Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Ingeniero Bioqumico
Depto. Mtodos de Anlisis

1. Nombre de la Materia: Curso prctico de Mtodos de Anlisis.

2. Nombre de la prctica: Estudio de Algunos factores que afectan el establecimiento de un mtodo
espectrofotomtrico.
3. Nombre del alumno: Torres Martnez Jordn Josu
4. Grupo: 4IM2
5. Seccin No. 2
6. Profesor: Rivas Faras Arturo
7. Fechas de realizacin: 19/Mayo/2015 y 21/Mayo/2015
8. Fecha de entrega: 28/Mayo/2015
9. Situacin escolar: Inscrito

Estudio de Algunos factores que afectan el establecimiento de un mtodo espectrofotomtrico.

Resultados:
Tabla No.1 Resultados de seleccin de tubos de ensayo comunes para usarlos como celdas.
Tobo No.
1
2
3

Giro Izquierda
94.5
92.1
93.3

%T400 (H2O)
Centrado
94.2
92.3
93.2

Giro Derecha
94.6
93.4
93.1

%T400 (NiSO4)
21.5
21.4
22.1

4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20

93.7
93.5
93.7
92.8
92.6
90.3
91.6
92.2
92.3
92.9
92.5
91.8
92.8
91.3
91.2
91.7
92.3

93.2
93.0
93.7
92.9
92.8
90.8
91.9
92.2
92.4
93.0
92.7
92.6
92.9
92.2
91.6
91.7
91.8

93.1
92.6
93.9
92.8
93.1
91.0
92.1
92.6
92.2
92.9
92.9
91.6
92.8
92.3
91.5
91.9
92.2

22.0
21.9
21.9
22.1
21.9
21.7
21.8
22.0
21.8
21.9
22.0
21.4
21.8
21.8
21.7
21.6
22.0

Nota los datos resaltados son los delos tubos eliminados para ser celdas en las siguientes experiencias.

Tabla NO. 2 Curva de calibracin de Fe 3+ por el mtodo de NH4SCN

Tubo No.

Fe3+
(g/ml)

A480

B
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

0
0.0698
0.1768
0.3400
0.6800
1.0200
2.3800
3.7400
5.1000
6.4600
7.8200

0
0.006
0.016
0.033
0.087
0.125
0.278
0.458
0.613
0.759
0.898

A ajustada
por
regresin
lineal
0.003
0.011
0.023
0.042
0.082
0.121
0.280
0.438
0.597
0.755
0.914

AAjustada

(AAjustada)2

-0.003
-0.005
-0.007
-0.009
0.005
0.004
-0.002
0.02
0.016
0.004
-0.016

0.000009
0.000025
0.000049
0.000081
0.000025
0.000016
0.000004
0.000400
0.000256
0.000016
0.000256

11
12

9.1800
10.540

1.068
1.231

1.072
1.231

-0.004
0

0.000016
0

Tabla No.3 Datos para aplicar el mtodo de Ringbom en la determinacin de Fe 3+ por el mtodo de SCN-

Tubo No.

Fe3+ (g/ml)

Log(Fe3+)

A480

%T

Absorbancia

B
0
0
0
100
0
1
0.0698
-1.1561
0.006
98.62
1.38
2
0.1768
-0.7525
0.016
96.38
3.62
3
0.3400
-0.4685
0.033
92.68
7.32
4
0.6800
-0.1674
0.087
81.84
18.16
5
1.0200
0.0086
0.125
74.98
25.02
6
2.3800
0.3765
0.200
63.09
36.91
7
3.7400
0.5728
0.358
43.85
56.15
8
5.1000
0.7075
0.513
30.69
69.31
9
6.4600
0.8102
0.659
21.92
78.08
10
7.8200
0.8932
0.898
12.64
87.36
11
9.1800
0.9628
1.068
8.55
91.45
12
10.540
1.0228
1.331
4.66
95.34
Los datos remarcados corresponden al el rango con menor error fotomtrico

Tabla No.4 Estabilidad del color respecto al tiempo.

