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UNIVERSIDADE DE SO PAULO

FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS


Programa de PsGraduao em Frmaco e Medicamentos
rea de Produo e Controle Farmacuticos

ESTABILIDADE FSICA E METODOLOGIA ANALTICA


PARA FORMULAES FARMACUTICAS CONTENDO
CETOCONAZOL

ANDRIA CRICCO PERARO

Dissertao para obteno do grau de


MESTRE

Orientadora:
Profa. Titular Erika Rosa Maria Kedor - Hackmann

SO PAULO
2001

Ficha Catalogrifica
Elaborada pela DivisA0 de Biblioteca e
Documentao do Conjunto das Qumicas da USP.

P427 e

Peraro, Andria Cricco


Estabilidade fsica e metodologia anaHtica para formulaes
farmacuticas contendo cetoconazol / Andria Cricco
Peraro. -- So Paulo, 2001.
116p.
Dissertao (mestrado) Faculdade de Cincias
Farmacuticas da Universidade de So Paulo. Departamento
de Farmcia.
Orientador: Kedor-Hackmann, Erika Rosa Maria
1. Medicamento: Controle de qualidade 2. Formulaes
farmacuticas 3. Estabilidade: Medicamento: Anlise farmacutica
I. T. 11. Kedor-Hackmann, Erika Rosa Maria, orientador.
615.19015

CDD

ANDRIA CRICCO PERARO

ESTABILIDADE FSICA E METODOLOGIA ANALTICA


PARA FORMULAES FARMACUTICAS CONTENDO
CETOCONAZOL

Comisso Julgadora
Dissertao para obteno do grau de
MESTRE

Profa Titular Erika Rosa Maria Kedor Hackmann


Orientadora/ Presidente

Profa Titular Maria Ins Rocha Miritello Santoro


1 Examinador

Profa Dra Magali Benjamin de Arajo


2 Examinador

So Paulo,27 de junho de 2001

O Senhor o meu rochedo,


e o meu lugar forte , a minha
fortaleza , em quem confio
Salmo 18

No basta saber, preciso aplicar.


No basta querer, preciso fazer
Goethe

Aos meus avs maternos Paulo Cricco e


Maria Riberti Cricco e paternos Alcino Peraro e
Alcinda Rogatto Peraro pela existncia de meu
melhor presente: meus pais .

profa Dra Magali Benjamin de Arajo , pela amizade


e pelo primeiro grande incentivo para a realizao deste trabalho

AGRADECIMENTOS

Profa Titular Erika Rosa Maria Kedor Hackmann, pela orientao, amizade e
colaborao.

Coordenadoria

do

Programa

de

Ps-Graduao

em

Frmaco

Medicamentos do Departamento de Farmcia da Faculdade de Cincias


Farmacuticas da Universidade de So Paulo.
Aos meus pais Ademar Peraro e Durvalina Cricco Peraro, pelo amor, incentivo
e fora.
Ao meu irmo Luciano Cricco Peraro, pela amizade, auxlio e incentivo.
Ao Adilson Cornlio dos Reis, pelo apoio, incentivo, fora e determinao.
profa Titular Maria Ins Rocha Miritello Santoro, pela amizade, incentivo e
sugestes.
profa Dra Maria Amlia Barata da Silveira pelo apoio e ateno.
s amigas Ftima Cristina Franco e Silva, Fernanda Pereira Ribeiro, Maria Rita
Rodrigues, Roberta Ribeiro Gonalez, pelo apoio, companheirismo e pacincia.
Aos amigos e colegas de graduao Adalberto Tsutsumi, Diogo Teixeira
Carvalho, Flvia Garcia, Irany Mesquita Coelho Moraes, Magda Damares de
Oliveira, Monica Silva Coelho Caracillo, Paula Marie Gardino Timmer, Oswaldo
Miguel Jnior e Roberto Parise Filho, pelo apoio e companheirismo.
Ao amigo e colega Dr Martin Steppe, pelas sugestes, apoio, companheirismo e
colaborao.

Aos colegas do Laboratrio de Controle de Qualidade Fsico- Qumico Adriana


Osrio, Aldo Adolar Maul, Andria Montoro Taborianski, Anil Kumar Singh,
Beatriz Resende Freitas, Daniella Almana G. C. Oliveira, Elizngela Abreu
Dutra, Ixis Ivette Taymes Hidalgo, Maria Gabriela de Arajo, Maria Segunda
Aurora Prado e Njla Mohamed Kassab, pelo auxlio, compreenso, amizade e
colaborao.
Dra Ins de Almeida Gonalves pelos espectros no infravermelho.
funcionria Iria Raimunda da Silva pelo carinho, compreenso e colaborao.
Ao prof.Titular Joo Fernandes Magalhes pelo apoio e incentivo.
s profas Dra Eliane Orsine e Dra Elizabeth Ap. Gianoto pelas correes e
sugestes.
Ao prof Dr Jorge Seferin Martins pelo apoio.
s funcionrias Luzanira Maciel e Regina Maura Rojas, pela colaborao.
s colegas Bianca Fedriz de Carvalho e Celina Y. Motizuki pelo auxlio na
execuo deste trabalho.
Ao colega do Laboratrio de Farmacotcnica Marcelo Guimares, pelo auxlio
no estudo das formulaes.
profa Dra Maria Valria Velasco, pela colaborao e correes.
s funcionrias do Laboratrio de Farmacotcnica Claudinia e Carla, pelo
fornecimento de matrias-primas.

Elizabete C. S. Paiva, secretria do Programa de Ps-Graduao em


Frmaco e Medicamentos, pela ateno e colaborao.
s funcionrias da Biblioteca do Conjunto das Qumicas Adriana de Almeida
Barreiros e Leila Aparecida Bonadio, pela reviso das referncias bibliogrficas.
Aos funcionrios da Secretaria de Ps-Graduao da Faculdade de Cincias
Farmacuticas da Universidade de So Paulo Benedita E. S. Oliveira, Elaine M.
Ychico e Jorge de Lima, pela ateno e colaborao.
Aos Laboratrios ISP, Chemy Union, EMS, pelo fornecimento de matriasprimas.
Fundao de Amparo Pesquisa de So Paulo ,FAPESP, pelos recursos
financeiros que possibilitaram a realizao deste trabalho.
Ao Senhor(a) assessor(a) da FAPESP pelas sugestes e correes realizadas
durante a execuo deste trabalho.
A todos que direta e indiretamente colaboraram pela realizao deste trabalho.

RESUMO

O cetoconazol um derivado imidazlico com atividade antifngica,


empregado no tratamento de grande variedade de infeces cutneas.
O objetivo deste trabalho foi a padronizao e a validao dos mtodos
analticos empregando-se a espectrofotometria no ultravioleta ( UV ) por
derivada de primeira ordem e a cromatografia lquida de alta eficincia ( CLAE )
para a determinao do cetoconazol em formulaes farmacuticas sob a forma
de creme obtidas no comrcio e formuladas em laboratrio. O estudo da
estabilidade fsica das formulaes obtidas em laboratrio foi realizado aps o
armazenamento sob diferentes condies de tempo, temperatura e umidade.
O mtodo espectrofotomtrico no UV por derivada de primeira ordem foi
padronizado a 257nm , no intervalo de concentrao de 5,0 a 30,0 g/mL em
metanol. O coeficiente de correlao linear foi de 0,9997,

o percentual de

recuperao foi de 100,24%. A mdia do desvio padro relativo foi de 0,56%


para a amostra simulada e 0,41% para a amostra comercial.
A determinao de cetoconazol por CLAE foi realizada empregando-se
uma coluna LiChrospher 100 RP- 18 ( 5m ) e fase mvel constituda por uma
mistura de trietilamina em metanol( 1:500 ) e soluo de acetato de amnio em
gua (1:200 ) na proporo

de 75 : 25 v/v, com vazo de 1,0 mL/min e

deteco no UV a 225 nm. O terconazol foi utilizado como padro interno. O


coeficiente de correlao linear foi de 0,9981, o percentual de recuperao foi
de 100,88%, a mdia do desvio padro foi de 2,13% para a amostra simulada e
1,25% para a amostra comercial.
A amostra simulada apresentou comportamento pseudoplstico e
tixotropia em decorrncia das medidas reolgicas obtidas experimentalmente.

ABSTRACT
Ketoconazole is an imidazole antifungal agent used in the treatment of
great variety of skin infectious diseases.
The aim of this research was the standardization and the validation of two
analytical methods, first derivative ultraviolet ( UV ) spectrophotometry and
high performance liquid chromatography( HPLC ) to determine ketoconazole in
commercial and simulated cream dosage forms preparations. The validated
methods were used to study the stability of the simulated cream after storage
under high temperatures and high percentage of humidity.
First derivative UV spectrophotometry was standardized at 257 nm, in a
range of concentration from 5.0 to 30.0 g/mL in methanol. The coefficient of
correlation was 0.9997 and the recovery average was 100.24%. The average
relative standard deviation ( RSD ) was 0.56% for simulated preparation and
0.41 % for commercial preparation.
The determination of ketoconazole by HPLC was performed using a
LiChrospher 100 RP-18(5m ) column, a mobile phase consisting of
triethylamine in methanol (1:500) and ammonium acetate solution in water(1:200
) 75:25 ( v/v ), a flow rate of 1.0 mL/min and UV detection at 225nm.
Terconazole was used as internal standard. The coefficient of correlation was
0.9981, the recovery average was 100.88%, the average relative standard
deviation ( RSD ) was 2.13% for the simulated preparations and 1.25% for the
commercial preparations.
The rheological measurements showed that the simulated preparation
presented pseudoplastic and thixotropic behavior.

SUMRIO

1 INTRODUO

2 REVISO DA LITERATURA

2.1 GENERALIDADES

2.2 ANTIFNGICOS
2.2.1 Antifngicos derivados dos imidazis

5
6

2.3 CETOCONAZOL
2.3.1 Aspectos gerais
2.3.2 Sntese
2.3.3 Estereoisomeria do cetoconazol
2.3.4 Mtodos de anlise de formulaes contendo cetoconazol

8
8
11
14
15

2.4 EMULSES
2.4.1 Definio
2.4.1.1 Componentes da emulso
2.4.2 Estudo de estabilidade de emulses
2.4.2.1 Reologia
2.4.2.2 Tamanho das partculas
2.4.2.3 Mtodos qumicos utilizados no estudo da estabilidade

17
17
18
18
21
22
23

3 OBJETIVOS

26

4. MATERIAL E MTODOS

27

4.1 Material
4.1.1 Solventes e Solues
4.1.2 Frmacos empregados como substncias de referncia
4.1.3 Matrias-primas
4.1.4 Equipamentos e acessrios
4.1.5 Formulaes estudadas
4.1.5.2 Obteno do creme com cetoconazol a 2%
4.1.6 Amostras

27
27
27
28
28
29
35
36

4.2 Mtodos
4.2.1 Identificao do cetoconazol matria-prima
4.2.1.1 Ponto de fuso
4.2.1.2 Cromatografia em camada delgada
4.2.1.3 Espectroscopia no infra - vermelho
4.2.1.4 Estudos Termoanalticos
4.2.2 Ensaios espectrofotomtricos preliminares
4.2.6 Ensaios cromatogrficos preliminares

37
37
37
37
37
38
38
39

4.3 Validao da metodologia analtica


4.3.1 Padronizao do mtodo espectrofotomtrico
4.3.1.1 Construo da curva de calibrao

40
40
41

4.3.1.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes


4.3.1.3 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme
4.3.2 Padronizao do mtodo cromatogrfico
4.3.2.1 Construo da curva de calibrao
4.3.2.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes
4.3.2.3 Determinao do limite de deteco e limite de quantificao
4.3.2.4 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme

41
42
44
45
45
47
47

4.4 Estabilidade fsica do cetoconazol em creme


4.4.1 Caractersticas organolpticas
4.4.2 Anlise de pH
4.4.3 Comportamento reolgico

49
50
50
51

5 RESULTADOS

52

5.1 Identificao do cetoconazol matria-prima


5.1.1 Ponto de fuso
5.1.2 Cromatografia em camada delgada
5.1.3 Espectroscopia na regio do infravermelho
5.1.4 Estudos Termoanalticos
5.1.5 Ensaios preliminares com as diferentes formulaes
do creme com cetoconazol a 2%

52
52
53
54
55
56
56

5.6 Validao da metodologia analtica


5.6.1 Padronizao do mtodo espectrofotomtrico por derivada de 1 ordem
5.6.1.1 Construo da curva de calibrao
5.6.1.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes
5.6.1.3 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme
5.6.2 Padronizao do mtodo cromatogrfico
5.6.2.1 Construo da curva de calibrao
5.6.2.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes
5.6.2.3 Determinao dos Limites de Deteco e Quantificao
5.6.2.4 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme

59
59
59
61
62
66
67
69
70
70

5.7 Estabilidade fsica do cetoconazol em creme


5.7.1 Caractersticas organolpticas
5.7.2 Anlise de pH
5.7.3 Comportamento reolgico

73
73
74
75

6 DISCUSSO

93

7 CONCLUSES

101

8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

103

1 INTRODUO
O cetoconazol um derivado imidazlico com atividade antifngica. Foi
lanado no Brasil sob a forma de comprimidos, contendo 200 mg de
cetoconazol, creme tpico e xampu na concentrao de 20 mg/g. O
cetoconazol na forma de comprimidos vem sendo substitudo por outros
antifngicos administrados por via oral

por apresentar alguns efeitos

colaterais indesejveis, como a hepatotoxicidade 82; 96. O cetoconazol creme


a 2% continua sendo muito utilizado no combate de diversas infeces
cutneas. ainda eficaz no combate dermatite seborrica e vrias
infeces causadas por diferentes espcies de fungos. Recentemente tem
sido usado contra acantomebase disseminada 88; 91. O cetoconazol xampu a
2% muito utilizado no combate caspa 44.
No incio do sculo os medicamentos tinham como origem fontes
magistrais e oficinais e no havia problema com a estabilidade, pois alm do
nmero reduzido de matrias-primas, as frmulas farmacuticas eram
preparadas e imediatamente fornecidas ao paciente o que implicava em
pouco ou nenhum tempo de armazenamento. Aps a 2a Guerra Mundial
muitos frmacos de origem natural foram isolados, suas frmulas qumicas
elucidadas e obtidos por sntese qumica. Novos frmacos foram sendo
sintetizados em nmero cada vez maior resultando em novas formulaes
farmacuticas. O processo da industrializao veio favorecer o arsenal
teraputico, mas trouxe problemas como: mudana na escala de trabalho
acarretando tempo de exposio fatores ambientais, risco de interao
fsica, qumica e microbiolgica. Houve mudanas na comercializao
trazendo problemas com o transporte e armazenamento dos produtos
farmacuticos.

A estabilidade de um produto farmacutico fator relevante e crtico,


principalmente em pases de clima variado. Nesse sentido, marcante a
influncia do excipiente, principalmente nos medicamentos de uso tpico 34.
A estabilidade definida como sendo o perodo de tempo em que um
produto mantm sua vida til, preservando as mesmas propriedades e
caractersticas que possua na ocasio de sua fabricao. Dentre os tipos de
estabilidade temos a estabilidade:- qumica, onde cada ingrediente ativo
mantm

sua

integridade

potncia

declarada,

entre

os

limites

especificados;- fsica, em que as propriedades fsicas originais incluindo


aparncia,

uniformidade

suspendibilidade

so

conservadas;

microbiolgica, na qual a esterilidade ou resistncia ao crescimento


microbiolgico mantida de acordo com os requisitos especificados; teraputica, em que deve permanecer inalterada a atividade farmacolgica
do produto e - toxicolgica, onde no pode ocorrer aumento significativo da
toxicidade97.
A degradao de princpios teraputicos durante o armazenamento e
o transporte o maior problema, principalmente em pases de clima tropical.
O prazo de validade, que em pases de clima temperado funciona como uma
maneira adequada de prever degradaes, pode no ser o mesmo nos
pases tropicais, mesmo que o medicamento seja armazenado em materiais
de acondicionamento apropriados 78.
Diante disto, temos que a introduo constante de novos frmacos na
teraputica, com estruturas qumicas das mais variadas, impe o estudo da
estabilidade dos medicamentos visando a garantia de prazos de validade
compatveis com o tempo necessrio para a comercializao e com as
exigncias da legislao.

