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3.
Anaerobias.
Aerobias.
c) Termfilas.
d) Desnitrificantes.
3. Bacterias aaaerobias. - No se conoce ninguna bacteria absolutamente anaerobia, es decir, que slo pueda vivir y desarrollarse en
total ausencia de oxigeno (pg. i3). I,as anaerobias estrictas parecen
estimuladas por la presencia de pequeas cantidades de osgeno libre,
aun cuando pueden vivir en total ausencia de este gas.
I,a primera generacin de una bacteria anaerobia, en cultivo, es
ms sensible a la presencia de oxfgeno que las generaciones siguientes,
y dentro de una generacin, toleran peor el oxgeno en las primeras
edades del cultivo.
McI,eod y Gordon (68) han destacado la incapacidad de producir
catalasa de las bacterias anaerobias. 1~n el desarrollo aerobio de las
bacterias se forma perxido de hidrgeno, que sera perjudicial para
ellas de no existir la catalasa, que desdobla el perxido en agua y oxfgeno inactivo. A1 carecer las bacterias anaerobias de la capacidad de
formar catalasa, cuando se desarrollan en condiciones aerobias estn
sometidas a la accin perjudicial del agua oxigenada. ^1 efecto nocivo
del aire sobre las bacterias anaerobias en estado vegetativo se hace
patente con una exposicin de slo cuarenta minutos, mientras que
en las esporas no se manifiesta al cabo de tres horas (2 y 27).
Las bacterias anaerobias intervienen en el suelo en un nmero considerable de importantes procesos, algunos de los que hemos mencionado ya, y entre los que merecen destacarse: formacin de amonaco
a partir de los proteidos; fijacin del nitrgeno atmosfrico por bacterias libres, ms iutensa, probablemente (77), que la llevada a cabo
por bacterias aerobias, y descomposicin de celulosa, peptinas y
proteidos.
^l solo carcter de anaerobias no sirve para caracterizar bacterias
que difieren tan fundamentalmente en su metabolismo, como las
qne obtienen su energa de la celulosa, las que toman su nitrgeno del
nitrgeno atmosfrico, las que pueden obtener oxgeno de los nitratos
- I -
y sulfatos o las que ocasionan el desprendimiento de olores pestilentes de las prote^nas complejas. Mientras que el anhdrido carbnico es el gas principal producido por las bacterias aerobias, las anaerobias se caracterizan por originar diversos gases, tales como el metano
y el hidrgeno en la descomposicin de los glcidos; el cido sulfhdrico en la reduccin de los sulfatos; xidos de nitrgeno y nitrgeno
libre en la reduccin de los nitratos; determinadas aminas, hidrgeno
sulfurado, nitrgeno y sus gidos y mercaptanes, como resultantes
de la descomposicin de los proteidos. Adems, las bacterias anaerobias
forman cidos actico, butrico, propinico, frmico y lctico, alcoholes etlico y butlico, y en algunos casos, acetona.
De entre los varios sistemas de clasificacin de las bacterias
anaerobias del suelo, reproducimos el siguiente, propuesto por ^^Vaksman (io2):
^
I.-Bacterias que actan prindpalmente sobre hidratos de carbono:
i. - Bacterias que utilizan ampllamente hidratos de carbono sencillos y
almdones como fuentes de energfa, denominadas por varios autores sacarolticas. A este grupo pertenecen las bacterias butricas
clasificadas de ordinario como una sola espede: Bacillus amylobacter A. :lfeyer y Bredemann. $stas bacterias descomponen los
azcares, con formadn de ddo butfrico y Rases.
a)
Bacterias. fijadoras de nitrgeno: Clostridium pastorianum Winogtadsky (Bac, amylobacter van Thieghem, Bac. amylocyme
Perdrix, Bac, butyricus Botkin, Granulobacter saccarobutyricum Befjeriack, Bac. ordhobutilicus Grimbert, Clostridium
americanum Ptiagahefm, Bac. amylobacter A. M. y Bred.), y
formas afines encontradas prcticamente como abundantes
ea casi todos los auelos. Bste organ{smo o grupo ha sido clasificado por Bergey como Cdostridium butyricum Prazmowskyy por Lehmann y Newmann, como Bac. pastorianum Wino,
gradsky.
b)
-gz-.
b)
Bacterias anaerobias que descomponen la celulosa a la temperatura ordinara. Bntre ellas se encuentran las productoras de
hidrgeno y de metano, de Omellansky; el
dissolvans Khouvne, y otras.
b)
Bac. cellulos^
Bac. sporegenes Metdwihoff (Glostridium sporogenes (Metcluiikoff) Bergey y ml). Bacilo mbvil, con flagelos pertricos, Gram
postvo, con extremos redondeados, de 3 a y x o,6 a o,8 .
