I e 6J). Com a
observao em microscopia eletrnica de varredura constatou-se que os
andrfitos estavam plenamente formados, tricolpados e isolados,
caracterizando-se como mnades, e com a esporoderme finalizada
(Figura 6K).
Segundo Mariath et al. (2006), durante a androgametognese,
amiloplastos de pequenas dimenses podem estar presentes, dispersos
pelo citoplasma, alm de surgirem pequenos vacolos que mais tarde
fundem-se e originam um grande vacolo que polariza o ncleo. Esses
autores acrescentam que, em seguida ocorre o desaparecimento da
vacuolao pr-mittica e a formao do Andrfito I, que apresenta
citoplasma mais denso e esporoderme espessa, formada pela parede
celular de grande complexidade, estratificada em camadas distintas com
propriedades fsicas e qumicas especficas. Erdtman (1952) sugeriu
uma terminologia morfolgica para a estratificao da esporoderme, a
qual, primariamente pode ser dividida em exina e intina. O
desenvolvimento de uma parede resistente, envolvendo a futura gerao
gametoftica masculina (andrfitos), foi de importncia fundamental na
conquista do ambiente terrestre pelas angiospermas. Sendo transportado
pelo vento ou mediante a ao involuntria de vetores animais, o
andrfito encontra-se em um meio hostil, onde os riscos de dessecao

71

so altos. A esporoderme resistente, especializada e estratificada, com

substncias hidrofbicas provenientes das clulas do tapete, que se
depositam sobre a exina ameniza os danos causados pela desidratao
excessiva (MARIATH et al., 2006).
As anlises estruturais do desenvolvimento dos andrfitos
mostraram que para garantir a produo de material funcional na
fecundao, a embriognese e, em consequncia, a formao de frutos e
sementes, C. xanthocarpa investiu nas estruturas de proteo (perianto)
at que a esporoderme estivesse completamente formada (estdio E).
Alm disso, o detalhamento da esporognese e da gametognese
essencial para a identificao de estdios crticos de desenvolvimento
dos andrfitos, visando adoo de tcnicas de manejo que previnam a
ao dos ventos ou de dficit hdrico, bem como de pragas ou molstias
que poderiam afetar os botes florais entre o estdio C e D2 de
desenvolvimento, os quais apresentam estdios transicionais entre a
androsporognese e a androgametognese (andrsporo, andrfito I e
andrfito II).

72

Figura 6 - Relao entre os estdios de desenvolvimento das anteras e

dos andrfitos de C. xanthocarpa. A) Estdios B, C, D1, D2 e E de
desenvolvimento das anteras. B) Ttrade tpica, com quatro esporos (setas); C)
Incio da dissoluo da parede calsica (seta) para liberao dos esporos das
ttrades (setas brancas); D) Liberao dos esporos das ttrades (seta) e incio da
formao dos andrfitos com vacuolizao do citoplasma (seta); E) Andrfito I
em citocinese ps-mittica, com separao de duas clulas desiguais por uma
delgada parede (seta); F) Andrfito tpico, com citoplasma denso e esporoderme
espessa (seta); G) Andrfito II em fase inicial de emisso do tubo polnico (seta
preta); H e I) Andrfitos II com tubo polnico bem desenvolvido (seta) e em
inicio de desenvolvimento (em I); J) Andrfito II tricolpado com esporoderme
plenamente formada (seta); K) Eletromicrografia de varredura mostrando
Andrfito II (gro de plen), mnade (seta). (Corante carmim actico, exceto
em K). (Barras = 500m em B, E, F, G, H, I, J; Barra = 200m em D; Barra =
50m em C; Barra = 10m em K). Es = esporo, Af = andrfito, AfI = andrfito
I, AfII = andrfito II, Vc = vacolo, Tp = tubo polnico.

73

2.3 ANLISES ESTRUTURAIS DO DESENVOLVIMENTO DO

GINECEU E DOS RUDIMENTOS SEMINAIS (VULOS) DE C.
XANTHOCARPA
2.3.1 Desenvolvimento do gineceu
Com o auxlio da microscopia ptica, foi possvel relacionar o
desenvolvimento do gineceu ao dos botes florais (Figura 7A). No
estdio B, o pistilo encontrava-se rodeado pelos estames, protegido
pelas ptalas, dispostas em camadas sobre estas estruturas, as quais
estavam envolvidas pelas spalas. Os verticilos de spalas, ptalas e
estames estavam inseridos de forma que permitiam ver a poro
superior do ovrio (Figuras 7A e 7B) no sendo possvel delimitar com
exatido as estruturas do perianto e do ovrio. Na regio basal do pistilo,
em C. xanthocarpa, foi possvel visualizar as estruturas secretoras de
leo, subepidrmicas, e uma zona parenquimtica com pouca
vascularizao. As cavidades ovarianas mostraram rudimentos seminais
em incio de desenvolvimento (Figura 7B).
O estdio C apresentou as estruturas do pistilo mais
desenvolvidas e protegidas pelas ptalas e spalas, sem alcanar a altura
das ptalas. Na regio ovariana, as estruturas secretoras de leo mais
conspcuas e na zona parenquimtica evidenciava-se um aumento da
vascularizao. Os rudimentos seminais (ovrio pluriovulado)
mostraram placentao axial, ocupando quase a totalidade dos lculos
ovarianos (Figura 7C).
No estdio D1, a estrutura superior do pistilo (estigma) alcanou
a altura das ptalas, sendo que as clulas da regio superior do estilete
apresentaram colorao esverdeada, sugerindo a presena de
cloroplastos. Toda regio do ovrio mostrou-se aumentada e os lculos
completamente preenchidos pelos rudimentos seminais, sendo evidente
a regio placentria axial (Figura 7D). O estdio D2 caracterizou-se
pela presena de muitas estruturas secretoras de leo nas diferentes
partes do gineceu, inclusive ao longo do estilete. Na regio dos ovrios,
constatou-se intensa vascularizao e estruturas secretoras
subepidrmicas bem evidentes. Os lculos estavam completamente
preenchidos pelos rudimentos seminais que exibiam uma regio interna
bem marcada (Figura 7E).
No estdio F, a regio estigma-estilete apresentou pleno
desenvolvimento, sendo marcante, na regio ovariana, a vascularizao
perifrica e o desenvolvimento do tecido parenquimtico, cujas clulas
prximas aos lculos mostraram colorao mais escura, provavelmente

74

ligada ao armazenamento de ar. Nos lculos, a regio placentria era

evidente sustentando rudimentos seminais em fase final de
desenvolvimento, reunidos em fileiras de 5 a 7. Foi possvel identificar,
nos septos divisrios dos lculos, um canal oco (Figuras 7F e 7G).
O gineceu, formado por carpelos, consiste em megasporfilos que
englobam um ou mais vulos, enquanto o androceu rene os estames,
que so os microesporfilos (SIMPSON, 2006). Os carpelos consistem
no ovrio contendo os vulos que se desenvolvem em sementes e o
estilete ou estilo, uma extenso mais fina do ovrio que termina no
estigma. O estigma o receptor do plen e a estrutura sobre a qual o
plen germina (BECK, 2009). Segundo Esau (1976), o estigma
formado por um tecido glandular secretor de substncias que criam um
meio adequado germinao dos tubos polnicos. As clulas
epidrmicas so comumente alongadas formando papilas ou pelos curtos
ou longos e ramificados. Ainda, segundo Esau (1976) o tecido do
estigma est ligado ao ovrio por um tecido semelhante, denominado
tecido estigmatide. Em estiletes que apresentam um canal, este
revestido pelo tecido estigmatide. Em estiletes macios, o tecido
estigmatide forma um mais cordes includos no tecido fundamental ou
associa-se aos feixes vasculares. Do ponto de vista histolgico, ovrio e
estilete apresentam epiderme, tecido fundamental parenquimtico e
feixes vasculares na antese. A epiderme externa cutinizada, podendo
apresentar estmatos. Os vulos so formados pelo nucelo envolvendo o
tecido esporgeno, um ou dois tegumentos de origem epidrmica e um
pednculo denominado funculo. Na antese so formados por
parnquima, contendo um sistema vascular. A anlise estrutural do
gineceu ao longo de seu desenvolvimento possibilitou a constatao de
que este mantinha relao estreita com o desenvolvimento do perianto,
pois as ptalas e spalas mantiveram o pistilo protegido at o estdio F
de desenvolvimento desta estrutura reprodutiva feminina.
As estruturas secretoras so muito comuns em vrios rgos de
C. xanthocarpa, sendo analisadas de forma pormenorizada na seo 2.
Provavelmente estas estruturas esto envolvidas na proteo dos rgos
onde se desenvolvem o que explica o aumento destas com o
desenvolvimento do gineceu. Em relao ao aumento da vascularizao
ao longo do processo de desenvolvimento do boto floral,
acompanhando o aumento em volume do ovrio, explica-se pela maior
exigncia do aporte de gua e nutrientes, para o preparo de condies
para polinizao e fertilizao e formao dos rudimentos seminais.

75

Figura 7 - Relao entre os estdios de desenvolvimento dos botes

florais e do gineceu de C. xanthocarpa. A) Estdios B, C, D1, D2 e E de
desenvolvimento; B) Estigma e estilete (seta) protegidos pelo perianto. Lculos
ovarianos semi-preenchidos pelos rudimentos seminais (seta); C) Estigma,
estilete e rudimentos seminais em desenvolvimento (setas); D) Estigma
alcanando as ptalas (seta) e regio ovariana com rudimentos seminais (seta)
preenchendo todo o lculo, presos placenta (seta); E) Regio ovariana com
tecido parenquimtico e feixes vasculares bem desenvolvidos (seta). Estruturas
secretoras (setas) na parede do ovrio e ao longo do estilete. F) Lculos
ovarianos com rudimentos seminais desenvolvidos (seta) e tecidos com intensa
vascularizao (seta). G) Rudimentos seminais reunidos em fileiras (seta). Barra
= 2mm (A); Barra = 1mm (G); B, C, D1, D2, E = estdios de desenvolvimento;
Pt = ptalas, Sp = spalas, Pc = placenta, Ei = estilete, Rs = rudimentos
seminais.

76

2.3.2 Desenvolvimento dos rudimentos seminais (vulos)

Com o auxilio da microscopia ptica e eletrnica de varredura foi
possvel relacionar os estdios de desenvolvimento do gineceu ao
desenvolvimento dos rudimentos seminais (Figura 8A). O estdio B
caracterizou-se pela formao inicial destas estruturas na parede interna
ovariana, a partir dos tecidos placentrios, sem ocupar a totalidade dos
lculos (Figura 8B). Foi possvel identificar regies coradas mais
intensamente com azul de toluidina, indicando intensa atividade
mittica, para a formao das clulas do nucelo (estrutura em domo) e
trs camadas na regio placentria, estrutura trizonada (Figura 8C). No
estdio C, a placenta mostrou-se bem desenvolvida sustentando os
rudimentos seminais, que ocupavam quase a totalidade dos lculos
(Figura 8D). No funculo em formao, era possvel ver o feixe vascular
bem desenvolvido e a regio nucelar (Figura 8E). No estdio D1, os
rudimentos seminais ocuparam todo o lculo, sustentados pela placenta,
a qual se mostrou como uma excrescncia na cavidade ovariana (Figura
8F). Na regio calazal, os tegumentos ainda em formao, apareceram
envolvendo o nucelo que se desenvolvia a partir da poro apical do
rudimento seminal, com formao incipiente do saco embrionrio
(Figura 8G). No estdio D2, os rudimentos seminais apresentaram uma
regio escura, bem demarcada quando corada com carmim actico,
confirmando atividade mittica da regio nucelar (Figura 8H). Neste
estdio de desenvolvimento, no rudimento seminal crassinucleado, as
camadas de tecido tegumentar apresentaram-se envolvendo o nucelo
massivo e, ainda, constatou-se o incio da formao do saco embrionrio
(Figuras 8I e 8J). Na fase balo, os rudimentos seminais antropos
estavam em fase final de desenvolvimento, apresentando forma tpica,
sendo sustentados pelo funculo (Figura 8K). Foi possvel identificar
duas camadas de tecidos tegumentares completamente formados, os
quais delimitavam claramente o tecido nucelar e o saco embrionrio,
interrompendo-se na micrpila, esta delimitada pelo tegumento interno
(Figuras 8L e 8M).
Segundo Souza (2009), os rudimentos seminais formam-se na
regio da placenta, a partir de divises periclinais que ocorrem nas
clulas epidrmicas, originando uma estrutura em domo que o nucelo
jovem. De Toni & Mariath (2008) afirmam que, com base no padro de
diviso das clulas, a regio da placenta apresenta uma estrutura
trizonada, formando uma camada epidrmica, uma subepidrmica e
outra central. O desenvolvimento do rudimento seminal inicia com
divises periclinais e anticlinais da camada central. De acordo com

77

Bouman (1984), provavelmente existe relao entre a estrutura

placentria e o tamanho dos rudimentos seminais e sementes, pois
estruturas trizonadas formam rudimentos seminais grandes, com
funculo e nucelo grandes. Souza (2009) referem-se ao funculo como
um pednculo de comprimento varivel que se desenvolve entre a
placenta e o rudimento seminal. Atravs desta estrutura se processa o
suprimento vascular do rudimento seminal. Ainda, de acordo com Souza
(2009), rudimentos seminais crassinucleados apresentam nucelo
massivo e bem desenvolvido, formado histolgicamente por uma
epiderme cuticularizada e um tecido parenquimtico. So considerados
bitegumentados quando apresentam dois tegumentos limitando a
micrpila, que por sua vez, um poro no pice do tegumento do
rudimento seminal, podendo ser delimitada somente pelo tegumento
interno. Os rudimentos seminais podem sofrer curvatura durante seu
desenvolvimento, em funo do maior crescimento em uma de suas
faces. Quando o corpo do rudimento seminal curva-se completamente,
mantendo a micrpila junto ao hilo ou calaza, classificado como
antropo.
Os ginfitos (sacos embrionrios) desenvolvem-se no seio de um
esporngio (nucelo) que exibe caractersticas neotnicas, isto , adquire
maturidade reprodutiva ainda em estado meristemtico. Os ginsporos
nunca abandonam o esporngio, pois no diferenciam estruturas que
permitam sua deiscncia. Desenvolvem uma atividade ltica agressiva,
aproveitando os tecidos circundantes como fonte nutritiva. Nas
angiospermas, complementa o autor, geralmente, o ginosporngio
(nucelo) totalmente consumido pelo ginfito em desenvolvimento e,
logo a seguir, pelo embrio esporoftico e pelo xenfito (endosperma)
(COCUCCI, 1995).

78

Figura 8 - Relao entre os estdios de desenvolvimento dos botes

florais e dos rudimentos seminais de C. xanthocarpa.

79

A) Estdios B, C, D1, D2 e E de desenvolvimento dos ovrios; B) Rudimentos

seminais em incio de formao a partir da placenta, originando-se na regio da
parede interna ovariana; C) Surgimento do rudimento seminal trizonado
(camadas I, II e III) a partir das divises periclinais do tecido placentrio. Na
camada subepidrmica evidencia-se a regio de clulas com alta atividade
mittica (seta); D) Regio portadora dos rudimentos seminais mais
desenvolvidos, com regio placentria evidente e lculos divididos pelo septo;
E) Funculo em formao, evidenciando o feixe vascular (seta). Detalhe do
parnquima e do lculo ovariano; F) Volume mximo do lculo ocupado pelos
rudimentos seminais. Regio placentria bem desenvolvida (seta); G) Regio
calazal, com tegumentos (I e II) envolvendo o nucelo e formao inicial do saco
embrionrio (seta); H) Rudimentos seminais intensamente corados com carmim
actico (atividade mittica) (seta). I, J) Seco transversal em microscopia
ptica e eletrnica de varredura evidenciando nos rudimentos seminais a regio
nucelar com intensa atividade mittica (seta em I), os tegumentos, o saco
embrionrio em formao, o lculo e o parnquima do ovrio; K) Ovrio com
lculos evidentes delimitados por placenta desenvolvida de onde se originam os
funculos (seta) que sustentam os rudimentos seminais em fase final de
maturao. Canal oco no septo entre os lculos; L, M) Rudimentos seminais
desenvolvidos, unidos placenta ovariana pelo funculo, nos quais distingue-se
a presena dos tegumentos (I, II) que interrompem-se na micrpila (seta em M).
Regio nucelar com saco embrionrio desenvolvido. Barras = 50m (C, J);
Barras = 100m (B, M, L, I); Barras = 200m (E, F, D, G, H); Barras = 500m
(K). Pc = placenta, Pi = parede interna ovariana, Pe = parede externa ovariana,
Rs = rudimento seminal, Se = septo, Lv = lculo ovariano, Pv = parnquima
ovariano, Fu = funculo, Ca = calaza, Nu = nucelo, Sc = saco embrionrio, Tg =
tegumento; B, C, D1, D2, E = estdios de desenvolvimento dos ovrios.

80

81

3- CONCLUSO
Os resultados obtidos associados ao desenvolvimento do perianto,
do androceu e do gineceu de Campomanesia xanthocarpa permitem
concluir que:
1. A etapa de florescimento da espcie dura, em mdia, 18 dias
podendo-se dividir os estdios de desenvolvimento dos botes
florais em B, C, D1, D2, E (estdio balo) e F (antese).
2. Podemos considerar como perodos mais crticos as fases C at
D2, pois estaro sendo formados os rgos reprodutivos
(androceu e gineceu) que garantem a produo de sementes e
frutos.
3. O desenvolvimento dos andrfitos mostra que os mesmos so
capazes de emitir o tubo polnico a partir do estdio D1 de
desenvolvimento dos botes florais.
4. Em relao ao desenvolvimento dos rudimentos seminais, a partir
do estdio D1 ocorre a intensificao da formao das estruturas
de proteo e formao do saco embrionrio, embora este se
complete somente no estdio E (fase balo).

82

83

4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
BECK, C.B. An introduction to plant structure and development.
Cambridge University Press. New York. United States of America.
2009.
BERGAMASCHI,
H.
Fenologia.
2002.
Disponvel
http://www.ufrgs.br/agropfagrom/disciplinas/502/agr05502.html

em:

BIAVATTI, M. W., FARIAS, C., CURTIUS, F., BRASIL, L. M.,

HORT, S., SCHUSTER, L. S. N., PRADO, S. R. T. Preliminary studies
on Campomanesia xanthocarpa (Berg.) and Cuphea carthagenensis
(Jacq.) J. F. Macbr. Aqueous extract: weight control and biochemical
parameters. Journal of Ethnopharmacology, Shannon, v.93, n.2-3,
p.385-389. 2004.
BOUMAN, F. The ovule. In: JOHRI, B. M. (Ed.) Embryology of
angiosperms. Springer Berlin, p. 123157. 1984.
COCUCCI, A.E.; MARIATH, J.E.A. Sexualidade das plantas. Cincia
Hoje, v.18, n.106. 1995.
DE TONI, K. L. G., MARIATH, J. E. A. Ovule ontogeny of Chomelia
and Ixora (Rubiaceae) Plant Systematics and Evolution, v. 272: 39
48. Printed in The Netherlands. 2008.
DONADIO, L.C., MRO, F.V.; SERVIDONE, A. A. Frutas
brasileiras. Jaboticabal: Ed. Novos Talentos, 288p. 2002.
DUCROQUET, J.P.H.J.; HICKEL, E.R. Fenologia da goiabeira serrana
(Feijoa sellowiana, Berg) no Alto Vale do Rio do Peixe, Santa Catarina.
Revista Brasileira de Fruticultura, Jaboticabal, v.13, n.3, p.313-320,
1991.
ERDTMAN, G. Pollen morphology and plant
Angiosperms. Stockholm: Almqvist and Wiksell, 1952.

taxonomy.

ESAU, K. Anatomia das plantas com sementes. Ed. Edgard Blcher.

So Paulo - SP. 1976.

84

FRANZON, R.C. Caracterizao de mirtceas nativas do sul do

Brasil. Dissertao (Mestrado em Fruticultura de Clima Temperado) Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, Universidade Federal de
Pelotas, Pelotas. 2004.
FRANZON, R.C. Propagao vegetativa e modo de reproduo da
pitangueira (Eugenia uniflora L.) Tese (Doutorado em Cincias).
Universidade Federal de Pelotas. Pelotas, RS. 2008.
GOGOSZ, A.M. Germinao e estrutura das plntulas de
Campomanesia xanthocrapa O. Berg. (Myrtaceae) crescendo em solo
contaminado com petrleo e biorremediado - Dissertao (Mestrado
em Botnica). Curitiba. Universidade Federal do Paran. 2008.
GOGOZS, A.M.; COSMO, N.L.; BONA, C.; SOUZA, L.A.
Morfoanatomia da plntula de Campomanesia xanthocarpa O. Berg.
(Myrtaceae). Acta Botnica Brasileira. 24 (3). 2010.
GOLDBERG, R. B., BEALS, T. P., SANDERS, P. M. Anther
development: basic principles and practical applications. The Plant
Cell, v. 5: 1217-1229. American Society of Plant Physiologists. 1993.
HORRIDGE, G.A. & TAMM, S.L. Critical point drying for scanning
electron microscopy study of ciliary motion. Science 163: 817-818.
1969.
KINUPP, V. F. Plantas alimentcias no convencionais da regio
metropolitana de Porto Alegre, RS. Tese (Doutorado em Fitotecnia).
Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Porto Alegre, RS. 2007.
KOLTUNOW, A.M., TRUETTNER, J., COX, K.H., WALLROTH, M.,
GOIDBERG, R.B. Different temporal and spatial gene expression
patterns occur during anther development. Plant Cell 2: 1201-1224.
1990.
LEITE, L.L.; CORADIN, L. In: Espcies nativas da flora brasileira
de valor econmico atual ou potencial: plantas para o futuro
Regio sul. Braslia: MMA. 2011.
LISBOA, G. N., KINUPP, V. F., BARROS, I. B. I. de. Campomanesia
xanthocarpa (Guabiroba). In: Espcies nativas da flora brasileira de

85

valor econmico atual ou potencial: plantas para o futuro Regio

Sul. Ed. CORADIN, L., SIMINSKI, A., REIS, A. Braslia: MMA, 934
p. 2011.
MARIATH, J. E. A.; SANTOS, R. P.; BITTENCOURT JR. N. S. Flor.
In. Anatomia vegetal. Ed. APEZZATO-DA-GLORIA, B.;
CARMELLO-GURREIRO, S. M.; Viosa, UFV, 437p. 2006.
MCDOWELL, E.M. & TRUMP, B. Histological fi xatives for
diagnostic light and electron microscopy. Archives of Pathology &
Laboratory Medicine 100: 405-414. 1976.
OBRIEN, T.P.; FEDER, N. & MCCULLY, M.E. Polychromatic
staining of plant cell walls by toluidine blue O. Protoplasma 59: 368373. 1964.
RODRIGUES, L. R., BEAUVALET, C. S., OLIVEIRA, J. M. S.,
MARIATH, J. E. A. Etapas da androsporognese e da
androgametognese da Pahseolus vulgaris L. de acordo com o tamanho
do boto floral. Revista Brasileira de Biocincias, v. 5, supl. 1. Porto
Alegre. 2007.
SATINA, S. & BLAKESLEE, A.F. Periclinal chimeras in Datura
stramonium in relation to development of leaf and flower. American
Journal of Botany, 5: 1265-1275. 149: 155-185. 7: 974-985. 28: 862871. 1941.
SATINA, S., BLAKESLEE, A.F., AVERY, A.G. Demonstration of
three germ layers in the shoot apex of Datura by means of
inducedpolyploidy in periclinal chimeras. American Journal of
Botany, 27: 895-905. 1940.
SCOTT, R., HODGE, R., PAUL, W., DRAPER, J. The molecular
biology of anther differentiation. Plant Science, 80: 167-191. 1991.
SIMPSON, M. G. Plant Systematics. Elsewier, Amsterdam. 2006.
SLIS, S.M. Estdios morfolgicos y anatmicos em hojas com
domacios de Campomanesia guaviroba (DC) Kiaersk. Universidad
Nacional Del Nordeste. Comunicaciones Cientficas y Tecnolgicas.
2000.

86

SOUZA, L. A. (Org.). Sementes e plntulas germinao, estrutura

e adaptao. Ponta Grossa: Todapalavra Editora. 2009.
STEWART, A.M.; CRAIG, J.L. Factors affecting pollinator
effectiveness in Feijoa sellowiana. New Zealand Journal of Crop and
Horticultural Science, Auckland, v.17, p.145-154, 1989.

