BIORREACTOR PARA EL TRATAMIENTO DE VINAZA

La vinaza es un residuo industrial que se genera durante la destilacin del alcohol.

En trminos del volumen producido, se estima que por cada litro de alcohol
obtenido a partir de mosto de melaza, se generan alrededor de trece litros de
vinaza.
Este

residuo,

es

altamente

corrosivo

contaminante

de

las

fuentes

de

agua, presenta en su composicin qumica altos contenidos de materia orgnica,

potasio y calcio 'y cantidades moderadas de nitrgeno y fsforo.
La vinaza, producto de la destilacin del alcohol, es potencialmente contaminante si
se arroja sin tratamiento a los cursos de agua. Uno de los temas preocupantes es
que si va a un dique, a un embalse o a un ro, la demanda biolgica de oxgeno es
muy alta, deja sin oxgeno el agua para acelerar la descomposicin y ah se produce
la mortandad de peces. Adems, mal manejada, saliniza los campos con sales de
potasio. Por eso, hay que disponerla siguiendo ciertos protocolos, sin cometer
excesos.
Una alternativa de solucin es la implementacin de un Biorreactor capaz de tratar
la vinaza reduciendo el 95% los niveles de contaminacin y transformndolo en gas
metano.
Con este sistema se logra el aprovechamiento de un residuo que era desechado,
transformndolo en energa limpia y renovable. Y de esta manera se consigue
tambin un desarrollo sustentable.
Esta tecnologa incluye inculos vivos que degradan la vinaza en un 95%, a
consecuencia de esa reaccin hay una produccin de metano que lo absorbe una
campana y que por tubo sale a un quemador. Cuando el esquema de procesamiento
del gas est listo, va a ir a cogeneracin elctrica a fin de que pueda ser reutilizado
en una fbrica.

BIORREACTOR PARA EL TRATAMIENTO DE AGUAS CON ALTO

CONTENIDO
DE METALES PESADOS

Los contaminantes peligrosos contribuyen a que exista un nmero cada vez mayor
de dolencias crnicas, como los cnceres y las enfermedades del corazn. Los
contaminantes qumicos pueden desempear tambin un papel en las
enfermedades infecciosas, quiz dejando el cuerpo ms vulnerable a las
infecciones. La magnitud exacta del riesgo que representan, sin embargo, es difcil
de cuantificar. Esto ha alimentado un intenso debate sobre lo que constituye un uso
seguro y la eliminacin de las sustancias txicas.
Entre ese tipo de contaminantes peligrosos hay que incluir los metales pesados, y
ms concretamente las aguas contaminadas con metales pesados disueltos.
Actualmente existe la problemtica en el centro poblado Medio Mundo en el cual La
poblacin podra sufrir trastornos pulmonares as como enfermedades
cardiovasculares y cerebrales si es que continan tomando el agua
contaminada con arsnico y cadmio que se distribuye a travs de la red de agua
potable.
Se hicieron estudios los cuales revelaron que el agua que consume la poblacin de
Medio Mundo tambin contendra residuos fecales, adems de trazas de metales
pesados como Arsnico y cadmio, hecho que fue comprobado con un informe
sanitario que emiti la red de salud Huaura- Oyon.
Este informe Advirti que estos metales pesados en la sangre pueden ocasionar
graves consecuencias en la poblacin, por ello se exigi que se haga de inmediato
pruebas mdicas a los pobladores para saber con certeza los niveles de arsnico y
cadmio en la sangre de los pobladores.
A raz de esta problemtica se estas buscando alternativas de solucin, una de ellas
podra ser la implementacin de uno o ms Biorreactores capaces de tratar esta
agua. Existen estudios e investigaciones de varios autores que han ensayado
distintos mtodos de biorremediacin con diferentes cargas contaminantes y
metales pesados.