Una de las bacterias ms fuertemente proteolticas que se conocen. Descompone los prtidos rnn formacidn de gas, ennegredmiento del medio y producdn de an olor marcado. );as
esporas, subterminales, se forman proato. Se encuentra abundantemente en el sudo, estircol, polvo y aguas residuales.
b)
Bac. oadamatis maligni Koch ( Vibrion septique Pasteur, Clostridium oedematis maligni (Koch) Bergey y col.). E;ncoatrado
en el intestino del hombre y en el suelo. Descompoae los prtidos con formaddn abuadante de gas, sin ennegrecer el
medio.
c)
d)
e)
b)
trificantes, de los que el primero parece ser el de mayor importarrcia (8o y I^3) en los procesos que se llevan a cabo en el suelo.
aJ BACT^RIAS ANAEROBIA5 DE5TRUCTORA5 D^ I.A CEI.UI,OSA. - Al
frente de este grupo deben figurar las bacterias, ya clsicas, aisladas
por Omeliansky (75) a fines del siglo pasado: Bac. methanigenes I,ehmann
y Neumann y Bac. f ossicularum I,ehmann y Neumann, que fueron
las primeras bacterias que se demostraron defintivamente capaces
de descomponer la celulosa en forma de papel de filtro o de algodn.
i,o gramos.
o,s
i,o
r
r
r
Carbanato cldrn (CaCO') ..................... io,o
Indidos.
iooo c. c.
y conservan la forma de la seccin de la fibra aun despus de separados de sta rnediante lavados. A medida que el cultivo envejece y
avanza la destruccin de la celulosa, los bacilos se alargan hasta
alcanzar una longitud triple de la primitiva, empezando a percibirse
un engrosamiento en uno de los extremos. que se tie ms intensamente, constituyendo finalmente una espora esfrica de z de dimetro, en cuyo momento el Bac. methanigenes presenta su aspecto
ms caractertstico.
I,a destruccin de la celulosa puede seguirse microscpicamente.
A1 iniciarse el ataque, el papel de filtro toma una coloracin anaranjada o amarilloanaranjada, apareciendo con numerosos agujeros y
los bordes corrodos. Finalmente pierde su estructura fibrosa y se
acumula en el fondo del frasco en forma de un sedimento negrusco
o anaranjado. El proceso de la destruccin es lento y puede durar
varios meses. Durante el perlodo de fermentacin vigorosa, el desprendimiento de gases vara de 3,5 c. c. a i5 c. c. por gramo de celulosa. Aderns de los gases indicados, durante la fermentacin se forman cidos grasos voltiles.
Con el Bac, methanigenes aparece asociado el Bac, f ossicularum, que
desprende hidrgeno durante la fermentacin de la celulosa. Sus esporas germinan mucho ms lentamente que las del primero, hecho que
fu aprovechado por Omeliansky para su separacin. Como hemos
indicado, en el primer cultivo preparado para el aislamiento del Bacillus methanigenes, el gas desprendido contena hidrgeno y metano.
Si dicho cultivo, poco tiempo despus de iniciado el desprendimiento
gaseoso, se calienta durante quince minutos a una temperatura
de 75^, las clulas del bacilo metnico procedentes de la germinacin
de las esporas quedan destrufdas, mientras que las esporas del productor de hidrgeno, que no han germinado todava, permanecen vivas. Repitiendo esta operacin en tres o cuatro generaciones sucesivas se llega a obtener un cultivo que slo desprende hidrgeno y
anhdrido carbr^co, en el que se encuentran bacilos de o,5 X 4 a 8
de longitud en los cultivos jvenes, y en los viejos pueden alcanzar
de io a ^5 de longitud. ^as esporas, esfricas y terminales, son de
mayor dimetro que en el Bac. methanigenes, midiendo i,5 de dimetro. A1 igual que este ltimo, las clulas vegetativas no toman con
el yodo la coloracin azul o prpura caracterfstica del Bac. amylobacter.