87

SEO II

ANLISE ESTRUTURAL DAS PARTES FLORAIS DE

Campomanesia xanthocarpa O. Berg. (MYRTACEAE)

CRISTINA MAGALHES RIBAS DOS SANTOS

88

89

LISTA DE FIGURAS SEO II

Figura 1 - Metodologias para anlise estrutural das partes florais de C.
xanthocarpa........................................................................................... 97
Figura 2 - Flor diclamdea, heteroclamdea e polistmone de C.
xanthocarpa em antese, mostrando os estames (Em), o pistilo (Pl), as
ptalas (Pt) e as spalas (Sp). ................................................................ 99
Figura 3 - Clice de C. xanthocarpa. .................................................. 102
Figura 4 - Corola de C. xanthocarpa................................................... 103
Figura 5 - Estames e andrfitos de C. xanthocarpa. ........................... 107
Figura 6 - Gineceu de C. xanthocarpa. ............................................... 111
Figura 7 - Estilete e ovrio de C. xanthocarpa.................................... 112
Figura 8 - Glndulas de leo e tricomas em partes florais de C.
xanthocarpa......................................................................................... 115

90

91

RESUMO
O estudo inclui a anlise estrutural das partes florais de C. xanthocarpa
visando a compreenso das estratgias da espcie para assegurar a
continuidade da espcie em ambientes naturais, atravs da reproduo
sexuada. O clice formado por cinco spalas de colorao verde-clara,
apresentando estmatos na face abaxial (externa) e tricomas secretores
na face adaxial. A corola, constituda por cinco ptalas obovadas de
colorao branca, intensamente vascularizada. As ptalas so
hipoestomticas; na face adaxial, tricomas restringem-se base e as
clulas epidrmicas tm paredes periclinais externas convexas; um
parnquima homogneo, com glndulas de leo subepidrmicas,
compe o mesofilo. O gineceu apresenta o estigma capitado-peltado,
com uma ruptura central, do tipo seco, com as clulas epidrmicas
papilosas. O estilete formado pelo canal estilar oco, revestido por
tecido estigmtico, que se estende at as cavidades ovarianas. O ovrio
nfero, possui de seis a oito lculos, com rudimentos seminais
bisseriados. O mesofilo ovariano formado por tecido parenquimtico,
o qual mostra conspcuos espaos intercelulares (reserva de ar) e
glndulas de leo subepidrmicas. Os feixes vasculares so abundantes
e a epiderme fortemente cutinizada e recoberta por tricomas. O
androceu formado por estames com filetes alongados que sustentam as
anteras tetraloculadas, onde se formam os andrfitos. Os quatro
microesporngios constituem as duas tecas unidas por um conetivo com
o feixe vascular central. A deiscncia ocorre a partir do estmio.
Histologicamente, as anteras so constitudas por uma epiderme,
endotcio e tapete (parietal e invasivo). Com a maturao dos
androsporngios (sacos polnicos) evidenciaram-se clulas desintegradas
do tapete, invasivas entre os andrsporos. Esta espcie apresenta
glndulas secretoras esquizolisgenas, ricas em lipdios e fenis,
abundantes em praticamente todos os rgos reprodutivos analisados,
alm de tricomas secretores unicelulares que mostraram reao positiva
ao Sudan III, especialmente na base, indicando a presena de compostos
lipdicos. O detalhamento das partes florais permite o enriquecimento do
material bibliogrfico disponvel, com detalhes estruturais importantes
que podem servir para embasar os programas de domesticao,
melhoramento e conservao desta espcie promissora subutilizada e
negligenciada.

92

93

INTRODUO
A reproduo sexuada nas Magnoliophyta, especialmente no
grupo das Magnoliopsida (Dycotyledoneae) realizada pela flor que
considerada um ramo transformado, formada por um eixo caulinar e
folhas diversamente modificadas, estreis e frteis (SOUZA, 2003). As
partes florais so altamente especializadas e evoluram com funes
especficas. Evidncias fsseis indicam que evoluram a partir das folhas
de antepassados e a principal evidncia a forma e a venao das
ptalas e spalas e, em menor grau dos estames e dos carpelos (BECK,
2010).
Segundo Simpson (2006), os botes florais esto constitudos por
perianto, gineceu e androceu. O perianto a parte mais externa,
constitudo por spalas e ptalas. O gineceu constitudo por estigma,
estilete e ovrio, neste formam-se os rudimentos seminais. O androceu
est formado por estames constitudos de filete e antera. O gineceu,
formado por carpelos, consiste em megasporfilos que englobam um ou
mais vulos, enquanto o androceu rene os estames, que so os
microesporfilos.
Campomanesia xanthocarpa foi classificada dentro da Subfamlia
Myrtoideae definida por flores bissexuadas, vulos com saco
embrionrio monosprico e nmero cromossmico bsico x = 11
(WILSON et al., 2005). Dentro desta subfamlia, acrescentam os
autores, temos a tribo Myrteae, que compreende todas as Myrtaceae
americanas. Sanchotene (1989) descreve as flores de C. xanthocarpa
como de colorao brancas, hermafroditas, zigomorfas, partindo de
pednculos unifloros, com 1 a 3 cm de comprimento, solitrios ou em
grupos, situados sobre ramos do ano. O clice formado por 5 spalas,
levemente pubescentes. A corola constituda por 5 ptalas obovadas.
Os estames so numerosos, com cerca de 8 mm de comprimento. O
ovrio nfero, podendo conter at 16 lculos, bisseriados. O estilete
mede 5 mm de altura, com estigma capitado ou peltado. O receptculo
floral plano e glabro.
Lima et al. (2011) referem-se a flores formadas por pednculos
de 0,7 a 3,5 cm comprimento, unifloros; bractolas lineares, caducas
antes da antese. Flores com hipanto coberto por tricomas, raro glabro;
clice aberto no boto, com lobos 0,7 a 1,8 vezes mais compridos do
que largos, tricomas presentes internamente ou nas margens, glndulas
presentes externamente; ptalas glabras ou com tricomas nas margens,
glndulas presentes externamente; estames em nmero de 80 a 150 com

94

glndula apical ausente; ovrio 5 a 10 locular; estilete com 3 a 7 mm

comprimento.
No existem registros de trabalhos mais aprofundados acerca da
caracterizao das estruturas formadoras da flor em Campomanesia
xanthocarpa. Alm disso, as anlises estruturais do perianto (clice e
corola), do androceu e do gineceu so relevantes para entender quais as
estratgias que a espcie utiliza buscando assegurar sua reproduo, a
perpetuao nos ambientes onde ocorre e a conquista de novos
ambientes. Alm disso, assegura o aporte de informaes importantes
para o melhoramento, a domesticao e a conservao desta espcie
nativa do sul do Brasil. Por estes motivos, o presente trabalho teve por
objetivo geral analisar estruturalmente as partes florais de
Campomanesia xanthocarpa O. Berg (Myrtaceae) visando compreender
as estratgias que asseguram a reproduo sexuada.

95

1. METODOLOGIA
1.1. LOCAL DE REALIZAO DAS ATIVIDADES
Coleta de Material Vegetal:
A coleta de ramos com botes florais, foi realizada em plantas de
rea remanescente de mata nativa do Estado de Santa Catarina, no
interior do municpio de Alfredo Wagner, latitude 27o4201, longitude
49o2001, altitude 480m, distante 111Km de Florianpolis (capital do
estado).
Anlises Laboratoriais:
Foram realizadas no Laboratrio de Fisiologia do
Desenvolvimento e Gentica Vegetal (LFDGV), do Departamento de
Fitotecnia, integrado ao Centro de Cincias Agrrias, no Laboratrio
Central de Microscopia Eletrnica (LCME) e no Laboratrio de
Anatomia Vegetal (LAVEG) do Departamento de Botnica, Centro de
Cincias Biolgicas da Universidade Federal de Santa Catarina, em
Florianpolis, Santa Catarina, Brasil.
1.2 COLETA DOS RAMOS FLORAIS DE C. XANTHOCARPA
Foram coletados ramos florais de 1,5m de comprimento, de
rvores adultas de C. xanthocarpa, com botes florais em diferentes
estdios de desenvolvimento. O material vegetal foi acondicionado em
baldes plsticos contendo gua, para transporte e manuteno no
laboratrio (adaptado de FRANZON, 2008). Para as anlises estruturais
das partes florais, foram coletados 50 botes florais no estdio E (fase
balo) diretamente dos ramos.
1.3 - ANLISES ESTRUTURAIS DO PERIANTO, DO ANDROCEU,
DO GINECEU E DAS ESTRUTURAS SECRETORAS DE C.
XANTHOCARPA
As anlises morfolgicas do perianto, do androceu e do gineceu
foram realizadas sob o microscpio estereoscpio Olympus SZH10,
com a unidade de controle DP Control 71 da Olympus, com cmara
fotogrfica acoplada.
Na Figura 1 esto representados os organogramas desenvolvidos
para o estudo das partes florais. Para as anlises estruturais do

96

desenvolvimento do perianto, do androceu, do gineceu e das estruturas

secretoras, foram utilizadas 3 diferentes tcnicas. Primeiramente, 10
botes florais foram seccionados transversal e longitudinalmente, mo
livre. As seces foram colocadas sobre lminas histolgicas, hidratadas
e cobertas por lamnula, para visualizao sob o microscpio ptico.
Mais 10 botes florais foram fixados em glutaraldedo (1%) +
formaldedo (4%) (MCDOWELL & TRUMP, 1976), infiltrados com
historesina (Leica), sendo colocados em soluo de pr-infiltrao
(historesina: etanol 95%, 1:1, v/v), durante 24 horas, sob vcuo e, em
seguida, transferidos para a soluo de infiltrao (historesina pura), por
4 horas, sob vcuo. A seguir, foram colocados em moldes que
continham a soluo de incluso (historesina adicionada de
endurecedor). A seces foram feitas em micrtomo de rotao,
distendidas em lminas histolgicas e submetidas colorao com azul
de toluidina (OBRIEN et al., 1964), para serem analisados sob o
microscpio ptico. Os registros fotogrficos e as anlises em
microscopia ptica foram realizados com auxlio do microscpio ptico
Olympus DP40F, com a unidade de controle DP Control 71 da Olympus
e com cmara fotogrfica acoplada.
A anlise ultraestrutural de superfcie, em microscopia eletrnica
de varredura (MEV) foi realizada em amostras retiradas de 10 botes
florais que haviam sido fixadas em glutaraldeido e desidratadas em srie
etlica crescente (at lcool 100% PA) para a obteno das seces
transversais e longitudinais. As seces foram colocadas em eppendorfs
contendo lcool 100% por mais 30 minutos e, posteriormente, foram
submetidas ao ponto crtico de CO2 Leica EM CPD 030, conforme
Horrige & Tamm (1969). Depois da secagem, o material foi aderido em
suportes de alumnio, com auxlio de uma fita carbono dupla-face e
numerado conforme planejamento prvio. Estes suportes foram postos
sobre isopor, numa caixa plstica transparente contendo slica gel. A
caixa foi vedada com PVC e colocada dentro de um desumidificador at
ser coberto com 20nm de ouro em metalizador Leica EM CPD 030,
modelo CPD 030. A anlise e documentao foram efetuadas em
microscpio eletrnico de varredura JEOL JSM-6390LV.

97

Figura 1 - Metodologias para anlise estrutural das partes florais de C.

xanthocarpa. A) Indivduo adulto em rea preservada de mata nativa. B)
Ramos com botes florais. C) Transporte dos ramos com botes florais at o
laboratrio. D) Acondicionamento dos ramos vegetais em baldes com gua. E)
Coleta de botes florais na fase balo (seta). F) Botes florais fixados em
glutaraldedo (1%) + formaldedo (4%). G) Sala de microscopia
(LFDGV/UFSC). H) Microscpio eletrnico de varredura JEOL JSM-6390LV
(LCME/UFSC).

98

99

2 RESULTADOS E DISCUSSO
2.1 FLOR DE CAMPOMANESIA XANTHOCARPA
A anlise dos botes florais de C. xanthocarpa confirmou os
dados constatados na literatura. A flor exibiu estrutura zigomorfa,
diclamdea (2 verticilos florais), heteroclamdea (clice e corola com
coloraes diferentes), corola dialiptala (ptalas livres entre si), clice
gamospalo (spalas parcialmente unidas entre si), polistmones
(numerosos estames), hermafrodita (Figura 2).

Pl

Pt

Sp

Em

Figura 2 - Flor diclamdea, heteroclamdea e polistmone de C.

xanthocarpa em antese, mostrando os estames (Em), o pistilo (Pl), as
ptalas (Pt) e as spalas (Sp).
2.2 PERIANTO (CLICE E COROLA) DE C. XANTHOCARPA
Os botes florais na fase balo apresentaram as folhas
modificadas estreis (perianto) e as frteis (androceu e gineceu)
inseridas no receptculo floral (Figura 3A). O clice apresentou 5
spalas de colorao verde-clara, com formato de pequenas folhas
parcialmente unidas entre si (clice gamospalo) (Figuras 3A e 3B). As
seces transversais das spalas mostraram a epiderme como um
revestimento uniestratificado, com clulas polidricas, recobertas por
cutcula, e com tricomas secretores na face adaxial. O contedo destes

100

tricomas mostrou reao positiva ao sudan III, indicando natureza

lipdica. O mesofilo das spalas apresentou parnquima homogneo
clorofilado (clornquima), com clulas de tamanhos variveis e
estruturas subepidrmicas secretoras, na face abaxial, glabra e rica em
complexos estomticos (Figuras 3C, 3D, 3E e 3F). A corola mostrou-se
formada por cinco ptalas obovadas, com cerca de 1cm, de colorao
branca (Figura 4A). As ptalas mostraram-se intensamente
vascularizadas, com ramificaes at prximo margem apical (Figura
4B). O mesofilo est formado por um parnquima homogneo (Figura
4C), apresentando conspcuos espaos intercelulares (Figura 4D) e
estruturas secretoras subepidrmicas (Figuras 4C e 4D). A epiderme
apresentou-se uniestratificada, evidenciando clulas com as paredes
periclinais externas convexas, na face adaxial (Figura 4D), coberta por
cutcula, e com tricomas (Figura 4E). A epiderme est provida de
estmatos, na face abaxial (Figura 4F). A observao ultraestrutural
revelou que em muitos estmatos no ocorria rompimento da cutcula na
regio do poro (Figura 4F), indicando que estes complexos estomticos
no seriam funcionais.
O receptculo a regio mais dilatada do eixo caulinar, onde se
inserem as folhas modificadas (SOUZA, 2003), constituindo-se no local
de onde emergem os apndices modificados: spalas, ptalas, estames e
carpelos (MARIATH et al., 2006). As spalas, como unidades do
perianto, mantm caractersticas semelhantes s das folhas, sendo
usualmente verdes, com estmatos e nervuras (SIMPSON, 2006). Souza
(2003) descreve as spalas como sendo revestidas por epiderme, em
geral, simples, com formao de cutcula, estomatfera e pilosa. As
clulas epidrmicas podem ter formatos variveis, os complexos
estomticos encontram-se na face abaxial e os pelos podem ser
secretores. A presena dos estmatos na epiderme da face abaxial
facilita as trocas de O2 e CO2 e a absoro eficiente do CO2, que ser
utilizado na reao de fotossntese. A cobertura das superfcies celulares
pela cutcula impermevel essencial para preveno da perda de gua
(EVANS, 1999). Esta a primeira barreira de proteo entre as
superfcies areas das plantas e o meio ambiente e o principal obstculo
ao movimento da gua, incluindo o fluxo transpiratrio e de solutos.
composta por cutina que forma uma matriz para deposio das ceras,
dois materiais hidrofbicos (RIEDERER & SCHREIBER, 2001). A
cutcula e os tricomas secretores de leos, presentes nas spalas da
espcie em estudo, devem constituir-se em estruturas importantes para
manuteno do equilbrio hdrico do boto floral, assegurando o
desenvolvimento adequado das estruturas reprodutivas.

101

O mesofilo das spalas parenquimatoso, quase sempre

clorofilado, homogneo, podendo apresentar cavidades secretoras
(SOUZA, 2003). As clulas do mesofilo podem conter at 10 milhes de
cloroplastos em cada centmetro quadrado, pois estes so os locais de
realizao da fotossntese (EVANS, 1999). Considerando-se que as
spalas so as partes florais mais expostas a irradiao solar, em C.
xanthofila, principalmente no boto floral que antecede a antese,
explica-se a presena de clornquima, podendo assim contribuir para
produo de metablitos indispensveis ao desenvolvimento da flor.
A intensa vascularizao das ptalas pode estar associada ao
transporte de metablitos que ficam armazenados no mesofilo e servem
para atrao de polinizadores. A convexidade das paredes celulares
associada presena de tricomas contribui para refletir a irradiao
solar, minimizando efeitos de desidratao dos tecidos internos
(LARCHER, 2000). A epiderme das ptalas tambm unisseriada e a
cutcula pode apresentar ornamentaes e/ou tricomas (SOUZA, 2003).
Alguns tricomas no mostraram presena de secreo, havendo assim
tricomas glandulares e aglandulares. Os tricomas, glandulares ou no,
devem contribuir com a proteo ao dessecamento na fase da antese,
pois a face adaxial fica mais exposta ao sol. Os estmatos posicionados
abaxialmente, estaro assim protegidos da perda hdrica por ocasio da
abertura para troca gasosa, indispensvel para a intensa atividade
mitocondrial que ocorre nos tecidos das partes florais (LAMBERS et
al., 1998). Assim, nas ptalas da espcie em estudo, a constatao de
estmatos no funcionais deve ser decorrncia na no exposio desta
face antes da antese, estdio este que posiciona a ptala de modo que a
face abaxial fique mais protegida da irradiao solar.
A forma como o perianto de C. xanthocarpa mostrou-se
estruturado demonstra que a espcie investiu na busca de proteo ao
androceu e ao gineceu at que estes estejam aptos a realizar suas
funes reprodutivas. Uma epiderme provida de cutcula e pelos
secretores na face adaxial previne a dessecao das estruturas e diminui
os efeitos da radiao solar. Por outro lado, uma epiderme revestida pela
cutcula e com os complexos estomticos protegidos na face abaxial,
permite s partes florais estreis a realizao das trocas gasosas (O2 e
CO2), a ativao da rota estomtica da transpirao, essencial para a
absoro dos nutrientes disponibilizados via xilema, e a realizao da
fotossntese pelas spalas, que auxiliam a planta na manuteno da flor
que garante a perpetuao da espcie.

102

Figura 3 - Clice de C. xanthocarpa. A) Spalas parcialmente unidas (seta),

de colorao verde clara, inseridas no receptculo floral. Barra = 2mm B)
Eletromicrografia de vista frontal de uma spala. C) Seco transversal de uma
spala com epiderme adaxial recoberta por tricomas (seta) delimitando
clornquima homogneo e estruturas secretoras sob a epiderme abaxial. D)
Epiderme adaxial (interna) recoberta por tricomas (seta). E) Eletromicrografia
de uma spala apresentando a face adaxial, intensamente pilosa, e abaxial de
aspecto glabro com vrios complexos estomticos (setas). F) Detalhe da
epiderme abaxial (externa) constituda por tricomas secretores (seta indicando a
secreo na extremidade do tricoma) e complexo estomtico formado pelas
clulas-guarda e clulas subsidirias. Sp = spala, Re = receptculo floral, Cl =
clornquima, St = estrutura secretora; Fd = face adaxial, Fb = face abaxial, Cg =
clula-guarda, Cs = clula subsidiria.

103

Figura 4 - Corola de C. xanthocarpa. A) Ptalas obovadas, de colorao

branca (seta). B) Detalhe da poro apical de uma ptala, mostrando
vascularizao ramificada at prximo margem (seta). C) Seco transversal
das ptalas dispostas em camadas e envolvidas pelas spalas. So formadas por
parnquima homogneo e estruturas secretoras subepidrmicas (seta). D)
Ptalas vistas em microscopia eletrnica de varredura, mostrando mesofilo
constitudo por parnquima homogneo, com espaos intercelulares (seta) com
estruturas secretoras subepidrmicas. Epiderme uniestratificada em ambas as
faces da ptala, com as paredes externas convexas das clulas na face adaxial.
E) Superfcie adaxial de uma ptala com presena de tricomas (seta). F)
Eletromicrografia da superfcie abaxial da ptala com presena de estmatos
(setas) na epiderme. Barras = 500m (B,C); 100m (D); 200m (E); 20m
(F). Pt = ptala, Sp = spala, Pr = parnquima, Ep = epiderme, St = estrutura
secretora, Fd = face adaxial.

104

2.3 ANDROCEU DE C. XANTHOCARPA

O androceu de C. xanthocarpa est constitudo por estames
providos de filetes alongados que sustentam as anteras no pice (Figura
5A e 5B). A antera tetraloculada, com 4 microesporngios, onde
formam-se os andrfitos (Figura 5B) e apresentam um conetivo central,
onde localiza-se o feixe vascular (Figura 5D). As anteras sofrem
deiscncia a partir da destruio da parede divisria entre os lculos da
mesma teca (Figura 5E) e do rompimento do tecido externo desta
regio, havendo a liberao dos andrfitos, atravs do estmio ou
abertura semelhante a uma fenda (Figuras 5B e 5C). As anteras
apresentaram uma parede externa epidrmica uniestratificada e uma
camada interna subepidrmica, o endotcio, tambm uniestratificado,
porm apresentando espessamentos parietais nas paredes tangenciais
internas e nas anticlinais (Figura 5D e 5E). As paredes celulares
espessadas no reagiram positivamente presena de lignina com uso
de azul de toluidina, mostrando colorao avermelhada, como as clulas
fundamentais do conetivo e a epiderme (Figura 5D), indicando presena
de compostos cidos. Tambm foi possvel identificar a camada mais
interna dos microesporngios, denominada tapete, tecido nutritivo que
assegura o desenvolvimento dos andrfitos. O tapete, em C.
xanthocarpa, mostrou-se formado por tapete parietal, com clulas
intactas, delimitando o lculo, e por clulas invasivas, entre os
andrsporos e tambm adjacente ao tapete parietal, evidenciadas como
desintegraes de tecido, decorrente do processo de maturao dos
micrsporos (Figuras 5E e 5F). Foi possvel visualizar os orbculos ou
Corpsculos de Ubish, revestindo a superfcie interna do tapete secretor
(Figura 5F).
Segundo Souza (2003), a antera tetrasporangiada, madura e
seccionada transversalmente mostra o conectivo, regio de juno com o
filete, onde ocorre o feixe vascular e as duas tecas, cada qual com dois
esporngios ou sacos polnicos onde se formam os gros de plen. As
tecas da antera esto ligadas entre si e com o filete atravs de um tecido
estril denominado conectivo, que separa os esporngios (MARIATH et
al, 2006). A definio dos diferentes tecidos numa antera acontece no
incio do processo de desenvolvimento da estrutura, desde a iniciao no
meristema floral at a antese da flor (MARIATH et al.,2000).
Geralmente, como refere Esau (1976), as anteras sofrem deiscncia e em
muitas espcies a deiscncia precedida pela destruio da parede
divisria entre os lculos da mesma teca (metade da antera). Mais tarde,
acrescenta a autora, o tecido externo desta regio tambm sofre

105

rompimento e o plen libertado atravs da fenda (estmio). Segundo

Mariath et al. (2006), as anteras apresentam deiscncia (abertura
espontnea) atravs de fendas longitudinais ou transversais, poros ou
valvas, libertando os andrfitos. Estes autores informam que a ruptura
do estmio coincide, aproximadamente, com a abertura da flor. Neste
momento, as clulas estomiais desidratam-se e as paredes celulares
contraem-se. Porm, devido aos espessamentos cuticulares e parietais,
as dimenses do lado externo das clulas do estmio permanecem fixas
e acabam dobrando-se, rompendo o tecido. Segundo Bittencourt Jr. &
Mariath (1997), a constituio qumica dos espessamentos , em geral
celulsica, acrescido de pequena quantidade de material pctico e
lignina.
Esau (1976) descreve a estrutura da antera como tendo a
epiderme como parede mais externa, uma camada subepidrmica
(endotcio), com deposio de material em arestas ou faixas e,
internamente o tapete, que um tecido nutritivo constitudo de clulas
multinucleadas. A autora comenta, ainda, que as camadas localizadas
entre o endotcio e o tapete muitas vezes so esmagadas e destrudas
durante o crescimento dos androsporngios. Furness & Rudall (1998)
afirmam que as funes do tapete so nutrir o tecido esporognico e os
andrsporos, secretar a calose durante a separao das ttrades,
sintetizar esporolenina para a formao da parede dos gros de plen,
produzir os orbculos (corpsculos de Ubish), sintetizar e liberar sobre o
gro de plen substncias como o Pollenkitt (lipdeos, flavonoides,
carotenoides), trifino (mistura de substncias hidrofbicas), enzimas e
protenas de reconhecimento. O tapete uma camada de clulas ricas
em protoplasma, importante fisiologicamente, pois todo nutriente
destinado s clulas-me do plen ou aos andrfitos em
desenvolvimento passa por este tecido (SOUZA, 2003). Os orbculos
so partculas de forma e tamanho variados impregnadas com
esporolenina, que revestem a superfcie interna das clulas do tapete
secretor (MARIATH et al., 2006). O conjunto de orbculos forma a
membrana tapetal e paratapetal que protegem os gros de plen maduros
quando o tapete degenera.
Os andrfitos das angiospermas desenvolvem-se a partir de
andrsporos haploides formados por meiose no interior dos
androsporngios dos estames. Em tais condies, inicia-se o
desenvolvimento do andrfito, com a primeira diviso mittica
formando apenas uma clula vegetativa e uma clula-me dos gametas
masculinos. Nessas condies de desenvolvimento pode ocorrer a antese
e o plen, contendo andrfitos, em diferentes graus de desenvolvimento,

106

dependendo da espcie, abandona o esporngio que lhe nutriu e

disperso, podendo ocorrer a polinizao. Transportado a um estigma
receptivo, renova seu ciclo de desenvolvimento (COCUCCI, 1995).
Os estames tm como principal funo a produo de esporos
(andrsporos) e suas formas maduras, os andrfitos (gros de plen).
Mas, em algumas espcies ocorrem modificaes, como os nectrios
que servem para atrair os insetos. Tambm podem gerar estames frteis
e outros infrteis, que servem de alimento aos polinizadores devido ao
contedo proteico. No caso de C. xanthocarpa, sua funo est ligada
produo dos gros de plen, pois no se formam os nectrios. Esta flor
polistaminada, ou seja, forma grande quantidade de estames o que
pode estar ligado oferta de plen para os polinizadores (especialmente
insetos).

