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MEMORIA DE TTULO
FERNANDO E. FLORES ROJAS
TALCA-CHILE
2004
UNIVERSIDAD DE TALCA
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
ESCUELA DE AGRONOMA
Por
MEMORIA DE TTULO
Presentada a la
Universidad de Talca como
Parte de los requisitos para optar al ttulo de
INGENIERO AGRNOMO
TALCA CHILE
2004
APROBACIN:
Profesor Gua
Profesor Informante
RESUMEN
El objetivo general del presente trabajo consisti en evaluar el efecto como controlador biolgico de
Bacillus sp. sobre el agente causal de cancro bacteriano en tomate (Clavibacter michiganensis
subsp. michiganensis). Para ello se analiz el efecto de tres cepas nativas de Bacillus sp.
recolectadas de diferentes partes de la regin del Maule; las cepas utilizadas se rotularon con los
siguientes cdigos 40-1A, 102-3 y 115-1.Se realizaron ensayos para determinar el tiempo de
incubacin para tres cepas nativas de Bacillus sp. en la que se logra la mayor actividad
biocontroladora sobre Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis. Los tiempos de incubacin
probados fueron 3, 6 ,24 y 48 horas. Los resultados de este ensayo arrojaron que la mayor
actividad biocontroladora se present a las 24 horas; la cepa nativa de Bacillus sp. mas destacada
y con mayor inhibicin sobre Clavibacter fue la cepa 102-3.Tambin se elabor una curva de
crecimiento para cada cepa nativa de Bacillus sp. y Clavibacter; para ello se realiz conteos en una
cmara de Neubauer en 5 tiempos diferentes de incubacin a las 3, 6, 24, 48 y 72 horas. Con estos
datos se hizo la curva de crecimiento, donde Clavibacter present una mayor poblacin que las
cepas nativas de Bacillus sp., y entre las cepas nativas de Bacillus sp. la de mayor poblacin fue
102-3. El crecimiento exponencial de todas las poblaciones tanto de Clavibacter como de Bacillus
sp. se present entre las 6 y 24 horas de incubacin. Finalmente se procedi a determinar y
comparar la concentracin mnima inhibitoria (CMI) de las tres cepas nativas de Bacillus sp. y
Serenade sobre Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis. Al se evaluar las tres cepas
nativas de Bacillus sp. con 24 horas de incubacin y el producto comercial Serenade, la CMI para
7
sta fue a la concentracin 10 Bacillus/ml; la cepa mas destacada y que logr una control
significativamente mayor a las dems fue 102-3.Este estudio contribuir a desarrollar nuevas
alternativas de control de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis por medio del uso de
cepas nativas de Bacillus sp., las cuales se perfilan como una buena opcin para el manejo de esta
enfermedad.
ABSTRACT
The efficacy as biocontrol agent of different native strains of Bacillus sp. on bacterial canker of
tomatoes (Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis) was determined under in-vitro
conditions. Therefore, native strains 40-1A, 102-3 and 115-1, isolated from different localities of the
VII Region of Chile, were incubated in nutrient broth for 3, 6, 24 and 48 h, in order to know when
they were most active against the pathogen. So, 50 l of biocontrol agent suspension were
deposited in 5 mm wells made in agar plates grown with the pathogenic bacterium and after 24 h,
the inhibition halo was registered and compared among them. Bacillus sp. native strain 102-3
shown a significantly high activity against C. michiganensis. This excellent activity was
demonstrated again when the minimal inhibitory concentration (MIC) was estimated for each native
5
-1
-1
Serenade. Then, this study suggests that this native strain of Bacillus could be used in a
preventive programme against C. michiganensis subsp. michiganensis in tomatoes.