Tiempo (min)
0
30
60
90
120

A480
0.383
0348
0.343
0.326
0.303

Tabla No. 5 Efecto de la concentracin de SCN - en la determinacin de Fe3+

Tubo No.

SCN- (g/ml)

Fe3+ (g/ml)

B
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

870
116
232
870
2900
5800
8700
11600
14500
17400
20300

0
2.792
2.792
2.792
2.792
2.792
2.792
2.792
2.792
2.792
2.792

SCN-/ Fe3+
0
41.5472
83.0945
311.604
1038.68
2077.36
3116.04
4154.72
5193.40
6232.09
7270.77

A480
0
0.016
0.093
0.198
0.268
0.319
0.347
0.369
0.391
0.391
0.391

Tabla No. 6 Efecto del pH

aniones en la reaccin Fe3+- SCNTubo No.

pH

A480

B
1
2
3
4
5

6
0
1
2
8
9

0
0.633
0.685
0.350
0.015
0.002

Tabla No. 7 efecto de algunos

Anin

A480 Inicial

A480 Final

Fluoruro
Oxalato
Tartrato
Fosfato

0.585
0.587
0.589
0.577

0.286
0.230
0.584
0.574

Tabla No.12 Condiciones ptimas para la determinacin de Fe 3+

Parmetro
pH
Tiempo
Concentracin de SCNLmites de Concentracin con %Ef mnimo

Lmite de deteccin del mtodo LDD

Valor optimo
1
0 (min)
14500 g/mL
2.38-6.46 g/mL de Fe3+
1Oxalato 2Fluoruro 3Tartrato
4Fosfato
0.0023 g /mL de Fe 3+

%EF
Intervalos de adsorcin con mnimo %EF

2.42
0.200-0.659

Aniones que interfieren en orden creciente

Curva de calibracin de Fe3+ por el mtodo de NH4SCN

1.4
1.2

f(x) = 0.12x + 0
R = 1

1
0.8

A480

0.6
0.4
0.2
0

10

11

g/ml de Fe3+

Graficas
:

Metodo de Rimbow
120
100
80
60

Absortancia

40
20

-1.5

-1

-0.5

Log(Fe3+)

0.5

1.5

Absorbancia vs Tiempo
0.4
0.38

f(x) = - 0x + 0.38
R = 1

0.36

Absrobancia

0.34
0.32
0.3

20

40

60

80

100

120

140

t (min)

Absorvancia vs Concentracion SCN

0.45
0.4
0.35
0.3
0.25

Absorvancia

0.2
0.15
0.1
0.05
0

5000

10000

SCN g/mL

15000

20000

Absorvancia vs pH
0.8
0.7
0.6
0.5

Absorbancia

0.4
0.3
0.2
0.1
0

pH

10

Efecto de algunos aniones en la reaccion Fe3+- SCN0.7

0.6
0.5
0.4

Absorbancia

0.3
0.2
0.1
0

Fluoruro

Oxalato
A480 Inicial

Tartrato

Fosfato

A480 Final

Clculos:
Para curva de calibracin volumen final en el tubo 10mL
0.00025 mol
55.845 g
L
1 L
mol
1000 mg
1000 mL
1000 g
g
13.96 g
3+=
=
1 mg
ml

Fe
13.96g de Fe3+----------------1mL
X=0.698g de Fe3+
----------------0.05mL
X=0.698 g/10mL=0.0698 g/mL de Fe3+
ycalculada=0.1165 x+ 0.0031=0.1165 ( 0.0698 )+ 0.0031=0.011
Clculos para efecto de concentracin del cromgeno, volumen final en el tubo 5 mL.

