Artigo

Quim. Nova, Vol. 24, No. 1, 13-17, 2001.

CARACTERIZAO DE QUITOSANA POR CROMATOGRAFIA DE PERMEAO EM GEL
INFLUNCIA DO MTODO DE PREPARAO E DO SOLVENTE
Kathya Ma Nilza de Carvalho Canella e Rosangela Balaban Garcia
Departamento de Qumica, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, CP 1662, 59072-970 Natal - RN
Recebido em 13/9/99; aceito em 9/8/00

CHARACTERIZATION OF CHITOSAN BY GEL PERMEATION CHROMATOGRAPHY INFLUENCE OF PREPARATION METHOD AND SOLVENT. In this work, samples of chitosan obtained in
different conditions were characterized by molecular weight distribution, using Gel Permeation Chromatography (GPC), in two different solvents. It was observed that the increase in the number of
deacetylation steps promotes a increase in the degree of deacetylation followed by a decrease in the
average of molecular weight and polydispersion. The GPC curves obtained for chitosan samples in the
two solvents used (CH 3 COOH 0.30 mol/dm 3 - CH3 CONa 0.20 mol/dm 3 and CH 3COOH 0.10 mol/dm 3
NaCl 0.20 mol/dm 3 ) showed small difference in elution volume, but significant changes in the average molecular weight (M n and M w) and polydispersion that, in agree with the values of Huggins constant, present evidences of chitosan aggregates formation in the second solvent.
Keywords: chitin; chitosan; gel permeation chromatography.

INTRODUO
Quitosana um polissacardeo derivado da quitina (copolmero
de -(14)-D-glucosamina e -(14)-N-acetil-D-glucosamina),
que encontrada em abundncia na natureza, principalmente em
carapaa de crustceos. Devido ao carter bsico, atribudo presena do grupamento amina nas unidades repetidas, e sua
biodegradabilidade, esses dois polmeros vem despertando bastante interesse de cientistas e tecnlogos, que tm descoberto diversas aplicaes, especialmente na rea biomdica1-3.
As propriedades fsicas e qumicas da quitina e de seus derivados N-desacetilados (quitosana) so muito diferentes.
Quitosana comercial possui, geralmente, grau de desacetilao
(G.D.) variando de 70 a 95%, com massa molar na faixa de
104-106 g.mol-1. Como muitas das propriedades destes polissacardeos esto intimamente relacionadas a estes dois parmetros4,5,
torna-se imprescindvel a determinao dos mesmos. Deste modo,
o conhecimento preciso do teor de grupos N-desacetilados (G.D.)
e, conseqentemente, de grupos NH2 importante, de maneira a
caracterizar qualquer processo de desacetilao da quitina, assim
como qualquer outra modificao qumica6-8.
Usualmente, a quitosana preparada utilizando-se solues
extremamente concentradas de hidrxido de sdio 40 a 50%,
o que costuma promover reaes de degradao do polmero.
Esta reao de hidrlise pode remover alguns ou todos os grupos acetila da quitina, liberando grupos amino que impem a
natureza catinica da quitosana resultante, que consiste de uma
mistura de polmeros de diferentes tamanhos9,10. A distribuio de massa molar, ou seja, a polidisperso (PD), influenciada por vrios parmetros, tais como: tempo, temperatura,
concentrao e condies atmosfricas empregadas na reao
de N-desacetilao. Assim, amostras de quitosanas podem ter
caractersticas diferentes quanto ao G.D., viscosidade e distribuio de massa molar, que iro influenciar na performance
final do polmero11. Alguns estudos foram conduzidos de forma a observar a influncia de modificaes das condies
reacionais, tais como temperatura 5,11-13 , concentrao da
base13,14 e nmero de etapas de reao5,11,14 na obteno de
quitosana de baixo grau de acetilao. A reao inversa
acetilao tem sido usada para obteno de amostras de
quitosana com grau de acetilao em torno de 50%, que apresentam solubilidade em gua15.

