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PROFESORA:

AYUDANTE:

FECHA:
SEMESTRE:

23/01/2015
Mdulo II

Prctica. N 6

TEMA:
CROMATOGRAFA DE CAPA FINA
FUNDAMENTO TERICO:
La cromatografa de capa fina es una tcnica de adsorcin slido-lquido. El fenmeno responsable de la
separacin es la adsorcin, la cual implica la distribucin de un soluto entre dos fases inmiscibles de
acuerdo a la mayor o menor adsorcin del soluto en la superficie de una fase slida. La fase estacionaria
es slida y la fase mvil es lquida (disolvente). La adsorcin es un fenmeno de superficie, que se
manifiesta por un aumento de concentracin en la interfase que rodea el medio estacionario. No se debe
confundir la adsorcin con la absorcin, que consiste en la penetracin de una sustancia en el seno de
otra. Por ejemplo, al escribir, el papel adsorbe tinta, mientras que una esponja absorbe agua.
La teora de la cromatografa de capa fina an no ha podido aclararse en todos sus detalles y es
complicada por varias razones.
1. La velocidad de flujo del solvente no es constante, sino que vara a medida que el frente del solvente
avanza a lo largo de la capa de adsorbente. La velocidad depende de las caractersticas fsicas del
solvente empleado. El solvente se mueve constantemente hacia reas de adsorbente seco, lo cual tiende
a involucrar calores y consecuentemente distorsiona el equilibrio.
1. Las manchas que se separan pueden sufrir una difusin lateral y probablemente no estarn
uniformemente depositadas sobre el adsorbente. Probablemente, la conclusin ms importante, de toda
la teora desarrollada para la cromatografa de capa fina, es que el mayor grado de resolucin en una
capa fina ocurre en el rea alrededor de los valores de Rf entre 0,3 y 0,4.
PROCESO DE PARTICIN LQUIDO-LQUIDO.
En su forma bsica, un sistema de particin y las fuerzas que gobiernan su operacin son mucho ms
simples que las de un sistema de adsorcin. Est constituido por dos lquidos que son parcialmente
miscibles uno en el otro. Debido al requisito de inmiscibilidad, uno de los lquidos tender a ser mucho
ms polar que el otro. Cualquiera de los dos lquidos puede ser un solvente puro o una mezcla de
complejidad considerable. Los factores que dictan si un soluto permanece en la fase estacionaria o si se
mueve juntamente con la fase mvil, estarn supeditados a las diferencias de solubilidad del soluto en las
dos fases. La extensin a la cual un soluto se distribuye entre dos lquidos puede medirse en un embudo
de separacin. Tales mediciones, producen constantes conocidas como coeficientes de particin o
reparto. Si un soluto A se disuelve en dos disolventes B y C, se distribuye entre ellos de acuerdo con la
siguiente ley:

Concentracin de A en B
Concentracin de A enC = una constante a temperatura constante = coeficiente de reparto

Por ende, entonces, podemos decir en forma general que los materiales que tienen diferentes
coeficientes pueden ser separados. Aquellos solutos que son ms solubles en la fase mvil se movern
ms rpido que aquellos que son menos solubles y los solutos que son ms solubles en la fase
estacionaria tendern a moverse ms lentamente que aquellos que son menos solubles.
Consideraremos como ejemplo tpico la separacin de una mezcla de sustancias sobre una tira de papel
de filtro. Se sabe que el papel de filtro est formado por numerosas fibras de celulosa que portan un
cierto porcentaje de humedad. Podemos considerar que las partes individuales de cada fibra, junto con su

humedad asociada, constituyen hipotticas "clulas" elementales. La separacin se lleva a cabo al


repartirse las sustancias entre la humedad de las clulas y el flujo de disolvente entre ellas. El agua de las
clulas permanece estacionaria, mientras que el disolvente circula sobre ellas. Debido a esto, a las
clulas se llama fase estacionara, mientras que al disolvente se le denomina fase mvil.
Podemos ilustrar mejor estos principios haciendo referencia a un ejemplo. Consideremos que una mezcla
de dos compuestos, A y B (cuyo coeficiente de reparto entre las fases estacionaria y mvil son 2:1 y 1:2,
respectivamente, es decir, A es relativamente ms soluble en agua), que se aplican en el origen de una
cromatografa de papel. La figura 1 representa un diagrama del corte longitudinal del papel, que contiene
la mezcla disuelta en el agua de una clula en el origen. Por conveniencia se puede considerar que el
reparto tiene lugar entre volmenes iguales de la fase en movimiento y estacionaria. En la figura, las
molculas del comportamiento A estn representadas por crculos negros, y las de B, por cruces

Cuando el disolvente penetra en la clula (esto ocurre cuando comienza la separacin), las dos
sustancias se repartirn de acuerdo con la ley de reparto, especificada anteriormente. El solvente
conteniendo una cierta cantidad de mezcla que correr a lo largo del papel y encontrara otra clula que
contiene agua, mientras que el disolvente puro se pone en contacto con la primera clula (figura 1,c) y
tendr lugar en ella un nuevo reparto (fig 1,d). Este proceso se conoce como distribucin en
contracorriente continua, en tanto que el disolvente avance a lo largo del papel: La figura 1e representa la

distribucin de A y B en el papel despus de haber tenido lugar la separacin. Es obvio que los dos
componentes ya han comenzado a separarse. En la prctica este proceso se repite mltiples veces,
dando, eventualmente, una separacin eficaz. Haciendo una similitud con el proceso de extraccin
lquido-lquido, podemos afirmar que en la multitud de pequeas celdas formadas por las micelas del
papel, la separacin tiene lugar igualmente como s se dispusiera de extracciones sucesivas. La
cromatografa que resultar de la anterior separacin se representa en la figura 2.

A se encontrar a un tercio de la distancia entre el origen y el frente del disolvente, mientras que B estar
a dos tercios de esta distancia.
Uno de los aspectos ms importantes de la cromatografa es que, en un sistema cromatografa) dado, el
movimiento relativo de un compuesto con respecto al frente del disolvente es una propiedad caracterstica
y reproducible. En el caso de las cromatografas de papel y capa fina se expresa el movimiento de un
compuesto como un valor de Rf. Este valor, es una constante caracterstica y constante de cualquier
sustancia para un sistema cromatogrfico dado. En la cromatografa sobre papel y capa fina los valores
de Rf se expresan mediante la ecuacin:

Rf =

distanciarecorrida por la sustancia


distancia recorrida por el disolvente

Para el caso estudiado tendremos:

Rf ( A ) =a/ x , R f ( B)=b /x
a.- distancia recorrida por la sustancia A, la cual se mide desde el punto de aplicacin al centro de la
mancha.
b.- distancia recorrida por la sustancia B, la cual se mide desde el punto de aplicacin al centro de la
mancha.
x.- distancia recorrida por el frente del solvente.
COMPARACIN CON LA CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL
La cromatografa sobre papel es una tcnica muy valiosa. Haciendo uso de ella se pueden separar de
forma fcil y rpida, sustancias qumicas relacionadas estrechamente en estructura, bien sean iones
orgnicos, as como tambin, compuestos orgnicos polifuncionales o muy polares, tales como: aminocidos, azucares o pigmentos de plantas. Entonces por qu usar otros mtodos, los cuales
aparentemente, a primera vista, hacen exactamente la misma cosa ?.
La respuesta a esta interrogante es bastante sencilla. Existen un gran nmero de familias de impuestos,
principalmente en el campo de los lpidos, donde la cromatografa de papel no ha producido los

