UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

El Ao de la Diversificacin Productiva y Fortalecimiento

de la Educacin

INFORME N6
TTULO:

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

INTEGRANTES:
20121330 Chiok, Ana Paula
20130086 Cornejo, Antuane de Ftima
20130433 Ramrez, Fiorella
20120465 Teodoro, Rosalvina

GRUPO: (E*) Jueves 11am 1pm

MESA N:

MICROBIOLOGIA GENERAL

2015

I.

INTRODUCCIN

Los medios de cultivo contienen los nutrientes necesarios para cultivar bacterias, hongos
y otros microorganismos. stos no pueden estudiarse individualmente debido a su
microscpico tamao, por lo que slo pueden ser estudiados en poblaciones; pero para
ello, es necesario cultivarlos en medios artificiales.
Los medios de cultivo para los microorganismos pueden ser slidos, lquidos o
semislidos. Los medios lquidos se pueden transformar en slidos al adicionarles agar,
gelatina o gel de slice. Al disminuir la cantidad del agente solidificante, se obtiene el
medio semislido.
Antes de preparar un medio de cultivo, es necesario entender sus necesidades bsicas.
Cualquier medio debe contener los siguientes factores: agua, carbono, energa, nitrgeno,
minerales, pH y factores de crecimiento.
Los componentes de los medios son muy variados. La eleccin se basa en el propsito
del estudio. Existen medios sintticos preparados con una composicin exacta conocida y
medios no-sintticos que contienen ingredientes de composicin imprecisa.
Un medio de cultivo apropiado para el crecimiento de microorganismo debe contener los
nutrientes esenciales; por ejemplo, para el aislamiento de bacterias, la mayora de los
medios son ricos en protenas o derivados como proteosas, peptonas, pptidos o
aminocidos.
Existen diferentes tipos de medios de cultivo como el qumicamente definido, cuyo
objetivo es el de crecimiento de quimioauttrofos y fotoauttrofos; el medio complejo para
el crecimiento de la mayora de los microorganismo quimiohetertrofos; el medio reductor,
donde crecen microorganismos anaerbicos estrictos; el medio selectivo, cuyo objetivo es
la supresin de microorganismo no deseados y el favorecimiento del crecimiento de los
microorganismos deseados; el medio diferencial, para la diferenciacin de colonias de los
microorganismo deseados de otras; y el medio de enriquecimiento, cuyo objetivo es
similar al medio selectivo pero destinado a aumentar la cantidad de microorganismos
deseados hasta niveles detectables.
Antes de 1930, la preparacin de los medios de cultivo inclua la incorporacin y medicin
de cada uno de los componentes del medio e incluso la preparacin de la mayora de los
medios de uso rutinario es un proceso mucho ms simple, debido a que estn disponibles
comercialmente en forma de polvos deshidratados completos y solo hay que disolverlos
en la cantidad de agua indicada, ajustarles el pH, distribuirlos en tubos y esterilizarlos.

I.1 Objetivos

 Preparar y esterilizar medios de cultivo de diferentes caractersticas para el cultivo

de microorganismos

II.

MARCO TERICO:

II.1 MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. La diversidad metablica de estos es tan grande que la variedad
de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal
adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriendo nos a las bacterias con
exclusividad. ( VERA ,2000)

Las exigencias nutritivas de las bacterias y de los microorganismos en

general, son muy variadas; mientras que unas son capaces de crecer en
condiciones ms diversas, otras tienen necesidades mucho ms
determinadas; por ello los medios tienen que ser adecuados a la especie
microbiana que se desea cultivar y de acuerdo a los fines que se persigue.
La preparacin de los medios es importante, no solo para conseguir el
desarrollo de los microorganismos fuera de su ambiente natural, sino porque
en su crecimiento en medios adecuados los microorganismos demuestran
una serie de propiedades de gran valor para su identificacin o utilizacin.

