UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE

SAN MARCOS
(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)
FACULTAD DE INGENIERA GEOLGICA,
MINERA, METALURGICA, GEOGRFICA Y CIVIL.

E.A.P. INGENIERA GEOLGICA.

MANUAL LABORATORIO DE BIOLOGA GENERAL.

BIOLOGA YSABEL PRADO VELAZCO.

CIUDAD UNIVERSOTARIA-2014
LIMA, PER

BIOLOGA GENERAL

BLGA. YSABEL PRADO V.

PRCTICA N 1

TEMA: DESCRIPCION,
COMPUESTO.

MANEJO

CUIDADOS

DEL

MICROSCOPIO

MATERIAL: Microscopio compuesto, portaobjetos, cubreobjetos, gotero, papel

lente, pedazo de peridico, pedazo de tela suave.

INTRODUCCION: El microscopio compuesto es un instrumento ptico que permite

obtener una imagen amplificada de un objeto pequeo (clulas, tejidos,
microorganismos, granos de polen, etc.), para hacer visibles detalles que no lo son
a simple vista.
Es de uso rutinario en los laboratorios de enseanza superior, investigacin; en el
campo de la Biologa, Medicina y ciencias afines como la Geologa, que estudia
los minerales y rocas con microscopios con nicoles cruzados y polarizadores
llamados microscopios petrogrficos.
Es un instrumento de precisin delicado y caro, por lo que es preciso darle un uso
y cuidado adecuados.
El lmite de resolucin del microscopio compuesto es aproximadamente de 200
nanmetros, el que no es suficiente para observar orgnulos celulares, virus y
macromolculas; esto es posible usando el microscopio electrnico cuyo lmite de
resolucin es de 0.5 nanmetros.
La ciencia y arte de distinguir los objetos ms pequeos se denomina Microscopa.

OBJETIVOS: Al finalizar la prctica, el alumno con ayuda de las pautas de la

presente gua y bibliografa sobre el tema, estar en capacidad de:
-Reconocer cada una de las partes del sistema mecnico y ptico del
microscopio convencional.
-Conocer el funcionamiento de cada una de las partes del microscopio.
-Enfocar sin error una imagen, previa iluminacin correcta del campo del
microscopio.
-Realizar la debida limpieza de las partes constitutivas del microscopio, antes
y despus de las observaciones.
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DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO COMPUESTO: est constituido por dos

partes:
A.- Parte mecnica: Constituida por los siguientes dispositivos:
I) El pie, base o estativo: Es un dispositivo metlico pesado, en forma de
herradura o circular que permite la estabilidad del microscopio.
II) Columna: Se encuentra en contacto con el pie.
III) Tubo ptico: Cilindro de metal de 16 cm de longitud en cuya parte superior
se dispone la lente ocular y en la parte inferior el revlver, al cual se
atornillan los objetivos. En la parte posterior se encuentra la cremallera,
sistema que est en conexin con los tornillos.
IV) Brazo: De metal macizo en forma de U abierta que sirve para transportar el
microscopio. Por su parte superior se une al tubo y por la parte inferior se
pone en contacto con la base, mediante la charnela que permite inclinar el
aparato. En su extremo superior se encuentra el tornillo
macromtrico( para movilizar el tubo rpidamente-enfoque grosero) y, en
su extremo inferior el tornillo micromtrico (para movimientos lentosenfoque fino).
V) Platina: Es la plataforma o mesa de trabajo donde se coloca la muestra,
puede ser redonda o cuadrada, inmvil o mvil mediante el carro. Posee
una abertura central denominada apertura de platina, que deja pasar los
rayos luminosos que vienen del espejo o de la luz incorporada. Tiene
pinzas para fijar la lmina portaobjetos que contiene la muestra a
observarse.
VI) El revlver: Dispositivo metlico giratorio, posee varias roscas, donde se
atornillan las lentes objetivo, que al girar deben disponerse en retn,
indicando que se encuentra en posicin de observacin.B.- Parte ptica: Las propiedades pticas de las lentes provienen de los
fenmenos de refraccin que sufren los rayos luminosos que las atraviesan.
Est constituida por:
1) Lentes Oculares: Soportadas por cilindros rectos, cortos y huecos, y se
colocan en la parte superior del tubo ptico, interiormente tienen dos lentes,
uno a cada extremo y entre ambos hay un diafragma; la lente superior se
llama lente ocular y la lente inferior, lente de campo. Tiene aumentos de 10x,
o 5x. Debe su nombre a que el observador coloca su ojo cerca de la lente
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ocular. Su funcin es aumentar la imagen producida por la lente objetivo. La