resultados deseados. Por lo tanto, se necesita una tcnica alternativa que sea capaz de separar, por
ejemplo, los cidos grasos de estructura muy parecida, de una manera tan simple y fcil como la
cromatografa de papel separa los amino-cidos estrechamente relacionados en su estructura qumica.
La cromatografa de capa fina (TLC: Thin Layer Cromatography), es la tcnica que cubre estas
expectativas. Podemos comparar la cromatografa sobre papel con la cromatografa de capa fina (TLC),
aspecto a las similitudes de los principios tericos y las tcnicas experimentales empleadas. En cuanto al
fundamento terico, la cromatografa sobre papel es una tcnica de particin lquido-lquido, mientras que
la de capa fina es una tcnica de adsorcin slido-lquido. Las ventajas de la TLC son: mayor velocidad,
mejor resolucin, (en general las manchas separadas se presentan ms compactas), mayor sensibilidad,
(se pueden separar y recuperar con mayor facilidad cantidades extremadamente pequeas de
compuestos, en el orden de los microgramos) y ms amplia posibilidad en la seleccin de reactivos de
deteccin, (se puede esparcir sobre las placas de slica y almina, reactivos reveladores altamente
corrosivos como el cido sulfrico, sin afectar la capa de adsorbente). La cromatografa de capa fina
tiene otras ventajas comparada con la de papel. Mientras que la cromatografa sobre papel se desarrolla
sobre una pelcula de pequeo espesor de celulosa soportada sobre el papel mismo, la de capa fina
puede desarrollarse sobre capas finas de una gran variedad de materiales inorgnicos pulverizados, tales
como; slica gel (xido de silicio: SiO2.H2O), celita, almina (xido de aluminio: Al2O2), tierra de
diatnicas (kieselguhr) y sobre sustancias orgnicas como: alcohol polivinlico, celulosa y celulosas
modificadas qumicamente. Es posible entonces, escoger el material particular ms adecuado, para
resolver la separacin del grupo de compuestos en estudio. El tiempo requerido para lograr una
separacin satisfactoria es considerablemente ms corto en TLC; y por ltimo, la capa de adsorbente
puede ser fcilmente retirada con una esptula fina para recuperar por elucin el contenido de una
mancha o banda presente en un espacio determinado de la placa. Adicionalmente, la TLC puede usarse
para separar sustancias hidrofbicas tales como: lpidos e hidrocarburos que son difciles de manejar
sobre el papel cromatogrfico. Las desventajas de la TLC comparadas con la cromatografa sobre papel
son; mayor dificultad para preservar resultados en TLC, los vales de Rf no son fcilmente reproducibles
en TLC y, los platos para la TLC son ms costosos que las hojas de papel.
PRINCIPIOS GENERALES DE LA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA.
La cromatografa de capa fina se lleva a cabo sobre una capa delgada uniforme de un adsorbente
adecuado extendida sobre una lmina de vidrio o de algn otro material y activada por calentamiento en
un horno (100 a 250C). Las muestras de mezclas a separar se disuelven en un solvente adecuado
(aproximadamente al 1%) y se aplican, mediante el uso micropipetas, a lo largo de un borde de la placa,
alrededor de 1 cm del final. Despus de evaporado el solvente, las placas se colocan verticalmente en un
recipiente de vidrio cerrado, denominadas cmaras de desarrollo, que contiene una capa de solvente
adecuado en el fondo. Antes, se ha debido procurar que la atmsfera de la cmara de desarrollo est
saturada con vapor del eluyente. El eluyente, avanza sobrepasando la mancha de origen. Al cabo de
unos pocos minutos los componentes de la mezcla son separados por el solvente que ir ascendiendo a
travs de la capa fina del adsorbente, transportando las manchas a localizaciones diferentes sobre el
adsorbente, por una combinacin de adsorcin y distribuciones variables del sistema del solvente.
Un ejemplo de separacin empleando la cromatografa de capa fina se indica en la serie de figuras que se
muestra a continuacin.

Las placas se extraen, procedindose a marcar rpidamente el frente del solvente antes que el disolvente
se evapore, se secan y se revela con diversos agentes que permiten visualizar los componentes de la
mezcla. La presencia de las sustancias separadas, se comprueban entonces por algn mtodo de
visualizacin. Las sustancias coloreadas se pueden observar inmediatamente, algunas fluorescen o
absorben luz U.V., y otras se hacen visibles rocindolas con reactivos especficos.
Como medida de la velocidad de desplazamiento de cualquier sustancia en un eluyente determinada, se
usa, como en la cromatografa de papel, el valor del Rf es decir, la relacin de la distancia que una
sustancia se ha movido con la distancia que ha viajado el frente del solvente de desarrollo.
Los valores de Rf, pueden ayudar en la identificacin de sustancias, cuando las mediciones se realizan
bajo las mismas condiciones, esto significa que se deben desarrollar cromatogramas comparativos al
mismo tiempo.
La cromatografa de capa fina se usa para determinar el nmero de componentes en una mezcla, para
detectar un compuesto particular en una mezcla de reaccin, y como un ensayo preliminar, para
determinar las condiciones ptimas para realizar una cromatografa de columna. El uso de la
cromatografa de capa fina est limitado a la aplicacin de sustancias relativamente poco voltiles, ya que
las pequeas cantidades de las mismas se encuentran expuestas en una superficie abierta.
PROCESOS DE ADSORCIN:
Dos factores estn involucrados en la cromatografa de adsorcin: las fuerzas de atraccin entre los
solutos y adsorbentes y las fuerzas que tienden a apartar los solutos de los adsorbentes, de tal manera
que puedan desplazarse con la fase mvil y puedan ser separados. A estos dos factores se les denomina
respectivamente adsorcin y desorcin.
De esta manera, la separacin de componentes de una mezcla por cromatografa de adsorcin depende
del equilibrio adsorcin - desorcin entre los compuestos adsorbidos en la superficie de la fase slida
estacionaria y la fase lquida mvil.
La fuerza con la que se adsorbe un componente aislado depende de la polaridad de la molcula, de la
actividad del adsorbente, y de la polaridad de la fase lquida mvil. Por lo tanto, la separacin de los
componentes de una mezcla depende de los valores relativos del equilibrio de adsorcin - desorcin para
cada uno de ellos. Por lo general, cuanto ms polar es un compuesto, ms fuertemente ser adsorbido en
la superficie de la fase slida.
El proceso de adsorcin es un fenmeno de superficie. En el sentido cromatogrfico el trmino adsorcin
se limita a las interacciones que implican enlaces por puente de hidrgeno, fuerzas de Van der Walls o
fuerzas de atraccin electrostticas (cuando las interacciones son inicas el proceso se denomina
intercambio inico), entre el o los solutos a separar y los centros activos del adsorbente.
Los centros activos del adsorbente provienen principalmente de los defectos (grietas, filos, etc.) de la red
cristalina del adsorbente donde las fuerzas electrostticas estn proyectadas parcialmente hacia el

