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INSTITUTO DE QUMICA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM QUMICA
PORTO ALEGRE
OUTUBRO 2005
PORTO ALEGRE
OUTUBRO 2005
DECLARAO DE AUTORIA
Este trabalho foi realizado pela autora, orientado pela ProF Ora. Elina
Bastos Caramo e co-orientado pelo Prof. Dr. Jos Vladimir de Oliveira. Todo o
trabalho foi desenvolvido no Laboratrio de Pesquisa E-202 e Central Analtica,
do Instituto de Qumica da Universidade Federal do Rio Grande do Sul e nos
Laboratrios de Termodinmica Aplicada e Central Analtica do Departamento
de Engenharia de Alimentos da Universidade Regional Integrada do Alto
Uruguai e Misses-Campus de Erechim.
Banca Examinadora:
ylJM'0-
iCJ~ ~~.
r6au~ 'Oa~
CHIMARRO
Amargo doce que sorvo
num beijo em lbios de prata.
Tens o perfume da mata,
molhada pelo sereno.
E a cuia, seio moreno,
que passa de mo em mo,
traduz o meu chimarro
na sua simplicidade
a velha hospitalidade,
da gente do meu rinco.
(Glauco Saraiva)
11l
DEDICATRIA
IV
AGRADECIMENTOS
VI
NDICE GERAL
ndice Geral............................................................................................................................
Lista de Figuras............................................................................................................ ..........
Lista de Tabelas............. .............................................. ................... .......... ....... ..... .... .............
Lista de Abreviaturas e Siglas.. .... ............................................................... .... ......... ... ...........
Resumo..................................................................................................................................
Abstract.................................................................................................................................
CAPTULO 1: INTRODUO................................................................................................
CAPTULO 2: REVISO DA LlTERATURA...........................................................................
1.0 ERVA-MATE................................................................................................................
1.1 Classificao taxonmica..................................................................... ...... ..............
1.2 Biologia reprodutiva................. ................................ ..................... ................ ..... .......
1.3 Habitat e distribuio geogrfica....................................... ... .... .............. .............. ....
1.4 Importncia da erva-mate.........................................................................................
1.5 Composio qumica da erva-mate............ .................. ......................... .... ................
2.0 TCNICAS DE EXTRAO APLICVEIS APLANTAS...........................................
2.1 Extrao por macerao............................................................................ ............. .
2.2 Extrao com ultra-som............... ................... ..........................................................
2.3 Extrao com liquido pressurizado (PLE).............................................................
2.3.1 Vantagens e desvantagens da extrao com liquido pressurizado..... ......... .........
2.4 Extrao com fluido supercrtico.................. .............................................................
2.4.1 Dixido de carbono como solvente...... .................................. ................ ................
2.4.2 Tcnica de extrao supercrtica...........................................................................
2.4.3 Equipamento tpico da extrao supercrtica....... ............................................ ......
2.5 Comparao das tcnicas de extrao.................................. ........... .... ... .................
3.0 PLANEJAMENTO ESTATSTICO DE EXPERIMENTOS.............................................
4.0 ANLISE INSTRUMENTAL.........................................................................................
4.1 Cromatografia gasosa (GC)................................................................... ...................
4.2 Espectroscopia de absoro atmica (FAAS)..........................................................
CAPTULO 3: DETERMINAO DOS MINERAIS DAS FOLHAS DE ERVA-MATE SOB
DIFERENTES CONDIOES AGRONOMICAS..............................................
1.0 EXPERIMENTAL..........................................................................................................
1.1 Detalhamento expenmental de campo..................................... ................ .................
1.2 Amostras................................................................. ..................................................
1.2.1 Digesto das amostras............................... ........................... ................ ................
1.3 Procedimento para determinao dos minerais........................................................
2.0 RESULTADOS E DiSCUSSO....................................................................................
2.1 Influncia das condies agronmicas sobre o teor de minerais nas folhas de
erva-mate................................................... ............ ....... ......... ............ .............................
3.0 CONCLUSOES PARCiAiS...........................................................................................
CAPTULO 4: APLICAO DO C02 AALTAS PRESSOES NA EXTRAO DE
COMPOSTOS ORGNICOS DA ERVA-MATE.............................................
1.0 EXPERIMENTAL.........................................................................................................
1.1 Reagentes e solventes............................. ............................................ ......... ............
1.2 Extrao com C02 supercrtico.................................................................................
1.3 Variveis de extrao................................................................................................
Rosngela Assis Jacques
vii
x
xii
xiv
xvi
xvii
1
6
7
7
8
8
9
11
15
16
16
20
23
25
26
27 .
28
29
30
32
32
34
35
36
36
37
38
38
40
40
48
49
50
.50
51
51
Vl1
53
53
55
56
56
58
59
65
65
66
67
71
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74
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77
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86
86
88
89
89
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98
98
98
99
99
100
100
101
101
102
102
105
Vlll
108
111
114
115
120
132
134
137
IX
LISTA DE FIGURAS
Figura 1:
Figura 2:
Figura 3:
Figura 4:
Figura 5:
Figura 6:
Figura 7:
Figura 8:
Figura 9:
Figura 10:
Figura 11:
Figura 12:
Figura 13:
Figura 14:
Figura 15:
Figura 16:
Figura 17:
Figura 18:
Figura 19:
Figura 20:
Figura 21:
Figura 22:
Figura 23:
Figura 24:
7
9
18
22
29
37
40
51
52
54
57
60
62
65
66
75
79
81
87
92
93
99
103
106
x
Figura 25: Cromatogramas do on total dos extratos das folhas de erva-mate obtidos
por extrao com lquido pressurizado (PLE) com hexano (A), tolueno(B),
diclorometano(C), acetato de etila (O), acetona(E) e metanol
(F).....................................................................................................................
109
Xl
LISTA DE TABELAS
Tabela I:
Distribuio dos teores de nutrientes nos diferentes tecidos de ervamate (g/1 00 g) ............................................................................................
Tabela 11:
Reviso da literatura sobre aplicao de ultra-som na extrao de
plantas .......................................................................................................
Tabela 111:
Reviso da literatura sobre aplicao da extrao com lquido
pressurizado (PLE) na extrao de plantas ............................................. ..
Tabela IV:
Propriedades termodinmicas dos fluidos .................................................
Tabela V:
Aplicaes da extrao com fludo supercrtico em plantas .................... .
Tabela VI:
Comparao entre mtodos de extrao utilizados em plantas ............... .
Tabela VII:
Parmetros instrumentais utilizados no FAAS ..........................................
Tabela VIII:
Teor de cinzas [g/100g base seca] das amostras de erva-mate.................. ..
Tabela IX:
Contedo de macronutrientes das folhas de erva-mate em funo da
idade da folha, incidncia de luz e adubao ............................................
Tabela X:
Contedo de micronutrientes das folhas de erva-mate em funo da
idade da folha, incidncia de luz e adubao ............................................
Tabela XI:
Anlise estatstica (ANOVA com teste de Tukey a 5%) dos contedos
dos minerais das folhas de erva-mate,sob diferentes condies
agronmicas ...............................................................................................
Tabela XII:
Condies cromatogrficas utilizadas na anlise dos extratos obtidos
com C02 a altas presses por GCIMS.......................................................
Tabela XIII:
Condies experimentais e rendimentos obtidos nas extraes de ervamate com C02 a altas presses. Erva-mate com idade de poda de 12
meses cultivada a pleno sol e sem adubao.......................................... ..
Tabela XIV:
Rendimentos dos extratos (misturas dos extratos da Tabela XIII) obtidos
por cromatografia lquida preparativa (fracionamento), expressos em
9 (extrato) por 100 9 de amostra...............................................................
Tabela XV:
Compostos identificados na mistura dos extratos da Tabela XIII e das
fraes do extrato fracionado de erva-mate com idade de poda de 12
meses, cultivada a pleno sol e sem adubao, obtido por SFE............... .
Tabela XVI:
Compostos das folhas de erva-mate com idade de 18 meses de poda,
quantificados em funo do tipo de fertilizao e incidncia de luz.......... .
Tabela XVII: Anlise estatstica (ANOVA com teste de Tukey a 5%): Efeito da
intensidade de luz e do tipo de adubao sobre a concentrao (mg!kg
de amostra) de compostos selecionados do extrato de folhas de ervamate com 18 meses de idade, obtidos por SFE........................................
Tabela XVIII: Variveis e resultados de um planejamento fatorial fracionrio 25-1 do
processo de extrao por ultra-som, das folhas de erva-mate................ ..