imagen producida por el ocular es virtual y derecha.
2) Lentes Objetivos: La calidad de un microscopio depende de la calidad de la
imagen dada por el objetivo; estas lentes son de construccin complicada y
se requieren clculos difciles para decidir la curvatura y la combinacin de
las lentes que la componen. Llevan este nombre por estar cerca del objeto,
que debe conocerse:
a)
b)
c)
d)
e)
f)

El aumento.
Distancia focal
Apertura numrica
Distancia de trabajo
Profundidad de foco
Campo de visin

El aumento: Puede calcularse dividiendo la longitud ptica del tubo (160

mm) entre la distancia focal. El objetivo de ms uso en Biologa es de 4mm
de distancia focal, es decir: 160/4=40x
Distancia focal: Es la distancia que separa el foco, del plano principal de la
lente que corresponde casi al centro de la misma.
Apertura Numrica (AN=n*sen(u)): Esta expresin es la de mayor
importancia en microscopia. Donde n= ndice de refraccin del medio
interpuesto entre el objeto y la lente frontal del objetivo; u= de la abertura
angular del objetivo. Su valor est indicado en la montura del objetivo, junto
con el aumento. La calidad del objetivo es tanto mayor cuanto ms elevada
es su apertura numrica; cuanto mayor sea la apertura numrica, mayor
ser el poder de resolucin del objetivo, y tanto ms finos los detalles que
podr revelar.
Poder de resolucin de un microscopio: Es la capacidad del microscopio de
distinguir a dos puntos vecinos como unidades. Dos puntos luminosos
forman imgenes separadas cuando existe entre ellos una distancia mnima
r, llamada Limite de Resolucin, si la distancia es menor que r, formarn
una sola imagen, es decir se confundirn. r tiene un valor diferente para
cada objetivo, y se calcula por la siguiente frmula: r=0.61/ AN Siendo 0.61
la mnima distancia a que pueden estar separados dos puntos, para que
sus imgenes se vean como separadas y, = longitud de onda de la luz
utilizada en la iluminacin.
Distancia de trabajo: Es el espacio libre entre el objetivo y el objeto. Es
menor a medida que el objetivo tiene mayor aumento.
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Profundidad de foco: Es el poder de resolucin en el plano vertical, y

expresa la cualidad de un objetivo de poder presentar perfectamente
detallados los diversos planos de una preparacin sin variar la posicin de
enfoque. A medida que aumenta la apertura numrica de un objetivo,
disminuye el nmero de planos del objeto que puede considerarse en foco.
La imagen producida por el objetivo ser real e invertida.

TABLA DE VALORES PARA OBJETIVOS TIPOS

Aumento
del
Objetivo
10x
40x
100x

Distancia
focal

A.N.

Distancia de
Trabajo

Profundidad
de Foco

Campo de
Visin

16 mm
4 mm
2 mm

0.20-0.30
0.65-0.85
1.2-1.3

4-8 mm
0.2-0.6 mm
0.11-0.16 mm

10 u
1-2 u
0.5 u

1-2 mm
0.25-0.5 mm
0.1m0.2 mm

3) Espejo: Orienta los rayos luminosos en direccin del objeto; posee dos
superficies, una plana y otra cncava. Cuando la fuente luminosa es el sol
se utiliza el espejo plano o el cncavo; al usar el espejo plano se elimina del
campo visual imgenes perjudiciales, como barras de las ventanas, etc.
Cuando se utiliza luz artificial, el espejo cncavo permite una iluminacin
ms intensa. En los microscopios modernos el sistema de iluminacin es
incluido.
4) Condensador: Se encuentra debajo de la platina, tiene como funcin
condensar y enfocar la luz sobre el objeto; tiene en su parte inferior un
diafragma iris, cuyo dimetro se puede variar mediante una palanca
horizontal, el tamao del diafragma iris controla la iluminacin del objeto.
5) Portafiltro: Se localiza debajo del diafragma iris, consiste de un anillo de
metal, en el que puede colocarse un vidrio despulido o de color. El filtro de
color azul o filtro luz-da reduce el exceso de color rojo y amarillo que
produce el filamento de una ampolleta corriente.

