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Lyce de Suscinio Morlaix

PC1 CH06 Dosage de molcules colores

TP Dosage des orthophosphates par spectrophotomtrie


Les dosages colorimtriques sont perturbs par la prsence de matires en suspension dans l'eau. Il est donc
prfrable de filtrer les chantillons d'eau avant les mesures, si possible sur entonnoir de Bchner avec un filtre
en microfibres de verre si des matires en suspension sont visibles.
Objectif
Mesurer la concentration en orthophosphates minraux, HPO42- et H2PO4- dans un chantillon d'eau.
Principe
On utilise un ractif (ractif molybdique) donnant un driv color avec les phosphates (complexe
phosphomolybdique de couleur bleue). L'intensit de la coloration, mesure par colorimtrie ou
spectrophotomtrie, est proportionnelle la concentration en phosphates dans certaines conditions. La
concentration du driv color est dtermine graphiquement partir d'une droite d'talonnage tablie au
pralable avec des concentrations connues en phosphates.
Matriel
Colorimtre ou spectrophotomtre
Le cas chant, fiole de filtration de Bchner branche sur une trompe vide
Produits

Phosphate monopotassique
Acide sulfurique
eau distille
Tartrate double d'antimoine et de potassium
Molybdate d'ammonium
Acide ascorbique

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Lyce de Suscinio Morlaix

PC1 CH06 Dosage de molcules colores

Prparation des solutions

Solution stock de phosphates (100 mg.L-1)


Dissoudre 143.2 mg de phosphate monopotassique (dessch au pralable l'tuve 100C) dans 990
mL d'eau distille.
Acidifier la solution par 1 mL d'acide sulfurique 20 %.
Ajuster le volume un litre avec de l'eau distille.

Ractif des orthophosphates (ractif molybdique)


o

Prparer au pralable les solution suivantes :


Solution de tartrate :
Dissoudre 0.274 g de tartrate double d'antimoine et de potassium dans 100 mL d'eau
distille
Solution d'acide sulfurique (20%)
Acide sulfurique
Eau distille

100 mL
400 mL

Solution de molybdate d'ammonium (40 g.L-1)


Molybdate d'ammonium
5g
Eau distille
120 mL
Solution d'acide ascorbique (50 g.L-1)
Acide ascorbique
5g
eau distille
100 mL

Prparation du ractif molybdique :


Solution d'acide sulfurique 20%
400 mL
Solution de tartrate
40 mL
Solution de molybdate d'ammonium 40 g.L-1 120 mL
Complter 800 mL avec de l'eau distille

Solution de phosphates pour la construction de la droite talon (2 mg.L-1)


A prparer extemporanment
-1
o Solution-stock 100 mg.L : 20 mL
o Complter un litre avec de l'eau distille

Lorthophosphate ragit avec le molybdate en milieu acide pour former un complexe mixte
phosphate/molybdate . Ensuite, lacide ascorbique rduit le complexe, provoquant une forte coloration
bleue de molybdne.

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PC1 CH06 Dosage de molcules colores

TP Dosage des orthophosphates par spectrophotomtrie


Prparation de la verrerie
Les doses de phosphates tant trs faibles, toute la verrerie doit tre rince l'acide chlorhydrique 5 %
puis l'eau distille pour viter toute contamination.

Construction de la droite d'talonnage


1. Gamme talon

On veut prparer 20 mL dune solution 1 mg.L-1 partir dune solution mre de concentration 2 mg.L-1.
1.1. Calculer le volume de solution mre prlever pour prparer cette solution.
1.2. Calculer le volume deau ajouter pour raliser cette dilution. Pour rendre la solution colore, on ajoutera
aprs dilution 1 mL dacide ascorbique et 4 mL de ractif molybdique.
1.3. Prciser la verrerie utilise pour cette dilution.
1.4. Pour cette solution fille, introduire tout de suite le ractif molybdique et lacide ascorbique selon les
proportions du tableau ci-dessous, attendre environ 15 minutes pour voir apparatre la coloration ( chronomtrer
le temps exact dapparition de la couleur). Pendant ce temps de coloration rpondre la question1.5.
1.5. Raliser les dilutions indiques dans le tableau complter.
Remarque importante : lajout du ractif molybdique et de la Solution dacide ascorbique ne se fera quau
moment de raliser les manipulations de la partie 3.
Concentration en phosphate de la
solution fille