exterior. La adsorcin es debida justamente a la interaccin de estas fuerzas con las interiores del soluto,
provocando de esta manera que las molculas del soluto se distribuyan en capas sucesivas
diferenciadas.
Las primeras capas de molculas se adsorben 3 a 5 veces ms fuertes que las capas siguientes. El calor
de adsorcin para la primera capa adsorbida sobre un slido est en el rango de 25-35 KcaI/mol,
disminuye rpidamente al rango de 5-10 Kcal/mol para capas sucesivas. Cuanto mayor sea la separacin
de cargas del soluto (mayor momento dipolar), mayor ser la adsorcin. Desde el punto de vista prctico
la cromatografa de adsorcin se aplica en la separacin de sustancias de media o baja polaridad.
En resumen, podemos decir que las fuerzas que causan la adsorcin de los solutos neutros son:
1. Atracciones del tipo dipolo-dipolo entre adsorbentes polares y solutos polares.
2. Enlaces por puentes de hidrgeno entre los grupos hidroxilo dentro de la estructura qumica del
adsorbente que se usa, especialmente de la slica, y los tomos de oxgeno y nitrgeno en la estructura
qumica de los solutos.
3. Las fuerzas de polarizabilidad entre adsorbentes polares y solutos tales como materiales aromticos
que pueden ser polarizados.
En todo caso, en cualquier fenmeno de adsorcin influyen tres variables independientes estas son el
adsorbente, el disolvente y las sustancias a cromatografiar.
Las separaciones sobre adsorbentes dependen de la existencia del equilibrio entre las molculas
adsorbidas en la fase estacionaria y las que estn libres en el disolvente (equilibrio adsorcin - desorcin).
Si las molculas de un componente particular tienen una elevada afinidad por el adsorbente pasarn muy
lentamente, mientras que otro componente con menos afinidad lo har ms rpido.
INFLUENCIA DEL DISOLVENTE.
El tipo de disolvente a usar es determinante para lograr una buena separacin. La regla general es elegir
la polaridad del disolvente anloga a la de la muestra a emplear y en la mayora de los casos adsorbentes
poderosos (activos) para sustancias no polares y adsorbentes con menos actividad para sustancias ms
polares.
La razn de la primera regla es obvia. Si, por ejemplo, elegimos un disolvente polar para una mezcla de
compuestos no polares, las molculas del disolvente sern adsorbidas preferentemente, por lo que la
mezcla pasar rpidamente a travs del sistema sin conseguir la separacin. Contrariamente, si
empleamos un disolvente apolar para una mezcla polar, sta permanecera en el origen sin lograrse
tampoco la separacin.
Existen dos fuerzas las cuales causan que los solutos se muevan con el solvente en un cromatograma.
La primera, es la tendencia para disolverse y moverse con el solvente, un fenmeno denominado
frecuentemente elucin. En este caso, los solventes ideales, debern disolver los solutos y debern ser lo
suficientemente buenos como solventes, como para competir con el poder de adsorcin del adsorbente.
Este tipo de situacin probablemente prevalece cuando se usan solventes aprticos para desarrollar los
cromatogramas como por ejemplo: hidrocarburos, teres y compuestos con funcin carbonlica.
La segunda fuerza que tiende a mover los solutos en un sistema cromatogrfico es un fenmeno de
desplazamiento.
Las molculas del solvente tienden a competir con el soluto por los sitios de adsorcin en el adsorbente y
por tanto tienden a mover las molculas del soluto a lo largo del sistema. Este fenmeno se denomina

desplazamiento. En cierto sentido, la elucin es una fuerza de traccin y el desplazamiento es una fuerza
de empuje. El fenmeno de elucin prevalece con solventes aprticos y el de desplazamiento con
solventes prticos como los alcoholes.
Para facilitar la eleccin del disolvente, se les ha clasificado en una serie llamada elutrpica, es decir en
orden de poder eluyente creciente. l poder eluyente aumenta con la polaridad del disolvente. La serie
elutrpica de Trappe modificada es:
DISOLVENTE
ter de petrleo
Ciclohexano
Tetracloruro de carbono
Benceno
Tolueno
Tricloroetileno
ter dietlico
Cloroformo
Acetato de etilo
Cloruro de etileno
Piridina
Acetona
n - propanol
Etanol
Metanol
Acetonitrilo
Agua

CONSTANTE DIELCTRICA ( )
2,0
2,1
2,2
2,3
2,4
3,4
4,3
5,0
6,4
10,0
12,0
21,0
22,0
26,0
34,0
37,0
81,0

Es importante correlacionar el poder eluyente de un disolvente con su constante dielctrica ya que la


cromatografa de adsorcin est basada en atracciones electrostticas, las cuales estn gobernadas por
la ley de Coulomb.

F=

q1 x q2
xr

Esta ecuacin establece que la fuerza F, entre dos cargas depende de la magnitud de las cargas y es
inversamente proporcional a la constante dielctrica del medio y al cuadrado de la distancia entre las
cargas. Si asumimos que los otros factores permanecen constantes, la fuerza de atraccin vara
inversamente con la constante dielctrica del medio. Es fcil demostrar (cmo ?) que el Rf es
inversamente proporcional a las fuerzas de atraccin entre el adsorbente y el material adsorbido, esto es:

F=

1
Rf

mientras menor es la interaccin soluto - adsorbente, mayor es su Rf; si es grande, F es pequea, y el


Rf, es grande.
Cuando no es posible obtener una buena separacin con disolventes puros se usan mezclas de
disolventes, hasta conseguir aquella combinacin que permita obtener la separacin deseada. Para que
los resultados de la cromatografa en capa fina sean reproducibles se usan disolventes de alto grado de
pureza, ya que las constantes dielctricas dependen grandemente de la pureza.

INFLUENCIA DE LA ESTRUCTURA QUMICA DE LAS SUSTANCIAS A SEPARAR.


La polaridad de las molculas es un factor muy importante en las separaciones cromatogrficas por
adsorcin. En general, cuanto ms polar es una sustancia, ms fuertemente es adsorbida. Las sustancias
adsorbidas fuertemente necesitan disolventes ms polares para ser eluidos.
Si las sustancias a separar poseen en la adsorcin con un disolvente no acuoso poca afinidad por los
adsorbentes hidrfilos usuales, entonces se trabajar con un absorbente activo y eluyentes poco polares.
Por el contrario, se emplearn adsorbentes poco activos y eluyentes polares cuando la afinidad de
adsorcin de las combinaciones es grande. Por esto es muy importante conocer qu caractersticas de la
estructura qumica de las sustancias influyen en la fuerza de unin por adsorcin.
Los principios en los que esto se rige se indican a continuacin:
1.- Los hidrocarburos saturados son poco o nada adsorbidos, la introduccin de enlaces dobles aumenta
la afinidad de adsorcin, tanto ms, cuanto mayor es su nmero y ms todava si estn conjugados. Con
la introduccin de enlaces dobles, especialmente enlaces dobles conjugados, aumenta la facultad de
polarizacin de las molculas y con esto la fuerza de la unin adsortiva a la superficie de los adsorbentes
hidrfilos.
2.- Si se introducen grupos funcionales en un hidrocarburo, aumenta generalmente la afinidad de
adsorcin, pudindose observar la siguiente serie de adsorcin descendente: -COOH, -CONH2, -OH,
-NHCOCH3, -NH2, -OCOCH3, -COCH3, -N(CH3)2, -NO2 -OCH3, -H, -Cl. Las combinaciones carbonlicas
se adsorben ms dbilmente que las hidroxlicas y amnicas. Los grupos C - metilo estn sin una
influencia especial.
3.- Si en una molcula estn presentes varios grupos funcionales de distinta naturaleza, sus influencias
separadas en la adsorcin son aproximadamente aditivas. Los efectos estricos son importantes y
pueden variar grandemente el grado de adsorcin.
Los factores que hay que tener en cuenta en la seleccin de adsorbentes y eluyentes apropiados, se
pueden resumir sinpticamente en el esquema que se presenta a continuacin.

De aqu resulta que para la separacin de sustancias poco polares (vrtice del tringulo punteado
sealando hacia abajo a la izquierda en la direccin de mezcla a separar no polar), hay que emplear un
adsorbente con actividad alta (vrtice del tringulo punteado sealando hacia arriba a la izquierda en la
direccin de la fase estacionaria con actividad I) y un eluyente con poco poder de elucin (vrtice del
tringulo punteado sealando hacia la derecha).
NATURALEZA DEL ADSORBENTE