NDICE
Pgina
1. INTRODUCCIN
2. REVISIN BIBLIOGRFICA
4
5
11
13
3. MATERIALES Y MTODOS
14
14
3.2 Determinacin del tiempo de incubacin para tres cepas de Bacillus sp. que logra la
14
16
16
subsp. michiganensis
3.4 Determinacin y comparacin de la CMI de tres cepas Bacillus sp. sobre Clavibacter
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18
4. RESULTADOS Y DISCUSIN
19
4.1 Determinacin del tiempo de incubacin para tres cepas de Bacillus sp. que logra la
19
21
subsp. michiganensis
4.3 Determinacin y comparacin de la CMI para Bacillus sp. sobre Clavibacter
23
26
6. BIBLIOGRAFA
27
NDICE DE FIGURAS
Pgina
CAPITULO III
Figura 3.1 Esquema del ensayo in vitro para determinar en las cepas de Bacillus sp. el
15
18
CAPITULO IV
19
20
21
23
24
1.- INTRODUCCIN
produccin y
superficie del cultivo (Agrios, 1993). Esta enfermedad se caracteriza por su severidad de
ataque tanto al aire libre como en invernadero, siendo especfica del tomate, la cual si tiene las
condiciones favorables puede llegar a destruir completamente las plantaciones (Besoain,
1994).
Norteamrica
Son aquellas causadas por bacterias, hongos, virus y nematodos fitopatgenos. Para que
una enfermedad se desarrolle debe haber un husped susceptible, un patgeno virulento, y un
ambiente apropiado para el desarrollo de la enfermedad (Jones et al., 1993).
Entre las bacterias que provocan
Clavibacter
2.3 Antecedentes generales del cncer bacteriano del tomate causado por Clavibacter
michiganensis subsp. michiganensis
Este patgeno fue descrito por primera vez en el ao 1909, por Edwin F. Smith sobre
tomates bajo invernadero en Grand Rapids, en el estado de Michigan, Estados Unidos. La
denomin en una primera instancia como enfermedad de Grand Rapids, pero ms tarde le dio el
nombre de marchitez bacteriana. A esta enfermedad se le dio importancia hacia 1926 cuando
produjo daos importantes en algunas zonas de Estados Unidos, y en los aos siguientes se
extendi por el mundo ocasionando grandes perdidas en produccin (Aguirre, 1965).
encajarse a presin, la cual da como resultado los arreglos en V y en forma de Y de las clulas.
La taxonoma de este gnero se basa en gran parte en la presencia del cido 2,4-diamino-butrico
en los peptidoglicanos de la pared celular. Adems, los cidos grasos de la clula son en su
mayora saturados de cadenas largas, con 15-17 tomos del carbono. Sin embargo, un compuesto
caracterstico para esta subespecie es que posee un cido graso no saturado, el cido
pentadecenoico. Las colonias en agar son de color amarillo caracterstico y alcanzan un dimetro
de 2-3 mm en 5 das. Estas son lisas y tienen mrgenes enteros y una consistencia butirosa.
(Jones et al., 1993).
Las fuentes de inoculo para esta enfermedad incluyen residuos de planta infectadas en el
suelo, malezas, estacas de madera contaminadas, y semillas. Otras vas son por medio de agua,
equipo contaminado, y trabajadores (Jones et al., 1993).
Las bacterias invernan en o sobre las semillas y, en algunas reas, en los restos de las
plantas depositadas en el suelo. Las infecciones primarias pueden deberse a la propagacin de
esas bacterias desde las semillas hasta los cotiledones u hojas, pero la mayora de las veces se
debe a la penetracin de dichas bacterias a travs de heridas en las races, tallos, hojas y frutos.
Las bacterias son llevadas hasta ellos a travs de la manipulacin de estos rganos, la cual tiene
lugar durante el trasplante, aunque tambin son diseminadas por el agua del suelo o la lluvia
acarreada por el viento. Una vez que se encuentran dentro de la planta, las bacterias llegan al
sistema vascular y se desplazan y propagan principalmente en los tejidos del floema. La bacteria
tambin invade los vasos espirales, y se mueven a travs de ellos y llegan al floema, medula y
corteza, donde forman grandes cavidades que originan cancros (Agrios, 1993).
