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I;
FS Figueira
I;
GP Cerveira
I;
CC Moraes
II, *
; SJ Kalil
I, *
RESUMEN
C-ficocianina es un colorante azul natural extrado de Spirulina platensis,que tiene
muchas aplicaciones en las industrias alimentarias y farmacuticas. En este trabajo se
investig el efecto del pH y la temperatura sobre la adsorcin de C-ficocianina en dos
diferentes resinas de intercambio inico (DEAE Streamline Streamline y Q XL) para la
cromatografa de adsorcin en lecho expandido. Adems, se evaluaron la cintica y la
isoterma de adsorcin. Se alcanz el equilibrio de la matriz Q XL despus de 60
minutos, mientras que para DEAE slo se alcanza despus de 140 min. C-ficocianina
mostr el coeficiente de particin ms alta a pH 7,5 para ambas resinas a 25 C. La
isoterma de adsorcin de C-ficocianina fue muy bien representado por el Langmuir,
Freundlich y modelos de Langmuir-Freundlich, donde los valores estimados
paraQ m y Kd obtenidos por la isoterma de Langmuir fueron, respectivamente, 33,92
mg.mL -1 y 0.123 mg. ml -1para DEAE, y 28,12 mg.mL -1 y 0.082 mg.mL -1 para la
matriz Q XL. A cooperatividad negativa se observ para la unin cuando se utiliz la
matriz Q XL C-ficocianina, mientras que la cooperatividad era puramente independiente
usando la matriz de DEAE.
Palabras clave: adsorcin; C-ficocianina; Isoterma de Freundlich; Los parmetros
cinticos; Isoterma de Langmuir.
INTRODUCCIN
Los ficobiliprotenas son pigmentos fotosintticos presentes en cianobacterias,
responsables de alrededor del 50% de la luz captada por estos microorganismos
(Santiago-Santos et al., 2004). Una de las ficobiliprotenas ms interesantes para la
comida (Yoshida et al., 1996) y cosmtico (Cohen, 1986) industrias es C-ficocianina, su
aplicabilidad se basa en el hecho de que se puede utilizar como un colorante azul
natural en estos sectores como un sustituto de colorantes sintticos, que son
generalmente txicos o de otra manera insegura (Moraes et al, 2011b;.. Minkova et
al, 2003; Arad y Yaron, 1992).
MATERIAL Y MTODOS
Preparacin del extracto crudo y Cuantificacin
La Spirulina platensis cianobacteria fue cultivado y mantenido en exteriores
fotobiorreactores en condiciones no controladas en el sur de Brasil. Durante estos
cultivos, el agua fue suplementado con 20% medio sinttico Zarrouk (Costa et
al., 2000). Al final del cultivo, la biomasa se recuper por filtracin, y despus se sec,
congelado y se moli a un dimetro de partcula de entre 0,106 y 0,125 mm
(Moraes et al., 2010).
La extraccin de C-ficocianina de la biomasa se llev a cabo de acuerdo con Moraes et
al. (2010), que usa agua como disolvente extractor a una velocidad de 0,16 g: 1 ml
(biomasa en polvo: extractor disolvente). La concentracin de C-ficocianina (C - FC, la
ecuacin (1)) se calcul como se describe por Bennett y Bogorad (1973) con pocas
modificaciones en las densidades pticas.
Adsorbentes
Se estudiaron dos adsorbentes adecuados para su uso en lechos expandidos para la
adsorcin de C-ficocianina.Estos adsorbentes consistan en una matriz macroporosa de
agarosa con un ncleo de cuarzo. Uno de los adsorbentes, Streamline DEAE (GE
Healthcare) es un intercambiador aninico dbil, siendo el grupo funcional -OCH 2 CH 2 -N + (C 2 H 5) 2 H. El otro adsorbente, Streamline Q XL (GE Healthcare) es
un intercambiador aninico fuerte, con un amonio cuaternario como grupo funcional. El
rango de pH de trabajo de ambos intercambiadores es entre 2 y 13 (Amersham
Biosciences, 2002). Estas resinas pueden promover diferentes grados (2-3 veces) de
expansin del lecho.
Efecto del pH sobre el coeficiente de particin
Las pruebas se llevaron a cabo en un reactor de mezcla termosttica a 25 C, con
agitacin mecnica durante 200 min como se muestra en la Figura 1 .
En este sistema, se aadi 30 ml de extracto C-ficocianina con una concentracin de Cficocianina inicial fijo a 3 ml de resina de intercambio inico (Streamline Q XL o
Streamline DEAE) pre-equilibrada en tampn fosfato 0,025 M de sodio en el pH de la
estudio. El pH del extracto C-ficocianina se ajust a los siguientes valores de pH (5,0,
5,5, 6,0, 6,5, 7,0 y 7,5), de acuerdo con el rango donde el C-ficocianina se considera
estable (Silva et al.,2009). Un espacio en blanco se prepar para cada prueba, en la
que se aadi el C-ficocianina en el pH bajo estudio para el sistema sin la resina de
intercambio de iones. Se tomaron muestras a intervalos predeterminados de tiempo
(0, 2, 5, 7, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 60, 80, 100, 140, 180 y 200 min), el clculo de la
concentracin de C-ficocianina segn la ecuacin (1). Los experimentos se llevaron a
cabo por duplicado.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Efectos del pH en el Coeficiente de Particin
El coeficiente de particin se correlaciona la cantidad de compuesto de destino que
migra de una fase a otra. En el presente caso, el coeficiente de particin correlaciona la
cantidad de C-ficocianina presente en la fase slida, o se adsorbe sobre la resina, con
la cantidad de la misma bioproducto libre en la solucin en el equilibrio.