Na presena de solues aquosas diludas de cidos, a

quitosana comporta-se como polieletrlito, causando o surgimento de interaes repulsivas eletrostticas entre os grupos
amino ionizados ao longo da cadeia polimrica16-18. Assim,
para caracterizar o comportamento desse polmero em soluo,
importante selecionar o sistema de solvente mais apropriado,
de forma a eliminar os efeitos inicos17. A influncia da polaridade do solvente, que , tambm, utilizado como fase mvel
na determinao da massa molar mdia atravs de Cromatografia de Permeao em Gel (GPC), tem sido discutida. A
polaridade deve ser suficientemente alta para: (1) eliminar
interaes eletrostticas entre o polieletrlito e a fase estacionria, evitando os efeitos de excluso e incluso inica, troca
inica e adsoro; e (2) reduzir ao mximo as repulses
eletrostticas intermoleculares estabilizando o volume
hidrodinmico do polmero19. Recentemente, tem sido discutido tambm o efeito da natureza qumica dos padres de
calibrao sobre a determinao de massa molar por GPC. No
caso da quitosana, alguns trabalhos mostram que os melhores
resultados so obtidos atravs do uso de padres de calibrao
tambm de quitosana20. Entretanto, a maior dificuldade surge
pela inexistncia de amostras comerciais desses padres.
Neste trabalho, o processo de desacetilao da quitina foi
estudado utilizando algumas condies usuais de reao, tais
como concentrao do hidrxido de sdio 50% a 120C, mas
introduzindo algumas alteraes, como a reao em trs etapas
sucessivas, para tentar evitar a degradao excessiva do
polmero. Dois sistemas de solventes j conhecidos e utilizados na literatura16,17,21,22 para a caracterizao em soluo de
quitosana foram utilizados em anlise por GPC, com a finalidade de observar a influncia da polaridade destes solventes
nas determinaes de massa molar e polidisperso.
PARTE EXPERIMENTAL
Materiais
Obteno da quitina
A quitina pode ser obtida a partir de uma variedade de animais marinhos, insetos e fungos, constituindo 1,4% do peso de
insetos. As cascas de crustceos contm 15 a 20% de quitina,

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25 a 40% de protenas e 40 a 55% de carbonato de clcio23. Em

crustceos, a quitina encontra-se firmemente associada aos demais constituintes do exoesqueleto. Portanto, para se isolar esse
polissacardeo, trs etapas so requeridas: desmineralizao (Etapa 1), desproteinao (Etapa 2) e despigmentao (Etapa 3).
Inicialmente, as cascas de camaro foram secas ao sol durante uma semana. Em seguida, foram modas e peneiradas. A
frao de p de dimetro mdio 0,42 mm foi a utilizada no
processo de extrao.
Etapa 1: O material peneirado foi suspenso em uma soluo
aquosa de HCl 0,10 mol/dm3. Em seguida, 1-octanol foi adicionado para diminuir o efeito do gs carbnico gerado durante
a desmineralizao, evitando-se, assim, o transbordamento do
material. A reao ocorreu por 3 h, sob agitao constante e
temperatura ambiente. O material obtido foi filtrado e lavado
diversas vezes com gua destilada.
Etapa 2: A extrao dos componentes proticos, ligados
covalentemente matriz polimrica, foi feita atravs do tratamento com uma soluo aquosa de NaOH 3%, com agitao
constante, 70C, durante 3 h. O material desproteinado foi
filtrado e lavado com gua destilada at a neutralidade.
Etapa 3: O produto da Etapa 2 foi colocado em suspenso
em soluo de NaOCl contendo 3% de cloro ativo, por 2 h.
Nesta fase, foram removidos os pigmentos contidos na matriz
polimrica. Obteve-se uma quitina de aspecto flocular e insolvel na maioria dos solventes orgnicos.
Obteno da quitosana
Amostras de quitosana, com diferentes quantidades de grupos N-desacetilados, foram obtidas atravs de dois mtodos,
como descritos a seguir:
Mtodo 1
A quitina foi dispersa em soluo aquosa de NaOH 50%,
contendo dodecil-sulfato de sdio (SDS) a 10% e boroidreto
de sdio (NaBH 4) a 1%. A reao de N-desacetilao foi
conduzida sob agitao constante e temperatura de 120C
por 4,5 h. Cinco amostras (Q-1 a Q-5) foram retiradas em
intervalos de 55 minutos. A reao foi interrompida por
resfriamento e diluio do meio reacional com gua destilada
at pH neutro.
Mtodo 2
A reao de desacetilao da quitina foi realizada em trs
etapas, designadas A, B e C.
Etapa A: A quitina foi dispersa em soluo aquosa de NaOH
50%, contendo dodecil-sulfato de sdio (SDS) a 10% e
boroidreto de sdio (NaBH4) a 1%, em atmosfera inerte de
nitrognio. A reao de N-desacetilao foi conduzida sob
agitao constante e temperatura de 120C por 1 h. Ao final
deste tempo, o meio reacional foi resfriado e neutralizado com
gua destilada.
Etapa B: O material obtido na etapa A foi submetido a nova
reao de N-desacetilao, por um perodo de 1 h.
Etapa C: O produto da etapa B foi novamente exposto a
reao de N-desacetilao, desta vez por 2,5 h.
Um total de 10 amostras (C-1 a C-10) foram retiradas ao
longo da etapa C, em intervalos de 15 minutos.
Purificao das Amostras
As amostras de quitosana foram dissolvidas em cido
actico 0,05 mol/dm3 sob agitao constante por uma noite.
As solues foram filtradas em funil de vidro sinterizado n.3 e
membranas de acetato de celulose millipore, de tamanho de
poro 3, 1.2, 0.8 e 0.45m e, em seguida, neutralizadas com