Tabela XIX:
Principais compostos identificados nos extratos por ultra-som com
hexano e metanol, das amostras de erva-mate com idade de poda de
18 meses, plantada a pleno sol e adubadas com fonte de nitrognio.......
Tabela XX:
Variveis e resultados de um planejamento fatorial fracionrio 26-2,
utilizados na extrao com lquido pressurizado ..................................... .
Tabela XXI:
Principais compostos identificados nos extratos por extrao com
lquido pressurizado com hexano e metanol, nas amostras de erva-mate
com idade de poda de 18 meses, cultivada a pleno sol e adubada com
fonte de nitrognio ......................................................................................
14
20
24
25
28
30
39
44
45
46
47
54
56
59
63
68
69
78
82
90
94
X1l
Tabela XXII:
Tabela XXIII:
Tabela XXIV:
Tabela XXV:
Tabela XXVI:
Tabela XXVII:
Tabela XXVIII:
101
102
104
107
110
112
112
X1ll
XlV
xv
RESUMO
o objetivo deste trabalho foi estudar a composio qumica das folhas de ervamate, sob diferentes condies agronmicas e tcnicas de extrao. Os
mtodos de extrao usados foram macerao, ultra-som, extrao com lquido
pressurizado e extrao com fludo supercrtico. Foram investigadas as
variveis que podem influenciar no processo de extrao, tais como
temperatura, presso, polaridade do solvente, tempo de extrao, massa de
amostra, entre outras. A identificao dos compostos foi realizada por
cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massas. Todos os
mtodos de extrao utilizados mostraram-se eficientes para a obteno dos
extratos, com as diferenas sendo mais quantitativas do que qualitativas. Entre
os mtodos de extrao que utilizam solventes orgnicos, a extrao com
lquido pressurizado mostrou-se mais eficiente, produzindo maior rendimento
em massa de extrato e maior concentrao de alguns dos compostos de
interesse, com as vantagens de reduo de solvente e tempo de extrao. A
composio qumica da erva-mate influenciada pelas condies agronmicas
de plantio, bem como pelas condies de extrao de suas folhas. A melhor
condio agronmica avaliada, ou seja, aquela que produziu maior quantidade
de extrato, foi o cultivo das plantas a pleno sol, adubadas com nitrognio e com
idade de poda de 18 meses. A varivel mais importante das tcnicas de
extrao utilizadas foi a polaridade do solvente. Solventes de maior polaridade
produziram maior rendimento em extrato. A anlise cromatogrfica dos extratos
obtidos permitiu identificar cerca de 50 compostos qualitativamente e 6
quantitativamente, destacando-se a cafena, fitol, cido palmtico, cido
esterico, esqualeno e vitamina E.
Rosngela Assis Jacques
XVI
ABSTRACT
The main objective of this work was to study the chemical composition of the
extracts of mate leaves cultivated under different agronomic conditions obtained
from different extraction techniques. The extraction methods used were
maceration, sonication, pressurized liquid extraction and supercritical fluid
extraction. It was investigated the influence of temperature, pressure, solvent
polarity, extraction time, sample amount, etc., on the extraction processo The
identification of the compounds was accomplished by gas chromatography
coupled to mass spectrometry detector (GC/MS). Results showed that ali the
extraction methods were efficient, with more quantitative differences than
qualitative. Among the extraction methods using organic solvents, the
pressurized liquid extraction showed to be more efficient, producing larger mass
yields and larger concentration of some of the present compounds in the mate
leaves, with the advantages of solvent consumption and time reduction. It was
verified that the chemical composition of the mate is influenced by the
agronomic conditions, as well as the extraction conditions of the mate leaves.
The best-evaluated agronomic condition, i.e., that produced the greatest
amount of extract was the fertilization with nitrogen and the complete exposure
to sunlight.
XV11
CAPTULO 1:
INTRODUO
~-
produtos
em
explorao,
como
tambm
de
novas
formas
de
aproveitamento [3,4].
O conhecimento cientfico sobre a taxonomia do gnero, a composio
qumica e as propriedades farmacolgicas da espcie lIex paraguariensis e do
produto erva-mate so ainda incipientes.
o desenvolvimento de tcnicas
Objetivos:
-+
-+
fluido
supercrtico,
levando em considerao
o efeito
das variveis
CAPITULO 2:
REVISO DA LITERATURA
1.0 ERVA-MATE
Diviso: Angiosperma
Classe: Dicotilednea
Sub-classe: Archichlamydeae
Famlia: Aquifoliaceae
Gnero: lIex
o gnero
espcies de lIex so
Paraguai
?
Quantidade produzida
De
2
410
Uruguai
(t)
At
339
1.531_
1.759
4.460
4.750
13.227
12.1
62.440_
lIex paraguariensis,
sendo
10
Alguns trabalhos [8,13-15] mostram que a composio qumica da ervamate muito complexa, apresentando metilxantinas, saponinas, taninos,
vitaminas, componentes minerais, substncias aromticas, cidos graxos,
terpenos, lcoois, cetonas, aldedos, fenis, entre outros.
A presena de saponinas em folhas de lIex paraguariensis foi
estabelecida atravs de trabalhos realizados por Gosmann [4] e Montanha [16].
Gosmann e colaboradores [17] e Kraemer [18] descreveram a presena
de 11 glicosdeos, como agliconas, cido urslico e cido oleanlico e os
acares arabinose, glicose e ramnose. Com o objetivo de conhecer mais
detalhadamente a composio, em termos de saponinas, de outros rgos
alm de folhas, Kraemer [19] analisou atravs de cromatografia em camada
delgada, amostras de erva-mate (ramos, razes, frutos verdes e maduros),
alm da cultura de clulas de lIex paraguariensis. Athayde [14] estudou as
saponinas presentes em folhas e frutos de rvores de lIex paraguariensis
nativas nos estados de Mato Grosso do Sul, Santa Catarina e Rio Grande do
Sul.
Desde a descoberta da presena da cafena por Stenhouse em 1843 e
da teobromina por Oehrli em 1927 em lIex paraguariensis [20], muitos trabalhos
tm sido publicados a respeito dos teores destas metilxantinas, tanto nas
folhas, talos ou frutos, como no produto erva-mate [9,14,21-28]. Alguns autores
fazem referncia presena de teofilina nas folhas e em produtos comerciais
da erva-mate [21-22].
Cafena, teofilina e teobromina so trs alcalides estreitamente
relacionados, presentes na erva-mate, e, nesta planta, so os compostos mais
interessantes sob o ponto de vista farmacolgico e teraputico. Os alcalides
so responsveis pelas propriedades estimulantes do mate. A cafena tem
efeito sobre o sistema nervoso central, acelera a entrada de oxignio nos
pulmes, aumenta a velocidade do metabolismo e acelera o batimento
11
Diversas
metodologias
para
a extrao
e a
quantificao de
12
13
Folhas
1,92
0,17
1,59
0,61
0,42
Julho
Ramos
1,01
0,057
0,98
0,88
0,34
Folhas
2,20
0,12
1,86
0,43
0,33
Outubro
Ramos
1,21
0,10
1,70
1,19
0,23
Flores
2,67
0,20
3,71
0,70
0,37
14
data
de
coleta
caractersticas
climticas,
influenciam
15
16
ultra-som definido com freqncias acima de 20,0 kHz. Estas ondas sonoras
criam uma variao de presso no lquido gerando a cavitao [57].
Os principais efeitos do ultra-som na extrao de plantas so: aumento
da permeabilidade das paredes celulares, produo de cavitaes (formao
espontnea de bolhas em um lquido abaixo do seu ponto de ebulio,
resultando num forte estresse dinmico) e aumento do estresse mecnico das
clulas, o que tambm chamado de frico interfacial [49].
Algumas clulas das plantas ocorrem na forma de glndulas (externas
ou internas) preenchidas com o leo essencial. Uma caracterstica das
glndulas externas que a membrana muito fina e pode ser facilmente
destruda pelo colapso das bolhas de cavitao prximo a parede das clulas.
Assim, facilita a penetrao dos solventes nas clulas e a liberao do
contedo do leo no solvente [49,50].
O ultra-som pode facilitar a dilatao e hidratao do material da planta
e causar alargamento dos poros da parede celular. Melhora a inchao e a
razo de transferncia de massa e, ocasionalmente, quebra a parede celular,
resultando no aumento da eficincia de extrao elou reduo do tempo de
extrao [58].
Para as glndulas internas, importante reduzir o tamanho das
partculas do material, aumentando assim o nmero de clulas diretamente
expostas extrao por solvente com ultra-som.
