Biotecnologia no diagnstico e na teraputica de doenas

Biotecnologia consiste na manipulao de organismos, clulas ou molculas

biolgicas com aplicaes especficas com o fim de realizar um diagnstico
e terapia de doenas.
Ex: imunoterapia (permite amplificar ou dirigir a resposta imunitria);
produo de substncias.
Os anticorpos, pela sua elevada especificidade, so utilizados no diagnostico
e no tratamento de doenas por determinados antignios. A sua utilizao
permite:

O reconhecimento de antignios especficos, mesmo quando presentes

em quantidades muito pequeninas;
O ataque dirigido s clulas que apresentam antignios especficos, o
que aumenta a eficcia da teraputica e reduz eventuais efeitos
adversos sobre outras clulas.

Anticorpos policlonais
Anticorpos produzidos como resultado da estimulao de vrios clones de
linfcitos B, em resposta a um determinado antignio, e que apresentam
uma especificidade para cada um dos diferentes determinantes antignicos
desse antignio. A invaso do organismo por um agente patognico conduz
produo de anticorpos policlonais e este tipo de anticorpos que
extrado do soro de animais inoculados.
Os anticorpos policlonais era obtidos a partir do soro de animais que tinham
sido previamente inoculados com o antignio ou a partir do soro de uma
pessoa que tivesse sido exposta a esse antignio mas tal envolve alguns
riscos, dado que o soro administrado possui protenas que podem ser
reconhecidas pelo sistema imunitrio do receptor como substncias
estranhas, desencadeando uma resposta imunitria.
Anticorpos monoclonais
So obtidos a partir da estimulao de um nico clone de linfcitos B e, por
isso, so todos iguais e especficos para um s determinante antignico.
Produo: isola-se um nico linfcito B activado (de um animal ou humano
que tenha sido exposto ao antignio), e funde-se com uma clulas tumural
do sistema imunitrio resultando um hibridoma (formam clulas culturas
celulares permanentes e produzem anticorpos especficos para um s tipo
de determinantes antignico).
Vantagens:
1. No necessitam de ser submetidos ao processo de purificao;
2. So especficos para um determinado eptoto.
Aplicaes de anticorpos monoclonais
Diagnstico de doenas ou condies clnicas

Exemplos
Teste
de

A elevada especificidade dos anticorpos monoclonais permite

a identificao de determinadas substncias em fluidos ou
tecidos, mesmo quando presentes em quantidades muito
reduzidas. A ligao do antignio-anticorpo detectada por
alterao de cor ou florescncia.
Imunizao passiva
Os anticorpos monoclonais podem ser usados para a
preparao de soros.
Tratamento do cancro
Anticorpos especficos para antignios que so marcadores
tumorais podem ser associados a substncias txicas ou
radioactivas, que, assim, destroem apenas as clulas
cancerosas sem causar danos s outras clulas.
Antdotos para venenos e drogas
A ligao dos anticorpos inactiva as molculas do veneno ou
droga que tm propriedades antignicas.
Enxertos e transplantes
Permitem verificar a compatibilidade dos tecidos

gravidez
Gonorreia
Sfilis

Riscos de alergias. A tecnologia do DNA recombinante tem permitidos a

produo de anticorpos mais eficazes e seguros.
Bioconverso
A biotecnologia permite a obteno de vrios produtos com aplicaes
teraputicas, em grandes quantidades e com baixos custos por processos
de bioconverso.
Bioconverso / Biotransformao: utilizao de clulas (geralmente,
microorganismos), ou da sua maquinaria enzimtica, para a transformao
de um substrato num produto estruturalmente relacionado. Ex: esterides.
Vantagens:

Permite a obteno de produtos que resultam de vias metablicas

complexas e cuja sntese in vitro difcil, se no mesmo impossvel;
Diminui o numero de etapas necessrias para a obteno do produto o
que torna a sua produo mais rpida e econmica.
Aumenta o grau de pureza dos produtos obtidos, diminuindo o risco de
reaes alrgicas.
Permite realizar transformaes, que seriam difceis de efectuar por
sntese qumica.

Ex: Antibiticos, esterides, vitaminas, vacinas ou protenas humanas. (ler

pg 132)
Antibiticos sintticos: produzidos em laboratrio por modificaes de uma
substancia produzida naturalmente por um microorganismo.

