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UNIDAD DE APRENDIZAJE N 3
GENTICA MOLECULAR
Los cromosomas eucariontes tienen una gran cantidad de ADN, el cual se halla
contenido en dos molculas lineales, una para cada cromtide. Si estas
molculas se replicasen a partir de un sitio nico de origen, la etapa S de la
Interfase sera extremadamente larga. Las clulas eucariontes resuelven este
problema disponiendo de mltiples sitios de origen de la replicacin en cada
cromosoma. En ellos, el ADN presenta secuencias especiales de nucletidos.
Adems todos los orgenes tienen en comn secuencias conservadas de
aproximadamente doce pares de nucletidos, llamados ARS (autonomus
replication secuence).
2.
En cada cromosoma, las dos cadenas del ADN se encuentran arrolladas una a la
otra como los hilos de una soga. Si tratamos de separarlas, la soga debe
apretarse ms en las vueltas restantes o girar. Algo similar ocurre en el ADN,
cuando las cadenas complementarias se separan para iniciar la duplicacin. En
ese momento aumenta la tensin torsional en el sector no duplicado de la doble
hlice.
Esquema que muestra dos replicones contiguos y los puntos donde se origina la
replicacin (flechas). Puede observarse el carcter bidireccional de la
replicacin y los sectores donde el ADN se sintetiza en forma continua y
discontinua.
4.
5.
MODELO SEMICONSERVATIVO
Como las nuevas hlices de ADN estn formadas por una cadena original
(preexistente) que sirvi de molde y una cadena nueva (recin sintetizada)
decimos que el mecanismo de replicacin es semiconservativo.
INICIO DE LA SNTESIS DE ADN
Para iniciar la sntesis de las cadenas complementarias se requiere adems del
ADN molde un cebador o primer , que consiste en una pequea cadena de ARN
de unos diez nucletidos de largo. La sntesis del cebador es catalizada por una
enzima llamada ARN-primasa y. el cebador queda unido al ADN
temporariamente. Unavezsintetizado el cebador la sntesis contina si la ADNpolimerasa tiene disponibles suficientes desoxirribonucletidos trifosfatados
(dATP, dGTP, dCCP y dTTP). stos se agregan en la cadena nueva de acuerdo a
la secuencia de nucletidos de la cadena que sirve de molde.
Gran parte de la energa requerida durante la replicacin la aportan los
desoxirribonucletidos trifosfatados, que hidrolizan los ltimos dos grupos
fosfato (liberando energa) cuando se unen entre s.
Al iniciarse la sntesis continua del ADN, en cada origen se forman dos
cebadores orientados divergentemente uno en cada cadena de la doble hlice y
a continuacin la ADN-polimerasa cataliza la sntesis de la cadena continua
agregando nucletidos en el extremo 3 de la hebra en formacin. Mientras
tanto los cebadores son removidos por una nucleasa reparadora y su lugar es
reemplazado por un fragmento de ADN equivalente sintetizado por la ADNpolimerasa .
Como vimos la cadena continua requiere un solo cebador que se forma a
comienzo de la replicacin, en cambio la cadena discontinua necesita muchos
cebadores, uno para cada fragmento de Okazaki. La enzima responsable de la
sntesis discontinua es la ADN-polimerasa . Cabe sealar que las ADNpolimerasas son sostendas por un anillo proteico llamado PCNA (Proliferating
Cell Nuclear Antigen) mientras realiza el deslizamiento por la cadena de ADN .
Los fragmentos de Okazaki alcanzan una longitud de 200 nucletidos. Una vez
completa la sntesis de un fragmento ambas enzimas se liberan y vuelven juntas
hacia el ngulo de la horquilla de replicacin, dejando atrs los 200 nucletidos
del segmento que acaban de sintetizar y otros tantos del ADN molde que se
usar para copiar el prximo fragmento de Okazaki.
Como ocurre con la polimerasa d en movimiento, la ADN-polimerasa a no se
desprende del ADN debido a que se le asocia un aro de PCNA. Luego el cebador
es hidrolizado por una nucleasa, la que se encarga tambin de reparar errores
(segundo sistema de reparacin) y los huecos son rellenados con
desoxirribonucletidos por la ADN-polimerasa . Finalmente los fragmentos
de Okazaki son unidos por la ADN-ligasa.
La discontinuidad de la sntesis hace que la hebra mal orientada crezca ms
lentamente que la otra, que lo hace en forma continua, por esta razn se les
asign el nombre de cadena rezagada y cadena adelantada respectivamente.