Sumarizando, podemos dizer que os possveis benefcios do ultra-som
na extrao so: o aumento da transferncia de massa, quebra das clulas
vegetais, aumento na penetrao do solvente e diminuio de efeitos capilares
[59].
O efeito do ultra-som no processo de extrao depende da freqncia,
potncia do aparelho e do tempo de extrao [60].
Existem dois tipos distintos de aparelhos geradores de ondas ultrasonoras [59,60]: o banho de ultra-som e a sonda, que podem ser visualizados
na Figura 3.
17
campo da qumica: (a) banho indireto, (b) banho direto e (c) sonda.
18
19
Analito
Mentha x piperata
Fagopyrum
esculentum
Referncia
Melechi et aI.
Shot~ruk
et aI.
Hromdkov et aI.
Ch preto, ch mate
Valerian officinalis I.
metilxantina
Lacerda et aI.
bomeol
Valachovic et aI.
Salvia officinalis
cineol, bomeol
Salisov et aI.
Chresta spp
esterides e triterpenos
Schinor et aI.
Macleaya cordata
alcalides
Zhal"!9. et ai
Sophora japonica
antioxidantes
Paniwnyk et aI.
Manjerona e organo cis-sabineno hidratado, terpineol-4 e Rodrigues
a-terpineoi, timol e carvacrol
Panax ginseng
saponinas
Wu et aI.
Soja
gordura
Stavarache et aI.
Celulose
eucalipto
P!QQ.as et aI.
Rosmarinus officinalis vitamina E
Torre et aI.
Soja
isoflavonas
Rosta--.a.no et aI.
Pastinaca sativa
furanocumarinas
Sowa etal.
Flores de citros
\inalol
Alissandrakis
et
aI.
Pisfachia vera
antioxidantes
Goli et aI.
Oleo vegetal
cidos graxos
Chemat et aI.
Eucommia ulmodies
cidos clorognicos
Li et aI.
[64]
[65]
[66]
[24]
[41]
[44]
[67]
[68]
[69]
[70]
[71]
[72]
[73]
[74]
[75]
[76]
[77]
[78]
[79]
[80]
nova,
que
utiliza
solventes
convencionais
em
elevada
20
apropriado.
Neste sistema, o processo de extrao realizado em temperaturas que
excedem o ponto normal de ebulio do solvente, e, dessa forma, a presso na
clula de extrao deve permanecer alta para manter o solvente no estado
lquido. Temperatura e presso influenciam na eficincia do processo. Devido
s altas presses e temperaturas utilizadas, a capacidade de sOlubilizao, a
difusividade e a cintica de extrao so aumentadas, acompanhadas por uma
diminuio dos tempos de extrao e volumes de solventes [52].
Desde o desenvolvimento do primeiro aparelho de extrao acelerada
com solvente, em 1995, poucas referncias podem ser encontradas quanto
aplicao da mesma na extrao de plantas [84].
21
22
Fcil de operar;
Sistema automatizado;
resultando
Desvantagens:
A extrao no seletiva;
23
amostra
Referncia
analito
Ch preto,caf
cafena
Dawidowicz et aI.
85
Ch preto, caf
cafena
Dawidowicz et aI.
86
Spirulina platensis
antioxidantes
Herrero, M. et aI.
87
Spirulina platensis
antioxidantes
Herrero, M. et aI.
88
Ma
polifenis
Alonso-Salces et aI.
89
Castanha
vitamina E
Delgado-Zamarreno et aI. 90
Soja
isoflavonas
Rostagno et aI.
91
Alecrim
antioxidantes
Herrero, M. et aI.
92
93
Plantas medicinais
ginsenosdeos
Choi et aI.
94
Plantas medicinais
alcalides
Ong et aI.
95
Soja
isoflavonas
Klejdus et aI.
96
Plantas medicinais
97
Ch
catequinas
98
Pineiro et aI.
99
Angelica sinensis
cido ferrlico
Lao et aI.
100
Ma
polifenis
Alonso-Salces et aI.
101
24
Estado do
Fludo
Gs
Densidade
(g.cm -3)
Difusividade
(cm2 . seg-1 )
(0,6-2) x 10-3
0,1-0,4
0,6-1,6
(0,2-2)
0,2-0,5
0,7 x 10-3
Viscosidade
(g. cm-1 . seg-1 )
(1-3)
10-4
Lquido
x 10-5
(0,2-3) x 10-2
Supercrtico
(1-3)
x 10-4
25
26
27
Amostra
lIex paraguariensis
lIex paraguariensis
lIex paraguariensis
Referncia
Saldana et aI.
Saldana et aI.
Esmelindro et aI.
N
122
123
124
Caredda et aI.
Lanas et aI.
Khajeh et aI.
Aghel et aI.
Ebrahimzadeh et aI.
Seger et aI.
125
126
127
128
129
130
Yang et aI.
131
132
Rodrigues et aI.
Rodrigues et aI.
133
zcan etal.
Pereira et.al.
134
135
Goli et.al.
Lanas et aI.
136
137
Chang et aI.
138
139
Khajeh et aI.
140
Khajeh et aI.
Amaral et aI.
141
cinco componentes: (A) fonte de C02; (8) bomba de alta presso; (C) cela de
extrao;
28
29
Vantagens
Desvantagens
mtodo padro;
grande quantidade de amostra;
Macerao
baixo custo.
SFE
Ultra-som
PLE
30
31
e/ou
reprodutibilidade
do
esquema
experimental
utilizado
(metodologia + equipamento).
Existem vrias maneiras de abordar tal aspecto durante o planejamento
dos experimentos, sendo que a escolha da abordagem peculiar a cada
experimento/equipamento e ser ditada, principalmente, pela experincia do
analista [147).
Em determinadas
32
composto,
ou
33
34
CAPITULO 3:
DETERMINAO DOS MINERAIS
DAS FOLHAS DE ERVA-MATE
CULTIVADAS SOB DIFERENTES
CONDiES AGRONMICAS-
1.0 EXPERIMENTAL
quatro tratamentos diferentes: no primeiro deles (linha 1), nenhum adubo foi
adicionado s plantas; no segundo (linha 2), foi aplicada uma dose de
300g/planta/ano de uria (fonte de nitrognio); no terceiro (linha 3) aplicou-se
uma dose de 120 g/planta/ano de cloreto de potssio (fonte de potssio); no
quarto tratamento (linha 4) foi aplicada uma dose de 300g/planta/ano de uria e
mais 120 g/planta/ano de cloreto de potssio.
Para avaliar o efeito da incidncia de luz sobre a composio qumica da
erva-mate, a rea experimental foi dividida em duas metades, sendo que em
uma delas foi utilizada uma tela de sombreamento (sombrite), na qual 75% da
luminosidade incidente retida, e na outra metade as plantas foram deixadas a
pleno sol.
Rosngela Assis Jacques
36
intensidade de luz.
(a)
(b)
Figura 6: Foto ilustrativa do experimento de campo: (a) rea a pleno sol e (b)
rea sombreada.
1.2 Amostras
37
38
Elemento
(nm)
Intensidade da
Fenda (nm)
Concentrao de
trabalho (mg L-1 )
lmpada (mA)
Ca
239,9
10
0,2
2-800
Na
303,2
0,2
2-400
Mg
202,6
1,0
0,15-20
Mn
403,1
0,2
0,5-60
Zn
213,9
1,0
0,01- 2.0
Cu
324,7
0,5
0,03 -10
Fe
248,3
0,2
0,06 -15
39
a)
b)
40
Figura 7.
As Tabelas IX e X (pginas 44 e 45) mostram os resultados em termos
de quantidade de macronutrientes e micronutrientes em mg/100g nas folhas de
erva-mate proveniente de plantas cultivadas ao sol e sombra, em diferentes
pocas de poda e com diferentes tipos de adubao. Pode-se observar que os
macro-nutrientes (K, Ca, Mg e Mn) apresentam valores entre 500 e 2500
mg/100g, sendo o potssio o composto majoritrio. Estes valores esto de
acordo com os valores encontrados por Sanz et al.[42] e Garcia et a/.[43]. Em
geral, o teor de K, Ca, Mg e Mn so altos para tecidos de plantas, e a ordem
crescente de concentrao destes metais : K>Ca>Mg>Mn [157, 158].
Entre os micronutrientes (Na, Zn, Fe e Cu), o sdio o elemento
majoritrio, apresentando um teor acima de 50 mg/100 g nas folhas de ervamate.
41
42
aquecimento foliar. Isso faz com que a prpria fotossntese seja mais eficiente,
uma vez que os estmatos tendem a ficar mais tempo abertos, em funo da
menor perda de gua. Assim, pode-se esperar que no ambiente mais
sombreado, a atividade metablica seja mais constante.
