Biochimica et Biophysica Acta 1822 (2012) 1896-1912

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Biochimica et Biophysica Acta

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Review

Molecular control of oogenesis^

Flor Snchez , Johan Smitz
Follicle Biology Laboratory, Vrije Universiteit Brussel,
Laarbeeklaan 101, 1090 Brussels, Belgium
A R T I C L E

I N F O

R E S U M E N

Article history:

Ovognesis es un proceso complejo regulado por un gran nmero de factores intra y extra-ovario. Oogonias, que se

revised form 8 May 2012 Accepted 13

en la etapa de la profase de la primera divisin meitica hasta que estn completamente desarrollados. Dentro de ovocitos

Received 17 January 2012 Received in

May 2012 Available online 24 May 2012

originan a partir de clulas germinales primordiales, proliferan por mitosis y forman ovocitos primarios que la detencin
primarios, la sntesis y la acumulacin de ARN y protenas a lo largo de la ovognesis son esenciales para el crecimiento y
la maduracin de los ovocitos; y por otra parte, que es crucial para el desarrollo en un embrin viable despus de la

Keywords:

Oocyte development
Folliculogenesis Gene
expression Oocyte

fecundacin. Meitica de ovocitos y competencia de desarrollo que se gana en una manera gradual y secuencial durante
la foliculognesis y se relaciona con el hecho de que el ovocito crece en interaccin con sus clulas somticas de
compaa. La comunicacin entre el ovocito y sus clulas de la granulosa de los alrededores es de vital importancia, tanto
para el desarrollo de los ovocitos y clulas de la granulosa diferenciacin. Los ovocitos dependen de clulas del cumulus

maturation Cumulus-oocyte

diferenciadas, que les proporcionan nutrientes y seales reguladoras necesarias para promover nuclear de ovocitos y la

complex

maduracin citoplasmtica y en consecuencia la adquisicin de propsito competence.The desarrollo de este artculo es

resumir los conocimientos recientes sobre los aspectos moleculares de la ovognesis y ovocitos estera uration, y el papel
crucial de las interacciones clula-cumulus, destacando la valiosa contribucin de las evidencias experimentales
obtenidos en modelos animales. Este artculo es parte de un nmero especial titulado: Gentica Molecular de la
insuficiencia reproductiva humana.
2012 Elsevier B.V. All rights reserved.

1. Introduccin
En la ltima dcada, se ha hecho un progreso sustancial en la eluci-dacin de
los factores que regulan los ovocitos y el folculo crecimiento y development, as
como la maduracin de ovocitos, a travs del estudio de las funciones
fundamentales de un gran nmero de protenas expresadas a lo largo de la
ovognesis , en particular durante las primeras etapas de la foliculognesis. Esto
se ha logrado principalmente mediante la evaluacin de la falta de sus productos
gnicos ya sea mediante el uso de enfoques knockout y / o delecin dirigida.
La aplicacin de tcnicas de biologa molecular para el quantification de la
expresin gnica, mediante el uso de anlisis de microarrays y en tiempo real
PCR tecnologas ha proporcionado nuevos conocimientos sobre la regulacin de
los ARNm de manera dependiente de la etapa durante la foliculognesis, tanto en
ovocitos y clulas del cmulo. Del mismo modo, los enfoques protemicos y una
reciente nueva perfiles de todo el genoma de mRNA materna en asociacin con la
polisomas, han permitido identificar proteins recin traducidos durante la
maduracin de ovocitos, en una etapa en la transcripcin ya ha cesado.

En este sentido, se ha hecho un gran progreso en los aspectos bsicos de la

investigacin de los ovocitos en el nivel molecular. El descubrimiento de muchos
molecular
procesos / vas involucradas en toda la ovognesis y la ovulacin, y la
identificacin de posibles marcadores de la calidad de los ovocitos se han logrado
en los ltimos aos.
El uso de enfoques in vitro en animales grandes, pero principalmente en el
modelo de ratn, se ha convertido tambin relevante en la prestacin de
information valioso que no se podra obtener en humanos por razones ticas.
Haciendo uso de tcnicas de biologa molecular junto con los sistemas de cultivo
in vitro de folculos preantrales y / o la maduracin de ovocitos in vitro, por
ejemplo, ha permitido el estudio de la influencia de una serie de factores (tales
como hormonas, protenas recombinantes, y / o crecimiento en fac tors) en el
desarrollo del folculo, la supervivencia, la produccin de esteroides, el
crecimiento y la maduracin de ovocitos, y el potencial de desarrollo. Adems, el
cultivo de clulas granulosa y el ovocito co-cultivo con clulas de la granulosa se

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han convertido en modelos aceptados para estudiar la interaccin

entre los ovocitos y sus clulas somticas que rodean y para
proporcionar un enfoque en el potencial de los oocitos para
regular una variedad de funciones de clulas de la granulosa.
Se ha producido un aumento exponencial de los
conocimientos en el campo de la biologa de los ovocitos; los
resultados de varios estudios entregados contribuyen massively
a la comprensin de la base molecular de la adquisicin de
meitica del ovocito y competencia de desarrollo. La presente
revisin tiene la ambicin de proporcionar informacin sobre los
ltimos avances en el campo, haciendo hincapi en los factores
clave que intervienen en el regulation de ovognesis y la
maduracin de ovocitos. Un enfoque particular que se provided
sobre el papel crucial de las clulas interacciones ovocito cumulus
ovocito y el control de la funcin de las clulas de la granulosa en
diferentes etapas de desarrollo follicle y maduracin.

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1898

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1. Las primeras etapas de la ovognesis y foliculognesis

1.1. Las clulas germinales primordiales y la formacin del
folculo
Los ovocitos se originan a partir de clulas germinales
primordiales (PGC). Ratn PGC se originan ya a los 7,5 das de
desarrollo embrionario (E7.5) en el mesodermo embrionario extra
y su desarrollo depende inicialmente en seales derivadas tanto
del ectodermo extraembrionario y endodermo visceral. Los
miembros de la familia TGF (3 como las protenas morfogenticas
seas (BMP), BMP4, BMP8B (origen ectodermo) y BMP2 (origen
endodermo) son factores especficos necesarios para la formacin
de PGC y la regulacin de la expresin gnica [1-3] (Fig. 1 ).
PGCs migran a la cresta genital en alrededor de E10.5 en el
ratn, donde proliferan por mitosis y dan lugar a oogonios.
Migracin, proliferacin y colonizacin de PGCs a las gnadas en
desarrollo estn controlados por muchos factores y dependen as
como en la interaccin de PGCs y sus clulas somticas
circundantes. En estudios in vitro han demostrado que BMP2 y
BMP4 aumentan el nmero de PGCs de ratn en cultivo [4,5],
mientras que knockouts ratn BMP7 muestran una reduccin en
el nmero de clulas germinales alrededor de este perodo [6].
Activina Tambin se ha demostrado que aumenta el nmero de
PGCs en humanos [7], aunque la activina inhibe la proliferacin de
PGC en ratn [8]. El papel de los factores de transcripcin
derivados de clulas germinales en esta etapa tambin se ha
demostrado mediante el uso de enfoques knockout y deleciones
condicionales en ratones. Estos incluyen factores tales como
BL1MP1 y PRDM14, que son crticos para la proliferacin y
migracin PGC [9-11], as como OCT4, NANOG [11-13], que son
esenciales para la supervivencia PGC. Parecen ser necesarios
varios factores para la supervivencia PGC, como F1Ga (factor en la
lnea germinal alfa), un factor responsable de la expresin
temprana de las glicoprotenas que formar la zona pelcida [14],
NANOS3 (nanos homlogo 3; Drosophila) y DND1 (homlogo de
punto muerto 1), dos RNA protenas que protegen PGCs de
someterse a apoptosis, as como la va de ligando K1T / K1T
(K1TL) de unin. Las mutaciones en cualquiera de los genes que
codifican para estos factores conducen a una deficiencia en la
formacin de folculos primordiales debido a un agotamiento de
las clulas germinales [12-17].
En todo el perodo de migracin de PGC en las crestas
genitales (E10.5) la determinacin del sexo comienza.
Diferenciacin en los ovarios parece ser el
va predeterminada, ya que el XY crestas genitales se
diferencian en los testculos bajo la influencia de la Sry gen Y
ligado a. Las gnadas XX no tienen SRY, y por lo tanto se
convierten en ovarios [18]. Tan pronto como se forman las CGP, la
gnada inicialmente bipotencial continuar su diferenciacin
principalmente bajo la influencia de factores de transcripcin
somtica celular derivada GATA4, FOXL2, Lhx9, WT1, WNT4, y
SF1 [19-22] (Fig. 1).
Despus de la colonizacin de la gnada (~ E13.5), CGP sern
sometidos a una fase de proliferacin mittica con una citocinesis
incompleta, lo que lleva a la formacin de 'quistes de clulas
germinales "o" nidos de clulas germinales "[23]. A raz de este
evento y antes de la formacin del folculo divisiones mitticas

detienen y clulas germinales iniciar la meiosis, se convierten en

ovocitos primarios y comprometerse con el programa femenino de
desarrollo [24].
Meiosis iniciar con una etapa profase, una fase compleja que
se subdivide en cinco etapas: leptotene, zygotene, pachytene,
diplotene y diacinesis. En el primer perodo de la profase, una
serie de acontecimientos cruciales ocurren, que involucra el
apareamiento de cromosomas homlogos, synapsis (estrecha
asociacin entre estos cromosomas) y recombination o 'cruzar'
(intercambio de material gentico). Posteriormente, los ovocitos
avanzan a la etapa diplotene donde entran en una fase de reposo
prolonged llamada dictyate [25]. En ovarios de ratn
embrionarias, la iniciacin del programa meitica es dependiente
sobre el cido retinoico y Stra8 (gen estimulado por el cido
retinoico 8) de sealizacin. Stra8 es un factor cytoplasmic
expresado por las clulas germinales femeninas justo antes de
entrar la prophase de primera divisin meitica [26], y en
respuesta al cido retinoico (RA) [27-29]. En las hembras se
requiere para la replicacin del ADN Stra8 premeiotic as como
para los eventos meiticos profase (es decir, la condensacin de
cromosomas, cohesion, sinapsis y recombinacin) [30].
Fig. 1. figura representativa de los factores implicados en
clulas germinales primordiales (PGC) la formacin, la ovognesis
y foliculognesis. Factores ovricos producidas por las clulas de
la teca / del estroma (en azul), las clulas somticas / granulosa
(en morado), clulas germinales (en rojo) o tanto en clulas de
clulas germinales y granulosa (verde), participan y regulan los
ovocitos y el folculo desarrollo en cada uno de las etapas
definidas a lo largo de la foliculognesis. Los factores de
transcripcin implicados se indican con una estrella (*). Las
protenas del ectodermo embrionario extra que participan en
formation PGC se indican en negro.
Los ovocitos se mantienen en la fase de la meiosis 1 dictyate
toda oogenesis, hasta LH induce la maduracin de ovocitos final
(en la mayora de los mamferos). Prophase eventos son de vital
importancia para la supervivencia de las clulas germinales y la
progresin meitica, y los errores que ocurren a lo largo de esta
etapa, as como durante las fases de consecutive de la meiosis,
puede originar y / o contribuir a aneuploidas meiticas
femeninos. 1ndeed, disruptores endocrinos, como el bisfenol A
(BPA), han demostrado que causa alteraciones en la formacin del
huso, para interferir con la polimerizacin de microtbulos e
inducir husos multipolares en ovocitos de ratn. Exposicin en el
tero 1n a BPA parece interferir con el control de la
recombinacin en fetales profase 1 ovocitos y el aumento