CONTROL DE EXPRESION DE GENES A PARTIR DEL CONTROL DE

FACTORES EXTRINSICOS

Los agentes patgenos son expuestos a diferentes temperaturas durante un ciclo

de infeccin y deben regular la expresin gnica en consecuencia. Sin embargo, la
medida en la que las bacterias virulentas alterar la expresin gnica en respuesta a
temperaturas que se encuentran en el husped es desconocido. Grupo
A Streptococcus (GAS) es un patgeno humano especfico que es responsable de
enfermedades que van desde infecciones superficiales de la piel y faringitis a
infecciones invasivas graves tales como la fascitis necrotizante y sndrome de shock
txico estreptoccico. GAS sobrevive y se multiplica en diferentes temperaturas
durante la infeccin humana. Se utiliz el anlisis de microarrays de ADN para
investigar la influencia de la temperatura sobre la expresin gnica global en una
cepa de serotipo M1 crecido hasta fase exponencial a 29 C y 37
C. Aproximadamente el 9% de los genes se expresaron diferencialmente en al
menos 1,5 veces a 29 C con respecto a 37 C, incluidos los genes que codifican
las protenas de transporte, protenas implicadas en la homeostasis del hierro, los
reguladores de la transcripcin, protenas de fago-asociado, y protenas con no
homlogo conocida . Son relativamente pocos genes de virulencia conocidos fueron
expresados diferencialmente en este umbral. Sin embargo, la transcripcin de 28
genes que codifican protenas con secuencias seal de secrecin predicha fue
alterada, lo que indica que la temperatura de crecimiento influye sustancialmente el
protena extracelular. Ensayos TaqMan en tiempo real transcripcin reversa-PCR
confirmaron los datos de microarrays. Tambin descubrimos que la transcripcin de
los genes que codifican las hemolisinas y protenas con funciones inferidos en la
regulacin del hierro, el transporte, y la homeostasis, fue influenciado por el
crecimiento a 40 C. Por lo tanto, GAS altera profundamente la expresin gnica en
respuesta a la temperatura. Los datos delinean el espectro de la expresin gnica
de temperatura regulada en un importante patgeno humano y proporcionan
muchas lneas imprevistas de investigacin patognesis.
Uno de los temas principales identificados en la investigacin procariota es que las
bacterias patgenas coordinadamente controlar la expresin gnica y la produccin
de factor de virulencia por circuitos de regulacin complejas en respuesta a
alteraciones en el medio de acogida. Por ejemplo, la sntesis de factor de virulencia
est influenciada por la disponibilidad de nutrientes, pH, osmolaridad, fase de
crecimiento, la tensin de oxgeno, los niveles de hierro, y la temperatura
( 1 ). Aunque el conocimiento se ha acumulado sobre los mecanismos moleculares
utilizados por las bacterias patgenas para regular la expresin gnica en respuesta
a los cambios del entorno, no se ha llevado a cabo el estudio de los cambios
globales en la transcripcin de genes inducidos por la temperatura.
Grupo A Streptococcus (GAS) es un patgeno Gram-positivo que causa muchas
infecciones (faringitis, septicemia, choque txico y la fascitis necrotizante) y
secuelas post-infecciosa (enfermedad cardiaca reumtica y glomerulonefritis). Los
seres humanos son el husped natural y nico reservorio de GAS. El organismo
puede sobrevivir y replicarse en diversos sitios anatmicos tales como la piel, la
garganta, el tracto urogenital femenino, tracto gastrointestinal inferior, y la sangre
( 2 ). Por lo tanto, GAS debe alterar la expresin de genes para sobrevivir y crecer

en estos ambientes. En los extremos de la piel superficial e infecciones de tejidos

profundos, GAS debe expresar diferencialmente virulencia y otros genes a
temperaturas que van desde aproximadamente 25 C a 40 C.
Se sabe relativamente poco acerca de los circuitos de regulacin de genes
utilizados por GAS en el curso de la infeccin humana. Los estudios de la expresin
gnica diferencial en respuesta a los cambios ambientales han llevado a cabo
mediante el anlisis de relativamente pocos loci diana que codifican probada o
factores

de

virulencia

extracelulares

putativos,

por

lo

tanto

han

sido

preseleccionada sobre la base de la presuncin de participacin en la interaccin

husped-patgeno ( 3 - 6 ) . Con la excepcin de los limitados datos disponibles a
partir del anlisis de los genes que codifican la protena M antifagoctica (emm )
( 4 ) y el superantgeno estreptoccico exotoxina pirognica A ( speA ) ( 6 ), se sabe
muy poco sobre el espectro de la expresin gnica de temperatura regulada en
GAS. Para obtener una perspectiva de las estrategias utilizadas por un patgeno
bacteriano para interactuar con el anfitrin, utilizamos la tecnologa de microarrays
de ADN para identificar los cambios globales en la expresin gnica en respuesta a
los cambios de temperatura fisiolgicamente relevantes.