Na Tabela XI tambm observado um aumento expressivo no contedo
de mangans quando as plantas so adubadas com fontes de nitrognio e
potssio ao mesmo tempo. No caso do Mn, a maior concentrao foliar no
ambiente sombreado foi observada somente no tratamento sem adubao.
Quando se aplicou s N, os teores de Mn no diferiram significativamente.
Porm, chama a ateno o fato de que quando se aplicou N juntamente com K
ou apenas K, houve um expressivo aumento de Mn foliar nas duas situaes
de luminosidade. Como no h na literatura informaes a respeito de uma
possvel sinergia entre K e Mn, pode-se trabalhar com a hiptese de que tenha
ocorrido um deslocamento de ons Mn+2 da CTC (capacidade de troca de
ctions) do solo pela aplicao do adubo potssico, o que levaria a uma maior
disponibilidade de Mn+2 para as plantas. A hiptese se fundamenta pelo fato de
que em solos cidos (pH < 5,0) o Mn pode estar ocupando, como ction
adsorvido eletrostaticamente, 20 a 30% da CTC do solo. Neste caso, a
concentrao de Mn+2 na soluo do solo, que , em ltima anlise, de onde as
plantas retiram os nutrientes, pode ter aumentado em funo da sua
substituio na CTC pelos ons K" que foram supridos atravs da adubao
potssi~
[159].
43
base seca]
6 meses
sol
12 meses
sombra
sol
sombra
18 meses
sol
sombra
24 meses
sol
sombra
Sem adubo
5,390,04
6,430,03
5,30O,10
7,470,15
5,880,14
5,940,21
6,230,04
6,71O,06
5,250,05
6,400,04
5,300,14
7,630,05
5,110,06
5,600,14
5,850,01
6,840,01
4,970,05
5,690,06
5,400,10
7,100,20
6,070,10
6,230,01
5,47O,01
6,260,06
N +K
5,340,05
5,770,11
5,320,05
7,000,10
6,400,36
6,44O,13
6,350,06
7,210,10
44
Tabela IX: Contedo de macronutrientes das folhas de erva-mate em funo da idade da folha, incidncia de luz e adubao.
Mineral
Ca
Mg
Mn
Fertilizao
semadubao
N
K
N+K
sem adubao
N
K
N+K
sem adubao
N
K
N+K
sem adubao
N
K
N+K
24 meses
sol
sombra
545,0 :t4,O 590,40:t 7,7
513,9:t 13,7 543,2:t 2,5
653,2:t8,5 673,4 +8,8
612,6:t 2,5 554,3 +6,0
414,5:t1,6 514,1 :t13,4
550,7:t 7,9 720,1 :t8,2
521,1 :t6,9 703,1 :t 3,1
424,3 :t5,3 569,6 :t6,6
726,8 :t3,7 753,8 :t6,O
797,5 :t3,8 786,9 :t3,3
709,5:t 1,3 726,8 :t3,8
775,6 :t2,5 775,9 :t2,8
122,1 :tO,8 148,1 :tO,8
152,4 .:t0,8
152,7.:t2,1
240,6:t 1,6 182,6.:t 1,6
45
Tabela X: Contedo de micronutrientes das folhas de erva-mate em funo da idade da folha, incidncia de luz e adubao.
6 meses
sol
Fe
12 meses
18 meses
24 meses
sombra
sol
sombra
sol
sombra
sol
sombra
6,5 0,2
3,6 0,1
6,8 0,2
4,2 0,1
5,7 0,1
3,3 0,1
4,9 0,1
6,5 0,1
8,1 0,1
5,1 0,1
9,8 0,1
5,9 0,1
6,4 0,1
5,4 0,1
9,1 0,1
5,30,1
6,9 0,2
4,1 0,1
8,7 0,1
5,4 0,1
6,4 0,1
3,9 0,1
8,7 0,1
N+K
5,4 0,1
7,7O,1
4,4 0,1
9,2 0,1
4,5 0,1
6,4 0,1
4,3 0,1
8,2 0,2
8,8 0,1
6,4 0,1
11,60,2 7,90,1
8,2 0,1
7,60,1
7,80,1
5,8 0,1
9,0 0,1
6,6 0,1
8,5 0,1
7,70,1
8,1 0,1
6,0 0,1
9,3 0,1
6,7 0,1
11,8 0,1
8,3 0,1
8,7 0,1
8,0 0,1
8,3 0,1
N+K
6,2 0,1
9,2 0,1
7,0 0,1
12,00,1 8,30,1
8,9 0,1
8,2 0,1
8,4 0,1
0,88 0,1 1,17 0,1 0,74 0,1 1,17 0,1 0,64 0,1 0,82 0,1 0,75 0,1 0,76 0,1
N+K
sem adubao 31,9 1,2 48,7 1,1 21,1 0,6 50,1 1,9 37,2 0,6 56,5 0,8 30,6 2,1 22,0 0,1
Na
27,9 1,3 46,3 0,5 22,5 0,6 41,1 1,3 26,1 0,7 34,4 0,6 29,9 2,5 26,2 0,2
30,9 1,8 38,8 2,3 29,4 0,3 34,6 0,7 27,0 0,7 32,8. 2,3 29,5 1,1 32,8 0,1
N+K
20,8 1,3 40,2 1,5 24,3 0,8 29,6 0,4 34,3 0,3 27,6 ,8 31,7 1,3 30,4 3,5
46
Tabela XI: Anlise estatstica (ANOVA com teste de Tukey a 5%) dos contedos dos minerais das folhas de erva-mate, sob
diferentes condies agronmicas.
Mineral
06
meses
K
Intensidade de luz
mg/100g
12
18
mg/100g
Sol
sombra
meses
24
Adubao
mg/100g
Sem adubao
N
N+K
meses meses
926,7 b
1030,8a
978,7 b
Ca
716,9a
588,Ob
606,3c 522,2 d
532,2b
699,5a
504,7 d
Mg
755,6b
783,7 a
756,6b 756,7 b
761,9a
764,3a
757,2c
Mn
253,Oa
190,5b
192,9b 187,5b
205,Oa
207,Oa
150,9d
Na
35,67 a
31,56b
34,58a 29,12 b
284
, b
370
, a
37,30a
Fe
745
, d
922
, a
837
, b
801
, c
714
, b
939
, a
795
, c
818
, bc
840
, ab
852
, a
Zn
637
, a
645
, a
559
, c
597
, b
473
, b
745
, a
495
, c
701
, a
619
, b
625
, b
Cu
108
, a
100
, b
O,78c
O,80c
O,80b
1,05a
1,05a
O,94b
08r
,
O,80d
Letras iguais entre dois nveis da mdia de um fator, no tem diferena significativa a 5 % (Teste de Tukey).
47
Analisando a influncia da idade de poda das folhas de erva-mate podese observar que o teor de minerais mais alto em folhas jovens.
48
CAPTULO 4:
APLICAO DO CO 2 A ALTAS
PRESSES NA EXTRAO DE
COMPOSTOS ORGNICOS
DE ERVA-MATE
1.0 EXPERIMENTAL
esqualeno,
tricosano,
heneicosano,
eicosano,
docosano,
hexacosano,
heptacosano, triacontano,
nonacosano,
linolenato de metila,
50
F
A
51
52
posteriormente,
guardada em dessecador.
A coluna foi
53
Condio
Equipamento
Coluna
Ionizao
Modo de injeo
Gs de arraste e fluxo
Programao de Temperatura
Temperatura do injetor e interface
esqualeno,
eicosano,
docosano,
hexacosano,
nonacosano,
tricosano,
54
1.5.1 Derivatizao
irreversivelmente
na
coluna
cromatogrfica.
55
Experimento
Temperatura
Presso Densidade
Rendimento
(OC)
(atm)
(g cm-3)
30
175
0,868
1,93
20
250
0,963
1,73
40
250
0,880
2,46
20
100
0,854
1,19
40
100
0,612
0,53
56
como
solvente.
As
3,0
4Cf>c 250atm
2,5
+ +
+ + o o
+
0+ o+ o o o
0+ 0+ 0+ 0+
20C 250atm
.. 4QC 100atm
"*c
Q)
E
'
2ff'c 100atm
11
2,0
+ 3O"c
1,5
r:::
Q)
a:: 1,0
175atm
0,0 .
+>
J::.
J::.
J::.
11
11
..
..
..
.
..
.
..
..
.
..
. . .. .. ..
o +
o + J::.
0,5
J::.
o +
11
11
11
11
J::.
J::.
J::.