La propagacin puede ser por la lluvia y el riego por aspersin. En cultivos sin suelo esta
se puede transmitir a travs de la solucin nutritiva, pero en especial la propagacin de la
enfermedad se ve favorecida en las labores de poda y deshoje, que da lugar a una distribucin en
lnea bastante caracterstica.
Las condiciones optimas de desarrollo son de 18 24 C con ms de un 80 % de
humedad. Como la mayora de las bacterias se ve favorecida por periodos climticos hmedos.
Las plantas muy vigorosas, despus de un aporte excesivo de nitrgeno, seran mas sensibles
(Blancard, 1990).
Uno de los sntomas mas frecuentes de esta enfermedad es la perdida de turgencia de
porciones internerviales de los foliolos que rpidamente se desecan. En el interior de los tallos se
aprecia un amarillamiento de los tejidos medulares en contacto con los vasos; tejidos que
comienzan a necrosar rpidamente, al tiempo que se forman oquedades en la medula. Estos
sntomas sistmicos pueden no ser nicos. Pequeas pstulas grises o negras sobre hojas, tallos y
frutos pueden hacerse visibles como consecuencia de las penetraciones bacterianas por estomas
y/o heridas (Nuez, 1995).
Las bacterias invaden los tallos resultando en la muerte de foliolos, hojas enteras y ramas
completas. Si el ataque se produce cuando la planta es pequea, ella puede morir. Las heridas
causadas en las races, al trasplantar a raz desnuda favorecen considerablemente la enfermedad
(Bravo y Aldunate, 1988).
Una vez que la planta de tomate esta infectada en el campo o invernadero, no existe un
tratamiento curativo satisfactorio o efectivo, ya que al expresarse los sntomas la planta por lo
general muere. De ah que todas las medidas o estrategias de control son de carcter preventivo,
es decir se deben tomar previo a la infeccin (Besoain, 1994).
Es fundamental tomar las precauciones para evitar su ataque u ocurrencia, para lo cual se
debe recurrir a un conjunto de medidas de higiene, como el lavado y desinfeccin de las manos y
de los equipos al trabajar con las plantas, en forma habitual; as como efectuar labores en forma
cuidadosa y prolija.
Las principales medidas de control son la utilizacin de semillas sanas, no
trasplantar a raz desnuda sino que utilizando contenedores para no daar la raz, no realizar
plantaciones en reas infectadas, rotar con gramneas y eliminar del cultivo las plantas con
sntomas de la enfermedad (Izquierdo et al., 1992).
Para el control integrado de esta enfermedad se debe partir con una semilla sana y si no
existen antecedentes que aseguren esto, se debe recurrir a la aplicacin de un tratamiento
erradicante a esta (se ha usado fermentacin con la pulpa, agua caliente, cido clorhdrico,
hipoclorito de sodio). Durante esta etapa no es aconsejable el uso de antibiticos, evitando de este
modo desgastarlos o producir problemas de resistencia con aplicaciones posteriores. Igualmente
se debe evitar manipular excesivamente las plantas, como tampoco resulta aconsejable rebajarlas,
ya que este manejo deja tejido vascular expuesto.
En los primeros meses del cultivo se deben proteger las plantas con bactericidas, rotando
los productos, o combinando productos con distintos modos de accin, realizando aplicaciones
frecuentes, ya que esta es una etapa critica en donde la bacteria se multiplica con facilidad y se
producen infecciones sistmicas. Los sntomas pueden aparecer hasta 90 das despus de
producida la infeccin.