La adsorcin de sustancias en la superficie del slido que acta como adsorbente es mayor cuanto mayor
es la polaridad del absorbente. La presencia de agua disminuye la actividad del adsorbente. La actividad
del adsorbente (poder de adsorcin), depende del tipo de material y del modo cmo se prepar. Muchos
de los slidos empleados como adsorbentes en cromatografa de capa fina son xidos metlicos,
xidos hidratados y sales. Las sustancias adsorbidas, llamadas tambin adsorbatos, son
combinaciones polares o polarizables.
En general, estn ligadas a la superficie del adsorbente por medio de fuerzas electrostticas las cuales
tambin son responsables de la cohesin de la red cristalina. Aqu, las tensiones reticulares actan en
parte hacia afuera. Los centros activos de adsorcin en el adsorbente son, por lo tanto, aristas, secciones
de rotura, ngulos y lugares defectuosos de la superficie, en tos que los
iones estn ms o menos
al descubierto. Con esto se hace comprensible el paralelismo entre la actividad de adsorcin y la escala
de dureza, que representa una medida de la magnitud de las fuerzas reticulares.
Por las tensiones elctricas superficiales se inducen momentos dipolares en las
combinaciones no polares, o se intensifican los momentos dipolares ya existentes en combinaciones
polares. As pues, la unin del adsorbato a la superficie del medio de adsorcin est producida por
fuerzas ion, dipolo o dipolo-dipolo respectivamente. En caso extremo la polarizacin puede
conducir a la ionizacin de las molculas adsorbidas. Los puentes de hidrgeno participan, a menudo de
la unin entre el adsorbente y la sustancia adsorbida. Las molculas, que forman puentes de hidrgeno
internos, se adsorben ms dbilmente en slica gel, xido de aluminio hidratado, que los compuestos
ismeros que no poseen estas propiedades. Adems, los puentes de hidrgeno influyen en la movilidad
entre la sustancia y el eluyente. La serie de poder adsortivo de los adsorbentes ms usados que se
presenta en la tabla fue establecida por H. H. Strian.
Para facilitar la eleccin del sistema, se ha preparado una lista de adsorbentes y disolventes ordenados
de menor a mayor polaridad (actividad y poder eluyente respectivamente). Esta se ha elaborado a base
de conocimientos prcticos y se representa a continuacin.
Adsorbentes por orden de menor a mayor
poder adsortivo
Azcar, almidn
Inulina
Nitrato magntico
Talco
Sosa
Carbonato potasio
Carbonato clcico
Fosfato clcico
Carbonato magntico
Magnesia
cido silicio activado
Silicato de magnesio activados
xido de aluminio
Carbn animal activado y magnesia activada

Disolventes por orden de menor a


mayor poder eluyente
Hexano, teres de petrleo
Heptano
Ciclohexano
Tetracloruro de carbono
Benceno
Tolueno
Cloroformo
ter dietlico
Acetato de etilo
Piridina
Acetona
Propanol
Etanol
Metanol
Agua
Mezcla de cidos, bases con agua, alcoholes o piridina

Aunque esta relacin es muy til, hay que tener cuidado, especialmente con los disolventes, ya que con
frecuencia se encuentra inversin de los resultados, entro dos disolventes determinados, en las mismas
condiciones.
Virtualmente puede emplearse cualquier lquido como disolvente en la cromatografa de adsorcin,
pudiendo combinarse mezclas de dos, tres e incluso cuatro lquidos de polaridad diferente. De esta
manera, el nmero de disolventes disponibles es mucho mayor que el de adsorbentes. Los adsorbentes
ms usados en TLC, en orden de importancia son la slica gel, y la almina. En determinados casos
tambin se emplean otros adsorbentes especiales como kieselguhr, celulosa, carbn activado y el polvo
de poliamida (nylon).
En la prctica slo se emplean con frecuencia solamente dos adsorbentes, la slica gel y la almina,
desarrollando la separacin empleando el disolvente apropiado o cambiando la polaridad del adsorbente
por adicin de agua. Para conseguir la forma ms activa del adsorbente, se calienta fuertemente,
eliminando toda el agua y cualquier impureza orgnica.
Los grados de menos actividad se consiguen por adicin de cantidades conocidas de agua. A este
proceso se le denomina desactivado.
Algunos adsorbentes contienen un aglomerante el cual aumenta la adhesin del adsorbente a la placa de
vidrio. Los aglomerantes ms comunes son el sulfato de calcio (yeso) y el almidn. Sin embargo, los
productos modernos tienen mejores propiedades adhesivas, siendo, en muchos casos, superfluo e
incluso indeseable el empleo de aglomerantes.
SILICAGEL: (CIDO SILCICO).
Es el adsorbente ms extensamente usado en TLC y probablemente el mejor material para realizar las
pruebas iniciales de separacin, ya que posee una capacidad de adsorcin muy elevada.
Si los compuestos a separar son neutros y contienen uno o dos grupos funcionales, pueden ser
separados sobre capas de slica gel, activada usando para el desarrollo de la cromatografa
solventes orgnicos puros o mezclas de solventes. Si los compuestos a ser separados son bases
orgnicas, el solvente de desarrollo deber contener una pequea cantidad de hidrxido de amonio de
dietilamina.
Del mismo modo, se deber aadir una pequea cantidad de cido actico a los solventes usados para el
desarrollo del cromatograma cuando se desea separar mezclas de compuestos cidos. La slica gel
puede usarse con todos los solventes, aun cuando exhibe capacidad de enlazamiento por puentes de
hidrgeno con algunos solutos y solventes cuando est presente el agua.
Esta capacidad de enlazamiento conjuntamente con el factor de hinchamiento y por tanto la disminucin
de la velocidad de flujo, en presencia de agua, metanol y etanol, causa algunas limitaciones a su uso
general. Los compuestos muy polares, tales como: alcoholes, aminas o cidos carboxlicos, se adsorben
fuertemente a la superficie de la slica, formando puentes de hidrgeno con los residuos de cido silcico
de la forma Si--O--H.
Por lo tanto, se requiere de un solvente muy polar para hacer que este tipo de compuestos se mueva a lo
largo de la superficie de la slica gel. Los compuestos apolares no sern muy atrados por la slica gel y se
movern rpidamente an en la presencia de solventes apolares. La slica gel puede adquirirse en formas
muy diversas.
Las ms comunes son la slica gel G y la slica gel H. La forma G, (la G significa Gypsum o yeso de Pars,
es decir sulfato de calcio. Cuando este aglomerante se expone al contacto con el agua o la humedad, se
convierte en una masa rgida de CaSO42H2O, el cual se enlaza al adsorbente y a la placa de vidrio),

contiene un 13% de aglomerante: El tamao medio de sus granos es de 5 a 25 mieras, la slica gel H no
contiene aglomerantes.
Igual que la forma G, posee un tamao medio de granulacin de 5 a 25 mieras. Las capas de slica gel H
poseen una buena estabilidad. Los tiempos de recorrido, en comparacin con los de la slica gel G son
algo superiores. Tambin pueden obtenerse slica gel H y slica gel G, con indicadores de fluorescencia
(slica gel GF254 y slica gel HF254). La materia fluorescente inorgnica (un silicato de zinc activado con
manganeso), hace innecesario en muchos casos, tener que colorear tas sustancias. Se observa el
cromatograma en la luz de una lmpara UV de onda corta. Las sustancias que absorben la luz UV
aparecen como manchas de absorcin oscuras sobre un fondo fluorescente.
ALUMINA:
Hasta ahora el xido de aluminio (almina), se ha utilizado con menor frecuencia en la cromatografa de
capa fina que la slica gel. Las mltiples posibilidades de aplicacin de la almina incluyen por ejemplo la
separacin de terpenos, alcaloides, esteroides, combinaciones alicclicas, alifticas y aromticas.
La almina tiene reaccin alcalina, por lo tanto se usa frecuentemente para la separacin de compuestos
con caractersticas bsicas en preferencia o la slica gel. Debido a su naturaleza bsica, no se requiere
aadir cantidad alguna de base al solvente de desarrollo.
La cromatografa de capa fina sobre almina tambin se usa como una herramienta complementaria para
la cromatografa de columna, tcnica en la cual la almina se emplea ms extensamente que la slica gel.
La almina presenta sitios de adsorcin de estructura qumica variada del tipo: Al5+, Al - OH, Al O-, Al
OH+ y dependiendo de su preparacin iones sodio o hidronio.
La almina puede obtenerse en tres formas: cida, bsica y neutra. La almina cida es una almina
lavada con cido, la cual produce una suspensin en el agua con un pH de aproximadamente 4.
Esta almina es adecuada para la separacin de compuestos con propiedades cidas tales como
aminocidos y cidos carboxlicos. La almina neutra (pH aproximadamente 7) se puede usar para la
separacin de cetoesteroides, glicsidos, cetales, lactonas, algunos esteres y para la deshidratacin de
solventes.
La almina bsica (pH aproximadamente 10) es adecuada para la separacin de compuestos con
caractersticas bsicas como las aminas.
Este tipo de almina, posee el ms amplio espectro de aplicacin. Los compuestos altamente polares se,
adsorben fuertemente sobre, este material, mientras que los compuestos no-polares (excepcin hecha
con los hidrocarburos insaturados) se enlazan dbilmente. La acetona, no debe usarse como solvente de
elucin con almina bsica de alto grado de actividad, ya que puede condensar por una reaccin de
condensacin aldlica.
Existen varios tipos de almina dependiendo de su grado de actividad, la cual se mide en la escala de
Brockman, de acuerdo al contenido de agua. Los grados de actividad son los siguientes:
Grado de Actividad

II

III

IV

Peso de agua (% en peso)

10

15

Para la almina, el grado de mayor actividad se define como actividad I de Brockman. El contenido de
agua posee un significado decisivo, ya que las molculas de agua fcilmente adsorbibles bloquean los
puntos activos de la superficie.