11
100
200
300
400
500
600
Figura 11: Curvas de extrao obtidas para erva-mate usando C02 a altas
presses (condies descritas na Tabela XIII). Erva-mate com idade de poda
de 12 meses cultivada a pleno sol e sem adubao.
57
58
Tabela XIV: Rendimentos dos extratos (mistura dos extratos da Tabela XIII)
obtidos por cromatografia lquida preparativa (fracionamento), expressos em
gramas (extrato) de cada solvente pela quantidade global da mistura do
extrato.
2.2.1
Frao
Eluenfe
Hexano
3,6
Tolueno
59,2
Diclorometano
8,8
Acetato de eti la
14,8
Acetona
3,2
Metanol
6,4
Anlise
cromatogrfica
Rendimento(% )
(GC-MS)
dos
extratos
obtidos
no
59
37
51
25
44
48
25
5Cl
Assis Jacques
60
de fitoesteris
de
plantas
tem
aumentado
interesse de
61
(~
Hexano
(8) Tolueno
11 13
(C) DlcJorometano
(E) Acetona
3D
(F) Metanol
50
_li.
de -Dflo .....)
XII.
62
r
.,~
mdio
6,6
8,8
11,5
14,3
16,7
18,6
22,1
21,9
22,8
23,2
24,1
24,5
25,5
26,9
28,6
29,1
29,2
29,9
30,3
30,7
30,9
31,0
31,4
32,5
33,7
34,6
34,7
35,6
36,6
36,7
38,6
38,7
40,5
40,6
42,4
42,5
42,7
44,2
45,8
45,9
47,5
47,7
47,9
48,8
50,2
52,3
53,0
nome do composto
cido octanico (*)
cido nonanico (*)
cido decanico (*)
cido undecanico (*)
cido dodecanico (*)
cido tridecanico (*)
cafena
cido tetradecanico (*)
teobromina
pentadecanoato de metila
hexadecanoato de metila
cido pentadecanico (*)
hexadecanoato de etila
cido hexadecanico (*)
fitol
cido heptadecanico (*)
linolenato de metila
fito I (ter-TMS)
docosano
cido linolico (*)
cido linolnico (*)
cido olico (*)
cido esterico (*)
tricosano
cido nonadecanico (*)
tetracosanol
tetracosano
cido eicosanico (*)
pentacosanol
pentacosano
hexacosanol
hexacosano
heptacosanol
heptacosano
octacosanol
octacosano
esqualeno
nonacosano
triacontanol
triacontano
commato de metila (C ou D)
commato de metila (C ou D)
untriacontano
vitamina E
dotriacontano
estigmasterol
tritriacontano
frmulalMM
identificao (*)
prob.(%)
C11H2402Si/206
C12H2602Si1220
C13H2s02Si/234
padro, MS
padro, MS
padro, MS
padro, MS
padro, MS
padro, MS
padro, MS
padro, MS
padro, MS
MS
MS
padro, MS
padro, MS
padro, MS
padro, MS
padro, MS
padro;MS
padro, MS
MS
MS
MS
MS
padro, MS
padro, MS
MS
MS
padro, MS
MS
MS
padro, MS
MS
padro, MS
MS
padro, MS
MS
padro, MS
padro;MS
padro, MS
MS
padro, MS
MS
MS
padro/MS
padro/MS
padro, MS
padro, MS
padro, MS
85
88
85
88
87
86
96
92
90
88
86
85
90
96
93
90
89
90
88
92
90
90
92
86
89
85
86
85
87
88
88
88
86
87
88
88
92
90
89
88
87
87
87
90
89
87
88
C14H300~i/248
C15H322Si/262
C1sH340~iI286
CsH1ON40i194
C17H360i300
C7HsN402/180
C1sH3202/254
C17H3402/270
C1sH380i314
C1sH3602/284
C19H4002Si/328
C2QH400/296
C2QH422Si/342
C19H322/292
C23H480Si/368
C22H461'31 O
C21H4002Si/352
C21H38~i/350
C21H4202Si/354
C21H4402Si/356
C23H48i324
C22H462Si/370
C24H500/354
C24Hsof338
C23H480~i/384
C25H520/368
C25Hsi352
C26H540/382
C26HsJ366
C27H560/396
C27Hssf380
C2sH580/410
C28Hssf394
C30Hsof41O
C29HsoI408
C30H620/438
C30Hsi422
C31HsoOJ486
C31HsoOJ486
C31HsJ436
C29H5002/430
C32Hssl450
C29H480/412
C33Hssl464
63
Continuao da Tabela XV
W
m~io
48
49
50
51
53,2
54,1
54,9
55,1
nome do composto
estigmasterol (ter-TMS)
estigmast-5-em-3-ol (3-beta)
estigmast-8-em-3-ol (3-beta)
beta-sitosterol (ter-TMS)
frmulalMM
Identificao (*)
prob.{%)
C29H480Si/528
C29H500/414
C29H500/414
C32H580Si/486
padro, MS
MS
MS
padro, MS
89
89
88
88
As fraes obtidas pela eluio com acetato de etila (D), acetona (E) e
metano I (F) apresentaram principalmente steres, cidos saturados e
insaturados. Alguns destes compostos tm sido citados na literatura em
extratos de erva-mate obtidos por SFE [28] e por outros processos de extrao.
Tambm podemos observar na Figura 13 que a maior porcentagem de cafena
foi eluda na frao de acetato de etila (D), completando-se a eluio nos
solventes subsequentes. interessante notar que nos extratos brutos foram
encontrados cidos carboxlicos e tambm steres metlicos e etlicos. Isto
pode ser afirmado pois, os cidos livres foram derivatizados formando o ster
TMS, enquanto os outros aparecem como steres metlicos e etlicos.
tambm interessante observar que o cromatograma da frao (B) (eludo com
tolueno) apresenta alguns compostos que no foram identificados com picos
intensos e tambm que esta frao tem uma alta porcentagem de extrato
(Tabela XIV). Podemos concluir que alguns compostos a base de cera podem
64
25
,
2O
,
! Sol-Linha 1
Sol-Linha 2
... Sol-Linha 3
O Sol-Linha 4
Sombra-Linha 1
Sombra-Linha 2
... Sombra-Linha 3
O Sombra-Linha 4
+ + +
+
++
+ .. '"
'6
tt**
*-
~ ~
0,5
..
Ot<~O
: * Ooe
......
t O. 0.0.
C1 c) O O
*.;. .J.~
10
......
O O
t ~~ ~
~
'I
0,0 .................-............~..........---.................._~..........---...................._
O
100
200
300
400
500
..................................
600
700
massa de 0l91
65
(I 6meses
0,9
C
O
12meses
18 meses
24meses
DCCO O
O O
?fi
o
QI
O O
0,6
E
'
C C
QI
a::
0,3
+
00'
, O
~ O
100
+ +
+ +
+ + +
C O
++
+ +
~ <e
200
400
500
600
700
66
67
Tabela XVI: Compostos das folhas de erva mate com idade de 18 meses de poda, quantificados em funo do tipo da fertilizao
e incidncia de luz.
sol
composto
sem adubo
cafena
4290 84,8
N+K
sem adubo
N+K
c. palmtico
358,412,9 256,811,5
129,24,7
210,69,6
288,86,4
255,810,5
fitol
229,93,4
102,85,9
332,810,2
111,85,6
132,75,2
93,42,2
c. esterico
29,75 1,0
28,60,6
28,00,7
28,40,8
31,8O,4
31,40,3
26,60,7
27,30,9
esqualeno
vitamina E
1260,1 39,1
2755,456,1
1548,526,7 999,216,4
68
Tabela XVII: Anlise estatstica (ANOVA com teste de Tukey a 5%). Efeito da
intensidade de luz e do tipo de adubao sobre a concentrao (mg/kg de
amostra) de compostos selecionados do extrato de folhas de erva-mate com 18
meses de idade, obtidos por SFE.
mg/kg
intensidade de luz
adubao
composto
sombra
cafena
5788,8a 3017,8b
4188,4b
sol
sem adubo
N+K
c.palmtico
271,6a
221,1 b
185,7d
219,8c
323,6a
256,3b
fitol
212,9a
167,7b
334,6a
147,2c
181,3b
982
, d
c. esterico
284
, a
296
, a
291
, a
296
, a
300
, a
273
, a
esqualeno
9420,3b 10053,4a
11651,2a
vitamina E
1808,3a 1276,3b
1595,1 b
69
o efeito
[2~].