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NaOH 10% at pH8,5. O polmero precipitado foi lavado

exaustivamente com gua destilada at se obter condutividade
20mS. Em seguida, foram feitas lavagens com misturas de
gua-etanol nas propores 30/70, 20/80, 10/90 e 0/100 v/v.
As amostras foram colocadas em vidro de relgio e a secagem
foi feita sob presso reduzida.
Mtodos Analticos
Infravermelho
Pastilhas de KBr de quitina e filmes das diversas amostras
de quitosana foram analisados em espectrofotmetro FTIR
MIDAC-Prospect.
Preparao dos filmes: As amostras de quitosana com tempos diferentes de N-desacetilao foram dissolvidas em soluo aquosa de cido actico 2%. As solues de polmero a
1% foram filtradas e, ento, tranferidas para placas de Petri. A
evaporao do solvente foi feita em cmara termostatizada a
45C, durante aproximadamente 20 h. Para neutralizao, os
filmes foram imersos em soluo aquosa de NaOH 5%, por 16
h. O excesso de NaOH foi removido por sucessivas lavagens
com gua destilada.
O grau de N-acetil das amostras de quitosana foi determinado por Infravermelho atravs do mtodo proposto por Moore
e Roberts24. Este mtodo envolve o uso da banda de amida I,
a 1655 cm-1, e da banda de hidroxila a 3450 cm-1. A porcentagem dos grupos amino-acetilados (% N-acetil) foi determinada pela Equao 1.
% N-acetil = (A1655 / A3450).100/1,33

(1)

onde:
A1655= Absorbncia a 1655 cm-1
A3450= Absorbncia a 3450 cm-1
1,33= constante que representa a razo A1655/A 3450 para
amostras de quitina completamente N-acetiladas.
Ressonncia Magntica Nuclear de Hidrognio
A quantificao dos grupamentos acetila foi tambm realizada atravs de RMN- 1H, em espectrofotmetro BRUKER
300MHz, a 80C, a partir da solubilizao de 10mg de
quitosana em 1,0cm3 de D2O contendo pequena quantidade de
HCl. O grau de N-acetil foi determinado pela relao entre as
reas abaixo dos sinais que correspondem aos hidrognios dos
resduos de glucosamina (=4,5ppm) e do CH3 (=1,95ppm)
do grupo amida12,14.
Cromatografia de Permeao em Gel
Foi utilizado um cromatgrafo lquido de alta eficincia,
marca VARIAN 9002-SDS, equipado com injetor Rheodyne,
modelo 7125, detector de ndice de refrao - modelo Star 9040,
integrador VARIAN 4400, e coluna TSK-GEL GMPWXL,
300x7,8mm ID. O volume injetado foi sempre 50L e velocidade de fluxo de 0,5 cm3/min.
A curva de calibrao foi preparada a partir de amostras
monodispersas de dextrana, DXT6K, DXT27K, DXT97K,
DXT165K e DXT5000K, de massa molar ponderal mdia (Mw):
5700, 27000, 97000, 165500 e 4900000, respectivamente. As
solues dos padres e das amostras de quitosana foram preparadas concentrao de 1mg/cm3, utilizando como solvente dois
sistemas aquosos: CH3COOH 0,10mol/dm3 - NaCl 0,20mol/dm3
e CH3COOH 0,30mol/dm3 - CH3COONa 0,20mol/dm3, que foram utilizados, tambm, como eluentes. Todas as solues foram filtrados em membranas de acetato de celulose de tamanho
de poro 0,22 m antes da injeo. A curva de calibrao para
cada eluente foi construda atravs do grfico de Log Mw versus
o volume eludo (Ve) para os padres de dextranas.