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los riesgos de errores en la segregacin cromosmica en ovocitos

de la reanudacin de la estera-racin en hembras adultas [31]. Por
otra parte, en los ovocitos folculo-cerrado, acondicionado continua
exposicin a niveles altos (30 pM) de BPA durante vitro el desarrollo
folicular en conduce a un arresto meitico aumento en la etapa GV y
un increase en la meiosis I aberrante (la mayora de ellas con no
alineados chromosomes) y la meiosis II husillos [32]. Por lo tanto, las
dosis bajas de exposicin al BPA ha sugerido que sea nocivo para los
seres humanos mediante el aumento de los ovocitos ploida aneu- [33].
-Detallada toda la informacin sobre la meiosis y el origen de
aneuploidas meiticas se revisan en el prximo captulo de la edicin
especial sobre "Gentica Molecular de la insuficiencia reproductiva
humana": Molecular Origen de Mujeres meiticos aneuploidas:
factores que determinan el riesgo de aneuploida, cul es la efecto, lo
que es especfico acerca humano.
Alrededor del momento de la detencin meitica, avera nidos de
clulas germinales para iniciar la formacin del folculo. Los ovocitos
se vuelven rodeados por clulas somticas (pre-granulosa) y forman
folculos primordiales. La formacin del folculo se produce antes del
nacimiento en humanos (durante el segundo trimestre del
development fetal) e inmediatamente despus de su nacimiento en el
ratn [23].
Los procesos de mantenimiento quiste clulas germinales y la
descomposicin no se entienden completamente (ver para su revisin,
[34,35]). Los estudios en roedores sealan a un papel de los estrgenos
en el mantenimiento de los nidos de clulas germinales [36-38]. Por
otra parte, el trabajo realizado por Jefferson et al. [39] suggests que
los estrgenos mantener nidos de clulas germinales a travs de la
receptor de estrgeno (ER) -p, desde ER- (3 ratones knockout
expuestos a una genistena (un compuesto estrognico) no forman
folculos multi-ovocito (MOF) , mientras que ER-un nocaut o ratones
de tipo salvaje hacer. MOF son folculos con-que contiene dos o ms
ovocitos sin membrane stano de separacin. Durante desglose nido,
la formacin de MOF parece ocurrir como resultado de una ruptura
incompleta [35 ]. Adems de los esteroides, los miembros de la beta del
factor de crecimiento transformante (TGF-p) superfamilia (como GDF9
y BMP15) y otras protenas tales como FOXL2 y Nobox tambin
parecen estar involucrados en este proceso. La falta de estos genes o
una expresin reducida y la funcin de los productos de los genes
afectan el momento de la ruptura nido y perjudica este proceso [40 a
44]. A pesar de que este modelo se puede aplicar en los roedores,
todava no est claro qu seales desglose anidan en-duce clulas
germinales en los humanos, aunque los esteroides tambin parecen
jugar un papel.
A lo largo de germen de ruptura del quiste celular, un nmero
sustancial de oocytes se pierden. Muchos ovocitos que no estn
rodeados por clulas somticas sufren apoptosis [45]. La apoptosis es
un proceso crucial, primero determining la piscina de folculos
primordiales, y ms tarde jugar un papel en la atresia folicular.
Muchas protenas pro-y anti-apoptticos han sido demonstrated para
regular la muerte de clulas germinales. Por ejemplo, en ausencia de
BCL2, un miembro anti-apopttica de la clula B linfoma / leucemia
(BCL) de la familia de protenas, un nmero reducido de ovocitos y
follicles primordiales pero un nmero normal de folculos primarios
han sido reportados en un temprano la edad (6 semanas), lo que
sugiere que BCL2 puede tener un impacto sobre la supervivencia del
folculo durante el establecimiento de PGC y / o la formacin del

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folculo primordial. Un papel similar ha sido sugerido para BclX

[46,47]. Por el contrario, la protena BAX pro-apoptticos, tambin
miembro de la familia BCL, promueve la muerte celular. La prdida de
Bax muestra un aumento del nmero de clulas germinales en E13.5;
y a pesar de algunas results contradictorios, se ha informado de que
la prdida de Bax o la prdida de su regulador Ahr (receptor de aril
hidrocarburos), resulta en un aumento en el nmero de folculos
primordial como se observa a las 6 semanas y 4 das postnatal,
respectivamente [ 48-50].
Del mismo modo, la participacin de otras vas, tales como la va
activada por caspasas, tambin conduce a la apoptosis. Se ha
demonstrated que en ausencia de caspasa 2 (CASP2), un aumento
del nmero de folculos primordiales se puede encontrar [51].
1.1. La activacin de los folculos primordiales
Folculos primordiales constituyen el depsito total de clulas
germinales available durante todo el perodo de la vida reproductiva
femenina. Ellos se activan y se reclutan de forma continua en las
cohortes de iniciar la foliculognesis, un proceso que toma alrededor
de dos semanas en ratones y casi seis meses en los seres humanos. La
activacin del folculo primordial es un proceso muy dynamic y
estrictamente controlada, ya pesar de la enorme progress que se ha
hecho, muchos mecanismos moleculares son todava no se entiende
completamente. La va de sealizacin PTEN / P13K, conocido por ser
involved en una serie diferente de procesos celulares tales como
regulacin de la proliferacin celular y la apoptosis [52] es una va
fundamental requerido para activation de folculos primordiales. A
P13K funcional (fosfatidilinositol 3 quinasa) va de sealizacin est
presente en ovocitos de folculos primordiales y primarios [53]. La
activacin de la va P13K conduce a la activacin de AKT su
componente, una protena serina / treonina quinasa que aumenta la
proliferacin celular y la supervivencia, mientras que PTEN (fosfatasa
y homlogo de tensina suprimido en el cromosoma 10) es un regulador
negativo de P13K [52] (Fig. 2).
La ausencia de PTEN en oocitos conduce a un aumento de la
actividad P13K y, como resultado, un aumento de la fosforilacin de
AKT y FOXO3a (caja forkhead O3), otro componente de la va P13K
[54]. FOXO3 es un factor de transcripcin que conduce a la detencin
del ciclo celular y la apoptosis (Fig. 2). Mientras que la fosforilacin
activa AKT, que suprime la accin FOXO3. FOXO3 se expresa en
ovocitos de ratn y est implicado en la represin de la activacin
folculo primordial, probablemente por inhibicin de la transcripcin
de genes esenciales durante la ovognesis y foliculognesis. Los
ratones que carecen FOXO3 muestran activacin prematura de los
folculos primordial y un agotamiento adicional de folculos a las 18
semanas [55,56] postnatally. Similar al fenotipo de FOXO3 ovarios
mutante nulo, la falta de PTEN da como resultado un agotamiento de
la piscina folculo primordial [54].
La manipulacin de la va de PTEN / P13K, mediante tratamiento
in vitro de ovarios de ratn y el tejido cortical de ovario humano con
un inhibidor de PTEN y un activador P13K, ha permitido a la
induccin de activation folculo primordial in vitro, la generacin de
folculos preovulatorios que contienen vulos maduros, despus del
trasplante del tejido de ovario [57].
Detencin de folculos primordiales, por otra parte, depende de la
existence de otra va de sealizacin que implica el supresor de tumor

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Growth factors. Kit-ligand

Fig. 2. Representacin esquemtica de la participacin ofPI3K / PTEN y pathways TSC / mTOR en la activacin del folculo primordial y arresto. La activacin de la va P13K (es decir, por
factores de crecimiento o Kit-ligando) conduce a la fosforilacin y la activacin de AKT, que a su vez fosforilan FOXO3. FOXO3 es un factor de transcripcin que induce la expresin de
genes detencin del ciclo celular. Cuando FOXO3 se fosforila y se transloca desde el ncleo hasta el citoplasma, se convierte en inactivada, por lo tanto permitiendo development folculo
para el progreso. PTEN es un regulador negativo de la va P13K. Adems 1N, a travs de la va de AKT, TSC, un regulador negativo de mTOR, se convierte en fosforilada y inactivado. Como
resultado, va mTOR se activa conduce a seales que regulate la traduccin de protenas y el desarrollo del folculo para el progreso.

La esclerosis tuberosa compleja 1 (TSC1) y el blanco de los mamferos

de la rapamicina complejo 1 (mTORCl). En un modelo de ratn, Tsc1 se ha
demostrado que regulan negativamente mTORCl y mantiene la
quiescencia de los folculos primordial (Fig. 2). -Mutacin nula en oocitos
conduce a una activacin prematura de los folculos primordiales y al
agotamiento folicular, y los resultados en la insuficiencia ovrica
prematura (POF) [58]. Por lo tanto, las acciones sinrgicas mediated por
el TSC / mTORCl y PTEN / P13K vas de sealizacin son fundamentales
en la regulacin del descanso y la activacin de la piscina folculo
primordial.
La interaccin de ligando KIT y su receptor KIT, expresada temprano
por las clulas somticas y de los ovocitos, respectivamente, tambin est
involucrado en los eventos clave que controlan la iniciacin del
crecimiento folicular mediante la promocin de reclutamiento de clulas
de la teca, la proliferacin de clulas de la granulosa y estimular el
crecimiento oocyte [59] . Los estudios in vitro han demostrado que el
tratamiento con ligando KIT regula el / Akt P13K en oocitos, mediante la
activacin de AKT y la represin de la transcripcin factor de FOXO3,
como resultado de una fosforilacin increased de ambos componentes
[53].
Otros factores de crecimiento importantes, tales como las
neurotrofinas (que desempean principalmente un papel como parte del
sistema nervioso); Tambin se ha demostrado para regular la
foliculognesis temprana. Por ejemplo, factor de crecimiento nervioso
(NGF) se expresa tanto en las clulas somticas y de los ovocitos incluso
antes de follicle formacin y parece jugar un papel en la activacin del
folculo primordial [60,61]. Ovarios de ratones de siete das de edad que
carecen de NGF muestran un proliferation disminucin de las clulas
somticas y contienen pocos folculos primarios, lo que sugiere que se
requiere la sealizacin de NGF para esta transicin [62].
Expresin clulas de la granulosa de anti-Mullerian hormonal (AMH),
un miembro de la TGF (3 superfamilia, se requiere para mantener un
equilibrio entre el nmero de folculos primordiales ser activados y los que
permanecen estancia en la piscina de reposo. Como se ha demostrado en
ratones nulos mutante para el gen Amh, la ausencia de AMH condujo a
un aumento de la contratacin de los folculos primordiales y un rpido
agotamiento de la reserva de folculos en reposo. Ms folculos antrales
preantral y pequeas fueron observed en el golpe de gracia en
comparacin con el tipo salvaje [63, 64]. Por lo tanto, al menos en el ratn,
AMH inhibe el reclutamiento de folculos primordiales en la creciente
piscina [65,66]. Sin embargo, un efecto positivo en la iniciacin de
crecimiento del folculo primordial por tratamiento con AMH se ha

informado en el modelo humano [ 67], lo que implica que se necesitan

ms estudios para comprender este proceso en los grandes mamferos.
Folculos primordiales darn lugar a folculos primarios en el que las
clulas de la granulosa aplanadas se convertirn en clulas de la
granulosa cuboidal de una sola capa (Fig. 1). La expresin temprana de
otros dos factores transcription de origen ovocito, Sohlhl y Nobox, es
decisiva para la progresin de folculos primordiales a la siguiente etapa
folicular primaria. En los ovarios que carecen Nobox (Nobox ovognesis
homeobox) la mayora de los folculos estn detenidos en la etapa
primordial, los ovocitos se degeneran y no desarrollan ms all cbicas
folculos pri-maria de una sola capa [43]. Una deficiencia en la expresin
Nobox conduce a abajo regulacin de muchas transcripciones ovocitos
importantes con papeles en etapas different de crecimiento tales como
Mos, Oct4, Rfpl4, Fgf8, Zarl, Dnmtlo, Gdf9, Bmp15 y Hloo, lo que indica el
papel esencial de Nobox como un regulator de ovocitos y el desarrollo
folicular. Del mismo modo, en ratones mutantes nulos para la
espermatognesis y la ovognesis factor bsico transcription hlicebucle-hlice (Sohlhl - / -), la progresin a la etapa primaria se interrumpe
y el crecimiento del folculo es detenido en la etapa de folculo primordial
[68]. Por otra parte, una deficiencia de este factor conduce a la regulacin
a la baja de Nobox y, en consecuencia, a la baja regulacin de muchos
genes regulados por este ltimo. Esto pone de relieve el papel potencial de
ambos Sohlhl y Nobox como reguladores maestros clave de ovognesis
temprana y la foliculognesis.
Theca / factores estroma derivados, los miembros de la TGF (3 superfamilia, tambin determinar la progresin folculo primordial. 1n
exposicin in vitro de ovarios de ratas neonatales de BMP4 aument la
proporcin de developing folculos primarios y redujo el nmero de
folculos primordiales en reposo [69]. Del mismo modo, un aumento en el
nmero de folculos preantrales y antral se obtuvo despus de la
inyeccin de BMP7 recombinante en rata bursa de ovario [70].
1.1. La progresin de la primaria a la fase folicular secundaria
Los primeros folculos preantrales son independientes de FSH para su
crecimiento inicial, como se evidencia por el hecho de que el desarrollo de
la etapa primaria y secundaria puede tener lugar en ausencia de
hormonas [71], aunque folculo estimulantes receptores de hormonas
(FSHR) estn presentes en la granulosa clulas (GC) de estos primeros
folculos, tanto en ratn y humanos [72,73]. Primaria a la transicin
folculo secundario es ms bien impulsado por factores paracrinos
intraovricos locales producidos por los oocitos, sus clulas de la
granulosa de compaa y clulas de la teca [74] (Fig. 1).