La cromatografa de los cidos y bases se desarrolla en forma diferente. De los adsorbentes que ms se
emplean en cromatografa de capa fina, la slica gel es relativamente cida y la almina es relativamente
bsica. S se intentara cromatografiar solutos con propiedades cidas sobre, almina, estos se unirn
fuertemente al adsorbente mediante fuerzas inicas.
Debido a este hecho, se movern con mucha dificultad a lo largo de la capa de adsorbente, por lo tanto,
su separacin ser muy difcil.
Igual situacin ocurrir con solutos bsicos sobre slica gel. Es as como, las bases debern ser
cromatografiadas sobre almina, donde podrn ser adsorbidas en casi la misma extensin que los
alcoholes. Los cidos y fenoles, debern ser separados sobre slica gel, donde podrn ser adsorbidos en
una extensin un poco mayor que los alcoholes.
KIESELGUHR Y CELULOSA:
El kieselgur adsorbe ms dbilmente que la slica gel y la almina. Por eso es especialmente apropiado
para separaciones de combinaciones polares (en particular para cromatografa de reparto). Estos dos
adsorbentes se usan como soportes para pelculas lquidas en la cromatografa de particin.
Este tipo de cromatografa se usa siempre para la separacin de molculas muy polares como los
aminocidos, los carbohidratos y algunos otros compuestos hidroflicos naturales y frecuentemente para
la separacin de ismeros estrechamente relacionados. Se debe tener cuidado de asegurar que las
capas contengan un lquido corno fase estacionaria, generalmente agua. Esto es especialmente el caso,
cuando las capas se preparan por el mtodo de inmersin. El sistema de solventes usado con estos
adsorbentes contiene generalmente varios constituyentes, uno de los cuales es la fase estacionaria
lquida, por ejemplo, agua.
CONCENTRACIN DE LA MUESTRA A APLICAR.
La cantidad de muestra en la cromatografa de adsorcin es muy importante, puesto que el poder
adsorbente de la superficie disminuye marcadamente con el incremento de la cantidad de muestras, ya
que se ocupan primero los centros ms activos. El resultado es la aparicin de "colas" en direccin al
origen.
Los mejores resultados se consignen al aumentar tanto como se pueda la relacin adsorbente/muestra.
Lo normal es que sea de 1000 a 1, para obtener resultados satisfactorios. En todo caso, las cantidades
que se pueden cromatografiar sin formacin de cola, son distintas. Dependen del nivel de adsorcin total,
es decir de la clase de adsorbente y de su capacidad, que en general va paralela con la actividad de
adsorcin.
Para un espes de capa de 250 , las cantidades de sustancias que se pueden
cromatografiar en cada capa de slica gel ascienden a unos miligramos, sobre las capas de xido de
aluminio menos activadas, la dcima parte, mientras que sobre capas de Kieselgur inactivas, se pueden
cromatografiar solamente 25 hasta 50 g de mezclas de sustancias.
ETAPAS PARA REALIZAR UNA CROMATOGRAFA DECAPA FINA PREPARACIN DE LA PAPILLA
DE ADSORBENTE
Sobre las placas se esparce en forma homognea una papilla de adsorbente dispersado en un solvente
adecuado. Si el adsorbente no contiene aglomerante, las papillas de adsorbente pueden conservarse en
frascos cerrados, casi indefinidamente.
Normalmente, las papillas se hacen con agua que, si es necesario, puede contener cidos, bases,
lampones o reactivos acomplejantes. El mayor problema en esta tcnica es conseguir una consistencia
correcta. Si la papilla es demasiado diluida correr rpidamente, dando lugar a capas, excesivamente

finas. Por el contrario, si es muy espesa se extiende muy difcilmente, siendo fcil obtener lneas o
grumos a lo largo de las placas. La papilla con agua debe usarse inmediatamente despus de su
preparacin, de lo contrario comenzar a formar grumos. Esta no debe emplearse si
la misma ha
estado sin uso despus de un periodo de tiempo. Las placas preparadas con una papilla acuosa deben
secarse en una estufa antes de su uso.
An cuando, se pueden usar un gran nmero de solventes, para preparar la papilla, el cloruro de metileno
y el cloroformo son probablemente los ms convenientes. Poseen dos ventajas, ambos tienen bajos
puntos de ebullicin y la habilidad para evitar que el adsorbente forme grumos. Los bajos puntos de
ebullicin significa que no es necesario secar las placas revestidas de adsorbente en una estufa.
Adems, las placas preparadas con estos solventes son estables por varios das. Tienen la desventaja,
que la capa de adsorbente formada sobre el vidrio es frgil y por tanto se debe tratar cuidadosamente.
Por esta razn, algunas personas prefieren aadir una pequea cantidad de metanol para hacer posible
que el aglomerante se fije ms firmemente. El metanol solvata el sulfato de calcio tanto como el agua.
La papilla se prepara convenientemente en un recipiente de tamao mediano con tapa hermtica. Se
requieren de 3 ml de diclorometano por cada gramo de slica gel.
Para obtener una papilla sin grumos, se deber aadir la slica gel al solvente, mientras la mezcla est
siendo agitada. Aadir solvente al adsorbente usualmente causa la formacin de grumos en la mezcla.
Cuando la adicin del solvente es completa, se coloca la tapa del recipiente y se cierra hermticamente,
se agita vigorosamente y para asegurar un mezclado completo.
PREPARACIN DE LAS PLACAS
Las placas para la cromatografa de capa fina se pueden adquirir comercialmente revestidas de capas
muy uniformes de slica gel o almina sobre lminas de plstico. Estas placas pueden obtenerse con o sin
un colorante fluorescente impregnando la superficie del adsorbente. Sin embargo, generalmente se usan
placas de vidrio, de tamao variable segn las necesidades de la aplicacin particular. Las dimensiones
ms comunes son:
7,5 x 2,5 cm (portaobjeto)
20 x 5 cm
20x10cm
20x20 cm (para cromatografa bidimensional)
100 x 20 cm (para cromatografa preparativa)
Las placas deben lavarse con jabn y agua, lavadas nuevamente con agua y luego con metanol acuoso
al 50%. Seguidamente, se permite que las placas se sequen completamente sobre toallas de papel. La
manipulacin de las placas debe hacerse por los extremos, debido a que las huellas digitales sobre la
superficie de las placas hacen dificultoso que el absorbente pueda adherirse al vidrio.
Para la preparacin de placas de capa fina sobre lminas de vidrio en el laboratorio se usan
frecuentemente dos mtodos:
(i)
por revestimiento
(ii)
por inmersin.
REVESTIMIENTO
En este mtodo, placas de vidrio del mismo espesor se disponen en hilera sobr un soporte especial,
extendiendo la papilla de adsorbente con un extendedor de capa fina. Si las placas de vidrio poseen
distinto espesor se usa un aparato con un dispositivo que permite colocar las placas de tal manera que

todas ellas tengan la superficie superior en un mismo plano, para asegurar que cada placa recibe el
mismo espesor de adsorbente, al deslizar el extendedor con el adsorbente tal como se indica en la figura:

El nivelador automtico de placas tiene una manivela frontal, la cual, con un giro, hace que suban las
placas y queden niveladas por la parte superior, ofreciendo una superficie total en un mismo plano,
aunque el grosor de las placas sea diferente.
Las placas se aplican por medio del extendedor, el cual cuenta con una serie de calibraciones para
conseguir capas de 0,25; 0,50; 0,75; y 1 mm de espesor.
Habiendo preparado las placas, el paso siguiente es el pecado, lo que se consigue alentndolas en una
estufa a una temperatura de.100 - 125 C durante un par de horas. De esta forma se activan, lo que las
hace adecuadas para la cromatografa de adsorcin.
INMERSIN.
Este es el mtodo ms ampliamente usado para preparar placas revestidas de adsorbente, tipo
portaobjetos, con fines didcticos en el laboratorio.
Consiste en sumergir un par de portaobjetos de vidrio de similares dimensiones adheridos uno contra el
otro y sujetados por un extremo con los dedos ndice y pulgar, dentro del recipiente que contiene la papilla
a una velocidad constante hasta que aproximadamente 0,25 cm desde el borde superior de las placas
permanezca sin revestimiento de adsorbente. A continuacin, se extraen las placas, lentamente a una
velocidad constante: La operacin puede visualizarse en la figura:

La operacin total del procedimiento oscila entre 3 y 5 segundos. Se requiere de cierta prctica para
ajustar el tiempo correcto. Despus de extradas, se permite escurrir la suspensin sobrante en el otro
extremo de la placa, apoyando el borde inferior de las placas en la parte superior del envase que contiene
la papilla. Las placas se separan, limpiando con un dedo el exceso de absorbente que haya quedado en
los bordes y en la superficie no cubierta de las placas, para finalmente colocarlas sobre una toalla de
papel para completar el proceso de secado.
APLICACIN DE LAS MUESTRAS SOBRE LAS PLACAS
Los mtodos son prcticamente los mismos que para la cromatografa de papel, teniendo en cuenta que
la mayor delicadeza de las capas finas exige mayor cuidado al aplicar la muestra. Las muestras se
aplican con un capilar sobre la lnea base, dejando evaporar el disolvente (Ver figura).
Los capilares que se usan son una extensin muy fina del tipo empleado en la determinacin de puntos
de fusin. (ver figura). La evaporacin del disolvente en la capa fina es tan rpida que no es necesario el
empleo de un secador de pelo u otro aparato similar. El dimetro de las manchas en el origen debe ser lo
ms pequeo posible.
Las solucin es no muy concentradas se pueden aplicar varias veces dejando evaporar el disolvente
entre cada aplicacin. El volumen de la muestra suele ser de 1 microlitro. No se debe olvidar marcar la
placa de forma adecuada, antes de comenzar la cromatografa. Lo ms sencillo es enumerar los puntos
de origen de izquierda a derecha, anotando las sustancias que se aplican en cuaderno de laboratorio.

ELECCIN DEL DISOLVENTE


Para obtener resultados reproducibles, en la cromatografa se deben usar solamente disolventes
muy puros. En general, se procura emplear disolventes (eluyentes) sencillos, de uno o
dos
componentes. En caso de disolventes de varios componentes, hay que evitar que los ms
voltiles
se evaporen si se emplean recipientes que no cierran hermticamente. Cuando se trata de mezclas de
sustancias desconocidas, lo mejor es emplear en primer lugar como disolvente benceno o cloroformo (con
contenido de alcohol). Si las sustancias se quedan durante la cromatografa cerca
del origen,
entonces o bien se elige un medio disolvente de mayor polaridad o se agrega al
disolvente
empleado otro miscible con l de mayor polaridad.
Si las sustancias se desplazan demasiado aprisa (cerca del frente), se emplea entonces un disolvente,
con menor polaridad. En todo caso, la eleccin del disolvente depender de la naturaleza, de los
compuestos que se van a separar y del material adsorbente sobre el cual se desarrollar la separacin.
Una regla general para la eleccin del disolvente es establecer la comparacin de polaridad del mismo
con respecto a las polaridades de las sustancias a separar.
As, para sustancias solubles en agua se elegirn capas de celulosa o slica gel, emplendose un
disolvente polar. Para sustancias menos polares se elegirn capas de almina o slica gel activadas,
emplendose un disolvente no acuoso apropiado.
Una tcnica sencilla para la eleccin del disolvente a emplear en una determinada separacin consiste en
colocar una serie de manchas de la muestra a intervalos en una placa. Los disolventes se prueban
aplicndolos en los centros de las manchas mediante un capilar muy fino, lo que permite desarrollar las
manchas radialmente (ver figura).

En el caso representado el disolvente 2 resulta ser el ms apropiado, debido a que resulta en la


separacin del mayor nmero de componentes de la mezcla en estudio.
DESARROLLO DE LAS PLACAS.
El desarrollo se lleva a cabo por el mtodo ascendente en cubetas especiales para cromatografa o
en recipientes adecuados tales como frascos pequeos con tapa de rosca, vasos de precipitados
cubiertos con vidrio de reloj, etc, del tipo que se muestran en las figuras anexas.

En el interior de la cmara de desarrollo debe colocarse un papel de filtro, empapado de disolvente, que
cubra las paredes interiores de la misma, para conseguir que la atmsfera est saturada de vapor del
disolvente.
El fondo de la cubeta se cubre de disolvente hasta una altura de 0,5 a 1 cm y, despus de un periodo de
tiempo apropiado, en el que se consigue el equilibrio, se introduce la placa. Durante el desarrollo no
puede moverse la cubeta. Por lo general, cuando se desarrolla una placa se deja que ascienda el
disolvente unos 10 cm por encima del origen y se saca la placa. El frente del disolvente se marca
cuidadosamente con un lpiz puntiagudo y se deja evaporar el mismo, operacin que dura unos pocos
minutos. Si es necesario se calienta la placa, estando lista para el revelado.
REVELADO DE LAS PLACAS.
Los procedimientos empleados para revelar las placas son anlogos a los que se usan en la
cromatografa sobre papel. Sin embargo, existen algunas diferencias interesantes. En principio, el mtodo
de baado no es recomendable, ya que las placas se estropean fcilmente con este mtodo.

Una de las ventajas de la cromatografa en capa fina sobre la de papel es la posibilidad de revelado con
agentes corrosivos tal como los cidos concentrados y compuestos fuertemente oxidantes, a alta
temperatura, debido a la naturaleza inorgnica de la capa. Otro reactivo muy empleado son los vapores
de yodo.
En un recipiente con tapa hermtica que contiene en el fondo unos pocos cristalitos de yodo, se introduce
el cromatograma y se deja unos minutos.
El yodo tiende a concentrarse en los sitios donde estn los compuestos, por lo que aparece una mancha
marrn oscuro, sobre un fondo amarillo plido. En tanto que el yodo no reaccione con los compuestos
revelados, el mtodo es extraordinariamente bueno como revelador no destructivo.
Otros mtodos que no afectan a los productos en el revelado son la fluorescencia y la radiactividad:
Muchas placas llevan impregnadas sustancias fluorescentes como aditivos para el revelado de los
compuestos, localizndose los mismos por la aparicin de manchas no fluorescentes. Adems, muchas
veces los compuestos a separar absorben en el ultravioleta, siendo este el mtodo ms sencillo para
localizarlos.
Cuando se emplea una lmpara UV, cualquier material orgnico, que contenga un cromforo, aparecer
sobre la placa como una mancha oscura sobre un fondo luminoso. Teniendo en cuenta que el material
orgnico se deposita sobre la superficie del adsorbente, si se tiene un cromforo, actuar como una
sombra o cortina que evitar que la radiacin UV alcance la superficie del adsorbente. La posicin de la
mancha debe delinearse como se mencion antes.
Si se desea emplear el revelado UV, se coloca la placa seca bajo una lmpara UV, preferiblemente en un
recinto oscurecido. Existen diversas lmparas de luz UV, pero las dos ms comunes son una que puede
manipularse con la mano y colocarse directamente sobre la placa y otra con un recinto cerrado por todos
los lados, provista de un trapo oscuro en la parte frontal y una mirilla en la parte superior. Si se emplea
una lmpara de mano, se mantiene sobre la placa a una altura de 10 cm aproximadamente, tal como se