2 REVISO DA LITERATURA
2.1 GENERALIDADES
As micoses so classificadas em superficiais e profundas ou
sistmicas. As micoses superficiais so predominantes e apresentam
distribuio universal. So manifestaes tegumentares causadas por
diferentes espcies e gneros de fungos que possuem em comum o
tropismo para invaso do tegumento cutneo. Caracterizam-se por produzir
leses na pele, mucosa, plos, unhas, dobras periungueais, conduto auditivo
externo zonas cutneo-mucosas, entretanto no invadem os tecidos mais
profundos

24, 26

. As micoses profundas ou sistmicas so causadas por

organismos que vivem livremente na natureza ou em materiais orgnicos


em decomposio. Estas infeces esto freqentemente limitadas a certas
reas geogrficas. Podem ser assintomticas, desenvolver sintomatologias
brandas e em alguns casos podem evoluir para doenas graves ou fatais 55.
As micoses superficiais podem ser reunidas em trs grandes grupos:
dermatofitoses, ceratofitoses e candidase04 .
A

disseminao

de

micoses

superficiais

tem

aumentado

significativamente por fatores como: convivncia em certos ambientes


coletivos, reaes climticas(calor, umidade), vesturios(tecidos sintticos,
sapatos apertados) que acumulam o calor e a umidade corporal. Contribuem
tambm para a disseminao destas micoses o emprego, em larga escala,
de contraceptivos orais, antibiticos de amplo espectro de ao e, at
mesmo, o excesso de higiene com o favorecimento de proliferao de
fungos oportunistas 26.
As micoses profundas ou sistmicas so raras, porm seu ndice tem
aumentado nos ltimos anos devido a infeces por fungos oportunistas92.

Os fungos so abundantes na natureza, podendo tambm estar


presentes no organismo humano.Espcies de Candida podem estar
presentes na mucosa digestiva, no trato respiratrio e genital. Outros, como
Cryptococcus e Aspergillus podem ser aspirados pelo homem e no causar
doena, devido ao sistema imune celular que o protege

45, 54

. Entretanto,

estados subnutricionais, organismos debilitados (aidticos, cancerosos,


diabticos),

modificaes

hospitalizao

e,

fisiolgicas

principalmente,

(gravidez),

avanos

longo

mdicos

na

tempo

de

teraputica

imunossupressora, como a quimioterapia do cncer, ou o tratamento de


transplantados renais, contribuem para aumentar o nmero de pacientes
vulnerveis. Estes estados propiciam o desenvolvimento de infeces por
fungos oportunistas e so causas freqentes de morbidade e de morte 45,

55

De uma maneira geral, o homem acometido pelas micoses,


independente de sexo, cor e idade. Somente as micoses superficiais so
transmitidas de homem para homem45.

2.2 ANTIFNGICOS
Por muitas dcadas, o desenvolvimento de substncias antimicticas
foi ofuscado pelo grande impulso dado bacteriologia95.
Antes de 1950, no existia tratamento confivel ou seguro para
micoses profundas e a teraputica das micoses superficiais dependia de
preparaes tpicas empricas51.
O tratamento de infeces por fungos iniciou-se com a descoberta
dos antibiticos polinicos representados pela nistatina e anfotericina B51. A
nistatina foi isolada por HAZEN e BROWN36 do Streptomyces noursei em
1949, estando disponvel comercialmente desde 195151. A anfotericina B foi
isolada do fungo Streptomyces nodosus, em 1956, por GOLD e
colaboradores26.

Apesar de suas desvantagens, como administrao intravenosa lenta


e efeitos adversos, tais como febre, nuseas e toxicidade renal, a
anfotericina B foi o nico antimictico fidedigno de amplo espectro de ao
at 1970.27;28;51
OXFORD e colaboradores70 isolaram, em 1938 a griseofulvina.
Entretanto sua ao antifngica s se tornou conhecida em 195827;51.
Em 1944, WOOLLEY103 constatou a atividade antifngica e
antibacteriana do benzimidazol. Esta informao foi, no entanto, ignorada,
uma vez que as infeces micticas no eram muito notadas na poca.
Uma nova gerao de substncias antifngicas iniciou-se com
produtos sintticos tais como, a flucitosina, sintetizada por DUSCHINSKY e
colaboradores39 em 1957, disponvel no comrcio desde 1963, e o tolnaftato
que foi preparado por MIYASAKI e colaboradores63 em 1963, cuja ao
antifngica foi estudada em 196851
JERCHEL
103

WOOLLEY

colaboradores

revisando

as

observaes

de

verificaram, em 1952, que alguns compostos benzimidazlicos

substitudos apresentavam notvel atividade antifngica. Este fato despertou


interesse em outros pesquisadores, iniciando-se, em 1969, com os
derivados imidazlicos, uma nova classe de antimicticos muitos dos quais
vm sendo introduzidos com xito nas ltimas dcadas23.

2.2.1 Antifngicos derivados dos imidazis


Em 1969, houve um grande avano no tratamento de micoses, com a
introduo dos derivados imidazlicos: o clotrimazol, o miconazol, o
econazol e em seguida o isoconazol101.
Estes compostos foram as primeiras substncias com atividade
teraputica contra um grande nmero de leveduras, dermatfitos, fungos
dimrficos e algumas bactrias gram-positivas95.
O cetoconazol foi sintetizado em 1978 e introduzido na teraputica em
1981 por HEERES e colaboradores38. Seu desenvolvimento significou um
avano na quimioterapia antifngica27.

Outros avanos na terapia antifngica foram representados pelo


terconazol de uso tpico, fluconazol, de uso oral e parenteral e itraconazol,
de uso oral. A terbinafina, alilamina sintetizada em 1978, utilizada na
teraputica de infeces dermatofticas.
Recentemente surgiu um novo antifngico tpico da classe dos
imidazis, o nitrato de sertaconazol, particularmente ativo contra espcies de
Candida15. Outro derivado imidazlico o voriconazol, que mostrou
melhores resultados contra Candida sp do que a anfotericina B, fluconazol e
itraconazol 09;22.
Recentes pesquisas com outros novos derivados imidazlicos tm
mostrado bons resultados: eberconazol apresenta maior eficcia contra
espcies de Candida e Cryptococcus neoformans, comparando-se com
clotrimazol e cetoconazol

96

; o SCH 5659205, mostrou melhor atividade

antifngica in vitro do que o fluconazol, itraconazol e cetoconazol. Outro


imidazlico o AFK-108, tem mostrado melhor atividade antifngica in vitro,
em relao a outros imidazlicos40.

2.3 CETOCONAZOL
2.3.1 Aspectos gerais
O cetoconazol um derivado imidazlico com atividade antifngica.
Quimicamente denominado cis-1-acetil-4-{4-[2-(2,4-diclorofenil)-2(1H-imidazolil-1-metil)-1,3-dioxilanil-4-metoxi]fenil}piperazina.

Sua

frmula

molecular C26H28Cl2N4O4 e seu peso molecular 531,4451:

Cl

Cl
O C
CH 3 CON

OCH 2

CH

Figura 1- Estrutura qumica do cetoconazol

Consta da Farmacopia Americana 24a edio e apresenta-se como


p branco, levemente amarelado, inodoro, facilmente solvel

em

diclorometano, solvel em cidos e em metanol, parcialmente solvel em


etanol e praticamente insolvel na gua 06, 11, 98.
No Brasil, o cetoconazol, foi lanado no comrcio sob a forma de
comprimidos, contendo 200mg de cetoconazol, creme tpico contendo
20mg/g e xampu tambm na concentrao de 20mg/g 16, 50.

As principais formulaes farmacuticas contendo cetoconazol


comercializadas no Brasil esto relacionadas no quadro abaixo 17, 50:

Quadro 1 - Principais formulaes farmacuticas contendo cetoconazol


comercializadas no Brasil
Nome comercial

Forma farmacutica

Laboratrio

Candiderm

creme

Ach

Candoral

comprimidos

Ach

Cetoconazol

comprimidos

Bergamo

Cetoconazol

comprimidos, creme, xampu Neo-Qumica

Cetonax

comprimidos, creme, xampu Janssen-Cilag

Cetonil

comprimidos, creme, xampu Stiefel

Cetozol

comprimidos, creme, xampu Cazi

Ketocon

comprimidos

Ketonan

comprimidos, creme, xampu Marjan

Miconan

comprimidos, creme, xampu Ativus

Nizoral

Cibran

comprimidos creme, xampu

Janssen-Cilag

Noriderm

comprimidos, creme

EMS

Cetoconazol

comprimidos

Davidson

Cetoconazol

comprimidos

Ducto

Cetoconazol Bunker

comprimidos creme xampu

Bunker

Cetozan

comprimido creme xampu

Royton

Cetoconazol

creme (Medicamento Genrico Teuto Brasileiro


Lei 9.787/99)

Cetoconazol

comprimidos

Teuto Brasileiro

Cetoconazol

comprimidos, creme

Green Pharma

Cetoconazol

comprimidos, creme, xampu Honorterpica

Fungoral

comprimidos, creme, xampu Farmion

Cetoconazol

comprimidos, xampu

Luper

Arcolan

creme

Galderma

10

As associaes com cetoconazol mais comercializadas no Brasil so:


Candicort

(cetoconazol,

betametasona,

sulfato

de

betametasona)
neomicina)

ambas

Novacort

(cetoconazol,

produzidas

por

Ach

Laboratrios S/A e Cetocort(cetoconazol, betametasona) de Laboratrio


Teuto Brasileiro 16, 17, 50.
O cetoconazol foi o primeiro antifngico ministrado por via oral.
Apresenta amplo espectro de atividade que inclui Candida sp, Cryptococcus
neoformans, Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum, Blastomyces
dermatitides e diversos dermatfitos29. O cetoconazol tambm tem sido
testado em pacientes portadores de cncer de prstata 89.
O cetoconazol creme a 2% tem sido usado topicamente no tratamento
de diversas infeces cutneas.
O cetoconazol um agente fungicida contra Pityrosporum ovale, um
importante fator etiolgico na dermatite seborrica. Diversos estudos clnicos
tm demonstrado a eficcia do tratamento antifngico com cetoconazol
tpico em dermatite seborrica 21, 93 . A eficcia do creme com cetoconazol
equivalente ao cetoconazol de uso sistmico, sem a desvantagem da
hepatotoxicidade, causada pelo uso sistmico repetido 30.
Vrios estudos provaram uma maior eficcia e segurana do
cetoconazol creme a 2% contra dermatite seborrica do que a hidrocortisona
creme a 1%, que tambm usada para essa finalidade 47, 68, 73.
Tinea pedis, Tinea cruris, Tinea corporis so infeces fngicas muito
comuns. So causadas por uma variedade de organismos e mostram uma
resposta muito varivel ao tratamento. Estudos demonstraram que o
cetoconazol creme a 2% tem sido eficaz e seguro no tratamento dessas
infeces . O cetoconazol atua contra as espcies de fungo Trichophyton,
Microsporum e Epidermophyton causadores dessas infeces56.
Para a Tinea pedis, conhecida como p de atleta, nem sempre os
dermatologistas indicam um tratamento tpico, mas estudos provaram que o
cetoconazol creme a 2% muito eficaz contra essa infeco31.
SAVIN e HORWITZ82 estudaram formulaes contendo cetoconazol
creme a 2% e creme placebo e ainda compararam com o cetoconazol usado

11

por via oral contra Tinea versicolor. Os resultados mostraram que o


cetoconazol realmente eficaz quando comparado com seu creme placebo,
e em comparao com cetoconazol via oral tambm mostrou maior eficcia
contra Tinea versicolor. Esses autores verificaram, nesse mesmo trabalho,
atravs de autoradiografia que a penetrao do cetoconazol se restringe ao
estrato crneo e estrato granuloso, no havendo absoro percutnea.
O cetoconazol creme a 2% mostrou maior eficcia quando comparado
com a mesma formulao contendo miconazol72.
Diversos estudos foram feitos para o tratamento eficaz de doenas de
pele de vrias origens e foram conseguidos bons resultados utilizando
combinaes

com

dipropionato

de

beclometasona(0,025%),

cetoconazol(2%) e fusidato de sdio(2%)85. Combinaes de fusidato de


sdio, butirato de clobetasona e cetoconazol, foram usadas no tratamento de
superinfeco por fungos e por bactrias 13;18;71.
Outro uso recente do cetoconazol creme a 2% est sendo no combate
a acantomebase disseminada, doena causada por uma ameba da espcie
Acanthomoeba sp, que causa infiltraes na pele podendo levar morte,
atacando principalmente pacientes imunocomprometidos 88;91 .
2.3.2 Sntese
A sntese do cetoconazol demonstrada no Esquema 1.
A 2,4 dicloroacetofenona submetida a uma ciclizao com glicerol
na presena do

benzeno-1-butanol e do cido p-toluenossulfnico(1),

levando formao do produto (2); este pela ao do bromo, transforma-se


em

cis-2-(2,4-diclorofenil)-2-bromometil-4-hidroximetil-1,3-dioxolano(3),

qual benzoilado com cloreto de benzoila, resultando o cis-2-(2,4diclorofenil)-2-bromometil-4-benzoiloximetil-1,3-dioxolano(4). A condensao


deste com 1-H-imidazol produz o cis-2-(2,4-diclorofenil)-2-(1-H-imidazol1metil)-4-benzoloximetil-1,3-dioxolano(5), o qual, em meio bsico,
debenzoilado,

dando

hidroximetil-1,3-dioxolano(6).

cis-2-(2,4-diclorofenil)-2-(1H-imidazol-1-metil)-4A

reao

do

(6)

com

cloreto

de

metanossulfonila produz o cis-2-(2,4-diclorofenil)-2-(1H-imidazol-1-metil)1,3-

12

dioxolano-4-metilmetanossulfonato(7).

Finalmente,

este

composto

condensado com 1-acetil-4-(4-hidrofenil)piperazina, por meio de hidreto de


sdio em benzeno-dimetilssulfxido, produzindo o cis-1-acetil-4-{4-[2-(2,4diclorofenil)-2-(1H-imidazolil-1-metil)-1,3-dioxilanil4metoxi]fenil}piperazina(cis I) 38.

Esquema 1- Sntese do cetoconazol(cis I)

13

14

2.3.3 Estereoisomeria do cetoconazol


O cetoconazol um antifngico com amplo espectro de ao. A base
de sua atividade antifngica o bloqueio da converso de lanosterol em
ergosterol, necessrio para manter a integridade da membrana dos
organismos celulares. O ponto especfico da interveno qumica parece
envolver a inibio da enzima do citocromo P-450.
O cetoconazol tem mostrado um efeito inibitrio similar na enzima
correspondente responsvel pela converso de lanosterol em colesterol em
humanos80. Em adio a isso, o cetoconazol tem mostrado inibio em
inmeras outras enzimas do citocromo P-450, envolvendo esteroidogneses
e metabolismo de frmacos. Um exemplo bem conhecido a diminuio de
nveis de andrognios em pacientes masculinos que usam cetoconazol por
um longo perodo. O cetoconazol tambm tem mostrado bloqueio adrenal na
esteroidognese e tem apresentado interferncia no metabolismo da
testosterona08,

47

. Essas propriedades tm levado o cetoconazol a ser

utilizado no tratamento contra o cncer de prstata e a sndrome de


Cushing80 .
Essa variedade de aes do cetoconazol, esto relacionadas com
seus ismeros, pois estes se diferenciam quanto s propriedades
farmacolgicas.
O cetoconazol uma mistura racmica de cis(2S,4R) e cis(2R,4S)
enantimeros. So numerosas as diferentes propriedades farmacolgicas
entre esses estereoismeros.
Os quatro estereoismeros do cetoconazol agem inibindo as enzimas
do citocromo

P450. Os ismeros cis(2S,4R) e (2R,4S) so mais potentes

inibidores da 14-dimetilase do lanosterol de mamferos do que os


diasteroismeros trans (2R,4R) e (2S,4S), por isso os ismeros cis possuem
atividade antifngica superior. O ismero cis(2S,4R) trs vezes mais
potente que seu similar cis (2R,4S)80
Diversos estudos buscam a sntese dos 4 estereoismeros do
cetoconazol, para a obteno de compostos mais puros08,

80

15

2.3.4 Mtodos de anlise de formulaes contendo cetoconazol


Para comprimidos contendo cetoconazol, ABOUNASSIF e ELSHAZLY01, sugeriram o uso de duas tcnicas rpidas e quantitativas. A
primeira foi uma titulao potenciomtrica em meio no-aquoso, onde o
ponto de equivalncia foi detectado graficamente por potenciometria
diferencial. A segunda tcnica foi a ressonncia nuclear magntica,
envolvendo a integrao dos sinais de prton do grupo metila do
cetoconazol, usando benzocana como padro interno.
DAS14 props para anlise de cremes e pomadas contendo
cetoconazol,

uma

rpida

identificao

quantificao

atravs

da

cromatografia em camada delgada e densitometria. O cetoconazol foi


separado dos excipientes utilizando uma mistura de propores iguais de
clorofrmio e lcool isoproplico. Em seguida foi aplicado em placa de slica
gel F254, utilizando como fase mvel n-hexano : clorofrmio : metanol :
dietilamina(50:40:10:1) e quantificado por densitometria.
A espectrofluorimetria foi o mtodo de anlise para xampu utilizado
por

EL-BAYOUMI

colaboradores20.