Dos miembros muy conocidos de la TGF (3 superfamilia, GDF9 y

BMP15, tienen un papel que se inicia durante las primeras etapas y
contina a lo largo de la foliculognesis y la ovulacin. Ovarios femeninos
ratones que carecen Gfd9 son capaces de formar folculos primordiales,
pero no progresan be all de la etapa de folculo primario; como
consecuencia, estos ratones no son frtiles Concordantemente, la
exposicin in vitro de tejido ovrico para GDF9 supports un papel de
GDF9 en la promocin del desarrollo del folculo ms all de la etapa
primaria [75,76] Resulta interesante.. , GDF9 ovarios ratones knockout
desarrollan clulas de la granulosa anormales con un aumento de la
expresin de KitL y no adquieren clulas de la teca [77-79]. Esto
demuestra un papel de GDF9 en la regulacin de la funcin de las clulas
pre-granulosa desde etapas muy tempranas onwards [ 79]. BMP15 juega
un papel en la estimulacin de la proliferacin de las clulas de la
granulosa no diferenciadas de una manera-FSH independiente [80]. Sin
embargo, a diferencia de GDF9, ratones hembras mutantes nulos que
carecen del gen de exposiciones Bmp15 nicos problemas de fertilidad
menores [81].

Anlisis de la expresin gnica in vivo en el crecimiento de los oocitos

en el ratn ha demostrado que durante la transicin de la primordial a la
fase folicular secundaria, el perfil de expresin de algunos genes oognesis
no se alter despus de gonadotropina tratamiento. Sin embargo, la
diferencia de regulation de la expresin de genes entre las condiciones de
gonadotropina inducida y naturales se mostr desde el preantral a la
etapa antral [89]. Adems, los estudios in vitro han mostrado que los
folculos preantrales cultivadas responden a las gonadotropinas [90], y la
exposicin de los folculos preantrales primeras a la FSH es favorable para
la supervivencia del folculo y necesario para la formacin antro in vitro
que se produzca [91-95].

La progresin del desarrollo folicular temprana tambin requiere la

protena expression y accin ofTATA vinculante 2 (Tbp2), un factor de
transcripcin-ovocito especfico expresado a lo largo de la foliculognesis.
Ovarios Ratones deficient en Tbp2 tener un nmero reducido de folculos
secundarios y, adems, tienen una expresin alterada de transcripts
ovocitos especficos involucrados en la foliculognesis temprana; niveles de
Gfd9, Bmp15 y ZP3 son las reguladas, mientras que los niveles de Oct4 y
Nobox fueron arriba regulados [82]. Por lo tanto, un papel potencial
ofTBP2 en la regulacin del control transcriptional de ovognesis ratn
ha sugerido.

Clulas de la granulosa dentro de los folculos preantrales proliferan a

una velocidad muy alta, dando lugar a un folculo preantral multi-capa,
un aumento de tamao follicular, seguido por la aparicin de una
cavidad antral (Fig. 1).

TAF4b, tambin conocida como protena de unin caja TATA (TBP)

factor de -Associated es otro factor de transcripcin expresado
preferencialmente en clulas germinales, pero tambin se encuentra para
estar presente en clulas de la granulosa. Anlisis de TAF4b nulos ovarios
ratones hembras mutantes han revelado un papel importante de TAF4b,
primero en la foliculognesis temprana, documentado por un nmero
reducido de folculos primordiales y en crecimiento y la supervivencia
celular por comprometida granulosa [83,84]. Curiosamente, TAF4b
ratones hembra nulos han elevated niveles de FSH, lo que sugiere que
sus folculos en crecimiento son resistentes a la proliferacin de las
clulas de la granulosa inducida por FSH [83,84]. Esta deficiencia podra
estar asociado con una interrupcin de la va AKT / FOXO tambin
observado en nulos mutante ovarios [85]. En una etapa posterior del
desarrollo, ovocito reanudacin meitica se deteriora y existe un bloqueo
alrededor de la etapa de dos clulas de desarrollo temprano del embrin
[83].
La expresin de los genes de efectos maternos (es decir, Mater, Zarl,
NPM2), esencial para la embriognesis temprana para proceder
adecuadamente tambin se inicia en la etapa de folculo primario y
contina hasta las etapas antrales [86-88].
1.2. La progresin a lo largo de las etapas preantral y para la etapa
antral temprana
El desarrollo folicular largo de las etapas muy tempranas ha sido
considerado como independiente de gonadotropina y, esencialmente
impulsado por factores secretados localmente. Cuando los folculos
alcanzan las etapas preantral, development largo de este perodo y la
progresin a la etapa antral temprano todava dependen principalmente de
factores intraovricos; Sin embargo, a diferencia de en las etapas
anteriores, los folculos expresan receptores de FSH y LH funcionales y
son capaces de responder a las gonadotropinas, como se ha demostrado
tanto in vivo como in vitro.

De hecho, los ratones deficientes en tanto FSH (FSH (3 nocaut) y

FSHR (FSHR nocaut) son infrtiles debido a un bloqueo en el desarrollo
del folculo antes del desarrollo del antro [96,97]. Sin embargo, debido a
las funciones especficas de las gonadotropinas en todo el etapa antral,
ms detalles de la respuesta y la gonadotropina modelos knockout se
explicarn en la siguiente fase folicular.

Muchos reguladores positivos durante la transicin de preantral al

desarrollo antral temprana han sido identificados, especialmente aquellos
belonging a la TGF (3 superfamilia. El GDF9 conocido y factores de
ovocitos-secretada BMP15 actan en sinergia para seguir promoviendo la
proliferacin celular granulosa . BMP15 es conocido por promover muy
potentemente mitosis en clulas de la granulosa indiferenciado de una
manera FSH-independiente mientras que al mismo tiempo que est
implicado en la granulosa FSH dependiente de cito-diferenciacin en
etapas posteriores ratones hembra mutante [80]. Bmpi5-null , sin
embargo, mostrar el desarrollo normal hasta las etapas antrales han
reducido las tasas de ovulacin y la fertilizacin y son subfrtiles [81];. En
contraste, una mutacin natural del gen Bmp15 causa una tasa de
ovulacin increased en ovejas [98] La diferente naturaleza de estas
especies (mono-ovulatoria frente a la poli-ovulatoria) puede ayudar a
explicar la observacin de diferentes fenotipos [99]. En los seres humanos
un heterocigoto hered la mutacin de este gen est relacionada con la
insuficiencia ovrica hypergonadotropic y disminucin de la proliferacin
de clulas de la granulosa [ 100]. Adems, otras mutaciones naturales del
gen BMP15 han sido identificados y podran estar asociados con failure
ovrica prematura (FOP). De hecho, una asociacin entre estas variantes y
una produccin decreased de la forma de la protena madura BMP15 ha
sugerido, concordantemente con un efecto biolgico reducido de la
protein [101]. Sin embargo, otros factores deben tenerse en cuenta, como
el origen tnico y / o algunos factores predisponentes, y por lo tanto se
necesitan ms estudios para aclarar una asociacin real con POF y el
impacto potencial de tales mutaciones en funcionalidad ovrica [102].
Comparable a la funcin de BMP15, GDF9 juega un papel crucial
como un mitgeno de clulas de la granulosa potente. GDF9 induce la
expresin de FSHR en los folculos preantral cultivadas [103]. La inyeccin
de GDF9-morfolino en oocitos de folculos preantrales cultivadas induce
apoptosis y suprimi el crecimiento del folculo preantral. Por lo tanto,
GDF9 puede al menos en parte tener un papel en el crecimiento del
folculo en la proteccin de las clulas de la granulosa de la apoptosis de
someterse a travs de la activacin de la fosfatidilinositol 3- quinasa (PI3K)
/ Akt [103].
Un papel de los andrgenos en la proliferacin de clulas de la
granulosa preantral y la supervivencia se ha indicado [104,105]. De
hecho, en el porcino, un interaction entre los factores de ovocitos
secretada y andrgenos parece existir para promover el crecimiento del
folculo [106]. Una ms clara participacin de androgens en el desarrollo

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del folculo, a travs del receptor de andrgenos (AR), ser con mayor
detalle en la revisin de la siguiente etapa de desarrollo del folculo.
Activinas y inhibinas, dos protenas estrechamente relacionadas con
roles opuestos pertenecen a la TGF (3 superfamilia y tambin influyen en
development folculo. Ambos complejos de protenas constan de dos
subunidades que originate de la misma familia de genes y protenas
relacionadas pero difieren en su composicin [107]. Adems de un
aumento de diameter folicular, y la diferenciacin de clulas de la
granulosa, el tono activina disminuye mientras que los aumentos de
expresin de inhibina. inhibina-B (a (3B) se expresa predominantly
durante las primeras etapas de la foliculognesis, un perodo de alta
proliferacin de clulas de la granulosa no diferenciadas, sin embargo,
despus de la seleccin y la diferenciacin del folculo para convertirse en
un folculo antral, inhibina-A (una (3A) resulta ser la inhibina ms
predominante [108109].
Activina-A se ha demostrado que induce la proliferacin en el in-vitro
cultured clulas de la granulosa en ratones y ratas [110-112]. Del mismo
modo, los ratones mutantes nulos para la inhibina una subunidad (Inha)
muestran una proliferacin incontrolada de clulas de la granulosa y el
desarrollo de tumores de ovario, lo que podra ser el resultado de un
fuerte incremento en la secrecin de protenas activina en estos ratones
[113].
Un papel de AMH como un regulador negativo de la seleccin del
folculo, por reducing capacidad de respuesta a la FSH folculo para
pasar a las etapas antrales, se ha sugerido [66114115].
La comunicacin entre clulas de la granulosa y entre las clulas de la
granulosa y el ovocito es crucial en todas las etapas de la foliculognesis.
El papel de las protenas de unin Gap tambin conocido como conexinas
43 y 37 (Cx43 y CX37, respectivamente), desempean un papel
importante en la maintenance de esta comunicacin. Cx43 se expresa
por las clulas de la granulosa y la obligacin de los cruces brecha formas
entre las clulas de la granulosa [116-118], mientras que CX37, expresado
en ovocitos en todas las etapas de desarrollo del folculo, es crucial para
una comunicacin brecha ocasiones ovocitos de las clulas de la
granulosa. En ratones que carecen de ovarios CX37, un arresto en la
foliculognesis se evidencia en la etapa antral temprano y ovocitos Meicompetencia tica se ve comprometida [119,120]. Los ratones deficientes
en Cx43 mueren poco despus del nacimiento [121]. Sin embargo,
estudios en los que Cx43 knockout ovarios son removidos prenatalmente