CONTROL DE EXPRESION DE GENES A PARTIR DEL CONTROL DE

FACTORES EXTRINSICOS
REGULACIN POR TEMPERATURA DE LA EXPRESIN DEL GEN rhlR DE Pseudomonas
aeruginosa Pseudomonas aeruginosa produce diversos factores de virulencia a
travs de un mecanismo regulatorio dependiente de la densidad de poblacin
conocido como respuesta sensora de qurum (QSR), el cual es mediado por la
produccin de homoserina lactonas aciladas (HSL). Posee dos sistemas de QSR:
LasR/LasI y RhlR/RhlI organizados en una cascada regulatoria jerrquica. El
complejo LasR/C12-HSL regula la expresin de lasI, rhlI y rhlR, mientras que
RhlR/C4-HSL regula entre otros, la expresin de rhlAB y rhlC, genes de enzimas en
la sntesis de ramnolipidos y rmlBDAC, el opern de produccin de dTDP-L-ramnosa,
precursor directo de los ramnolpidos. La protena RhlR puede actuar como represor
de rhlAB en ausencia de C4-HSL. Estudios previos demostraron que a 37o C, genes
regulados por RhlR (rhlA-lacZ y rmlBDAlacZ) aumentan su expresin, contrario a lo
obtenido a 30o C. Sin embargo; en idnticas condiciones, no hubo efecto de la
temperatura en la transcripcin misma de rhlR. Estos datos dan lugar al objetivo de
este trabajo: determinar cual es el efecto de la temperatura en la expresin y
actividad del factor RhlR de P. aeruginosa. Se utiliz el plsmido pECP61.5 (rhlAlacZ-ptacrhlR), una construccin cuya fusin es encendida con la adicin exgena
de C4-HSL e IPTG, transformado en Escherichia coli DH5 y P. aeruginosa cepa
PAO1. Ensayos de Western-blot mostraron que la cantidad de RhlR en PAO1 y
PAO1/pECP61.5 fu menor a 30o C comparada con la encontrada a 370 C. As
mismo, se observ una induccin de la fusin rhlA-lacZ a 37o C en PAO1. En E. coli,
la cantidad de RhlR no vari con la temperatura en las condiciones evaluadas; pero
funciona como activador en presencia de C4-HSL y como represor con C4-HSL e
IPTG a 37o C. Este efecto no se observ a 30o C, pues la activacin es menor en
presencia de C4-HSL e IPTG. Respecto del factor transcripcional LasR, no se
encontr diferencia en la cantidad de protena producida a 30 y 37o C en PAO1. Los
resultados obtenidos hasta el momento, nos sugieren que la regulacin por
temperatura de la actividad regulatoria de RhlR, involucran eventos
postranscripcionales relacionados con velocidad de sntesis y/o con la estabilidad de
la protena.