70
massa das folhas secas [8, 14, 22,23,173]. Saldaria et aI. [26] identificaram e
quantificaram a cafena em extratos de folhas de erva-mate obtidos por extrao
por fludo supercrtico e encontraram valores de 4308 mg/kg deste composto, na
temperatura de 70C e presso de 255 atm.
Em um outro trabalho, Saldaria et aI. [27], observaram que a modificao
do solvente com diferentes quantidades de etano I resultou em um aumento da
concentrao de cafena nos extratos das folhas de erva-mate obtida por SFE a
200 atm e 70C (de 3320 mg/kg para 6110 mg/kg de cafena nas folhas ervamate). Os valores de cafena da Tabela XVII esto dentro da faixa de
concentrao encontrada por estes pesquisadores.
71
72
1.0 EXPERIMENTAL
~:
74
..
Condensador de ar
..
Parede da aparelho
4-Rl-- gua
Figura 16: Equipamento utilizado para extrao com ultra-som das folhas de
erva-mate.
75
76
CAPTULO 5:
APLICAO DO U'lTRA-SOM
NA EXTRAO DE COMPOSTOS
ORGNICOS DE ERVA-MATE
Y (%) =5.32 + 0.48X1 + 1.08X2 + 4.59X3 + 0.38X4 + O.85Xs + O.83X1X4 - 0.59X1Xs - 0.47X4Xs + 0.43 XW + 0.63 XW
77
1
2
3
4
5
6
7
X1
(-) 60
(-) 60
(-) 60
(-) 60
(+) 180
(+) 180
(+) 180
(+) 180
(-) 60
(-) 60
(-) 60
(-) 60
(+) 180
(+) 180
(+) 180
(+) 180
X2
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
25
25
25
25
25
25
25
25
75
75
75
75
75
75
75
75
(-)
(-)
(+)
(+)
(-)
(-)
(+)
(+)
Hex
Hex
Met
Met
Hex
Hex
Met
Met
Hex
Hex
Met
Met
Hex
Hex
Met
Met
Xs
N
(-)
(-)
(+)
(+)
(+)
(+)
(-)
(-)
2,506
2,508
7,501
7,486
7,506
7,501
2,502
2,505
7,509
7,506
2,507
2,505
2,503
2,504
7,505
7,503
(-)
(+)
(-)
(+)
(-)
(+)
(-)
(+)
1:10
1:30
1:10
1:30
1:10
1:30
1:10
1:30
1:10
1:30
1:10
1:30
1:10
1:30
1:10
1:30
exper.
0,33
0,63
5,84
9,95
0,66
1,13
6,78
13,4
0,33
0,64
6,6
9,6
0,78
1,39
12,1
12,6
teor.
0,00
1,32
6,73
9,93
0,13
0,80
7,98
13,07
1,77
0,07
6,31
9,02
1,43
1,61
12,70
13,53
(+)
(-)
(-)
(+)
(+)
(-)
(+)
(+)
(+)
(+)
(-)
(-)
(-)
(+)
(+)
(+)
(-)
(-)
(+)
(-)
(-)
(-)
(+)
(+)
(+)
(+)
(-)
(+)
(+)
(+)
(+)
(+)
(-1) nvel baixo; (+1) nvel alto; X1 (tempo de extrao em minutos); Xz (temperatura
extrao De); X3 (polaridade do solvente); X4 (massa de amostra em g); X5 (massa
9
10
11
12
13
14
15
16
de
de
Xa (polaridade
78
(0.83X1~),
~
~
~14
C/)
Cb
I o exp~rjmental J
teonco
E: 12
E
(J)
E
"-c:
010
1::
(J)
~ 6
"'o
4
2
o
o
o
2
~
4
~
6
2
10
12
~
14
16
experimento
Figura 17: Correlao entre os rendimentos obtidos experimentalmente e
aqueles calculados pelo modelo emprico do planejamento fatorial fracionrio 25-1.
= 0,984)
79
80
(AI S onicao
com hexano
16
28
....
N
!ia
....o.
21
ZOOM
25
16
(8) Sonicao
com metanol
....
N
::;:
o. . . . . - - - - - - - - ,
....
20
29
7
ZOOM
25
Figura 18: Cromatogramas do on total dos extratos obtidos por ultra-som com
hexano (A) e metanol (B), das amostras de erva-mate com idade de poda de 18
meses, cultivada a pleno sol e adubada com fonte de nitrognio. Os picos
identificados esto na Tabela XIX. As condies cromatogrficas esto descritas
na Tabela XII.
81
Tabela XIX: Principais compostos identificados nos extratos por ultra-som com
hexano e metanol, das amostras de erva-mate com idade de poda de 18 meses,
plantada a pleno sol e adubada com fonte de nitrognio.
N
Solvente
hexano metanol
compostos identificados
mdio
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
6,54
8,80
11,36
15,48
16,74
18,10
20,74
21,81
22,82
24,47
25,70
26,40
26,94
29,22
29,99
30,63
30,80
30,91
31,38
35,62
39,52
42,92
44,18
54,97
62,86
cido octanico(*)
cido nonanico(*)
cido decanico (*)
cido heptanodiico(*)
cido dodecanico (*)
cido octanodiico(*)
cido nonanodiico(*)
cafena
teobromina
cido pentadecanico{*)
cido undecanodiico(*)
cido palmitoleico (*)
cido hexadecanico(*)
cdo heptadecanico(*)
fitol (TMS-derivado)
cido linoleico(*)
cido linolnico(*)
cido olico (*)
cido esterico(*)
cido eicosanico(*)
cido docosanico(*)
esqualeno
nonacosano
estigmast-8-en-3-01
agnosterol(ter-TMS derivado)
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
frmulalMM
CllH24~Si/206
C12H260~i/220
C13H2S02Si/234
C13H2S04Si2/304
C15H3202Si/262
C14H3004Sii318
ClsH324Si2/332
CsH10N402/194
C7HsN402/100
ClsH3802/314
C17H3604Si2/360
C38H7402Si/591
C19H4Q02Si/328
C20H4202Si/342
C23H480Si /368
C21H4Q02Si/352
C21H380~i/350
C21H4202Si/354
C21H4402Si/356
C23H4802Si/384
C25Hs202Si/412
C30Hso/410
C29H60/408
C29HsoO/414
C33H560Si /496
Identificao
(*)
MS
MS
MS
MS
MS
MS
MS
PadrolMS
Padro/MS
Padro/MS
MS
padrolMS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
MS
MS
MS
padro/MS
MS
MS
padro/MS
padro/MS
padrolMS
padro/MS
probo
(%)
85
88
85
85
87
92
90
96
92
85
86
87
96
90
90
92
90
90
92
85
85
92
90
85
85
82
compostos
metilxantinas
(cafena
identificados
e
neste
teobromina),
extrato foram:
cidos
hidrocarbonetos,
carboxlicos
saturados
As principais variveis que influenciaram o processo de extrao por ultrasom foram: tempo de extrao, polaridade do solvente e razo massa de
amostra I volume de solvente.
83
84
CAPTULO 6:
APLICAO DA EXTRAO COM
lQUIDO PRESSURIZADO NA
ANLISE DOS COMPOSTOS
ORGNICOS DE ERVA-MATE
1.0 EXPERIMENTAL
26-2
nas
A partir deste captulo o termo ASE ser usado como sinnimo de PLE,
uma vez que o equipamento usado assim designado comercialmente. As folhas
de erva-mate foram extradas em um equipamento de ASE 300 da marca
Dionex, conforme visualizado na foto da Figura 19. Foram utilizadas clulas de
ao inoxidvel para extrao, com capacidade mxima de 100 mL e frascos
coletores de vidro com capacidade de 250 mL.
86
planejame~to
X2
%)
87
88
=1 a 1O) :
y % = 7.753 + 1.030 X1 + 0.608 X2+ 6.089 X3 + 1.788 X4 - 0.841 Xs + 0.283 Xs+ 0.546 X1X4 + 2.009 X1X2 - 0.649 Xw.
89
rendo em massa
(%)
X2
X1
Exp.