1899

y cultivadas bajo conditions in vitro o in vivo (bajo la cpsula renal de

ratones de tipo salvaje) han demostrado que la falta de Cx43 conduce a
una detencin del folculo development en la etapa primaria [116,122].
Un enfoque utilizando ovarios ratones quimricos que combina bien
CX37 o 43 ovocitos KO con clulas de la granulosa WT, y viceversa, ha
revelado los roles diferenciales importantes para conexinas 37 y 43 en
cualquiera de los tipos de clulas. Los folculos carece de Cx43 slo en el
ovocito, o CX37 slo en las clulas de la granulosa, son capaces de crecer
normalmente con ovocitos capaces de resuming meiosis y ser fertilizado.
Sin embargo, la falta de Cx43 en clulas granulosa imita la detencin
temprana en la foliculognesis observado en los ovarios Cx43 KO,
mientras que los oocitos que carecen de la expresin de CX37 tiene una
reanudacin meitica deteriorado y no son capaces de ser fertilizado,
similar a lo que se observa en CX37 ovarios KO [123,124].
Curiosamente, aunque el fenotipo observado en los ovarios que
carecen de CX37 sugiere un papel crtico y nica de CX37 en oocitos, un
modelo de ratn transgenic ha revelado que estos efectos adversos
pueden ser restored cuando los ovocitos en crecimiento que carecen de
CX37 ectpica expresan Cx43. En este modelo transgnico, la
comunicacin de las clulas de la granulosa de los ovocitos, el crecimiento
oocyte, y el potencial de los ovocitos para madurar y ser fertilizados
fueron restored [125].Antral development role of gonadotropins
Antral development starts with antrum formation (Fig. 1) and the
differentiation of granulosa cells into the cumulus and mural cell
compartments, which confers to the oocyte the competence to resume
meiosis. However, although the oocyte has become meiotically competent,
the acquisition of developmental competence will occur along these later
stages (see also Oocyte maturation).
The progression throughout the antral stages and ovulation has been
considered to be dependent on pituitary-secreted gonadotropin (FSH and
LH) support. FSH is the essential driver of in vivo antral development.
FSH induces luteinizing hormone receptor (Lhcgr) mRNA expression in
mural cells, which will be required for follicles to respond to LH, the latter
being crucial for triggering the ovulatory process.
Action of both gonadotropins in the ovary is mediated by binding and
activation of their receptors (LH receptor, LHR and FSH receptor, FSHR).
Knockout mouse models of each of these receptors have shown the
relevant role of gonadotropin signaling within the ovary.
In LHR knockout (LuRKO) mice, follicle development does not progress
beyond the antral stage; these mice are infertile due to the low estrogen
production and anovulation [126]. Moreover, high doses of FSH are not
capable of inducing final follicular development and

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la ovulacin cuando LHR no est presente [127]. Por lo tanto, la expresin de LHR es esencial no slo para la ovulacin, sino tambin para la maduracin del folculo antes de
la ovulacin.
Los ratones deficientes en la FSH (FSH (3 nocauts) son infrtiles debido a un bloqueo del desarrollo del folculo antes de la etapa antral. Dentro de estos folculos, las clulas
de la granulosa expreso niveles de transcripts FSH-R aument, pero los niveles de aromatasa disminuy, . subunits y la inhibina / activina Por otra parte, no logran expresar
niveles normales de receptores de LH [97] FSHR nulos ratones hembras mutantes, en los que se han eliminado todas las formas de la FSHR (tambin conocido como Forko -.
folitropina ratones knockout del receptor ), mostrar un tero atrfica y tambin son infrtiles debido a un bloque en la foliculognesis antes de la formacin antral [96]. En estos
mutantes, los folculos ms grandes observados tienen no ms de cuatro capas de clulas de la granulosa. Sin embargo, a pesar de una expresin normal de aromatase mRNA y
protena en ratones mutantes FSHR-null, hay una prdida completa de la produccin de estrgenos por el ovario, lo que lleva a alterations metablicos tales como la obesidad y
la anormalidad esqueltico (algunos de los cuales puede ser revertida mediante tratamiento con estradiol-17 beta ). Esto puede sugerir que la sealizacin a travs de la FSHR
puede estar implicada en la activacin de la enzima aromatasa [128].
Si el bloque en el desarrollo del folculo en tanto FSH (FSHR 3 y knockouts es debido a la proliferacin de clulas de la granulosa o alterada debido a la apoptosis increased
no se entiende completamente. Aunque la funcin precisa de la ciclina D2 (un gen sensible a la FSH y que participan en granulosa proliferation celular) en este proceso no ha
sido identificado, FSH (3 ratones knockout tienen una modesta disminucin en la expresin de la ciclina D2, mientras que esto no se ha demostrado claramente en ratones Forko
[96].
Estos estudios son relevantes para la reproduccin humana ya que se han encontrado phenotypes similares a los reportados en ratones en humanos con mutaciones en
FSH (FSHR 3 y [129]. Por otra parte, una serie de sntomas menopausal en las mujeres, as como caractersticas de hipogonadismo hypergonadotropic- que se pueden observar
en las mujeres infrtiles tambin se mimicked por el fenotipo de los ratones Forko.
Por enfoques in vitro, los estudios han demostrado que en el absence de FSH folculos cultivados son detenidos en su desarrollo, no son compatibles con la formacin de
antro y exhibir la apoptosis, todos los cuales se pueden prevenir mediante la suplementacin de FSH [91,92]. A pesar de esto, la investigacin llevada a cabo por nuestro grupo ha
demostrado que una vez establecida la formation antro, el desarrollo del folculo preovulatorio a la etapa de bajo disminucin de las concentraciones de FSH inducir una mejor
clulas del cumulus differentiation [130131]. En consecuencia, los bajos niveles de FSH aplicados en el cultivo de folculos despus de la formacin del antro parecen promover
el desarrollo de follicles primates y de los ovocitos alcanzar dimetros mayores [95]. Por el contrario, exposure a suprafisiolgicamente altos niveles de FSH durante las etapas
antrales o durante todo el desarrollo de preantral a las etapas antrales in vitro de ovocitos perturbs de control de la diferenciacin de clulas de la granulosa, as como la funcin
de clulas del cumulus, en cultivos de ratn y el folculo primate [95130 ]. Por lo tanto, although gonadotropinas son esenciales durante las etapas antrales in vitro, una puesta
a punto dosis es fundamental para lograr un desarrollo adecuado del antro.
Bajo la influencia de las gonadotropinas, los folculos sintetizan hormonas esteroides, tales como andrgenos y estrgenos, que contribuyen a follicular desarrollo, mediante
la induccin de la proliferacin de clulas de la granulosa y differentiation a travs del receptor de andrgenos (AR) y receptor de estrgeno (ER), respectivamente [109132133 ]. A
travs de la bien conocida de clulas dos, modelo de dos gonadotropina, clulas de la teca producen andrgenos bajo influence de estmulos de LH, mientras que las clulas de la
granulosa producen andrgenos estrgenos utilizando como sustrato, bajo la influencia de FSH [108134].
Los andrgenos, se ha demostrado que participar en proliferation clulas de la granulosa y la supervivencia a travs del receptor de andrgenos (AR). Ratones hembra-AR
deficientes son subfrtiles, y muestran un nmero reducido de follicles antrales y ovocitos ovularon, y una alta tasa de clulas de la granulosa apoptosis; eventualmente
desarrollan insuficiencia ovrica prematura [135,136]. La mayor parte de las caractersticas observadas en estos ratones Ar-nulos parecen ser el resultado de una falta de
expresin AR ms especficamente en las clulas granulosa, como se ha demostrado por un modelo en el que knockouts especficas para la AR en las clulas de la granulosa o ya
sea ovocitos eran hecho. Por lo tanto, granulosa AR especfica de la clula parece ser esencial para desarrollo del folculo mentand supervivencia [137].
El estradiol es el estrgeno predominante en trminos de activity estrognica. De hecho, una de las principales funciones de las clulas de la granulosa preovulatorio es la
sntesis de estradiol. En el interior del folculo, el estradiol se produce a travs de la enzima aromatasa, y mejora la respuesta de las clulas de la granulosa a las gonadotropinas
[138].
Modelos knockout para el dos receptores de estrgeno diferentes, ERA y ER ^ tienen ventaja a la elucidacin del papel de los estrgenos en el desarrollo follicular. Ratones
knockout para la era, tambin conocidos como los ratones ERKO, se han incrementado los niveles de estradiol y LH, mientras que los niveles de FSH son normales. Los ovarios de
ratones ERKO muestran una detencin en la etapa antral temprano y son infrtiles [139140]; esto demuestra el papel esencial de estradiol en inducida por gonadotropina
diferenciacin folculo. Por el contrario, en ER ^ nocaut (BERCO) folculos ratones desarrollar las etapas antral y estos ratones son frtiles, pero no tienen una respuesta
disminuida a los estmulos ovulatory hCG [140-142].
Otro enfoque implic la alteracin dirigida del gen Cyp19 (aromatasa) en ratones (ArKO), que causa una deficiencia en la sntesis de estradiol. Estos ratones tienen niveles
elevados de gonadotropins circulantes y la testosterona y son infrtiles. En la edad adulta, los ovarios de ratones hembra ArKO pueden contener grandes folculos antrales, pero
despus de una foliculognesis ao es severamente afectada y folculos secundarios hay longer encontrado [143,144], lo que sugiere un papel importante de estradiol en el
desarrollo folicular. Por otra parte, el fenotipo ArKO parece result no slo de la falta de estrgenos, sino tambin de los altos niveles de gonadotropinas circulantes,
principalmente LH [145].
Los miembros de la del factor de crecimiento de insulina (IGF), la familia (es decir, IGF1, IGF2) tambin cooperan con gonadotropinas para determinar la seleccin del folculo
y la progresin a travs de las etapas ms antrales. En roedores, IGF1 y IGF2 son las formas predominantes en las clulas de la granulosa y la teca, respectively, donde cooperar
con FSH y LH accin en cada tipo de clulas [146]. Por otra parte, en los ratones deficientes en IGF1, el desarrollo del folculo no progresa ms all del pequeo escenario antro.
En estos ratones se reduce la expresin de FSHr, y la disminucin de la sntesis de estradiol y la proliferacin de clulas de la granulosa reducida [147,148].
Adems de los IGF, el desarrollo folicular en todas las etapas antrales depende claramente de muchos otros factores intraovricos. Similar a anteriores etapas, activinas y
inhibinas producidos por las clulas de la granulosa desempean papeles paracrinos esenciales mediante la regulacin de la synthesis andrgenos inducida por LH-producida

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por clulas de la teca [149-151], y por lo tanto, garantizar el suministro estradiol. En ratones que carecen de ACVR2B (la activina tipo IIB-receptor), la progresin ms all de las
primeras etapas antrales falla [152]. El sistema de activina-inhibina no slo regulan proliferation clulas de la granulosa, sino tambin la diferenciacin de clulas de la
granulosa y la maduracin de ovocitos, estando el ltimo acelerado por la accin activina A [153-155].
Secretada-ovocitos GDF9 y BMP15 tambin juegan un papel crtico en las etapas antral. GDF9 y BMP15 regulan la funcin de clulas del cumulus (ms explicacin
detailed se da en la siguiente seccin). Como se evidencia en la rata y humano, estos factores de ovocitos solo, o en combinacin, atenan effects de FSH y estimulan la
proliferacin de clulas de la granulosa y la diferenciacin. GDF9 suprime la secrecin de estradiol estimulada por FSH por la represin de la actividad aromatase y tambin
suprime la formacin de los receptores de LH inducida por FSH en clulas del cumulus diferenciados. BMP15 se cree que reduce la apoptosis de clulas del cumulus y para
suprimir la expresin del receptor de FSH [79156157]. Tanto BMP15 y GDF9, junto con BMP6, se ha demostrado que inhibit la produccin de progesterona inducida por FSH,
que puede ser considerada importante para la supervivencia del folculo y la prevencin de la luteinizacin prematura.
En los folculos preovulatorios, un papel crtico de GDF9 y BMP15 en la induccin de cmulos mucificacin / expansin y la regulacin de los genes implicados en este
proceso ha sido demostrada y ser further adelante [79158159] explic.
Otros factores tales como teca derivados de factores de BMP4 y BMP7 son posibles reguladores paracrinos de la funcin de clulas de la granulosa. En la rata, estos dos
factores atenan la secrecin de progesterona inducida por FSH-mientras que mejoran la secrecin de estradiol inducida por FSH [70160].