107

Figura 5 - Estames e andrfitos de C. xanthocarpa. A) Estames formados

pelas anteras e por filetes dispostos ao redor do androceu. Barra = 2mm. B)
Eletromicrografia da antera deiscente (seta), tetraloculada, sustentada pelo
filete. C) Antera recoberta pelos andrfitos apresentando destruio da parede
divisria entre os lculos da mesma teca e o rompimento do tecido externo da
regio (seta), formando o estmio. D) Seco longitudinal da antera imatura,
mostrando o endotcio no lignificado (colorao prpura avermelhada) e o
parnquima entre os lculos (seta). Pode-se observar o estmio e os sacos
polnicos com micrsporos em seu interior (colorao azul-esverdeada, com
azul de toluidina). E) Seco longitudinal da antera mostrando o endotcio
(seta), sob a epiderme e os andrfitos entre clulas do tapete. F) Andrfitos II:
poro de emergncia do tubo polnico (seta), clulas do tapete parietal destrudas,
Corpsculos de Ubish, tapete invasivo entre os andrfitos e clulas intactas do
tapete parietal. An = antera, Ft = filete, Lo = lculo, Fv = feixe vascular, Af =
andrfito, En = endotcio, Es = estmio, Sl = saco polnico, Ep = epiderme, Ta
= tapete parietal intacto, Dt = tapete parietal destrudo, Ti = tapete invasivo,
AfII = andrfito II.

108

2.4 GINECEU DE C. XANTHOCARPA

Campomanesia xanthocarpa apresenta um estilete alongado
interligando a poro apical do gineceu, constituda por estigma,
poro basal, onde se encontra o ovrio (Figuras 6A e 6B). O estigma
mostrou-se capitado-peltado, com uma fenda central (Figura 6C), que
facilita a penetrao dos tubos polnicos. do tipo seco, com as clulas
epidrmicas alongadas formando papilas (Figura 6D e 6E). Estas clulas
papilosas, quando seccionadas (Figura 6F) evidenciaram contedo de
colorao azulada, significando reao positiva a compostos fenlicos.
Logo abaixo das papilas, aparece tecido parenquimtico formado por
clulas alongadas transversalmente. Em seco longitudinal da poro
apical do estilete, finalizado pelo estigma (Figura 6F), podem ser
evidenciadas as terminaes da vascularizao das folhas carpelares que
constituem o gineceu. As clulas do parnquima fundamental do
estilete, assim como as do estigma, apresentam paredes celulsicas que,
sob reao com azul de toluidina, mostraram colorao avermelhada
(Figura 6F), indicando a presena de compostos cidos.
O estilete revestido por uma epiderme uniestratificada e
apresenta, tecido parenquimtico subepidrmico (Figura 6D), com
conspcua reserva de amido (Figura 6F). A fenda observada no estigma
(Figura 6E) tem continuidade no estilete, o qual mostrou ser provido de
um canal oco, central que se estende at as cavidades ovarianas (Figura
7A). Este canal revestido pelo tecido transmissor que apresenta clulas
alongadas (Figura 7B).
Em C. xanthocarpa, o ovrio nfero, no havendo uma
delimitao ntida do receptculo e do ovrio, e apresenta a parte
superior, ligada ao estilete, como um disco mais elevado (Figuras 6A e
6B) com alguns tricomas na superfcie. Possui de seis a oito lculos,
com rudimentos seminais bisseriados (Figuras 7C e 7D). A epiderme
externa ovariana fortemente cutinizada e recoberta por tricomas
(Figura 7E). O mesofilo, na regio ovariana, est constitudo por tecido
parenquimtico (Figuras 7F, 7G e 7H), o qual mostra conspcuos
espaos intercelulares (Figura 7G), que devem ter importante papel na
reserva de ar. Feixes vasculares ocorrem entremeados ao tecido
parenquimtico (Figura 7H). Estruturas secretoras esto presentes no
mesofilo, sob a epiderme (Figuras 7E e 7G).
O gineceu, verticilo floral que contm os rudimentos seminais,
com seu respectivo esporngio, desenvolve uma srie de estruturas
especializadas que garantem a fecundao. Estruturas como estigma,
estilete e tecido transmissor constituem especializaes que permitem o

109

desenvolvimento do andrfito, determinando a trajetria segura para que

ocorram o acoplamento, a cpula e a singamia (COCUCCI, 1995).
Conforme Esau (1976) comum no estigma, a presena de clulas
epidrmicas alongadas formando papilas e um tecido glandular secretor
de substncias, que criam um meio adequado germinao dos tubos
polnicos. Com relao presena de papilas, outros estudos tm
registrado estas em estigmas de espcies de Myrtaceae, como em
Eugenia uniflora (FRANZON, 2008), a qual tambm apresenta estigma
do tipo seco (SILVA & PINHEIRO, 2007). Estigmas do tipo seco
tambm so citados em seis gneros de Myrtaceae estudados na regio
central do Brasil (PROENA & GIBBS, 1994). De acordo com
Lughadha e Proena (1996), esta uma caracterstica recorrente em
Myrtoideae. Nos estigmas do tipo seco, eventos na pr-polinizao,
incluem o desenvolvimento de uma secreo extracuticular que serve
para adeso do plen compatvel e sua hidratao, facilitando a
penetrao dos tubos polnicos (HESLOP-HARRISON, 2000). Alm
disso, a secreo pode auxiliar na germinao do gro de plen e
crescimento inicial dos tubos polnicos (CLIFFORD & SEDGLEY,
1993), embora em algumas espcies o crescimento dos tubos seja
auttrofo at chegar ao tecido transmissor (HERRERO & DICKINSON,
1980). Souza (2003) menciona a presena de tecido transmissor
revestindo os canais ocos do estilete. Segundo Herrero e Dickinson
(1979), o crescimento do tubo polnico, no tecido transmissor,
hetertrofo, dependendo das reservas estilares, especialmente de amido.
Em Eugenia uniflora, os gros de amido presentes nas clulas
adjacentes ao tecido transmissor desaparecem depois da passagem dos
tubos polnicos (RODRIGO & HERRERO, 2000). Os gros de amido
observados no tecido transmissor, em C. xanthocarpa, devem ser
relevantes para o crescimento dos tubos polnicos, bem, como no
deslocamento destes atravs do estilete. Segundo Mariath et al. (2006),
o ovrio a poro basal dilatada do carpelo, de cuja superfcie interna
emergem excrescncias formadas por tecidos epidrmicos e
subepidrmicos (placenta) para o interior da cavidade central (lculo) de
onde se originam os rudimentos seminais. Segundo Souza (2003), o
mesofilo ovariano apresenta natureza parenquimtica, havendo ou no
estruturas secretoras.
A maneira como as partes constituintes do gineceu de C.
xanthocarpa estruturam-se sugere adaptao da espcie, no sentido de
facilitar a adeso, o reconhecimento e a germinao dos gros de plen
compatveis sobre as papilas estigmticas, a penetrao dos tubos
polnicos no estilete, atravs da fenda no estigma e o percurso atravs do

110

canal estilar oco revestido, por tecido que garante a nutrio e guia os
tubos polnicos at a entrada do ovrio. Entretanto, em C. xanthocarpa,
a presena de compostos fenlicos no deve estar relacionada com a
germinao dos tubos polnicos e sim, provavelmente como forma de
defesa a predao. Na regio das cavidades ovarianas so produzidos os
rudimentos seminais e toda esta poro do gineceu est voltada para a
proteo e a manuteno destas estruturas, atravs dos tecidos
parenquimticos e da vascularizao garantindo o aporte de nutrientes e
gua. Os septos que dividem os lculos apresentam a continuidade do
canal estilar oco, guiando os tubos polnicos at os rudimentos seminais
no sentido de garantir a cpula atravs da micrpila, a descarga dos
gametas no saco embrionrio e a singamia, permitindo a continuidade
desta espcie.

111

Figura 6 - Gineceu de C. xanthocarpa. A e B) Gineceu visto sob

microscpio estereoscpio (A) e sob o microscpio eletrnico de varredura (B)
apresentando o estigma localizado no pice do estilete e a poro superior do
ovrio nfero, mostrando-se como um disco mais elevado, com alguns tricomas
na superfcie. C) Estigma seco e capitado-peltado, mostrando a fenda central
(seta). D) Seco transversal do estigma-estilete mostrando as papilas
estigmticas coradas em azul (fenis), o parnquima que preenche o estilete (cor
prpura-avermelhada), os feixes vasculares (cor vermelha), as clulas
esbranquiadas (provvel reserva de amido) e a epiderme simples do estilete. E)
Detalhes do estigma mostrando a fenda estigmtica e as clulas epidrmicas
alongadas formando papilas. F) Detalhe da regio estigma-estilete com clulas
esbranquiadas logo abaixo das papilas, uma regio de clulas alongadas
transversalmente (seta), as clulas esbranquiadas adjacentes ao parnquima e
os feixes vasculares. Eg = estigma, Ei = estilete, Ov = ovrio, Ep = epiderme, Pr
= parnquima, Ps = papila estigmtica, Fv = feixe vascular, Ra = reserva de
amido, Fs = fenda estigmtica. Barras = 2mm (A), 1mm (B), 100m ( C),
20m (D,F), 50m (E).

112

Figura 7 - Estilete e ovrio de C. xanthocarpa. A) Seco longitudinal do

gineceu, mostrando o canal estilar oco, estendendo-se at os lculos ovarianos.
B) Canal estilar oco com aparente depsito de secreo, revestido pelo tecido
transmissor (cor prpura avermelhada) envolvido pelo parnquima. C e D)
Detalhe do ovrio sob o microscpio estereoscpio (C) e em microscopia
eletrnica de varredura (D) mostrando os rudimentos seminais seriados se
desenvolvendo nas cavidades ovarianas e a regio parenquimtica. E)
Eletromicrografia da seco transversal do ovrio mostrando a epiderme externa
cutinizada e recoberta por tricomas. Estrutura secretora abaixo da epiderme. F,
G e H) Seces longitudinais em microscopia eletrnica de varredura (F) e
microscopia ptica (G e H) do ovrio mostrando a epiderme com presena de
tricomas (em F) e o mesofilo constitudo por parnquima apresentando
conspcuos espaos intercelulares (seta em G) e presena de estruturas
secretoras (em G). Em H pode-se ver regies prpuro-avermelhadas marcando a
presena da parede primria nas clulas parenquimticas. Ao redor dos feixes
vasculares de colorao prpura mais intensa, evidenciam-se as clulas
formadoras da bainha do feixe. Barra = 2mm (C ). Co = canal estilar oco, Lv =
lculo ovariano, Pr = parnquima, Tt = tecido transmissor, Pv = parnquima
ovariano, Rs = rudimento seminal, Ec = epiderme cutinizada, Tr = tricoma, St =
estrutura secretora, Ep = epiderme, Fv = feixe vascular.

113

2.5 ESTRUTURAS SECRETORAS EM C. XANTHOCARPA

Campomanesia xanthocarpa mostrou estruturas secretoras em
todas as partes formadoras da flor, sendo mais abundantes nas spalas,
no filete, no estilete e na regio ovariana. Testes histoqumicos com
sudan, revelaram a presena de leos em dois tipos de estruturas,
glndulas (Figuras 8A a 8D) e tricomas (Figuras 8E e 8F). As glndulas
so estruturas subepidrmicas, constitudas por um tecido secretor que
delimita um espao interno (Figuras 8C e 8D), no qual acumula-se a
secreo oleosa. O tecido secretor (epitlio secretor) est constitudo por
trs camadas de clulas (Figura 8C). Os tricomas secretores de leo,
presentes nas partes florais de C. xanthocarpa so unicelulares, mais
dilatados na base e afilados na extremidade (Figura 8E), por onde
liberada a secreo (Figura 8F). Estas estruturas mostraram-se
abundantes na face adaxial das spalas, em menor nmero na base da
face adaxial das ptalas, nos filetes dos estames, no estilete e na
superfcie ovariana.
De acordo com Platt & Thomson (1992), as clulas produtoras de
leo secretam seus produtos dentro de cavidades. O epitlio secretor
destas estruturas, esclarecem os autores, formado por trs camadas de
clulas: uma camada externa, uma camada mdia suberizada e uma
camada interna. Complementam esclarecendo que, depois que a camada
interna depositada, uma cavidade formada, rodeada pela membrana
plasmtica anexada numa protuso em forma de sino chamada cpula.
Uma camada suberizada depositada sobre a epiderme selando a
glndula de leo, prevenindo o contato das clulas ao redor com
substncias potencialmente txicas. Segundo Gogosz (2010), as
glndulas secretoras de C. xanthocarpa so abundantes em praticamente
todos os rgos, com exceo da raiz. Alguns autores classificam a
glndula de leo das Myrtaceae como tendo origem lisgena, outros,
porm, classificam-nas como esquizgenas (FAHN, 1982). Segundo
Esau (1974), lisogenia e esquizogenia podem ser combinadas na
formao de espaos secretores. A formao destas estruturas, em C.
xanthocarpa, foi verificada por Gogosz (2010), sugerindo que ocorre a
partir da combinao de esquizogenia, em um primeiro momento, e
lisogenia, na fase final do seu desenvolvimento, tratando-se, portanto de
glndula esquizo-lisgena. Alm disso, na glndula plenamente formada,
as clulas encontram-se rompidas na regio perifrica da cavidade.
Ainda, segundo Gogosz (2010), o contedo destas clulas ocorre de
diferentes formas e, segundo o resultado do teste com sulfato ferroso,
tratam-se de compostos fenlicos. Segundo Beltrati & Paoli (2003), a

114

presena de compostos fenlicos em rgos totalmente diferenciados

relacionada com os mecanismos de interao entre plantas e animais,
agindo como dissuasivo alimentar e reduzindo a herbvoria. Alm disso,
quando as plantas esto sob estresse hdrico, os compostos fenlicos
acumulados nos vacolos garantem a manuteno do arcabouo celular
e integridade dos tecidos. Taiz & Zeiger (2002) referem-se existncia
de uma srie de compostos fenlicos, com diferentes funes nas
plantas. Podem reduzir o crescimento de plantas vizinhas (alelopatia),
do suporte mecnico s estruturas vegetais, permitem o crescimento
ascendente e o transporte de gua pelo xilema sem colapso das
estruturas, o que pode ter permitido s plantas colonizarem o ambiente
terrestre e diminuem a digestibilidade pelos herbvoros (lignina),
produzem sinais visuais e olfativos (carotenoides e flavonoides). Os
flavonoides formam a maior classe de compostos fenlicos e so as
antocianinas (atraem animais para as flores e frutos), as flavonas
(protegem dos danos causados pela luz ultravioleta), os isoflavonoides
(apresentam atividade antomicrobiana) e os taninos que inibem o ataque
de herbvoros.
Segundo Souza (2003), os tricomas glandulares apresentam uma
poro apical, uni ou pluricelular e uma outra, que funciona para o pelo
como um pednculo. A ocorrncia dos tricomas secretores,
provavelmente, deve ter implicaes na ecologia da espcie. Diversos
trabalhos tm relatado a funo dos tricomas na defesa da planta contra
herbivoria (CUTTER, 1987; THEOBALD et al., 1979). Tambm h
relatos sobre sua interferncia no processo de fotossntese devido a
alteraes na luz absorvida, regulao da temperatura foliar e reduo da
evapotranspirao (SMITH et al., 1997). A presena de tricomas tem
tambm importncia em estudos de sistemtica comparativa
(THEOBALD et al. 1979).

115

Figura 8 - Glndulas de leo e tricomas em partes florais de C.

xanthocarpa. A) Vista frontal da face abaxial da ptala evidenciando a
glndula de leo e os tricomas. B) Seco paradrmica da face adaxial da spala
apresentando a glndula de leo, em reao positiva ao Sudam III e o arranjo
das clulas do epitlio secretor na regio glandular. C) Eletromicrografia de
seco transversal do ovrio apresentando a glndula de leo rodeada pelo
epitlio secretor formado por trs camadas de clulas (I, II, III). Detalhe da
secreo depositada dentro da cavidade glandular (seta). D) Seco longitudinal
do ovrio com glndula de leo evidenciando a secreo em seu interior, o
epitlio secretor (em azul) e a regio da cpula. Pode-se ver a espessa camada
cuticular sobre a epiderme unisseriada e a presena de tricomas. E)
Eletromicrografia da face adaxial da spala recoberta por tricomas secretores
(setas). F) Seco paradrmica da borda da spala evidenciando o tricoma
unicelular apresentando reao positiva ao Sudam III na base e a secreo sendo
extrusada no pice. Go = glndula secretora, Tr = tricoma, Pt = ptala, Ct =
clula secretora, Sp = spala, (I, II, II) = camadas do epitlio secretor, Ov =
ovrio, Cp = cpula, E = epitlio secretor, S = secreo, Ci = cutcula, Ep =
epiderme, R = regio secretora.

116

117

3- CONCLUSO
Analisando a estrutura das partes florais de Campomanesia
xanthocarpa pode-se concluir que:
1. A espcie investiu em estruturas de proteo nas spalas
(cutcula, glndulas de leo e tricomas) e em mecanismos,
provavelmente, ligados rota transpiratria estomtica e
fotossntese (abundncia de complexos estomticos e
cloroplastos), as quais permanecem nas flores envolvendo o
androceu e o gineceu.
2. As ptalas servem de mecanismo de proteo ao androceu e ao
gineceu at a antese, devido presena de glndulas de leo e ao
formato convexo das clulas que formam um estojo
envolvendo os rgos reprodutivos.
3. O androceu polistmone provavelmente assume papel de atrao
aos polinizadores pela abundncia de plen e material proteico
que representam, alm de desenvolver as anteras que garantem a
produo de gametas funcionais e facilitam a sua disperso no
momento da antese, favorecendo polinizao cruzada.
4. O gineceu estrutura-se de forma a facilitar a adeso e a
germinao dos gros de plen compatveis, a penetrao e o
crescimento dirigidos dos tubos polnicos, a cpula e a descarga
dos gametas, nos rudimentos seminais, com a consequente
singamia, promovendo a fecundao e a formao de novos
indivduos.
5. As glndulas de leo e os tricomas secretores so estratgias
extras adotadas pela espcie, no sentido de preservar as partes
florais dos estresses ambientais, biticos e abiticos, a fim de
garantir a perpetuao e a ocupao de novos espaos em seu
hbitat natural, atravs da reproduo sexuada.

118

119

4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
BECK, C.B. An introduction to plant structure and development.
Cambridge University Press. New York. United States of America.
2010.
BELTRATI, C.M. & PAOLI, A.A.S. Sementes. In: APPEZZATO-DAGLRIA, B. & CARMELLO-GUERREIRO, S.M. Anatomia vegetal.
Viosa, UFV. 2003.
BITTENCOURT JR, N.S. & MARIATH , J. E. A. Ontogenia dos
estratos parietais da antera de Tabebuia pulcherrima Sandw.
(Bignoniaceae). Acta Botanica Brasilica 11: 9-30. 1997.
CLIFFORD, S.C., SEDGLEY, M. Pistil structure of Banksia menziesii
R. Br. (Proteaceae) in relation to fertlility. Australian Journal of
Botany, Collingwood, v.41, n. 4-5, p.481-490.1993.
COCUCCI, A.E.; MARIATH, J.E.A. Sexualidade das plantas. Cincia
Hoje, v.18, n.106. 1995.
CUTTER, E.G. Anatomia vegetal:
interpretaes. v.2. So Paulo, Roca. 1987.

rgos,

experimentos,

ESAU, K. Anatomia das plantas com sementes. Ed. Edgard Blcher.

So Paulo - SP. 1976.
EVANS, J.R. Leaf anatomy anables more equal acces to light and CO2
between chloroplasts. New Phytologist 143, p 93-104. 1999.
FAHN, A. Plant anatomy. 3nd ed. New York, Pergamon. 1982.
FRANZON, R.C. Propagao vegetativa e modo de reproduo da
pitangueira (Eugenia uniflora L.) Tese (Doutorado em Cincias).
Universidade Federal de Pelotas. Pelotas, RS. 2008.
FURNES, C. A., RUDALL, P. J. The tapetum and systematic in
monocotyledons. The Botanical Review 64: 201-239.

120

GOGOZS, A.M.; COSMO, N.L.; BONA, C.; SOUZA, L.A.

Morfoanatomia da plntula de Campomanesia xanthocarpa O. Berg.
(Myrtaceae). Acta Botnica Brasileira. 24(3). 2010.
HERRERO, M., DICKINSON, H.G. Pollen-pistil incompatibility in
Petunia-hybrida changes in the pistil following compatible and
incompatible intraspecific crosses. Journal of Cell Science,
Cambridge, v. 36, p. 1-18. 1979.
HERRERO, M., DICKINSON, H.G. Pollen-tube growth following
compatible and incompatible intraspecific pollinations in petuniahybrida. Planta, v.148, n.3, p.217-221. New York. 1980.
HESLOP-HARRISON, Y. Control gates and micro-ecology: the pollenstigma interaction in perspective. Annals of Botany. (Suppl. A) 85: 5
13. 2000.
HORRIDGE, G.A. & TAMM, S.L. Critical point drying for scanning
electron microscopy study of ciliary motion. Science 163: 817-818.
1969
LAMBERS, H.; STUART, F. & PONS, T.L. Plant Physiological
Ecology. SpringersVerlag, New York. 1998.
LARCHER, W. Ecofisiologia vegetal. So Carlos, Rima Artes e
Textos. 2000.
LIMA, D. F., GOLDENBERG, R., SOBRAL, M. O gnero
Campomanesia (Myrtaceae) no estado do Paran, Brasil. Rodrigusia
62 (3): 683-693. 2011.
LUGHADHA, E.N.; PROENA, C. A survey of the reproductive
biology of the Myrtoideae (Myrtaceae). Annals of the Missouri
Botanical Garden, v.83, n.4. St. Louis. 1996.
MCDOWELL, E.M. & TRUMP, B. Histological fi xatives for
diagnostic light and electron microscopy. Archives of Pathology &
Laboratory Medicine 100: 405-414. 1976.

121

MARIATH, J. E. A.; SANTOS, R. P.; BITTENCOURT JR. N. S. Flor.