0.5 mol
58 g
L
1 L
mol
1000 mg
1000 mL
1000 g
g
29000 g
=
=
1 mg
ml

SCN
29000 g de SCN------------------1mL
x
-----------------0.15

X=4350 g de SCNX=4350 g/5mL=870 g/mL de SCNEf =

%Ef =

230.0
m

230.3
=2.426
94.9273

Calculo para el lmite de deteccin:

yb=0.0031+3 b =0.0031+3(0.0102)= 0.00337

b=

x=

(A Acalculada)2
n2

yb0.0031 0.003370.0031
=
=0.0023 g /mL de Fe 3+
0.1165
0.1165

Discusin: Para esta prctica se tuvieron que seleccionar 20 tubos con superficie ptica equivalente
(Esto quiere decir, que poseen una superficie homognea, paredes de igual grosor, desvan la luz de la
misma forma y producen efectos pticos idnticos o similares), y dimetro interno equivalente (Esto es
que el paso de luz sea el mismo en todos los tubos).Y esto se logr tomando la lectura a 95%T y girando
un poco a la derecha y un poco a la izquierda para observar si en ese intervalo de superficie ptica
exista 2%T si no sobre pasaba este intervalo de Transmitancia la celda era aceptada. Para que de esta
manera se produzca una dispersin de la luz anloga en todos los tubos.
Para la curva de calibracin se espera encontrar que siga la Ley general de Bouger y Beer, lo cual fue
cierto ya que el coeficiente de correlacin R 2 es cercano a 1esto quiere decir que siguen una tendencia
lineal y por lo tanto sigue ley antes mencionada. Y tanto la escala til e intervalo de concentracin
ptimos de trabajo son; Escala: 0.006 a 1.331, el Intervalo de concentracin es 0.0698-10.540.
Obteniendo un lmite de deteccin (LDD) de este mtodo de 0.2626 g/mL de Fe 3+.
La estabilidad del color es en un tiempo corto por ello se aade el SCN -, cuando se hizo la prueba de
estabilidad se encontr que la mxima absorbancia de al tiempo 0 de adicin de SCN - y al transcurrir el
tiempo la absorbancia se disminua por lo que esta reaccin de coloracin no es estable.
Para la concentracin de cromgeno se encontr que la concentracin de tiocianato ptima para esta
reaccin debe ser de 14500 g/mL, ya que a esta concentracin la reaccin es prcticamente completa
estequeometricamente por lo que al adicionar cantidad mayores de 14500 g/mL el cambio de
absorbancia es mnimo.
El estudio de pH, determino que el pH ptimo para que se lleve a cabo la reaccin es de 1, al ir
aumentando dicho parmetro, se incrementa la cantidad de OH en el medio y al ser esta especie ms

electronegativa que el tiocianato se favorece otra reaccin que compite con el tiocianato generando otro
compuesto. Lo cual disminuir la concentracin de [FeSCN] 2+ disminuyndola Absorbancia.
Con frecuencia, las sustancias interferentes son muy similares en sus propiedades qumicas en base al
analito de inters y por tanto reaccionan de modo muy semejante con el cromgeno. En este caso la
diferencia de electronegatividades de algunos aniones produce reacciones indeseables que modifican la
formacin del producto [FeSCN]2+ genera el color; tal es el caso del oxalato y fluoruro, que al ser ms
electronegativos que el tiocianato, reaccionan con el Fe3+ originando otra sustancia diferente. En el caso
del fosfato y tartrato se produce una disminucin pequea en la absorbancia, ya que la mayor parte del
fierro reacciona con el tiocianato y no con el fosfato, esto nos indica que no hay una gran diferencia en
electronegatividades entre estos dos aniones.

Conclusin: Por lo que concluimos que las condiciones ptimas de trabajo de esta reaccin son pH=1.
Tiempo de medicin de Absorbancia =0 min porque no es una reaccin estable. Concentracin de SCN ptima es de 14500 g/mL. Y que el oxalato y fluoruro son sustancias interferentes a la reaccin mientras
que el tartrato y fosfato generan una interferencia insignificante.