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1903

Finalmente, los folculos preovulatorios que contienen oocitos totalmente crecido estn dispuestos a someterse a la ovulacin, que es inducida por la oleada preovulatoria de
las gonadotropinas. La ovulacin se caracteriza por la ruptura de la pared del folculo y la liberacin del complejo cumulus-ovocito; en este momento el ovocito tiene meiosis
reanudado y ha progresado hasta la metafase II de la meiosis (Fig. 1) (maduracin de los ovocitos se describe en detalle en las secciones siguientes).
Despus de la ovulacin, las clulas de la granulosa y la teca se convierten en clulas ltea y son responsables de la produccin de estradiol y progesterona, este ltimo se
expresa predominantemente en el cuerpo lteo [161].
1. Regulacin de la expresin gnica y de almacenamiento de mRNA durante la ovognesis
Durante la ovognesis, ovocitos aumento de tamao (aproximadamente 20 a 80 horas, en el ratn y el 35 a 120 horas, en humanos) como en volumen (~ 100 veces) [162,163].
A lo largo de este perodo, los ovocitos sintetizan y acumulan ARN y protenas que son vitales para su crecimiento adecuado y maturation, e indispensable para el desarrollo en
un embrin viable [164-166].

Sntesis de las transcripciones es ms alta en las primeras fases de development, que coincide con la proliferacin activa de clulas foliculares; sin embargo, por el final del
crecimiento (etapas antrales) y en el momento de la maduracin oocyte, el silenciamiento de la actividad transcripcional y la degradacin de algunos ARNm ser los procesos
predominantes [167-169] (Fig. 3).
Totalmente crecido y oocitos murinos meiotically competentes han es-calcula participa contener ~ 6 ng de ARN total que es casi ~ 200 veces la cantidad de ARN que se
encuentra en una clula somtica tpica [170,171]. Aproximadamente el 10-15% del total de ARN producido por un ovocito totalmente crecido comprende ARN heterogenous,
mientras que la mayora, ~ 65% comprende ARN ribosomal [171].
El destino de mRNA de ovocitos depende, en gran parte, de su asociacin con diferentes tipos de protenas que regulan la accesibilidad a initiation factores y ribosomas [166].
Despus de la transcripcin, poliadenilacin ocurre por defecto, es decir, una cola poli-A (> 150 residuos) se aade en el extremo 3 'del ARNm. Despus de poliadenilacin, la
asociacin con factores capbinding y de iniciacin es un paso crucial para determinar el inicio de la activacin de la traduccin. Posteriormente, una ms compleja asociacin
involving proceso con subunidades ribosomales y la participacin de un gran nmero de factores permitirn que la etapa de traduccin dependiente de mRNAs [166172] (Fig. 3).

Oocyte growth, and acquisition of

meiotic,
maturational and developmental
competence

Activation of transcription by transcription factors

and chromatin remodeling
Transcript
ion

rRNA
synthesis
and
storage

Initiation of nucleolar activity by

chromatin remodeling/acquisition
of nucleolar proteins

1902

mRNA
synthesis
and
polyadenylati
on

Interaction of proteins
associated with 5'and
3'UTR of polyadenylated
-5'UTR
"
RNA,Deadenylating\3'AAA
circularization:
Initiation of translation

F. Sanchez, J Smitz / Biochimica et Biophysica Acta 1822 (2012) 1896-1912

^ nuclease

mRNA
deadenylation
and storage

'

Association of mRNA with

Y-box RNA-binding
proteins (e.g. MSY1),
storage in mRNP particles

Masking of mRNA with shorter poly(A)

tails/inaccessibility to cap-associated initiation factors
^5'UTPR Masking 3AAAA
Vfactorsly mRNA

mRNA
Fig. 3. Representacin de algunos eventos generales implicados en la regulacin de la expresin en el ovocito durante el crecimiento y la maduracin. Como se explica en el
texto, el destino de mRNAs puede variar considerablemente. Despus de la transcripcin, algunos mRNAs se someten traduccin inmediatamente despus de poliadenilacin,

Stage-specific
polyadenylation
Stage-specific, default
deadenylation and
degradation of mRNAs

mientras que otros se someten a deadenylation y se almacenan para ser traducido adems en etapas especficas de acuerdo a las necesidades de los ovocitos. La

Stage-specific
modification of masking
and associated
proteins, and of cap
structure, and
recruitment.^3AAAA
of Poly(A)
polymerase
(PAP)

acumulacin de transcripciones de ovocitos y protenas es crucial para la adquisicin de la competencia meitica de

ovocitos y de desarrollo. Reproducido con permiso de Oxford University Press, desde Eichenlaub-Ritter y Peschke [166].

Regulacin de la expresin gnica en el ovocito no slo es dependiente

de poliadenilacin, sino tambin en la presencia de sequences altamente
conservadas en el extremo 3 'y 5' regiones no traducidas (UTRs) de ARN
que estn implicados en procesos tales como la poliadenilacin, la
iniciacin de trans lation, el enmascaramiento de los ARN y la
disposicin de mRNA a someterse a deadenylation y la degradacin
[166173]. La regulacin de las transcripciones occurs de una manera
bien orquestada y etapa especfica. Mientras que algunas transcripciones
se sintetizan para su uso inmediato, se deadenylated otras
transcripciones (por acortamiento de la cola poli-A, que confiere ms
estabilidad) a ser degradados o almacenada en el ooplasma en partculas
ribonucleares (RNPs) para ser utilizado en las etapas posteriores .
Transcripciones almacenados en RNPs no se asocian con polirribosomas
sino ms bien se asocian con factores de enmascaramiento, y por lo tanto
no se traducen (Fig. 3).
Regulacin activa de transcripciones en el ovocito se produce
predominantemente durante la transicin de primordial para la etapa
primaria folicular [174], donde la mayora de los genes relacionados con la
proliferacin celular, el ciclo celular y la transcripcin estn regulados.
Del mismo modo, la transicin de la primaria a la fase folicular
secundaria se caracteriza por una regulacin ascendente activa de
muchos genes de ovocitos (es decir, las transcripciones que participan en
el ciclo celular, la biosntesis y el metabolismo macromolecular). Desde la
secundaria a la etapa antral, los genes implicados en la transcripcin
basal de la polimerasa II promotores estn regulados hacia abajo, y
pueden explicar el silenciamiento transcripcional a gran escala hacia el
final del crecimiento de los ovocitos [174]. Una degradacin selective de
las transcripciones se produce durante la maduracin de ovocitos en el
ratn [167-169,175] y humanos [176]. En el ratn, una disminucin de ~
30% en el total de ARN se ha descrito que se produzca durante la
maduracin [175]. However, aunque ovocitos no sintetizar ARN de novo
en esta etapa, las modificaciones post-transcripcional son cruciales en la
regulacin de la expresin protein en esta etapa [167,177]. En la
siguiente seccin (maduracin de ovocitos) se da ms informacin sobre
las transcripciones cruciales regulados during esta etapa.
La regulacin gnica a nivel post-transcripcional, tambin es inducida
por la interaccin de las transcripciones con pequeos RNAs. ARNs
pequeos se noncoding ARN de una longitud corta: 19-31 nucletidos
(nt), cuya funcin principal es el silenciamiento gnico de ARNm diana.
Tres clases principales de pequeos RNAs no codificantes se han
identificado que desempean papeles esenciales en el desarrollo
mammalian: endgenos-pequeos RNAs de interferencia (siRNAs), micro
ARN (miRNAs) y ARNs Piwi-que interactan (piRNAs) (vase, por review ,
[178179]).
SiRNAs y miRNAs endgenos son originalmente un largo
transcripciones de aproximadamente 200 nt. siRNAs son inicialmente
hebra (ds) RNA dobles que se cortan directamente por Dicer, una RNasa
citoplasmtica III, en una longitud ms corta de 19-25 nt. miRNAs se
transcriben como a largo primario-miRNAs, que se reconoce por primera
vez y escindido por el complejo formado por Drosha, una enzima RNasa
III, y la protena de unin al ARN DGCR8 (sndrome de DiGeorge crtico
regin del gen 8) en una pre-miRNAs, y ms tarde escindido por Dicer en
un ~ 22-nt miARN [180,181]. Al contrario de siRNAs y miRNAs, piRNAs
no requieren Dicer para su procesamiento; sin embargo, piRNAs
biognesis an es poco caracteriza [179].
Despus de ser procesado por Dicer, ambos miRNAs y siRNAs son
incor porado como una sola hebra en el silenciar complejo (RISC), y
actuar a travs de este complejo para silenciar ARNm diana ARN
inducida. El silenciamiento de la expresin gnica por siRNAs es inducida
por la escisin del ARNm diana. El Argonauta 2 (AGO2) es un componente

clave de la siRISC ya que possesses una actividad endonucleasa y es

responsable de la escisin del ARNm diana [178].
De manera diferente a siRNAs, el papel de miRNAs en la represin del
ARNm trans-mento se especifica mediante mecanismos alternativos [178].
La traduccin se puede suprimir, ya sea en la etapa de iniciacin o
despus de la traduccin ha sido initiated [182]. miRNAs aceleran
mRNAdegradation mediante, por ejemplo, triggering desestabilizacin del
ARNm por deadenylation; o secuestran mRNAs y los transportan a un
compartimiento de almacenamiento en el que se degraded, y finalmente
interferir con la expresin de genes [178183].
La regulacin de la funcin de reproduccin por miRNAs no ha sido
estudiado ex tensively. Recientemente, los estudios in vitro han
demostrado que el miR-224 se expresa en las clulas de la granulosa en
diferentes etapas de desarrollo del folculo y sus niveles estn regulados
por TGF (31 y activina A. Interestingly, Smad4 parece ser un objetivo
potencial de miR -224, y por la regulacin negativa de la expresin de la
protena SMAD4, miR-224 podra estar involved en TGF (31 mediada por
la proliferacin de clulas de la granulosa y la funcin [184].
Con respecto a las ofmiRNAs de expresin en ovocitos, un anlisis de
patrn de expresin de miRNAs Ofthe sugiere que miRNAs se heredan de
la madre el ovocito al cigoto, mientras que la expresin de novo de
miRNAs puede producirse ms all de la etapa de 2 clulas de desarrollo
del embrin. Entre los miRNAs maternas existentes, la familia let-7 se ha
demostrado que someterse a una regulacin dinmica durante el
crecimiento de los ovocitos y ms tarde en el desarrollo embrionario
temprano (como se muestra por un aumento abundante) [185].
Curiosamente, un papel esencial para siRNA en la maduracin de
ovocitos se ha implicado a partir de ratones deficientes en cualquiera de
Dicer o DGCR8. Prdida de Dicer en ovocitos mutantes provoca un
agotamiento de la mayora de los miRNAs en el ovocito y ms
crticamente, miles de ARNm se dysregulated (es decir expression de dos
transcripciones de ovocitos, Mos y H2AX, han demostrado estar
sobreexpresado en comparacin con el control de los ovocitos ). Por otra
parte, los ovocitos mutantes tienen una organizacin husillo aberrante y
segregation cromosmica, dando como resultado la detencin meitica.
Por el contrario, cuando DGCR8 est ausente en los ovocitos de ratn, los
niveles de mRNA permanecieron inalterados y no hay efecto adverse en
la maduracin de ovocitos. A partir de estos hallazgos se dedujo que los
efectos observados en los ovocitos mutantes Dicer se determinan por la
prdida de siRNAs en lugar de miRNAs, y por lo tanto no estn miRNAs
required para la maduracin de ovocitos, pero, como se mencion antes,
para los acontecimientos posteriores del desarrollo del embrin [185
-187].
La regulacin de miRNAs por gonadotropinas no ha sido totalmente
en investigados. Hasta el momento, la expresin de tres miRNAs dentro
del ovario de ratn, miR-21, miR-132 y miR-212 se ha encontrado que
aumentar en las clulas de la granulosa mural despus del pico de LH
[188]. Adems, la expresin de miR-143, let-7a y mir-15b durante la
foliculognesis ha sugerido que ser regulada negativamente por FSH
[189].
Por lo tanto, la regulacin de la expresin gnica en el ovocito a lo
largo de la ovognesis en el nivel transcripcional y post-transcripcional es
un proceso crucial que est estrechamente controlado de una manera
dependiente de la etapa, y en ltima instancia, este proceso se asegura de
que el ovocito se madurar y adquirir competencia completo desarrollo.
La maduracin de ovocitos 1.