In. Anatomia Vegetal. Ed. APEZZATO-DA-GLORIA, B.;
CARMELLO-GURREIRO, S. M.; Viosa, UFV, 437p. 2006.
MARIATH, J. E. A., MOO, M. C. C., OLIVEIRA, J. M. S., DE TONI,
K. L., SANTOS RINALDO, P. E., SANTOS, R. P. Embriologia:
atualidade e importncia na cincia botnica. In Tpicos Atuais em
Botnica (T. B. CAVALCANTI coord.). EMBRAPA Recursos
Genticos e Biotecnologia/ Sociedade Botnica do Brasil, Braslia, p.
95-100. 2000.
OBRIEN, T.P.; FEDER, N. & MCCULLY, M.E. Polychromatic
staining of plant cell walls by toluidine blue O. Protoplasma 59: 368373. 1964.
PLATT, K. A., & THOMSON, W.W. Idioblast oil cells of avocado:
Distribution, isolation, ultrastructure, histochemistry, and biochemistry.
International Journal. of Plant Science, 153: 301310. 1992.
PROENA, C., GIBBS, P. E. Reproductive biology of eight sympatric
Myrtaceae from central Brazil. New Phytologist, v.126, p. 343-354,
1994.
RIEDERER, M., and L. SCHREIBER. Protecting against water loss:
Analysis of the barrier properties of plant cuticles. Journal of
Experimental Botany 52: 20232032. 2001.
RODRIGO, J., HERRERO, M. Cuajados errticos en albaricoquero.
Polinizacion y calidad de flor. Zaragoza: instituicion Fernando el
Catlico. 2000.
SANCHOTENE, M.C.C. Frutferas nativas teis fauna na
arborizao urbana . 2. ed. Porto Alegre: SAGRA, 1989.
SILVA, A.L.G.; PINHEIRO, M. C. B. Biologia floral e da polinizao
de quatro espcies de Eugenia L. (Myrtaceae). Acta Botanica
Brasilica, v.21, n.1. Braslia. 2007.
SIMPSON, M.G. Plant systematics. Elsevier, Amsterdam. 2006.

122

SOUZA, L. A. de Morfologia e anatomia vegetal: clula, tecidos,

rgos e plntula. Ed. UEPG. Ponta Grossa PR. 2003.
TAIZ, L. & ZEIGER, E. Fisiologia vegetal. 3ed. Artmed. Porto Alegre
RS. 2004.
THEOBALD, W.L., KRAHULIK,J.L, ROLLINS, R.C. Trichome
description and classifi cation. In: Anatomy of the Dicotyledons, 2nd
ed., vol. I, Systematic Anatomy of Leaf and Stem, with a Brief History of
the Subject, C. R. Metcalfe and L. Chalk. Clarendon Press, Oxford, p.
4053. 1979.
WILSON, P.G.; OBRIEN, M.M.; HESLEWOOD, M.M.; QUINN, C.J.
Relationships within Myrtaceae sensu lato based on a matK phylogeny.
Plant Systematics and Evolution 251: 3-19. 2005.

123

SEO III

ANLISE DO PLEN, DA POLINIZAO CRUZADA E DA

POLINIZAO GEITONOGMICA EM Campomanesia
xanthocarpa O. Berg. (MYRTACEAE

Formatado para publicao

CRISTINA MAGALHES RIBAS DOS SANTOS

124

125

Analysis of pollen, cross-pollination and selfpollination in Campomanesia xanthocarpa (Myrtaceae):

implications
for
species
conservation
and
domestication
Cristina Magalhes Ribas dos Santos , Marisa Santos2 and Miguel
Pedro Guerra3
1

1,3

Laboratrio de Fisiologia do Desenvolvimento e Gentica Vegetal, Programa

de Ps-Graduao em Recursos Genticos Vegetais, Universidade Federal de
Santa Catarina, 88034-000, Florianpolis, Santa Catarina, Brasil.
2
Laboratrio de Anatomia Vegetal, Programa de Ps-Graduao em Recursos
Genticos Vegetais, Universidade Federal de Santa Catarina, 88040-900,
Florianpolis, Santa Catarina, Brasil.
1
Corresponding author. Email: cristinaribassantos@gmail.com

126

127

LIST OF TABLES SEO III

Table 1 - Time intervals, in hours, for collection and number of flowers
non-pollinated and pollinated (cross-pollinated and self-pollinated) of C.
xanthocarpa......................................................................................... 136
Table 2 - Classes for evaluation of pollen tube growth in the stylus of C.
xanthocarpa......................................................................................... 139
Table 3 - Time collection, in hours, number of floral buds with pollen
tube growth and classes of growth of pollen tubes according to the
location in pistils (class 1 stigma; class 2 - stigma-half of the stylus;
class 3 - half and 2/3 of the stylus; class 4 - 2/3 of the stylus-input ovary;
class 5 - penetrating the ovary; class 6 - penetrating the ovules) of C.
xanthocarpa......................................................................................... 147

128

129

LIST OF FIGURES SEO III

Fig. 1 - Different rates of germination of C. xanthocarpa pollen grains:
............................................................................................................. 139
Fig. 2 - Germination of C. xanthocarpa pollen grains over time in
culture medium consisting of 1 g of agar in 100ml of distilled water with
a concentration of 20% sucrose and 40 mg L-1 of boric acid. Arrows
indicate the pollen tubes. Bar = 200m (a-d). ..................................... 140
Fig. 3 - Pollen tube growth of C. xanthocarpa .................................... 141
Fig. 4 - Pollen tube features resulting from cross-pollination, selfpollination and growth classes in C. xanthocarpa............................... 148
Fig. 5 - Cross-pollination and self-pollination of C. xanthocarpa. ..... 150

130

131

Abstract
Campomanesia xanthocarpa Berg. (Myrtaceae), popularly known as
guavirova, is a native species of the Brazilian Atlantic Forest Biome, a
biodiversity hotspot. However, few studies have reported on the
reproductive biology of this species, whose nutritional and medicinal
properties are neglected and underutilized. The objective of this work
was to study the reproductive biology of C. xanthocarpa associated with
features of its pollination, in particular the possible occurrence of selfincompatibility. The plant material was originated from plants located in
Alfredo Wagner City, Santa Catarina State, in southern Brazil. To
analyze the development of pollen tubes, germination tests were
performed in vitro. Controlled pollination and the collection of buds at
predetermined times were conducted to evaluate the reproductive
system. Data were submitted to ANOVA, and when significant
differences (P < 0.05%) were detected, analysis was submitted to
Tukeys range test. Average pollen germination was 36.24%, and apical,
subapical, vacuolar and nuclear pollen zones were observed. In
controlled cross-pollination, germination began within two hours, and
pollen tubes were observed growing in an organized pattern, following
the stigma toward the ovary and then fertilizing 100% of the flowers.
This system showed no barriers 72h after pollination. In the selfpollination experiments, germination started 16 hours later. In contrast
to cross-pollination, pollen tubes grew in a disorganized pattern into the
stylus in 40% of the flowers, and no penetration into the ovules was
observed. These results demonstrate inhibition of pollen tube growth
and suggest the occurrence of homomorphic gametophytic selfincompatibility (GSI) in this species.

132

133

INTRODUCTION
According to FAO (2010), climate change will produce entirely
new standards that may drastically alter the conditions for agriculture in
the future. Agricultural production, especially in the poorest and most
food insecure countries, will suffer the greatest impacts. Therefore, the
demand for germplasm adapted to these new conditions will be
intensified, and native genetic diversity will ensure a swift and rapid
response to these new challenges. The domestication of native plants,
including those already known and used by local or regional farmers
offers a great opportunity for countries rich in genetic resources
(Coradin et al. 2011).
Guabirobeira (C. xanthocarpa) belongs to the Myrtaceae family,
which comprises about 100 genera and 3000 species of trees and shrubs
distributed over all continents, except Antarctica, predominantly in
tropical and subtropical regions of the planet. A large number of species
of Myrtaceae native vegetation can be found in Brazil, and several of
them are located in the southern states (Marchiori and Sobral 1997).
Campomanesia xanthocarpa produces fruits that are highly appreciated
by humans, besides serving as food for associated fauna (Lorenzi 1992).
These fruits are eaten raw and used for the preparation of liqueurs,
juices and jellies. The high content of phenolic compounds (1616 ppm
100g-1) and vitamin C (233.56 mg 100g-1) qualifies the fruit as a
functional food. The texture of the fruit may be attributed to the high
content of pectin. This fruit has technological potential as a result of its
nutritional and sensory properties (Santos et al. 2009). In this context, C.
xanthocarpa was included as a priority species in the initiative called
"Plants for the Future" put forth by the Brazilian Ministry of
Environment and aimed at exploring new ways to utilize the rich
Brazilian biodiversity (Coradin et al. 2011).
Knowledge of the mode of reproduction of a plant species
becomes important, among other things, for the management and
conservation of plant genetic resources and also for their domestication,
a fundamental step toward achieving greater success in the use of native
species. Studies of pollen-pistil interaction, as well as the manner and
time in which fertilization takes place, are some of the aspects that
should be studied to elucidate the reproductive process (Souza 1996).
The presence of self-incompatibility, which prevents self-fertilization
and thus encourages outcrossing, is an aspect of great importance for the
viability of the commercial production of fruits (Bruckner et al. 2005).

134

Like many of our native species, little is known about the

reproductive biology of C. xanthocarpa. Therefore, the present work
aimed to study the reproductive biology of this species, seeking to
assess and record the behavior of its pollen, the possible occurrence of
self-incompatibility mechanisms, and the behavior of cross-pollination.
MATERIAL AND METHODS
Collection of samples
Floral branches to perform cross-pollination and self-pollination
were collected in the middle-lower region of a tree (S1) and in an
environmental remnant of native forest located near Alfredo Wagner
City, Santa Catarina State, (latitude 27o42'01", longitude 49o20'01") at
480 m altitude. Branches 1.5 meters in length with floral buds at
different developmental stages were placed in plastic buckets containing
water for transport to the laboratory.
Pollen for germination in vitro and for controlled manual
pollination was extracted from the floral buds collected during balloon
stage (before anthesis), separated into paper bags, identified and placed
in polystyrene boxes with ice for transportation. For cross-pollination, a
mixture of pollen was taken from trees near S1 and designated S2, S3
and S4. The buds and pollen were obtained from the same tree (S1) for
self-pollination.
Material samples taken from individual S1 were deposited in the
herbarium of the Federal University of Santa Catarina (FLOR number
40926) and identified by Cristina Magalhes Ribas dos Santos.
Extraction of the pollen
To extract pollen for the different treatments, anthers were
removed from floral buds and left to dry on absorbent paper during 24 h
at ambient temperature of 20o C. Three mL of identified pollen were
stored in 5 mL eppendorf tubes. The tubes were placed in 20 ml Falcon
tubes containing silica gel and stored in the refrigerator at 7o C for 24
hours, (adapted from Franzon et al. 2006).
Analysis of in vitro germination of pollen grains
The culture medium was prepared, following Miranda and
Clement (1990), with 1 g of agar in 100 ml of distilled water with a
concentration of 20% sucrose and 40 mg L-1 boric acid dispensed into 4
Petri dishes in a volume of 10 ml per dish.
With the aid of a fine brush, 0.3 mL of pollen used in the
different treatments were spread on the medium and dispensed in Petri

135

dishes that were sealed with plastic PVC film and placed into a chamber
for BOD (Biological Organism Development) at 25 C under 12 hours
of light.
After the start of germination, an optical microscope was used to
perform counts of the material germinated every 4 hours until 24 hours
of incubation had been completed, in 4 randomly chosen fields in each
of 4 replicates. Pollen was considered germinated when the pollen tube
length exceeded its own diameter (Stanley and Linskens 1974). Analysis
of samples for the development of pollen tubes was carried out from the
Petri dishes distributed on histological slides, stained with acetic
carmine at 0.5%, and covered by glass slides for observation under
optical microscopy, following Franzon et al. (2006). The observations
were performed using a DP40F Olympus microscope equipped with an
Olympus DP71 with digital camera.
Emasculation of the floral buds and implementation of controlled
manual cross-pollination and self-pollination
The treatments with controlled manual pollination were
performed in separate controlled environmental conditions (25o C and
12 hours light).
In floral branches maintained in plastic buckets containing water,
floral buds were emasculated in the balloon stadium (removal of petals
and stamens). Each pollination experiment (cross-pollination and selfpollination) used 250 floral buds. For each experiment, more than 250
floral buds were bagged without pollinate (Table 1). The pollen stored
for 24 hours under refrigeration for each treatment was placed directly
on the stigma of the emasculated floral buds. These were identified with
colored ribbons to mark the different collection times, a procedure
adapted from Franzon et al. (2006; Table 1).
Collection of pollinated floral buds and analysis of growth of pollen
tubes using fluorescence microscopy
Floral buds originated from the different pollination treatments
were taken from floral branches and placed into 20 mL Falcon tubes
with fixative solution FAA (formaldehyde: acetic acid: ethanol 70 GL,
1:1:9) for 24 hours and then transferred to ethanol solution 70o GL
(Johansen 1940).
Under a stereoscopic microscope equipped with an Olympus
SZH10 control unit and Olympus DP 71 digital camera, pistils were
excised, transferred to 25 mL beakers containing 10 mL of NaOH 9 N,
and placed in an oven at 60 C for 10 minutes. The pistils were removed

136

from the oven, washed with distilled water, transferred to histological

slides, stained with 0.1% aniline blue in KH2PO4, and then covered and
compressed with another histological slide (Martin 1959).
Observations of the growth of pollen tubes at different collection
times were carried out using a Leica DMI6000 B Confocal Scanner TCS
SP5 coupled with a Laser Diode 405 nm UV line. The analysis of the
growth of pollen tubes at different collection times (Table 1) permitted
their separation into classes of growth (Table 2), as adopted by Franzon
(2008) for Eugenia uniflora (Myrtaceae).
Statistical analysis
The obtained data were subjected to analysis of variance
(ANOVA), and when significant differences (P < 0.05%) were detected,
analysis of multiple means comparison was performed following
Tukeys range test (Steel et al. 1997). All statistical analyses were
performed using the SAS program, version 8.0 (SAS 2002)
Table 1 - Time intervals, in hours, for collection and number of flowers
non-pollinated and pollinated (cross-pollinated and self-pollinated) of C.
xanthocarpa
Collection time after
controlled
manual
cross-pollination and
self-pollination
BP*

Number of non-pollinated
flowers

20

10

10

2h, 4h, 6h, 8h, 10h,

12h AP**
16h AP

(10 x 6) x 2 = 120

10 x 6 = 60

10 x 6 = 60

20

10

10

24h, 32h, 40h, 48h,

56h, 64h, 72h AP
96h, 120h, 144h,
168h, 192h, 216H,
240h AP
Total Flowers Used

(10 x 7) x 2 = 140

10 x 7 = 70

10 x 7 = 70

10 + (15 x 6) =
100

10 + (15 x 6) = 100

250

250

{10 + (15 x 6)}

x 2 = 200

Number of
flowers (crosspollinated)

500

Number of flowers
(self-pollinated)

* BP = before pollination; **AP = after pollination

RESULTS AND DISCUSSION

Analysis of in vitro germination of pollen grains
Analysis of pollen germination cultivated in vitro showed that
after 4 hours of incubation, the average rate of germination was 5.34%.
After 8 hours, the rates were 12.9%, increasing to 17.98% after 16

137

hours, and then stabilizing at 36.24% after 20 hours of incubation (Fig.

1, 2).
Franzon et al. (2006), working with pollen of C. xanthocarpa,
found average rates of germination of 55.8% for pollen grains collected
after anthesis and 27.6% for materials collected at the balloon stage.
These authors found germination rates 8.64% higher for pollen grains
with floral buds at the balloon stage. This difference may have resulted
from the use of 20% sucrose in the culture medium (Franzon and
collaborators used 10%) because sucrose helps maintain osmotic
balance between the pollen tube and the culture medium and, moreover,
provides the energy required for tube growth (Stanley and Linskens
1974). Compared to the study of Franzon et al., who collected pollen at
the anthesis stage, i.e., the final stage of maturation, we instituted a onehour delay, collecting pollen at the earlier balloon stage. At this stage of
development, the pollen to be used in the treatment of controlled
pollination will not be mixed with pollen coming from other specimens,
thus ensuring its origin. Also, floral buds at this stage do not need to be
bagged, facilitating experimental activities.
The tricolporate and monad pollen grains of C. xanthocarpa
(Fig. 3a, b) started germination after 2 hours of incubation, but could not
be considered because of the reduced size of pollen tubes in relation to
the diameter of pollen grains. At the beginning of the process, the pollen
tube emerges through the pore, allowing the inner contents of the grain
to move within the tube (Fig. 3c). After 4 hours of incubation, it was
then possible to consider the germination of the pollen grains because
pollen tubes were bigger than the diameter of pollen grains, showing
rapid growth (Fig. 3d).
Cheung (1996) and Johri et al. (2001) relate the growth of
pollen tubes to the increased concentration of calcium (Ca++) ions in the
apical zone, forming a gradient that promotes deposition of materials
that form the plasma membrane and cell wall by increasing the length of
the tube. These materials are synthesized in organelles located in the
subapical zone and transported to the apical zone by secretory vesicles
through the Golgi complex.
After 20 hours of observations, the different apical zones,
including subapical, nuclear and vacuolar, which form the pollen tube,
could be observed. The apical zone appears as a transparent and
spherical region at the apex of the tube (Fig. 3e). According to Mariath
et al. (2006), the cell wall in this region is formed by pectins that confer
gelatinous consistency, favoring growth. This zone disappears when
growth ceases.

138

The subapical zone appears as a compact region (cytoplasmic)

(Fig. 3e). According to Johri et al. (2001), this region is rich in cellular
organelles, such as mitochondria, Golgi complex, smooth and rough
endoplasmic reticulum, vesicles, lipid bodies and amyloplasts. This
could explain the intense red color from staining with acetic carmine.
Vegetative and generative cells were observed in the nuclear zone of the
pollen tube (Fig. 3f). According to Cocucci and Mariath (1995), the
vegetative cell has great structural complexity because it is linked to
longevity and germination of the tube. Among the several organelles
that form the vegetative cell, dictyosomes stand out. These organelles
are responsible for constructing the cell wall and the extension of the
plasmalemma, allowing the pollen tube to grow by several centimeters.
The authors claim that vegetative cells, as well as generative cells, have
a high degree of chromatin condensation and reduction system
organelles. Once individualization of its cytoplasm is completed, both
ends of the generative cell are found inside the vegetative cell. Both
generative and vegetative cells are connected through the plasmodesmas
which cross the plasma membranes (Yu et al. 1992).
It was also possible to identify the vacuolar zone of the pollen
tube (Fig. 3f) where, according to Mariath et al. (2006), the formation of
callose plugs occurs. In this region, on the inner cell wall surface, the
callose layer appeared thicker. The transversal callose plugs can be seen
in Figure 3f, splitting the pollen tube into compartments. According to
the authors, the function of callose is to isolate the main areas of the
tube with more active cytoplasm, keeping it confined to the apex.
Images showing the growth of pollen tubes of C. xanthocarpa
also indicate the cell wall (Fig. 3d, e, f). According to Johri et al. (2001),
this is formed by cellulose, pectin and callose. Mariath et al. (2006)
claim that cellulose is not produced in the apical area, but only along the
tube. In addition, the pectins are found in the entire tube wall in all
regions, while callose is present along the cell wall and will be deposited
in accordance with tube elongation.
The whitish coloration of the cell wall suggests the presence of
callose on the side walls along the tubes. This material is hydrophobic,
which allows waterproofing and the isolation of the contents inside the
tube in relation to the medium surrounding it, which may explain the
absence of the red color by acetic carmine staining. In addition, the
callose present in the pollen tubes reacts with a component of aniline
blue, producing a fluorescent compound in ultra violet (UV) light. The
green fluorescent tubes are differentiable pistil tissue (Martin 1959),

139

which permitted detection of the differences between cross-pollination

and self-pollination experiments.
Table 2 - Classes for evaluation of pollen tube growth in the stylus of C.
xanthocarpa.
Classes
2
3
4
5
6

Pollen Tube Growth in Stylus *

Pollen tube not exceeding the stigma
Pollen tube from the stigma and half of the stylus
Pollen tube between half and 2/3 of the stylus
Pollen tube between 2/3 of the stylus and the input of the ovary
Pollen tube penetrating the ovary
Pollen tube penetrating the ovules

* Adopted by Franzon (2008)

Fig. 1 - Different rates of germination of C. xanthocarpa pollen grains:

After 4 hours of incubation (5.34%); After 8 hours of incubation
(12.9%); After 16 hours of incubation (17.98%); After 20 hours
incubation (36.24%).

140

Fig. 2 - Germination of C. xanthocarpa pollen grains over time in

culture medium consisting of 1 g of agar in 100ml of distilled water with
a concentration of 20% sucrose and 40 mg L-1 of boric acid. Arrows
indicate the pollen tubes. Bar = 200m (a-d).

141

Fig. 3 - Pollen tube growth of C. xanthocarpa: a, b) Pollen grain,

tricolporate, monad; c) early germination with pollen tube extruded
through the pore and migration of the content of the grain (arrow) (2
hours of incubation); d) pollen grain considered germinated (4 hours
incubation), showing the cell wall (arrow); e) pollen grain with pollen
tube, showing the apical clear zone (arrow) and cytoplasmic compact
subapical zone (arrow); f) pollen grain with pollen tube
compartmentalized, showing nuclear zone, vegetative cell (arrow),
elongated generative cell, and vacuolation zone. One observes
deposition of callose plug (arrow). In various images of Figure 3 (d, e,
f), the cell wall of pollen tubes (arrows) with whitish coloration can be
observed. Bar = 500m (b-f). Az = apical zone; Sz = subapical zone;
Vc = vegetative cell; Gc = generative cell; Vz = vacuolation zone, Cp
= callose plug, Cw = cell wall.

142

Analysis of the growth of pollen tubes resulting from the crosspollination and self-pollination
The unpollinated floral buds, which were used as control for
these experiments, showed no pollen grains on the stigma (Fig. 4a, d).
Furthermore, the ovaries did not show any development and aborted 64
hours after the start of the experiments.
Cross-pollination showed fast germination of pollen grains with
the presence of pollen tubes in Class 2 in 100% of floral buds after 2
hours (Fig. 4e, f). Class 3 was detected in 100% of floral buds after 8
hours, with the pollen tubes growing profusely in an organized way in
the channel of the stylus (Fig. 4h, i). After 12 hours, 80% of the floral
buds showed Class 4 growth with pollen tubes in the initial portion of
the ovary (Fig. 4k, l). Class 5 was achieved after 32 hours with pollen
tubes growing up in the ovary of 80% of floral buds (Fig. 4n, o). By 72
hours, the pollen tubes were around or penetrating the ovules (Class 6)
in 100% of floral buds analyzed (Fig. 4q, r), demonstrating the
efficiency of this process in C. xanthocarpa.
Self-pollination showed different behavior relative to the growth
of pollen tubes. The entire process was slower. Only 20% of the floral
buds showed Class 2 growth 16 hours after pollination (Fig. 4f, g). Class
3 was detected in 40% of floral buds 32 hours after pollination (Fig. 4i,
j). In addition to the lower number of floral buds with pollen tube
growth, it was observed that the pattern of development up to Class 3
was disorganized with no definite direction in the channel of the stylus
(Fig. 4g, h). Class 4 was observed after 56 hours in 20% of floral buds,
with few pollen tubes in the final portion of the stylus (Fig. 4l, m). After
96 hours of self-pollination, 20% of floral buds showed Class 5 growth,
with a few pollen tubes in the initial portion of the ovary. At this time, it
was observed that the plant tissues showed early oxidation, signaling
senescence and cell death (Fig. 4 p). Analyses were performed up to 168
hours of self-pollination, at which time the abortion of floral buds was
initiated. After 120 hours, no Class 6 samples were detected.
Furthermore, the plant tissues were oxidized, leading to the elimination
of floral buds by the plant (Fig. 4s). These results show the absence of
ovule fertilization and the presence of some mechanism that prevents
self-fertilization in this species. All results are summarized in Table 3.
By analyzing the behavior of pollen from the cross-pollination
experiments, it was possible to observe the growth of pollen tubes.
Specifically, after 4 hours of incubation, in vitro pollen grains were
considered to be germinated. In the cross-pollination experiment, pollen

143

germinated on the stigma and pollen tubes in the stylus of floral buds
after 2 hours.
According to Johri et al. (2001), the stigmatic surface is
specialized in retaining pollen, providing the necessary humidity for
germination. In the case of C. xanthocarpa, we found that the stigma is
the dry-type and rich in papillae (Fig. 4b). Dry stigma is covered by a
cuticle layer protected by a protein which enables the recognition of
incompatible pollen (Went and Willemse 1984). The secretion released
by the papillae facilitates adhesion, humidity and disruption of the
cuticle, making it discontinuous or cracked such that it facilitates the
penetration of pollen tubes through the stylus (Heslop-Harrison 2000).
Proena and Gibbs (1994) found dry-type stigmas with unicellular
papillae in five genera of Myrtaceae in central Brazil. Eugenia uniflora
(Myrtaceae) showed the presence of papillae in compact dry stigma
(Franzon 2008), which were similar to those reported in this work. This
seems to be common in Myrtoideae, a group that includes all genera of
Myrtaceae species that have fleshy fruits, such as C. xanthocarpa. In the
cross-pollination experiments, it was observed that, after germination,
pollen tubes of C. xanthocarpa penetrated the stigmatic fissure (Fig. 4b),
following a hollow stylus channel (Fig. 4c). According to Johri et al.
(2001), a hollow stylus channel extends from the stigma to the ovary
and is lined by glandular cells covered by secretions where pollen tubes
pass. In C. xanthocarpa, the stylus channel goes beyond the entrance of
the ovary, extending to the cavities of the ovary, where the ovules are
located (Fig. 4c). Weber (1994) and Johri et al. (2001) argue that the
secretions along the stylus channel are composed of various
combinations of polysaccharides, lipids, phenols, pectins, proteins,
antioxidants, amino acids, boron and calcium. For Rodrigo and Herrero
(2000), these secretions function to nourish and guide pollen tubes
during their journey to the ovary.
The speed of growth of pollen tubes until reaching ovules is
variable in angiosperms and may take a few hours or days (Edlund et al.
2004). Pound et al. (2003) found that in Eucalyptus nitens (Myrtaceae),
pollen tubes reached the ovules two weeks after pollination. For Acca
sellowiana, it was still possible to observe tubes in the micropyle
channel fifteen days after fertilization, and fertilization itself occurred
21 days after pollination (Fisher 2004). In Eugenia uniflora, pollen
tubes reached the ovaries of the flowers on the third day and penetrated
the ovules on the fourth day after pollination (Franzon 2008). For C.
xanthocarpa, pollen tube growth is relatively fast. Two hours after
pollination begins, the growth and the migration of pollen tubes

