CIENCIA DE LA SALUD

FRAMACIA Y BIOQUIMICA

Curso: Anlisis Instrumental

Docente: Huerta Avalos Aracely
Ciclo: IV
Unidad: Cuarto
Integrantes:
ngeles Cancin Cinthia
Quiroz Guizabalo Neylith

 Cules son los componentes y las funciones de un cromatgrafo de HPLC?

(Sesin 13 )
Aplicaciones principales: Anlisis cuantitativo general de mezclas multicomponentes
de orgnicos voltiles. Tcnica de separacin muy eficiente.
Fenmeno molecular: Reparto entre una fase de vapor y el substrato
Ventajas en el anlisis cualitativo: Separa materiales para su examen por medio de
otras tcnicas.
Ventajas en el anlisis cuantitativo: Aplicacin amplia a los materiales voltiles,
anlisis de multicomponentes, alta sensibilidad en casos especiales.
Muestra promedio deseable: 1 mg
Limitaciones del mtodo: Identifica los materiales solo en casos especiales
Limitaciones para la muestra: Presin de vapor mayor de 1 torr. a la temperatura de
entrada de la muestra

Cul es la funcin de la columna de un HPLC y de que est constituida?

La fase mvil en cromatografa de intercambio inico ha de tener las mismaspropiedades

generales que se requieren para los otros tipos de cromatografa. Es decir,ha de
solubilizar la muestra, tener una fuerza de disolvente que conduzca a tiempos deretencin
razonables (valores de k adecuados), y debe interaccionar con los solutos detal forma que
favorezca la selectividad (valores de adecuados). En cromatografainica las fases
mviles suelen ser disoluciones acuosas que pueden contener cantidadesmoderadas de
metanol u otros disolventes orgnicos miscibles con el agua; estas fasesmviles, a
menudo contienen especies inicas en forma de disolucin reguladora. Lafuerza eluyente
y la selectividad se determinan por el tipo y concentracin de esosingredientes aadidos.
En general, los iones de la fase mvil compiten con los iones delanalito por los puntos
activos del relleno del intercambiador inico. Cromatografa inica con columnas
supresoras. Como se ha sealadoanteriormente, la aplicacin de la cromatografia inica
para la determinacin deespecies inorgnicas no se desarroll debido a la falta de un
buen sistema de deteccinuniversal, que permitiera la determinacin cuantitativa basada
en las reas de los picoscromatogrficos. Los detectores de conductividad eran la
eleccin obvia para esteobjetivo. Estos detectores pueden tener una elevada sensibilidad,
son universales paralas especies cargadas y, como norma general, responden de una
forma predecible a loscambios de concentracin. Por otra parte, dichos detectores son
simples, baratos defabricar y mantener, fciles de miniaturizar, y por lo comn son
robustos y deprolongada duracin. La nica limitacin de los detectores de conductividad
result serun serio problema que impidi su uso generalizado. Esta limitacin proviene de
laelevada concentracin de electrlito que se requiere para eluir la mayora de los
ionesanalito en un tiempo razonable. En consecuencia, la conductividad de los
componentesde la fase mvil tiende a enmascarar la de los analitos, y por ello se
reduceconsiderablemente la sensibilidad del detector. En 1975, el problema de la elevada
conductividad del eluyente se resolvimediante la introduccin de la denominada columna
supresora que se utilizainmediatamente a continuacin de la columna de intercambio
inico. La columnasupresora est rellena con una segunda resina de intercambio inico,

que convierteeficazmente los iones del disolvente en especies moleculares poco

ionizadas, sin alterarlos iones del analito. Por ejemplo, cuando se separan y determinan
cationes, se elige enmuchas ocasiones el cido clorhdrico como reactivo eluyente, y la
columna supresoraes una resina de intercambio aninico en la forma hidrxido. El
producto de la reaccinen la columna supresora es agua. Esto es,H+ (ac) + Cl- (ac) +
Resina+ OH - (s) Resina+ C1- (s) + H2OEs evidente que los cationes analito no se
retienen en esta segunda columna. Para la separacin de aniones, el relleno supresor es
la forma cida de una resinade intercambio catinico. En este caso, el bicarbonato o
carbonato de sodio puedeutilizarse como agente eluyente. La reaccin en la columna
supresora es entoncesNa+ (ac) + HCO3- (ac) + Resina- H+ (s) Resina- Na+ (s) +
H2CO3 (ac) 4.25 .
Cul es la funcin de la fase estacionaria y de la fase mvil en un HPLC?
Las FASES ESTACIONARIAS en cromatografa de gases juegan un papel decisivo,
puesto que la fase mvil es inerte. Estas son en su mayoria lquidas como ya se ha
comentado y deben cumplir una serie de requisitos:
- baja volatilidad: su temperatura de ebullicin debe estar al menos 100 grados por
encima de la temperatura mxima de trabajo
- deben ser estables a temperaturas elevadas
- deben ser qumicamente inertes (no reaccionar)