1904

F. Sanchez, J. Smitz / Biochimica et Biophysica Acta 1822 (2012) 1896-1912

Los ovocitos adquieren gradualmente la maduracin during

crecimiento nuclear y citoplasmtica. Competencia meitica, que es la
capacidad de los ovocitos para reanudar la meiosis y convertirse en
nuclearmente madurado, se adquiere durante la foliculognesis y coincide
con la formacin de antro, cuando los oocitos han alcanzado
aproximadamente 80% de su tamao final (en ratones [190]; y humano
[191 ]). Competencia de desarrollo se relaciona con la madurez
citoplasmtica de los ovocitos y se refiere a la capacidad del ovocito para
ser fertilized y convertirse en un embrin sano capaz de continuar su
development a plazo y producir un nacimiento vivo. Maduracin
citoplasmtica se adquiere despus de que el ovocito se convierte en
meiotically competente y involves una acumulacin de transcripciones y
otros factores descritos en ms detalle en las pginas siguientes.
Un claro ejemplo de adquisicin de tanto mat-racin nuclear y
citoplasmtica a tiempo es que a pesar de ovocitos aislados de folculos
antrales tempranos son capaces de reanudar la meiosis, no avanzan ms
all de la metaphase I (MI) fase [192]. Adems, si estos mismos pequeos
folculos antrales son madurados y fecundados in vitro que son capaces
de pasar a la fase MII y fertilizar, sin embargo, diferente a los ovocitos
aislados de grandes etapas antral, el desarrollo temprano del embrin se
ve comprometida [193194]. Por lo tanto, un ovocito que ha adquirido
competencia meitica no ha adquirido la madurez necessarily
citoplasmtica.
1.1. La maduracin meitica
Desde ovocito competencia meitica se adquiere en una etapa
anterior, cuando los oocitos son todava desarrollo incompetente, los
ovocitos tienen que se mantenga en la etapa de vescula germinal hasta
que completen su plena maduracin.
Dentro del ovocito, niveles elevados de monophosphate cclico de
adenosina (cAMP), producido por la adenilato ciclasa, son cruciales en el
mantenimiento de los ovocitos bajo arresto meitica (en roedores [195]; en
los seres humanos [196]) (Fig. 4, panel superior) . En oocitos, la fuente de
cAMP se ha sugerido que el producto de la afluencia de cAMP a travs de
la comunicacin brecha de la salida de las clulas del cumulus para el
ovocito [197] y / o la produccin de cAMP endogenous dentro del ovocito,
inducida por la activacin de receptores acoplados a protenas G-3 y 12
(GPR3,12) [198199].
Recientemente, se ha propuesto que la entrada de monofosfato de
guanosina cclico (GMPc) a partir de las clulas del cumulus al ovocito
(tambin a travs de la comunicacin brecha de la salida), impide la
activacin de ovocitos cAMP-fosfodiesterasa (PDE3A), la enzima que es
responsable de la degradacin de cAMP y, al hacerlo, evita resumption
meitica [200] (Fig. 4, panel superior).
Notablemente, los mismos, y a travs de la interaccin con sus clulas
del cumulus que rodean ovocitos, se han demostrado que contribuyen a
su propia detencin meitica. Los ovocitos promueven la expresin de
clulas cmulo de Npr2 (receptor del pptido natriurtico 2). NPR2 es
activado por su ligando CNP (pptido natriurtico de tipo C) para producir
cGMP, que como se mencion anteriormente se difunde en el ovocito para
inhibir la actividad PDE3A [200-202]. Recently, los experimentos in vitro
han revelado un papel directo de oocyte- secretada factores, entre los que
GDF9, BMP15 y FGF8B han identified y un papel del estradiol en la
regulacin de la expresin de NRP2 en clulas del cumulus [203]. Esto
pone de relieve un papel nico de estradiol en los folculos preovulatory
en el control de detencin meitica del ovocito antes de la ovulacin.
En conjunto, estos hallazgos contribuyen a la comprensin de los
mecanismos implicados en el mantenimiento de la detencin meitica, y
pueden ser de particular importancia en el diseo de la maduracin in
vitro (MIV) tcnicas para mejorar la competencia de desarrollo.

La maduracin de ovocitos meitica implica una cascada de procesos

que se inicia con el pico de LH preovulatorio, conduciendo a la progresin
del ovocito (por ese tiempo suspendido en la profase I de la primera
division meitica) a la etapa de metafase II y terminando con la extrusin
del primer cuerpo polar.
Despus de la oleada de LH, un evento que es esencial para el ovocito
para reanudar la meiosis es el mucificacin / expansin de clulas del
cumulus, que es causada por la produccin de cido hialurnico
producido por las clulas del cumulus en respuesta a las gonadotropinas.
La expansin del cumulus depende de la estimulacin del factor de
crecimiento epidrmico inducida por LH (EGF) -al igual que los pptidos,
a travs de la activacin de la protena quinasa A (PKA) y en respuesta a
altos niveles de AMPc producidos por las capas externas de la com
clulas de la granulosa partamento. Bajo estos estmulos, los niveles de
transcripciones que participan en mucificacin / expansin tales como
HAS2, la PTX3 y Tnfaip6 [204-207] se incrementan en clulas del
cumulus (Fig. 4, panel inferior).
La induccin de esta respuesta por factores similares a EGF est
mediada por la ac-tivacin de la / 2 va ERK1, que a su vez estimula la
production de la prostaglandina E2 (PGE2) a travs de la induccin de
mRNA tanto Ptgs2 y expresin de la protena. PGE2 se ha demostrado que
induce, adems, la produccin de clulas de la granulosa de los factores
similares a EGF, que mejora la seal de LH [208]. Como se representa en
la Fig. 4 (panel inferior), ambos tipos de clulas de la granulosa (clulas
murales y cmulos) responden y contribuyen a EGFR sealizacin
mediada, aunque la expansin (y la expresin de genes relacionados con
la expansin del cumulus-) es una respuesta nica de clulas del cmulo.
Por otra parte, la expansin del cumulus tambin es inducida por
factores cumulusexpansion permitiendo (CEEFs) producidos por el
ovocito [158,209]. La regulacin de ovocitos de expansin del cumulus se
discutir con ms detalle en la siguiente seccin (interaccin de ovocitos
cumulus) (Fig. 4).
Dentro del ovocito, la LH estimula la reanudacin meitica se inicia
por una drstica cada en los niveles de cAMP. Despus de sealizacin
LH-desencadenado, PDE3A en los ovocitos se activa [210] y degrada
cAMP. Alternativamente, una difusin limitada de cGMP y / o cAMP de las
clulas del cumulus al ovocito tambin parece contribuir a la reanudacin
meitica. Esto es apoyado por el hecho de que despus de gatillo LH, los
niveles de mRNA Nppc (que codifica CNP) disminucin, dando lugar a una
produccin limitada y la difusin de cGMP en el ovocito, que permite
PDE3 para degradar activamente cAMP [211]. Por otra parte, el cierre de
las uniones gap tambin puede contribuir a este proceso, como resultado
de la activacin de la va de sealizacin de ERK / MAPK inducida
despus de la activacin de EGFR [212213] (Fig. 4, panel inferior).
1.1.1. Reglamento de las transcripciones de ovocitos requerido para la
maduracin meitica
Los ovocitos participan activamente en el proceso de maduracin
meitica, asegurando as su progresin a la etapa madura. Como se
mencion anteriormente, una degradacin masiva predominante de las
transcripciones de los ovocitos se produce durante la maduracin; Sin
embargo, este evento parece ser un process selectivo [169].
Evidentemente, las transcripciones y / o protenas asociados con el
ovocito detencin meitica en la etapa (GV) de vescula germinal son
degradados o los niveles de expresin han disminuido drsticamente. Por
ejemplo, la traduccin de CDH1 - un co-activador del complejo /
cyclosome anafase de la promocin (APC / C) que reprime los niveles de
ciclina B1 a travs de ubiquinylation mantener detencin meitica - se
reduce en un 70% [214,215].

Por otra parte, las transcripciones que participan en vas de

sealizacin essential para la regulacin de la meiosis de los ovocitos y el
mantenimiento de la detencin meitica en MII, tales como ERK / MAPK y
P13 / AKT se retienen [169216]. Aunque se han mostrado algunas
transcripciones de efecto materno para someterse a la degradacin
durante esta transicin, algunas otras transcripciones parecen ser
estables.

Entre las transcripciones sometidos traduccin activa durante la

transicin GV-M11, bien establecidos los reguladores del ciclo celular
(CCNB1 y Mos) han sido identificados, as como componentes de la
anafase de la promocin de complejos y los componentes del puesto de
control conjunto del husillo (Mad2, BUB1B, y Sogl2). Esta clase tambin
incluye un conjunto de transcripciones que codifican reguladores
transcripcionales y remodeladores de la cromatina [215].

La degradacin o el mantenimiento de algunas transcripciones

aberrante durante la maduracin de ovocitos y / o fertilizacin pueden ser
perjudiciales para la calidad de los ovocitos y pueden comprometer la
competencia de desarrollo [217].

CPEB y DAZL se han identificado recientemente como dos

moduladores cruciales de traduccin durante la maduracin de ovocitos.
CPEB promueve la traduccin Dazl mRNA durante la transicin a la etapa
de MI; DAZL protein induce posteriormente la traduccin de su propio
ARNm, establishing de ese modo un bucle regulador positivo. Aunque un
papel de DAZL como un regulador de traslacin durante la maduracin de
ovocitos se ha propuesto anteriormente [218,219], Chen et al. [215] han
demostrado recientemente un papel claro y crucial de DAZL durante esta
ltima etapa. Los oocitos en el que DAZL se ha reducido regulado por la
inyeccin de oligonucletidos de morfolino antisentido especficos (MOS)
han demostrado que se retrase su resumption meitica y los pocos
ovocitos que extruyen un cuerpo polar tenido un husillo en su mayora
defectuoso [215]. Por otra parte, DAZL se ha demostrado que regulan la
traduccin de las transcripciones necesarias para el ensamblaje del huso
y la transicin M1-M11 (es decir Tex19.1, TPX2 y Dazl s mismo).

Aunque la mayora de las transcripciones dentro del ovocito se

degradan durante la maduracin, muchas otras transcripciones someten
poliadenilacin y associate con los polisomas a someterse a la traduccin
[177,215]. A travs de perfiles de todo el genoma de los ARNm maternas,
un estudio reciente ha revealed diferentes patrones de transcripciones de
ovocitos en asociacin con los polisomas, lo que indica la regulacin de
traduccin activo durante maturation. Por este enfoque, se ha
demostrado que aproximadamente 7.600 transcripciones para ser
traducido activamente durante la maduracin de ovocitos, mientras que la
traduccin de muchos otros es reprimida [215].
Curiosamente, parece que hay dos mecanismos diferentes de
represin trans-relacional durante la maduracin de ovocitos:
transcripcin de degradacin, como se ha demostrado previamente
[169216]; y el otro parecen estar independent de degradacin. En este
ltimo caso, la traduccin parece ser reprimidos por la translocacin de
los transcritos que permanecen tan estable, desde el polysome a la
fraccin subpolysome / RNP [215].