144

occurred in an organized pattern and in great quantity, from the stigma

to the ovary, with penetration in the ovules three days after pollination
in 100% of the flowers. The speed of growth of pollen tubes appears to
be important for the reproductive success of the plant, since it minimizes
possible damage by such unfavorable abiotic factors as excessive
rainfall or wind (Tangmitcharoen and Owens 1997). This strategy can
be configured in an adaptive mechanism that protects against
unfavorable climatic factors in the flowering period, thus ensuring
proper fertilization and fruit formation. In addition, plant populations are
formed by allogamous individuals that are genotypically different and
generally have a high level of heterozygosity, which enables better
efficiency in colonizing new habitats.
The species studied showed a high reproductive efficiency
because it facilitates and accelerates coupling, copulation and
subsequent syngamy, ensuring the production potential of the fruits and
seeds that will determine its perpetuation in nature and occupation of
new habitats. Knowledge of reproductive mechanisms can also facilitate
the domestication of guabirobeira and its introduction in intensive
production systems.
When compared to cross-pollination, self- pollination showed a
different pattern of behavior of pollen tubes. There was an abnormal
spiraled growth in the stylus characterized by an absence of definite
direction, narrowing of the wall, and formation of a bulb at the apex of
the tube (Fig. 4g h). Using a fluorescence technique, Kho and Baer
(1968) demonstrated this behavior, in which a meshwork of
incompatible pollen forms in the style, with the apical region of the
pollen tube increasing. These characteristics are usually found in species
which express gametophytic self-incompatibility (GSI) (De Nettancourt
1977). In this system, the pollen grain germinates, and an
incompatibility reaction occurs between the pollen tube and stylus
(Schifino-Wittmann and Dall'Agnol 2002).
This incompatibility is revealed in three possible pollination
conditions. First, self-incompatible pollination occurs when both S
alleles are identical (x S1S2 S1S2) for both cross-pollination and selfpollination. Second, a partial match occurs when half of the pollen
grains are compatible, and the other half are incompatible as a result of
the presence of an allele in common (x S1S2 S1S3). Third, full
compatibility occurs when the two are different S alleles (x S1S2 S3S4)
(Bueno et al. 2006). Since the pollen grains show expression
independently by segregating 1:1, the crossings can be compatible,

145

totally incompatible, or semi-compatible (Richards 1997; Takayama and

Isogai 2005).
When considering self-incompatibility reactions, pollen-pistil
interactions may prevent the germination of pollen grains or pollen tube
growth, highlighting the activation of self-incompatibility. In the GSI
system, the reaction generally occurs between the incompatible pollen
grain and stigmatic papillae, in which the pollen grain is deposited such
that it cannot germinate or rehydrate (Takayama and Isogai 2005). The
authors add that the recognition of incompatible pollen that occurs in the
stylus is determined by the haploid genome pollen grain and that its
rejection occurs during the development of the pollen tube, when both
determinants, male and female, carry the same S-haplotype. Inheritance
is usually monofactorial, governed by one S locus, which has a variable
number of alleles (Richards 1997). The number of S alleles in different
populations of different species is quite variable and can be very high in
species that have high fertility rates. Having a large number of different
alleles in a population is important because it ensures a sufficient
number of compatible pollinations without compromising fertility
(Heslop Harrison, 1983). The GSI system is considered the most widely
distributed in angiosperms found in the Solanaceae, Rosaceae,
Papaveraceae, Liliaceae, Onagraceae, Leguminosae, Commelinaceae
and Amaryllidaceae families (Gibbs 1986). It is also found in many
orders of angiosperms considered primitive, such as Magnoliales,
Winterales, Hamamelidales and Nympheales (Richards 1997).
In the Solanaceae, Rosaceae, and Scrophulariaceae families, the
determinant female is a ribonuclease (S-RNase) expressed in the stylus
and an F-box protein expressed in pollen grain (Takayama and Isogai
2005). In Papaver rhoeas (Papaveraceae), incompatibility is also under
gametophytic control (GSI), and in this family, the S-protein female
determinant recognized by the pollen grain was observed. After
recognizing the S-haplotype, Ca++ influx into the pollen tube occurs,
causing a signaling cascade that results in a rapid inhibition of its
development and, finally, death of the incompatible pollen tube
(Franklin-Tong et al. 2002). These results suggest that the GSI system
could be acting in C. xanthocarpa.
In many families of plants, including the Myrtaceae and
Campomanesia genera, self-incompatibility is late-acting selfincompatibility (LSI). In the Apocynaceae (Lipow and Wyatt 1999),
Bignoniaceae (Gibbs and Bianchi 1999) and Myrtaceae (Pound et al.
2003), no differences were observed in growth, tube number or
development in proportion to fertilized ovules between compatible and

146

incompatible plants. In the Myrtaceae, evidence of an LSI mechanism

was identified in the following species: Eucalyptus regnans (Sedgley et
al. 1989), E. woodwardii (Sedgley and Smith 1989), E. cladocalix and
E. leptophylla (Ellis and Sedley 1992), Thryptomene calycina (Beardsell
et al. 1993), Blepharocalyx salicifolius, Campomanesia velutina, C.
pubescens, Siphoneugena densiflora (Proena and Gibbs 1994),
Gomidesia fenzliana, G. lindeniana and G. pubescens (Nic Lughadha
1998), Metrosideros excelsa (Schmidt-Adam et al. 1999), Eucalyptus
globulus ssp. globulus (Pound et al. 2002) and E. nitens (Pound et al.
2003).
For Acca sellowiana (Myrtaceae), both germination of pollen
grains on the stigma and the growth of pollen tubes toward the first third
of the stylus were observed one day after self-pollination (T1) and crosspollination (T2) treatments (Finatto et al. 2011). Two days after T1 and
T2, the tubes reached half of the stylus, and on the fourth day, most of
the pollen tubes reached the base of the stylus, confirming the results
obtained by Santos et al. (2007) for that species. At four days after
pollination in both self-pollination and cross-pollination, these authors
found that pollen tubes grew in the stylus to reach the ovary, showing
LSI. For Eugenia uniflora, no difference in the growth of pollen tubes
was observed in either treatment, although growth occurred without
definite direction and folding, close to ovules in some materials,
indicating that the mechanism active in this species is LSI (Franzon
2008). In Campomanesia velutina and C. pubescens, the pollen tubes
penetrated the ovules with the same frequency as that seen in crosspollination, and rejection came a week after fertilization (Proena and
Gibbs 1994). This behavior was not detected in the present work
because the pollen tubes had an abnormal growth in the early
developmental stages, suggesting the occurrence of a rejection
mechanism in the channel of the stylus. Furthermore, pollen tubes were
not found nearby or penetrating the ovules, with abortion of floral buds
after 168 hours of self-pollination. This leads us to affirm that
homomorphic gametophytic self-incompatibility (GSI) is the system that
best fits C. xanthocarpa. This mechanism prevents inbreeding,
promoting crosses between individuals, leading to heterosis. Thus, selfincompatibility has implications for the domestication and breeding of
this species, among other by the need of establish commercial orchards
with different varieties in order to assure the fruit-set and the abundant
fruit production.

147

Table 3 - Time collection, in hours, number of floral buds with pollen

tube growth and classes of growth of pollen tubes according to the
location in pistils (class 1 stigma; class 2 - stigma-half of the stylus;
class 3 - half and 2/3 of the stylus; class 4 - 2/3 of the stylus-input ovary;
class 5 - penetrating the ovary; class 6 - penetrating the ovules) of C.
xanthocarpa.
Time Collection

Not pollinated
Floral buds
with pollen
tube growth

BP*
2 hAP**
4h AP
6h AP
8h AP
10h AP
12h AP
16h AP
24h AP
32h AP
40h AP
48h AP
56h AP
64h AP
72h AP
96h AP
120h, 144h AP
168h, 192h, 216h
e 240h AP

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
early abortion
of flowers
aborted flowers
aborted flowers
aborted flowers
aborted flowers

Self-pollinated
Floral buds
with pollen
tube growth

Cross-pollinated

Classes of
growth of
pollen tubes

Floral buds
with pollen
tube growth

0 (a) A
0 (a) A
0 (a) A
0 (a) A
0 (a) A
0 (a) A
0 (a) A
1 (a) A
0 (a) A
2 (a) A
2 (a) A
2 (a) A
2 (a) A
1 (a) A

2
3
1
1e3
2e4
2

0 (a) A
5 (b) B
5 (b) B
5 (b) B
5 (b) B
5 (b) B
5 (b) B
5 (b) B
5 (b) B
5 (b) B
5 (b) B
5 (b) B
5 (b) B
5 (b) B

Classes of
growth of
pollen
tubes
2
2
2
3
3
3e4
3e4
4
4e5
5
5
5
5

1 (a) A
2 (a) A
0 (a) A
aborted flowers

4
4e5
-

5 (b) B
5 (b) B
5 (b) B
5 (b)

6
6
6
6

Means followed by different letters: lowercase letters in the column and

uppercase letters in the row, differ to a significance level of 5% in the Tukey
test. *BP = before pollination, **AP = after pollination

148

Fig. 4 - Pollen tube features resulting from cross-pollination, selfpollination and growth classes in C. xanthocarpa: a,d) BP: stigmas

149

without pollen grains (arrows); b) Stigma with papillae (P) and

stigmatic cleft (F); c) Hollow channel and its extension to the ovarian
cavity (arrow); (e-g) Class 2; e) 2hAP cross-pollination; pollen tubes in
the style (arrow); f) Location class 2; g) 16hAP self-pollination; pollen
tubes moving disorganized in stylus (arrow); (h-j) Class 3; h) 8hAP
cross-pollination; pollen tubes migrating in large numbers (arrow); i)
Location class 3; j) 32hAP self-pollination; pollen tubes disorganized in
the stylus (arrow); (k-m) Class 4; k) 12hAP cross-pollination; pollen
tubes (arrow); l) Location class 4; m) 56hAP self-pollination; few pollen
tubes in channel (arrow); (n-p) Class 5; n) 32hAP cross-pollination;
pollen tubes in the ovary; o) Location Class 5; p) 96hAP selfpollination; pollen tubes at the entrance of the ovary; (q-s) Class 6; q)
72hAP cross-pollination; pollen tubes around the ovules (arrow); r)
Location Class 6; s) 120hAP self-pollination; absence of pollen tubes in
the region of the ovules (arrow); Bars = 1 mm (a, c, d, f, i, l, m, o, r),
500m (g, j, p, s), 100 m (e, h, k, n, q), 10 m (b); P= papilla, F =
stigmatic fissure.

150

The behavior of the development of pollen tubes, over time, in

the treatment of self-pollination and cross-pollination is best seen in
Figure 5, where the efficiency of cross-pollination and any barriers to
self-pollination in C. xanthocarpa become clear.

Fig. 5 - Cross-pollination and self-pollination of C. xanthocarpa a)

Classes of growth of pollen tubes at different days after pollination.
b) Percentage of flowers with pollen tubes in Class 2 growth in pistils
(100% 2hAP cross-pollination) (20%, 16hAP self-pollination).
c) Percentage of flowers with pollen tubes in Class 3 growth in pistils
(100%, 8hAP cross-pollination) (40%, 32hAP self-pollination).
d) Percentage of flowers with pollen tubes in Class 4 growth in pistils
(80% 12hAP cross-pollination) (20%, 56hAP self-pollination).
e) Percentage of flowers with pollen tubes in Class 5 growth in pistils
(80% 32hAP cross-pollination) (20%, 96hAP self-pollination).
f) Percentage of flowers with pollen tubes in Class 6 growth in pistils
(100%, 72hAP cross-pollination) (0% self-pollination).

151

CONCLUSIONS
This work presented the following results related to pollination,
cross-pollination and self-pollination in C. xanthocarpa:
1) Pollen collected in the balloon presents high viability for controlled
crosses.
2) Culture medium with 1 g of agar in 100mL of distilled water with a
concentration of 20% sucrose and 40 mg L-1 of boric acid allows for
efficient evaluation of the viability and germination of pollen grains.
3) This species shows high reproductive efficiency because two hours
after pollination begins, the growth and migration of pollen tubes
occurred in an organized pattern and in great quantity, from the stigma
to the ovary, with the penetration in the ovules three days after
pollination in 100% of the flowers. This facilitates and accelerates
coupling, copulation and subsequent syngamy.
4) The existence of homomorphic gametophytic self-incompatibility
(GSI) in this species can be concluded.

152

153

REFERENCES
Beardsel DV et al. (1993) Reproductive biology of australian
Myrtaceae. Australian Journal of Botany 41.
Bruckner CH et al. (2205) Autoincompatibilidade do maracuj
implicaes no melhoramento gentico. In Maracuj: germoplasma e
melhoramento gentico. (Eds NTV Junqueira, MF Braga) (Embrapa
Cerrados: Planaltina DF)
Bueno LCS et al. (2006) Melhoramento gentico de plantas: princpios e
procedimentos. (UFLA: Lavras)
Coradin L et al. (2011) Espcies nativas da flora brasileira de valor
econmico atual ou potencial: plantas para o futuro Regio sul.
(Ministrio do Meio Ambiente: Braslia)
Carvalho TCP (1989) Comportamento de algumas cultivares de
ameixeira japonesa (Prunus salicina) quanto polinizao no Rio
Grande do Sul. 72 p. Dissertao (Mestrado em Fruticultura de Clima
Temperado). Escola de Agronomia Eliseu Maciel, Universidade Federal
de Pelotas, Pelotas.
Cheung AY (1996) Pollen-pistil interactions during pollen-tube growth.
Trends in Plant Science v.1 n.2.
Coccuci AE and Mariath JEA (1995) Sexualidade das plantas. Cincia
Hoje 8, n.106.
De Nettancourt D (1977) Incompatibility in angiosperms. (Springer:
Berlin).
Ellis MF and Sedgley, M (1992) Floral morphology and breeding
system of three species of Eucalyptus, section Bisectaria (Myrtaceae).
Australian Journal of Botany 40.
Edlund AF et al. (2004) Pollen and stigma structure and function: the
role of diversity in pollination. Plant Cell 16.
Finatto T et al. (2011) Late-acting self-incompatibility in Acca
sellowiana (Myrtaceae) Australian Journal of Botany 59.

154

FAO - Food and Agriculture Organization of the United Nations (2010)

The second report on the state of the worlds plant genetic resources for
food and agriculture (Food and Agriculture Organization of the United
Nations, Commission on Genetic Resources for Food and Agriculture:
Rome, Italy)
Franzon RC et al. (2006) Germinao in vitro de plen de guabirobeira
(Campomanesia xanthocarpa Berg.). Revista Ceres 53, n.305.
Franzon RC Propagao vegetativa e modo de reproduo da
pitangueira (Eugenia uniflora L.) Tese (Doutorado em Cincias).
Universidade Federal de Pelotas. Pelotas, RS. 2008
Franklin-Tong VE et al. (2002) Involvement of extracellular calcium
influx in the selfincompatibility response of Papaver rhoeas. Plant
Journal 29.
Gibbs PE (1986) Do homomorphic and heteromorpic selfincompatibility systems have the same sporophytic mechanism? Plant
Systematics and Evolution 154.
Gibbs PE and Bianchi MB (1999) Does Late-acting self-incompatibility
(LSI) Show family Clustering? Two more species of Bignoniaceae with
LSI: Dolichandra cynanchoides and Tabebuia nodosa. Annals of
Botany 84.
Heslop-Harrison J (2000) Control gates and micro-ecology: the pollenstigma interaction in perspective. Annals of Botany 85 (Supplement A)
Heslop-Harrison J (1983) Self-incompatibility: phenomenology and
physiology. Proceedings of the Royal Society of London 218.
Johri BM et al. (2001) Reproductive biology of angiosperms. In
Reproductive Biology of Plants (Eds BM Johri, PS Srivastava) (Narosa
Publishing House: New Delhi)
Johansen DA (1940) Plant microtechnique (McGraw Hill: New York)
Kho YO and Baer J (1968) Observing pollen tubes by means of
fluorescence. Euphytica 17.

155

Lipow SR and Wyatt R (1999) Floral morphology and late-acting selfincompatibility in Apocynum cannabinum (Apocynaceae). Plant
Systematics and Evolution 219.
Lorenzi H (1992) rvores brasileiras: manual de identificao e cultivo
de plantas arbreas nativas do Brasil. (Plantarum: Nova Odessa/SP)
Mariath JEA et al. (2006) Flor. In Anatomia vegetal (Eds B Apezzatoda-Gloria and SM Carmello-Guerreiro) (UFV: Viosa)
Martin FW (1959) Staining and observaing pollen tubes in the style by
means of fluorescence. Stain Tchnology 34.
Marchiori JNC and Sobral M (1997) Dendrologia das angiospermas:
Myrtales. (Ed. da UFSM: Santa Maria)
Miranda PA and Clement CR (1990) Germination and storage of
pejibaye (Bactris gasipaes) Palmae pollen. Revista de Biologia Tropical
38.
Nic Lughadha E (1998) Preferential outcrossing in Gomidesia
(Myrtaceae) is maintained by a post-zygotic mechanism. In:
Reproductive biology in systematics, conservation and economic
botany. (Eds SJ Owens, PJ Rudall) (Royal Botanic Gardens, Kew:
London)
Pound LM et al. (2002) Self-incompatibility in Eucaliptus Globulus spp.
globulus (Myrtaceae). Australian Journal of Botany 50.
Pound LM et al. (2003) Pollen tube growth and early ovule following
self and cross-pollination in Eucaliptus nitens. Sexual Plant
Reproduction 16.
Proena C and Gibbs P (1994) Reproductive biology of eight sympatric
Myrtaceae from central Brazil. New Phytologist 126.
Richards AJ (1997) Plant Breeding Systems. (Chapman & Hall: USA)
Rodrigo J and Herrero M (2000) Cuajados errticos em alboricoquero.
Polinizacin y calidad de flor. (Instituicin Fernando el Catlico:
Zaragoza)

156

Santos MS et al. (2009) Caracterizao fsico-qumica, extrao e

anlise de pectinas de frutos e Campomanesia xanthocarpa B.
(Gabiroba). Semina: Cincias Agrrias 30, n1.
Santos KL et al. (2007) Evidncia da atuao do sistema de
autoincompatibilidade tardia em Acca sellowiana (Berg) Burret.
(Myrtaceae). Revista Brasileira de Fruticultura 29, n.1.
Schifino-Wittmann MT and DallAgnol M
incompatibilidade em plantas. Cincia Rural 32, n.6.

(2002)

Auto-

Schmidt-Adam G et al. (1999) Floral biology and breeding system of

pohutukawa (Metrosideros excelsa, Myrtaceae). New Zealand Journal
of Botany 37.
SAS (2002) Statistical analysis system version 8.0 getteing started
with the SAS learning adition (SAS Institute Inc. Cary: NC)
Sedgley M and Smith RM (1989) Pistil receptivity and pollen tube
growth in relation to the breeding system of Eucalyptus woodwardii
(Symphyomyrtus: Myrtaceae). Annals of Botany 64.
Sedgley M et al. (1989) Pollen tube growth and early seed development
in Eucalyptus regnans B. Muell. In relation to ovule structure and
preferential outcrossing. Australian Journal of Botany 37.
Souza MAD (1996) Biologia reprodutiva de onze espcies de Myrtaceae
em floresta de terra firme na Amaznia Central. Dissertao (Mestrado
em Cincias Biolgicas), Universidade Federal do Amazonas. Manaus,
AM. 1996.
Stanley RG and Linskens HF (1974) Pollen biochemistry management.
(Heidelberg, Berlin)
Steel GDR et al. (1997) Principles and procedures of statistics: a
biometrical approach. (McGraw Hill Inc.: New York)
Takayama S and Isogai A (2005) Self-incompatibility in Plants. Annual
Review Plant Biology 56.

157

Tangmitcharoen S and Owens JN (1997) Floral Biology, Pollination,

Pistil Receptivity, and Pollen Tube Growth of Teak (Tectona grandis
Linn f). Annals of Botany 79.
Yu HS et al. (1992) Sperm cells in pollen tubes of Nicotiana tabacum
L.: three-dimensional reconstruction, cytoplasmic diminution, and
quantitative cytology. Protoplasma 168.
Weber M (1994) Stigma, style, and pollen tube pathway in Smyrnium
perfoliatum (Apiaceae). International Journal of Plant Science. 155.
Went JLV and Willemse MTM (1984) Fertilization. In: Embryology of
Angiosperms. Ed. BM Johri) (Springer-Verlag: Berlin)

158

159

SEO IV

DESENVOLVIMENTO ESTRUTURAL DE EMBRIES,

SEMENTES E FRUTOS DE Campomanesia xanthocarpa O. Berg.
(MYRTACEAE)

CRISTINA MAGALHES RIBAS DOS SANTOS

160

161

LISTA DE TABELAS SEO IV

Tabela 1 - Intervalos de tempo (em horas) para coleta e quantidade de
botes florais de C. xanthocarpa, submetidos polinizao cruzada
controlada em cada tempo: .................................................................. 170
Tabela 2 - Tempos de coletas de flores em antese (dimetro mdio dos
ovrios em mm) e frutos correlacionados a uma escala de tamanhos
(dimetro em milmetros) aps a polinizao cruzada controlada de C.
xanthocarpa......................................................................................... 177

162

163

LISTA DE FIGURAS SEO IV

Figura 1 - Metodologias utilizadas para anlise estrutural de frutos,
sementes e embries de C. xanthocarpa. ............................................ 173
Figura 2 - Padro sigmoidal de desenvolvimento dos frutos de C.
xanthocarpa......................................................................................... 178
Figura 3 - Estdios de desenvolvimento dos frutos, sementes e embries
de C. xanthocarpa ............................................................................... 181
Figura 4 - Fruto, sementes e embries de C. xanthocarpa cinco dias
(120h DP), aps a polinizao cruzada controlada. ............................ 183
Figura 5 - Fruto, sementes e embries de C. xanthocarpa dez dias (240h
DP) aps a polinizao cruzada controlada. ........................................ 186
Figura 6 - Fruto, semente e embries de C. xanthocarpa trinta e sete dias
(840hDP) aps a polinizao cruzada controlada. .............................. 188
Figura 7 - Fruto de C. xanthocarpa, 39 dias aps a polinizao (936h
DP). ..................................................................................................... 192
Figura 8 - Semente e embrio de C. xanthocarpa 39 dias aps a
polinizao (936h DP). ....................................................................... 197

164

165

RESUMO
Durante 45 dias foi possvel acompanhar o padro de desenvolvimento
sigmoidal dos frutos de Campomanesia xanthocarpa, com 5 estdios de
desenvolvimento, variao de dimetro de 27,42mm e comportamento
climatrico. O estdio I foi considerado a fase de pr-antese da flor. No
estdio II, com durao mdia de 30 dias, os frutos apresentaram
colorao verde e spalas persistentes. A fecundao se deu no terceiro
dia aps a polinizao e a embriognese foi detectada no quinto dia,
com a formao do zigoto, com suspensores bem desenvolvidos,
formao do endosperma nuclear, presena do nucelo e da testa na
semente. No dcimo dia os embries se encontravam no estdio globular
e o endosperma apresentou celularizao. O estdio embrionrio
cordiforme ocorreu antes de 15 dias e, aos vinte dias o embrio se
encontrava na fase de torpedo, evoluindo at o trigsimo dia para sua
forma mirtoide definitiva. Neste perodo as sementes se desenvolveram
envoltas pela parede interna ovariana com glndulas de leo, sem que
houvesse o concrescimento entre esta estrutura e a testa seminal,
podendo-se extrair facilmente os embries de dentro dos frutos. No
estdio III, com durao mdia de uma semana, os frutos e os embries
aumentaram rapidamente em dimetro, a testa das sementes iniciou o
concrescimento com a parede interna ovariana e a colorao variou para
amarelo-esverdeado. O estdio IV se caracterizou pelo amadurecimento
pleno, com variao de cor para o alaranjado, mximo dimetro
(30,21mm), mximo desenvolvimento dos embries e o concrescimento
da testa com a parede interna ovariana na maioria das sementes. O
estdio V marcou o incio da senescncia pela intensificao da cor
laranja e a diminuio do dimetro dos frutos. Os frutos maduros so
bagas alaranjadas do tipo campomanesodeo, com spalas persistentes,
pericarpo dividido em 3 regies, glndulas de leo na regio interna e na
regio externa do pericarpo, abaixo da epiderme estomatfera e coberta
por tricomas. A regio mediana do pericarpo apresenta vascularizao
intensa, clulas longas e expandidas e escleredes que fazem a
sustentao do tecido. As sementes so cobertas por mucilagem oriunda
da polpa e pela regio interna do pericarpo rico em glndulas de leo
que concrescem com o tegumento das sementes. So formadas pela testa
cartilaginosa bitegumentada, apresentam hipstase bem desenvolvida e
so exalbuminosas. Os embries so tipicamente mirtoides, formados
pelo eixo hipocotilo-radicular engrossado e por cotildones pequenos.
Apresentam a radcula livre e no apresentam estruturas secretoras.