I,a fermentacin hidrogenada de la celulosa progresa ms lentamente que la metnica, y a la temperatura ptima (35^) puede continuar ininterrumpidamente durante ms de un ao. El gas, hidr-86-
geno y anhdrido carbnico, se forma con ms lentitud; aproximadamente, 8 c. c. por gramo de celulosa en las veinticuatro horas. Adems de los gases mencionados, durante la fermentacin se forman
cidos actico y butrico, trazas de cido valrico y alcoholes superiores, asf como pigmentos y substancias aromticas, que dan al cultivo
un aroma parecido al del queso.
Ni el Bac. methanigenes ni el Bac, fossicularum han podido obtenerse en cultivos puros en la forma habitual, ya que ninguno de los
dos se desarrollan en los medios slidos ordinarios a base de agar o
gelatina, habiendo fracasado todos los intentos en este sentido.
En iq23, Khouvine (56) describi otro organismo anaerobio destructor de la celulosa aislado del intestino del hombre: el Bac. cellulosae
dissolvens Khouvine. (Clostridium dissolvens (Khouvine) Bergey y colaboradores), interesante porque, adems de otros productos, suministra
alcohol etlico en proporcin de un 8 por ioo de la celulosa fermentada. NTorfolgicamente, el Bac. cellulosae dissolvens se parece mucho al
Bac. fossicularum, del que se diferencia por sus esporas, ovales en
lugar de esfricas y de mayor tamao: 2 x 2,5 . Fste organismo
se desarrolla bien hasta en temperaturas de 57^, y a este respecto,
repre^enta una fase de transicin hacia las bacterias termfilas. Fu
cultivado en un medio lquido conteniendo substancias fecales como
fuente de nitrgeno: las bacterias se adhieren fuertemente a las fibras
celulsicas del papel, lo que permite separarlas de las contaminaciones
que son arrastradas al lavar el papel con la solucin de sales esterilizada.
En la fermentacin de la celulosa, nico hidrato de carbono al que
ataca, adems de hidrgeno y anhdrido carbnico, se forma cido
actico y butrico, alcohol etlico y un pigmento pardoamarillento.
nicamente se recupera, en los productos de la fermentacin aislados,
e155^15 Por Zoo del carbono fermentado. Madame Khouvine cree que el
resto se encuentra en el lquido de fermentacin en forma de hidratos
d e carbono solubles , que son capaces d e ser absorbidos por el
intestino.
5obre gel silceo con celulosa forma colonias de color rosa naranja.
g,oo gramos.
Mg SOa ...................................
i,oo
SG ......................................
i,oo
^
r
0,02
FeSOa ....................................
Agua destllada .............................
i.ooo c.c.
ficie del gel quede libre de exceso de lquido. Se colocan entonces pequeas partculas de suelo sobre la placa, que se cubre y se pone a
incubar. A los tres o cuatro das se desarrollan colonias de color anaranjado, arnarillo, etc., que se extienden sobre el medio de cultivo. De estas colonias se pueden hacer trasplantes a matraces que contengan un gramo de papel de filtro y 25 c, c. de la solucin anterior. I,os
organismos empiezan a desarrollarse como pequeos lunares coloreados, sobre el papel, que posteriormente forman una masa mucilaginosa e^tendida por todo ste. Mediante repetidos trasplantes puede
llegar a obtenerse la bacteria en cultivo puro.
t,o gramos.
r,o
^
T,o
2,0
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zo,o
^r
iooo
c. c.
[^J BACTERIAS DFSNITRIFICANTES QU$ ATACAN A I.A CEI,UI,OSA. Algunas bacterias reductoras de nitratos pueden usar la celulosa como
fuente de energa, Un medio que contenga o,25 gramos de KNO,,
0,05 gramos de K,HPO, y 2 gramos de celulosa en forma de papel de
filtro, en ioo c. c. de agua corriente, se coloca llenando completamente
un matraz tapado, que se inocula con cieno y se incuba anaerobiamente a 3g^. 1~1 ataque de la celulosa empieza en una semana, y
viene acompaado de la reduccin del nitrato a nitrito, que a su vez
desaparece en quince das. Renovado el medio, el proceso de reduccin
de nitratos se acelera considerablemente. La celulosa toma color anaranjado amarillo y consistencia mucilaginosa, descomponindose en
fibras, que terminan por desaparecer. I,os gases que se desprenden
son una mezcla de nitrgeno con anhdrido carbnico.