4.2. La maduracin citoplasmtica

Muchos aspectos diferentes determinan la maduracin de ovocitos
citoplsmica. Sntesis y acumulacin / almacenamiento de transcritos
durante el crecimiento de los ovocitos y el silenciamiento transcripcional a
gran escala al final del ovocito

Fig. 4. Representacin esquemtica ofLH inducida por la maduracin de ovocitos. El panel superior (por encima de las lneas) muestra el mantenimiento de la detencin meitica del ovocito antes de la
LHsurge. Los ovocitos se mantienen en arrestdue meitica a los altos niveles intracelulares de cAMP. Interaccin de los CNP producida por las clulas murales y su receptor NPR2, expresada en clulas del
cumulus (y hasta reguladas por OSF y E2) induce la conversin de GTP en GMPc, que se transfiere a continuacin, en los ovocitos a travs de uniones comunicantes. cGMP previene la activacin PDE3
dentro del ovocito y cAMP se mantiene entonces en niveles altos. Despus de la LH-aumento (por debajo de las lneas), la va de sealizacin de PKA es activada e induce la produccin de los factores
similares a EGF (es decir, AREG / EREG). Factores similares a EGF, a su vez, activan una cascada de eventos mediados por el EGFR (tanto en clulas murales y cmulos). Como resultado, ERK1 / 2 inducir
otros eventos principales: 1) la sobre regulacin de las transcripciones responsables de la expansin del cumulus HAS2, Tnfaip, PTX3 y Ptgs2 (que tambin estn regulados positivamente por los CEEFs
derivados del ovocito); 2) produccin ofPTGS2, que mejoran la respuesta a la LH estmulos a travs de la produccin ofPGE2 y por inducir la produccin de ms factores similares a EGF y activacin de la
cascada subsiguiente; y, 3) el cierre de las gapjunctions, lo que evita la transferencia de cGMP en el ovocito. Al mismo tiempo, los niveles de CNP y NPR2 disminuyen y tambin contribuyen a la baja
produccin de cGMP. Dentro del ovocito, algunas transcripciones cruciales para la transicin de la GV a la etapa MII se traducen activamente.

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1
2)

crecimiento son esenciales para apoyar primeras etapas de desarrollo del embrin (tal como fue
revisado en la seccin anterior). En efecto, una contribucin de las clulas granulosa en ovocitos
silenciamiento transcripcional global en ovocitos de ratn pre-ovulatorios, y por lo tanto en la
adquisicin de la maduracin de ovocitos citoplsmica, se ha sugerido [220].
Silenciamiento transcripcional global en el ovocito se asocia con - aunque no depende de - otro
evento clave que tambin determina la competencia de desarrollo de los ovocitos, la condensacin de
la cromatina en la configuracin nuclolo rodeado [221]. Mattson y Albertini [222] inicialmente
demostraron que el tiempo de la formacin de antro en coincides ratn con la aparicin de dos
configurations cromatina ovocito diferentes, la configuracin 'nucleolo rodeado' (SN), en los que un
anillo de cromatina puede ser distinguido alrededor del nucleolo, y el "nucleolo rodeado no '(NSN), en
el que la cromatina se dispersa en todo el nucleolo. Mientras ovocitos NSN son transcripcionalmente
active y tienen una competencia pobre desarrollo, debido a un bloqueo en la etapa de dos clulas,
los ovocitos en la configuracin SN son transcripcionalmente inactive y tener una mejor
competencia de desarrollo [223-225].
Adems, un anlisis de microarrays ha revelado que vitro en-matured ovocitos MII derivados de
cualquiera de los ovocitos en la SN o etapa NSN mostraron diferentes patrones de expresin gnica.
OCT4 (o POU5F1), ha demostrado tener un papel importante como un regulador clave potente de
eventos molecular que rigen el establecimiento de competence desarrollo de los ovocitos de ratn
[226]. Niveles de transcripcin de el regulador transcripcional de Stella, una transcripcin regulada
por ovocito OCT4, con un papel esencial durante el desarrollo embrionario temprano, se han
encontrado Oct4 y para ser downregulated, y sus protenas se ha demostrado que estar ausente en
antral y MII ovocitos con una configuracin de NSN.

En concierto con los correctos patrones de expresin gnica en el ovocito, la interaccin ovocitos
de las clulas de la granulosa mediada por cualquiera de signals paracrinos y / o por falta de
comunicacin de la unin de las primeras etapas de development determina la tasa de crecimiento
del folculo y la diferenciacin. Por otra parte, despus de la diferenciacin, la interaccin clulaovocito cumulus es esencial promover nuclear de ovocitos y la maduracin citoplasmtica, que
determinan la capacidad del ovocito para apoyar el desarrollo embrionario temprano [192220234].
La interaccin de clulas de la granulosa de ovocitos y el control de los ovocitos de la funcin de
las clulas de la granulosa son esenciales antes y despus del pico de LH. De hecho, en follicles
antrales, los ovocitos GV completamente crecidos han demostrado ser los reguladores ms potentes
de la funcin de las clulas cumulus [235]. Antes de que el pico de LH, los ovocitos no slo influyen
en la proliferacin de clulas de la granulosa [233236] y differentiation [231,232], pero muy
importante, ovocitos regulan la actividad metablica de las clulas del cmulo dentro del COC (la
captacin de aminocidos, la gluclisis y la biosntesis de colesterol) [229237238] . Despus del pico
de LH, los ovocitos regulan la expresin de genes de cmulo responsables del proceso mucificacin /
expansin.
En general, el conocimiento de control de los ovocitos de la situacin de cumulus DIF-dife- y la
funcin se ha logrado por ovocito co-cultivo ex-perimentos, generacin de ratones knockout, y por
tcnicas de biologa molecular, incluyendo anlisis de cuantificacin de los ARNm y ARN, para
regulation ejemplo a travs de la interferencia de ARN.
1.1. Interaccin Cumulus-ovocito antes de que el pico de LH
1.1.1. La regulacin de la diferenciacin de clulas del cumulus

Hay evidencia creciente que sugiere que los factores presentes en oocytes en la etapa SN, pero
ausente en la configuracin NSN determinar la competencia oocyte, segn lo informado por Zuccotti
et al. [226]. Sus resultados tambin han sido apoyados por los resultados de los experimentos de
micromanipulacin de la vescula germinal de ovocitos completamente crecidos (SN y NSN), que
indican fuertemente que los factores (s) presentes en el citoplasma de los ovocitos MII SN (despus de
que ocurra GVBD), determinar la competencia de desarrollo y no estn presentes en ovocitos con la
configuracin NSN [227].

En el momento de la formacin de antro, clulas de la granulosa se diferencian en dos

compartimentos: las clulas de la granulosa cumulus permanecen cerca de la oocyte, mientras que
las clulas de la granulosa murales permanecen en la parte externa del folculo. Estudios in vitro
han proporcionado evidencias de que dentro de las clulas del folculo, murales y granulosa cmulos
estn regulados de manera diferente por el opposing intrafolicular efectos de gonadotropinas (FSH) y
ovocitos, respectively, que determinan su fenotipo y funcionalidad [231,232].

DAZL es otra protena crucial no slo es esencial para maturation meitica sino tambin
necesario para la adquisicin de la competencia en el desarrollo de los ovocitos. Down-regulacin de
DAZL en ovocitos GV no slo no comprometer la progresin de la meiosis, sino tambin la
fertilizacin. Por otra parte, la baja regulacin de DAZL derivados de la madre en los primeros cigotos
provoca un bloqueo en la etapa de dos clulas. Por lo tanto, un papel importante de DAZL como un
regulador de la traduccin en el desarrollo temprano del embrin y como determinant de
competencia de desarrollo tambin se ha propuesto [215].

Los ovocitos promueven la expresin de clulas del cumulus transcripciones mientras que
suprimen transcripciones celulares murales [79231232239]. Cuando ovocitos GV completamente
crecidos se eliminan microquirrgicamente de los complejos cumulus-ovocito (un procedimiento
conocido como oocytectomy - oox), clulas del cmulo tienden a dedifferentiate, como lo demuestra la
baja regulacin de la expresin de marcadores de clulas del cumulus (es decir Amh, Slc38a1) [ 232
239] y, bajo esta condicin, la FSH es capaz de inducir transcripciones murales (es decir LHCGR,
CYP11A1) en estas clulas. Ovocitos co-cultivo con clulas del cumulus oox reverts este efecto.

Interaccin celular 1. ovocitos-cumulus

En los ltimos aos, se han logrado avances notables en el estudio de la interaccin de las
clulas de la granulosa de ovocitos y de la regulacin de los ovocitos de la funcin celular de la
granulosa [228-233].

Como se mencion anteriormente, los altos niveles de FSH durante folculo plomo cultura a una
expresin alterada de las transcripciones de cmulo, como lo demuestran los niveles disminuidos
ofAmh y altos niveles de LHCGR funcional [130] .Este phenotype atpica causada por altas dosis de
FSH durante el cultivo aparentemente Tambin se refleja en los ovocitos, que bajo estas condiciones
expreso aumentaron significativamente los niveles de Gdf9 y Bmp15 mRNA en comparacin con los

ovocitos cultured bajo dosis ms bajas de FSH [130]. Teniendo en cuenta la regulacin de LHCGR y
Amh por transcripciones de ovocitos, se cree que el aumento de los niveles de Gdf9 y Bmp15 ARNm
para reflejar una respuesta ovocito para compensar effects que se producen en las clulas del
cmulo.
Los ovocitos tienen el potencial de inducir la expresin de las transcripciones de clulas cumulus
en las clulas murales, incluso en la presencia de FSH. Esto claramente dem-uestra que dentro del
folculo, caractersticas de clulas cumulus estn influenciados principalmente por su estrecha
asociacin con el ovocito, que potently puede amortiguar los efectos continuos de FSH con el fin de
mantener las clulas del cumulus diferenciadas [232240]. Curiosamente, una fuerte evidencia
sugiere que estas acciones estn mediadas a travs de la activacin de Smad2 / 3, identificando as
GDF9, que acta a travs de esta va, como uno de los candidatos ideales entre los factores de
ovocitos-secretada que ejercen tales effects [232233].
1.1.2. Cooperatividad metablico

Seales paracrinas mediadas por factores de ovocitos secretadas son probablemente uno de los
mecanismos ms esenciales, pero no exclusivas, que median las interacciones cu-Mulus ovocito. Gap
cruces son altamente especializados conexiones intercellular que facilitan la comunicacin entre el
ovocito y sus clulas del cumulus que rodean. En particular, dado que los oocitos y clulas cumulus
estn separados fsicamente por la zona pelcida, la comunicacin de la unin GAP puede ocurrir
gracias a las proyecciones especializados transzonal citoplasmticas (TZP) desarrollados por las
clulas del cumulus. Estas proyecciones son capaces de penetrar a travs de la zona pelcida de
llegar a la membrana del ovocito y permitir la formacin de uniones gap [241].
Gap cruces juegan un papel crucial en la communication bidireccional entre ovocitos y clulas
del cumulus, permitiendo el paso de molecules de diferentes tipos (es decir, aminocidos y
metabolitos tales como piruvato) del cumulus para el ovocito [228]. De hecho la expresin de las
protenas de unin brecha Cx43 y CX37 en las clulas de la granulosa y de los ovocitos,
respectivamente, se ha demostrado que es de vital importancia en guaranteeing ovocitos y el folculo
desarrollo [123,124].