166

167

INTRODUO
A definio de fruto vem evoluindo medida que as anlises
estruturais do gineceu se intensificam. Cave (1869) classificou os frutos
como uma folha, mais ou menos modificada, quando ele provm de um
ovrio superior; quando ele provm de ovrios nferos, podem estar
envolvidos na formao dos frutos, tecidos de origem receptacular e do
perianto (MAUSETH, 1988). Classicamente, os frutos so considerados
como o ovrio fecundado, desenvolvido e amadurecido. Barroso et al.
(1999) estabelecem que o fruto a estrutura que representa o ltimo
estdio de desenvolvimento do gineceu fecundado ou partenocrpico.
Para Souza (2006), o resultado de ovrio ou ovrios desenvolvidos e
em estado de maturao, podendo-se agregar a ele outras partes da flor
ou mesmo de inflorescncia.
Um dos requisitos para o desenvolvimento dos frutos a
fecundao. Mariath et al. (2006) definem fecundao como a
aproximao dos dois gametas do andrfito aos dois gametas do
ginfito. Os autores dividem este processo em polinizao,
acoplamento, cpula, descarga dos gametas e singamia. Ainda segundo
Mariath et al. (2006), a singamia a ltima etapa da fecundao e
compreende a fuso de um gameta com a oosfera para formar o zigoto
esporoftico (diplide) e de outro gameta com a clula mdia para
formar o endosperma (em geral triploide). Para Souza (2003), a dupla
fecundao, evento que ocorre nas Angiospermae, inicia com
transformaes estruturais, fisiolgicas e bioqumicas nos ovrios e nos
vulos, as quais levam formao da parede do fruto (pericarpo) e
formao das sementes, respectivamente.
O entendimento de que os frutos s iniciam seu desenvolvimento
a partir da fecundao no correto, uma vez que os tecidos formadores
do fruto derivam de clulas que se formam no primrdio floral
(NITSCH, 1953). Como esclarece Souza (2009), a anlise de
desenvolvimento dos frutos inclui o ovrio das flores em pr-antese
(fase balo). A literatura registra muitos estudos de desenvolvimento de
frutos. Entre estes podem ser citados os trabalhos clssicos de Nitsch
(1953) com espcies de Cucurbitaceae, tomate, ma, de Souza et al.
(1984, 1993) com Lonchocarpus muehlbergianus Hassl. e Acacia
paniculata Willd., de Oliveira (1991), com Inga fagifolia G. Don e Inga
uruguensis Hook. & Arn., e de Barros (2002) com Mimosa
caesalpiniaefolia Benth.
Segundo Souza (2006), o estudo de frutos e sementes essencial
na preservao de espcies, na colonizao de novos ambientes, no

168

controle de plantas invasoras, no reflorestamento, na silvicultura, na

investigao de plantas medicinais e txicas e em muitos outros campos
de aplicao botnica. Este perodo do processo reprodutivo
fundamental no ciclo biolgico das plantas.
Alm disso, conhecer os estdios de desenvolvimento de frutos
importante na hora de tomar decises em relao ao manejo em sistemas
de produo, pois permitem detectar os momentos crticos para
ocorrncia de estresses biticos ou abiticos. A avaliao do padro de
desenvolvimento de um fruto a partir do florescimento auxilia no
estabelecimento de ndices de maturidade (COOMBE, 1976). O estgio
de desenvolvimento dos frutos no momento da colheita tem influncia
na qualidade do fruto maduro e um dos ndices mais utilizados na
determinao do ponto de colheita o nmero de dias desde a florao
at o desenvolvimento pleno do fruto (WARRINGTON et al., 1999).
Estas informaes no foram encontradas para Campomanesia
xanthocarpa, o que determinou os estudos acerca do desenvolvimento
estrutural de embries, sementes e frutos desta espcie.

169

1. METODOLOGIA
1.1. LOCAL DE REALIZAO DAS ATIVIDADES
Coleta de Material Vegetal:
A coleta de ramos florais e de frutos polinizados em S1, bem
como a coleta de botes florais de indivduos S2, S3 e S4, foi realizada
em plantas ocorrentes em reas remanescentes de mata nativa, no Estado
de Santa Catarina, no interior do municpio de Alfredo Wagner, latitude
27o4201, longitude 49o2001, altitude 480m, distante 111Km de
Florianpolis (capital do estado).
Anlises Laboratoriais:
Foram realizadas no Laboratrio de Fisiologia do
Desenvolvimento e Gentica Vegetal (LFDGV), do Departamento de
Fitotecnia, integrado ao Centro de Cincias Agrrias; no Laboratrio
Central de Microscopia Eletrnica (LCME) e no Laboratrio de
Anatomia Vegetal (LAVEG) do Departamento de Botnica, Centro de
Cincias Biolgicas da Universidade Federal de Santa Catarina, em
Florianpolis, Santa Catarina, Brasil.
1.2 COLETA DE RAMOS E DE BOTES FLORAIS DE C.
XANTHOCARPA
Foram coletados 4 ramos florais de 1,5m de comprimento, de
uma rvore adulta de C. xanthocarpa (matriz S1) (Figuras 1A e 1B),
com botes florais em diferentes estdios de desenvolvimento. O
material vegetal foi acondicionado em baldes plsticos contendo gua
(adaptado de FRANZON, 2008) para transporte e manuteno durante
10 dias no laboratrio. Botes florais de indivduos S2, S3 e S4, na fase
balo de desenvolvimento, foram separados em sacos de papel,
identificados e colocados em caixa de isopor com gelo para posterior
transporte (Figura 1C).
1.3 POLINIZAO
XANTHOCARPA

CRUZADA

CONTROLADA

EM

C.

Para estudar o desenvolvimento dos frutos de C. xanthocarpa,

procedeu-se polinizao cruzada controlada, atuando como agentes
transportadores dos andrfitos das anteras para os estigmas das flores,

170

de modo a assegurar que o acoplamento, a cpula e a consequente

singamia ocorreriam cerca de 72 horas depois da polinizao.
Em laboratrio, foram retiradas as anteras dos botes florais
oriundos dos indivduos S2, S3 e S4, as quais foram colocadas a secar
sobre papel absorvente em condies de temperatura ambiente, em local
fresco e abrigado, por 24 horas para liberao dos gros de plen. Aps
a liberao, o material foi armazenado em tubos eppendorf de 5mL
sendo, ento, identificados e acondicionados em tubos falcon de
20mL, com slica gel e colocados sob refrigerao a 7oC, por 24 horas,
para uso na polinizao cruzada controlada (adaptado de FRANZON et
al., 2006).
Nos ramos florferos acondicionados em baldes plsticos com
gua, foram escolhidos 120 botes florais na fase de pr-antese (fase
balo) para a polinizao cruzada controlada. Foram retiradas as ptalas
e os estames (anteras e filetes) e realizadas as polinizaes com a
mistura de plen (S2, S3 e S4), sendo os plens colocados diretamente
sobre o estigma das flores emasculadas que foram marcadas com fitas
coloridas (Figura 1D, 1E e 1F). No indivduo S1 tambm foram
realizadas polinizaes cruzadas controladas, em 120 botes florais, na
fase balo, utilizando a mistura de polens S2, S3 e S4, sendo os botes
florais marcados com fitas (Figuras 1A e 1G). Tanto em laboratrio
quanto no indivduo S1, foram deixados 15 botes florais sem polinizar.
As coletas foram realizadas a intervalos de tempo pr-determinados
conforme a Tabela 1 (adaptado de FRANZON et al., 2008).
Tabela 1 - Intervalos de tempo (em horas) para coleta e quantidade de
botes florais de C. xanthocarpa, submetidos polinizao cruzada
controlada em cada tempo:
Tempo de coleta
AP*
72h, 96h, 120h, 144h, 168h,
192h, 216h e 240hDP**
240h, 360h, 480h, 600h, 720h,
888h, 936h e 1008hDP
Total de botes florais utilizados

Nmero de botes
florais (laboratrio)
15

Nmero de botes
florais (indivduo S1)
15

15 x 8 = 120

15 x 8 = 120

*AP = antes da polinizao **DP = depois da polinizao

270

171

1.4 - COLETA DE FRUTOS E EXTRAO DE SEMENTES E

EMBRIES ORIUNDOS DA POLINIZAO CRUZADA
CONTROLADA EM C. XANTHOCARPA
Aps 72 horas da polinizao cruzada controlada, os tubos
polnicos atingiram a micrpila dos vulos e isto determinou o incio das
coletas nos ramos acondicionados em laboratrio, at 10 dias depois das
polinizaes (DP). Na matriz S1, as coletas iniciaram 10 dias DP,
prolongando-se por 42 dias DP, conforme os intervalos de tempo
contidos na Tabela 1. Parte dos frutos oriundos da polinizao cruzada
controlada, em S1 (10 frutos em cada tempo), foi coletada in natura e
transportada em isopor, com gelo, at o laboratrio (Figura 1H). A
mesma metodologia foi aplicada ao material polinizado no laboratrio.
O restante do material polinizado (5 frutos em cada tempo) foi colocado
em tubos falcon de 15mL contendo soluo de fixao de
glutaraldeido 2,5%, em tampo fosfato de sdio 0,2M - pH 7,3. O
material colocado em fixador foi submetido ao vcuo, por 4 horas.
Depois, foi lavado com tampo fosfato, diludo em gua destilada na
proporo de 1:1. Foram realizadas duas lavagens de 15 minutos cada
neste tampo (McDowell & Trump, 1976). Posteriormente, este material
foi desidratado em srie etanlica crescente, iniciando com lcool 10%,
com duplas lavagens de 15 minutos cada, passando para lcool 20%,
30%, 40%, 50%, 60% at 70%, com duplas lavagens de 15 minutos em
cada lcool. O material assim desidratado foi guardado em geladeira at
o momento de ser preparado para microscopia ptica ou para
microscopia eletrnica de varredura (Figuras 1I e 1J).
As sementes e embries foram extrados dos frutos, em diferentes
estdios de desenvolvimento. As sementes foram beneficiadas, sendo
que a operao de beneficiamento consistiu na colocao da polpa dos
frutos em peneiras, com enxgue abundante em gua corrente, at a
remoo das estruturas que as envolviam.
1.5 - ANLISE ESTRUTURAL DE EMBRIES, SEMENTES E
FRUTOS DE C. XANTHOCARPA
Os frutos in natura, em diferentes estdios de desenvolvimento
(Tabela 1) foram analisados morfologicamente, sob o microscpio
estereoscpio, e medidos com paqumetro graduado em milmetros, na
regio mediana dos frutos, a intervalos de cinco dias (adaptado de
ALMEIDA et al., 2011). Os dados dos tamanhos dos frutos foram
submetidos aos testes de normalidade e de igualdade de varincias e

172

anlise de varincia (ANOVA). Para a anlise estrutural, os frutos recm

coletados foram seccionados transversal e longitudinalmente, mo
livre com gilete e colocados sobre lminas histolgicas, sendo corados
com sudan III e floroglucinol acidificado.
Os frutos coletados conforme a Tabela 1, fixados e desidratados,
foram infiltrados com historesina (Leica), sendo colocados em soluo
de pr-infiltrao (historesina: etanol 95%, 1:1, v/v), durante 24 horas,
sob vcuo, e, em seguida, transferidos para a soluo de infiltrao
(historesina pura), por quatro horas, sob vcuo. A seguir, foram
colocados em moldes que continham a soluo de incluso (historesina
adicionada de endurecedor). As seces foram feitas em micrtomo de
rotao, distendidas em lminas histolgicas e submetidas colorao
com azul de toluidina (OBRIEN et al., 1964),. Os registros fotogrficos
e as anlises foram realizados em microscpio ptico Olympus DP40F,
com unidade de controle DP, Control 71 da Olympus e cmara
fotogrfica acoplada ou sob microscpio estereoscpio Olympus
SZH10, com unidade de controle DP, Control 71 da Olympus e cmara
fotogrfica acoplada (Figura 1I).
A anlise ultraestrutural de superfcie, em microscopia eletrnica
de varredura (MEV), foi realizada em amostras retiradas de cinco botes
florais, de cada estdio de desenvolvimento. As amostras, previamente
fixadas e conservadas em etanol 70%, como descrito acima, foram
desidratadas em srie etlica crescente at etanol 100% para a obteno
das seces transversais e longitudinais. As seces foram colocadas em
tubos eppendorfs, contendo etanol 100%, por 30 minutos, e,
posteriormente, foram submetidas ao ponto crtico de CO2 Leica EM
CPD 030, seguindo procedimento de Horrige & Tamm (1969). Depois
da secagem, o material foi aderido sobre suportes de alumnio, com
auxlio de uma fita carbono dupla-face e numerado conforme
planejamento prvio. Estes suportes foram postos sobre isopor, numa
caixa plstica transparente contendo slica gel. A caixa foi vedada com
PVC e colocada dentro de um desumidificador at ser coberto com
20nm de ouro, em metalizador Leica EM CPD 030, modelo CPD 030. A
anlise e documentao foram efetuadas em microscpio eletrnico de
varredura JEOL JSM-6390LV (Figura 1J).

173

Figura 1 - Metodologias utilizadas para anlise estrutural de frutos,

sementes e embries de C. xanthocarpa. A) Indviduo S1. B) Ramos
florferos retirados de S1. C) Acondicionamento para transporte de estames
(indivduos S2, S3 e S4) usados na polinizao cruzada controlada. D e E)
Emasculao dos botes florais e polinizao cruzada manual em ambiente
controlado. F) Ramos com botes florais polinizados e marcados com fitas
coloridas, acondicionados em baldes contendo gua. G) Ramos de S1 ( campo)
marcados com fitas coloridas, aps a polinizao cruzada controlada. H)
Acondicionamento para transporte de frutos oriundos da polinizao cruzada
controlada em S1. I) Sala de microscopia, no Laboratrio de Fisiologia do
Desenvolvimento e Gentica Vegetal (LFDGV/UFSC). J) Sala de Microscopia
Eletrnica de Varredura (MEV), no Laboratrio Central de Microscopia
Eletrnica (LCME/UFSC).

174

175

2 RESULTADOS E DISCUSSO
2.1 ESTDIOS DE DESENVOLVIMENTO DOS FRUTOS DE C.
XANTHOCARPA
Para C. xanthocarpa, optou-se por incluir a fase de pr-antese na
anlise de desenvolvimento, acompanhando os demais estdios a partir
da polinizao cruzada controlada. Na fase balo, o ovrio desta espcie
apresentou uma parte superior, ligada ao estilete, mais elevada, seis a
oito lculos com rudimentos seminais bisseriados, epiderme externa
fortemente cutinizada e recoberta por tricomas. O mesofilo mostrou-se
constitudo por tecido parenquimtico e os feixes vasculares estavam
entremeados a este tecido. Estruturas secretoras foram registradas no
mesofilo, sob a epiderme (Seo II deste trabalho). No terceiro dia
depois da polinizao (72h DP), ocorre a fecundao da oosfera (Seo
III deste trabalho), com o desenvolvimento dos frutos estendendo-se por
cerca de, 45 dias. O dimetro mdio e a colorao alteraram-se
visivelmente ao longo do tempo, variando de 2,79mm e colorao
esverdeada at 30,21mm e colorao alaranjada. Durante cerca de 30
dias, o desenvolvimento dos frutos apresentou uma evoluo lenta e
constante, variando de 2,79mm at 17,48mm de dimetro, com a
manuteno da colorao esverdeada. De 30 a 37 dias constatou-se uma
variao de cerca de 10mm no dimetro dos frutos, passando de
17,48mm para 26,97mm e a cor verde que foi substituda pelo laranjaesverdeado. Em dois dias (aos 39 dias), houve um aumento mdio de
cerca de 3mm no dimetro dos frutos (de 26,97 para 30,21mm) e a
mudana para a colorao alaranjada, no estgio final de
amadurecimento. A senescncia intensificou-se a partir de 42 dias
depois da polinizao, com o aumento de intensidade da colorao
laranja, quando teve incio a reduo no dimetro mdio, que passou
para 28,93mm, eventos que culminaram com a queda dos frutos. Estes
dados esto sumarizados na Tabela 2.
A partir destas observaes, foi possvel dividir o
desenvolvimento dos frutos em 5 estdios, dentro de um padro
sigmoidal (Figura 2). O estdio I (Figura 2A) foi representado pelo
ovrio das flores na fase balo. O estdio II (Figuras 2B a 2G) foi
identificado pelo lento desenvolvimento inicial logartmico at 30 dias
DP, provavelmente ligado diviso, expanso celular e diferenciao
dos tecidos. No estdio III (entre 30 e 37 dias DP; Figuras 2G e 2H,
respectivamente)
ocorreu
um
incremento
exponencial
no
desenvolvimento dos frutos de C. xanthocarpa, atravs do crescimento

176

dos embries, desenvolvimento das sementes, crescimento do pericarpo

e incio da maturao. No final deste perodo, a colorao verde intensa
foi substituda parcialmente pelo laranja (Figura 2H). O estdio IV
(Figura 2I) foi identificado pela desacelerao do desenvolvimento at
39 dias DP, com o processo de amadurecimento dos frutos,
caracterizado pela mudana da colorao verde para o alaranjado, e
pelas mudanas nos padres sensoriais, sendo o melhor momento para o
consumo in natura da fruta. O estdio V de desenvolvimento (Figura 2J)
envolveu a fase de senescncia e degradao at 42 dias DP, com
diminuio do dimetro mdio e absciso dos frutos.
O aumento no tamanho do fruto proporcionado pelo aumento
do nmero e tamanho das clulas, as quais, com o crescimento, vo
formando vacolos e acumulando de carboidratos e outros compostos
(GORTNER et al., 1967). Em geral, a diviso celular est restrita a
primeira e segunda fase do desenvolvimento, podendo ser de curta
durao, para alguns frutos, como o tomate (HULME, 1970; AWAD,
1993), ou prolongar-se por vrias semanas, como em carambola
(GONZLEZ et al., 2001). A expanso celular, por outro lado, pode
continuar at a maturidade (GORTNER et al., 1967). Salomo et al.
(2006) constataram que o aumento nos frutos de lichieira (Litch
chinensis Sonn.) at o 77 dia foi devido, basicamente, ao crescimento
do pericarpo e da semente. Nesse perodo, pericarpo e semente, juntos,
representavam 87% da massa da matria seca do fruto. Em ciriguela
(Spondias purpurea L.) a fase de crescimento mais intenso foi
caracterizada pelo aumento do volume dos frutos, acompanhado pela
pigmentao verde-intensa, caractersticas estas indicativas da atividade
celular mxima, refletida pela imaturidade fisiolgica (MARTINS et al.,
2003). Chitarra & Chitarra (2005) referem o controle destas etapas
ao de fitormnios como auxinas, citocininas e giberilinas, que
retardam o amadurecimento e estimulam a diviso e expanso celulares.
Na fase de amadurecimento, os frutos de ciriguela, j haviam
completado o desenvolvimento e atingido a mxima qualidade
comestvel, caracterizada por profundas modificaes na textura e nos
pigmentos, refletida pela transio da cor verde-escura para vermelhoescura (MARTINS et al. 2003). As mudanas de cor esto relacionadas
degradao da clorofila durante o amadurecimento, evidenciando
outros pigmentos contidos nas clulas, como os carotenos e xantofilas.
O controle do amadurecimento est relacionado ao incremento nos
teores de cido abscsico e um aumento na atividade das hidrolases,
estimulando a sntese autocataltica do etileno (CHITARRA &
CHITARRA, 2005).

177

Martins et al. (2003) registraram, no amadurecimento de

ciriguela, sinais de enfraquecimento da camada de absciso do pecolo
como preparao para a liberao do fruto da planta. A queda de frutos
pode estar relacionada menor presena de feixes vasculares nos
pedicelos, o que reduziria a chegada de nutrientes, fotoassimilados e
reguladores de crescimento para o fruto, impedindo seu
desenvolvimento (ZHANG, 1997). Durante a senescncia, predominam
os processos catablicos que levam degradao do rgo vegetal. Pode
ser resultante do corte do fornecimento de nutrientes levando
utilizao de reservas acumuladas nos tecidos para manter a homeostase
celular e a integridade das membranas. Etileno e cido abscsico esto
intimamente envolvidos neste processo que culmina com a morte celular
programada (CHITARRA & CHITARRA, 2005).
Tabela 2 - Tempos de coletas de flores em antese (dimetro mdio dos
ovrios em mm) e frutos correlacionados a uma escala de tamanhos
(dimetro em milmetros) aps a polinizao cruzada controlada de C.
xanthocarpa
Dias/horas da polinizao
Antese (AP*)
5 dias (120h DP**)
10 dias (240h DP)
15 dias (360h DP)
20 dias (480h DP)
25 dias (600h DP)
30 dias (720h DP)
37 dias (888h DP)
39 dias (936h DP)
42 dias (1008h DP)

Dimetro mdio do ovrio (AP)

e dos frutos (mm)
2,79a
6,32b
8,81b
10,26bc
12,43c
14,24cd
17,48d
26,97e
30,21f
28,73f

*AP = antes da polinizao **DP = depois da polinizao

178

Figura 2 - Padro sigmoidal de desenvolvimento dos frutos de C.

xanthocarpa. A)Fase balo (ovrio com 3mm de dimetro). B) Frutos de
colorao verde (5 dias DP; 6mm). C) Colorao verde (10 dias DP; 9mm). D)
Frutos verdes (15 dias DP; 10mm). E) Frutos verdes (20 dias DP; 12mm). F)
Frutos verdes (25 dias DP; 14mm). G) Frutos verdes (30 dias DP; 17mm). H)
Frutos verde-alaranjados (37 dias DP; 27mm). I) Frutos alaranjados (39 dias
DP; 30mm). J) Intensificao da colorao laranja dos frutos (42 dias DP;
29mm). I, II, III, IV, V = estdios de desenvolvimento.