Usou-se

um

gel-xampu

com

cetoconazol a 2%.
Para a anlise de cremes e comprimidos contendo cetoconazol, foi
proposto por EL-SHABOURI e colaboradores19, a espectrofotometria,
baseada na formao de complexo de carga de transferncia. Esse
complexo foi formado pelo frmaco(cetoconazol) como doador de eltrons e
o iodo como receptor. O mtodo apresentou rapidez, simplicidade e
sensibilidade.
SADEGHII e SHAMSIPUR81 , sugeriram a extrao do cetoconazol
contido em creme e comprimido, utilizando uma mistura de 1:1 de um
complexo formado por cido pcrico em pH 2,5 e clorofrmio, e analisados
por espectrofotometria em 410nm.
A Farmacopia Americana 24a edio98, preconiza para comprimidos
a cromatografia lquida de alta eficincia, utilizando como fase mvel uma
mistura de diisopropilamina em metanol 1:500/soluo de acetato de amnio

16

em gua 1:200 na proporo de 7:3, coluna C-18 de 30cm x 3,9 mm e


detector UV a 225nm.
48, 67

HACKMANN e colaboradores

, propuseram para a anlise de

cetoconazol em comprimido e creme , a espectrofometria direta no


ultravioleta, usando como solvente o cido clordrico 0,01mol/L e leitura em
222 e 269nm; no mesmo trabalho foi proposta a cromatografia liquida de alta
eficincia(CLAE),

utilizando

como

fase

mvel

uma

mistura

de

diisopropilamina em metanol 1:500/ soluo de acetato de amnio em gua


1:200 na proporo a 8:2 e coluna LiChrospher 100RP-18(5m) Merck
medindo 12,5 cm x 4mm, detector a 225nm e terconazol como padro
interno.
LOW e WANGBOONSKUL

57

descreveram um mtodo para anlise

de cetoconazol comprimido, creme e xampu, utilizando a CLAE. Os autores


utilizaram uma coluna de octadecilslica medindo 200 x 4,6 mm. A fase
mvel foi constituda por acetonitrila 60% e ortofosfato dissdico
hidrogenado a 20 mM e 0,2% de dietilamina v/v, em pH 4,0., vazo de 1,5
mL/min e detector UV a 232nm
ARRANZ e colaboradores03

pesquisaram recentemente uma nova

metodologia de anlise para o cetoconazol, aplicando a eletroforese capilar,


uma tcnica moderna e que apresenta vantagens em comparao com
outros mtodos, como a alta eficincia em separaes, curto tempo de
anlise, uso de pequenos volumes de amostras e reagentes, alta
versatilidade e completa automao. Nesse trabalho os autores conseguiram
atravs da eletroforese capilar, a separao de uma mistura contendo
cetoconazol, econazol e clotrimazol. Essa tcnica tambm foi utilizada para
a anlise de medicamentos que contm esses antifngicos separadamente,
obtendo-se bons resultados, podendo essa tcnica ser utilizada no controle
de qualidade de amostras que contenham esses antifngicos.

17

2.4 EMULSES
2.4.1 Definio

Emulses so preparaes farmacuticas obtidas pela disperso de


duas fases lquidas imiscveis ou praticamente imiscveis.74
As emulses so o tipo mais comum de sistemas de liberao usados
em produtos cosmticos. Elas permitem que ampla gama de ingredientes
sejam liberados de maneira rpida e conveniente nos cabelos e na pele. Os
tipos de emulses usados so normalmente materiais semi-slidos formados
por uma poro aquosa(hidrfila) e uma poro oleosa(lipoflica). Essas
duas pores constituem as fases interna e externa da emulso. A fase
interna composta pelos materiais que formam as minsculas partculas
dispersas(ou emulsificadas). Normalmente, a fase externa(tambm chamada
de fase contnua) a mais abundante das duas.84
Emulso O/A e A/O: a mais tpica das emulses aquela na qual o
leo est disperso na gua. Compreensivelmente, ela chamada de
emulso leo-em-gua(O/A). Um outro tipo de emulso simples a emulso
gua-em-leo(A/O), na qual a gua torna-se emulsificada. Se uma emulso
do tipo O/A ou A/O depende de vrios fatores, entre os quais a
concentrao de cada um dos materiais no sistema, o tipo de emulsificante e
a tcnica empregada no processamento de criao da emulso.
Emulses mltiplas: alm da emulso simples, de duas fases,
podem ser desenvolvidos sistemas mais complexos. Essas emulses podem
ter vrias fases internas e so conhecidas como emulses mltiplas. So
verdadeiras emulses dentro de emulses. Por exemplo, a gua pode ser
dispersa num leo que, posteriormente, disperso numa outra fase aquosa.
Essa a chamada emulso gua/leo/gua(A/O/A). Outras emulses
mltiplas podem apresentar mais trs, quatro ou mais fases internas.

18

2.4.1.1 Componentes da emulso


Fase oleosa: esta fase formada por compostos no polares,
tipicamente incompatveis com a gua. Entre tais compostos podemos citar
gorduras, leos e cra e todos os seus derivados, inclusive alcois graxos,
cidos graxos, steres, hidrocarbonetos, glicerdeos e silicones.
Fase aquosa: esta parte da emulso formada pela gua e demais
materiais hidrfilos do sistema. Podem ser materiais umectantes, como
glicerina ou propilenoglicol, polmeros hidrossolveis que do espessamento
ou do condicionamento, conservantes, corantes,eletrlitos ou ingredientes
caractersticos, como extratos vegetais ou protenas hidrolisadas.
Emulsificantes: so os compostos que possibilitam a emulsificao,
estabilizando a disperso da fase interna na fase contnua. So tensoativos
que reduzem a tenso superficial entre as fases. Os emulsificantes tpicos
so molculas com uma poro hidrfila e uma poro lipoflica. So
classificados

como

aninicos,

catinicos,

no-inicos

ou

anfteros,

dependendo da natureza de seu principal grupo hidrossolvel. Ao serem


colocados na gua, os emulsificantes tm a tendncia de alinhar-se de modo
a minimizar a interao entre suas extremidades hidrfilas e lipfilas.
Havendo quantidade suficiente de emulsificante, podem formar-se estruturas
esfricas chamadas micelas. Essas estruturas so agregados nos quais as
caudas lipoflicas orientam-se para o centro da micela e as cabeas
hidroflicas formam a superfcie externa.84
As

emulses

so

usadas

oralmente,

parenteralmente

topicamente(cremes,por exemplo)07.
2.4.2 Estudo de estabilidade de emulses

Os sistemas emulsificados leo em gua ou gua em leo so


considerados

termodinamicamente

instveis79 .

uso

do

agente

emulsificante indispensvel para a formao da emulso, pois exibe a

19

habililidade de baixar a tenso superficial da gua ou de reduzir a tenso


interfacial entre duas substncias imiscveis 102 .
As preparaes farmacuticas e cosmticas so planejadas seguindo
as orientaes tcnicas e bsicas de boas normas de fabricao e devem
permanecer estveis por vrios meses aps a sua produo, mesmo quando
sujeitas s mais variadas espcies de agresses do meio ambiente, como
por exemplo: luz(radiaes ultravioleta,

visvel e infravermelho), altas e

baixas temperaturas, oxignio do ar, estresse mecnico em funo do


transporte, reaes qumicas e contaminao microbiana 10, 42, 76, 77, 79.
A emulso dever manter suas caractersticas originais de forma
aceitvel por um perodo finito, o qual normalmente denominado prazo de
validade 10, 42, 49, 76, 77, 79.
O estudo da estabilidade tem por objetivo prever se o produto
suportar as condies adversas do ambiente por determinado tempo, em
condies normais de armazenamento.Para isso, procede-se ao teste de
envelhecimento

acelerado

do

produto.

Este

teste

poder

fornecer

antecipadamente uma indicao dos problemas, que podero ocorrer nas


formulaes e dizer se o produto ou no estvel 10, 42, 49, 64, 69, 76, 77, 79.
Dentre os fatores que afetam o tempo de vida e merecem ateno
especial num planejamento do estudo de estabilidade envolvendo emulses,
destacam-se a temperatura, luz, umidade, efeitos mecnicos, tamanho das
partculas, comportamento reolgico e eficcia de conservantes 46, 77, 102 .
Os estudos sobre a desestabilizao das emulses mostraram que
existem quatro mecanismos principais que so a cremagem ou cremeao,
a floculao, a coalescncia e a inverso. Esses mecanismos, embora
explicados separadamente, ocorrem simultaneamente na emulso.
Cremagem: as gotculas em uma emulso possuem diferentes
densidades e esto, portanto, propensas a passar por um processo de
desestabilizao conhecido como cremagem. Trata-se de um processo
segundo o qual as partculas menos densas tendem a ir para o topo. A
emulso fica com duas sees, uma delas tendo maior quantidade da fase

20

interna e outra com maior quantidade da fase externa. A formao da


cremagem representa um problema pouco grave para a estabilidade porque
nenhuma das partculas realmente se combina. Esse fenmeno pode ser
revertido por agitao.
Floculao: durante este processo as gotculas da fase interna
formam uma associao fraca e reversvel. O fenmeno tipicamente
causado por uma carga inadequada sobre as micelas, o que reduz a fora
de repulso entre elas. As duas partculas permanecem distintas e no h
alterao nas dimenses. Isso pode ser demonstrado por meio de duas
bolas de bilhar e fazendo-as tocar uma na outra. Enquanto elas se tocam,
forma-se uma associao. No entanto, essa associao pode ser facilmente
rompida pela remoo de uma das bolas. Da mesma forma a floculao em
uma emulso pode ser revertida por meio da agitao do sistema. Por esse
motivo, a floculao um problema de pouca gravidade para a estabilidade
da emulso.
Coalescncia: quando duas gotculas da fase interna se aproximam
o suficiente, elas se unem para formar uma gotcula maior. Esse processo
representa um problema srio para a estabilidade, por ser irreversvel.
Quando um nmero grande de partculas coalesce, o resultado uma
separao completa das duas fases. Existe um fenmeno semelhante
chamado amadurecimento Ostwald segundo o qual as partculas da fase
interna tendem a combinar-se em dimenses iguais. Ele tambm pode levar
separao das fases.
Inverso: a separao uma das conseqncias do processo de
desestabilizao da emulso e a inverso de fase outra conseqncia.
Quando ocorre a inverso de fase, a fase externa torna-se fase interna e
vice-versa. Uma alterao dessas normalmente indesejvel porque as
caractersticas fsicas da emulso resultante sero diferentes da original. A
inverso e a separao de fases promovem a inutilizao de uma emulso.

21

medida em que as emulses se tornam instveis, sua composio


fsico-qumica pode variar. Podem-se usar diferentes mtodos para
determinar o grau de desestabilizao. O mtodo mais simples o da
observao direta, e verificaes de viscosidade e de pH. Outros mtodos
mais sofisticados envolvem tcnicas de disperso de luz, medio de
condutividade, avaliao microscpica e at ressonncia magntica
nuclear(RMN).64, 69, 84
As caractersticas reolgicas observadas no estudo da estabilidade
fsica das emulses so viscosidade da fase interna, viscosidade da fase
externa, proporo fase-volume, emulsificantes usados e sua quantia,
efeitos eletroviscosos, distribuio das partculas. Outros testes realizados
so aparncia e velocidade de sedimentao07.
As razes que podem levar a disperso e coalescncia so a
incompatibilidade qumica entre emulsificante e outro componente, a escolha
imprpria do tensoativo, a alta concentrao de eletrlitos, a baixa
viscosidade e a temperatura07.
2.4.2.1 Reologia
A reologia estuda as condies de fluidez e de deformao da
matria, que so influenciados por foras externas. O comportamento
reolgico do material pode ser medido como resultado dessas foras. Esse
estudo

envolve

determinao

de

caractersticas

complexas

das

substncias, como a viscosidade, a consistncia, a plasticidade e a


elasticidade. A viscosidade definida como a resistncia para o fluxo e
medida pela proporo da fora de cisalhamento(fora aplicada) e pelo
gradiente de velocidade(movimento). Se o gradiente muda durante a
aplicao, a mudana da fora pode ser descrita por uma curva de fluxo em
funo do aumento ou diminuio do gradiente de velocidade. Dividindo-se a
fora de cisalhamento pelo gradiente de velocidade, para cada ponto,
resultar a curva de viscosidade 53;66;86
A consistncia a propriedade apresentada pelos corpos de
resistirem s deformaes permanentes que uma dada carga tende a

22

provocar-lhe. No caso dos corpos fludos(gases ou lquidos newtonianos)


esta resistncia deformao depende da viscosidade do fluido, grandeza
fsica e mensurvel. Considerando o oposto destas condies tem-se os
corpos slidos,

cuja resistncia deformao s pode ser avaliada

empiricamente pela dureza. Tem-se tambm os lquidos no-newtonianos e


os corpos semi-slidos, como as emulses. A consistncia desse tipo de
material deriva da soma e da interferncia de fatores como as foras de
adeso e de coeso, elasticidade, viscosidade, tixotropia e estrutura
micelar.76
Os lquidos no-newtonianos e os corpos semi-slidos podem
classificar-se quanto s suas propriedades reolgicas em trs grupos
fundamentais, estabelecidos de acordo com o tipo de escoamento que
apresentam

quando

submetidos

uma

fora

externa:

plsticos,

pseudoplsticos e dilatantes76.
As emulses so consideradas lquidos no-newtonianos, pois no
seguem a lei de Newton de fluidos viscosos, ou seja, no mostram
proporcionalidade direta entre fora de cisalhamento e gradiente de
velocidade. Nesse caso, a viscosidade varia em funo de gradiente de
velocidade

53, 62, 90

. Tambm so consideradas pseudoplsticas, pois

mostram uma diminuio na viscosidade quando o gradiente de velocidade


aumenta 99, 100 .
A tixotropia

a capacidade de um sistema em apresentar baixa

viscosidade quando sofre cisalhamento e a capacidade de recuperar sua


estrutura aps determinado perodo de tempo66.
2.4.2.2 Tamanho das partculas
As partculas que compem a fase interna da emulso so
polidispersas(isto , apresentam dimenses variveis), e suas dimenses
mdias que so usadas na classificao da emulso. Por exemplo, se seu
dimetro mdio for menor do que 100 ela passa a ser referida como
emulso micelar. Com o dimetro de partculas cuja mdia esteja situada
entre 100-2000 a emulso passa a ser chamada de microemulso.

23

Partculas com dimetro mdio maior formam uma macroemulso, que o


tipo mais comum utilizado na formao de produtos cosmticos84.
Dentre os mtodos para avaliar a estabilidade de emulses, est o
exame microscpico, que determina o tamanho, a forma e a distribuio das
gotculas da fase dispersa das emulses.
A distribuio irregular do tamanho e a agregao de partculas, so
sinais de alerta quando se avalia o comportamento de um dado sistema em
funo de seu agente emulsificante

99,102

. Conseqentemente, deve-se optar

pelas emulses que forneam gotculas menores, quando tratadas em


condies semelhantes, visto que estas tornam-se mais estveis quanto
menores e mais uniformes forem o tamanho de suas partculas 49 .
A distribuio do tamanho de partculas determina a estabilidade ou
instabilidade da emulso, em funo do aumento do tamanho das partculas,
desde que estejam dentro dos padres especificados pela literatura de 0,5
10 m 25 .
2.4.2.3 Mtodos qumicos utilizados no estudo da estabilidade
A instabilidade das emulses tambm pode ser resultado da
instabilidade qumica (principalmente hidrlise de tensoativos), destruio
microbiana de um componente crtico da emulso, ou por processos
fotoqumicos.79
Os ensaios qumicos devem estabelecer se as substncias contidas
nas amostras, conservadas em condies adequadas, permanecem
inalteradas ou se parcial ou totalmente alteradas. Para isso necessrio
identificar a substncia e verificar se no h formao de produtos que
inicialmente no existiam; em seguida necessrio a determinao
quantitativa das substncias em ensaio e, se possvel, seus produtos de
alterao. Uma tcnica insubstituvel para identificao completa das
substncias inalteradas e de seus possveis produtos de alterao a
cromatografia em camada delgada. Os mtodos de anlises quantitativas
devem ser, por sua vez muito especficos de maneira a poderem distinguir
entre frmaco inalterado e produto de degradao: um mtodo que no

24

garante esta diferenciao no serve para estabelecer se um medicamento


estvel. Mtodos de anlise especficos podem ser conseguidos
empregando-se tcnicas como cromatografia em papel ou coluna,
cromatografia preparativa em camada delgada, cromatografia gasosa,
cromatografia lquida de alta eficincia, espectrofotometria no ultravioleta,
espectroscopia no infravermelho e ressonncia magntica nuclear 12.
sempre recomendvel, antes de se tirar concluses sobre a
estabilidade fornecida pelos dados experimentais de laboratrio, determinarse a preciso dos mtodos atravs da estatstica. Diversos fatores podem
alterar a estabilidade de um produto farmacutico. Cada componente quer
terapeuticamente ativo ou inativo, pode afetar a estabilidade. Outros fatores,
chamados extrnsecos como a temperatura, luz, ar (especificamente o
oxignio, dixido de carbono e vapores de gua), umidade, local de
acondicionamento tambm alteram a estabilidade. H tambm os fatores
intrnsecos
61,97

oxidao

como:

incompatibilidade,

pH,

hidrlise,

racemizao

O controle da estabilidade pode ser feito atravs de estudos


preliminares e acelerados. De acordo com a resoluo GMC 53/96 do
Mercosul

41, 65

o programa de estudo de estabilidade deve levar em

considerao o mercado para o qual est destinado o produto e as zonas


climticas em que ser utilizado. O Brasil se enquadra na zona climtica
IV32,

33, 41

que definida como quente e mida, portanto as condies de

armazenamento so 30C- 70% de Umidade Relativa(UR) para estudos


preliminares e para estudos acelerados as condies foradas de
armazenamento so 40C-75% UR para 6 meses ou 50C-90% de UR para
3 meses. O estudo preliminar da estabilidade pode ser realizado a partir de
uma exposio, por breve tempo, em condies drsticas como:
autoclavao sucessiva, alta temperatura, luz solar direta, uso de agentes
oxidantes e redutores, umidade e centrifugao. Todos esses ensaios
devero ser feitos com produtos do mesmo lote ou lotes diversos, mas com
substncias obtidas pelo mesmo processo de sntese. Esses ensaios podem
dar informaes sobre a vida mdia e possveis alteraes, permitindo a

25

seleo de melhores formulaes. No entanto, o estudo acelerado da


estabilidade deve ser baseado em: seleo de ensaios de envelhecimento,
de acordo com a forma farmacutica em exame; subdiviso das amostras
em material de acondicionamento de diversos tipos para selecionar o mais
adequado; esquema de verificao bem definido e o mais especfico
possvel, para conseguir em tempo mais breve e de forma mais segura, a
coleta de dados essenciais para avaliao da forma em exame

34, 35, 37

.O

objetivo do estudo acelerado verificar a necessidade de aumentar a dose


do princpio ativo e determinar o prazo de validade da substncia
analisada37, 97.