Luego, durante la etapa de mayor intervencin manual del cultivo, se debe evitar realizar
podas y desbrotes en das con alta humedad relativa, y efectuar aplicaciones preventivas
inmediatamente despus de realizada esta labor. En los primeros focos de esta enfermedad, se
tendr que erradicar las plantas infectadas que presenten los primeros sntomas, para disminuir al
mximo las infecciones secundarias. En el caso de los invernaderos, una vez terminado el cultivo
se deben extraer todos los restos de las plantas, evitando de este modo que la bacteria pueda
sobrevivir asociada a restos de l. En plantaciones al aire libre, se recomienda incorporar
debidamente los rastrojos, y en el caso de haber habido un ataque severo, se recomienda realizar
una rotacin de al menos dos aos con cultivos no pertenecientes a la familia de las solanceas
(tomate, papa, pimentn, aj, berenjena, etc.) (Besoain, 1994).
Para el tratamiento qumico existen varios productos, especialmente preventivos, pero con
algn poder curativo segn el grado de ataque y oportunidad de aplicacin. Estos van desde los
derivados de cobre hasta los antibiticos. Los derivados de cobre actan sobre varios puntos del
metabolismo de la bacteria; mientras los antibiticos son especficos en su modo de accin, lo cual
puede conllevar a una resistencia del patgeno a stos. Esta situacin podr variar zonal o
predialmente incluso, segn la virulencia de los ataques o de la presin
de las aplicaciones
qumicas.
Por otra parte, hay que considerar que el uso de los derivados del cobre tiene limitaciones
en el momento de floracin, ya que se pueden presentar problemas de abortos de flores en la
planta. Esto se acenta en el caso de los oxicloruros ms que en los cuprosos (Rev. E y A agrcola,
1993).
-1
Bacillus subtilis (1.6 x 10 bacterias g de semilla). Virgen-Calleros et al. (1996) lograron en papa
(Solanum tuberosum) cierto control de Rhizoctonia solani con la aplicacin de Bacillus subtilis
(Zabaleta-Meja, 2000).
Tambin hay antecedentes donde se determin el efecto de Bacillus spp sobre la
germinacin y el desarrollo de semillas de tomate infectadas con Fusarium oxysporium var.
cubensis (Brada et al., 1995).
Su efecto benfico cuando se aplica junto a las semillas o en forma individual no se debe
exclusivamente al antagonismo con los patgenos sino que influye positivamente en la
germinacin, desarrollo y rendimiento del cultivo debido a la produccin de sustancias promotoras
del crecimiento y al mejoramiento de la nutricin de las plantas.
Con respecto a B.subtilis, se ha estudiado la liberacin de compuestos con propiedades
antifngicas como la subtilina y otros antibiticos de la familia de las Iturinas (Fernndez, O., 2001).
10
Las bacterias como Bacillus subtilis al ser habitantes comunes en el suelo se establecen
por s solas en la rizosfera del cultivo tratado y colonizan el sistema radical, compitiendo con los
organismos que la atacan y por lo tanto suprimen enfermedades causadas por patgenos como
Fusarium spp. y Rhizoctonia spp.; es decir su mecanismo de accin en este caso es por
competencia. Bacillus subtilis tambin es una bacteria eficaz contra varios hongos patgenos, ya
que es capaz de producir un antibitico, llamado iturin, el cual es particularmente activo contra el
hongo,
Sclerotina fruticola, y
11
3.2
Determinacin del tiempo de incubacin para tres cepas de Bacillus sp. que logra la
Para realizar este experimento, cada cepa nativa de Bacillus sp., se inocul en un tubo con
6 ml de caldo nutritivo (CN). Luego estos fueron colocados en agitacin permanente a 20C,
obtenindose posteriormente de ellos una alcuota en cuatro tiempos diferentes de incubacin
(3, 6, 24 y 48 horas).
El patgeno Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis se sembr en un matraz
conteniendo 200 ml de medio de cultivo lquido, dejndose crecer en agitacin constante por 24
horas a 20C. Una vez cumplido este tiempo, sobre placas Petri con 30 ml de agar nutriente, se
agreg 1 ml del cultivo de la bacteria patgena (Clavibacter), el que fue esparcido
homogneamente sobre la placa. Despus de 30 minutos se retir el sobrenadante y se procedi a
realizar orificios en el agar con un sacabocado de 5 mm, en un nmero de tres por placa Petri
(Figura 3.1). En cada uno de stos, se agreg 50 l del cultivo de las cepas de Bacillus sp.
incubados por 3, 6, 24 y 48 horas. Luego las placas, fueron colocadas a 4C por 2 horas
Posteriormente todas las placas se incubaron en una estufa a una temperatura constante de 25C,
midiendo el halo de inhibicin a las 48 horas despus de la inoculacin, cabe destacar que los
halos de inhibicin no presentaron un dimetro uniforme, por lo que se debi sacar un promedio de
cada uno de ellos.