II.2 PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

2.2.1 CONSTITUYENES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
AGAR :
Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el
agar bacteriolgico el componente dominante es un polisacrido que se obtiene
de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que a excepcin
de algunos microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de
agar al 1-2% se licua alrededor de los 100C y se gelifica alrededor de los 40C,
dependiendo de su grado de pureza.
EXTRACTOS. Su preparacin consiste en que ciertos rganos o tejidos
animales o vegetales (p.e. carne, hgado, cerebro, semillas, etc.) son extrados
con agua y calor y posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o
polvo. Estos preparados deshidratados son a menudo empleados en la
elaboracin de los medios de cultivo. Los ms utilizados son el extracto de
carne, de levadura y el de malta.
PEPTONAS. Son mezclas complejas de compuestos orgnicos, nitrogenados y
sales minerales, que se obtienen por digestin enzimtica o qumica de
protenas animales o vegetales (soja casena carne, etc.). Las peptonas son
muy ricas en ppticos y aminocidos, pero pueden ser deficientes en
determinadas vitaminas y sales minerales.
FLUIDOS CORPORALES. Con frecuencia es necesario aadir a los medios de
cultivo de algunos patgenos sustancias como sangre completa, sangre
desfibrinada, plasma o suero sanguneo, sobre todo para conseguir el primer
aislamiento a partir del hospedador. La sangre no puede ser esterilizada, y por
tanto debe de ser obtenida en condiciones aspticas directamente de un animal
sano, y adicionada al medio de cultivo despus de que este haya sido auto
clavado. Los fluidos corporales no solo aportan factores de crecimiento sino que
tambin aportan sustancias que neutralizan a inhibidores del crecimiento de
algunas bacterias. Un ejemplo podra ser la catalasa presente en las clulas
sanguneas destruye el perxido de hidrgeno que algunas bacterias que no
poseen este enzima acumulan como producto del metabolismo del oxgeno.

SISTEMAS AMORTIGUADORES. Para mantener el pH dentro del rango optimo

del crecimiento bacteriano a veces, es necesario aadir algunos componentes al
medio de cultivo. Debido a que la mayora de as bacterias son neutrfilas, se
suelen emplear sales del tipo de los fosfatos bisodicos bipotsicos u otras
sustancias

como

las

peptonas

para

prevenir

la

desviacin

del

pH.

INDICADORES DE PH. Con el objeto de poder detectar variaciones en el pH

debido a fermentaciones u otros procesos, se hace necesario a veces aadir
indicadores acido-base que nos lo indiquen.

AGENTES REDUCTORES. Con el objetivo de crear en los medios de cultivo

condiciones que permitan el desarrollo de los grmenes microaerofilos
anaerobios se aaden estos agentes reductores siendo, los mas empleados la
cisteina y el tioglicolato entre otros. AGENTES SELECTIVOS. La adicin de
determinadas sustancias a un medio de cultivo puede convertirlo en selectivo.
As, por ejemplo, la adicin de cristal violeta, sales biliares, azida sodica, telurito
potasico, antibiticos, etc., a la concentracin adecuada har que acten como
agentes selectivos frene a determinados microorganismos.

II.3 CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.

Segn el manual de laboratorio de microbiologa escrito por Manrique L.
2.3.1. MEDIOS LIQUIDOS.
a) NO SINTTICOS. Leche, solucin acuosa de substratos naturales como
peptona, extracto de levadura, extracto de carne, etc. La composicin es
indefinida.
b) SINTTICOS. Son medios cuyos constituyentes qumicos son definidos.
Aminocidos, azucares, o factores de crecimiento, como vitaminas.
2.3.2 MEDIOS SLIDOS.
a) INICIALMENTE LQUIDOS, aquellos presentan este estado en el
momento en que son preparados. A su vez pueden ser:

i) Reversibles: los que una vez slidos, pueden ser lquidos nuevamente,
sin alterar sus caractersticas nutritivas; generalmente haciendo uso del
calor. Agar comn, gelatina, etc.
ii) Irreversibles: los que una vez solidificados no pueden ser licuados
nuevamente por medios del calor, porque tienen elementos termolbiles
en su constitucin. Agar sangre, agar huevo, etc.
b) INICIALMENTE SLIDOS, trozos de papa, zanahoria, etc.
Por la funcin que desempean tambin pueden ser:

COMUNES
Permite el crecimiento indiscriminado de todo tipo de microorganismos.
Agar nutritivo, caldo nutritivo, caldo con suero, agar leche peptonizado.