muestra en la figura. Mrese solo la placa, evite siempre mirar directamente a la lmpara.
CONSERVACIN DEL CROMATOGRAMA
La conservacin de los cromatogramas en capa fina es difcil y generalmente indeseable, puesto que las
placas se utilizan muchas veces. Interesa, por tanto, encontrar un medio para conservar los
cromatogramas obtenidos. El espesor del vidrio y la naturaleza tan delicada de la capa son obstculo
para guardar los cromatogramas. La posicin de las manchas despus del revelado puede fotografiarse o
dibujarse. Un mtodo que puede usarse convenientemente, consiste en adherir con sumo cuidado sobre

la superficie del adsorbente, una cinta plstica transparente de una anchura un poco mayor que el de la
placa y, tratar que el cromatograma se pegue en la cinta de manera que se conserve por largo tiempo.
APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFA DE CAPA FINA EN QUMICA ORGNICA.
La tcnica de cromatografa en capa fina tiene muchos usos importantes en qumica orgnica. Puede
usarse en las siguientes aplicaciones.
1.- Establecer si dos compuestos determinados son idnticos.
2.- Determinar el nmero de componentes en una mezcla.
3.- Determinar el solvente apropiado para una separacin en columna cromatogrfica.
4.- Monitorear la separacin de una columna cromatogrfica.
5.- Comprobar la efectividad de separaciones realizadas en columna, o mediante tcnicas de extraccin o
cristalizacin.
6.- Registrar el progreso de una reaccin.
En todas estas aplicaciones, la cromatografa de capa fina tiene la ventaja sobre otras tcnicas, que en
esta, se usan pequeas cantidades de material para realizar los anlisis. Con muchos de los mtodos de
visualizacin, se pueden detectar cantidades tan pequeas como 10 -7 gramos. Por otra parte, pueden
utilizarse cantidades relativamente grandes como 1 miligramo.
El uso de la cromatografa de capa fina, puede servir para establecer la identidad qumica de dos
compuestos que se sospechan son idnticos. Simplemente se aplican ambos compuestos en una misma
placa y se desarrolla en un solvente adecuado. S ambos compuestos recorren la misma distancia, es
decir tienen el mismo valor de Rf estos sern probablemente idnticos. Si en cambio, la posicin de
ambas manchas no es la misma, se puede asegurar en forma definitiva y concluyente que los dos
compuestos no son idnticos.
Es importante, aplicar ambos compuestos en la misma placa. Esta precaucin es especialmente
importante cuando se usan placas preparadas por inmersin, puesto que estos varan de uno a otro. Dos
placas preparadas de esta forma no tendrn exactamente el mismo espesor de adsorbente.
La cromatografa en capa fina, tambin encuentra aplicacin para establecer si un compuesto es una
sustancia pura o en su defecto se trata de una mezcla. Una sustancia pura produce una sola mancha sin
importar el solvente que se use para desarrollar la placa. Por otra parte, el nmero de componentes de
una mezcla puede establecerse probando varios solventes para desarrollar la mezcla.
Sin embargo, los resultados deben tomarse con cuidado, ya que a menudo resulta difcil, conseguir un
solvente adecuado que pueda separar una mezcla de compuestos con propiedades muy similares tales
como los ismeros. La falta de separacin no es prueba absoluta de que una aplicacin particular de una
muestra sea una sustancia pura.
Podernos emplear la cromatografa de capa fina para determinar el mejor solvente que podr ser usado
en la resolucin de una mezcla que ha de ser separada utilizando la tcnica de cromatografa en
columna. El proceso consiste en preparar varias placas, impregnadas con el mismo adsorbente que ser
usado en la separacin por cromatografa en columna, aplicar la solucin de la mezcla en cada una de las
placas y analizar los resultados que se obtienen al desarrollar la cromatografa de capa fina en solventes
de diferente polaridad. El solvente que proporciona una mejor resolucin en capa fina, muy
probablemente funcionar mejor en columna. Estos experimentos en pequea escala tienen la virtud de
ser rpidos, usa pequeas cantidades de material y ahorrar tiempo.
En forma similar, la tcnica de TLC, puede usarse para monitorear el progreso de una separacin por
cromatografa de columna. Una situacin hipottica se analiza en los diagramas de la figura que se
muestra a continuacin.

El anlisis preliminar por cromatografa de capa fina revela que un solvente determinado, separa la
mezcla en cuatro componentes (A-D). Por lo tanto, se usa este solvente para eluir la columna. Este
proceso conduce a la obtencin de 11 fracciones de 15 ml cada una.
El estudio detallado de las distintas fracciones por TLC muestra que las fracciones 1, 2, y 3,
contienen el componente A, las fracciones 4, 5, 6, y 7, el componente B, las fracciones 8 y 9, el
componente C y las fracciones 10 y 11, el componente D. Se observa que las fracciones 3, 4, 7 y 9 se
obtienen con una pequea contaminacin de otro componente. La fraccin 3 est contaminada o con algo
de B la 4 con A, la 7 con C y la 9 con D.
Otro ejemplo de la aplicacin de la tcnica de TLC, se encuentra en el anlisis de una mezcla producto de
una reaccin. El anlisis del producto de reaccin por TLC, produjo dos manchas, A y B. Despus de la
cristalizacin del producto, se procedi a analizar los cristales obtenidos por TLC, encontrndose que los
cristales eran puros e idnticos al componente A, mientras que las aguas madre contenan una mezcla de
A y B. Estos resultados conducen a pensar que el proceso de purificacin resulta satisfactorio para el
componente A.
Finalmente, es posible usar la tcnica de TLC para monitorear el progreso de una reaccin. A intervalos
de tiempo especficos, durante el transcurso de la reaccin, se toman muestras de la mezcla de reaccin
y se someten a anlisis por TLC. Un ejemplo se detalla en las figuras esquematizadas a continuacin:

En este caso, se desea convertir el reactante A en el producto B. Al comienzo de la reaccin (0 hr), se


prepar una placa en la cual se aplicaron los compuestos puros A y B, adems de la mezcla de reaccin.
Anlisis similares se condujeron a 0,5; 1; 2; y 3 horas despus del inicio de la reaccin. Las placas
muestran que la reaccin se completa en 2 horas: Cuando el tiempo de reaccin se prolonga por ms de
2 horas, comienza a aparecer un producto colateral nuevo C. Por lo tanto, el tiempo ptimo de reaccin
es de 2 horas.

PARTE
EXPERIMENTAL
CROMATOGRAFA DE CAPA FINA
1. INTRODUCCIN
La palabra cromatografa proviene del griego chromo (color) y graphos (escrito). La cromatografa es un
sistema analtico que permite separar los diferentes componentes de una muestra problema por
distribucin entre dos fases, una estacionaria y otra mvil, con el fin de identificarlos y/o cuantificarlos.

Fase Mvil (eluyente): Efecto de desplazamiento ejercido sobre los componentes de la mezcla
por una fase mvil, que puede ser un lquido o un gas, sobre una fase estacionaria. Cuando se
utiliza un lquido como fase mvil mediante una serie eluotrpica se escoge la mejor
combinacin de solventes miscibles para una buena separacin cromatogrfica de una muestra
en sus componentes, para lo cual se pueden emplear ter de petrleo, hexano, benceno,
tolueno, cloroformo, etc.

Fase estacionaria (adsorbente): Efecto de retencin producido sobre los componentes de la


mezcla por una fase estacionaria, que puede ser slida o lquida, anclada a un soporte slido. Si
es un lquido, puede estar distribuido en un slido, el cual puede o no contribuir al proceso de
separacin. El lquido puede tambin estar qumicamente unido al slido (Fase Ligada) o
inmovilizado sobre l (Fase Inmovilizada). Los adsorbentes ms utilizados son: slica gel (SiO 2) y
almina (Al2O3).

El fenmeno de migracin de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria,


impulsados por la fase mvil, recibe el nombre de elucin. El orden de elucin de un compuesto se
incrementa al aumentar la polaridad de la fase mvil o eluyente.
CROMATOGRAFA DE PAPEL
La cromatografa en papel es la tcnica de separacin e identificacin de sustancias qumicas mediante
un disolvente que se mueve sobre hojas o tiras de papel de filtro. Es la ms sencilla de las tcnicas, pero
slo dar resultados cualitativos. El mtodo se basa en un mecanismo de reparto, y consiste en depositar
una pequea cantidad de muestra en el extremo de una tira de papel de filtro, que se deja evaporar.
Luego se introduce la tira en una cubeta que contenga el disolvente, de manera que ste fluya por la tira
por capilaridad (fig. 1).
Figura 1. Cromatografa de papel

Fuente: OpenCoursiveWare, Cromatografa, 2011.