Replicacin de la heterocromatina
La heterocromatina por estar muy compactada se replica tardamente durante
la fase S del ciclo celular.
Sntesis de histonas
Hemos sealado que el ADN se replica en forma semiconservativa, es decir que
las cadenas de la doble hlice progenitora, al separarse para su replicacin, se
comparten por igual en ambos cromosomas hijos. En cambio no se sabe como se
segregan las histonas. Es posible que al cabo de la replicacin sean heredadas
totalmente por uno de los cromosomas hijos, en este caso el otro cromosoma
hijo debe procurarse de la totalidad de histonas nuevas.
En su mayor parte las histonas se sintetizan durante la fase S de la interfase
y se incorporan al cromosoma apenas es duplicado el ADN
Replicacin en Procariontes
Muchas de las caractersticas esenciales de la duplicacin del ADN son
universales, aunque existen algunas diferencias entre procariontes y
eucariontes debido a que su material gentico est organizado de manera
distinta.
En las bacterias casi todo el ADN se encuentra formando una cadena circular,
en cambio en los eucariontes cada cromosoma no duplicado contiene una cadena
lineal asociada a una gran cantidad de protenas y algo de ARN.
En procariontes al existir un nico punto de origen se forma slo un ojal de
replicacin. Aqu actan tres ADN-polimerasas:
ADN-polimerasa I, es la que elimina el cebador y reemplaza los
ribonucletidos de ste por desoxirribonucletidos, rellenando los huecos
dejados por la ADN-polimerasa II. Adiciona 10 nucletidos/seg.
Exonucleasa en sentido 3
Correccin
de
errores,
removiendo nucletidos en sentido 5
3
Poli. I
Enzimas
PRINCIPALES
Exonucleasa en sentido 5
ENZIMAS
QUE
ACTUAN
EN
LA
ADN-polimerasa I (procariontes)
ADN-polimerasa II (procariontes)
ADN-polimerasa
(eucariontes
ADN-polimerasa (eucariontes)
ADN-polimerasa (eucariontes)
Helicasas
Primasas
Protenas SSB
Topoisomerasas I y II
Corrigen el superenrollamiento
Hacia finales del siglo XIX, los bilogos haban reconocido ya que los
transportadores de la informacin hereditaria eran los cromosomas que
resultan visibles en el ncleo cuando una clula comienza a dividirse. Pero la
evidencia de que es el ADN de estos cromosomas la sustancia de la que estn
formados los genes, se obtuvo mucho ms tarde a partir de estudios sobre
microorganismos. Hasta entonces se haba credo que slo las protenas
presentaban una complejidad conformacional suficiente como para ser
portadoras de la informacin gentica. El modelo del ADN propuesto por
Watson y Crick en 1953 brind una explicacin satisfactoria de la forma en que
pueden operar los procesos relacionados con una molcula depositaria de la
informacin gentica: el almacenamiento de informacin, su replicacin, su
expresin, la mutacin y la recombinacin.
EL CONCEPTO DE GEN
El genoma es el conjunto de genes de una especie. Pero qu es un gen?. En
principio
es
una
unidad
informativa
discreta,
responsable
de
una
SEGUNDA LETRA
PRIMERA
LETRA
UUU
fenilalanina UCU serina
UAU
tirosina
UGU
cistena
UGC
UUC
UCC serina
UAC tirosina cistena
U fenilalanina
UCA serina
UAA stop UGA stop
UUA leucina
UCG serina
UAG stop
UGG
UUG leucina
triptfano
CAU
histidina
CUU leucina CCU prolina
C
CAC
histidina
CAA
glutamina
CAG
glutamina
AUU
isoleucina
ACU
treonina
AUC
isoleucina
ACC
treonina
AUA
isoleucina
ACA
treonina
AUG
metionina
ACG
treonina
CGU
arginina
CGC arginina
CGA
arginina
CGG
arginina
AAU
AGU serina
asparagina
AGC serina
AAC
AGA
asparagina
arginina
AAA lisina
AGG
AAG lisina
arginina
GAU
GGU glicina
U
C
A
G
U
C
A
G
U
C
A
G
TERCERA
LETRA
aspartato
GAC
aspartato
GAA
glutamato
GGC glicina
GGA glicina
GGG glicina
GAG
glutamato
C
A
G
EL MARCO DE LECTURA
De qu manera se leen los codones durante la sntesis proteica?