ESPECIALES

a) Medios mejorados.
Son aquellos a los que se les agrega determinadas sustancias nutritivas
como: sangre, yema de huevo, suero, etc., que estimula las exigencias
nutritivas de ciertos microorganismos. Agar sangre, agar sabourand, etc.
b) Medios selectivos.
Se caracterizan porque se incluyen sustancias que favorecen el desarrollo
de determinadas especies inhibiendo el de otras. Mc Conkey agar, SS
agar, Agar tergitol, Bismuto sulfito agar, etc.
c) Medios de diferenciacin.
Ponen
de
manifiesto
algunas

propiedades

bioqumicas

del

microorganismo, como formacin de gas, cambios en el pH, fenmenos de

xido reduccin. Medios azucarados como caldos glucosado, lactosado,
agar gelatina, agar Kligler, medio nitratado, etc.
2.4MEDIOS DE CULTIVO PREPARADOS EN EL LABORATORIO

CALDO NUTRITIVO
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el desarrollo de
microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Su uso est
descrito en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y
otros materiales de importancia sanitaria.

Medio no selectivo, contiene peptona y extracto de carne que constituye la

fuente de carbono y nitrgeno necesarios para el adecuado desarrollo
bacteriano.
Puede ser utilizado adems, como pre-enriquecimiento en la bsqueda de
Salmonella sp.a partir de alimentos, ya que permite recuperar clulas
daadas, diluir metabolitos txicos y sustancias inhibitorias.

AGAR NUTRITIVO
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento
de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos
nutritivos. Su uso est descripto en muchos procedimientos para el
anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.
No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la
fuente de carbono y nitrgeno para el desarrollo bacteriano. El agregado
de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u
otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes.

AGAR MAC CONKEY

Medio selectivo por contener sales biliares y cristal violeta que inhiben el
crecimiento de bacterias no entricas. Es tambin un medio diferencial
porque contiene lactosa y un indicador de pH. Las bacterias capaces de
fermentar este azcar producirn un cambio en el pH del medio por la
liberacin de productos cidos. Como consecuencia sus colonias
aparecern de color violeta, contrastando con la coloracin amarillenta de
las colonias de bacterias incapaces de fermentar la lactosa.

AGAR MANITOL SALADO

Medio selectivo y diferencial muy utilizado para el aislamiento e
identificacin de S. aureus. La alta concentracin de sal (NaCl al 7,5%) le
proporciona su carcter selectivo, ya que slo este tipo de
microorganismos osmotolerantes, adems de osmfilos, pueden
multiplicarse en l. Por otra parte, el nico azcar presente es el manitol,
que puede ser fermentado por las cepas patgenas de este gnero
bacteriano, diferencindolas as de las que no lo son. La produccin de
cidos provenientes de la fermentacin de cidos provenientes de la
fermentacin del manitol es detectada por un viraje del indicador del pH
presente en el medio (rojo fenol) a amarillo. S. aureus, fermentador del

manitol, dar lugar a colonias pequeas rodeada de un halo prpura (a

veces permite el desarrollo de E. faecalis, pero con un crecimiento muy
pobre).

AGAR ALMIDON
El agar es bsicamente un medio de uso mltiple (por ejemplo, agar
nutriente, agar infusin de corazn) al que se aade 0,4% de almidn
soluble. Un plato de este medio es solo rayas o manchas inoculadas con
el organismo de prueba. Despus de la incubacin (de preferencia durante
varios das) que el medio est inundado de yodo de Gram. El yodo
reacciona con el almidn para formar un complejo azul oscuro de color.
Cualquier rea clara alrededor del crecimiento de la cultura despus de la
adicin de yodo indica la degradacin del almidn por el organismo debido
a su produccin de amilasa, una enzima extracelular.

AGAR GELATINA
El agar es bsicamente un medio de uso mltiple, que en este caso se le
agrega gelatina en un 0.4 % entre otros agregados tenemos a la peptona
0.1% y extracto de levaduras. Este medio comercial permite determinar la
actividad de la proteasa.

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el
Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han
preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presin de oxgeno adecuada, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en
composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de
muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la
que se aadirn otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios
de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se

solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre

el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que
bastantes bacterias provocan su licuacin.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin
de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa
se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos
resistentes.
Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas
bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH
bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya
que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).

CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve
afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos,
son ajenos por completo al propio medio.
o Disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,
como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos
casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del
crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para
ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que
tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de
carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de
estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaba la prdida
de los factores nutritivos lbiles.
Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es
utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de
nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen
utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los
aminocidos y otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la
peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a
muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamnica.
Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de
ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

o Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especmenes inoculados en dichos
medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave
(que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante).
o Condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en
los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las
estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as
que se deseque el medio.

o Consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo
productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en
estado semislido o slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al
punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y
comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est
ampliamente extendido en el laboratorio.
o Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de
oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados
sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn
adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio,
los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas
parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida), mientras los

anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de

las citadas condiciones.
o Luz ambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.
o pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe
olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos
metablicos normales.
o Temperatura
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y
43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los termfilos a 80C o incluso a
temperaturas superiores (hipertermfilos). En lneas generales, los patgenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C,
y los saprofitos tienen rangos ms amplios.

III.

MATERIALES Y MTODOS

3.1Materiales

CALDO
NUTRITIVO

MATERIALES

1.2 Mtodos:

AGAR
NUTRITIVO

AGAR
MAC
CONKE
Y

AGAR
MANITOL
SALADO

Medios de cultivo o ingredientes deshidratados

Agua destilada
Algodn , gasa
Balanza
Erlenmeyers de 250 y 500 ml
Esptulas
Lpiz marcador de vidrio
Papel indicador de pH
Probetas de 100ml
Papel aluminio y papel corriente no absorbente
Tubos de ensayo

AGAR
ALMIDON

AGAR
GELATINA

IV.

OBSERVACION Y

DISCUSIN :

componentes

Pesamos todos los

en

una

balanza analtica y preparamos un Erlenmeyer, adecuado para el volumen que

vamos a preparar y lo enrasamos con agua destilada hasta 120 ml.

Figura 2. En el proceso de pesado de

ingredientes. Fotografa tomada durante la
prctica.
-

Elaboramos tapones para cada Erlenmeyer y luego de colocarlos lo cubrimos con un

papel que identifique el nombre del cultivo y del grupo que lo realiz,
Se lleva a esterilizar en una autoclave durante 15 min a 121 C.

ESTAS FUERON LAS OBSERVACIONES :

Agar Mac Conkey

El agar MacConkey es una de las primeras frmulas (publicadas en 1900 por MacConkey)
para el aislamiento, cultivo e identificacin de Enterobacteriaceae y determinados
organismos no fermentadores. Posteriormente, este medio fue modificado varias veces.
El agar MacConkey es slo ligeramente selectivo, dado que la concentracin de sales
biliares, que inhiben los microorganismos gram positivos, es baja en comparacin con
otros medios en placa entricos. El agar MacConkey tambin se utiliza en el examen
microbiolgico dealimentos.
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y
el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la
flora Gram positiva. El agar es el agente solidificante. Por fermentacin de la lactosa,
disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de
pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

V.

VI.

CONCLUSION
La composicin qumica de diversos medios de cultivo diseados
para cultivar microorganismos en el laboratorio puede resumir la
nutricin microbiana de estos.
De acuerdo al tipo de bacteria que se requiera sembrar, se usar
un tipo especfico de medio de cultivo, esto, ya que cada bacteria
requiere cierto tipo de nutrientes para subsistir y formar sus
colonias, adems de que cierto tipo de medios de cultivo, nos
pueden mostrar de acuerdo a su composicin ciertas
caractersticas que presentan determinado tipo de bacterias, ya
sea por su pH y que este sea determinado por los indicadores de
los medios o por que reacciona con ciertos componentes del
medio.
Cada medio de cultivo tiene objetivos es por ello que cada medio
tiene una composicin particular.
Todos los medios al finalizar su preparacin deben esterilizarse
para tener un medio limpio antes de sembrar nuestra muestra
CUESTIONARIO