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USO DEL MICROSCOPIO:

1) Trasladar el microscopio cogindolo del brazo con la mano derecha y
sosteniendo la base con la mano izquierda en forma horizontal.
2) Limpiar con un lienzo suave la parte mecnica del microscopio.
3) Limpiar con papel lente la parte ptica del microscopio, tratando de retirar el
polvo, la humedad, la grasa muy perjudiciales para el sistema ptico.
4) Enfocar con el objetivo de 10x, orientando el espejo cncavo de modo que
refleje la mayor cantidad de luz hacia el condensador y, con el diafragma
completamente abierto, hasta observar el campo del microscopio completamente
iluminado en forma homognea. El espejo debe estar colocado a 20 o 30 cm de
distancia de la fuente de luz.
5) colocar la preparacin en la abertura de la platina, de tal modo que reciba los
rayos luminosos, provenientes del espejo, diafragma y condensador.
6) Mientras se mira por el ocular hacer descender el tubo ptico con el tornillo
macromtrico, hasta que el objetivo est a unos 0.5 cm de distancia de la
preparacin, hasta que aparezca la imagen.
7) Luego se enfoca la imagen con el tornillo micromtrico.
8) una vez ubicada la estructura que ms nos interesa, observar con el objetivo de
mayor aumento, para lo cual se gira el revlver, teniendo la precaucin de alejar el
tubo ptico a fin de no daar la preparacin por una mala manipulacin.
9) Una vez enfocada la muestra ir graduando el diafragma hasta observar los
detalles estructurales externos e internos.
10) Al terminar las observaciones, limpiar las lentes con papel lente y dejar el
microscopio con el objetivo de menor aumento en el eje ptico, cubrirlo con su
funda y guardarlo.

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PRACTICA N 2

TEMA: ORGANISMOS VIVIENTES EN AGUA ESTANCADA.

MATERIAL: Agua estancada que contenga en lo posible representantes del reino

Monera (espirilos), reino Protista (protozoos), reino Animalia (rotferos, crustceos,
ostrcodos, larvas de insectos), reino Plantae (algas unicelulares, pluricelulares).
a) Microscopio compuesto
b) Porta y cubre-objetos
c) Gotero
d) Lugol
e) Pinzas, estiletes.
f) Papel lente
g) Papel secante
h) Lienzo suave

OBJETIVOS: Conocer la gran biodiversidad que existe en un pequeo ecosistema

como son las aguas estancadas, donde prosperan organismos que no son visibles
a simple vista, y para ser visualizados precisa el uso de instrumentos pticos.

PROCEDIMIENTO: Coloque una gota de agua estancada de la superficie del

fondo del recipiente (de boca ancha) en un porta-objetos, luego cubra con una
laminilla en un ngulo de 45 sexagesimales, para evitar la formacin de burbujas
de aire, que obstaculice su observacin.
Observe al microscopio:
a)
b)
c)
d)

El movimiento del organismo.

Los medios de locomocin, forma y nmero.
Describa la morfologa del organismo.
Dibuje los organismos observados.

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PRCTICA N 3

TEMA: LA CLULA VEGETAL

MATERIAL:
a) Bulbo de cebolla-Allium cepa
b) Fruto de aj-Capsicum frutescens

PROCEDIMIENTO:
A. 1. Preparacin Hmeda: Corte el bulbo de cebolla en 4 partes y luego se
separar por s sola en capas o catafilos, de cuya superficie cncava, corte
una porcin pequea (5mm) de la delicada epidermis que la cubre. Con
una pinza, colocarla rpidamente en una gota de agua, evitando la
formacin de pliegues y luego coloque los cubreobjetos. Use el diafragma
para reducir la cantidad de luz que pasa a travs de la preparacin.
Informe:
-Observe a 10x y 40x
-Dibuje e indique las estructuras observadas a 40x.
2. Preparacin hmeda con colorante: en la preparacin anterior aada
una gota de azul de metileno en el borde del cubreobjetos.
Informe:
-Observe a 10x y 40x.
-Dibuje las clulas teidas con azul de metileno sealando las estructuras
ms visibles (ncleo,, nuclolo, vacuolas).