Xa
Xs
Xs
exp.
terico
(-)
50
(-)
50
(-)
Hex
(-)
2,483
(-)
(-)
1,1
0,70
(-)
50
(-)
50
(-)
Hex
(-)
2,589
(+) 30 (+)
1,3
0,91
(-)
50
(-)
50
10
(-)
14,1
16,58
(-)
50
(-)
50
15,9
14,21
(-)
50
(+) 100
(-)
(-)
10
(+)
1,0
0,90
(-)
50
(+) 100
(-)
(+) 30
(-)
0,70
0,0
(-)
50
(-)
2,627
(-)
10
(+)
11,5
1.1,98
(-)
50
(-)
2,538
(+) 30
(-)
8,1
8,44
(+) 100
(-)
50
(-)
10
(+)
2,5
2,89
10
(+) 100
(-)
50
(-)
(-)
1,5
1,91
11
(+) 100
(-)
50
(+) Met
(-)
2,541
(-)
10
(+)
12,5
11,73
12
(+) 100
(-)
50
(+) Met
(-)
2,505
(+) 30
(-)
8,2
8,17
13
(-)
Hex
(-)
2,568
(-)
10
(-)
2,9
2,98
14
(-)
Hex
(-)
2,579
(+) 30 (+)
2,4
3,13
15
10
(-)
23,1
20,93
16
(+) 100 (+) 100 (+) Met (+) 7,587 (+) 30 (+)
17,2
18,56
(-)
(-)
(-)
10
90
(massa de
X1~),
R = 0,984. O
91
considerado, pois, esta foi a melhor condio do processo de PLE com hexano.
-25
Io
i!
-.5=
I:
ai
Experi mental
Terico
20
-=
I:
ai
ti:
15
10
~ ~
O
O
O O
O
4
10
O
12
Q
14
16
18
Condio elqJerimental
26-2
para a
A Figura 21 presenta os cromatogramas do on total dos extratos de erva mate obtidos por extrao com lquido pressurizado (PLE) utilizando hexano e
metanol como solventes. A identificao dos picos est apresentada na Tabela
XXI.
92
16
A) hexano
40
23
39
16
B) metano I
41
Figura 21: Cromatogramas do on total dos extratos obtidos por extrao com
lquido pressurizado (PLE) com hexano (A) e metanol (8), das amostras de ervamate com idade de poda de 18 meses, cultivada a pleno sol e adubada com fonte
de nitrognio. Os compostos correspondentes aos picos identificados esto
listados na Tabela XXI. As condies cromatogrficas esto descritas na Tabela
XII.
93
Tabela XXI: Principais compostos identificados nos extratos por extrao com
lquido pressurizado com hexano e metanol, nas amostras de erva-mate com
idade de poda de 18 meses, cultivada a pleno sol e adubada com fonte de
nitrognio.
W
Solvente
hexano metanol
compostos identificados
mdio
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
6,54
7,67
8,80
11,36
14,30
16,74
18,10
20,74
21,81
22,0
23,86
24,45
24,47
25,70
26,40
26,94
28,56
29,22
29,99
30,63
30,80
30,91
31,38
33,69
35,62
36,72
39,52
40,48
40,50
42,43
42,55
42,92
43,12
44,18
45,82
45,88
47,68
47,87
48,7
54,97
62,86
cido octanico(*)
cido butanodiico(*))
cido nonanico(*)
cido decanico (*)
cido undecanico(*}
cido dodecanico (*)
cido octanodiico(*)
cido nonanodiico(*)
cafena
cido tetradecanico(*)
hexadecanoato de metila
cido hexadecanico
cido pentadecanico(*}
hexadecanoato de etila
cido palmitoleico (*)
cido hexadecanico(*}
fitol
cido heptadecanico(*}
fitol(ter-TMS-derivado)
cido linoleico(*)
cido linolnico(*)
cido olico (*)
cido esterico(*}
cido nonadecanico(*)
cido eicosanico(*}
pentacosano
cido docosanico(*)
heptacosanol
heptacosano
octacosanol
octacosano
esqualeno
hexadecanal
nonacosano
triacontanol
triacontano
acet estigmasta-5,22-dien-ol
untriacontano
vitamina E
estigmast-8-en-3-ol
agnosterol(TMS-derivado)
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
CllH240~i1206
Cl0H2204Si2/262
C12H2602Si/220
C13H2S02Si/234
C14H3002Si/248
C15H322Si/262
C14H3004Sii318
C15H3204Si2/332
CSH10N4021194
C17H3602/300
C17H3402/270
ClsH322/256
ClsH3802/314
ClsH3602/284
C38H740~i/591
C19H4002Si/328
C20H400 /296
C20H4202Si/342
C23H480Si /368
C21H4002Si/352
C21H380~i/350
C21H420~i/354
C21H440~i/356
C22H4602Si/370
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
frmulalMM
X
X
X
C23H480~i/384
C25H52/352
C25H5202Si/412
C27H560 /396
C27H56/380
C2sH580 / 410
C28H58/394
C30H50/410
ClsH400
C29H60/408
C30H620 /438
C30H62/422
C31H5002/454
C31H64/436
C29H5002/430
C32H560Si /528
C33H560Si /496
Identificao
(*)
MS
MS
MS
MS
MS
MS
MS
MS
Padro/MS
Padro/MS
Padro/MS
Padro/MS
MS
padrolMS
padro/MS
padrolMS
padrolMS
padrolMS
padro/MS
MS
MS
MS
padro/MS
MS
MS
padro/MS
MS
MS
padro/MS
MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
MS
Padro/MS
MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
probo
(%)
85
87
88
85
88
87
92
90
96
92
85
85
85
96
87
96
93
90
90
92
90
90
92
89
85
88
85
86
87
88
88
92
88
90
89
88
87
87
89
85
85
94
hexadecanico (16), cido linolnico (21), cido esterico (23) e nonacosano (34)
so os maiores compostos dos extratos de erva-mate obtidos por extrao com
lquido pressurizado (PLE) utilizando hexano e metanol como solventes. Na
frao hexnica foram identificados um nmero maior de compostos em
comparao com a frao metanlica. Podemos observar que alguns compostos
so identificados simultaneamente nas duas fraes, o que indica que a extrao
destes compostos pode ser realizada com apenas um solvente.
95
96
CAPTULO 7:
COMPARAO DE TCNICAS DE
EXTRAO DE COMPOSTOS
ORGNICOS DA ERVA -MATE
USANDO SOLVENTES ORGNICOS
1.0 EXPERIMENTAL
98
..
Condensador. ar
99
75C). O extrato foi recuperado por filtrao em papel filtro Whatman 1PS. Os
solventes foram usados na mesma ordem de polaridade do processo de
macerao: hexano, tolueno, diclorometano, acetato de etila, acetona e metano!.
Aps a extrao com um solvente, uma nova amostra de erva-mate foi extrada
com o solvente seguinte, e assim sucessivamente. Estes extratos foram secos
sob N2, pesados e guardados ao abrigo da luz e calor.
extrada com
100
hexano
macerao 2,40O,05
tolueno
acetona
metanol
1,90O,04
2,50O,10
1,80O,06
7,3O,14
14,3O,14.
ASE
2,90O,08
4,20O,07
2,10O,04
1,30O,05
3,20O,08
23,1 O,2
US
1,35O,07
4,40O,1
1,90O,09
2,30O,1
3,OO,08
14,4O,2
101
solventes
macerao
US
PLE
hexano
tolueno
diclorometano
acetato
de etila
acetona
metanol
5,Ob
4,6c
6,2a
2,2d
3,5c
2,2d
1,8d
4,5b
17,3a
diclorometano e acetato
de etila
no apresentaram diferena
102
lln
16
A) Hexano
30.5 31
"'1'------'
&
39
B) TOIueno
8
32
39
Dl Acetato de etila
E)_na
FI Metanol
16
103
W
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
1R
mdio
6,54
8,80
11,36
14,3
16,74
18,10
20,74
21,81
22,00
22,82
23,22
23,86
24,47
24,87
26,40
26,94
28,56
29,22
29,99
30,25
30,63
30,80
30,91
31,38
33,69
35,62
36,72
39,52
40,50
42,43
42,55
42,92
43,02
44,18
45,82
45,88
47,87
48,7
54,15
compostos identificados
H T O AE A M
X X X X
X X X X
X X X X
X
X X X X
X X
X
X X X X
X X X X
X
X
X
X
X X X
X X
X
X X
X X X X
X
X X X X
X X X X
X
X X X X
X X X X
X X X X
X X X X
X
X X X X
X X X
X
X
X X X
X
X
X X X X
X
X
X
X
X
X X
X X
X
X
X X
X
X
X X
X
X X
X
X X X X X
X
X
X X X
X
X X X
Identificao
(*)
MS
MS
MS
MS
MS
MS
MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
MS
padro/MS
MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
MS
MS
MS
padro/MS
MS
MS
padro/MS
MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
probo
(%)
85
88
85
88
87
92
90
96
92
90
89
88
85
89
87
96
93
90
90
88
92
90
90
92
89
85
88
85
87
88
88
92
85
90
89
88
87
89
85
104
mtodo
de
extrao
tentativamente
105
11
A)
22
H_no
13
'I.