1.- Cuales son las ventajas de los medios complejos para el cultivo de
microorganismos.
De los medios complejos no se conoce exactamente, cul es la composicin del
medio; sin embargo, presenta la ventaja de que ya estn presentes todos o casi
todos los elementos que un microorganismo puede requerir adems pueden ser
utilizados en un

cultivo con una amplia gama de microorganismos, incluidos

aquellos en los que no se conocen sus requerimientos precisos de factores de

crecimiento; con frecuencia resulta ms cmodo hacer crecer al microorganismo
en un

medio complejo, especialmente si los requerimientos de factores de

crecimiento son numerosos, adems que no se necesitan aadir oligoelementos a

los medios complejos, mientras que a los medio definidos es importante proveer
los factores de desarrollo adecuado. En algunos estudios de bacterias es
necesario utilizar medios qumicamente definidos, que se llaman sintticos, en los
que todos los nutrientes esenciales se proporcionan qumicamente puros.
2.- Por qu no es necesario ajustar el pH en el caldo nutritivo y si lo es en el
agar almidn?
El motivo principal es que el agar no gelifica a pH cido, es por esto que se ajusta
el pH. En el caso del caldo nutritivo no se tiene el problema, ya que no contiene
agar sino que es un medio lquido. El error de pesadas tambin influencia en la
variacin de pH. Por ejemplo cuando se prepara el agar almidn se realiza cuatro
pesadas correspondientes a sus cuatro componentes agar, almidn, peptona y
K2HPO4. Cada pesada tienen su margen de error, por lo que este margen de error
ser el que determine la variacin del pH final; en el caso del caldo nutritivo este
solo posee 2 componentes; extracto de carne y peptona, por lo que el margen de
error por pesadas es menor. Es importante recordar el uso de buffers en los
medios de cultivo, ya que estos sern los que eviten los cambios de pH final. El pH
vara principalmente durante el tratamiento trmico que se le da al medio. Esta
variacin flucta entre 0.1 y 0.2 unidades de pH.
3.- Determine la naturaleza qumica y la funcin nutritiva de cada uno de los
ingredientes que contienen los medios que ha utilizado.
CALDO NUTRITIVO: (Extracto de carne, 0.3% y peptona, 0.5%)
Extracto de carne: Protenas, lpidos, carbohidratos
Peptona: Protena
Agar Mc Conkey
Peptona: Protena
Proteosa-peptona: Protena

Lactosa: Disacrido,Carcter diferencial

Sales biliares: Sal
NaCl: Sal
Agar: Polisacrido
Rojo neutro: Sal
Cristal violeta: Sal , carcter selectivo
Agar Manitol Salado
Extracto de carne:
Proteosa-peptona: Protena
NaCl: Sal, Carcter Selectivo
Manitol: Polialcohol, Carcter selectivo diferencial
Agar: Polisacrido
Rojo Fenol
Agar nutritivo
Extracto de Carne: Protenas, lpidos, carbohidratos
Peptona: Protena
Funcin nutritiva:
* Peptona: Es el producto que resulta de la digestin e materiales altamente protenicos
por ejemplo carne, casena, gelatina, la digestin del material proteico se realiza con
cidos y diferentes tipos de peptonas (dependiendo de la protena usada y del mtodo de
digestin), sirven para hacer medios de cultivo bacteriolgicos. Existen diferencias entre
las peptonas en cuanto a su propiedad para determinar el vencimiento bacteriano.
Principal fuente de nitrgeno orgnico, puede contener algunas veces carbohidratos y
vitaminas, esto con relacin a la clase de material digerido.
* Agar: Resiste la accin microbiana. Se usa como agente solidificante, gelifica a menos
de 45C, no se considera nutriente para las bacterias.
* Fosfato y K2HPO4: Sntesis de cidos nucleicos y fosfolpidos. Se requiere como un
componente del ATP y de las coenzimas como el NAD, NADP y las flavinas. Introducido
como fosfato inorgnico utilizado para el crecimiento.
* Agua: Debe utilizarse solo agua desmineralizada que se haya comprobado no txica
para los microorganismos.
* Extracto de carne: Sirve para proporcionar una mayor fuente de vitaminas y coenzimas,
este extracto se prepara mediante ebullicin para desnaturalizar las protenas y as
molculas pequeas de las clulas y concretar el extracto.
* Sales biliares: Mezcla normalizada de glicolato slido y laurocolato slidos a partir de
bilis de buey, agente inhibidor selectivo.
* Proteosa-peptosa: Preparada por digestin de carne fresca escogida con papaoina.
Produccin de toxinas bacterianas.
* Triptona: Hidrolizado pancretico o por tripsina de casena de alta calidad. Fuente rica
en nitrgeno aminocido.
* Lactosa: Fuente de glucosa y galactosa.

