BIOTECNOLOGA

I.

TITULO:
DETERMINACIN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

II.

INTRODUCCIN:
Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los mismos
comienzan a dividirse activamente empleando los nutrientes que le aporta el medio de
cultivo para "fabricar" nuevos microorganismos. Este proceso contina hasta que algn
nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato limitante) y el crecimiento se detiene.
Tambin puede detenerse el crecimiento por acumulacin de alguna substancia inhibidora
formada por los mismos microorganismos, pero supngase por ahora que ste no es el
caso y que la primera alternativa es la vlida. Luego hay dos aspectos claramente
diferenciables que hacen al crecimiento microbiano: uno estequiomtrico, por el cual la
concentracin final de microorganismos obtenidos depender de la concentracin y
composicin del medio de cultivo, y el otro cintico, el que dir con qu velocidad se lleva
a cabo el proceso
Lodo activo, La eliminacin de materia orgnica disuelta y los nutrientes de las aguas
residuales tiene lugar durante el tratamiento biolgico del agua. Normalmente se
caracteriza por la interaccin de distintos tipos de bacterias y microorganismos, que
requieren oxgeno para vivir, crecer y multiplicarse y consumen materia orgnica. El lodo
resultante llama lodo activo. Normalmente este lodo esta en forma de floculo que
contienen biomasa viva y muerta adems de partes minerales y orgnicas adsorbida y
almacenada.
El comportamiento de sedimentacin de los floculo de los lodos activos es de gran
importancia para el funcionamiento de la planta de tratamiento biolgico. Los floculo
deben ser removidos, para separar la biomasa del agua limpia, y el volumen requerido de
lodo activo puede ser bombeado de nuevo en el tanque de aireacin.

Bacterias hetertrofas, de las cuales unas utilizan los compuestos orgnicos elaborados
por otros seres vivos a los que parasitan; las bacterias patgenas o parsitas, productoras
de enfermedades en el hombre y en los animales; otras viven en substancias orgnicas,
descomponindolas aprovechando la materia orgnica muerta para la alimentacin, las
bacterias de la putrefaccin o o saprfitas; provocando fermentaciones, actica, butrica,
lctica, etc., las bacterias zimgenas; y por ltimo, las bacterias simbiticas, que viven en
plan o ayuda mutua con organismos vegetales o animales, como las bacteriorrizas de las
leguminosas. stas son la mayor parte de las bacterias. Haciendo referencia a su
respiracin, se dividen as: Bacterias aerobias, Utilizan oxgeno para realizar la respiracin.
Bacterias anaerobias, Para respirar sustituyen el oxgeno por otras sustancias.

III.

OBJETIVO:
3.1. Determinar el crecimiento de microorganismos presentes en una muestra de lodo
activo.

IV.

MATERIALES Y METODOS:
4.1. Material Biolgico:

Muestra: Lodo activo superficial (cernido)

4.2. Material de Laboratorio:

Placas Petri estriles (4)/ mesa

Pipetas (1 de 1ml y 1 de 5 ml)/ mesa

Mechero

Tubos de ensayo (Frascos con 4.5 mL de diluyente) 6/ mesa

4.3. Medio de Cultivo:

Medio de
cultivo para recuento (PCA). Para
crecimiento: Caldo Nutritivo (200mL/mesa)

V.

Solucin Salina Fisiolgica (SSF) (100mL/mesa)

PROCEDIMIENTO:
1. Usar guantes para la recoleccin de 1 L de muestra de lodo activado de la planta
de tratamiento de aguas residuales de covicorti.

2. Tomamos una alcuota (1mL) de lodo activo e inoculamos en los matraces que
contienen caldo nutritivo.

1ml de lodo activado es

colocado en 100 ml de
caldo nutritivo.

El caldo nutritivo contiene como fuente principal 1% de peptona, 0.5% de

electrolitos (NaCl) y 0.3% de extracto de carne.
Los microorganismos pueden tener como nutriente solo la peptona la cual les
provee de fuentes carbonadas y nitrogenadas.
NOTA: se pudo haber agregado otros nutrientes que contengan fuentes de
fsforo.
3. Luego de homogenizar la mezcla del caldo con el lodo activo, procedemos a hacer
las respectivas diluciones:

0.5 ml

100 ml de caldo
nutritivo

0.5 ml

0.5 ml

0.5 ml

Frascos de penicilina conteniendo

4.5 ml de solucin salina (SSF)

Frascos luego de haber realizado las diluciones

Las diluciones se realizaron desde 10 -3 hasta 10 -6 en cada frasco respectivamente.

4. De los 2 ltimos frascos conteniendo las diluciones 10 -5 y 10 -6 extraemos 1 ml del
contenido a dos placas por frasco de dilucin.

Frasco de
penicilina que
contiene la
dilucin 10 -6

Realizar el mismo procedimiento para el frasco de penicilina de 10-5.

5. Siembra por incorporacin: Agregamos en las placas conteniendo ya las muestras,
el agar nutritivo o comn (contiene 1.5 ml de agar puro y NaCl) 15 ml por placa.
La temperatura del agar debe ser de 45C y un pH neutro (7)

Incorporacin del agar nutritivo a la placa

Placas listas para

la incubacin.

Esperamos que el agar se solidifique para poder voltear las placas, y as no

humedecer el cultivo con la transpiracin que emiten los microorganismos.
6. Incubar en la estufa a una temperatura de 35 C.
7. Hacer los recuentos inicial, intermedio y final (0,2 y 4 das) del nmero
microbiano. En cada recuento se agrega nutrientes segn las exigencias de los
microorganismos.
8. Determinar el crecimiento microbiano por la diferencia de los crecimientos de
UFC/ml final e inicial en un tiempo dado.
9. Plotear el crecimiento microbiano.
VI.

RESULTADOS:
Tiempo (hrs)
0

24

48

VII.

diluciones
10-3
10-4
10-5
10-6
10-6
10-7
10-8
10-9
10-10

MESA 1
96 x 103
50 x 104

MESA 2

MESA 3

MESA 4

14x108

27x105
14x106
12x109

8x105
1x106
91x109

4.5x106
4x106
2x109

21x1011
12x1012

22x1011
17x1012

20x1011
11x1012

17x1011
12x1012

COMENTARIO:
A la temperatura de la estufa (35C) se da el crecimiento ptimo del microbio,
aumentando su metabolismo y acelerando su crecimiento.
Si se sobrepasa 10C ms de lo debido, puede ocasionar la muerte de la bacteria; ya
que son de naturaleza termoestable.
El caldo proporciona los requerimientos necesarios para su desarrollo, ya que posee
los nutrientes principales, mencionados anteriormente.
Es recomendable que en los recuentos de 2 y 4 das, se agregue el caldo nutritivo al
hacer las diluciones, para seguir proporcionando los nutrientes necesarios y ayudar en
el crecimiento de la poblacin bacteriana.

 En la curva de crecimiento microbial de lodo activo de la planta de tratamiento de

aguas residuales de COVICORTI, se observo que como todos utilizamos el mismo tipo
de muestra, las variaciones de crecimiento microbial no fueron significativas, ya que
las curvas salieron casi idnticas.

VIII.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

IX.

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA: Tcnicas de Recuento

microbiano. [Citado 11/07/11]. Disponible en:
http://www.unad.edu.co/fac_ingenieria/pages/Microbiologia_mutimedia/3_4_3r
ecuento.htm

ANEXOS:

Observamos todos los materiales e instrumentos empleados en la prctica.