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Caracterizao de Quitosana por Cromatografia de Permeao em Gel

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Viscosimetria
As medidas viscosimtricas das amostras de quitosana foram realizadas em um remetro digital Brookfield, modelo DVIII, acoplado a um banho termosttico de circulao de gua
FANEM, modelo 111, a uma temperatura de 25,0 0,1C e
utilizando o sensor de viscosidade cone-placa CP40. Para estas
anlises, foram preparadas solues diludas dos polissacardeos, utilizando como solvente o sistema aquoso - CH3COOH
0,10mol/dm3-NaCl 0,20mol/dm3. As solues foram filtradas
atravs de membranas de acetato de celulose de tamanho de
poro 0,45m antes das determinaes de viscosidade, realizadas s mais baixas velocidades de cisalhamento permitidas
dentro do erro experimental e no plat newtoniano. A viscosidade intrnseca, [], foi determinada pela extrapolao dos
dados de viscosidade diluio infinita, de acordo com a
Equao de Huggins25. A massa molar viscosimtrica mdia,
Mv, foi determinada atravs da Equao de Mark-HouwinkSakurada, [] = K.M v a , onde as constantes referentes ao
solvente utilizado so: K=1,8x10-3 e a=0,9321,22.
RESULTADOS E DISCUSSO
O espectro de absoro no Infravermelho da quitina, mostrado na Figura 1, apresenta bandas de absoro caractersticas
da amida, nas regies de 1655 cm-1 - estiramento C=O - conhecida como banda de amida I; 1561 cm-1 - deformao N-H
- banda de amida II e 1315 cm-1 - atribuda deformao CONH e ao grupo CH2, que acontecem mesma frequncia. Essa
ltima banda tem sido denominada banda de amida III, devido
deformao do grupo CO-NH26,27. A banda aguda a 1377
cm-1 atribuda deformao simtrica do CH3. A banda em
3272 cm-1 atribuda vibrao de estiramento N-H, e a observada a 3463 cm-1 ao estiramento O-H.

Figura 1. Espectro de absoro no Infravermelho da quitina.

A tcnica de espectroscopia no IV til para comprovar a

hidrlise dos grupamentos acetila da estrutura da quitina, atravs da reduo da banda de estiramento da carbonila da amida.
A Figura 2 mostra a evoluo das bandas a 1655 cm-1 (amida I)
e a 1590 cm-1 (deformao N-H de aminas) de cinco amostras
de quitosana obtidas durante a etapa C (Mtodo 2). Nesta etapa,
dez amostras foram coletadas de 15 em 15 minutos, como descrito anteriormente. Entretanto, dessas dez amostras apenas as
cinco ltimas, denominadas C-6, C-7, C-8, C-9 e C-10, apresentaram boa solubilidade em soluo aquosa de cido actico e,
por isso, foram as selecionadas para estudo. Como se pode observar, a banda a 1655 cm-1 decresce na mesma proporo em
que a banda a 1590 cm-1 cresce, indicando assim que o material
formado foi aumentando o seu grau de desacetilao.

Figura 2. Evoluo do grau de desacetilao atravs das bandas de

absoro da quitosana. (A) C-6, (B) C-7, (C) C-8, (D) C-9 e (E) C-10.

As tcnicas utilizadas para a determinao do G.D.