26

3 OBJETIVOS
-Seleo de mtodos analticos para a determinao do cetoconazol
em formulaes farmacuticas sob a forma de creme obtidas no comrcio e
simuladas em laboratrio;
-Validao

padronizao

da

metodologia

analtica

espectrofotometria derivada no ultravioleta, utilizada para a determinao do


cetooconazol em creme;
--Validao e padronizao da metodologia analtica cromatografia
lquida de alta eficincia, tambm utilizada para a determinao do
cetooconazol em creme;
-Estudo de estabilidade acelerada de formulaes farmacuticas
creme contendo cetoconazol;
-Estudo da estabilidade fsica do cetoconazol em preparaes
farmacuticas creme obtidas em laboratrio, sob diferentes condies de
armazenamento.
-Estudos reolgicos das amostras de creme obtidas em laboratrio e
armazenadas sob diferentes condies de temperatura e umidade em
tempos determinados.

27

4. MATERIAL E MTODOS

4.1 Material
Todos os reagentes utilizados foram de grau analtico e as matriasprimas de grau farmacutico.
4.1.1 Solventes e solues

-acetato de amnio(Merck)
-acetato de etila(Merck)
-acetato de sdio(Merck)
-cido actico glacial(Merck)
-cido clordrico(Merck)
-clorofrmio(Merck)
-diisopropilamina(Merck)
-etanol 96%(Merck)
-metanol para cromatografia(Merck)
-n-hexano(Merck)
-trietilamina(Merck)

4.1.2 Frmacos empregados como substncias de referncia


-cetoconazol padro (United States Pharmacopeia)
- terconazol matria-prima(Janssen-Cilag)

28

4.1.3 Matrias-primas
-Butilidroxitolueno B.H.T.(Galena)
-Cetiol V oleato de decila(Galena)
-Cetoconazol (Americhem-Laboratrios Prieto S/A(Panam-Panam))
teor : 99,73%
-Cetoconazol (Laboratrios Ach) teor : 100,92%
-Cetoconazol (Laboratrios EMS) teor : 99,5%
-Chemynol I imidazolidiniluria(Chemy Union)
-EDTA (Merck)
-Germal II diazolidiniluria(ISP do Brasil)
-Isocil PC metilcloroisotiazolinona e metilisoclorotiazolinona(Chemy
Union)
-Lanette Nlcool cetoestearlico; cetoestearilsulfato de sdio(Galena)
-Merguard 1200 metilbromoglutaronitrila e fenoxietanol (CalgonGalena)
-Nipagin metilparabeno(Galena)
-Nipazol propilparabeno(Galena)
-Polawax cera autoemulsionante(Galena)
-Propilenoglicol(Galena)
-Vaselina liquida(Galena)
4.1.4 Equipamentos e acessrios
-Agitador mecnico com hlice adaptvel- tica
-Balana analtica- OHAUS
-Balana eletrnica BG 200 GEHAKA
-Banho ultrasnico Thornton T14
-Clula DSC50 acoplada com acessrio para resfriamento
automtico(LTC50) IQ-USP
-Coluna cromatogrfica Merck LiChrospher 100RP 18(5m)
-Cromatgrafo lquido modelo CG 480, munido de injetor de loop fixo
de 20L

29

-Detector ultravioleta, modelo CG 435


-Espectrofotmetro infravermelho Bomem, com transformador de
Fourier
-Espectrofotmetro UV/Visvel Beckmann-DU srie70, acoplado a
computador e impressora, com cubeta de quartzo de 1cm de caminho tico
-Estufa tica regulada a 40C
-Estufa Fanem regulada a 50C
-Integrador modelo CG-200
-Manta aquecedora
-Medidor de ponto de fuso (Melting Point SMP1 Stuart Scientific)
-Membrana Millipore
-Milli Q Plus Milipore obteno de gua
-Placas de slica gel 60 F 254(Merck)
-pHmetro DM 21 Digimed TE 901
-Potes de plstico de poliestireno capacidade de 30 g
-Potes de vidro tipo III capacidade de 30 g
-Refrigerador Tropical Peabody, mantido a 10C
-Termobalana Shimadzu modelo TGA-50 IQ-USP
-Termo-higrmetro
-Viscosmetro rotacional Brookfield RVT com dispositivo
para pequenas amostras Spindle SC4-29

4.1.5 Formulaes estudadas

As formulaes do creme base 58, 59 para incorporar cetoconazol a 2%


preparadas em laboratrio e submetidas a estudos preliminares, foram as
seguintes:

30

Formulao 1

Nome comercial
Fase aquosa(A)

Nome qumico

Funo

%p/p

Propilenoglicol

5,00 Propilenoglicol

Umectante

Nipagin

0,15 Metilparabeno

Conservante

gua destilada q.s.p. 100,0


Fase oleosa(B)
Polawax

Veculo

%p/p
15,00 Cera auto-emulsionante

Cera auto-emulsionante
no inica

Vaselina lquida

5,00 Vaselina lquida

Emoliente

Nipazol

0,05

Propilparabeno

Conservante

Nome qumico

Funo

Formulao 2

Nome comercial
Fase aquosa(A)

%p/p

Propilenoglicol

3,00 Propilenoglicol

Umectante

0,15 Metilparabeno

Conservante

Nipagin

gua destilada q.s.p. 100,0

Veculo

Fase oleosa(B)

%p/p

Polawax

20,00 Cera auto-emulsionante

Cera auto-emulsionante
no inica

Vaselina lquida

2,00 Vaselina lquida

Emoliente

Nipazol

0,05 Propilparabeno

Conservante

Fase C

%p/p

cido ctrico

4,00

cido ctrico

Solubilizante

Trietanolamina

5,00

Trietanolamina

Neutralizante de pH

31

Formulao 3

Nome comercial
Fase aquosa(A)

Nome qumico

Funo

%p/p

Propilenoglicol

5,00 Propilenoglicol

Umectante

Nipagin

0,15

Metilparabeno

Conservante

EDTA dissdico

0,20

EDTA dissdico

Quelante

gua destilada q.s.p.100,0


Fase oleosa(B)

Polawax

Veculo

%p/p
15,00 Cera auto-emulsionante

Cera auto-emulsionante
no inica

Vaselina lquida

5,00 Vaselina lquida

Emoliente

Nipazol

0,02

Conservante

B.H.T.

0,05 Butilidroxitolueno

Fase C
Merguard 1200

Propilparabeno

Antioxidante

%p/p

0,30 Metildibromoglutaronitril e

Conservante

fenoxietanol
Formulao 4

Nome comercial
Fase aquosa(A)

Nome qumico

Funo

%p/p

Propilenoglicol

5,00 Propilenoglicol

Umectante

Nipagin

0,15

Metilparabeno

Conservante

EDTA dissdico

0,20

EDTA dissdico

Quelante

gua destilada q.s.p.100,0


Fase oleosa(B)

%p/p

Lanette N

15,00

Veculo
Disperso coloidal de

Base auto-emulsionante

alcois graxos e sulfato de


cetil-estearila
Cetiol V

3,00

Oleato de decila

Emoliente

Vaselina lquida

5,00

Vaselina lquida

Emoliente

Nipazol

0,02

Propilparabeno

Conservante

B.H.T.

0,05

Butilidroxitolueno

Antioxidante

32

Formulao 5

Nome comercial
Fase aquosa(A)

Nome qumico

Funo

%p/p

Propilenoglicol

5,00 Propilenoglicol

Umectante

EDTA dissdico

0,20

Quelante

EDTA dissdico

gua destilada q.s.p.100,0


Fase oleosa(B)
Polawax

Veculo

%p/p
15,00 Cera auto-emulsionante

Cera auto-emulsionante
no inica

Vaselina lquida

5,00 Vaselina lquida

Emoliente

B.H.T.

0,05 Butilidroxitolueno

Antioxidante

Fase C

%p/p

Merguard 1200

0,30 Metildibromoglutaronitril e

Conservante

fenoxietanol

Formulao 6

Nome comercial
Fase aquosa(A)

Nome qumico

Funo

%p/p

Propilenoglicol

5,00

Propilenoglicol

Umectante

EDTA dissdico

0,20

EDTA dissdico

Quelante

gua destilada q.s.p.100,0


Fase oleosa(B)

Polawax

Veculo

%p/p
15,00 Cera auto-emulsionante

Cera auto-emulsionante
no inica

Vaselina lquida

5,00

Vaselina lquida

Emoliente

B.H.T.

0,05

Butilidroxitolueno

Antioxidante

Fase C

%p/p

Chemynol I

0,50

Imidazolidiniluria

Conservante

33

Formulao 7

Nome comercial

Nome qumico

Funo

Fase aquosa(A)

%p/p

Propilenoglicol

5,00

Propilenoglicol

Umectante

EDTA dissdico

0,20

EDTA dissdico

Quelante

gua destilada q.s.p.100,0

Veculo

Fase oleosa(B)

%p/p

Polawax

15,00 Cera auto-emulsionante

Cera auto-emulsionante
no inica

Vaselina lquida

5,00 Vaselina lquida

B.H.T.

0,05 Butilidroxitolueno

Fase C

%p/p

Germal II

0,50

Emoliente
Antioxidante

Diazolidiniluria

Conservante

Nome qumico

Funo

Formulao 8

Nome comercial
Fase aquosa(A) %p/p
Propilenoglicol

5,00

Propilenoglicol

Umectante

EDTA

0,20

EDTA dissdico

Quelante

gua destilada q.s.p.100,0


Fase oleosa(B)

Polawax

Veculo

%p/p
15,00

Cera auto-emulsionante

Cera auto-emulsionante
no inica

Vaselina lquida

5,00

Vaselina lquida

Emoliente

B.H.T.

0,05

Butilidroxitolueno

Antioxidante

0,50

Imidazolidiniluria

Conservante

0,05

Mistura de isotiazolinonas

Conservante

Fase C

%p/p

Chemynol I
Isocil PC

34

Formulao 4A

Nome comercial
Fase aquosa(A)

Nome qumico

Funo

%p/p

Propilenoglicol

5,00 Propilenoglicol

Umectante

EDTA dissdico

0,20

Quelante

EDTA dissdico

gua destilada q.s.p.100,0


Fase oleosa(B)

%p/p

Lanette N

15,00

Veculo
Disperso coloidal de

Base auto-emulsionante

alcois graxos e sulfato de


cetil-estearila
Cetiol V

3,00

Oleato de decila

Emoliente

Vaselina lquida

5,00

Vaselina lquida

Emoliente

B.H.T.

0,05

Butilidroxitolueno

Antioxidante

Nome qumico

Funo

Formulao 4B

Nome comercial
Fase aquosa(A)

%p/p

Propilenoglicol

5,00 Propilenoglicol

Umectante

Nipagin

0,15

Conservante

Metilparabeno

gua destilada q.s.p.100,0


Fase oleosa(B)

%p/p

Lanette N

15,00

Veculo
Disperso coloidal de

Base auto-emulsionante

alcois graxos e sulfato de


cetilestearila
Cetiol V

3,00

Oleato de decila

Emoliente

Vaselina lquida

5,00

Vaselina lquida

Emoliente

Nipazol

0,02

Propilparabeno

Conservante

35

Formulao 4C

Nome comercial
Fase aquosa(A)
Propilenoglicol

Nome qumico

Funo

%p/p
5,00 Propilenoglicol

gua destilada q.s.p.100,0


Fase oleosa(B)

%p/p

Lanette N

15,00

Umectante
Veculo

Disperso coloidal de

Base auto-emulsionante

alcois graxos e sulfato de


cetilestearila
Cetiol V

Vaselina lquida

3,00

Oleato de decila

Emoliente

5,00

Vaselina lquida

Emoliente

As fases A e B foram aquecidas em manta aquecedora temperatura


de 70C. A fase aquosa(A) foi vertida sobre a oleosa(B) sob constante
agitao, com o auxlio de um agitador mecnico com hlice, at atingir
consistncia. Os componentes da fase C, juntamente com o cetoconazol
foram adicionados a uma temperatura em torno de 45C.

4.1.5.2 Obteno do creme com cetoconazol a 2%


Em um gral de porcelana triturou-se at p fino o cetoconazol,
exatamente pesado, a fim de se obter concentrao de 2%, e adicionou-se
uma pequena quantidade de propilenoglicol para solubiliz-lo. Acrescentouse aos poucos o creme base ao gral contendo cetoconazol e misturou-se
para obter uma formulao homognea.
Na Formulao 2 foi usado o cido ctrico para solubilizar o
cetoconazol, e trietanolamina para corrigir o pH.
Todas as formulaes foram acondicionadas em frascos de plstico e
de vidro com capacidade de 30g e submetidas a estudos preliminares em
diferentes condies de armazenamento.

36

4.1.6 Amostras
A formulao que se mostrou mais adequada para os estudos de
estabilidade e seleo de mtodos de anlise foi a Formulao 6(amostra
simulada):
Formulao 6

Nome comercial
Fase aquosa(A)

Nome qumico

Funo

%p/p

Propilenoglicol

5,00

Propilenoglicol

Umectante

EDTA dissdico

0,20

EDTA dissdico

Quelante

gua destilada q.s.p.100,0

Veculo

Fase oleosa(B)

%p/p

Polawax

15,00 Cera auto-emulsionante

Cera auto-emulsionante
no inica

Vaselina lquida

5,00

Vaselina lquida

Emoliente

B.H.T.

0,05

Butil hidrxitolueno

Antioxidante

Fase C

%p/p

Chemynol I

0,50

Imidazolidiniluria

Conservante

Cetoconazol

2,00

Cetoconazol

Antifngico

Dentre as vrias amostras de creme com cetoconazol que so


comercializadas no Brasil, a amostra utilizada foi o creme com cetoconazol a
2% do Laboratrio Teuto(Medicamento Genrico Lei 9.787/99):
Cetoconazol.............................................................................................20 mg
Excipiente( Metilparabeno, propilbarabeno, lcool etlico, EDTA dissdico,
Polawax , polissorbato 80, propilenoglicol) q.s.p. ......................................1 g

37

4.2 Mtodos
4.2.1 Identificao do cetoconazol matria-prima
A identificao do cetoconazol matria-prima foi realizada de acordo
com as monografias encontradas nas Farmacopias Americana98 e
Britnica06. Para o ensaio de identificao da matria-prima cetoconazol em
cromatografia em camada delgada foram utilizadas as amostras de trs
diferentes laboratrios( Ach, Americhem, EMS )e nos demais ensaios
utilizou-se a matria prima cetoconazol do laboratrio Americhem.
4.2.1.1 Ponto de fuso
Foi determinado o ponto de fuso da amostra de cetoconazol
utilizando o aparelho Melting Point SMP1 Stuart Scientific.
4.2.1.2 Cromatografia em camada delgada
Para a identificao atravs da cromatografia em camada delgada
foram preparadas solues de amostras de cetoconazol matria prima de
trs laboratrios diferentes na concentrao de 10mg/mL em clorofrmio e
aplicadas em cromatoplacas em vidro 20 X 20 cm recobertas com Silica gel
60 F254 Merck e comparadas com uma aplicao do cetoconazol padro,
tambm na concentrao de 10mg/mL. A fase mvel utilizada foi composta
pela mistura de n-hexano: acetato de etila: metanol: gua: cido actico
glacial( 27: 40: 30: 2: 1) . Para a revelao das manchas foi utilizado vapor
de iodo 97, 98 .
4.2.1.3 Espectroscopia no infravermelho
A amostra foi identificada por espectroscopia na regio do
infravermelho(IV). Primeiramente foi transformada em pastilha de KBr, e

38

determinada de acordo com as recomendaes da literatura11. O espectro


obtido foi comparado com um espectro relatado na literatura.
4.2.1.4 Estudos termoanalticos

Calorimetria exploratria diferencial (DSC)


Condies
fechado),

massa

experimentais:
de

amostra

cadinho
em

torno

de
de

alumnio(parcialmente
1,9mg,

atmosfera

de

nitrognio(50mL/min), programao de aquecimento desde temperatura


ambiente at 600C, razo de aquecimento de 10C/min.