Con este ensayo se logr determinar el tiempo de crecimiento en el que las diferentes
cepas de Bacillus sp. eran ms activas sobre el patgeno.
Cepa
102-3
Clavibacter
michiganensis
Subsp. michiganensis
Cepa
40-1A
Cepa
115-1
Figura 3.1 Esquema del ensayo in vitro para determinar en las cepas de Bacillus sp. el tiempo de
incubacin ptimo, en cuanto a inhibicin del crecimiento de Clavibacter michiganensis subsp.
michiganensis.
3.2.1
Diseo experimental
3.3
Determinacin de
la
curva de
Clavibacter
La determinacin fue llevada a cabo en tubos con 6 ml de caldo nutritivo, los cuales se
sembraron tanto con las cepas 40-1A, 102-3 y 115-1, como con el patgeno, en tubos de ensayo
independientes. Posteriormente estos tubos fueron colocados en agitacin permanente a 20C.
Luego se procedi a sacar una alcuota de cada tubo a las 3, 6, 24, 48 y 72 horas de incubacin,
y con la ayuda de una cmara de Neubauer se procedi a hacer el conteo bacterial. Los valores
obtenidos a partir del conteo realizado con la cmara, fueron ingresados a la siguiente formula para
estimar el nmero de bacterias/ml:
Formula 1
N Bacterias
Bacterias / ml
0,0025 mm *0,1*1000
Con los resultados obtenidos desde la formula se elaboraron las curvas de crecimiento
para cada una de las cepas nativas de Bacillus sp. y Clavibacter michiganensis subsp.
michiganensis.
3.4
comercial en base a la cepa QST 713 de Bacillus subtilis (Serenade, Moviagro). Adems se
incluy un testigo con solo agua destilada. En el caso del producto comercial Serenade su
9
concentracin inicial fue de 5 x10 Bacillus/ml la cual debi ser ajustada a una concentracin de 10
Bacillus/ml para igualarla con las concentraciones iniciales de las cepas nativas de Bacillus sp..
Cada cepa nativa de Bacillus sp. se inocul en un tubo con 10 ml de caldo nutritivo (CN) y
fueron colocados en agitacin permanente a 20C por 24 horas. Una vez que las cepas nativas
cumplieron 24 horas de crecimiento se procedi a preparar las diferentes diluciones. Tanto las
cepas de Bacillus sp., como Serenade, en las distintas concentraciones fueron colocadas en
cantidad de 50 l en los orificios hechos en el agar nutritivo. Se ocuparon placas separadas para
cada cepa, al igual que para Serenade, cada una con seis orificios en que se evaluaron cinco
diferentes diluciones ms un testigo. El ensayo const de doce repeticiones para cada tratamiento
(Figura 3.2).
Una vez que las placas fueron inoculadas con las diferentes diluciones de las cepas de
Bacillus sp. y del producto comercial Serenade, estas fueron colocadas a 4C por 2 horas
Posteriormente todas las placas se incubaron en una estufa a una temperatura constante de 25C,
midiendo el halo de inhibicin a las 48 horas despus de la inoculacin, cabe destacar que los
halos de inhibicin no presentaron un dimetro uniforme, por lo que se debi sacar un promedio de
cada uno de ellos.