..&
~Wl
2.
~13D
3S
3&
37
22
D) _ _ _
"
11
22
'I.
F)_noI
Figura 24: Cromatogramas do on total dos extratos obtidos por extrao com
ultra-som com hexano (A) tolueno (8), diclorometano (C), acetato de etila (D),
acetona (E), metanol (F) das amostras de erva-mate com idade de poda de 18
meses, cultivada a pleno sol e adubada com fonte de nitrognio. Os picos
identificados esto na Tabela XXV. As condies cromatogrficas esto
descritas na Tabela XII.
106
Tabela XXV: Principais compostos identificados nos extratos obtidos por extrao com
ultra-som com hexano(H), tolueno(T), diclorometano(D), acetato de etila (AE), acetona (A)
e metanol(M) nas amostras de erva-mate com idade de poda de 18 meses, cultivada a
pleno sol e adubada com fonte de nitrognio.
N
compostos identificados
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
mdio
6,54
6,99
7,67
8,80
11,36
14,3
15,48
16,74
18,10
20,74
21,81
22,82
23,86
24,11
24,45
24,47
24,87
25,55
25,57
25,70
26,40
26,94
28,56
29,22
29,25
29,99
30,63
30,80
30,91
31,38
33,69
35,62
39,52
42,92
44,18
48,7
54,15
62,89
T D AE A M
X X
X X
X X
X
X
X X
X
X
X X X
X X X X
X X X X X
X X X X X
X
X
X
X
X
X
X
X
X X
X
X X
X
X
X
X
X
X X
X X X X X X
X
X
X X X
X
X X
X X X X X X
X X X X X X
X X X X X X
X X X X X X
X X X X X X
X
X
X
X
X
X X
X
X
X
X
X X
X X X X X X
X
Identificao
(*)
MS
MS
MS
MS
MS
MS
MS
MS
MS
MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
MS
padro/MS
MS
padro/MS
MS
MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
MS
padro/MS
MS
MS
padro/MS
padro/MS
MS
MS
MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
probo
(%)
85
89
89
88
85
88
87
87
90
90
96
90
88
89
91
87
89
87
89
88
88
96
93
90
88
93
92
90
90
92
87
85
85
92
90
89
85
85
107
como
cido
clorognico,
com
propriedades
antioxidantes
108
20
31
A)He.....o
B)Tolueno
C) DicIOl'"ornetano
48
O) Acetato de etia.
49
9
E)
Acetona
F)
48
7
Metenol
49
109
1R
mdio
6,54
7,67
8,80
11,36
14,3
16,74
18,10
20,74
21,81
22,0
22,82
23,86
24,44
24,45
24,47
24,87
25,55
25,57
26,40
26,94
27,98
28,15
20,28
28,56
28,78
29,22
29,99
30,63
30,80
30,91
31,38
33,69
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33 34,58
34 35,62
35 36,72
36 39,52
37 40,48
38 40,50
39 42,43
40 42,55
AE A
X
X
X
X
X
X
X X
X
X
X X X X
X X X X
X X X X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
compostos identificados
H T O
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X X X X X
X X
X
X X
X
X
X X
X X X
X X X
X X X X X X
X
X
X X
X
X X
X
X X
X X
X X
X
X X
X
X X X X
X
X X X
X
X X X
X
X X
X
X X
X
X X
X X X X
X
X
X X X X
X X
X X
Identificao
(*)
MS
MS
MS
MS
MS
MS
MS
MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
MS
padro/MS
MS
padro/MS
MS
padro/MS
MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
padro/MS
MS
MS
padro/MS
padro/MS
MS
padro/MS
MS
padro/MS
MS
MS
padro/MS
MS
padro/MS
probo
(%)
85
89
88
85
88
87
90
90
96
90
90
88
89
91
87
89
87
89
88
96
89
90
90
93
90
90
93
92
90
90
92
87
86
85
88
85
87
88
87
89
110
N
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
(*)
compostos identificados
H T O AE A M
mdio
X X
42,92 esqualeno
43,02 estigmast-5-en-ol
44,18 nonacosano
X X
45,82 triacontanol
X X
45,88 triacontano
X X
47,69 estigmasta-5,22-dien-ol acetato X X
47,87 untriaconatano
X X
48,7 vitamina E
X X X
54,15 estigmast-5-em-ol (3-beta)
X X
62,89 agnosterol (ter-TMS)(*)
compostos identificados como derivados TMS
X
X
X
X X
X
X
Identificao
(*)
padro/MS
padrolMS
padro/MS
MS
padro/MS
padro/MS
padrolMS
padro/MS
padrolMS
padrolMS
probo
(%)
92
85
90
88
89
85
88
89
86
87
111
composto
hexano
tolueno
458,8 15,5
cafena
cido palmtico. 228,1 10,5
2,1 O,14
fitol
2,0 O,1
cido esterico
1157,4 40,1
esqualeno
131,3 6,5
vitamina E
4271,9 95
216,8 8,7
4,4 0,3
0,07 O,O01
121,85,5
280,4 13
2977,9 45
114,5 5,5
2,1 0,2
5,2 0,7
33,6 1,9
115,5 4,O
acetona
metanol
574,9 25
256,4 10,1
3,4O,3
9,9O,3
841,3 24,8
279,3 16,3
568,3 17,8
12,5 O,3
0,035 0,001
O,05O,O01
151 7,0
55,0 1,4
1895,2 55
cafena
744,3
20,1
cido palmtico.
4,7 O,2
fitol
7,30,4
cido esterico
1187,5 83,1
esqualeno
76,1 1,2
vitamina E
ND NO DETECTADO
6358,580
52,33,1
0,84 O,O8
0,4 O,02
120,2 3,2
64,3 1,8
4805,2 65
13,2 O,5
1,2 O,14
0,37 O,01
34,2 2,O
6,85O,5
Tabela XXVIII: Anlise estatstica (ANOVA com teste de Tukey a 5%) referente
concentrao dos compostos das folhas de erva-mate com idade de poda de 18
meses, cultivada a pleno sol e adubada com fonte de nitrognio (mg/kg de
amostra) obtidos por macerao, ultra-som e extrao com lquido pressurizado.
mglkg de erva-mate (base seca)
tcnica
composto macerao
cafena
cido
palmtico
fitol
cido
esterico
esqualeno
vitamina E
2082,2b
107,9b
2,Ob
1,4c
352,7b
129,9b
US
solventes
ASE
1866c 3278,88
75,~
226,88
1,1 c
4,78
3,38
4,88
647,1B 358,4b
227,1 8 59,5c
976,;3e 4836,38
409,68 135,4c
3,4b
9,78
1,gc
0,;3e
1062,1B 378,4c
162,2b 286,38
3989,1 b
53,2d
acetato
de etila
acetona metanol
1,;2e
7,1 b
4,28
3,OC
1,gc
1,3d
0,27f
0,5e
494,7b
162,8b
243,6d
68,21
279,5d
77,1d
258,1 d
76,3e
112
113
114
CAPTULO 8:
CONCLUSES
CONCLUSOES GERAIS
CONCLUSOES ESPECFICAS
Quanto extrao por fluido supercrtico (5FEJ:
116
117
independente do
mtodo de extrao,
especialmente
pela
valor
agregado
tais
como:
cafena
(responsvel
pelas
esqualeno
(bactericida
natural,
empregado
118
chegando
aos
24
meses
com
rendimentos
Analisando a influncia da idade de poda das folhas de erva-mate, podese observar que o teor de minerais mais alto em folhas jovens. Plantas
cultivadas em reas sombreadas apresentam maior quantidade de
nutrientes do que aquelas plantadas ao sol. O metabolismo da planta de
erva-mate fortemente influenciado pelas condies agronmicas de
plantio, que se reflete diretamente na composio mineral das folhas. As
variveis agronmicas que mais influenciaram foram a idade de poda das
folhas e a intensidade de luz.
119
CAPITULO 9:
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Erva-mate
(I/ex
paraguariensis
St.
HiI.)
Dissertao
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Mestrado,
Carvalho,
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136
CAPTULO 12:
ANEXOS
ESTRUTURAS QUMICAS
12.1 - Estruturas das Metilxantinas
~N
/C~
N
o~
/CHs
H",
N
I ~
N
O~
I
CHs
C~
>
Teobromina
Cafena
Teofi li na
138
12.2 - Derivatizao
CHs
.t.mostra
-:
+ CH3 -S1-x _
Para BSTFA,
Amostra -
-si
..
-CH3
HX
CHs
CH..
ParaTMCS,
x= Cl
Fitol derivatizado
hexadecanico
139