En los ltimos aos, los ovocitos y clulas del cumulus se han

demostrado para cooperar en ms de un proceso metablico. Por ejemplo,
los ovocitos, por s mismos, no son capaces de metabolizar la glucosa
[242], mientras que las clulas del cmulo de manera muy eficiente de
hacerlo, como lo demuestra la medicin de la actividad glucoltica de AOC
cultivadas en comparacin con los ovocitos denudados [229,230]. Desde
ovocitos exigen que los productos obtenidos a partir de processes
metablicos como una fuente de energa para apoyar su crecimiento y
maduracin, se requieren clulas cumulus para metabolizar la glucosa
para ovocitos [242243].
Regulacin de la actividad glucoltica de clulas del cumulus por los
oocitos se ha evidenciado mediante el anlisis de transcripciones en las
clulas del cumulus que participan en este proceso. Sugiura et al. [229]
demostraron que las transcripciones que codifican para enzimas
glucolticas involucrados en metabolism glucosa como Enol, PKM2,
LDH1 y PFKP se redujeron regulado en clulas del cumulus oox
cultivadas en comparacin con los controles AOC intactas, y esto fue
acompaado de una reduccin de la actividad glicoltica measured en
estas clulas. Sin embargo, el co-cultivo de clulas del cumulus oox con
ovocitos result en la recuperacin a los niveles de transcripcin
normales y la actividad glucoltica normal [229].
Un estudio muy interesante ha apuntado hacia un papel directo de
factores secretados oocyte- en la regulacin de las transcripciones
glucolticas y la gluclisis en clulas del cumulus. Clulas de cmulo de
Bmp15 - / - o doble mutante (DM) Bmp15 - / - ratones gdf9 +/- eran
defectuosos en la promocin de la expresin de las transcripciones que
participan en la gluclisis en clulas del cumulus y tambin se defective
en el metabolismo de la glucosa [230]. Adems, en particular, slo el
efecto combined de BMP15 y factor de crecimiento de fibroblastos 8
(FGF8B) administrada exgenamente a las clulas del cumulus oox
cultivadas era capaz de restaurar la expresin normal de enzimas
glucolticas y restaurar la actividad glycolytic [230].
A la cooperacin metablica similar parece existir entre ovocitos y
clulas del cumulus con respecto a la biosntesis de colesterol. Ovocitos y
embriones de ratn parecen requerir el colesterol para apoyar el
desarrollo preimplantation [244,245]. Los ovocitos no son capaces de
sintetizar el colesterol desde las enzimas requeridas para este proceso
(tales como MVK, PMVK, FDPS, SQLE, CYP51, Sc4mol y EBP) estn
apenas detectado o ausente en los ovocitos, mientras que las clulas del
cumulus activamente y altamente expresan estas enzymes [238]. Como
se muestra por la cultura de los AOC intactas y desprovistas de ovocitos,
la capacidad de los ovocitos para convertir de etilo para el colesterol ha
demostrado ser muy pobre, que apoya la idea de que las clulas del
cumulus proporcionan los ovocitos con los productos de esta va [238].
La participacin de GDF9 y BMP15 como factores que median estas
acciones se ha evidenciado por un enfoque similar a la mentioned antes.
Clulas del cmulo mutantes derivados de Bmp15 - / - o DM Bmp15 - / ratones GDF9 +/- no fueron capaces de producir denovo colesterol a
tasas similares a las clulas de control de tipo salvaje (WT) de cmulo,
mientras que en las clulas del cmulo oox esta deficiencia fue an mayor
en comparacin con WT AOC. Del mismo modo, co-cultivo de oox con
ovocitos denudados totalmente crecido restaur las tarifas normales de la
biosntesis de esteroles [238].
Un tercer ejemplo muy conocido est relacionada con la absorcin de
cidos amino. Los ovocitos, en comparacin con clulas del cumulus,
parecen tener una pobre capacidad de absorcin de aminocidos. Un
claro ejemplo es la baja cantidad de radiolabeled L-alanina presente en
ovocitos denudados despus del cultivo cuando compared a las
cantidades muy altas se encuentran en los AOC [237,246]. L-alanina ha
demostrado ser un sustrato preferentemente transportado por el

SLC38A1 transportador de aminocidos (familia portador de soluto 38,

miembro 3). Transcripciones Slc38a1 no se expresan en oocitos aunque
Slc38a1 es altamente expresado en clulas del cumulus [237]. La
participacin de los ovocitos en la captacin de aminocidos de clulas
del cumulus se ha dilucidado por culturing clulas del cumulus oox,
mostrando que, en ausencia de los ovocitos no slo una incorporacin
reducida drsticamente de L-alanina se observa, sino tambin una
importante reduccin de los niveles de transcripcin Slc38a1 en clulas
del cumulus. Co-cultivo con ovocitos totalmente crecido puede restaurar
los niveles normales transcript en clulas del cumulus y, al mismo
tiempo, la incorporacin de L-alanina [237]. Una vez ms, esto demuestra
que los ovocitos regulan una actividad metablica diferente en las clulas
del cmulo.
En general, estos estudios han demostrado la cooperacin between
ovocitos y sus clulas del cumulus que rodean, e indican que la actividad
metablica de las clulas del cumulus se controla por el ovocito. Los
productos del metabolismo celular cumulus son los ms probable
transferred a los ovocitos a travs de uniones gap y se compensar la
incapacidad metablica de los ovocitos.
En gran medida, estos procesos parecen estar mediada por oocytefactores secretados que implican la GDF9, BMP15 y las vas de
sealizacin FGF8. Si estos factores son los nicos reguladores de estos
processes, y si otros procesos dependen de la cooperacin de los ovocitos
y clulas del cumulus antes del pico de LH, requiere mayor investigacin.
1.1. Interaccin Cumulus-ovocito despus del pico de LH 5.2.1.
Expansin Cumulus
Como revisado en la seccin anterior, una respuesta evidente a la
oleada de LH es la expansin clulas del cmulo, que es crucial para la
ovulacin.
Los ovocitos participa en la expansin del cumulus como lo ilustra el
ob-servacin que oox clulas del cmulo no expandirse en respuesta a la
FSH, mientras que co-cultivo con ovocitos completamente crecidos
restaura la capacidad de estas clulas para someterse a la expansin
[234]. A travs de la secrecin de expansin cumulus permitiendo
factores (CEEFs), los ovocitos promueven la expresin de las
transcripciones de clulas del cumulus, como HAS2, Ptgs2, PTX3 y
Tnfaip6, que son responsables de la expansin del cumulus
[79158231247].
De manera similar, la implicacin de factores de ovocitos (tales como
GDF9, TGF (31, BMP15 y activina A) en la expansin del cumulus se ha
establecido a travs de la adicin exgena de estos proteins
recombinantes en cultivo. La induccin de la expansin de clulas del
cumulus y oox , furthermore, la promocin de la expresin de HAS2,
Tnfaip6, Ptgs2, y PTX3 en clulas del cumulus oox y / o clulas de la
granulosa aisladas en cultivo ha demostrado ser reproducida por la
adicin de estos factors ovocitos, lo que sugiere que son componentes
potenciales de los CEEFs [79.158.159.209.248].
Estas y otras observaciones proporcionan pruebas claras de que
GDF9 y BMP15 son elementos importantes de las CEEFs. Por un apabordaje interferencia de ARN, la generacin de gdf9 ovocitos
desmontables se ha demostrado que comprometer expansin de clulas
del cumulus que rodean [249], mientras que este no es el caso en los
ovocitos desmontables BMP15. Sin embargo, los estudios en Bmp15 - / o en doble mutante (Bmp15 - / - Gdf9 +/-) ratones knockout han
demostrado que las clulas del cumulus de estos ratones mutantes
fracasan para expandir [250]. Por otra parte, los ovocitos de estos ratones
no son capaces de restaurar la capacidad del cumulus para expandirse en

1910

F. Snchez, J. Smitz / Biochimica et Biophysica Acta 1822 (2012) 1896-1912

oox tipo salvaje (WT) clulas del cumulus, y clulas del cumulus
mutantes fracasan para expandir incluso en presencia de ovocitos WT
[250]. Estos estudios ponen de relieve la importancia tanto GDF9 y
BMP15 en la induccin de la expansin del cumulus y sugieren que su
presencia antes del pico de LH podra ser crucial para la correcta
diferenciacin celular cumulus, y conferir a las clulas del cmulo del
capacity para apoyar la expansin . Adems, BMP15 recombinante se ha
demostrado que induce la expresin de los pptidos similares a EGF,
epirregulina, anfirregulina y betacelulina, que apunta hacia un papel ms
importante de BMP15 despus de la induccin de la ovulacin por LH
[159].
Despus GDF9 y BMP15 interactan con sus respectivos receptores
ALK5 y ALK6, que actan a travs de molculas de sealizacin aguas
abajo llamados molculas receptoras reguladas 'SMADs. Seales GDF9
travs SMAD2 / 3, mientras que BMP15 activa Smad1 / 5/8
[233251252]. El uso de un bloqueador de la fosforilacin SMAD2 (SB431542) se ha demostrado para neutralizar tanto GDF9 y ovocito
induccin de expansion en clulas del cumulus oox [209]. Por otra parte,
Daz et al. [232] han demostrado que la expresin de ovocitos PTX3
inducida en clulas del cumulus requiere la activacin de ambos SMAD2
y SMAD3, mientras que expression de Ptgs2 y HAS2 transcripciones
solamente depende de la activacin de Smad2. Por lo tanto, estos estudios
indican fuertemente GDF9 como un factor crucial la regulacin de la
expansin del cumulus. A pesar de esto, GDF9 anticuerpo neutralizante
se ha demostrado no ser capaz de contrarrestar oocyte- inducida por la
expresin de HAS2 en clulas del cumulus [158], lo que sugiere que GDF9
no es el nico OSF involucrados en este proceso.
2. Conclusiones
Descubrimientos fundamentales en aspectos bsicos de ovocitos y
biology folculo han proporcionado informacin sobre la regulacin de las
vas moleculares que controlan primeras etapas de ovognesis,
foliculognesis y maturation ovocito, que se determinan por la activacin
compleja y la interaccin de muchos factores que actan en una etapamanera especfica. Desde las primeras etapas de ovognesis en el ovario
fetal, factores de crecimiento (es decir, muchos members del TGFp
superfamilia) y la interaccin entre el medio ambiente y el desarrollo

somtico ovocito unidad de clulas germinales y la formacin del folculo

primordial. Durante los ltimos quince aos, muchos estudios han
contribuido en sealar la importancia de la interaccin entre los ovocitos
y sus clulas del cmulo surrounding; el ovocito se ha revelado como el
orchestrator en la promocin del desarrollo folicular y en asegurar su
propia competencia de desarrollo mediante la regulacin de la funcin de
clulas de la granulosa.
Esta informacin es de particular inters ya que contribuye a la
creacin de la base molecular que determina la adquisicin de la
competencia de los ovocitos; Adems, refuerza el nexo que debe existir
entre la ciencia bsica y la aplicacin clnica.
Debido a que la generacin in vitro de una gran fuente de vulos
maduros para el tratamiento de las mujeres infrtiles con pacientes de
reserva o cncer de ovario reducidos con ovarios criopreservados sigue
siendo un reto obvio, ms datos sobre la regulacin in vitro tienen que ser
adquiridos. El achievement de una visin precisa sobre la regulacin de
las transcripciones bajo ciertas condiciones in vitro y / o debajo de un
estmulo especfico podra contribuir tremendously al refinamiento de
metodologas de cultivo para el cultivo in vitro de folculos y en las
tcnicas de maduracin in vitro.
En los pacientes con trastornos de la fertilidad como arrest
maduracin de ovocitos, fallo ovrico prematuro, sndrome de ovario
poliqustico, y especialmente aquellas condiciones de infertilidad con
etiologa desconocida, la identificacin y la asociacin de alteraciones de
los patrones de genes especficos en estos conditions particulares
pueden ayudar a iniciar nuevas modalidades de tratamiento. Finalmente,
el assessment de ciertos genes y productos gnicos puede ser de uso
potencial para la generacin de frmacos que pueden mejorar su
fertilidad.
Agradecimientos
Los autores estn muy agradecidos con el Profesor Dr. Michel De Vos,
de la Universidad Libre de Bruselas (Blgica) para la correccin del texto
en English. La investigacin realizada en el Laboratorio de Biologa
folculo fue apoyado por el Fondo de Investigacin de Flandes (FWO
proyecto KN 1.5.040.09).References