Bacillus sp. 10
(sin diluir)
Agua estril
(testigo)
Clavibacter
Bacillus sp. 10
michiganensis
Bacillus sp. 10
Subsp. michiganensis
Bacillus sp. 10
Figura 3.2 Esquema del ensayo in vitro utilizado para determinar para tres cepas de Bacillus sp. y
Serenade la concentracin mnima inhibitoria (CMI) sobre Clavibacter michiganensis subsp.
michiganensis, en medio de cultivo agar nutritivo.
4.1
Determinacin del tiempo de incubacin para tres cepas de Bacillus sp. que logra la
Los resultados de este ensayo son fundamentales dentro del estudio ya que a partir de
ellos se pudo determinar el tiempo en el cual las diferentes cepas nativas de Bacillus sp.
alcanzaron su mayor control sobre Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis.
50
40
30
20
10
0
3
24
48
102-3
115-1
Las cepas nativas de Bacillus sp. utilizadas demostraron tener un efecto en el control de
Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Figura 4.1). Todas ellas luego de seis horas de
crecimiento, mostraron ya inhibicin sobre el patgeno. A las 24 horas de incubacin se alcanz el
mximo halo de inhibicin sobre Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, siendo la cepa
mas destacada la 102-3, logrando un halo inhibitorio de 44,3 mm, seguida de la cepa 115-1 con 34
mm. La que mostr el menor efecto fue 40-1A con 29,2 mm de halo inhibitorio. A las 48 horas las
tres cepas redujeron su control y las diferencias entre ellas se hicieron menores.
50
b
40
30
20
10
0
24
Tiempo de incubacin (horas)
102-3
115-1
40.1A
4.2
Determinacin de
la
curva de
Clavibacter
que en las cepas 40-1A y 115-1, sus poblaciones fueron bastante similares
(Figura 4.3).
108 Bacterias / ml
6
5
4
3
2
1
3
24
48
72
102-3
115-1
Cmm
La curva de crecimiento bacteriano puede dividirse en distintas fases: fase lag o latencia,
fase exponencial, fase estacionaria y fase de muerte. La fase de latencia en este caso abarc entre
las 3 y 6 horas desde inicio de incubacin. Entre las 6 y 24 horas se observ la fase de mayor
crecimiento, llamada fase de crecimiento exponencial, alcanzando a las 24 horas su mxima
capacidad de crecimiento. Segn los autores Brock y Madigan (1991), lo anterior es una
consecuencia del hecho de que cada clula se divide para formar dos clulas, cada unas de las
cuales tambin se divide para formar dos clulas ms y as sucesivamente. En general, las
bacterias tienen una mayor rapidez de crecimiento comparada con otros microorganismos. Esta
fase de crecimiento exponencial se ve afectada por la composicin del medio de cultivo, la
temperatura, entre otros. La fase de muerte de la poblacin bacteriana se empez a producir
posterior a las 24 horas de incubacin, la fase estacionaria no se ve representada en el grafico.
Brock y Madigan (1991) afirman que en la fase estacionaria no existe crecimiento, generalmente
debido al agotamiento de nutrientes indispensables o tambin por algn producto de desecho del
metabolismo bacteriano liberado al medio, el cual llega a un nivel en que es inhibidor, cesando el
crecimiento exponencial. Aunque no hay crecimiento en la fase estacionaria, muchas de las
funciones pueden continuar, incluyendo el metabolismo energtico y algunos procesos
biosintticos. S la incubacin contina despus de que una poblacin alcanza la fase estacionaria,
las clulas pueden seguir vivas y continuar metabolizando, pero lo ms probable es que mueran. Si
esto ltimo ocurre, la poblacin se encuentra en la fase de muerte.
Finalmente cabe sealar que el tiempo de incubacin con el que se logr el mayor control
de Bacillus sp. sobre Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, fue tambin 24 horas,
pudiendo a partir de esto concluir que existe una directa relacin entre mximo crecimiento
bacterial de Bacillus sp. y el nivel de control que logr este sobre el patgeno. Esto se corrobora si
comparamos el control logrado a las 6 y 48 horas de incubacin donde el biocontrolador logr una
menor inhibicin del crecimiento del patgeno, lo que se asociara a que su poblacin a las 6 horas
es an muy baja y a las 48 horas esta va decreciendo.