0 mg.L-1

0.5 mg.L-1

1 mg.L-1

1.5 mg.L-1

2 mg.L-1

Volume de solution fille prpare (mL)

20

20

20

20

20

Solution dacide ascorbique (mL)

Ractif molybdique (mL)

Volume total des solutions prpares


avec indicateur color (mL)

25

25

25

25

25

Solution talon de phosphates


2 mg.L-1 (mL)
Eau distille (mL)

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2. Spectre dabsorption
On dsire savoir quelle longueur les solutions prpares absorbe le maximum dnergie lumineuse.
1. Remplir une cuvette standard de spectrophotomtre avec de leau distille.
2. Allumer le spectrophotomtre :
signal unique ; bouton ; afficher une longueur donde de 400 nm puis valider
bouton zro
3. Introduire la cuvette standard de spectrophotomtre avec la solution 1 mg.L-1 et lire la valeur dabsorbance
cette longueur donde.
4. Recommencer cette opration pour toutes les longueurs donde de 400 nm 880nm par pas de 20nm.
Tracer le graphe A = f().
Questions
1. Pourquoi est-il ncessaire de faire le zro dabsorbance pour chaque longueur donde ?
2. Quelles est lallure du spectre obtenu ?
3. Prciser la valeur de longueur donde retenue pour raliser la mesure dune absorbance de solution
dorthophosphates. Justifier.

3. Mesures de concentration dorthophosphate dune eau naturelle

Remplir cinq cuvettes standard de spectrophotomtre avec chacune des solutions tester. Attendre 15
minutes.
Rgler la source lumineuse la longueur donde choisie.
Placer la cuve 0 mg.L-1dans lemplacement prvu du spectrophotomtre.
Rgler le zro d'absorbance.
Enregistrer l'absorbance de chacune des cuves.
Noter les rsultats dans le tableau ci-dessous.
o Construire la droite dtalonnage (absorbance = f [phosphate]).
o Introduire 20 mL de l'chantillon d'eau mesurer dans un flacon. Ajuster le pH 7 si ncessaire.
o Ajouter 1 mL de la solution d'acide ascorbique et 4 mL de ractif molybdique.
o Attendre 30 min, remplir une cuvette standard et mesurer l'absorbance.
Concentrations

0 mg.L-1

0,5 mg.L-1

1 mg.L-1

1,5 mg.L-1

2 mg.L-1

Absorbance

Dterminer graphiquement la concentration en phosphate dans les chantillons prlevs.

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PC1 CH06 Dosage de molcules colores

Les origines, les effets des orthophosphates. Les solutions lies aux pollutions aux orthophopshates. Texte
du TP 1 dosage des orthophosphates par spectrophotomtrie.

Origines :
Dcomposition de la matire organique
Infiltration de fosses daisance ou de dpts de fumier
Rejets industriels, domestiques, agricoles (engrais)
Traitement contre corrosion et entartrage des eaux industrielles : ce tratiement a pour effet la diminution de la
duret (magnsium et calcium), de lalclinit, augmentation de lmulsion des huiles, suspension des salissures
favorise

Effets :
Indice de pollution partir de 0,5 mg/L
Perturbation de ladoucissement des eaux ( eau dure traite pour la potabilit)
Sous forme dorthophosphate H3PO4
Dveloppement des algues : contribution leutrophisation par un enrichissement excessif en matire nutritive
(passage de la lumire rduite, consommation doxygne, passage un systme msotrophe puis eutrophique)
Rejets humains de phosphate dans les eaux uses : part de 30% 50%
1 mg de phosphore contribue llaboration de 70 80 mg de matires organiques.
Dgradation des qualits organoleptiques de leau, putrfaction, adiolments prsents.

Solutions :
Traitement de coprcipitation
Influer sur le pH
Niveau guide de 0,4 mg/L avec un niveau maximum de 5,0 mg/L en P2O5

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