(Infravermelho e RMN 1H) apresentaram resultados concordantes entre si, como mostra a Tabela 1. A principal vantagem
da utilizao do Infravermelho a facilidade de obteno da
anlise, que pode ser feita sob a forma de filme ou pastilha de
KBr. Alguns trabalhos28 mostram que insignificante o efeito
da gua adsorvida no polmero sobre a intensidade da banda
de estiramento O-H a 3463cm-1. Entretanto, a absoro atribuda deformao de gua a 1640 cm-1 pode interferir na resoluo das bandas de amida I e II, dificultando a determinao
da absorbncia a 1655 cm-1. A escolha adequada da linha base
tambm fundamental29. Uma outra dificuldade ainda detectada a altos graus de desacetilao, onde a banda de amida I
pode ser mascarada pela banda de NH24,29. Essas incertezas
no ocorrem nas determinaes do G.D. por RMN. Podese
considerar que os resultados equivalentes obtidos para as duas
tcnicas neste trabalho deve-se faixa de G.D. das amostras
estudadas, que no alcana valores prximos de 100%.
A tabela 1 apresenta a evoluo da solubilidade e da porcentagem de grupos desacetilados na quitosana, com o aumento do tempo de desacetilao atravs dos dois mtodos utilizados. Observa-se que a solubilidade total da quitosana em
CH3COOH 2%, detectada pela transparncia das solues e
pela ausncia de material insolvel aps centrifugao, ocorreu no Mtodo 1 desde 55 minutos de reao, a um G.D. 81%.
Entretanto, no Mtodo 2, a solubilidade total do polmero s
foi observada a 210 minutos de reao, a um valor de G.D.
semelhante ao caso anterior (82%).
De um modo geral, existe uma tendncia a se obter porcentagem de NH2 em torno de 70% na primeira hora de reao,
quando a reao ocorre entre 100 e 120C e em concentrao
de NaOH de 40 a 50% e, a partir da, o aumento da
desacetilao observada lento e pequeno, chegando ao mximo de 80% em 4-5 h5,12.
As principais diferenas entre os mtodos 1 e 2 so a atmosfera inerte e a reao em trs etapas, ambos utilizados no
mtodo 2, que no seriam suficientes para justificar a menor
solubilidade das amostras obtidas por este mtodo. Seria esperado que em 55-60 minutos de reao, atravs dos dois mtodos, se obtivesse quitosana j solvel em CH3COOH 2%. Ao
final da segunda etapa de desacetilao do Mtodo 2 (Etapa Btempo total de reao 120 minutos), o polmero apresentou-se
parcialmente solvel. Entretanto, ao se determinar o G.D. da

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Tabela 1. Evoluo do grau de desacetilao e solubilidade da

quitosana com o tempo de desacetilao.
G.D.
(%)

Mtodo 1

Tempo de Solubilidade em
reao(min) CH3COOH 2%

Quitina
Q-1
Q-2
Q-3
Q-4
Q-5

0
55
110
165
220
275

Insolvel
solvel
solvel
solvel
solvel
solvel

6,2 a
81 / 80,3b
82 a
82,8a
83 a
87a,b

Mtodo 2

Amostra

Etapa A
Etapa B
C-1
C-2
C-3
C-4
C-5
C-6
C-7
C-8
C-9
C-10

60
120
135
150
165
180
195
210
225
240
255
270

Insolvel
Parcial
Parcial
Parcial
Parcial
Parcial
Parcial
Solvel
Solvel
Solvel
Solvel
Solvel

n.d.
85b(frao sol.)
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
78,6a
81,5a
87,5a
88,5a
90,3b
91,8b

princpio, sugere que a polaridade dos dois solventes apresenta

efeitos equivalentes de estabilizao dimensional da cadeia
polimrica. Entretanto, uma anlise mais criteriosa das curvas
cromatogrficas, atravs da determinao das massas molares
mdias, Mn e Mw, e polidisperso (Tabela 2), sugere que os dois
solventes, de fato, apresentam qualidades diferentes. Pode-se
observar que todas as amostras de quitosana apresentaram massa molar mdia (Mn e Mw) maiores ao se usar o solvente 2
(CH3COOH 0,10mol/dm3 - NaCl 0,20mol/dm3). Esse efeito foi
ainda mais pronunciado sobre Mw. Resultados semelhantes foram obtidos por viscosimetria31. Alm disso, a polidisperso
(PD) para as amostras nesse solvente tambm foram sensivelmente maiores. Esses resultados podem ser explicados pela formao de agregados moleculares, que do origem a valores de
Mn, Mw e PD superestimados. A maior influncia sobre Mw se
explica pela sua grande sensibilidade s molculas maiores
(Mw = NiMi2/NiMi, onde Ni= n de molculas de massa molar
Mi). A formao de agregados de quitosana no solvente 2 tambm foi constatada por medidas de espalhamento de luz17.

determinado por Infravermelho; b determinado por RMN;

n.d = no determinado.