Consideremos la siguiente secuencia de bases de un ARNm:
5-----GUUCCCAUA----3
Si comenzamos la lectura en la G situada hacia el extremo 5, este mensaje
podra ser traducido como una secuencia de tres aminocidos (las palabras del
cdigo se leen de corrido, sin ningn signo de puntuacin entre ellas):
Valina - prolina - isoleucina
Cul sera la traduccin del mensaje si en cambio la lectura se iniciara en la
primera U desde el extremo 5?
fenilalanina - prolina
Con este simple ejemplo resulta evidente que el sitio de inicio de la traduccin
es de importancia capital para la correcta traduccin del mensaje.
Qu determina que la lectura comience en el sitio correcto?
Los ARNm portan un codn, el AUG (codifica metionina), que es interpretado
por los ribosomas como codn de iniciacin. Este codn da el marco o cuadro
de lectura que ser empleado de all en ms. En adelante, el ribosoma se
desplazar a lo largo del ARNm en bloques consecutivos de tres bases,
garantizando la lectura de los codones apropiados.
EL PROCESO DE LA TRANSCRIPCIN
La transcripcin consiste en la sntesis de ARN a partir de un molde de ADN.
Burbuja de transcripcin
Direccin de la transcripcin
El enlace fosfodister se produce entre el hidroxilo en posicin 3 del primer
nucletido y el grupo fosfato interno, en posicin 5, del segundo. Un grupo
pirofosfato de este ltimo es liberado como producto y escindido rpidamente
en dos fosfatos por la accin de una pirofosfatasa. Dicha ruptura es tan
exergnica que la reaccin inversa se torna prcticamente imposible. As,
desde el punto de vista termodinmico, se favorece la sntesis de la nueva
cadena. Por lo tanto, son los mismos sustratos los que, por estar trifosfatados,
aportan la energa necesaria para su polimerizacin.
Una molcula de ADN molde, con regin promotora, que indica el inicio
de la transcripcin, con secuencia de terminacin, que marca el fin del
proceso, y un segmento que ser expresado.
LA MAQUINARIA TRADUCCIONAL
La traduccin implica el funcionamiento coordinado de un gran nmero de
molculas entre las que se encuentran los distintos tipos de ARN. Una vez
transcriptos cada ARN sufre una serie de modificaciones cuyas caractersticas
difieren segn hablemos de clulas procariotas y eucariotas. Describiremos
cada ARN en general y luego sus variantes en ambos tipos celulares.
ARNm (MENSAJERO)
Los ARNm son molculas lineales de cadena simple en donde residen las
instrucciones para la elaboracin de un producto proteico.
Los ARNm eucariotas y procariotas son esencialmente iguales en el sentido que
presentan, una vez listos para la traduccin, una secuencia continua de codones
que se extienden desde el principio al fin del mensaje gentico dictando con
exactitud la secuencia lineal de aminocidos de una cadena polipeptdica en
particular. Esta secuencia se lee en la direccin 5' 3'. El principio de la
secuencia presenta un codn iniciador (casi siempre AUG), y el final de la
secuencia o regin codificadora es un codn de terminacin o stop (UGA, UAA,
UAG).
Adems de la regin codificadora presenta sectores extra en los extremos 5'
y 3' del mensajero denominados secuencias directora y seguidora
respectivamente. Estas regiones no se traducen en protena aun cuando forman
parte del ARNm transcripto del gen.
ARNm EUCARIOTA
1- La mayora de los ARNm eucariotas presentan la secuencia del mensaje
interrumpida, es decir coexisten a lo largo de la molcula sectores que
codifican para la protena llamados EXONES, con secuencias intercaladas sin
informacin denominadas INTRONES .
En muchos casos, mientras coincidan las 2 primeras bases del codn, hay
suficiente "balanceo"en la tercera posicin para permitir el acoplamiento con
ms de un tipo de nucletido en el anticodn, de manera que existen
aproximadamente 31 tipos de ARNt.
Por ejemplo el aminocido fenilalanina es codificado por dos codones sinnimo:
UUU / UUC. Sin embargo un solo anticodn AAG puede complementarse
indistintamente con UUU y UUC, realizando el trabajo de llevar a la
fenilalanina al ribosoma para ser incorporada a la cadena polipeptdica en
formacin .
Etapa 1 de la aminoacilacin
b- Sin abandonar la enzima, se transfiere el aminocido del complejo aminoacilAMP al ARNt especfico, con lo cual se origina la molcula final: AMINOACIL
-ARNt
Etapa 2 de la aminoacilacin
En resumen, la aminoacilacin o activacin de los aminocidos tiene dos
funciones :
1- proporcionar el primer paso en la traduccin del mensaje gentico a una
secuencia de aminocidos ;
2- activar al aminocido antes de incorporarlo a la protena. El enlace entre el
ARNt y el aminocido libera al hidrolizarse la energa necesaria para propulsar
la formacin del enlace peptdico durante la traduccin.
