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Cu+
Cu2O + H2O
Vermelho ou
amarelo
Mas o Cu++ tambm reage com o meio alcalino:
quente
Cu++
alcalino
Cu (OH)2
alcalino
CuO
preto
Para evitar que esta reao mascare o teste de presena de glicdio redutor, o on Cu++
mantido em soluo alcalina sob a forma de complexo. H vrios reagentes base de Cu++,
(como Fehling , Benedict) que diferem em relao ao solubilizador, ao alcalinizante ou ao
reagente para o Cu++ formado.
Reativo de Benedict. (Contm citrato de sdio, carbonato de sdio anidro e sulfato de cobre).
Reao de Benedict
Preparar a seguinte srie de tubos, contendo:
Tubo A 1 mL de gua destilada
Tubo B 1 mL de soluo de glicose 1%
Tubo C 1 mL de soluo de frutose 1%
Tubo D 1 mL de soluo de amido 1%
Acrescente a cada um deles 1 mL do reagente de Benedict. Aquecer 3 minutos, em banho-maria
fervente. Observar. Explicar.
DIFERENCIAO ENTRE ALDOSES E CETOSES
Reao de Seliwanoff - O reagente de Seliwanoff contm resorcinol diludo em cido clordrico.
Este teste permite diferenciar aldoses e cetoses, que sob a ao desidratante do cido clordrico
so transformadas em derivados de furfural, que se condensam com o resorcinol formando um
composto. A reao com cetose rpida e mais intensa pela facilidade de formao do derivado
furfural. A sacarose d reao positiva: Explicar este fato.
Preparar os seguintes tubos de ensaio:
Tubo A 3 mLde Seliwanoff + 5 gotas de gua destilada
Tubo B 3 mL de Seliwanoff + 5 gotas de soluo de frutose 1%
Tubo C 3 mL de Seliwanoff + 5 gotas de soluo de glicose 1%
Tubo D 3 mL de Seliwanoff + 5 gotas de soluo de sacarose 1%
Colocar em banho-maria 100C. Observar de trs em trs minutos, durante aproximadamente 10
minutos. Explicar.
IV - HIDRLISE DE DI E POLISSACARDEOS
A sacarose um dissacardeo encontrado nas plantas (acar comum) e formada por uma
unidade de D - glicose e uma de D - frutose com uma ligao do tipo - 1,2 O-glicosdica.
O amido o material de reserva celular dos vegetais. Contm dois tipos de polmeros da glicose,
a amilose e a amilopectina. O primeiro consiste de cadeias longas, no ramificadas de unidades
de D-glicose conectadas por ligaes -1,4. A amilopectina altamente ramificada. As
ligaes glicosdicas unindo os resduos de glicose nas cadeias da amilopectina so -1,4, mas
os pontos de ramificao, so ligaes -1,6.
Hidrlise da sacarose
Preparar os seguintes tubos de ensaio:
PROPRIEDADES DA UREASE
A urease uma enzima altamente especfica para a uria. Nesta prtica utilizaremos a
urease para estudar as propriedades das enzimas como por exemplo: atividade, especificidade,
inibio, desnaturao e natureza da estrutura enzimtica.
Como j foi discutido, com exceo das enzimas de RNA ou ribozimas, todas as enzimas
so protenas. Por isso, a primeira reao a ser realizada nesta prtica ser para verificar a
estrutura protica da urease.
A - Reao da urease com o Biureto
Preparar a seguinte srie de tubos, contendo:
Tubo A 1 mL do reativo de Biureto + 3 gotas de soluo de urease
Tubo B 1 mL do reativo de Biureto + 3 gotas de gua destilada
Observar e explicar o resultado.
B - Teste da atividade
Preparar a seguinte srie de tubos, contendo:
Tubo A 1 mL do substrato (soluo de uria 0,4 M pH 7,0 contendo o indicador vermelho de
fenol) + 3 gotas da soluo de urease
Tubo B 1 mL do substrato + 3 gotas de gua destilada
Misturar levemente. Aguardar 2 min. Observar e equacionar a reao.
C - Teste da especificidade
As enzimas so especficas pelos seus substratos. Especificidade a habilidade da enzima de
discriminar entre dois substratos competidores. Para demonstrar a especificidade da urease ser
utilizadas uma substncia com estrutura similar a uria: a tiouria.
Colocar em um tubo de ensaio, 1 mL da soluo de tiouria 0,4 M pH 7,0 (contendo vermelho de
fenol como indicador) + 3 gotas da soluo de urease.
Misturar levemente. Aguardar 2 min. Observar e comparar com a reao B ( teste da
atividade). Explicar.
Desnaturao pelo calor
A maneira de demonstrar a importncia da estrutura especfica das protenas para a funo
biolgica que exercem, alterar esta estrutura e determinar o efeito que isto causa nesta funo.
Uma alterao extrema a desnaturao. Desnaturao a perda total da estrutura tridimensional
da protena.
Colocar num tubo de ensaio 1 mL de gua destilada + 3 gotas da soluo de urease. Ferver
usando a chama do bico de Bunsen, durante 2 minutos.
Adicionar em outro tubo de ensaio 1 mL da soluo do substrato (soluo de uria 0,4 M pH 7,0
contendo o indicador vermelho de fenol) e acrescentar 0,5 mL da soluo de urease fervida.
Misturar levemente. Aguardar 2 min. Observar e comparar com a reao B. Explicar
Inibio por sais de mercrio
Os grupos sulfidrilas (-SH) so essenciais para a atividade enzimtica da urease. Eles podem
manter ou talvez constituir parte do centro ativo da enzima.
Para verificar a inibio da atividade da urease pelo cloreto de mercrio, preparar a seguinte
srie de tubos, contendo:
Tubo A 3 gotas de soluo de urease + 1 mL de gua destilada
Tubo B 3 gotas de soluo de urease + 1 mL de gua destilada + 5 gotas da soluo de
cloreto de mercrio 5 %
Misturar levemente e adicionar 1 mL do substrato (sol. de uria 0,4 M pH 7,0 contendo o
indicador vermelho de fenol) a cada um dos tubos. Observar e propor uma equao para a
inibio.