Figura 4. Curvas GPC para as amostras de quitosana, utilizando

como solvente: (a) CH 3COOH 0,30 mol/dm3 - CH3COONa 0,20 mol/
dm3 e (b) CH 3COOH 0,10 mol/dm3 NaCl 0,20 mol/dm3.

Tabela 2. Massas molares mdias (Mn e Mw) e polidisperso

(PD) para a quitosana em CH3COOH 0,10 mol/dm3 NaCl
0,20 mol/dm3 e CH3COOH 0,30 mol/dm3 - CH3COONa 0,20
mol/dm3.
Amostra

frao solvel, obteve-se o valor de 85%. Isso pode significar

que a insolubilidade das amostras inicialmente obtidas por este
mtodo seja devida, principalmente, desacetilao no-homognea ao longo da cadeia polimrica. J foi verificado que
nos casos em que os grupos N-acetil encontram-se distribudos
no esqueleto polimrico de forma aleatria, a quitosana passa
apresentar solubilidade a partir de G.D.= 50%30.
Ainda na Tabela 1, comparando-se os valores de G.D. obtidos para Q-5 e C-10, pode-se concluir que, de fato, a
quitosana obtida atravs da reao de desacetilao em 3 etapas apresentou maior G.D. (92%) do que a obtida em apenas
uma etapa (87%).
A Figura 3 apresenta os cromatogramas dos padres de
dextrana utilizados neste trabalho. As curvas mostradas representam, simultaneamente, os resultados obtidos para os dois solventes
estudados (CH3COOH 0,10mol/dm3 - NaCl 0,20mol/dm3 e
CH3COOH 0,30mol/dm3 - CH3COONa 0,20mol/dm3), ou seja,
para todos os padres, observou-se coincidncia das curvas. Isso
significa que no houve influncia da diferena de polaridade dos
dois solventes sobre o volume de eluio dos padres.

Q-1
Q-2
C-7
C-8
C-10
Figura 3. Curvas de GPC para padres de dextrana. A: DXT5000KMw=4,9x106; B: DXT165K- Mw=1,65x105; C: DXT97K- Mw=9,7x105;
D: DXT27K- M w=2,7x104; E: DXT6K- M w=5,7x103.

A Figura 4 mostra as curvas cromatogrficas para as amostras de quitosana dissolvidas em CH3COOH 0,30mol/dm3 CH3COONa 0,20mol/dm3 (Figura 4a) e em CH3COOH 0,10mol/
dm3 - NaCl 0,20mol/dm3 (Figura 4b). As amostras Q-1 e Q-2
apresentaram volumes de eluio menores que as amostras C-7,
C-8 e C-10 nos dois solventes usados, isso significa maior massa
molar mdia para as primeiras amostras. Alm disso, em mdia,
no foram observadas diferenas significativas entre os volumes
de eluio de cada amostra nos dois solventes, o que, em

Solvente 1a
Mn.10 -5 M w.10 -6
4,41
5,15
1,83
1,60
1,54

2,01
2,00
0,587
0,545
0,342

Solvente 2b
PD

M n.10-5

Mw.10-6

PD

4,5
3,9
3,2
3,4
2,2

5,38
5,19
2,73
2,31
2,09

4,07
2,61
1,23
0,998
0,709

7,5
5,0
4,5
4,3
3,4

CH 3 COOH 0,30 mol/dm 3 CH 3COONa 0,20 mol/dm 3 ;

CH3COOH 0,10mol/dm3 NaCl 0,20 mol/dm3.