2.2 DESENVOLVIMENTO MORFOLGICO DE EMBRIES E

SEMENTES CORRELACIONADOS AO DESENVOLVIMENTO
DOS FRUTOS DE C. XANTHOCARPA
Uma vez estabelecidos os estdios de desenvolvimento dos
frutos, estes foram relacionados com o desenvolvimento das sementes e
embries. A fase II caracterizou-se pelo desenvolvimento lento das
estruturas, ao longo de 30 dias depois da polinizao cruzada
controlada. A partir do dcimo dia foi possvel detectar mudanas na
forma dos frutos, sementes e embries, observados sob o microscpio
estereoscpio. Ao longo dos 30 dias, os frutos globosos de cor verde
mantiveram as spalas firmemente aderidas e foi possvel distinguir a
parte superior do fruto em desenvolvimento com o que havia restado do
estilete (Figuras 3A1, 3B1, 3C1 e 3D1). Neste perodo, as sementes

179

desenvolveram-se envoltas pela parede do fruto jovem constituda por

glndulas de leo. Aos 10 dias, a cobertura formada pela parede interna
do fruto (Figura 3A2) mostrou-se mais ampla do que as sementes que se
encontravam no seu interior, permitindo o desenvolvimento gradual das
estruturas seminais e embrionrias (Figuras 3B2, 3C2 e 3D2). Nesta
fase, a extrao das sementes era facilitada, bastando uma presso leve
sobre o ovrio em desenvolvimento. Aos 10 dias, as sementes podiam
ser facilmente liberadas. Estas mostraram-se formadas pela testa
envolvendo os embries globulares (Figura 3A3 e 3A4), menores que
0,5mm. Aos 15 dias, os embries desprendiam-se facilmente da testa, os
quais denotavam um perodo de transio entre a fase cordiforme e a de
torpedo (Figuras 3B3 e 3B4), com cerca de 1,5mm de comprimento.
Aos 20 dias, ao se fazer presso sobre os frutos, eram liberados somente
os embries, os quais j se encontravam na fase de torpedo (Figuras 3C3
e 3C4), com cerca de 3mm de dimetro, ficando a testa das sementes
aderida no interior dos frutos (Figura 3C3). Aos 30 dias, os embries,
com cerca de 4mm, eram liberados com facilidade, apresentando o
formato reniforme caracterstico (Figuras 3D3 e 3D4).
Na fase III de desenvolvimento, houve o incremento do
desenvolvimento dos frutos em dimetro e o incio perceptvel do
amadurecimento devido mudana de colorao do verde para o
amarelo esverdeado (Figura 3E1). Este incremento em dimetro, no
perodo de uma semana, provavelmente est ligado ao desenvolvimento
dos tecidos do pericarpo (Figura 3E2), uma vez que as estruturas
seminais e embrionrias no variaram significativamente em tamanho
ou forma. Os embries (Figuras 3E3 e 3E4) exibiram forma semelhante
fase anterior, com cerca de 4,5mm de dimetro, facilmente liberados
atravs da presso sobre os frutos, com extravasamento sobre eles das
secrees das glndulas de leo da parede interna.
A fase IV caracterizou-se pela intensificao da colorao
alaranjada dos frutos (Figura 3F1) e pela finalizao da estrutura
embrionria com cerca de 5mm de dimetro. A parede interna locular
(Figura 3F2) mostrou-se firmemente aderida s estruturas seminais,
possibilitando fcil liberao do embrio (Figura 3F3). Constatou-se,
ainda, um aumento no volume de secrees glandulares liberadas sobre
os embries, estes se mostrando mais espiralizados (Figura 3F4).
A formao do embrio em Magnoliopsida compreende uma fase
proembrionria, diviso do zigoto at os primrdios dos cotildones, e
uma fase embrionria, que inicia com o embrio cordiforme at a sua
formao final (SOUZA, 2009). Barroso et al. (1991) esclarecem que o
embrio das sementes de Myrtaceae serve como base para a

180

classificao desta famlia em tribos, diferenciando-os em embries

mircioides, pimentoides e eugenioides. Estes autores complementam
informando que em Campomanesia so encontrados embries enrolados
em espiral, formados pelo eixo hipoctilo-radicular, em cujo pice se
localizam os cotildones rudimentares, constituindo a forma
especializada do embrio pimentoide. Coneglian (2007), trabalhando
com sementes de Campomanesia pubescens (DC.) Berg no conseguiu
registrar os cotildones anatomicamente, atribuindo este fato ao
tamanho reduzido de tais rgos.
Pode-se perceber que as fases de desenvolvimento mais intenso
dos frutos nem sempre correspondem as do desenvolvimento mais
intenso das sementes e embries. A maior diferena, em termos de
tamanhos e formas, foi verificada na fase III de desenvolvimento para os
frutos, enquanto o perodo de diferenciao e crescimento mais intensos,
nas estruturas seminais e embrionrias, deu-se nos ltimos 10 dias da
fase II de desenvolvimento dos frutos. Campomanesia xanthocarpa
investe inicialmente na formao e na proteo dos ginfitos, atravs da
formao da testa e da cobertura das sementes pela parede interna
locular, a qual mostrou-se rica em glndulas de leos e fenis, com
provvel funo de defesa ao ataque de patgenos e/ou predadores,
garantindo assim sua perpetuao na natureza. Num segundo momento,
a espcie investe no aprimoramento dos frutos como estruturas de
proteo e disperso das sementes. Aos 39 dias, o fruto mostrou
evidncias indicativas do pleno amadurecimento do pericarpo, bem
como do embrio neste contido. Estas informaes tornam-se
importantes na tomada de decises acerca dos melhores momentos para
coleta de frutos para consumo in natura ou para uso industrial, de
embries empregados na micropropagao ou da coleta de sementes
para produo de mudas.

181

Figura 3 - Estdios de desenvolvimento dos frutos, sementes e embries

de C. xanthocarpa: A1-A4) Frutos verdes 10 dias DP, apresentando
spalas persistentes (seta em A1), com sementes se desenvolvendo
envolvidas pela parede locular interna glandular (seta em A2), com
liberao da testa seminal (seta em A3) contendo o embrio globular
(seta em A4). B1-B4) Frutos verdes 15 dias DP, com spalas presentes
envolvendo a parte superior do ovrio em desenvolvimento (seta em B1)
e estruturas seminais envolvidas pela parede do fruto (B2), liberando a
testa (seta em B3) com embries em fase transicional, entre a fase
cordiforme e a fase de torpedo (B4). C1-C4) Frutos verdes 20 dias DP,
com spalas presentes (C1) e aumento de dimetro, apresentando a
semente em desenvolvimento dentro da proteo da parede glandular
(seta em C2), liberando embries na fase de torpedo (seta em C3 e
detalhe do embrio em C4). D1-D4) Frutos verdes 30 dias DP com
spalas bem visveis (D1) e estruturas seminais completamente cobertas
pela parede interna do fruto (D2), liberando embries (D3) em incio de
espiralizao (D4); E1-E4) Frutos de colorao amarelo-esverdeada 37
dias DP (D1), evidenciando degradao da clorofila, parede interna (E2)
parcialmente aderida s sementes no seu interior, liberando embries
espiralizados (E3 e E4). F1-F4) Frutos maduros 39 dias DP, com
colorao alaranjada (F1), com sementes envoltas pela parede locular
(F2), liberando embries completamente espiralizados (F3 e F4). Barras
= 1mm (A2, A3, A4), 2mm (A1, B1, B2, B3, B4, C2, C3, C4, D4, E3,
E4, F4), 5mm (C1, D1, D3, F3), 10mm (E1, F1), 100m (D2, E2, F2).

182

2.3 ANLISE ESTRUTURAL DO DESENVOLVIMENTO DE

EMBRIES
E
SEMENTES
CORRELACIONADOS
AO
DESENVOLVIMENTO DOS FRUTOS DE C. XANTHOCARPA
2.3.1 Anlise estrutural aos cinco dias aps a polinizao cruzada
Depois de cinco dias da polinizao cruzada controlada, em C.
xanthocarpa, os botes florais de colorao verde apresentavam
desenvolvimento perceptvel da regio ovariana, spalas persistentes e
restos da poro basal do estilete (Figura 4A), cujos tecidos entraram em
senescncia e morte aps a fecundao. As seces dos ovrios em
desenvolvimento, sob a microscopia ptica, revelaram os proembries
com seus respectivos suspensores. Foi possvel distinguir a testa, a
regio nucelar e o saco embrionrio, envolvendo a poro apical dos
proembries voltada para o endosperma nuclear, em incio de formao.
Pode-se visualizar a parede interna do fruto unitegumentada cercando as
cavidades loculares ainda no concrescidas com a testa das sementes
(Figuras 4B e 4C). Na figura 4C, uma parte da testa mostrou-se
concrescida com o tegumento interno do fruto. A microscopia eletrnica
de varredura permitiu a visualizao da testa e da regio nucelar, no
sendo possvel distinguir os proembries (Figura 4D). No quinto dia
depois da polinizao controlada, C. xanthocarpa apresentou
proembries com seus suspensores bem desenvolvidos (Figura 4B),
envoltos em camadas protetoras, como a testa. Tecidos nutritivos, como
o endosperma nuclear, que parece ter iniciado sua formao antes dos
proembries, devido ao aspecto bem desenvolvido, e a camada espessa
do nucelo garantem o incio da expresso da programao gentica que
leva ao desenvolvimento da nova gerao esporoftica.
Aps a fecundao, conforme referem Mariaht et al. (2006), a
clula mdia d origem gerao xenoftica (em geral um tecido de
reserva), responsvel pela nutrio do embrio esporoftico originado a
partir da fuso de um gameta do andrfito com a oosfera, gerando um
zigoto esporoftico (diploide). Os autores esclarecem que o embrio
corresponde fase inicial da ontogenia do esporfito, culminando com a
germinao da semente. A embriognese inicia a partir da fecundao e,
atravs de mitoses sucessivas, origina a nova gerao esporoftica.
Ainda, segundo Mariath et al. (2006), as primeiras divises
celulares embriognicas resultam na formao de um proembrio,
constitudo por um aglomerado de clulas na extremidade apical,
projetada na direo da clula-mdia fecundada ou do endosperma em
incio de formao, e por um grupo de clulas basais que formam um

183

filamento chamado suspensor, voltado para o canal micropilar. Alm de

manter o embrio numa posio fixa, estudos ultraestruturais,
bioqumicos e fisiolgicos indicam que o suspensor tem papel ativo na
embriognese inicial e no desenvolvimento embrionrio, alm de
funcionar como translocador de substncias nutritivas dos tegumentos
para o embrio (YEUNG & MEINK, 1993).
O endosperma desenvolve-se a partir da fuso do gameta do
andrfito com a clula central ou mdia, sendo considerado nuclear
quando o ncleo primrio do endosperma, resultante da singamia,
divide-se inmeras vezes, sem formar a parede celular. Os ncleos
permanecem livres na cavidade onde se aloja o embrio, mais tarde
ocorrendo a celularizao (SOUZA, 2009). O endosperma nuclear
encontrado em muitas espcies, incluindo as da famlia Myrtaceae.
Coneglian (2007), trabalhando com Myrcia bella Cambess. e
Campomanesia pubescens (DC.) O. Berg observou a formao deste
tipo de endosperma logo aps a antese, o que tambm foi constatado em
C. xanthocarpa (Figura 4B).

Figura 4 - Fruto, sementes e embries de C. xanthocarpa cinco dias

(120h DP), aps a polinizao cruzada controlada. A) Fruto verde com
incio de desenvolvimento do ovrio, apresentando spalas persistentes e o que
restou da base do estilete na insero, com o incio da poro superior do ovrio
(seta). B) Seco longitudinal do fruto, mostrando o incio da formao da
semente, com a presena de testa, regio nucelar, envolvendo o saco
embrionrio, e proembrio sustentado pelo suspensor (seta), cuja regio apical
volta-se para o endosperma nuclear. Nota-se que a parede interna
unitegumentada do fruto, que delimita o lculo da cavidade, no se encontra
concrescida com a testa seminal. C) Presena de proembries desenvolvendo-se
em sementes, cujas testas encontram-se concrescidas com a parede interna
(seta) e periderme do fruto em desenvolvimento. D) Eletromicrografia da
semente em formao mostrando a testa e a regio nucelar. Barra = 2mm (A).
Te = testa, Nu = nucelo, Ea = endosperma nuclear, Lv= lculo, Pi = parede
interna, Pb = proembrio, Pm = pericarpo.

184

2.3.2 Anlise estrutural aos dez dias aps a polinizao cruzada

Aps dez dias da polinizao controlada, os frutos de C.
xanthocarpa apresentavam colorao verde, regio ovariana
desenvolvida e spalas persistentes, com a cicatriz do estilete bem
visvel (Figura 5A). As microscopias ptica e eletrnica de varredura
permitiram a visualizao da testa bem desenvolvida e ainda no
concrescida parede locular interna do fruto (Figuras 5B e 5D),
formada pelo tegumento interno fortemente comprimido, um tegumento
mdio e um tegumento externo ou exotesta cujas clulas mostraram-se
levemente alongadas no sentido radial (Figuras 5E e 5F). Nesta fase de
desenvolvimento dos frutos de C. xanthocarpa, os embries globulares
alojados numa das extremidades do saco embrionrio, circundados pelo
endosperma nuclear que se encontrava em processo de celularizao,
foram facilmente identificados. O nucelo apresentou-se como uma
camada menos espessa, circundando o saco embrionrio, indicando que,
provavelmente, as estruturas em desenvolvimento consumiram suas
reservas (Figuras 5C, 5D e 5F).
Coneglian (2007) descreveu a estrutura das camadas formadoras
da testa em Campomanesia pubescens, Myrcia bella e Eugenia
punicifolia (Kunth) DC., referindo-se s clulas alongadas da exotesta,
com espessamentos secundrios lignificados, clulas da mesotesta sem
lignificao e comprimidas medida que o embrio se desenvolvia e a
forte compresso das clulas da camada interna, parecendo que as
clulas no possuiam citoplasma. O uso de azul de toluidina nas
amostras de C. xanthocarpa no indicaram presena de lignina na
exotesta. Aps uma srie de divises mitticas, as clulas da
extremidade terminal do proembrio originam uma massa esfrica de
clulas que reconhecida como o estdio globular da ontogenia do
embrio (MARIATH et al., 2006). Pescador et al. (2009) relataram que
Acca sellowiana apresentou endosperma do tipo nuclear e que sua
formao iniciava-se antes da formao do zigoto, com o incio da
celularizao durante a formao do embrio globular. Este padro de
formao do endosperma foi o mesmo encontrado para C. xanthocarpa.
Em M. bella e C. pubescens, de acordo com Coneglian (2007), o
endosperma comea a ser observado logo aps a antese e tambm
formado de modo nuclear. Nas duas espcies, durante o
desenvolvimento, o endosperma celulariza-se e consumido na medida
em que produzido, sendo mais abundante em C. pubescens. O nucelo,
complementa a autora, consumido no processo de desenvolvimento
das estruturas seminais e embrionrias nestas espcies.

185

Aps dez dias da polinizao estruturas importantes na formao

das sementes e embries so claramente visveis, sendo este perodo
marcado pela embriognese propriamente dita e pelo maior
desenvolvimento do endosperma e da testa, estruturas mantenedoras do
embrio. Nota-se que C. xanthocarpa estruturou-se no sentido de
garantir o pleno desenvolvimento das sementes e embries, o que a
torna uma espcie capaz de competir e se estabelecer nos ambientes
onde encontrada.

186

Figura 5 - Fruto, sementes e embries de C. xanthocarpa dez dias (240h

DP) aps a polinizao cruzada controlada. A) Fruto em desenvolvimento
com spalas persistentes. B) Eletromicrografia de varredura permitindo a
visualizao do lculo com duas sementes em desenvolvimento. Tegumento
externo (exotesta) no concrescido parede interna do fruto. C) Seco
longitudinal do fruto mostrando a semente formada pela testa, o tegumento
interno delimitando a regio nucelar e o saco embrionrio com o embrio
globular circundado pelo endosperma nuclear em processo de celularizao.
Nota-se a parede locular unitegumentada com glndulas de leo em formao,
no concrescida com a testa. D) Eletromicrografia de varredura mostrando
seco transversal da semente, onde possvel observar as camadas formadoras
da testa, a regio nucelar e o saco embrionrio com o endosperma nuclear e
parte do endosperma em processo de celularizao. E) Detalhe da seco
seminal, em microscopia eletrnica de varredura, mostrando o endosperma em
processo de celularizao, o endosperma nuclear, o nucelo, a endotesta e a
mesotesta comprimidas e a exotesta. F) Detalhe da seco longitudinal da
semente mostrando o embrio globular, envolto pelo endosperma nuclear com
regies celularizadas, a camada menos espessa do nucelo, a endo e a mesotesta
comprimidas e a exotesta com clulas mais alongadas. Barra = 2mm (A). Sp =
spala, Sm = semente, Lv = lculo, Pi = parede interna do fruto, Nu = nucelo, El
= embrio globular, Te = testa, Ez = endosperma celularizado, Ea = endosperma
nuclear, Go = glndula de leo, Ed = endotesta, Em = mesotesta, Ex = exotesta.

187

2.3.3 Anlise estrutural aos trinta e sete dias aps a polinizao

cruzada
O trigsimo stimo dia aps a polinizao cruzada marcou o
incio perceptvel do amadurecimento dos frutos de C. xanthocarpa,
evidenciado pela mudana na colorao externa de verde para amareloesverdeado. Ainda persistiam resqucios das spalas envolvendo a
cicatriz do que havia sido o estilete e a poro superior do ovrio
(Figura 6A). A microscopia eletrnica de varredura e a anlise sob o
microscpio estereoscpio permitiram a visualizao do pericarpo
desenvolvido e dos lculos com as sementes em desenvolvimento. Foi
possvel perceber que, de um total de 7 a 9 vulos potenciais por lculo,
somente 1 a 2 sementes desenvolveram-se ao lado de sementes
abortadas (Figura 6B). Glndulas de leo, adjacentes parede interna do
fruto, apresentaram-se envolvendo conspcuamente as sementes. A testa
bem desenvolvida mostrou-se concrescida com a parede interna,
restando uma parte do endosperma contornando o embrio (Figura 6C).
Mesmo concrescida, a testa rompia-se com emprego de presso sobre a
regio, liberando os embries desenvolvidos, porm, estes ainda no
estavam completamente espiralizados (Figuras 6F).
Em Campomanesia pubescens, Coneglian (2007) constatou que
vrios vulos de cada lculo comeavam a desenvolver-se em sementes,
mas nenhum ou apenas um por lculo atingia o estdio de semente
madura, sendo que os demais permaneciam como vulos abortados nos
lculos sem semente ou nas proximidades de sementes em
desenvolvimento. Segundo a autora, nesta espcie, bem como em
Myrcia bella e Eugenia punicifolia, apenas um vulo desenvolve-se em
semente. Segundo Landrum (1982), o aborto iniciado pela planta-me
no intuito de concentrar recursos para o desenvolvimento de um vulo
em semente. Assim, C. xanthocarpa tambm deve apresentar vulos
abortados como forma de concentrar esforos para o bom
desenvolvimento de algumas sementes.
As glndulas de leo so frequentes entre as Myrtaceae, sendo
relatada em diversos rgos de espcies desta famlia (JUDD et al.
1999). Pescador et al. (2009), trabalhando com Acca sellowiana relatou
que o endosperma persistia somente at o estdio de torpedo, o que no
se verificou em C. xanthocarpa.

188

Figura 6 - Fruto, semente e embries de C. xanthocarpa trinta e sete dias

(840hDP) aps a polinizao cruzada controlada. A) Fruto amareloesverdeado, com pericarpo desenvolvido, mostrando resqucios das spalas na
regio superior do fruto (seta). B) Eletromicrografia de seco transversal do
fruto mostrando o pericarpo bem desenvolvido e os lculos com sementes
seriadas desenvolvendo-se ao lado de vulos abortados (seta). C) Seco
longitudinal mostrando as glndulas de leo ao redor dos lculos contendo a
semente constituda por testa, endosperma e embrio. D) Detalhe, em
microscopia eletrnica de varredura, de seco longitudinal na semente, cuja a
testa foi removida, mostrando o endosperma e o embrio. E) Eletromicrografia
mostrando a extruso do embrio, com a permanncia da testa (seta) aderida
cavidade interna glandular. F) Embrio pimentide, parcialmente espiralado,
formado pelo eixo hipoctilo-radicular, com cotildones rudimentares no pice
(seta). Barras = 10mm (A), 2mm (C, F). Sm = semente, Pm = pericarpo, Go =
glndula de leo, Te = testa, Eo = endosperma, Eb = embrio, Pi = Parede
interna, Epi = embrio pimentide, Ehr = eixo hipoctilo-radicular.

189

2.3.4 Anlise estrutural do fruto maduro de C. xanthocarpa

No presente trabalho, depois de trinta e nove dias da polinizao
cruzada controlada, foi possvel avaliar a disposio dos frutos (Figura
7A) desenvolvendo-se muito prximos uns dos outros, suspensos por
pednculo individualizado e inseridos nas gemas axilares das folhas. As
bagas apresentaram colorao alaranjada, dimetro mdio de 30mm,
com as spalas verdes ainda presentes (Figura 7B).
Quando maduros, os frutos de C. xanthocarpa mostraram
pericarpo que pode ser visualmente separado em 3 regies como
decorrncia das caractersticas histolgicas. Uma regio externa, cujo
tecido apresentou-se mais compacto, uma regio mediana com tecido
formado por espaos perceptveis e uma regio interna, prxima aos
lculos onde se encontravam as sementes, cujo tecido mostrou-se mais
compactado. Como no foram realizadas anlises mais aprofundadas
sobre a ontognese destes tecidos, optou-se pela denominao geral,
pericarpo, o qual est constitudo por regies externa, mdia e interna
(Figura 7C).
Em seco transversal do fruto, na regio externa do pericarpo,
atravs da microscopia eletrnica de varredura, foi possvel distinguir as
salincias das glndulas de leo subepidrmicas e na regio interna do
fruto, as glndulas plenamente desenvolvidas (Figura 7D). Os tricomas
mantiveram-se persistentes na epiderme uniestratificada e as glndulas
de leo mostraram-se constitudas por clulas secretoras que delimitam
ampla cavidade (Figura 7E). Seces paradrmicas mostraram grande
quantidade de glndulas abaixo do tecido epidrmico, sendo que o
contedo destas estruturas glandulares mostrou reao positiva ao sudan
III, indicando contedo de natureza lipdica (Figura 7F). Na epiderme
tambm foram evidenciados estmatos (Figura 7G).
A vascularizao (Figura 7H) se mostrou intensa na regio
mediana do pericarpo. A quantidade de tecidos de conduo pode ser
explicada pelo desenvolvimento das clulas desta regio, que se
alongaram, expandiram e aumentaram em volume, formando a polpa
dos frutos. O tecido parenquimtico, adjacente aos feixes vasculares
(Figura 7H), estava constitudo por clulas que armazenam nutrientes e
gua, que so translocados via feixes vasculares at a regio mediana do
pericarpo. Nesta regio do pericarpo, tambm foram detectadas clulas
que mostraram suas paredes espessadas e lignificadas, evidenciando
reao positiva ao floroglucinol acidificado (Figura 7I), caracterizandose como escleredes, dispostas em grupos ou isoladas. Seces
transversais do fruto, observadas em microscopia eletrnica de

190

varredura, mostraram a regio interna do pericarpo formada por clulas

mais compactas e delimitada internamente pela parede locular
uniestratificada. Esta regio rica em glndulas de leo que, nesta etapa
de desenvolvimento dos frutos, encontram-se cobrindo o tegumento
seminal (Figura 7J). O amadurecimento dos frutos mostrou-se de forma
escalonada, havendo frutos maduros crescendo ao lado de frutos
imaturos ou verdes, refletindo o desenvolvimento tambm escalonado
das flores, sendo esta uma caracterstica tpica de espcies no
domesticadas. Os atributos sensoriais eram suficientes para o consumo
in natura e o preparo de doces e sucos, sendo considerados aptos para a
colheita.
As espcies de Myrtoideae tm seus frutos classificados como
bagas por diferentes autores (Barroso et al. 1991, Judd et al. 1999) A
baga considerada um fruto simples, carnoso, uni a pluricarpelar e uni a
plurisprmico, ocorrendo em vrias famlias botnicas (SOUZA, 2006).
Barroso et al. (1999) classificaram os frutos das Myrtaceae sulamericanas como bacides, que so frutos carnosos e indeiscentes, com
pericarpo muito ou pouco espessado e endocarpo formado apenas pela
epiderme interna, que nunca lenhosa, esclerificada ou coricea, e com
nmero de sementes varivel. Para o gnero Campomanesia, os autores
classificaram os frutos como campomanesodeos, cujo pericarpo
carnoso e h um tecido pulposo central, no qual os lculos dispem-se
radialmente. Sanchotene (1989) classifica os frutos de C. xanthocarpa
como bagas globosas, achatadas nos plos, coroadas por spalas verdearroxeadas, suspensos por um pednculo com cerca de 2 cm de
comprimento. Acrescenta que o exocarpo liso, fino e, quando maduro,
amarelo; o mesocarpo doce, amarelo, sucoso, abrigando de 1 a 32
sementes.
Os elevados teores de compostos fenlicos (1616 ppm/100g) e
vitamina C (233,56 mg/100g), de acordo com Santos (2009), qualificam
o fruto como alimento funcional e a textura pode ser atribuda ao alto
teor de pectinas. Conforme o autor, estes podem ser consumidos in
natura ou usados para preparar gelias e licores, apresentando potencial
tecnolgico devido s suas propriedades sensoriais e nutritivas. Segundo
Roth (1977), a presena de tricomas mais efetiva em frutos jovens e
esto relacionados reduo da transpirao e proteo, especialmente
quando a cobertura por cutcula ou ceras no se completou. Em C.
xanthocarpa a epiderme delgada, o que pode explicar a manuteno
dos tricomas nos frutos maduros. Coneglian (2007) constatou que em C.
pubescens, os tricomas no estavam presentes na maturao. As demais
caractersticas desta regio do pericarpo, descritas por esta autora, so

191

semelhantes ao que foi constatado em C. xanthocarpa. Em Myrcia bella

e C. pubescens os contedos das cavidades secretoras em
desenvolvimento e em atividade de secreo, reagiram positivamente
aos testes com cloreto frrico e acetato de cobre associado a cido
rubenico, indicando a presena de compostos fenlicos lipossolveis, e
cujo contedo secretado lipdico (reage positivamente aos testes com
vermelho de sudan IV e preto de sudan B). Anlises realizadas no leo
voltil de C. xanthocarpa identificaram 62 componentes,
correspondendo a 100% dos constituintes do leo, destacando-se dentre
eles os monoterpenos -pineno (15%), o-cimeno (10,8%), -pineno
(10,5%) (VALLILO, 2008). Segundo as observaes de Landrum
(1986), em frutos de Campomanesia encontrados parcialmente comidos
sob as rvores, os lculos foram evitados devido ao sabor produzido
pelas secrees das glndulas presentes nesta regio, o que manteve a
integridade das sementes. Souza (2006) descreve a epiderme desta
regio nos frutos como formada por clulas com paredes periclinais
externas espessas e cuticularizadas, podendo ser glabra ou no e
estomatfera. Frutos in natura de C. xanthocarpa, avaliados quanto
composio nutricional e ao teor de elementos inorgnicos, mostraram
alto teor de gua (81,4%), lipdios (1,9%), carboidratos totais (8,9%),
fibra alimentar (6,3%), alm de quantidades razoveis de cido
ascrbico (17,8 mg.100 g-1), e traos de riboflavina (0,09 mg.100 g-1)
(SANTOS, 2009). Entre os minerais (16), os principais elementos foram
o K, P, Mg e, como microelementos, o Fe, Cu e Pb. O valor energtico
do fruto (57,3 kcal.100 g-1) deve-se quase que exclusivamente aos teores
de carboidratos totais (8,9%) (VALLILO, 2008).