Termogravimetria (TG)
-

calibrao do instrumento com padro de oxalato de clcio.

condies experimentais: cadinho de platina, massa de amostra


em

torno

de

4,5

nitrognio(50mL/min),

mg,

programao

atmosfera
de

dinmica

aquecimento

de

desde

temperatura ambiente at 900C, razo de aquecimento de


10C/min.
4.2.2 Ensaios espectrofotomtricos preliminares
Para a anlise do cetoconazol matria-prima e do cetoconazol creme
a 2% por espectrofotometria no UV, foram obedecidas as seguintes
condies experimentais: velocidade de 300nm/min, limite de absorbncia
de 0,000 a 1,000; cubeta de quartzo de 1 cm de espessura.
Os parmetros utilizados para a anlise do cetoconazol matria-prima
foram os seguintes:
-

solvente metanol ; concentrao de 25g/mL de cetoconazol


matria-prima; comprimento de onda mximo( max) 244 nm;

39

solvente metanol ; concentrao de 220g/mL de cetoconazol


matria-prima; max de 296 nm;

solvente cido clordrico 0,01 mol/L; concentrao de 270g/mL de


cetoconazol matria-prima; max 269nm.

Todas essas anlises foram efetuadas por espectrofometria direta no


UV e por espectrofometria derivada no UV.
As amostras de cetoconazol creme a 2% foram analisadas seguindo
os parmetros abaixo:
-

solvente cido clordrico 0,01 mol/L; concentrao 200g/mL de


cetoconazol ; max 269nm espectrofotometria direta no UV;
max 218,5nm espectrofotometria derivada no UV;

solvente cido clordrico 0,01 mol/L; concentrao 200g/mL de


cetoconazol ; max 269nm espectrofotometria direta no UV;
concentrao 25g/mL; max 218,5nm espectrofotometria
derivada no UV;

solvente metanol; ; concentraes 20g/mL e 5g/mL de


cetoconazol ; max 244nm espectrofotometria direta no UV;
max 257nm espectrofotometria derivada no UV.

4.2.6 Ensaios cromatogrficos preliminares


Escolha do solvente
Foram testados os solventes cido clordrico 1mol/L ; mistura de
diclorometano e metanol(1:1) e metanol.

40

Fase mvel
Foram testados os seguintes tipos de fase mvel:
-

mistura de trietilamina em metanol(1:500) e soluo de acetato de


amnio em gua(1:200) nas propores de 7:3 e 75:25;

- diisopropilamina em metanol(1:500) e soluo de acetato de amnio


em gua(1:200) nas propores 7:3 e 8:2.

Colunas cromatogrficas empregadas


- coluna cromatogrfica Nova Pack C18 300 mm x 3,9mm;
- coluna cromatogrfica: Merck LiChrospher 100 RP-18 (5m) em
LiChroCART medindo 4mm x 12,5mm.

4.3 Validao da metodologia analtica


4.3.1 Padronizao do mtodo espectrofotomtrico
Aps

terem

sido

realizados

os

ensaios

preliminares,

foram

estabelecidos os seguintes parmetros:


-

Intervalo de leitura dos espectros de absoro: 211 295 nm.

mximo para o cetoconazol: 244 nm em espectrofotometria


direta no UV e 257 nm em espectrofotometria derivada no UV de
primeira ordem.

Velocidade de varredura dos espectros de absoro: 300 nm/min

41

Solvente: metanol para cromatografia

Cubeta de quartzo de 1 cm.

Assentamento das ordenadas: 0,500

Delta lambda ( ):2 nm

Mtodo quantitativo: zero pico

Ordem da derivada: 1a

Verificou-se que a derivatizao dos espectros no UV direto melhora a


visualizao dos mesmos. Padronizou-se como mtodo de anlise a
espectrofotometria derivada no UV.
4.3.1.1 Construo da curva de calibrao
Foram pesados 25,0 mg de cetoconazol padro e transferidos para
balo volumtrico de 100,0 mL, completando-se o volume com metanol,
obtendo-se uma soluo final de 250,0 g/mL.
Desta soluo a 250,0 g/mL foram transferidas alquotas de 0,5; 1,0;
1,5; 2,0; 2,5 e 3,0 mL para bales de 25 mL e completou-se o volume com
metanol, obtendo-se concentraes de 5,0; 10,0; 15,0; 20,0; 25,0 e 30,0
g/mL de cetoconazol em cada balo volumtrico.
As derivadas das leituras das absorbncias destas solues foram
efetuadas a 257 nm, empregando-se metanol como branco.
4.3.1.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes
Especificidade
a) Preparao da soluo padro
Foram pesados 10,0 mg de cetoconazol padro e transferidos para
balo volumtrico de 100,0 mL, completou-se o volume do balo com
metanol, desta soluo transferiu-se uma alquota de 5,0 mL para balo
volumtrico de 25,0 mL, completou-se o volume com metanol e obteve-se
uma soluo de concentrao final de 20,0 g/mL.

42

b) Preparao da soluo da amostra creme simulada(formulao 6)


Foram pesados 500,0 mg de creme de cetoconazol a 2%,
equivalentes a 10,0 mg de cetoconazol e transferidos para balo volumtrico
de 100,0 mL, dissolvendo-se o creme com metanol, levou-se a soluo 15
minutos em ultrassom e depois completou-se o volume com metanol.
A soluo foi filtrada em papel de filtro quantitativo, rejeitando-se os
primeiros 10,0 mL e do filtrado transferiu-se uma alquota de 5,0mL para
balo volumtrico de 25,0 mL, completou-se o volume com metanol,
obtendo-se uma concentrao final correspondente a 20,0g/mL.
c) Preparo da soluo da amostra creme comercial
Essa soluo foi preparada conforme item 4.3.1.2b., utilizando a
amostra creme comercial de cetoconazol a 2%.
d) Preparo da soluo da amostra placebo
Pesou-se 500,0 mg de creme base sem cetoconazol, procedendo-se
conforme o preparo da soluo amostra de creme com cetoconazol (item
4.3.1.2 b).
e) Preparo da mistura de soluo padro e soluo da amostra
placebo
Foram pesados 10,0 mg de cetoconazol padro e transferidos para
balo volumtrico de 100,0 mL, completou-se o volume do balo com
metanol, desta soluo transferiu-se uma alquota de 5,0 mL para balo
volumtrico de 25,0 mL, e nesse mesmo balo transferiu-se uma alquota de
5,0mL da soluo placebo concentrada, completou-se o volume do balo
com metanol.
Todas essas solues foram analisadas por espectrofotometria
derivada no UV.
4.3.1.3 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme
Desvio padro relativo - Preciso

43

a) Preparao da soluo padro


Foi utilizada a mdia aritmtica das leituras de 3 solues padro de
20 g/mL preparadas como descrito no item 4.3.1.2.
b) Preparao da soluo amostra creme simulada(formulao 6)
Foram preparadas 10 solues de amostra creme simulada de
acordo com o descrito no item 4.3.1.2. Todas as solues com concentrao
final de 20,0 g/mL , foram analisadas por espectrofotometria derivada no
UV.
c) Preparao da amostra creme comercial
Foram preparadas 10 solues de amostra creme comercial de
acordo com o descrito no item 4.3.1.2. Todas as solues com concentrao
final de 20,0 g/mL, foram analisadas por espectrofotometria derivada no
UV.

Teste de recuperao - Exatido


a) Preparo da soluo padro
Foram pesados 25,0 mg de cetoconazol e transferidos para balo
volumtrico de 100,0 mL, completando-se o volume com metanol, obtendose uma soluo de concentrao final de 250,0 g/mL.
b) Preparo da soluo amostra creme comercial
Foi pesado 1,25 g da amostra creme comercial, equivalente a 25,0 mg
de cetoconazol e transferiu-se para balo volumtrico de 100,0 mL,
dissolvendo-se com metanol em banho de ultrassom por 15 minutos.
Completou-se o volume com metanol, obtendo-se soluo a 250,0 g/mL.
Filtrou-se essa soluo, rejeitando-se os primeiros 10,0 mL, desse
filtrado foram coletadas alquotas para o teste de recuperao.

44

c) Procedimento
Alquotas de soluo padro e de amostra creme foram transferidas
para balo volumtrico de 25,0 mL, conforme o procedimento
seguinte:

Amostra creme

Padro

Concentrao final

250,0 g/mL

250,0 g/mL

1,0 mL

________

10,0 g/mL

________

1,0mL

10,0 g/mL

1,0 mL

1,0mL

20,0 g/mL

1,0 mL

1,5 mL

25,0 g/mL

1,0 mL

2,0 mL

30,0 g/mL

Essas solues foram analisadas por espectrofotometria derivada no


UV.
4.3.2 Padronizao do mtodo cromatogrfico
Aps vrios experimentos, foram fixados os seguintes parmetros:

Fase mvel: mistura de trietilamina em metanol 1:500 e soluo de


acetato de amnio em gua 1:200 na proporo de 75:25.
A fase mvel foi filtrada em membrana para filtrao Millipore de

0,5m e desgaseificada antes de ser utilizada.

Vazo: 1,0 mL/min

Deteco no UV: 225 nm

Atenuao: 7 A.U.F.S.

Temperatura ambiente( 25C 1C)

Volume de injeo: 20 L

Coluna: LiChrospher 100RP-18(5mm) Merck

45

Solvente: metanol
As solues foram filtradas em unidades filtrantes HV MILLEX

0,45 m, antes de serem injetadas no cromatgrafo.


4.3.2.1 Construo da curva de calibrao
a) Preparao da soluo padro
Foram pesados exatamente 10,0 mg de cetoconazol e transferidos
para balo volumtrico de 100,0 mL, dissolvendo-se e completando-se o
volume com metanol, obtendo-se soluo de concentrao final de 100,0
g/mL de cetoconazol .
b) Preparo da soluo de padro interno
Foram pesados exatamente 25,0 mg de terconazol e transferidos
para balo volumtrico de 100,0 mL, dissolvendo-se e completando-se o
volume com metanol, obtendo-se soluo de concentrao final de 250,0
g/mL de terconazol .
c) Procedimento
Alquotas de 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0 e 8,0 mL da soluo padro
foram transferidos para balo volumtrico de 10,0 mL e em cada balo de
10,0 mL foi acrescentado uma alquota de 2,0 mL da soluo de padro
interno a 250,0 g/mL, completou-se o volume de cada balo com metanol,
obtendo-se solues com concentraes de 20,0; 30,0; 40,0; 50,0; 60,0;
70,0 e 80,0 g/mL de cetoconazol e 50,0g/mL de terconazol.

4.3.2.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes


Especificidade

46

a) Preparao da soluo padro


Foram pesados 10,0 mg de cetoconazol e transferidos para balo
volumtrico de 100,0 mL, completando-se o volume com metanol. Desta
soluo transferiu-se uma alquota de 4,0 mL para balo volumtrico de
10,0mL e uma alquota de 2,0 mL da soluo de padro interno a
250,0g/mL, completou-se o volume com metanol e obteve-se uma
concentrao final de 40,0 g/mL de cetoconazol e 50,0g/mL de
terconazol.
b) Preparao da soluo amostra creme simulada(formulao 6)
Foi pesado 1,0 g da amostra creme simulada, equivalente a 20,0 mg
de cetoconazol e transferido para balo volumtrico de 100,0 mL, adicionouse cerca de 80,0 mL de metanol e submeteu-se a soluo ao banho de
ultrassom por 15 minutos e completou-se o volume com metanol. Filtrou-se
esta soluo, rejeitando-se os primeiros 10,0 mL, do filtrado transferiu-se
uma alquota de 2,0 mL para balo volumtrico de 10,0 mL e uma alquota
de 2,0 mL de soluo de padro interno a 250,0 g/ml, completou-se o
volume com fase mvel e obtendo-se uma concentrao final de 40,0 g/mL
de cetoconazol e 50,0 g/mL de terconazol.
c) Preparo da soluo amostra placebo
Foi pesado 1,0 g de creme base sem cetoconazol e procedeu-se
conforme o preparo da soluo amostra creme, sem adicionar padro
interno, descrito anteriormente.

47

4.3.2.3 Determinao do limite de deteco e do limite de quantificao


Procedimento:
Foram preparadas solues contendo 20,0; 30,0; 40,0; 50,0 e 60,0
g/mL de cetoconazol e em cada soluo foi acrescentado 50 g/mL de
padro interno terconazol. Foram efetuadas trs determinaes para cada
concentrao e calculado o desvio padro entre os resultados obtidos a
partir das razes entre as reas de padro e padro interno.
O clculo para o limite de deteco(LD) e limite de quantificao(LQ)
foi realizado pelas frmulas94:

LD =

Desvio Padro mdio

X 3,3

Inclinao da curva de calibrao

LQ =

Desvio Padro mdio

X 10

Inclinao da curva de calibrao

4.3.2.4 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme


Desvio padro relativo - Preciso
a) Preparao da soluo padro
Foram preparadas trs solues padro conforme item 4.3.2.2a.e
efetuadas trs leituras de cada soluo padro. Utilizou-se a mdia
aritmtica dessas leituras como valor do padro.

48

b) Preparao da soluo de amostra creme simulada(formulao 6)


A soluo de amostra creme simulada foi preparada conforme
descrito no item 4.3.2.2b. Foram realizadas 10 determinaes para cada
amostra e os resultados foram analisados estatisticamente.
c) Preparao da soluo de amostra creme comercial
A soluo de amostra creme comercial foi preparada conforme
descrito no item 4.3.2.2b. Foram realizadas 10 determinaes para cada
amostra e os resultados foram analisados estatisticamente.

Teste de recuperao - Exatido


a) Preparao da soluo padro
Foram pesados 25,0 mg de cetoconazol padro e transferidos para
balo volumtrico de 100,0 mL, dissolvendo-se e completando-se o volume
com metanol, obtendo-se uma soluo de 250,0 g/mL.
b) Preparao da soluo de amostra creme comercial
Foi pesado 1,0 g da amostra creme, equivalente a 20,0 mg de
cetoconazol e transferiu-se para balo volumtrico de 100,0 mL, adicionouse cerca de 80,0 mL de metanol e submeteu-se essa soluo ao banho de
ultrassom por 15 minutos, depois completou-se o volume com metanol.
Filtrou-se esta soluo contendo 200,0 g/mL de cetoconazol. Esse filtrado
foi utilizado para preparar as solues diludas para realizar o teste de
recuperao.

49

c) Preparao da soluo de padro interno


Foram pesados 25,0 mg de terconazol padro e transferidos para
balo volumtrico de 100,0mL, dissolvendo-se e completando-se o volume
com metanol, obtendo-se uma soluo de 250,0g/mL.
Procedimento:
Alquotas de soluo padro e de amostra creme foram transferidas
para balo volumtrico de 25,0 mL, conforme procedimento que segue:

Amostra creme

Padro

Concentrao

250,0 g/mL

250,0 g/mL

final de cetoconazol

(filtrado)
1

4,0 mL

________

40,0 g/mL

________

4,0mL

40,0 g/mL

4,0 mL

1,0 mL

50,0 g/mL

4,0 mL

2,0 mL

60,0 g/mL

4,0 mL

3,0 mL

70,0 g/mL

Em todos os bales volumtricos foram transferidas alquotas de 5,0


mL da soluo de padro interno a 250,0 g/mL, sendo a concentrao final
de terconazol(padro interno) em cada balo 50,0 g/mL

4.4 Estabilidade fsica do cetoconazol em creme


a) Condies de armazenamento das amostras

50

Aps o preparo de um lote de 3 kg da Formulao 6(amostra


simulada), este foi dividido em amostras acondicionadas em frascos de vidro
tipo II e frascos plsticos de poliestireno com capacidade de 30 g. Foram
feitas coletas dessas amostras aps 48 horas do preparo e analisadas
quanto s caractersticas fsicas.
Em seguida, as amostras foram armazenadas em trs condies
diferentes: 10C, 40C e 75%U.R.(umidade relativa)* e 50C e 90%U.R.**.
*Para atingir a umidade de 75%U.R. e temperatura de 40C, as
amostras foram armazenadas em dessecador contendo soluo saturada de
acetato de sdio e armazenado em estufa a 40C. A umidade de 75% foi
medida atravs de termo-higrmetro.
** A umidade de 90%U.R. e temperatura de 50C foram atingidas
adicionando-se gua destilada em dessecador e armazenando- o em estufa
a 50C. A umidade de 90%U.R., tambm foi medida atravs de termohigrmetro.
b) Anlise das amostras de cetoconazol creme
As amostras a 50C e 90%U.R. foram coletadas e analisadas nos
tempos 7, 14, 28, 42 dias, as amostras a 40C e 75%U.R. nos tempos 7 e 28
dias e as amostras a 10C foram analisadas aps 1 ms de armazenamento.
As caractersticas fsicas foram analisadas atravs de sua aparncia,
pH e comportamento reolgico.
4.4.1 Caractersticas organolpticas
As

amostras

armazenadas

temperaturas

diferentes

observadas em relao a cor e odor em tempos pr determinados.