Como j foi comentado acima, as amostras Q-1 e Q-2, obtidas pelo mtodo 1, apresentaram massas molares maiores que
as amostras C-7, C-8 e C-10, obtidas pelo mtodo 2. Esse
resultado est relacionado ao tempo maior de desacetilao para
as amostras C-7, C-8 e C-10, provocando hidrlise do
polissacardeo, apesar da atmosfera inerte utilizada. Por outro
lado, as amostras C-7, C-8 e C-10 apresentaram menores valores de polidisperso, o que pode ser explicado pelo
fracionamento ocasionado pelas trs etapas desse mtodo.

Vol. 24, No. 1

Caracterizao de Quitosana por Cromatografia de Permeao em Gel

A Tabela 3 apresenta os dados de viscosidade intrnseca,

massa molar viscosimtrica mdia e constante de Huggins, determinados para as amostras de quitosana dissolvidas em
CH3COOH 0,10mol/dm3 - NaCl 0,20mol/dm3. As amostras obtidas pelo mtodo 1 apresentaram maiores valor de [] e Mv
que as obtidas pelo mtodo 2, concordando com os resultados
de GPC. Os valores da constante de Huggins (k), determinados
pela equao red.=[] + k[]2c (onde red.= viscosidade reduzida, [] = viscosidade intrnseca e c= concentrao do
polmero), variaram de 0,3 a 1,4, apresentando uma tendncia a
valores maiores que 0,5. De um modo geral, solues obtidas a
partir de bons solventes para os polmeros, apresentam valores
de k no intervalo de 0,3-0,532,33. Assim, pode-se considerar
que esses valores de k esto de acordo com as evidncias de
formao de agregados observadas nos resultados de GPC.
Tabela 3. Viscosidade intrnseca, massa molar viscosimtrica
mdia e constante de Huggins para quitosana dissolvida em
CH3COOH 0,10 mol/dm3 NaCl 0,20 mol/dm3.
[] (cm3/g)

M v.10-5

Q-2
Q-3

519,1
456,6

7,42
6,47

0,971
1,369

C-7
C-8
C-9
C-10

195,4
187,7
181,4
173,0

2,59
2,48
2,38
2,26

0,317
0,546
0,511
0,565

Amostra

CONCLUSES
Observou-se que o processo de desacetilao da quitina realizado em meio heterogneo pode provocar uma distribuio
no aleatria dos grupos N-acetil ao longo da cadeia
polimrica, fazendo com que algumas amostras apresentem
solubilidade parcial em solues aquosas de cido actico,
apesar destas j terem alcanado um grau de desacetilao
mdio maior que 50%. Embora a desacetilao feita em mais
de uma etapa (mtodo 2) promova um aumento do G.D., a
reduo da massa molar mdia no pode ser evitada, quando
se utiliza uma concentrao de 50% NaOH. Entretanto, essas
amostras de menor massa molar apresentaram PD menor, provavelmente devido ao fracionamento ocorrido durante o processo. Isso significa que a desacetilao em mltiplas etapas
realizadas em solues alcalinas to concentradas quanto 50%
NaOH no aconselhvel quando se deseja minimizar a degradao do polmero. Quando a desacetilao da quitina realizada em mais de uma etapa, as lavagens intermedirias facilitam a etapa subseqente de desacetilao, promovendo um aumento do G.D., mesmo que as reaes sejam realizadas em
meio heterogneo. Entretanto, em solues concentradas de
NaOH, a hidrlise do polissacardeo tambm facilitada.
O solvente CH3COOH 0,10mol/dm3 - NaCl 0,20mol/dm3
apresentou indcios de m solubilizao, com formao de agregados, o que foi evidenciado pelos altos valores de k e PD,
indicando que esse solvente no possui polaridade suficientemente alta para eliminar os efeitos de interao entre as cadeias do polmero.
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem ao CNPq, RHAE e PPPg-UFRN pelo
apoio financeiro recebido, e Professora M. Rinaudo
(CERMAV-CNRS) pelas anlises de RMN.