Antibitico semissintticos: resultam de uma substancia precursora sinttica

que fornecida a um microorganismo, o qual se encarrega de proceder
sua transformao, completando a sua sntese.
Vantagens da penicilina sinttica:

Um espectro de ao mais largo, pois a modificao que sofreram tornaas eficazes no combate a bactrias que so resistentes penicilina
natural;
O modo de administrao. Algumas delas, por serem resistentes a
secrees gstricas, podem ser tomadas por via oral, evitando-se assim
a injeo.

Actividade enzimtica
Os processos fermentativos que esto a base da produo ou transformao
de alimentos resultam do metabolismo dos microorganismos envolvidos
nesses processos.
Anabolismo conjunto de reaces que necessitam de energia para
sintetizar molculas mais complexas a partir de molculas mais simples.
Catabolismo conjunto de reaces que conduzem degradao de
molculas complexas, formando-se molculas mais simples e libertando-se
energia
Para que uma reaco qumica ocorre necessrio fornecer energia ao
sistema, para que a reaco se inicie. Energia necessria energia de
activao. Recorrer a condies extremos, como a utilizao de
temperaturas elevadas ou cidos e bases fortes, leva destruio dos
restantes constituintes celulares (causam a desnaturao das protenas e a
morte celular), logo as clulas recorrem a catalisadores (molculas capazes
de acelerar uma reaco qumica sem que sejam nela consumidos). Ex:
enzimas (catalisadores biolgicos ou biocatalisadores).
As enzimas actuam como catalisadores porque diminuem a energia de
activao necessria para desencadear uma reaco o que permite acelerar
a velocidade da reaco (mais reaces em menos tempo. Por outro lado, as
enzimas permitem a realizao das reaces metablicas sem que seja
necessrio alterar as condies de temperatura das clulas.
As enzimas apresentam um elevado grau de especificidade (absoluta ou
relativa), catalisando apenas um determinado tipo de reaco qumica.
Substrato molcula sobre a qual a enzima actua. As enzimas com
especificidade absoluta actuam apenas sobre um tipo de substrato. As
enzimas que tm uma especificidade relativa podem actuar sobre um grupo
de substratos (desde eu sejam semelhantes do ponto de vista qumico).
As enzimas so protenas globulares com estrutura terciria e possuem uma
regio centro activo (corresponde a uma reentrncia na molcula da

enzima onde se localizam determinados aminocidos) que se liga ao

substrato. A especificidade da aco enzimtica resulta da compatibilidade
entre a forma do cento activo e a forma do substrato. O substrato liga-se ao
centro activo da enzima formando o complexo enzima-substrato.
O substrato induz a mudana de configurao do centro activo, permitindo
uma complementaridade perfeita e a ligao com o substrato. As
interaces molculas que se estabelecem durante a formao do complexo
enzima-substrato so fracas e efmeras mas suficientes para alterar a
estabilidade do substrato
Activado o substrato, desencadeia-se a reaco que conduz transformao
desse substrato no produto, sem que sejam necessrios elevados nveis de
energia. Uma vez formados os produtos, a enzima fica novamente livre para
catalisar novas reaces.

Variao de concentraes ao longo do fenmeno

medida que se vo estabelecendo ligaes entre a enzima e o
substrato, a concentrao de enzima livre diminui, aumentando a
concentrao enzima-substrato, at um ponto de estabilizao que
resulta do facto e a velocidade de formao do complexo enzimasubstrato se aproximar da velocidade de dissociao da enzima e do
produto formado
Algumas enzimas so constitudas apenas por material de natureza
proteica, outras que apenas conseguem catalisar reaces se estiverem
associadas a substncias designadas cofactores. Apoenzima molcula de
natureza proteica- cofactor substancia de natureza no proteica.
Originando a holoenzima. A apoenzima e os cofactores quando isolados no
tm poder cataltico.
Factores que condicionam a actividade enzimtica
Temperatura: tanto as temperaturas baixas como as temperaturas elevadas
inactivam as enzimas. a influencia da temperatura na actividade enzimtica
resulta do facto de este factor interferir com as ligaes intramoleculares da
enzima responsveis pela sua estrutura globular.
Temperaturas altas desnaturam as protenas (perdem a sua estrutura
globular e portanto as propriedades). No voltam a adquirir a sua
conformao inicial, um processo irreversvel.
Temperaturas baixas inactivam as protenas. Deixam de activar, mas se
repostas as condies normais voltam a activar.