CONTROL DE EXPRESION DE GENES A PARTIR DEL CONTROL DE

FACTORES EXTRINSICOS

Pseudomonas aeruginosa es una bacteria que se encuentra ampliamente

distribuida en la naturaleza, se puede aislar de muestras de suelo, aguas pristinas y
contaminadas, as como de plantas, animales y hasta de personas sanas. Todos
estamos cotidianamente en contacto con ella, sin embargo al ser un patgeno
oportunista, slo infecta a personas inmunosuprimidas. En muchos de estos casos
la infeccin es mortal pues tiene una alta resistencia natural a diversos antibiticos.
Por otra parte, P. aeruginosa infecta con gran frecuencia los pulmones de pacientes
con fibrosis qustica, el padecimiento gentico ms frecuente en poblaciones
caucsicas, y tiene una alta tasa de mortalidad en estos casos. Todas estas
caractersticas conllevan a que las infecciones por P. aeruginosa representen un
problema de salud importante. Por otra parte esta bacteria es capaz de utilizar una
enorme variedad de compuestos orgnicos como sustrato para crecer, incluyendo
detergentes recalcitrantes, y produce algunos compuestos que la hacen til en el
tratamiento de la contaminacin y en otros procesos biotecnolgicos. El estudio de
esta bacteria es pues de importancia tanto clnica como biotecnolgica. Una
caracterstica importante de P. aeruginosa en cuanto a su estructura gentica es
que, a diferencia de otras bacterias como Escherichia coli, la secuencia de su
genoma est altamente conservada entre cepas clnicas y ambientales, de modo
que cerca del 90% de los genes de cualquier cepa estn presentes en todas las
otras. Este core del genoma incluye los genes de virulencia, de modo que los
aislamientos ambientales son tambin potencialmente patgenos. En el laboratorio
a mi cargo cuando trabajaba en el Instituto de Biotecnologa de la UNAM,
estudiamos la gentica molecular de P. aeruginosa con distintos objetivos. Por
ejemplo, en 1987, aislamos una cepa de la selva de Chiapas que produce una lipasa
con uso potencial en detergentes y que a la vez sintetiza altos niveles de distintos
factores de virulencia. Algunos aos ms tarde, a partir de una planta de
tratamiento de aguas residuales en Cuernavaca aislamos otra cepa que puede
degradar detergentes recalcitrantes. La lnea de investigacin principal de mi
laboratorio fue iniciada en Biotecnologa y continuada en el Instituto de
Investigaciones Biomdicas, a partir del ao 2003. Esta lnea se centra en la
gentica molecular de la produccin de ramnolpidos por P. aeruginosa. Los
ramnolpidos son surfactantes, que adems de ser tiles en la limpieza de suelos
contaminados con hidrocarburos o metales pesados, participan en la virulencia de
esta bacteria. En este sentido nuestro grupo ha contribuido de una manera
importante en la descripcin de la va de biosntesis de estos glicolpidos (1) y de la
interaccin de esta ruta con el metabolismo central de la bacteria, como es la
sntesis de cidos grasos, as como con la produccin de otros compuestos como es
el caso del lipopolisacrido que forma la membrana externa o la del polmero de
reserva, polihidroxialcanoato, que puede ser usado para producir plsticos
iodegradables. Asimismo estamos iniciando la caracterizacin bioqumica de
algunas de las enzimas de la va de biosntesis de ramnolpidos. La expresin de los
genes que codifican para las enzimas que participan en la sntesis de ramnolpidos
est regulada a nivel transcripcional de una manera coordinada con la expresin de
genes que codifican para diversos factores de virulencia, como enzimas hidrolticas,
adhesinas y toxinas, mediante la llamada respuesta sensora de qurum (2). En mi
laboratorio hemos centrado nuestros estudios en el mecanismo molecular de la

regulacin transcripcional mediada por la protena RhlR, que es uno de los factores
centrales en esta respuesta. Hemos encontrado que se trata de una protena
reguladora con caractersticas atpicas, ya que puede ser tanto un activador como
un represor y modula su unin a ciertas secuencias de DNA, dependiendo del tipo
de coligando presente. Es interesante adems nuestro hallazgo acerca de que la
regulacin de la expresin gentica dependiente de RhlR es distinta a 29 C, una
temperatura a la que crecera la bacteria en condiciones ambientales y a 37 C la
temperatura del cuerpo humano. Actualmente estamos estudiando el mecanismo
molecular de esta termorregulacin. Tanto el estudio de la va de biosntesis de
ramnolpidos, como el de la respuesta sensora de qurum nos han permitido
plantear estrategias para la bsqueda de inhibidores de la virulencia de P.
aeruginosa que pudieran permitirnos desarrollar compuestos tiles para el control
de las infecciones producidas por esta bacteria. Estas lneas de investigacin, sin
embargo, se encuentran en sus inicios y an es prematuro afirmar que alguno de
los compuestos propuestos pudiera tener aplicaciones clnicas. En cuanto a las
aplicaciones biotecnolgicas, recientemente, mediante una colaboracin con la Dra.
Valeria Souza del Instituto de Ecologa, UNAM, hemos iniciado la caracterizacin de
cepas productoras de surfactantes, aisladas del sistema lagunar de Cuatro Cinagas
Coahuila, que puede ser considerado como un mar primitivo. Entre las bacterias
aisladas se encuentran algunas Pseudomonas que parecen tener gran potencial
para su uso industrial.