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REFERNCIAS
1. Hirano, S.; Seino, H.; Akiyama, Y. e Nonaka, I. In
Progress in Biomedical Polymers, 1990; p.283.
2. Chandy, T.; Sharma, C. P.; Biomater., Artif. Cells, Artif.
Organs 1990, 18, 1.
3. Singh, D. K.; Ray, A. R.; J. Appl. Polym. Sci. 1994, 53, 1115.
4. Domard, A.; Int. J. Biol. Macromol. 1987, 9, 333.
5. Mima, S.; Miya, M.; Iwamoto, R.; Yoshikama, S.; J.
Appl. Polym. Sci. 1983, 28, 1909.
6. Davies, D. H.; Hayes, E. R.; Methods in Enzymology
1988, 161, 442.
7. Rinaudo, M.; Domard, A.; In Chitin and Chitosan; Brine,
C. J.; Stanford, P.A.; Zikakis, J. P., Ed.; Elsevier Applied
Sciences; London, 1989, p 71.
8. Sannan, T., Kurita, K.; Iwakura, Y.; Makromol. Chem.
1976, 177, 3589.
9. Ottfy, M. H.; Vrum, K. M.; Christensen, B. E.; Anthonsen,
M. W.; Smidsrfd, O.; Carbohydr. Polym. 1996, 31, 253.
10. Yomota, C.; Miyazaki, T.; Okada, S.; Colloidal Polym.
Sci. 1993, 271, 76.
11. Chen, R. H.; Hwa, H-D.; Carbohydr. Polym. 1996, 29, 353.
12. Focher, B.; Beltrame, P. L.; Naggi, A.; Torri, G.;
Carbohydr. Polym. 1990, 12, 405.
13. Chen, R. H.; Lin, J. H.; Yang, M. H.; Carbohydr. Polym.
1994, 24, 41.
14. Dung, P. L.; Milas, M.; Rinaudo, M.; Desbrires, J.;
Carbohydr. Polym. 1994, 24, 209.
15. Kubota, N.; Eguchi, Y.; Polym. J. 1997, 29, 123.
16. Wang, W.; Bo, S.; li, S.; Qin, W.; Int. J. Biol. Macromol.
1991, 13, 281.
17. Rinaudo, M.; Milas, M.; Dung, P. L.; Int. J. Biol.
Macromol. 1993, 15, 281.
18. Domard, A. In Advances in Chitin Science; vol. II;
Proceedings of the Seventh International Conference on
Chitin Chitosan and Euchis97; Domard, A.; Roberts, G.
A. F.; Vrum, K. M., Ed; Jacques Andre Publisher; Lyon,
1997; p 410.
19. Barth, H. G.; Regnier, F. E.; J. Chromatogr. 1980, 192, 275.
20. Tsaih, M. L.; Chen, R. H.; J. Appl. Polym. Sci. 1999,
71, 1905.
21. Maghami, G. G.; Roberts, G. A. F.; Makromol. Chem.
1988, 189, 195.
22. Wang, W.; Qin, W.; Bo, S.; Makromol. Chem., Rapid.
Commun. 1991, 12, 559.
23. Mathur, N. K.; Narang, C. K.; J. Chem. Educ. 1990, 11, 939.
24. Moore, G. K.; Roberts, G. A. F.; Int. J. Biol. Macromol.
1980, 2, 115.
25. Huggins, M. L.; J. Am. Chem. Soc. 1942, 64, 2716.
26. Pearson, F. G.; Marchessault, R. H.; Liang, C. Y.; J.
Polym. Sci. 1960, XLII, 101.
27. Sannan, T.; Kurita, K.; Ogura, K.; Iwakura, Y.; Polymer.
1978, 19, 458.
28. Domszy, J. G.; Roberts, G. .A. F.; Makromol Chem. 1985,
186, 1671.
29. Baxter, A.; Dillon, M.; Taylor, K. D. A.; Roberts, G. A.
F.; Int. J. Biol.Macromol. 1992, 14, 166.
30. Nishi, M.; Noguchi, J.; Tokura, S.; Shiota, H.; Polym. J.
1979, 11, 27.
31. Signini, R.; Filho, S. P. C.; Polmeros: Cinc. Tecnol.
1988, Out/Dez, 63.
32. Tanford, C.; In Phys. Chem. Macromol.; Ed. John Wiley
& Sons; New York, 1961, p 392.
33. Trived, H. C.; Patel, R. D.; Die Angew. Makromol. Chem.
1986, 141, 11.