CURSO DE BIOQUMICA

Informe de Laboratorio N 7
DETERMINACIN DE TRANSAMINASAS
Grupo A Mesa N 6

17 de Junio
2015

DETERMINACIN DE TRANSAMINASAS

INTRODUCCIN
Los aminocidos son los monmeros de las protenas y ests constituyen la parte
estructural de nuestro organismos principalmente desarrollando otros roles como
ser precursores de hormona peptdicas y otros compuestos de inters biolgico
(neurotransmisores, histamina, anillos porfirnicos, nucletidos,etc.).
El organismo puede sintetizar una parte de los -aminocidos necesarios para
el suplemento proteico y otra parte proviene de la dieta los cuales se denominan
aminocidos esenciales.
Las transaminaciones son reacciones de intercambio de un radical NH 2 entre
dos grupos carbonados, siendo reemplazado el radical amino por una funcin
cetona y viceversa sabiendo que esta reaccin se da en dos pasos un poco
complejos ya que el papel de las reacciones de transaminacin es doble porque
permiten realizar la interconversin de los aminocidos y posibilitan la separacin
de la parte nitrogenada de los aminocidos aportados en exceso, constituyendo el
primer paso del catabolismo de muchos aminocidos.
Las dos transaminasas ms activas son:
- GOT (glutmico oxalactico transaminasa) o
aminotransferasa).
- GPT (glutmico pirvico transaminasa) o
aminotransferasa).

ASAT, AST
ALAT,

(aspartato

ALT

(alann

Se presentan en muchos rganos, principalmente en hgado y msculo cardaco.

Pero tambin en rin, cerebro, pncreas, pulmones siendo un indicador de riesgo
ya que aumentan anormalmente sus niveles plasmticos en patologas hepticas
(GOT y GPT), como tambin en cardiopatas (GOT).
OBJETIVOS

Conocer la utilidad que tiene la determinacin de la actividad de la GPT y la GOT

en el suero.
Interpretar bioqumicamente la elevacin de las enzimas en el suero.
Conocer su importancia como enzimas de diagnstico clnico.

PROCEDIMIENTO

REACTIVOS PROVISTOS

Sustrato GOT: solucin con 100 Mm de L-aspartato y 2 mM de alfa-cetoglutarato

en buffer fosfatos 100 mM, pH 7,4.
Sustrato GPT: solucin con 200Mm de L-alanina y 2 Mm de alfa-cetoglutarato en
buffer fosfatos 100mM, pH 7,4.
Reactivo 2,4-DNFH: solucin conteniendo 1 mmol de 2,4-dinitrofenilhidracina en
cido clorhdrico 1 mol/l.
Diluyente para Enzimas concentrado: solucin de hidrxido de sodio 4 mol/l.
Standard: solucin de piruvato de sodio 2 mmol/l. para efectuar la curva de
calibracin.

PRECAUCIONES:

Los reactivos son para uso diagnostico in vitro

MUESTRA

Debe usarse nicamente suero fresco, no hemolizado.

MATERIAL Y EQUIPOS DE LABORATORIO

- Espectofotometro.
- Micropipetas.
- Pipetas capaces de medir los volmenes.
- Tubos de ensayo.
- Bao de agua a 37C
- Cubetas espectofotometricas.
- Reloj.

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD DE TRANSAMINASAS GOT Y GPT EN

SUERO.
TECNICA:
Preparar la siguiente batera de tubos
Sustrato GPT

Blanco GPT
500 uL

MUESTRA DE GPT
500 uL

ORINA SUERO
--------

Sustrato GOT

----

-----

500 uL

500 uL

Colocar en bao de agua a 37C unos dos minutos

Suero

----

100 Ul

-----

100 uL

Agua destilada

100 uL

-----

100 uL

-----

Mezclar por agitacin suave e incubar exactamente 30 minutos y agregar

Reactivo 2,4-DNFH

500 uL

500 uL

500 uL

500 uL

Mezclar, dejar 10 minutos a 37C luego agregar

Diluyente de enzimas 5,0 mL
5,0 mL
5,0 mL 5,0 mL
(NaOH 4 mol/L)
Mezclar por inversin y retirar del bao
Despus de 2 minutos leer la absorbancia en espectofotometro a 505 nm.

PASO 1:

primero preparamos los sustratos GOT y GPT

Luego lo llevamos a bao maria por 2 min.
A una temperatura de
37C

PASO 2:
Ahora agregamos suero y agua destilada

agregamos
suero y agua
destilada

lo llevamos a
bao maria

y lo encubamos
por 30 minutos
a 37C

PASO 3:
AGREGAMOS Reactivo 2,4-DNFH
Mezclar, dejar 10 minutos a 37C

PASO 4:
AADIMOS DILUYENTE DE ENZIMAS (NAOH 4 MOL/L)
Mezclar por inversin y retirar del bao
Despus de 2 minutos leer la absorbancia en espectofotometro a 505 nm.

RESULTADOS
Blanco GOT: 0.195
Muestra GOT: 0.246

Corregido: 0.051

Blanco GPT:
Corregido: 0.065
0.194
Muestra GPT:
0.259

INTERPRETACIN DE RESULTADOS
Luego de emplear la curva de calibracin para medir la actividad de la
transaminasa GOT y GPT, se obtuvo el valor de 5,1 U/L para GOT y 8,9 U/L para
GPT, lo cual es adecuado dentro de los valores de referencia:
GOT-GPT: Hasta 12 U/L
Los valores obtenidos nos reflejan una correcta funcin del tejido cardaco sin
lesiones tisulares.

CONCLUSIONES
-

En la muestra de suero obtenida no se encontr un alza de transaminasas, es

decir no hay dao heptico o cardaco, est dentro de los valores normales
tanto para GPT como para GOP.
El alza de estas enzimas se da por cirrosis, un consumo excesivo de alcohol
de lpidos, necrosis tisular, lesiones hepticas entre otros factores
provenientes de la dieta o patolgicos por lo tanto se podra decir que son
indicadores para detectar el mal estado y funcionamiento de los principales
rganos, hgado y corazn.

BIBLIOGRAFA
1. DETERMINACIN DE GPT Y GOT.
http://trabajosmedicos.blogspot.com/2012/08/determinacion-de-gpt-y-gotinforme-de.html
2. Elevacin de transaminasas.
http://www.bioquimica.ucv.cl/paginas/central/bioquimica%20clinica/Elevaci
%F3n%20de%20transaminasas.pdf
3. Transaminasas, Valoracin y Significacin Clnica.
https://www.aeped.es/sites/default/files/documentos/transaminasas.pdf.
Garca, M., Zurita, A.