2. TRADUCCIN
El mecanismo por el cual se traduce el mensaje del ARNm puede describirse en
tres etapas:
Iniciacin
Elongacin
Terminacin
2.
El ARNm se acopla a la subunidad menor , para lo cual debe ser
previamente reconocida la cap y los nucletidos contiguos en el extremo 5' del
mensaje.
3.
La subunidad menor se desliza sobre el ARNm hasta localizar al codn
de
iniciacin
AUG.
Este modelo de seleccin propuesto para eucariotas difiere del modelo de
emparejamiento descripto para procariotas, por el cual el acoplamiento de
bases codn-anticodn iniciador se producira por un emparejamiento de bases
que preceden a AUG del ARNm con el extremo 3'del ARNr de la subunidad
menor.
4.
Una vez localizado y acoplado el anticodn al codn AUG del mensaje
se establece la pauta de lectura correcta para el resto de los codones que
contenga la regin codificadora del ARNm.
5.
Finalmente se acopla la subunidad mayor, quedando el aminoacil ~ARNt
iniciador en el sitio P del ribosoma. Como todas las cadenas polipeptdicas han
sido iniciadas por un ARNt iniciador, todas las protenas recin sintetizadas
tienen metionina (o N-formilmetionina en bacterias) como residuo amino
terminal. En ambos casos la metionina inicial es eliminada por una
aminopeptidasa especfica.
ACTIVIDADES
Las siguientes actividades se realizarn en grupos de 5 estudiantes.
Actividad 1:
Cada grupo debe idear una forma didctica para explicar el tema de sntesis de
protenas, puede ser trayendo modelos o maquetas de las diferentes molculas
que intervienen en el proceso y explicando el proceso.
Cada estudiante del grupo debe estar en capacidad para explicar su modelo.
Estos modelos o maquetas lo deben traer a la clase presencial para en una
hora realizar las exposiciones. Traten en lo posible de sintetizar el tema para
exponerlo en 15 minutos.
No acepto grupos de 2 o tres estudiantes.
Actividad 2:
Responde las siguientes preguntas y envalas a la plataforma.
1. Consulta en que consiste la regulacin de la expresin gnica.
La regulacin gnica comprende todos aquellos procesos que afectan la accin de
un gen a nivel de traduccin o transcripcin, regulando sus productos funcionales, es
decir la regulacin gentica no es ms que la regulacin de la sntesis de las
macromolculas.
5'-
ACGTCATTGCAAGCATTACC
-3'
RNA:
5'-
ACGUCAUUGCAAGCAUUAC
-3'
A. Pro-His-Met-Arg-His-Tyr-Lys-Cys-His-Thr
B. Met-Arg-His-Tyr-Lys-Cys-His-Thr
C. Met-Arg-His-Tyr-Lys
D. Met-Pro-His-Met-Arg-His-Tyr-Lys-Cys-His-Thr
E. Arg-His-Ser-Glu-Tyr-Tyr-Arg-Leu-Tyr-Ser
CUUGUGCAGAUGCGCCAUUAUAAGUGCCACACGUGACACACA
Pro-His- Met-Arg-His- Tyr- Lys- Cys- His-Thr-Thr-Stop-Thr-thr
4.
A.
B.
C.
D.
RNA cebador
Hebras de DNA molde
Fragmentos de Okazaki
DNA polimerasa
hebra DNA n1
19.1
26.0
31.0
23.9
hebra DNA n2
23.8
30.8
25.7
19.3
Mrna
23.8
30.9
26.1
19.0
A.
Hebra 1
B.
Hebra 2
C.
Ambas hebras, 1 y 2
D.
Ninguna hebra, ni 1 ni 2
E.
El mRNA usa una de las dos hebras del DNA como molde y as ser
complementario
de
ella.
La
hebra
codificante
del
DNA
es
tambin
B. 636 C 212
D.211
E.110
Ala
GUA
Cis
UGC
Val
GUU
Leu
CUU
Iso
AUA
Los aminocidosAla Cis Val tienen la secuencia CAT ACG CAA por lo tanto si
tiene una mutacin en uno los nucletidos del ADN que forma la protena, una
de las obsiones podra ser CAT ACG GAA.