F.I.S.H.

De la sigla inglesa Fluorescence In Situ Hybridization, conocida en espaol

como hibridacin in situ con fluorescencia, es una tcnica de citogentica
molecular que se basa en la hibridacin de una sonda de ADN marcada con una
sustancia fluorescente sobre su secuencia complementaria del genoma, bien en la
metafase cromosmica o en el ncleo en interface. Posee una alta sensibilidad,
especificidad y rapidez por lo que la convierte en una tcnica importante de
estrategia diagnostica.
Los dos componentes principales de la tcnica de FISH convencional son la sonda
de ADN marcada con fluorescencia y la secuencia diana en la muestra tumoral
para la cual es especfica. Es muy importante destacar que no es una tcnica de
bsqueda de nuevas alteraciones cromosmicas, sino que nicamente detecta
aquello que buscamos, permaneciendo el resto del genoma oculto.
Podemos utilizar sondas de ADN de distintos tipos: centromricas (marcan
nicamente las zonas centromricas), de pintado cromosmico (marcan todo un
cromosoma) y de secuencias especficas de locus (marcan regiones
cromosmicas de secuencia nica)
Esta tcnica complementa perfectamente a la citogentica convencional en todas
aquellas situaciones en que no ha sido posible realizar un cariotipo: al disponer de
metafases de poca calidad, o no haber obtenido metafases, o bien en los casos en
que las alteraciones cromosmicas asociadas a un diagnostico son cripticas no
visibles en el cariotipo, como el caso de la t(12:21) en leucemia aguda linfoblstica
infantil.
Ventajas

No requiere clulas en divisin, ya que permite el anlisis no solo de

metafases sino tambin de ncleos en interfase.
Puesto que no es imprescindible analizar metafases, adems de tejidos
frescos permite emplear muestras congeladas y tejido incluido en parafina,
lo que hace esta tcnica muy til en estudios retrospectivos de tumores
slidos.
Es una tcnica rpida (24 horas) y en poco tiempo pueden ser analizadas
un gran nmero de clulas.
Tiene una sensibilidad y especificidad altas.
Detecta anomalas cromosmicas numricas y estructurales siempre que
dispongamos de las sondas.

Permite la identificacin de cromosomas, de origen no determinado por el

cariotipo, si se tiene alguna pista de que cromosomas pueden ser
implicados, ya que debe elegirse una o mas sondas de ADN.
Es muy til para descartar alteraciones cripticas concretas o
microdeleciones, no visibles en el cariotipo.
Permite la monitorizacin: seguimiento de una terapia antitumoral,
deteccin de enfermedad mnima residual, deteccin temprana de recadas
y cuantificacin de clulas genticamente alteradas.
Es de gran utilidad en el anlisis de trasplantes de medula sea
heterlogos. Se pueden utilizar sondas centromricas de los cromosomas X
e Y y analizar las seales de ambos cromosomas en un gran nmero de
ncleos.
Permite la deteccin de deleciones gnicas y amplificaciones gnicas.
Por ltimo es de gran utilidad en investigacin gentico-medica, ya que
permite determinar la localizacin precisa de los puntos de rotura
cromosmicos en tumores en la bsqueda de nuevos genes implicados en
el cncer, y detectar y localizar genes de inters ya conocidos.

Inconvenientes

No es una tcnica de screening (la sonda se elige en funcin de la

anomala cromosmica que queramos detectar).
No suele emplearse, excepto en casos especiales como el comentado de
los trasplantes, como tcnica nica sino complementaria al cariotipo, si este
no resulta informativo.
Tiene un elevado coste econmico, tanto en sondas de DNA como en
analizadores de imagen.
Su utilizacin depende de la disponibilidad de sondas de DNA.
Debido a hibridaciones inespecficas, es necesario calcular para cada
sonda la tasa de falsos positivos y falsos negativos.
No pueden detectarse muchas alteraciones simultneamente.