CROMATOGRAFA DE CAPA FINA


Es la tcnica utilizada para separar los componentes puros de una mezcla, de acuerdo con su polaridad.
Consiste, en que la fase estacionaria se encuentre sobre un plano formando una capa de partculas
slidas extendida sobre un soporte, tal como una placa de vidrio o aluminio ((Thin Layer Chromatography,
TLC), la muestra es aplicada en puntos o en banda, para posteriormente ser eluda dentro de un tanque
cromatogrfico como se ilustra en la figura 2.
Figura 2. Diagrama de una cromatografa de capa fina

Fuente: biomodel.uah.es, Cromatografa, 2008.

La cromatografa en capa fina como mtodo cualitativo y cuantitativo, siempre requiere contar con un
estndar de referencia para comparar su valor de factor de retardo (Rf) y el color de la mancha del
estndar al ser revelada con agentes qumicos, con los datos experimentales obtenidos.
Para el caso de cromatografa de papel y de capa fina se analiza el factor de retardo de la siguiente
manera:

Factor de retardo (Rf): Es un valor relativo para cada sustancia y depende de las condiciones
cromatogrficas con que se haya trabajado (fase mvil, fase estacionaria, eluyente y el tiempo
de saturacin). El valor de Rf es el coeficiente de la distancia recorrida por el compuesto (DM)
para la distancia recorrida por el disolvente (DF), se lo puede visualizar el la figura 3.
Figura 3. Representacin del factor de retardo

Fuente: Martnez, et al., Manual de prcticas de laboratorio de farmacognosia y fotoqumica,


2008.

Revelado de la placa: Se denomina revelado de placa a los mtodos empleados para la


visualizacin de los componentes no coloreados de la muestra. El revelado de las placas se
puede realizar mediante dos mtodos: mtodo qumico (por inmersin o rociado de reactivos
colorantes como yodo); y mtodo fsico (mediante la radiacin con luz UV).

2. OBJETIVO

Aplicar cromatografa de capa fina (CCF) para muestras de analgsicos y colorantes.

3. MATERIALES Y REACTIVOS
Muestras
Cafena
Analgsicos con contenido de cafena
Rojo congo (0.1% m/v)
Rojo de fenol (0.1% m/v)
Azul de metileno (0.1% m/v)
Reactivos
Butanol
Agua
cido actico
Hexano
Materiales
Papel filtro
Tubos de ensayo
Vasos de precipitacin
Matraces erlenmeyers
Mortero y pistilo
Vidrios reloj
Pipetas
Probetas
Esptulas
Varillas de agitacin
Embudos
Tijera
Regla
4. PROCEDIMIENTO
PREPARACION DE LAS MUESTRAS
Preparar una solucin de los colorantes a una concentracin de 0.1% (5 ml).
Para los analgsicos se trituran por separado hasta obtener un polvo fino. Intentar disolver 0.2gr en 5 ml
de etanol al 95%. Filtre y conserve el filtrado para aplicar en las placas de capa fina. El patrn de cafena
se prepara disolviendo 0.1 gr de cafena en 10 ml de etanol al 95%. En caso de no disolverse, someter a
bao mara.
PREPARACIN DE LA PLACA PARA CROMATOGRAFA DE CAPA FINA
Cortar un trozo de la lmina de slica gel para CCF segn lo requerido.
Trazar una lnea con lpiz a 0,5 cm del borde inferior y a 0,5 cm del borde superior del papel.
En el borde inferior, marcar un punto con el lpiz a 0.5 cm del borde izquierdo donde se colocara la
primera siembra, la segunda siembra se la realizara a 0.5 cm de la primera aplicacin (continuar con el

mismo proceso para las dems aplicaciones), la ltima siembra se la realiza a 0.5 cm de distancia del
borde derecho de la placa.
Aplicar las diferentes muestras sobre la placa cromatogrfica en los puntos de sealados.
Colocar en un vaso de precipitacin el solvente a emplear (figura 4).
Dejar eluir y evitar que el solvente llegue a la lnea superior marcada con lpiz y con las muestras
aplicadas, retirar y dejar secar los cromatogramas.

Figura 4. Cromatografa de capa fina y preparacin de muestra

PREPARACIN DEL SOLVENTE


Preparar las soluciones que se indican en la tabla 1, un volumen de 5 ml para cubrir la base del
recipiente a emplear (que no sea mayor a 0.5 cm de altura):

Tabla 1. Relacin para mezcla de solventes


Mezcla
M1
M2

Solventes
1-Butanol:cido Actico: Agua: Hexano
Butanol : Etanol : Amoniaco
Fuente: Laboratorio de Qumica Orgnica, 2015

Relacin
4:3:5:1
2:1:2

REVELADO DE PLACAS DE CAPA FINA


Luz ultra violeta (UV)
Unas vez secos los cromatogramas que contienen el patrn de cafena y el analgsico llevar a la lmpara
de luz ultravioleta (UV). Dibujar las marcas visibles y luego tomar las respectivas mediciones para el
clculo del factor de retardo (Rf).
Yodo
Colocar dos o tres cristales de yodo en un vaso de precipitacin, introducir la placan que contiene la
cafena y el analgsico dentro del vaso de precipitacin, luego tapar con papel aluminio, llevar a una
fuente de calor (plancha de calentamiento, mechero), observar.
5. DATOS OBTENIDOS
Reportar los datos de distancias recorridas por los colorantes y los analgsicos sobre las placas de capa
fina.
6. RESULTADOS
Calcular el Rf para cada color y para los analgsicos con cada mancha observada.

Tabla 2. Datos obtenidos


Solvente

Marca

Color

Colores
separados

Distancia recorrida (cm)


Rx
Rx (solvente)
(colores/analgsicos)

Fuente:
Elaborado por:

Reportar los grficos (fotografas).


6. DISCUSIN
Discuta sobre la diferencia entre solventes empleados en la prctica, lo que sucede con los colorantes y
los analgsicos.
7. CONCLUSIONES
Concluya si se alcanzaron o no los objetivos planteados.
8. CUESTIONARIO
1. Indique la clasificacin de la cromatografa de acuerdo al estado fsico del eluyente y del
mecanismo de separacin.
2. En qu consisten las fuerzas propulsoras y las fuerzas retardantes en cromatografa?
3. Qu es el RF?
4. El valor del Rf Depende del eluyente?
5. Qu es el TR?
6. Explique las razones por las cuales unos solventes son ms polares que otros. Considerar los
solventes utilizados en la prctica.

Rf

7. Por qu se dice que la cromatografa en capa fina es un criterio parcial y no total de


identificacin?
8. Cul es la importancia y las aplicaciones de cromatografa de capa fina?
9. Qu significa que una sustancia tenga: Rf menor a 0.5, mayor a 0.5 e igual a 0.5?
10. Segn lo realizado en la prctica cul ser el resultado de los siguientes errores en
cromatografa en capa fina?
a. -Aplicacin de solucin muy concentrada
b. -Utilizar eluyente de alta polaridad
c. -Emplear gran cantidad de eluyente en la cmara de cromatografa
9. BIBLIOGRAFIA
1. Introduccin a la Cromatografa, David Abbott y R.S. Andrews, Tercera Edicin., Alhambra S.A.
Madrid., 1973.
2. Paper, Thin Layer Chromatography and Electrophoresis, A Teaching Level Manual, Smith Ivor and
Feinberg, J. G. Shandon, London, 1965.
3. Experimental Methods in Organic Chemistry, Moore, J. A.., and Dalrymple, D. L., Second Edition., W.
B. Saunders Co., Philadelphia,, 1976.
4. Introduction to Organic Laboratory Techniques. A Contemporary Approach, Second Edition.,
Pavia, Lampman y Kriz