4.4.2 Anlise de pH

foram

51

O pH das amostras foi analisado nos tempos e temperaturas


determinados. Foram preparadas solues a 10% da amostra creme76. O pH
inicial dessa formulao foi de 5,6.
4.4.3 Comportamento reolgico
As anlises foram realizadas temperatura ambiente utilizando-se
13,0 g da amostra, em viscosmetro rotacional Brookfield e spindle SC4-29.
As amostras foram submetidas aos seguintes gradientes de velocidade:
0,125; 0,25; 0,625; 1,25; 2,50; 5,00; 12,50 e

25,00 1/s. O tempo

estabelecido para cada leitura do torque foi de 2 minutos.

52

5 RESULTADOS

5.1 Identificao do cetoconazol matria-prima


5.1.1 Ponto de fuso
Cetoconazol

Faixa de fuso C

Matria-prima

148 154

Padro USP

148 152

53

5.1.2 Cromatografia em camada delgada

Figura 5 - Cromatografia em camada delgada do cetoconazol


1- Padro cetoconazol
2- Matria-prima (Laboratrio EMS)
3- Matria-prima (Laboratrio Ach)
4- Matria-prima (Americhem)

O sistema eluente composto pela mistura de n-hexano; acetato de


etila; metanol; gua; cido actico glacial(27:40:30:2:1) permitiu a
identificao das manchas do cetoconazol padro e das amostras de
matria-prima cetoconazol. Os Rfs podem ser observados na Tabela 1.

54

Tabela 1 - Valores de Rf do cetoconazol padro e das amostras de


matria-prima
Amostra

Rf

Padro cetoconazol

0,67

Matria-prima EMS

0,66

Matria-prima Ach

0,67

Matria-prima Americhem

0,66

5.1.3 Espectroscopia na regio do infravermelho

Figura 6- Espectro infravermelho do cetoconazol matria - prima

55

5.1.4 Estudos termoanalticos

Figura 7 - Curva DSC do cetoconazol. Condies: cadinho de alumnio com massa


de amostra em torno de 1,9mg,sob atmosfera dinmica de N2(50 mL), da temperatura
ambiente a 600C, com razo de aquecimento de 10C/min.

Figura 8 Curvas TG/DTG do cetoconazol Condies: cadinho de platina com


massa de amostra entre 4,5-5 mg, sob atmosfera dinmica de N2(50 mL),
da temperatura ambiente a 900C, com razo de aquecimento de
10C/min.

56

5.1.5 Ensaios preliminares com as diferentes formulaes


do creme com cetoconazol a 2%
Todas as amostras de creme com cetoconazol a 2%, inicialmente
possuam colorao branca. Para cada amostra com cetoconazol submetida
diferentes temperaturas, preparou-se uma amostra de creme sem
cetoconazol e submeteu-se s mesmas condies. Todas as amostras de
creme base sem cetoconazol, submetidas diferentes temperaturas, no
sofreram alterao de cor.
As tabelas abaixo, indicam quais amostras sofreram alterao de cor,
pela influncia do tempo e temperatura:
Tabela 2 - Formulaes contendo cetoconazol a 2% submetidas a
temperatura de 10C
Tempo(dias) 7
Amostras
Formulao 1 S A
Formulao 2 S A
Formulao 3 S A
Formulao 4 S A
Formulao 5 S A
S A sem alterao

15

30

45

60

SA
SA
SA
SA
SA

SA
SA
SA
SA
SA

SA
SA
SA
SA
SA

SA
SA
SA
SA
SA

Tabela 3 - Formulaes contendo cetoconazol a 2% mantidas temperatura


ambiente
Tempo(dias) 7
Amostras
Formulao 1 S A
Formulao 2 Rsea
Formulao 3 S A
Formulao 4 S A
Formulao 5 S A
S A sem alterao

15

30

45

60

SA
Rsea
SA
SA
SA

SA
Rsea
SA
SA
SA

SA
Rsea
SA
SA
SA

SA
Rsea
SA
SA
SA

57

Tabela 4 - Formulaes contendo cetoconazol a 2% submetidas a


temperatura de 35C
Tempo(dias) 7
Amostras
Formulao 1 S A

15

30

45

60

SA

SA

Formulao 2
Formulao 3
Formulao 4
Formulao 5

Rsea
SA
SA
SA

Rsea
SA
SA
SA

Levemente
rsea
Rsea
SA
SA
SA

Levemente
rsea
Rsea
SA
SA
SA

Rsea
SA
SA
SA
S A sem alterao

Tabela 5 Formulaes contendo cetoconazol a 2% submetidas


temperatura de 40C
Tempo(dias) 7
Amostras
Formulao 1 S A
Formulao 2 Rsea
Formulao 3 S A

15

30

45

60

SA
Rsea
SA

SA
Rsea
SA

Formulao 4 S A

SA

SA

Formulao 5 S A

SA

SA

Rsea
Rsea
Levemente
marrom
Levemente
rsea
Levemente
amarela

Rsea
Rsea
Levemente
marrom
Levemente
rsea
Levemente
amarela

S A sem alterao

Tabela 6 - Formulaes contendo cetoconazol a 2% submetidas a


temperatura de 50C
Tempo(dias) 7
Amostras
Formulao 1 S A
Formulao 2 Rsea
Formulao 3 Marrom
Formulao 4 Rsea
Formulao 5 Amarela
S A sem alterao

15

30

45

60

Rsea
Rsea
Marrom
Rsea
Amarela

Rsea
Rsea
Marrom
Rsea
Amarela

Rsea
Rsea
Marrom
Rsea
Amarela

Rsea
Rsea
Marrom
Rsea
Amarela

58

Tabela 7 - Amostras submetidas temperatura de 50C e mantidas


temperatura ambiente por 1ms
Temperatura
Amostras
Formulao 4A
Formulao 4B
Formulao 4C
Formulao 6
Formulao 7
Formulao 8
S A sem alterao

Ambiente

50C

SA
SA
SA
SA
SA
SA

SA
Levemente rsea
SA
SA
SA
SA

59

5.6 Validao da metodologia analtica


5.6.1 Padronizao do mtodo espectrofotomtrico por derivada de 1a ordem
5.6.1.1 Construo da curva de calibrao
Os valores experimentais obtidos na construo da curva de
calibrao so descritos na Tabela 8.

A Figura 9 mostra a curva de

calibrao do cetoconazol obtida a 257 nm em espectrofotometria no UV


derivada e a Figura 10 mostra a sobreposio dos espectros derivados no
UV utilizados para a obteno da curva de calibrao.

Tabela 8 Valores experimentais utilizados na construo da curva de calibrao do


cetoconazol para o mtodo espectrofotomtrico.
Concentrao de leitura

dA/d *

(g/mL)

257 nm

5,00

0,0075

10,0

0,0148

15,0

0,0228

20,0

0,0304

25,0

0,0375

30,0

0,0444

*mdia de trs determinaes

60

Figura 9 Curva de calibrao do cetoconazol em metanol.


max 257nm. Ordem da derivada: 1a .
Dados estatsticos: b = 0,001487; a = 0,0002133;
Se = 0,000378; Ser = 1,44%; r = 0,9997.

Figura 10 - Sobreposio dos espectros de absoro do cetoconazol (5,0 a


30,0g/mL em metanol). max 257 nm. Ordem da derivada: 1a . Mtodo zero pico.

61

5.6.1.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes


Especificidade

A Figura 11 mostra a sobreposio dos espectros de absoro do


placebo(A), padro e placebo(B),padro(C) e amostra de cetoconazol creme
simulada(formulao 6) (D) em metanol.

Figura 11 Sobreposio dos espectros de absoro do placebo(A),


padro20g/ml e placebo(B),padro 20g/mL(C) e amostra de
cetoconazol creme 20g/mL(D) em metanol. max 257 nm.
Velocidade de varredura:300nm/min. Ordem da derivada = 1a .

62

5.6.1.3 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme


Desvio padro relativo - Preciso
Os resultados obtidos com a aplicao do mtodo espectrofotomtrico
a

amostra

creme

com

cetoconazol

simulada(formulao

6)

esto

representados na Tabela 9 e os resultados do tratamento estatstico esto


resumidos na Tabela 10 . J os resultados referentes a amostra comercial
esto representados nas Tabelas 11 e 12.

Figura 12 - Espectro de absoro no ultravioleta da amostra simulada de


cetoconazol creme. Concentrao de 20g/mL em metanol. Ordem da
derivada=1a . max 257nm.

63

Tabela 9 Resultados obtidos na determinao do teor do cetoconazol presente na


amostra creme simulada(formulao 6) empregando o mtodo espectrofotomtrico
derivado de primeira ordem
Amostra creme

Valor encontrado

Teor percentual

Valor Terico

g/mL

(%)

20,264

101,32

20,132

100,66

20,462

102,31

20,330

101,65

20,330

101,65

20,264

101,32

20,330

101,65

20,264

101,32

20,132

100,66

10

20,462

102,31

20g/mL

Tabela 10 Resultados da anlise estatstica na amostra de creme com cetoconazol


simulada(formulao 6) pelo mtodo espectrofotomtrico derivado de primeira
ordem
Desvio padro

Desvio padro RSD%

Intervalo de confiana %

0,566

0,56

101,49 0,402

64

Figura 13 - Espectro de absoro no ultravioleta da amostra comercial de


cetoconazol creme. Concentrao de 20g/mL em metanol.
Ordem da derivada=1a . max 257nm.

Tabela 11 Resultados obtidos na determinao do teor do cetoconazol presente na


amostra creme comercial empregando o mtodo espectrofotomtrico derivado de 1a
ordem

Amostra creme

Valor encontrado

Teor percentual

Valor Terico

g/mL

(%)

20,46

102,30

20,59

102,95

20,59

102,95

20,66

103,30

20,59

102,30

20,66

103,30

20,46

102,30

20,59

102,95

20,46

102,30

10

20,46

102,30

20g/mL

65

Tabela 12 Resultados da anlise estatstica na amostra de creme com cetoconazol


comercial pelo mtodo espectrofotomtrico derivado de 1a ordem
Desvio padro

Desvio padro relativo RSD%

Intervalo de confiana %

0,41819

0,41

102,76 0,2991

Teste de recuperao para o mtodo espectrofotomtrico - Exatido


A Tabela 13 apresenta os resultados do teste de recuperao na
amostra de creme comercial com cetoconazol.

Tabela 13 Resultados obtidos para o teste de recuperao pelo mtodo


espectrofotomtrico derivado de 1a ordempara a amostra de creme com cetoconazol.
Amostra

Quantidade de padro Quantidade de padro

Recuperao

adicionado(g/mL)

recuperado*(g/mL)

(%)

10,0

10,34

103,36

15,0

15,00

100,00

20,0

19,47

97,35

*mdia de trs determinaes

66

5.6.2 Padronizao do mtodo cromatogrfico

Figura 14 Cromatograma do cetoconazol padro(A)40g/mL e do terconazol


padro interno 50g/mL.Solvente: metanol. Condies cromatogrficas: Fase mvel:
mistura de trietilamina e metanol(1:500) em soluo de acetato de
amnio(1:200)75:25. Coluna cromatogrfica: Merck LiChrospher 100 RP-18
12,5mmX4mm. Vazo:1mL/min. Deteco no UV: 225 nm.

Figura 15 Cromatograma da amostra de cetoconazol creme comercial(A)40g/mL e


do terconazol padro interno 50g/mL.Solvente: metanol. Condies
cromatogrficas: Fase mvel: mistura de trietilamina e metanol(1:500) em soluo
de acetato de amnio(1:200)75:25 Coluna cromatogrfica: Merck LiChrospher 100
RP-18 12,5mmX4mm. Vazo:1mL/min. Deteco no UV: 225 nm.

67

Figura 16 Cromatograma da amostra de cetoconazol creme simulada(formulao 6)


(A)40g/mL e do terconazol padro interno 50g/mL.Solvente: metanol. Condies
cromatogrficas: Fase mvel: mistura de trietilamina e metanol(1:500) em soluo
de acetato de amnio(1:200)75:25 Coluna cromatogrfica: Merck LiChrospher 100
RP-18 12,5mmX4mm. Vazo:1mL/min. Deteco no UV: 225 nm.

5.6.2.1 Construo da curva de calibrao


A Figura 17 representa a curva de calibrao do cetoconazol. Os
valores experimentais obtidos para a construo da curva de calibrao so
descritos na Tabela 14.

68

Figura 17 Curva de calibrao do cetoconazol. Concentraes de 20 a 80 g/mL de


cetoconazol e 50g/mL de terconazol padro interno. Fase mvel: mistura de
trietilamina

em metanol(1:500)

em soluo

de

acetato

de

amnio

em

gua(1:200)75:25. Dados estatsticos: b = 0,02328; a = - 0,06066; Se = 0,0163


Ser = 1,48%; r = 0,99809

Tabela 14 Resultados experimentais utilizados na construo da curva de calibrao


pelo mtodo cromatogrfico.
Concentrao de leitura

Razo das reas

g/mL

AP/API*

20,0

0,43337

30,0

0,64810

40,0

0,83808

50,0

1,08589

60,0

1,29394

70,0

1,60948

80,0

1,81286

*mdia de trs determinaes para cada concentrao

AP = rea do padro
API = rea do padro interno

69

5.6.2.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes


Especificidade
A Figura 18 mostra os cromatogramas do placebo(creme base sem
cetoconazol)(A), da mistura de cetoconazol padro com creme placebo(B) e
do cetoconazol creme amostra simulada(formulao 6)(C).

Figura 18 Cromatograma A creme placebo sem cetoconazol; Cromatograma B


mistura de cetoconazol padro 40g/mL ,creme placebo e padro interno 50mg/mL;
Cromatograma C: cetoconazol creme 40g/mL e padro interno 50g/mL.
Condies cromatogrficas: Fase mvel: mistura de trietilamina e metanol(1:500) em
soluo de acetato de amnio(1:200)75:25. Coluna cromatogrfica: Merck
LiChrospher 100 RP-18 12,5mmX4mm. Vazo:1,0mL/min.
Deteco no UV: 225nm.

70

5.6.2.3 Determinao dos limites de deteco e quantificao


Os valores obtidos para a determinao dos limites de deteco e
quantificao do mtodo cromatogrfico so apresentados na Tabela 15.

Tabela 15 Valores obtidos para a determinao dos limites de deteco e


quantificao pelo mtodo cromatogrfico
Parmetro

Cetoconazol

limite de deteco(g/mL)

1,02

limite de quantificao(g/mL)

3,41

5.6.2.4 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme

Desvio padro relativo Preciso

Os valores experimentais obtidos na determinao quantitativa das


amostras comercial e simulada(formulao 6) de creme com cetoconazol
atravs da cromatografia lquida de alta eficincia(CLAE) podem ser
observados nas Tabelas16 e 17.

71

Tabela 16 Valores experimentais obtidos na determinao quantitativa da amostra


de creme com cetoconazol(comercial) por CLAE e anlise estatstica dos resultados
Amostra

Concentrao

Porcentual

de cetoconazol

obtido(%)

Desvio padro

Desvio padro

Intervalo de

relativo RSD %

confiana %

1,25

98,23 0,8756

(40g/mL)
1

38,86

97,15

38,96

97,41

39,84

99,61

39,03

97,57

39,54

98,84

39,22

98,04

38,60

96,49

39,88

99,71

40,00

100,00

10

39,00

97,49

1,2241

Tabela 17 Valores experimentais obtidos na determinao quantitativa da amostra


simulada de creme(formulao 6) com cetoconazol por CLAE e anlise estatstica.
Amostra

Concentrao

Porcentual

de cetoconazol

obtido(%)

Desvio padro

Desvio padro

Intervalo de

Relativo RSD%

confiana %

2,13

108,79 1,66

(40g/mL)
1

43,36

108,39

44,27

110,67

43,18

107,94

44,98

112,45

44,76

111,91

42,56

106,41

42,31

105,77

43,39

108,48

43,79

109,49

10

42,58

106,45

2,3188

72

Teste de recuperao para o mtodo cromatogrfico Exatido


A Tabela 18 apresenta os resultados do teste de recuperao na
amostra comercial de creme com cetoconazol.