192

Figura 7 - Fruto de C. xanthocarpa, 39 dias aps a polinizao (936h

DP).

193

A) Ramos com frutos desenvolvendo-se nas regies axilares das folhas (setas).
B) Fruto maduro do tipo campomanesodeo (baga globosa) com spalas
persistentes (seta). C) Eletromicrografia de varredura do pericarpo (Per) do
fruto distinguindo-se trs regies: externa (Rex), mediana (Rem) e interna (Rei).
D) Parede do fruto, destacando as glndulas de leo evidentes (seta)
subepidrmicas e na seco transversal mostrando as cavidades glandulares
espalhadas pela regio externa; E) Detalhe da regio perifrica do pericarpo,
mostrando tricomas na epiderme e glndula de leo com clulas delimitando
ampla cavidade (seta). F) Seco paradrmica do pericarpo evidenciando reao
positiva ao sudan III (setas) para contedo lipdico das glndulas de leo. G)
Seco paradrmica da epiderme com presena de estmatos (setas). H) Feixes
vasculares na regio mediana do pericarpo, entre clulas parenquimticas (seta).
I) Escleredes agrupados na regio mediana do pericarpo, com as paredes
espessadas e lignificadas, evidenciando reao positiva presena de lignina
com floroglucinol acidificado (seta). J) Eletromicrografia de varredura de
seco transversal na regio interna do pericarpo, destacando presena de
glndula de leo (seta), muito prxima ao rudimento seminal. Barras = 1cm (A),
10mm (B), 500m (C,D), 10m (E), 200m (F,G,I), 1mm (H), 50m (J). Bg =
baga globosa, Per = pericarpo, Rex = regio externa, Rem = regio mediana,
Rei = regio interna, Ep = epiderme, Go = glndula de leo, Tr = tricoma, Bf =
bainha do feixe, Fv = feixe vascular, Sm = semente.

194

2.4 ANLISE MORFOLGICA DA SEMENTE E DO EMBRIO

MADURO DE C. XANTHOCARPA
No presente trabalho, aos 39 dias da polinizao cruzada
controlada, as anlises morfolgicas nas sementes maduras de C.
xanthocarpa, mostraram a presena de uma cobertura mucilaginosa e a
adeso do pericarpo rico em glndulas de leo sobre as sementes. Podese perceber uma regio mediana mais escura sob o pericarpo, tratandose da hipstase (Figura 8A). Sob o microscpio de varredura pode-se
ver parte do pericarpo aderido como um falso tegumento seminal
(Figura 8C e 8D). As glndulas de leo (Figura 8D), quando rompidas,
espalharam sobre o embrio seus contedos ricos em fenis e lipdeos,
os quais atuam como dissuasivos alimentares, antioxidantes e protetores
contra dessecao. Sem a cobertura do pericarpo as sementes se
apresentaram com formato reniforme e achatado dorsiventralmente, com
a superfcie externa do tegumento seminal sem a presena de glndulas
(Figura 8B). No foi constatada a presena do endosperma, nesta fase
em que o embrio j ocupava inteiramente o interior da semente, fato
que determina tratar-se de semente exalbuminosa.
Quando foram removidas parcialmente as estruturas
mucilaginosas, o pericarpo e o tegumento das sementes, foi possvel
visualizar o embrio sob o microscpio eletrnico de varredura (Figura
8C). Depois da retirada dos envoltrios, o embrio foi extrado
mostrando a forma tpica de um embrio mirtide (Figuras 8E e 8F)
tambm denominado pimentide, que estava alojado dentro de uma
semente com testa cartilaginosa. O embrio mostrou-se constitudo por
eixo hipoctilo-radicular conspcuo e engrossado, sendo os cotildones
muito pequenos (Figuras 8E e 8F).
Segundo Paoli (2006), a semente, nas Angiospermae, o vulo
maduro e fecundado a partir do processo de dupla fecundao, formada
pelo esporfito jovem (embrio), por um tecido alimentar (endosperma)
e por um envoltrio protetor, constituindo a unidade de disperso da
espcie. Nas Myrtoideae, as sementes variam em tamanho, estrutura do
tegumento, morfologia do embrio (NIC LUGHADHA & PROENA,
1996) e na espessura da testa (MCVAUGH, 1968). Segundo Landrum
(1986), parte do pericarpo aderido uma caracterstica aparentemente
restrita ao gnero Campomanesia, dentro das Myrtaceae. Segundo Nic
Lughadha & Proena (1996) a presena de glndulas de leo no embrio
tambm uma caracterstica encontrada em Myrtoideae, porm em C.
xanthocarpa no foram encontradas estruturas secretoras no embrio,
mas sim sobre eles.

195

A hipstase pode ser impregnada por cutina, suberina, lignina ou

calose e suas clulas podem conter compostos fenlicos, protena, amido
e reservas lipdicas, que podem persistir nas sementes maduras (PAOLI,
2006). Segundo Bouman (1984), esta estrutura pode ser uma barreira
que limita o crescimento do saco embrionrio, uma ligao entre o
suprimento vascular e o saco embrionrio, controlar o balano hdrico
de sementes dormentes, exercer proteo nas sementes maduras ou
fornecer reservas alimentares ao embrio. Nesta espcie, a hipstase
persistente pode estar ligada proteo e alimentao do embrio no
momento da germinao. Em C. pubescens, Eugenia punicifolia e
Myrcia bella, Coneglian (2007) constatou a presena da hipstase
expandida e evidente nas sementes maduras, composta por clulas com
depsitos fenlicos, caracteristicas que Werker (1997) considerou como
uma hipstase lato sensu. Pescador et al. (2009) observaram a presena
da hipstase nos vulos de Acca sellowiana. A hipstase persistente foi
referida por Von Teichman & Van Wyk (1991) como comum em
Myrtaceae e em outras 80 famlias de Dicotiledneas.
As anlises estruturais revelaram que o tegumento da semente
no apresenta glndulas na epiderme, conforme declarado por Berg
(1997), para as espcies de Campomanesia. Semelhantes resultados
foram encontrados por Coneglian (2007), para C. pubescens. Landrum
& Kawasaki (1997) consideraram que o tegumento seminal de espcies
do gnero Campomanesia no distinguvel na semente madura, devido
sua pequena espessura. Dados sobre a espessura dos tegumentos
maduros e sua estrutura, durante o desenvolvimento da semente, podem
ter significado para comparaes entre grupos (TOBE & RAVEN,
1983) e, em muitas espcies e gneros, o conhecimento da estrutura da
semente madura pode ser essencial para a disposio apropriada do
txon (MCVAUGH, 1968).
A ausncia de endosperma em sementes maduras caracterstica
da ordem Myrtales (TOBE & RAVEN 1983). Segundo Landrum &
Stevenson (1986), a ausncia de endosperma em sementes maduras
consequncia da transferncia da funo de armazenamento de energia
do endosperma para diferentes partes do embrio, tais como cotildones
(Em Eugeniinae), embrio como um todo (em Myrciinae), ou no
hipoctilo (em Myrtinae).
Santos (2004), trabalhando com sementes de C. xanthocarpa,
encontrou alto ndice de sementes vazias (vulos abortados) e
problemas de sanidade relacionados presena de larvas de insetos,
ficando disponvel para a semeadura, cerca de 50% do material
beneficiado. No momento da disperso apresentaram 33% de umidade,

196

sendo classificadas como recalcitrantes. De acordo com o conceito de

Cavalcante & Perez (1995), em presena de luz, a faixa de mxima
germinabilidade situou-se em temperaturas de 15 a 30C. A temperatura
tima de germinao, conceito estabelecido por Labouriau (1983), ficou
em 25C, demonstrando seu alto potencial adaptativo, possibilitando sua
instalao em locais sombreados ou sol pleno, habitando o interior ou
a orla das matas, embora prefira os stios midos da Floresta Ombrfila
Densa e Floresta Estacional Caduciflia.
A morfologia dos embries de Myrtoideae de grande
importncia taxonmica (LANDRUM & KAWASAKI, 1997), sendo o
principal carter para definio das subtribos (BARROSO et al., 1999).
No caso de C. xanthocarpa, o embrio mirtoide est relacionado
subtribo Myrtinae. O embrio de Campomanesia classificado por
Rotman (1976) e Landrum & Kawasaki, (1997) como espiralado, com
dois cotildones foliceos pequenos, hipoctilo alargado e radcula livre.

197

Figura 8 - Semente e embrio de C. xanthocarpa 39 dias aps a

polinizao (936h DP). A) Semente recoberta pela parede interna do fruto,
com glndulas de leo, permitindo a visualizao da hipstase que se apresenta
como uma mancha marrom mais escura na regio central, B) Semente
propriamente dita, alojada na cavidade locular mostrando o tegumento externo.
C) Eletromicrografia de varredura com o embrio sob a camada de mucilagem e
o envoltrio formado pela regio interna do pericarpo. D) Detalhe da glndula
de leo sobre o embrio. E) Embrio mirtide, sob o microscpio estereoscpio,
formado por eixo hipoctilo-radcular engrossado e cotildones foliceos
minsculos, apresentando depsito de leo proveniente das glndulas do
pericarpo. F) Eletromicrografia do embrio mirtide, exibindo os cotildones
foliceos, o eixo hipoctilo-radicular e restos da regio interna do pericarpo.
Barra = 1mm (E). Go = glndula de leo, Hi = hipstase, Rei = regio interna
do pericarpo, Lv = lculo, Sm = semente, Eb = embrio, Um = mucilagem, Emi
= embrio mirtide, Rad = radcula, Cf = cotildone foliceo, Ehi = eixo
hipoctilo-radicular, Ol = leo.

198

199

3 CONCLUSO
As anlises do desenvolvimento de embries, sementes e frutos
de Campomanesia xanthocarpa permitiram concluir que:
1. Os frutos levam, cerca de, 42 dias para se desenvolverem num
padro sigmoidal que pode ser dividido em 5 estdios de
desenvolvimento.
2. Devido s estruturas ovarianas formadoras do fruto j estarem
presentes na pr-antese, esta fase de desenvolvimento da flor foi
includa como estdio I.
3. O estdio II o mais longo (30 dias) e abrange eventos de
fundamental importncia como a fecundao, a embriognese
com a formao dos proembries, dos embries globulares, dos
embries nos estdios cordiforme e de torpedo, at sua forma
mirtoide definitiva. As principais estruturas formadoras da
semente so formadas neste perodo.
4. O estdio III de desenvolvimento marca o incio do
amadurecimento perceptvel dos frutos atravs da mudana de
colorao e grande aumento em dimetro, provavelmente ligado
ao acmulo de reservas.
5. O estdio IV um perodo rpido (2 dias) de amadurecimento
pleno dos frutos com aprimoramento de padres sensoriais.
6. O estdio V o incio da rpida senescncia dos frutos
climatricos da espcie.
7. Os estdios de desenvolvimento II e III so os mais crticos em
relao a estresses biticos ou abiticos no desenvolvimento de
embries, sementes e frutos desta espcie.
8. Os frutos apresentam estruturas de proteo desde a epiderme,
atravs dos tricomas e glndulas de leo at as regies mais
internas. Para garantir a disperso das sementes, a espcie
investiu na regio mediana do pericarpo, atravs da presena de
escleredes que do a sustentao necessria ao tecido
parenquimtico rico em substncias nutritivas. As clulas deste
tecido so supridas com fotoassimilados e gua atravs da rede de
feixes vasculares, garantindo a recompensa para os dispersores.
9. Embora as sementes estejam estruturadas de modo a proteger o
embrio, recobrindo-o com mucilagem e substncias contidas nas
glndulas de leo e tenha providenciado uma reserva alimentar
no eixo hipoctilo-radicular e na hipstase, a caracterstica
recalcitrante e o curto perodo de viabilidade apresentados
dificulta sua utilizao.

200

201

4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ALMEIDA.E.J. de, JESUS, N. de, MARTINS, A.B.G. Fenologia do
florescimento e frutificao do Dovialis. Cientfica, v.39 n.1/2, p. 7984. 2011.
AWAD, M. Fisiologia ps-colheita de frutos. So Paulo: Nobel, 1993.
114p.
BARROS, S.S.U. de. Anatomia e ontognese dos frutos e sementes de
Mimosa caesalpiniaefolia Benth. (Fabaceae:
Mimosoideae).
Dissertao (Mestrado). Universidade Estadual Paulista, Botucatu/SP.
2002.
BARROSO, G.M.; PEIXOTO, A.L.; ICHASO, C.L.F.; COSTA, C.G.;
GUIMARES, E.F. Sistemtica de angiospermas do Brasil. Viosa:
Imprensa Universitria da Universidade Federal de Viosa, v.12. 1991.
BARROSO, G.M., MORIN, M.P., PEIXOTO, A.L., ICHASO, C.L.F.
Frutos e sementes: morfologia aplicada sistemtica de
dicotiledneas. Ed. da Universidade Federal de Viosa. Viosa. 1999.
BERG, O. Myrtaceae. In: VON MARTIUS, C.F.P. (Ed). Flora
Brasiliensis. Part 1. Lipsiae: Frid. Fleischer in Commv, 1857-1859.
v.14, p.1-655 apud LANDRUM, L.R.; KAWASAKI, M.L. The genera
of Myrtaceae in Brazil: an illustrated synoptic treatment and
identification keys. Brittonia, v.49, p.508-536, 1997.
BOUMAN, F. The ovule. In: JOHRI, B.M. (Ed.) Embriology of
Angiosperms. Springer-Verlag: New York. 1984.
CAVALCANTE, A.M.B. & PEREZ, S.C.J.G.A. Efeitos da temperature
sobre a germinao de sementes de Leucaena leucocephala (Lam.) de
Wit. Revista Brasileira de Sementes, 17 (1): 1-8. 1995.
CAVE, M.C. Structure et developmemt du fruit. Annales des Sciences
Naturalles Botaniques, v.5, n.10, p.123-190. 1869.
CHITARRA, M.I.F.; CHITARRA, A.B. Ps-colheita de Frutas e
Hortalias: Fisiologia e Manuseio. 2 ed. UFLA, Lavras. 2005.

202

CONEGLIAN, I.R.M. Morfologia e ontognese do pericarpo e semente

de Eugenia punicifolia (H.B. & K.) DC, Myrcia bella Camb. e
Campomanesia pubescens (DC) Berg (Myrtaceae). Dissertao
(Mestrado). Universidade Estadual de Campinas. 2007.
COOMBE, B.G. The development of fleshy fruits. Annual Review of
Plant Physiology, v. 27, p. 507-528. Palo Alto. 1976.
FRANZON, R.C., RASEIRA, M.C.B., WAGNER JUNIOR, A.
Germinao in vitro de plen de guabirobeira (Campomanesia
xanthocarpa Berg.). Revista Ceres 53, n.305. 2006.
FRANZON, C.R. Propagao vegetativa e modo de reproduo da
pitangueira (Eugenia uniflora L.). Tese (Doutorado em Cincias).
Universidade Federal de Pelotas. Pelotas, RS. 2008.
GONZLEZ, D.V.; HERNNDEZ, M.S.; HERRERA, A.;
BARRRERA, J.A.; MARTINEZ, O.W.; PAEZ, D. Desarrollo del fruto
e indices de cosecha de la carambola (Averrhoa carambola L.)
producida en el Piedemonte Amazonico Colombiano. Revista
Iberoamericana de Tecnologa Postcosecha, v.3, n.2, p.144-154.
Cidade do Mxico. 2001.
GORTNER, W.A.; DULL, G.G., KRAUSS, B. H. Fruit development,
maturation, ripening, and senescence: A biochemical basis for
horticultural terminology. HortScience, v. 2, n. 4, p. 141-144.
Alexandria. 1967.
HORRIDGE, G.A. & TAMM, S.L. Critical point drying for scanning
electron microscopy study of ciliary motion. Science 163: 817-818.
1969
HULME, A.C. The Biochemistry of fruits and their Products.
London: Academic Press, 618p. 1970.
JUDD, W.S.; CAMPBELL, C.S.; KELLOGG, E.A.; STEVENS, P.F.
Plant systematics: a phylogenetic approach. Massachusetts: Sinauer
Associates Inc. Publishers, 1999.
LABOURIAU, L.G. A germinao das sementes. Instituto
Venezoelano de Investigaciones Cientficas, Washington. 1983.

203

LANDRUM, L.R.; KAWASAKI, M.L. The genera of Myrtaceae in

Brazil: an illustrated synoptic treatment and identification keys.
Brittonia, v.49, p.508-536, 1997.
LANDRUM, L.R. The development of the fruits and seeds of
Campomanesia (Myrtaceae). Brittonia, v.34, p.220-224, 1982.
LANDRUM, L.R. Campomanesia, Pimenta, Blepharocalyx, Legrandia,
Acca, Myrrhinium, and Luma (Myrtaceae). Flora Neotropica. Monogr.
45. New York Botanical Garden, New York. 1986.
LANDRUM, L. R. & STEVENSON, D. Variability of embryos in
subtribe Myrtinae (Myrtaceae). Systematic Botany 11:155-162. 1986.
MCVAUGH, R. The genera of american Myrtaceae an interim report.
Taxon, v.17, p.354-418, 1968.
MARIATH, J. E. A.; SANTOS, R. P.; BITTENCOURT JR. N. S. Flor.
In. Anatomia vegetal. Ed. APEZZATO-DA-GLORIA, B.;
CARMELLO-GUERREIRO, S. M.; Viosa, UFV, 437p. 2006.
MARTINS, L.P., SILVA, S de M., ALVES, R.E., FILGUEIRAS,
H.A.C. Desenvolvimento de frutos de cirigueleira (Spondias purprea
L.). Revista Brasileira de Fruticultura, v.25, n.1, Jaboticabal/SP.
2003.
MAUSETH, J.D. Plant anatomy. The Benjamin/Cummings Publishing
Company, Inc. California. 1988.
MCDOWELL, E.M. & TRUMP, B. Histological fixatives for diagnostic
light and electron microscopy. Archives of Pathology & Laboratory
Medicine 100: 405-414. 1976.
NIC LUGHADHA, E.N. & PROENA, C. A survey of the reproductive
biology of the Myrtoideae (Myrtaceae). Annals of the Missouri
Botanical Garden 83:480-503. 1996.
NITSCH, J.P. The physiology of fruit growth. Ann. Review of Plant
Physiology, v.4, p. 199-236. 1953.

204

OBRIEN, T.P.; FEDER, N. & MCCULLY, M.E. Polychromatic

staining of plant cell walls by toluidine blue O. Protoplasma 59: 368373. 1964.
OLIVEIRA, D.M.T. Morfologia e desenvolvimento dos frutos,
sementes e plntulas de Inga fagifolia Willd. e Inga uruguensis Hook.
ET Arn. (Fabaceae, Mimosoideae). Tese (doutorado), Universidade
Estadual Paulista, Rio Claro. 1991.
PAOLI, A.A.S. Semente. In: Anatomia do fruto e da semente.
SOUZA, L.A de (Org.) Ed. UEPG, Ponta Grossa/PR. P.200. 2006.
PESCADOR, R., KERBAUY, G.B., STRASSBURG, R.C., KRAUS,
J.E. Structural aspects of the zygotic embryogenesis of Acca sellowiana
(O. Berg) Burret (Myrtaceae). Acta Botanica Brasilica, 23 (1), p. 1360144. 2009.
ROTH, I. Fruits of Angiosperms. Gebruder Borntraeger, Berlim. 1977.
ROTMAN, A.D. 1976. Revisin del gnero Campomanesia en la
Argentina (Myrtaceae). Darwiniana 20:327-340.
SALOMO, L.C.C., SIQUEIRA, D.L.de, PEREIRA, M.E.C.
Desenvolvimento do fruto da lichieira (Litch chinensis Sonn.). Revista
Brasileira de Fruticultura, vol. 28, n.1, Jaboticabal/SP. 2006.
SANCHOTENE, M.C.C. Frutferas nativas teis fauna na
arborizao urbana . 2. ed. Porto Alegre: SAGRA, 1989.
SANTOS, C.M.R., FERREIRA, A.G., QUILA, E.A. Caractersticas de
frutos e germinao de sementes de seis espcies de Myrtaceae nativas
do Rio Grande do Sul. Cincia Florestal, v.14, n2. P.13-20. 2004.
SANTOS, M. da S.; CARNEIRO, P.I.B.; WOSIACKI, G.;
PETKOWICZ, C.L.de O.; CARNEIRO, E.B.B. Caracterizao fsicoqumica, extrao e anlise de pectinas de frutos de Campomanesia
xanthocarpa B. (Gabiroba). Semina: Cincias Agrrias, vol30, n1.
Londrina. PR. 2009.

205

SOUZA, L. A. Anatomia do desenvolvimento do pericarpo de

Lonchocarpus muehlbergianus. Hassler (Leguminosae Faboideae).
Revista Unimar, v.6, n.1, p.5-19, 1984.
SOUZA, L. A. Morfo-anatomia do desenvolvimento do fruto de Acacia
paniculata Willd, (Leguminosae). Arquivos de Biologia e Tecnologia,
v.36, n.4, p. 851-871. 1993.
SOUZA, L. A. de Morfologia e anatomia vegetal: clula, tecidos,
rgos e plntula. Ed. UEPG. Ponta Grossa PR. 2003.
SOUZA, L. A. Anatomia do fruto e da semente. Ed. UEPG. Ponta
Grossa PR. 2006.
SOUZA, L. A. Sementes e plntulas: germinao, estrutura e
adaptao. Ed. TODAPALAVRA. Ponta Grossa PR. 2009.
TOBE, H.; RAVEN, P.H. An embryological analysis of Myrtales: its
definition and characteristics. Annals of Missouri Botanical Garden,
v.70, p.71-94, 1983.
VALLILO, M.I.; MORENO, P.R.H.; OLIVEIRA, E. de; LAMARDO,
L.C.A.; GARBELOTTI, M.L. Composio qumica dos frutos de
Campomanesia xanthocarpa Berg Myrtaceae. Cincia Tecnologia
Alimentos, v. 28. Sppl.0. Campinas. SP. 2008.
VON TEICHMAN, I. & VAN WYK, A.E. 1991. Trends in the
evolution of dicotydelonous seeds based on character associations, with
special reference to pachychalazy and recalcitrance. Botanical Journal
of the Linnean Society 105:211-237.
WARRINGTON, L.J.; FULTON, T.A.; HALLIGAN, E.A. SILVA,
H.N. Apple fruit growth and maturity are affected by early season
temperatures. Journal American Society Horticultural Science,
Alexandria, v.124, n.5, p. 468-477, 1999.
WERKER, E. Seed anatomy. Berlim, Gerbrder Borntraeger. 1997.
YEUNG, E.C., MEINKE, D.W. Embryogenesis in angiosperms:
development of the suspensor. The Plant Cell, v.5, p. 1371-1381. 1993.

206

ZHANG, D.P. The relationship between structures of fruit stalks and

fruit dropping in litchi. Acta Horticulturae Sinica, v.24, n.2, p.105-10.
Beijing. 1997.