pH: pode alterar a distribuio das cargas elctricas da enzima. O pH do

meio interfere com a conformao do centro activo, podendo em casos
extremos,
conduzir

desnaturao
da
enzima,
tornando-a
permanentemente inactiva.
Existe um valor de temperatura e pH ptimo em que se atinge a velocidade
mxima das reaces catalisadas por essas enzimas.
Concentrao da enzima: a velocidade da reaco aumenta de forma
proporcional ao aumento da concentrao da enzima, enquanto houver
substrato disponvel no meio.
Concentrao de substrato: a velocidade das reaces catalisadas por
enzimas aumenta medida que a concentrao do substrato vai
aumentando, at se atingir um valor mximo, a partir do qual a velocidade
se mantm constante. Porqu? Quanto maior for a quantidade de molculas
de substrato disponveis no meio, maior vai ser a velocidade da reaco at
que todas as enzimas estejam ocupadas. Estando ocupados todos os
centros activos atinge-se um ponto de saturao, a partir do qual, por mais
que a concentrao do substrato aumente, a velocidade da reaco
mantm-se constante (taxa de formao de novas ligaes ao substrato =
taxa de separao dos produtos).

Inibio enzimtica
Existem molculas que so capazes de inibir a actividade das enzimas
inibidores podendo a sua aco fazer-se de forma reversvel ou
irreversvel.
Inibio enzimtica reversvel: os inibidores ligam-se temporariamente
enzima e, aps a sua dissociao, a enzima permanece funcional. A
reversibilidade da inibio radica nas fracas ligaes que se estabelecem
entre o inibidor e a enzima.
Inibio enzimtica irreversvel: os inibidores combinam-se com a enzima de
forma permanente, inactivando-a ou destruindo-a. Ex: venenos.
A inibio enzimtica e, particularmente a inibio reversvel, pode ser do
tipo competitivo ou no competitivo.
Inibio competitiva: o inibidor compete com o substrato normal, ligando-se
ao centro activo da enzima ( possvel porque o inibidor estruturalmente
semelhante ao substrato, contudo, esta semelhana no absoluta e, por
isso, a enzima, frequentemente, no catalisa nenhuma reaco). O inibidor
ocupa apenas temporariamente o centro activo que, por isso, algumas
vezes est ocupado pelo verdadeiro substrato e outras pelo inibidor. Se a
concentrao do substrato for superior do inibidor, ser maior a

probabilidade de o centro activo estar ocupado com o verdadeiro substrato,

revertendo-se u minimizando-se assim este tipo de inibio portanto
depende da relao entre a concentrao do inibidor e a do verdadeiro
substrato.
Inibio no competitiva: o inibidor estruturalmente diferente do substrato
e liga-se enzima num local que ao o centro activo provocando a sua
inactivao porque produz uma alterao da conformao d centro activo,
impedindo a sua liao ao substrato. Muitos dos inibidores no competitivos
so substncias metablicas que regulam a actividade enzimtica,
combinando-se de forma reversvel com as enzimas.
Controlo de vias metablicas
Vias metablicas as reaces no ocorrem de forma isolada, mas de forma
sequencial, o produto de uma reaco utilizado como substrato de uma
reaco seguinte e assim sucessivamente at se obter o produto final
(cadeia de reaces catalisada por uma cadeia enzimtica).
Frequentemente, as vias metablicas so reguladas por substncias que se
ligam enzima, modificando a sua conformao. Ao se ligarem a uma
regio especfica diferente do centro activo centro alostrico. A ligao de
substncias reguladoras ao centro alostrico, modificando a conformao da
enzima, pode conduzir inibio ou estimulao da actividade enzimtica.
Diversas vias metablicas so controladas atravs da inibio reversvel
efectuada por substncias que so produtos dessa esma via metablica e
que funcionam como inibidores no competitivos.
Como? Quando o produto de uma via metablica comea a atingir
concentraes elevadas, estas molculas ligam-se ao centro alostrico da
primeiro enzima da cadeia, bloqueando toda a sequncia de reaces. Este
mecanismo de inibio por retrocontrolo contribui para a economia da
clula, ao permitir evitar o desperdcio de recursos que estariam a ser
utilizados para produzir sustncias em quantidades excedentes. Quando a
concentrao do produto resultante dessa via metablica comea a
diminuir, as molculas desta substncia, que estavam ligadas primeira
enzima da cadeia metablica, libertam-se do centro alostrico, permitindo
que enzima se torne de novo activa e, assim, se reinicie a actividade
cataltica, comeando a aumentar a concentrao final do produto final.
Fermentao