Tabela 18 Resultados obtidos para o teste de recuperao pelo mtodo


cromatogrfico para a amostra comercial de creme com cetoconazol.
Amostra

Quantidade de padro Quantidade de padro

Recuperao

adicionado(g/mL)

recuperado*(g/mL)

(%)

10,0

10,09

100,90

20,0

20,06

100,30

30,0

30,43

101,44

*mdia de trs determinaes

73

5.7 Estabilidade fsica do cetoconazol em creme

5.7.1 Caractersticas organolpticas


Todas as amostras(formulao 6) mantiveram a cor branca inicial,
bem como seu odor. As amostras a 50C analisadas nos tempos 7,14 e 28
dias mostraram mudanas em sua consistncia, tornaram-se mais lquidas,
com aspecto de loo. As amostras de 42 dias a 50C tornaram-se ainda
mais lquidas. As amostras a 50C durante 63 dias, tornaram-se totalmente
lquidas. As amostras a 40C e a 10C no sofreram mudanas.

74

5.7.2 Anlise de pH
O pH inicial das amostras simuladas(formulao 6) foi de 5,6. A
Tabela 18 mostra os valores de pH dessas amostras nos determinados
tempo e temperatura.

Tabela 19 Resultados obtidos pela medida de pH das amostras de creme cetoconazol


simuladas
Condies de
armazenamento
dias

10C

40C 75%UR

plstico

vidro

plstico

-----

-----

5,8

5,8

5,6

5,6

14

-----

-----

-----

-----

5,6

5,6

28

-----

-----

5,5

5,5

5,6

5,7

30

5,4

5,4

-----

-----

-----

-----

42

-----

-----

-----

-----

5,6

5,6

60

5,6

5,6

-----

-----

-----

-----

63

-----

-----

5,3

5,3

5,7

5,7

----- no foi determinado

vidro

50C 90% UR
plstico

vidro

75

5.7.3 Comportamento reolgico

Os resultados dos estudos reolgicos das amostras de cetoconazol creme,


armazenadas nas condies: 10C, 40C 75%UR e 50C 90%UR podem ser
observados nas Tabelas 20 a 41 e nas Figuras 19 a 30.

Tabela 20 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


plstico e analisadas 48 horas aps seu preparo
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

5,0
6,5
10,5
15,0
20,0
24,0
32,5
42,5
43,0
33,0
24,5
18,5
14,0
9,0
5,5
4,0

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

100000
65000
42000
30000
20000
12000
6500
4250
4300
6600
12250
18500
28000
36000
55000
80000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

*Os resultados obtidos representam a mdia de duas determinaes

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
12500
16250
26250
37500
50000
60000
81250
106250
107500
82500
61250
46250
35000
22500
13750
10000

76

Tabela 21 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


vidro e analisadas 48 horas aps seu preparo
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

5,0
6,5
10,5
14,5
20,0
24,0
33,0
44,0
43,0
32,0
24,0
18,5
13,5
9,0
5,5
4,0

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

100000
65000
42000
29000
20000
12000
6600
4400
4300
6400
12000
18500
27000
36000
55000
80000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
12500
16250
26250
36250
50000
60000
82500
110000
107500
80000
60000
46250
33750
22500
13750
10000

* Os resultados obtidos representam a mdia de duas determinaes.


Tabela 22 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de
vidro e armazenadas a 40C e 75%UR por 7 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

6,5
8,75
13,75
19,25
24,25
28,00
39,50
50,75
51,75
31,75
22,75
17,50
13,5
9,25
6,00
4,25

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

130000
87500
55000
38500
24250
14000
7900
5075
5175
6350
11375
17500
27000
37000
60000
85000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
16250
21875
34375
48125
60625
70000
98750
126875
129375
79375
56875
43750
33750
23125
15000
10625

77

Tabela 23 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


plstico e armazenadas a 40C e 75%UR por 7 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

6,75
8,50
13,25
19,50
25,75
31,00
39,00
52,75
53,00
39,50
29,00
23,00
17,00
11,75
7,25
5,50

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

135000
85000
53000
39000
25750
15500
7800
5275
5300
7900
14500
23000
34000
47000
72500
110000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
16875
21250
33125
48750
64375
77500
97500
131875
132500
98750
72500
57500
42500
29375
18125
13750

* Os resultados obtidos representam a mdia de duas determinaes.


Tabela 24 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de
vidro e armazenadas a 50C e 90%UR por 7 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

3,25
3,75
5,75
9,25
12,0
14,0
18,75
23,75
22,5
17,25
12,75
10,00
7,75
5,00
3,00
2,00

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

65000
37500
23000
18500
12000
7000
3750
2375
2250
3450
6375
10000
15500
20000
30000
40000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
8125
9375
14375
23125
30000
35000
46875
59375
56250
43125
31875
25000
19375
12500
7500
5000

78

Tabela 25 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


plstico e armazenadas a 50C e 90%UR por 7 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

2,75
3,25
5,50
8,50
10,25
12,00
15,75
20,75
19,5
14,5
10,5
8,75
6,50
4,75
3,00
1,75

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

55000
32500
22000
17000
10250
6000
3150
2075
1950
2900
5250
8750
13000
19000
30000
35000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
6875
8125
13750
21250
25625
30000
39375
51875
48750
36250
26250
21875
16250
11875
7500
4375

* Os resultados obtidos representam a mdia de duas determinaes.


Tabela 26 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de
vidro e armazenadas a 50C e 90%UR por 14 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

2,75
3,5
6,5
9,00
10,00
11,75
17,50
23,25
27,00
14,75
9,50
7,75
6,25
4,75
2,50
2,00

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

55000
35000
26000
18000
10000
5875
3500
2325
2700
2950
4750
7750
12500
19000
25000
40000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
6875
8750
16250
22500
25000
29375
43750
58125
67500
36875
23750
19375
15625
11875
6250
5000

79

Tabela 27 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


plstico e armazenadas a 50C e 90%UR por 14 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

3,25
4,00
7,00
10,25
12,00
14,25
20,00
28,75
33,50
18,25
12,25
9,50
7,75
5,50
3,50
2,25

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

65000
40000
28000
20500
12000
7125
4000
2875
3350
3650
6125
9500
15500
22000
35000
45000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
8125
10000
17500
25625
30000
35625
50000
71875
83750
45625
30625
23750
19375
13750
8750
5625

* Os resultados obtidos representam a mdia de duas determinaes.


Tabela 28 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de
vidro e armazenadas a 40C e 75%UR por 28 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

7,00
8,75
13,75
19,50
27,75
34,50
42,00
61,75
60,50
43,00
32,25
25,00
18,25
12,50
7,75
5,75

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

140000
87500
55000
39000
27750
17250
8400
6175
6050
8600
16125
25000
36500
50000
77500
115000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
17500
21875
34375
48750
69375
86250
105000
154375
151250
107500
80625
62500
45625
31250
19375
14375

80

Tabela 29 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


plstico e armazenadas a 40C e 75%UR por 28 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

7,25
9,25
14,75
2075
28,50
34,00
42,50
56,00
56,25
41,75
30,00
23,00
17,00
11,75
7,75
5,50

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

145000
92500
59000
41500
28500
17000
8500
5600
5625
8350
15000
23000
34000
47000
77500
110000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
18125
23125
36875
51875
71250
85000
106250
140000
140625
104375
75000
57500
42500
29375
19375
13750

* Os resultados obtidos representam a mdia de duas determinaes


Tabela 30 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de
vidro e armazenadas a 50C e 90%UR por 28 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

2,25
3,00
4,75
6,00
8,00
9,25
12,5
26,0
17,0
14,75
9,25
7,25
4,75
2,75
1,75
1,00

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

45000
30000
19000
12000
8000
4625
2500
2600
1700
2950
4625
7250
9500
11000
17500
20000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
5625
7500
11875
15000
20000
23125
31250
65000
42500
36875
23125
18125
11875
6875
4375
2500

81

Tabela 31 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


plstico e armazenadas a 50C e 90%UR por 28 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

3,50
4,50
6,25
8,75
13,25
15,00
20,75
26,00
26,00
19,00
13,00
9,50
6,25
4,25
2,75
2,00

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

70000
45000
25000
17500
13250
7500
4150
2600
2600
3800
6500
9500
12500
17000
27500
40000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
8750
11250
15625
21875
33125
37500
51875
65000
65000
47500
32500
23750
15625
10625
6875
5000

*Os resultados obtidos representam a mdia de duas determinaes

Tabela 32 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


vidro e armazenadas a 10C e por 30 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

5,00
7,00
10,5
16,0
26,0
31,5
36,0
40,0
38,5
25,5
18,0
13,5
10,0
6,00
4,00
3,00

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

100000
70000
42000
32000
26000
15750
7200
4000
3850
5100
9000
13500
20000
24000
40000
60000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
12500
17500
26250
40000
65000
78750
90000
100000
96250
63750
45000
33750
25000
15000
10000
7500

82

Tabela 33 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


plstico e armazenadas a 10C por 30 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

5,00
6,50
10,0
14,5
23,5
25,5
35,5
46,0
42,5
31,5
22,0
16,5
12,0
7,50
5,00
3,50

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

100000
65000
40000
29000
23500
12750
7100
4600
4250
6300
11000
16500
24000
30000
50000
70000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
12500
16250
25000
36250
58750
63750
88750
115000
106250
78750
55000
41250
30000
18750
12500
8750

*Os resultados obtidos representam a mdia de duas determinaes

Tabela 34 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


vidro e armazenadas a 50C por 42 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

3,00
4,00
5,50
8,00
11,5
12,0
14,5
19,0
17,5
13,5
10,0
8,00
5,5
4,00
2,50
2,00

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

60000
40000
22000
16000
11500
6000
2900
1900
1750
2700
5000
8000
11000
16000
25000
40000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
7500
10000
13750
20000
28750
30000
36250
47500
43750
33750
25000
20000
13750
10000
6250
5000

83

Tabela 35 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


plstico e armazenadas a 50C por 42 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

2,00
3,00
5,00
7,00
9,00
9,50
16,0
22,5
18,0
14,0
8,00
6,50
4,00
3,50
1,50
1,00

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

40000
30000
20000
14000
9000
4750
3200
2250
1800
2800
4000
6500
8000
14000
15000
20000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
5000
7500
12500
17500
22500
23750
40000
56250
45000
35000
20000
16250
10000
8750
3750
2500

*Os resultados obtidos representam a mdia de duas determinaes.


Tabela 36 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de
vidro e armazenadas a 10C por 60 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

7,00
8,50
13,0
18,5
26,5
33,0
43,0
60,0
55,5
41,0
28,5
22,0
15,5
10,0
6,00
4,50

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

140000
85000
52000
37000
26500
16500
8600
6000
5550
8200
14250
22000
31000
40000
60000
90000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
17500
21250
32500
46250
66250
82500
107500
150000
138750
102500
71250
55000
38750
25000
15000
11250

84

Tabela 37 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


plstico e armazenadas a 10C por 60 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

6,00
8,50
13,0
19,0
26,0
30,5
43,5
53,0
54,5
37,5
27,0
21,0
15,5
10,0
6,00
4,50

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

140000
85000
52000
37000
26500
16500
8600
5300
6000
8200
14250
22000
31000
40000
60000
90000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
15000
21250
32500
47500
65000
76250
109375
132500
136250
93750
67500
52500
38750
25000
15000
11250

*Os resultados obtidos representam a mdia de duas determinaes


Tabela 38 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de
vidro e armazenadas a 40C por 63 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

8,00
10,0
15,0
21,5
31,0
39,5
48,0
69,0
70,5
43,5
35,0
26,0
18,5
13,0
8,00
6,00

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

160000
100000
60000
43000
31000
19750
9600
6900
7050
8700
17500
26000
37000
52000
80000
120000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
20000
25000
37500
53750
77500
98750
120000
172500
176250
108750
87500
65000
46250
32500
20000
15000

85

Tabela 39 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


plstico e armazenadas a 40C por 63 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

7,50
9,50
14,5
20,5
27,0
36,0
45,5
62,0
61,0
42,0
34,0
25,0
17,5
12,0
7,50
5,50

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

150000
95000
58000
41000
27000
18000
9100
6200
6100
8400
17000
25000
35000
48000
75000
110000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
18750
23750
36250
51250
67500
90000
113750
155000
152500
105000
85000
62500
43750
30000
18750
13750

* Os resultados obtidos representam a mdia de duas determinaes


Tabela 40 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de
vidro e armazenadas a 50C por 63 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

2,00
3,50
4,50
6,00
8,00
12,5
19,0
24,0
24,5
18,5
10,0
7,00
5,00
4,00
3,00
2,00

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

40000
35000
18000
12000
8000
6250
3800
2400
2450
3700
5000
7000
10000
16000
30000
40000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
5000
8750
11250
15000
20000
31250
47500
60000
61250
46250
25000
17500
12500
10000
7500
5000

86

Tabela 41 Resultados reolgicos das amostras de creme embaladas em frascos de


plstico e armazenadas a 50C por 63 dias.
Velocidade
(rpm)

Torque*

Fator

Viscosidade
(cps)*

Gradiente de
velocidade(1/s)

0,5
1,0
2,5
5,0
10
20
50
100
100
50
20
10
5,0
2,5
1,0
0,5

3,50
4,00
6,00
6,50
9,50
12,0
20,0
25,0
27,5
21,5
14,0
9,00
6,50
5,00
3,50
2,50

20000
10000
4000
2000
1000
500
200
100
100
200
500
1000
2000
4000
10000
20000

70000
40000
24000
13000
9500
6000
4000
2500
2750
4300
7000
9000
13000
20000
35000
50000

0,125
0,25
0,625
1,25
2,50
5,00
12,50
25,00
25,00
12,50
5,00
2,50
1,25
0,625
0,25
0,125

* Os resultados obtidos representam a mdia de duas determinaes

Fora de
cisalhamento
(N/m2)
8750
10000
15000
16250
23750
30000
50000
62500
68750
53750
35000
22500
16250
12500
8750
6250

87

48 horas
30 dias
60 dias

Fora de cisalhamento(N/m )

160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0
0

10

15

20

25

Gradiente de velocidade(1/s)

Figura 19 Representao grfica das medidas reolgicas do creme com


cetoconazol armazenado a 10C. Embalagem de vidro

48horas
30 dias
60 dias

Fora de cisalhamento(N/m )

140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0
0

10

15

20

25

Gradiente de velocidade(1/s)

Figura 20 Representao grfica das medidas reolgicas do creme com


cetoconazol armazenado a 10C. Embalagem de plstico.

88

48 horas
7 dias
28 dias
63 dias

160000

Fora de cisalhamento(N/m )

180000

140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0
0

10

15

20

25

Gradiente de velocidade(1/s)

Figura 21 Representao grfica das medidas reolgicas do creme com


cetoconazol armazenado a 40C e 75%UR. Embalagem de vidro.

48 horas
7 dias
28 dias
63 dias

Fora de cisalhamento(N/m )

160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0
0

10

15

20

25

Gradiente de velocidade(1/s)

Figura 22 Representao grfica das medidas reolgicas do creme com


cetoconazol armazenado a 40C e 75%UR. Embalagem de plstico.

89

120000

Fora de cisalhamento(N/m )

100000
80000
60000
40000

48 horas
7 dias
14 dias
28 dias
42 dias
63 dias

20000
0
0

10

15

20

25

Gradiente de velocidade(1/s)

Figura 23 Representao grfica das medidas reolgicas do creme com


cetoconazol armazenada a 50C e 90%UR. Embalagem de vidro.

100000

Fora de cisalhamento(N/m )

120000

80000
60000
40000

48 horas
7 dias
14 dias
28 dias
42 dias
63 dias

20000
0
0

10

15

20

25

Gradiente de velocidade(1/s)

Figura 24 Representao grfica das medidas reolgicas do creme com


cetoconazol armazenado a 50C e 90%UR. Embalagem de plstico.

90

Figura 25 Representao grfica das medidas reolgicas do creme


com cetoconazol armazenado a 10C. Embalagem de vidro.

48 horas
30 dias
60 dias
120000

Viscosidade(cps)

100000
80000
60000
40000
20000
0
0

10

15

20

25

Gradiente de velocidade(1/s)

Figura 26 Representao grfica das medidas reolgicas do creme com


cetoconazol armazenado a 10C. Embalagem de plstico.

91

48 horas
7 dias
28 dias
63 dias

180000
160000

Viscosidade(cps)

140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0
0

10

15

20

25

Gradiente de velocidade(1/s)

Figura 27 Representao grfica das medidas reolgicas do creme com


cetoconazol armazenado a 40C e 75%UR. Embalagem de vidro.
48 horas
7 dias
28 dias
63 dias
160000
140000

Viscosidade(cps)

120000
100000
80000
60000
40000
20000
0
0

10

15

20

25

Gradiente de velocidade(1/s)

Figura 28 Representao grfica das medidas reolgicas do creme com


cetoconazol armazenado a 40C e 75%UR. Embalagem de plstico.

92

100000
48 horas
7 dias
14 dias
28 dias
42 dias
63 dias

Viscosidade(cps)

80000

60000

40000

20000

0
0

10

15

20

25

Gradiente de velocidade(1/s)

Figura 29 Representao grfica das medidas reolgicas do creme com


cetoconazol armazenada a 50C e 90%UR. Embalagem de vidro.