4.3
bacterias/ml para las tres cepas de Bacillus sp., lo que era esperable ya que correspondi a la
concentracin sin diluir. La CMI para las tres cepas nativas de Bacillus sp. se alcanz a la
5
concentracin 10 Bacillus/ml, mientras que para el producto Serenade esta estuvo muy por
7
50
40
30
20
10
108
107
106
105
104
Bacillus sp./ml
102-3
115-1
40.1A
Serenade
Con los datos obtenidos se procedi a comparar los halos de inhibicin para las tres cepas,
5
35
a
Halo inhibicin (mm)
30
b
c
25
20
15
10
5
0
5
10E+5
10
Bacillus sp./ml
102-3
115-1
40-1A
5.-CONCLUSIONES
En los diferentes ensayos realizados se logr concluir que las cepas nativas de Bacillus
sp. 102-3, 115-1 y 40-1A son capaces de inhibir el crecimiento de Clavibacter michiganensis
subsp. michiganensis.
El tiempo de incubacin en el cual las cepas de Bacillus sp. se encuentran ms activas
sobre el patgeno es de 24 horas, tiempo en el cual tanto las cepas como el patgeno se
encuentran en el mximo de su crecimiento exponencial (fase exponencial).
La concentracin mnima inhibitoria (CMI) revel que las cepas nativas de Bacillus sp.
fueron capaces de controlar a Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis a una menor
concentracin que el producto comercial Serenade. De las tres cepas analizadas la de mejor
accin controladora fue la 102-3, la cual se destac en todos los ensayos practicados.
6.-BIBLIOGRAFA
Krarup
disponible en
http://www.puc.cl/sw_educ/hortalizas/html/tomate/cultivo_tomate.html Consultado
10
mayo
2003.
-
Blancard, D. 1990. Enfermedades del Tomate Observar, Identificar Luchar. Ediciones Mundi
Prensa, Madrid, Espaa. 212 p.
Besoain, X. 1994. Factores de desarrollo y control de cncer bacterial del tomate. Empresa y
Avance Agrcola 31:24-27
Casanova A, Carmen Gloria. 2002. Tesis (Ing Agr) Control biolgico in vitro y bajo
condiciones controladas de invernadero de cancro bacteriano del tomate (Clavibacter
michiganensis subsp. michiganensis (Smith Davis et al.). Universidad Catlica de Valparaso.
Fac. de Agronoma, Quillota, 74 p.
Cazorla F.M; Durn V.E. 2003. Perspectivas del control biolgico de enfermedades en
plantas. disponible en http://www.ciencias.uma.es/publicaciones/encuentros/ENCUENTROS35/
microb35.html. Consultado 20 Diciembre 2003.
Nuez, F. 1995. El Cultivo del Tomate. Ediciones Mundi Prensa, Madrid, Espaa. 793 p.
Ortega A, Sandra Marisol. 1998. Tesis (Ing Alim) Parmetros microbiolgicos para la
formulacin de medios de cultivo para la produccin semindustrial de cepas antagonistas de
patgenos vegetales. Universidad Austral de Chile. Fac. de Ciencias Agrarias, Esc. de
Ingeniera en Alimentos, Valdivia, 112 p.
Ortiz, C. 1983. Control Biolgico o la Naturaleza al Cuidado del Hombre. Prxima Dcada
19:16-21.
Solis F, Ramos C., 1996. Efecto de aplicaciones al suelo de Bacillus subtilis en el control de
Fusarium oxysporum en arveja china. Publicado en julio 1996. Disponible en
http://www.ag.vt.edu/ipmcrsp/meetings/guatemala-research/guatemala-search1/SOLIS2e.html.
Consultado 20 mayo 2003.
University Of California. 1985. Integrated pest Management For Tomatoes. Edit for University
Of California. California , Estados Unidos. 104 p.