* NaCl: Utilizado como agente inhibidor del crecimiento de ciertos microorganismos.

* Almidn: Fuente rica de carbohidratos.
* Extracto de levadura: Es una excelente fuente de sustancias estimulantes del
crecimiento.
* Gelatina: Solidificante de los medios de cultivo y para la puesta en evidencia y
diferenciacin de ciertas bacterias proteolticas.

4. Describa el autoclave y su forma de uso.

La autoclave es una cmara equipada con dispositivos que permite que permiten que esta
se llene de vapor y a su vez mantienen la temperatura y la presin necesaria por el tiempo
requerido; lo que mata a los microrganismos no es la presin sino la humedad combinada
con la alta temperatura del vapor. Utilizando vapor de agua a alta presin y temperatura
para ello. El fundamento del autoclave es que coagula las protenas de los
microorganismos debido a la presin y temperatura, aunque recientemente se ha llegado
a saber de algunos microorganismos, as como los priones, que pueden soportar las
temperaturas de autoclave.

5. Qu otros mtodos de esterilizacin se emplean para medios de cultivo? Qu

ventajas otorgan?
Hmeda, autoclave
Seca, horno
Gaseosa: xido, etileno, formaldehdo o H2O2.
Filtracin: membranas de 0.45 y 0.22 m.
Por mtodos fsicos
Altas temperaturas (Calor)
El calor en presencia o ausencia de humedad puede ser utilizado para desinfectar o
esterilizar. La ventaja de los tratamientos en presencia de humedad (calor hmedo) es
que se requiere menor temperatura para el mismo efecto. Esto se debe a la capacidad de

penetrar en las clulas, desnaturalizando protenas y afectando todos los componentes

celulares.
Calor hmedo
a) Pasteurizacin
La pasteurizacin es un mtodo empleado para reducir la carga microbiana. No se
destruyen por este mtodo las esporas bacterianas.
b) Calentamiento a ebullicin El agua a ebullicin generalmente mata clulas vegetativas
en menos de 10 minutos. Sin embargo ciertos virus, como el virus de la hepatitis, puede
sobrevivir hasta 30 minutos mientras que las esporas de ciertasespecies de los gneros
Clostridium y Bacillus soportan tratamientos de ms de una hora.
Calor seco
La accin letal del calor seco se debe a la oxidacin de las protenas.
a) Incineracin
Los incineradores se utilizan en caso de materiales descartables. Tambin se usa la
incineracin para esterilizar las ansas antes o despus de utilizarlas por mtodos
qumicos Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos.

Con xido de etileno: Es un agente que se une a compuestos con hidrgenos lbiles
como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc. Destruye todos
los microorganismos incluso virus. Sirve para esterilizar material termosensibles como el
descartable (goma, plstico, papel, etc.), equipos electrnicos, bombas
cardiorrespiratorias, metal, etc. Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo,
y adems cancergeno.
Con aldehdos: Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas, provocando una
modificacin irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimtica. Estos compuestos
destruyen las esporas.
Glutaraldehdo: Consiste en preparar una solucin alcalina al 2% y sumergir el material a
esterilizar de 20 a 30 minutos, y luego un enjuague de 10 minutos. Este mtodo tiene la
ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante efectivo fro. Puede esterilizar plstico,
goma, vidrio, metal, etc.
Formaldehido:
Se utilizan las pastillas de paraformaldehido, las cuales pueden disponerse en el fondo de
una caja envueltas en gasa o algodn, que despus pueden ser expuestos al calor para
una rpida esterilizacin (accin del gas formaldehido). Tambin pueden ser usadas en
Estufas de Formol, que son cajas de doble fondo, en donde se colocan las pastillas y se

calienta hasta los 60 C y pueden esterilizar materiales de ltex, goma, plsticos, etc. Las
pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs.
Esterilizacin por gas-plasma de Perxido de Hidrgeno Es proceso de esterilizacin a
baja temperatura la cual consta en la transmisin de perxido de hidrgeno en fase
plasma (estado entre lquido y gas), que ejerce la accin biocida.
Posee como ventajas:
* No deja ningn residuo txico.
* Se convierte en agua y oxgeno al final del proceso.
* El material no precisa aireacin.
* El ciclo de esterilizacin dura entre 54 y 75 minutos.

VII.

BIBLIOGRAFA

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