100000

48 horas
7 dias
14 dias
28 dias
42 dias
63 dias

Viscosidade(cps)

80000

60000

40000

20000

0
0

10

15

20

25

Gradiente de velocidade(1/s)

Figura 30 Representao grfica das medidas reolgicas do creme com


cetoconazol armazenado a 50C e 90%UR. Embalagem de plstico.

93

6 DISCUSSO

O cetoconazol um derivado imidazlico com propriedades


antifngicas, encontrado no mercado brasileiro nas formas farmacuticas
comprimido, creme e xampu. O cetoconazol apresenta como efeito colateral
a hepatotoxicidade

82;96

. Com o surgimento de novos antifngicos menos

txicos, o cetoconazol vem sendo substitudo, principalmente na forma de


comprimidos, pelos derivados menos txicos. Entretanto outras formas
farmacuticas como creme, tem seu uso aumentado31;56;71;72;82;85 e j a forma
farmacutica xampu, vem sendo muito utilizada no auxlio ao combate a
caspa 44 .
A matria-prima cetoconazol utilizada na preparao dos cremes foi
devidamente identificada atravs dos testes de identificao recomendados
pelas

Farmacopia

CLARKES

Americana

24ed.,

Farmacopia

Britnica

06,11, 98

O ponto de fuso estava dentro da faixa de fuso indicada na


literatura.
No teste de identificao por cromatografia em camada delgada,
foram utilizadas matrias-primas cetoconazol de trs laboratrios diferentes,
e comparadas com amostra do padro de cetoconazol, sua colorao e seus
Rfs coincidiram.
O espectro na regio do infravermelho da amostra de cetoconazol foi
condizente com o espectro encontrado na literatura11.
A anlise trmica da amostra de cetoconazol foi utilizada para avaliar
a estabilidade trmica e a pureza do cetoconazol matria-prima. A anlise
trmica inclui todos os mtodos em que uma propriedade fsica de certa
substncia medida em funo da temperatura ou do tempo, enquanto a
substncia submetida a um aumento programado de temperatura 43.

94

Na curva de calorimetria exploratria diferencial (DSC) pode-se


observar um pico endotrmico com temperatura em torno de 149 a 152C e
H em torno de 104 a 114J/g que ocorre numa faixa de temperatura em que
a curva de termogravimetria( TG )e sua derivada ( DTG ) no mostram perda
de massa. Este evento caracterstico da fuso da substncia, e os dados
termoanalticos so concordantes com queles da literatura98 que indicam
faixa de fuso de 148 - 152C para o cetoconazol. Aproximadamente
350C o material fundido volatilizado , a perda de massa evidenciada na
curva TG(entre 310 - 400C).
A curva TG/DTG evidencia que o cetoconazol termoestvel at
300C e apresenta perda de massa entre 300 e 400C.
Atravs desses resultados verifica-se, que o cetoconazol matriaprima um produto muito estvel, sem consider-lo dentro de uma
formulao.
Para avaliao da estabilidade de formulaes contendo cetoconazol,
foram preparadas oito formulaes na forma de creme com cetoconazol a
2% e submetidas a diferentes condies de armazenamento. Procurou-se
utilizar os mesmos componentes de formulaes preparadas no comrcio.
Inicialmente desenvolveu-se a Formulao 1, que aps duas semanas em
estufa a 50C e 45 dias em estufa a 40C, mostrou colorao rsea.
Na Formulao 2, com o objetivo de melhorar a solubilidade do
cetoconazol para incorpor-lo na formulao, dissolveu-se o cetoconazol em
cido ctrico e corrigiu-se o pH da formulao com trietanolamina, mas em
uma semana os cremes apresentaram colorao rsea; somente o creme
que estava armazenado a temperatura de 10C, no sofreu alterao de cor.
Resolveu-se testar a Formulao 3. Acrescentou-se formulao
mais um conservante(Merguard 1200), um antioxidante(B.H.T.) e um
quelante(EDTA), todos com a finalidade de melhorar a estabilidade da
formulao. Com uma semana armazenados em estufa a 50C, mostraram
colorao marrom.

95

Aps esses testes, resolveu-se mudar a base emulsionante Polawax


para Lanette; A Formulao 4 foi submetida a diferentes estudos, para
observar mudanas fsicas, na tentativa de utilizar-se esse creme base.
Depois de 7 dias em estufa, o creme mudou para a colorao rsea. Devido
essas mudanas de colorao, testou-se os componentes em estufa a
50C, separadamente com cetoconazol, para verificar se h interao entre
o cetoconazol e algum componente. Preparou-se tambm as formulaes
4A,4B e 4C

para observar possveis alteraes devido a presena de

conservantes, antixiodante e quelante. Primeiramente obteve-se uma


formulao idntica a 4, depois uma formulao sem o uso de
conservantes(Nipagin e Nipazol)4A, outra formulao sem o uso de
antioxidante(B.H.T.) e quelante(EDTA) 4B e por ltimo uma formulao
isenta de conservantes, antioxidantes e quelantes denominada 4C. Essas
formulaes foram armazenadas em estufa a 50C por um ms. A
formulao 4B mostrou colorao rsea, indicando uma possvel interao
entre o cetoconazol e os conservantes utilizados.
Na Formulao 5, retirou-se os conservantes Nipagin e Nipazol e
se utilizou o conservante Merguard 1200. Aps uma semana em estufa a
50C, adquiriu colorao amarela.
Todos os componentes utilizados no preparo dessas formulaes
foram pesados e colocados em frascos individualmente com cetoconazol,
nas mesmas concentraes usadas no preparo da formulao. Esses
frascos contendo cada um dos componentes individualmente com
cetoconazol, foram submetidos a uma temperatura de 50C, tambm por 1
ms. Os frascos contendo cetoconazol, Nipagin e Nipazol adquiriram
colorao rsea e os frascos contendo cetoconazol e Merguard 1200
colorao marrom.
A partir desses resultados, verificou-se que a colorao rsea pode
ser devido a uma possvel interao do cetoconazol com os conservantes
Nipagin e Nipazol a altas temperaturas. A colorao marrom e amarela
pode ser devido a presena do conservante Merguard 1200, que muito
voltil e no suporta as temperaturas das estufas usadas nesse estudo.

96

Dentre as formulaes 6, 7 e 8, nenhuma sofreu alterao de cor .


Como um dos objetivos desse trabalho a obteno de uma formulao
estvel, estas trs formulaes mostraram-se mais adequadas, porque alm
de no sofrerem alterao de cor a altas temperaturas, possuem
conservantes que so compatveis com todos os componentes, e os agentes
antioxidante e quelante esto em concentraes indicadas pela literatura75,
garantindo proteo antimicrobiana e antioxidante.
As amostras 1, 2, 3, 4 e 5 foram armazenadas nas temperaturas:
ambiente, 10,35,40 e 50C por 60 dias. J as amostras 4A, 4B, 4C, 6, 7 e 8
foram submetidas a temperatura de 50C por at 1 ms 62;83.
Todos os testes com as formulaes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 4A, 4B e
4C(descritas em Material e Mtodo item 4.1.5) e com os componentes
separados, foram realizados em frascos plsticos e frascos de vidro, no
havendo nenhuma diferena nos resultados.
Aps a realizao destes testes com todas as amostras, a formulao
escolhida foi a 6, pois todos os seus componentes so facilmente
encontrados e aceitos no mercado e no sofreram alteraes nos testes
realizados.
Na tentativa de padronizar uma metodologia para analisar as
formulaes

contendo

cetoconazol,

foram

utilizados

os

mtodos

espectrofotomtricos no ultravioleta(UV) direto e derivada e a cromatografia


lquida de alta eficincia(CLAE).
Foram testados em espectrofometria direto e derivada no UV os
solventes cido clordrico 1mol/L; 0,1mol/L e 0,01mol/L; etanol e metanol
para a anlise do creme contendo cetoconazol. O solvente cido clordrico
0,01mol/L proporcionou bons resultados para a anlise do cetoconazol
matria-prima em espectrofometria derivada no UV no 218,5 nm e a
269nm em espectrofotometria direta. Para a anlise do creme com
cetoconazol utilizando-se essa metodologia, os resultados indicaram
interferncia dos excipientes nesses picos de absoro.

97

Com o solvente etanol os resultados foram insatisfatrios, pois no


obteve-se bons picos de absoro, descartando-se seu uso para a anlise
do creme com cetoconazol.
O solvente metanol foi utilizado para a padronizao do mtodo
espectrofomtrico , apresentando melhores resultados com a derivada de 1a
ordem do que com o mtodo direto, por isso essa foi a metodologia
escolhida. Estabeleceram-se os seguintes parmetros: intervalo de leitura
dos espectros de absoro: 211 295 nm; mximo 257 nm; velocidade de
varredura dos espectros de absoro: 300 nm/min; solvente: metanol para
cromatografia; cubeta de quartzo de 1 cm; assentamento das ordenadas:
0,500; delta lambda ( ):2 nm; mtodo quantitativo: zero pico; ordem
da derivada:1a . Construiu-se a curva de calibrao nas concentraes
5,0;10,0;15,0;20,0;25,0 e 30,0 g/mL . No houve interferncia dos
excipientes, mostrando que o solvente metanol realiza uma boa extrao do
cetoconazol nessa formulao. Esse mtodo mostrou bons resultados de
preciso e exatido, atravs dos resultados de desvio padro relativo (RSD)
e do teste de recuperao. Foram realizados testes com amostras comercial
e simulada. O coeficiente de correlao linear foi de 0,9997, o percentual de
recuperao foi de 100,24%. A mdia do desvio padro relativo foi de 0,56%
para a amostra simulada e 0,41% para a amostra comercial.
A anlise do cetoconazol por cromatografia lquida de alta
eficincia(CLAE), foi realizada de acordo com a tcnica descrita na
Farmacopia Americana 24a edio com algumas modificaes. Os
parmetros foram: mistura de trietilamina(substituindo a diisopropilamina
preconizada pela Farmacopia Americana) em metanol(1:500) e soluo de
acetato de amnio em gua(1:200) na proporo de 7:3 como fase mvel;
coluna Nova Pack C18 300 x 3,9mm; deteco no UV a 225nm. No foi
possvel obter a vazo recomendada pela Farmacopia Americana que de
3mL/min, o equipamento utilizado foi compatvel com vazo de 0,55mL/min.
Foi preparada uma soluo de cetoconazol a 20g/mL em diclorometano e
metanol(1:1)., obtendo-se um cromatograma para o cetoconazol com tempo
de reteno muito alto, cerca de 24 min, o que inviabilizou esse sistema.

98

Com a fase mvel recomendada pela Farmacopia Americana


diisopropilamina em metanol (1:500) acetato de amnio em gua(1:200), na
proporo 7:3, obteve-se tempo de reteno em torno de 9 min para o
cetoconazol e 15 min para o padro interno terconazol. Alterando-se a
proporo dessa fase mvel para 8:2, obteve-se melhores tempos de
reteno para o cetoconazol e terconazol.
O metanol apresentou melhores resultados de preciso e exatido,
quando comparado com o cido clordrico, por isso foi escolhido como o
solvente para a extrao do creme.
As duas fases mveis testadas podem ser empregadas na aplicao
da metodologia, mas para a realizao desse trabalho, foi utilizada a fase
mvel[mistura de trietilamina em metanol 1:500 em soluo de acetato de
amnio em gua 1:200(75:25)], pois a trietilamina um produto mais
acessvel do que a diisopropilamina. Os resultados obtidos foram:
coeficiente de correlao linear = 0,9981,
100,88%,

percentual de recuperao =

mdia do desvio padro =2,13% para a amostra simulada e

1,25% para a amostra comercial.


Portanto as duas metodologias analticas: espectrofotometria derivada
no UV e cromatografia lquida de alta eficincia podem ser utilizadas para a
determinao do teor de cetoconazol em creme.
A estabilidade do cetoconazol um assunto que tem sido discutido
por diversos autores. SKIBA e colaboradores87 avaliaram a estabilidade do
cetoconazol em formulaes aquosas, em funo do pH e da concentrao
do antioxidante butilidroxidotolueno(BHT), e verificaram que a formulao
mais estvel apresentou pH 7 e 0,1% de BHT e seu tempo de prateleira foi
estipulado em 15 meses.
Na formulao estudada no presente trabalho, o pH 5,6 e a
concentrao de BHT de 0,05%, mas so utilizados conservante
imidazolidiniluria e quelante EDTA, o que pode aumentar a estabilidade
qumica e microbiolgica da formulao.

99

Em outra pesquisa, realizada por KUMER e colaboradores52, foi


estudada a estabilidade do cetoconazol em solues etanlicas. As solues
foram armazenadas em frascos de vidro transparente e mbar, ambos em
temperatura ambiente e a 8C por 29 dias. As amostras foram avaliadas
pela cromatografia lquida de alta eficincia. Durante esse perodo no
houve diminuio significativa na concentrao de cetoconazol.
Outro estudo de estabilidade utilizando cetoconazol foi realizado por
ALLEN E ERICKSON III02. Foram preparadas solues de cetoconazol a
20mg/mL em soluo de uma mistura 1:1 de Ora-Sweet e Ora-Plus e xarope
de cereja. Essas solues foram armazenadas a 5C e 25C, ao abrigo da
luz, durante 60 dias e analisadas por CLAE. Estas solues tambm se
mostraram estveis.
No presente trabalho, visando avaliar a estabilidade fsica do creme,
que uma emulso O/A, foram feitas anlises reolgicas das amostras,
mostrando que essa formulao tem comportamento no-newtoniano
pseudoplstico,

pois

de

acordo

com

graficamente, a viscosidade

diminui

as

anlises

representadas

com o aumento do gradiente de

velocidade, em todas as amostras. No houve diferena significativa na


viscosidade em relao s amostras armazenadas em frasco de plstico e
frasco de vidro.
A tixotropia das amostras a 48 horas permaneceu praticamente a
mesma, verificando-se que essas amostras tem a capacidade de recuperar
sua

estrutura

aps

determinado

perodo

de

tempo.

As

amostras

armazenadas a 10C e 40C tiveram um pequeno aumento na tixotropia,


comparando-se com as amostras de 48 horas, e as amostras a 50C,
tiveram uma diminuio na tixotropia.

Observando-se os grficos de

reologia( Figuras 19 a 24 ) pode-se verificar que as amostras analisadas no


perodo de 7 dias at 63 dias , j no apresentaram grande diferena nos
valores de tixotropia, isso provavelmente deve-se a uma maturao da
formulao.
Analisando os resultados reolgicos atravs das Tabelas 19 a 41,
verificou-se uma variao da viscosidade entre as amostras armazenadas

100

10C, 40C 75%U.R. e 50C 90% U.R.. As amostras armazenadas a


10C tiveram um pequeno aumento na viscosidade aps 60 dias. As
amostras armazenadas a 40C 75%U.R. tiveram um aumento da
viscosidade em relao ao tempo de armazenamento, j as amostras a 50C
90% U.R. sofreram uma diminuio na viscosidade, comparando-se com
as amostras iniciais.
As caractersticas organolpticas cor e odor, foram mantidas iguais
aos resultados iniciais, o odor da emulso caracterstico e a cor branca. A
aparncia das amostras armazenadas a 10C e 40C no foi alterada, mas
as amostras armazenadas a 50C por 42 dias comearam a se liqefazerem
e quelas a 50C por 63 dias tornaram-se totalmente lquidas.
O pH de todas as amostras no teve alterao significativa,
mantendo-se numa faixa de 5,3 a 5,8.
Os resultados obtidos atravs dos estudos de estabilidade fsica,
mostraram que no houve diferena significativa entre as amostras
armazenadas em frascos de plstico e frascos de vidro, porm pode-se
considerar que os frascos de vidro suportam condies mais drsticas de
temperatura e umidade, pois alguns frascos de plsticos armazenados a
50C 90% U.R., sofreram rachaduras.

101

7 CONCLUSES

O cetoconazol matria-prima foi devidamente identificado pelos


mtodos indicados pelas Farmacopias Americana e Britnica;

De acordo com as curvas de DSC e TG/DTG o cetoconazol matriaprima um produto estvel at cerca de 300C;

Formulaes farmacuticas creme contendo cetoconazol na presena


de conservantes metilparabeno, propilparabeno apresentam colorao
rsea e de metildibromoglutaronitril e fenoxietanol colorao marrom a
altas temperaturas;

A Formulao 6 apresentou boa aparncia, cor e odor caractersticos.


Manteve-se na mesmsa faixa de pH, quando submetida a diferentes
condies de armazenamento;

A Formulao 6 aps ter sido submetida a diferentes condies de


armazenamento

apresentou

comportamento

pseudoplstico

tixotropia, o que foi verificado atravs dos resultados de reologia;

A espectrofotometria derivada no UV de primeira ordem mostrou


preciso, exatido, especificidade e linearidade pelos resultados de
desvio padro relativo, teor de recuperao, interferncia do placebo e
coeficiente de correlao linear;

102

A CLAE atravs dos resultados de desvio padro relativo, teor de


recuperao, interferncia do placebo e coeficiente de correlao linear
tambm apresentou preciso, exatido, especificidade e linearidade

As duas metodologias podem ser utilizadas para anlise de


cetoconazol em creme a 2%.

103

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