LA FASE MOVIL:
Todos los equipos de HPLC incluyen un sistema de bombeo de fase mvil de alta presin
para forzar el paso de la fase mvil a travs de la columna, cuyo relleno muy compacto,
es responsable de una importante sobrepresin. Los requisitos del sistema 15 de bombeo
en HPLC son muy rigurosos ya que en algunos detectores las fluctuaciones en el flujo de
fase mvil dan lugar a fluctuaciones de la seal, produciendo un ruido de fondo que
impide la observacin de seales dbiles. En HPLC es deseable que el control y la
reproducibilidad del caudal de fase mvil sean mejores que el 0.5%. Existen diferentes
tipos de bombas de alta presin con distintas caractersticas, ventajas e inconvenientes.
Las ms frecuentes son bombas de pistn.
En HPLC, para una fase estacionaria concreta, la naturaleza de la fase mvil es el factor
clave en la separacin. Puede trabajarse en dos modalidades:
Isocrtica: la composicin de la fase mvil permanece constante durante la separacin
En gradiente: la composicin se va modificando durante la separacin. Para trabajar en
esta modalidad el cromatgrafo debe disponer de un sistema de programacin de
gradiente, que permita la mezcla reproducible de disolventes en distintas proporciones
durante la separacin cromatogrfica.
Un requisito tcnico importante es que los disolventes empleados deben carecer de gases
disueltos, ya que estos pueden provocar serios problemas por formacin de burbujas. Es
frecuente por ello la desgasificacin de los disolventes.

 Describa cuales son las aplicaciones de la cromatografa por HPLC.

1. Determinaciones cualitativas: datos de retencin para la caracterizacin de
la muestra.
2. Determinaciones cuantitativas
En un cromatograma de HPLC seale y describa el tiempo de retencin y el
tiempo vaco?
En un sistema cromatogrfico estable, el tiempo de retencin de un soluto particular es
constante, y por lo tanto puede utilizarse para identificar ese soluto. As, aunque la
cromatografa es primordialmente una tcnica de separacin, es posible identificar los
compuestos separados de una mezcla compleja por medio de sus tiempos de retencin
Cmo se puede calibrar un HPLC?
HPLC es una prueba de cromatografa lquida de alta resolucin que obliga a los
solventes a travs de una columna bajo altas presiones de hasta 400 atmsferas. La alta
presin hace que esta prueba cromatografia realizar ms rpido que otras pruebas de
cromatografa con mtodos de deteccin de HPLC automatizado y sensible. Para llevar a
cabo HPLC, una serie de estndares de calibracin que contienen los compuestos
especficos en los que usted est probando necesidad de estar preparados utilizando una
curva de calibracin. Cosas que necesitar
HPLC columna
muestras
agua HPLC
Normas para las muestras
Matraces aforados
Microsoft Word o Excel
Cul es el fundamento de la cromatografa de gases? (Sesin 14)
Entre las tcnicas cromatogrficas utilizadas con fines analticos, la cromatografa de
gases es probablemente la tcnica de ms amplia utilizacin; ninguna tcnica analtica
puede
ofrecer su capacidad de separacin o su sensibilidad a la hora de analizar compuestos
voltiles.
Por otra parte, el hecho de que con esta tcnica las mezclas sean separadas en fase
gaseosa,
establece los lmites de su utilizacin, que estarn marcados fundamentalmente por la
estabilidad
trmica de los compuestos a separar. Por lo general, la utilizacin de la cromatografa de
gases

est restringida a la separacin de compuestos con un peso molecular menor de 1000 a

una
temperatura mxima de trabajo de aproximadamente 400 EC; dentro de estos lmites,
como ya
se ha mencionado, la nica limitacin existente ser la estabilidad trmica de la muestra.

Qu aplicaciones tiene el cromatgrafo de gases?

El objetivo de la capacitacin es entregar conocimientos actualizados de esta tcnica
instrumental y relacionarlos con las problemticas de la industria a nivel nacional, para el
mejoramiento de la calidad en los procesos de anlisis de diferentes tipos de muestra de
las distintas reas empresariales.
Quienes participen en este curso recibirn los conocimientos tericos y prcticos
necesarios para el correcto desempeo de la tcnica de cromatografa gaseosa, que les
permitan la determinacin de analitos en diferentes matrices, comprendiendo los
fundamentos de la metodologa instrumental, y siendo capaz de realizar la eleccin del
mtodo de deteccin en relacin al analito en diferentes matrices, evaluando y
optimizando los parmetros analticos.
REQUISITOS PARA POSTULAR: Estar en posesin de un ttulo profesional universitario o
una licenciatura equivalente a la licenciatura que otorga la Universidad de Chile.