La Figura 2 muestra la variacin en la concentracin de C-ficocianina en la fase lquida
a los diferentes valores de pH durante el perodo de tiempo estudiado. Se puede
observar que se alcanz el equilibrio despus de 60 minutos para todos los valores de
pH estudiados usando la resina Streamline Q XL ( Figura 2b ), mientras que con la
resina DEAE Streamline ( Figura 2a ), el equilibrio se alcanza solamente despus de
140 minutos. Los ensayos llevados a cabo sin la adicin de cualquier resina mostraron
que no haba desnaturalizacin C-ficocianina durante el perodo de tiempo estudi en
cualquiera de los valores de pH de trabajo. El tiempo necesario para alcanzar el
equilibrio para la adsorcin de C-ficocianina en la resina DEAE Streamline en los
diferentes valores de pH fue muy similar a la encontrada por Silveira et al. (2008),
cuando se alcanz el equilibrio despus de 150 min para la adsorcin de C-ficocianina
en la resina de flujo rpido Q Sepharose utilizado para el lecho fijo.
La Figura 3 muestra el comportamiento del coeficiente de reparto con la variacin en el
pH para la adsorcin de C-ficocianina en las resinas DEAE Streamline Streamline y Q
XL. Los valores del coeficiente de particin ms bajos se obtuvieron en el valor ms
bajo de pH estudiado, es decir, a pH 5. La estructura de C-ficocianina incluye una parte
reparto se obtuvieron a pH 7,5 para ambas resinas y por lo tanto este pH fue elegido
para seguir trabajando.
Efecto de la temperatura sobre el coeficiente de particin
Los coeficientes de particin que se encuentran en el intervalo de temperatura
evaluados se muestran en laTabla 1 .
Analizando el modelo de Langmuir, K d es el coeficiente de disociacin del soluto complejo adsorbente, que representa la afinidad entre el soluto y los adsorbentes
(Lan et al., 2001). La evaluacin de las constantes de isoterma de Langmuir ( Tabla 2 )
se puede concluir que la matriz Q XL muestra ms afinidad para la adsorcin de Cficocianina de la matriz de DEAE. El valor de Q m para el adsorbente Q XL (28,12
0,10 mg.mL -1) fue menor que para el adsorbente DEAE (33,92 0,27 mg.mL -1), lo que
probablemente se deba a que otros compuestos cargados negativamente vinculados a
primera el grupo funcional antes de C-ficocianina.
Silveira et al. (2008) estudiaron la adsorcin de la C-ficocianina de Spirulina
platensis sobre la resina de intercambio de iones Q Sepharose Fast Flow en un lecho
fijo y los valores obtenidos para Q y m K d de 22,67 mg.mL -1 y 0.031 mg.mL 1,
respectivamente. Los valores de Q m del mismo apoyo y la orientacin de producto Streamline DEAE y C-ficocianina, respectivamente - para diferentes cianobacterias son
variables y valores para Q m de 0,8 mg.mL -1, 1.6 (Bermejo et al., 2006) mg.mL 1
(Bermejo y Ramos, 2012), 1,74 mg.mL-1 (Ramos et al., 2010) y el 5,2 mg.mL 1
(Ramos et al., 2011) se puede encontrar en la literatura. As, la resina DEAE
Streamline mostr mximo de adsorcin 7 veces mayor que el valor mximo
Langmuir tambin se utiliz para las isotermas de adsorcin llevadas a cabo en varios
tipos de resinas de intercambio inico para diferentes protenas de inters, tales como
la adsorcin de cido clavulnico en Amberlite IRA (Barboza et al., 2002) o de
amiloglucosidasa sobre celulosa DEAE ( Manera et al., 2008). Bresolin et al. (2011)
utilizaron el modelo de Langmuir para la cromatografa negativa por geles de agarosa
con ligandos basados en aminas inmovilizado (poli-L-lisina) para adsorbida albmina de
suero humano y el modelo de Langmuir-Freundlich para describir la isoterma de
adsorcin de inmunoglobulina G en el mismo adsorbente.
No se encontraron estudios que determinaron las isotermas en una matriz Q XL, a
excepcin de uno que estudi el uso de esta matriz para la adsorcin de C-ficocianina
por EBIEC de un extracto crudo en presencia de las clulas (Moraes et al., 2011a) .
La eleccin apropiada entre las dos resinas (Streamline DEAE o Streamline Q XL) para
la adsorcin de C-ficocianina usando la cromatografa de lecho expandido depender
del tiempo de equilibrio necesario, la selectividad adsorbente, el costo y re-uso de la
matriz y otros factores que deben ser evaluados. En este caso, los prximos pasos de
este trabajo evaluar la reutilizacin de estas resinas.
AGRADECIMIENTOS
Este trabajo fue apoyado por la Coordinacin de Perfeccionamiento de Personal de
Nivel Superior - CAPES, el e Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico
Tecnolgico - CNPq y la Fundao de Amparo Pesquisa do Estado do Rio Grande do
Sul - FAPERGS.
NOMENCLATURA
Referencias
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Enviado: 10 de diciembre 2012
Revisado: 28 de agosto 2013
Aceptado: 30 de enero 2014