B. Haga una preparacin hmeda con un corte superficial del endocarpio del
aj.
Informe:
-Identifique y dibuje (40x) la lmina media, membrana primaria, membrana
secundaria, canal poral y poros de la pared.
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PRCTICA N 4

TEMA: INCLUSIONES CITOPLASMTICAS.

MATERIAL: Colorante azul de metileno o lugol, porta y cubreobjetos, gotero, hoja

de afeitar, pinza, papel lente, papel absorbente.
a)
b)
c)
d)

Tubrculo de papa-Solanum tuberosum

Raz de zanahoria- Daucus carota
Bulbo de ajo- Allium sativum
Peciolo de begonia-Begonia sp.

OBJETIVOS: Reconocer las diferentes inclusiones citoplasmticas tpicas de la

clula vegetal, como los tipos de plastidios (leucoplastos: amiloplastos,
proteinoplastos; cromoplastos: caroteno, xantofila, licopeno) y el contenido
vacuolar (drusas, oxalatos, etc.). Los plastidios faltan en las bacterias. Cianofceas
y hongos.

PROCEDIMIENTO:
A) Hacer una preparacin hmeda con un raspado interno de papa. Observe y
dibuje los granos de almidn, la posicin de los hilios y las estras.
B) Realice un corte longitudinal en la parte externa de la raz de zanahoria y
haga el montaje en agua. Observe y dibuje las formas variadas de
cromoplastos.
C) Haga una preparacin hmeda con un corte delgado del catafilo de ajo.
Observe y dibuje los cristales de oxalto de calcio (sales de cidos
orgnicos) y las maclas.
D) Haga una preparacin hmeda con un corte transversal del pecolo de la
hoja de la begonia. Observe y dibuje las drusas que son cristales de oxalto
de calcio en forma de rosa nutica.

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PRCTICA N 5

TEMA: LA CLULA ANIMAL.

MATERIAL:
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)

Colorante Verde Janus o azul de metileno

Mucosa bucal
Portaobjetos
Cubreobjetos
Palillos de dientes
Papel lente
Papel absorvente
Gotero

OBJETIVOS: Conocer la estructura de la clula animal (tejido epitelial de la

mucosa bucal) y establecer diferencias entre esta y la clula vegetal.

PROCEDIMIENTO: Con el extremo ancho de un palillo de dientes frote

ligeramente la cara de su mejilla en una sola direccin; agite el palillo en una gota
de agua y deje secar 5 minutos. Agregar una gota de Verde Janus o Azul de
metileno y deje pasar 3 minutos. Lave la muestra con un pequeo chorro de agua
para eliminar el exceso de colorante y deje secar 5 minutos. No coloque
cubreobjetos.
Observar a 10x y busque una o dos clulas que estn completas y bien planas;
cambie al objetivo 40x para dibujar.

INFORME:
-Dibuje la clula animal, indicando sus partes.
-Describa la forma y nmero de las mitocondrias.
-Cul es la funcin del tejido epitelial, membrana celular, mitocondrias,
vacuolas y nuclolos?
-Establezca diferencias entre clulas vegetal y animal.

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PRCTICA N 6

TEMA: MITOSIS

MATERIAL:
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)
i)
j)

Races de cebolla
Hoja de afeitar
Placa Petri
Portaobjetos
Cubreobjetos
Estilete
Pinza
Mechero
Solucin de orcena actica al 1.5%
Microscopio compuesto.

OBJETIVOS: Reconocimiento del proceso mittico en las plantas, cuya

multiplicacin celular se produce en los tejidos meristemticos apicales (en este
caso el pice de la raz de la cebolla), laterales o intercalares, dando por resulado
el crecimiento en altura o en grosor de la planta.

PROCEDIMIENTO:
1. En una placa Petri coloque unas gotas de orcena actica y agregue las
puntas de las races. Mantenga la placa Petri sobre el fuego y
agitndola, espereque hierva la orcena.
2. Coloque las races en otro Petri; con una pinza retire una punta de raz
de 2 mm de largo y colquela en una lmina porta objetos con una gota
de orcena fra, coloque la laminilla y deje reposar durante 5 minutos,
luego utilizando el dedo pulgar presione el material.
3. Observe al microscopio las diversas fases de la mitosis y dibuje a 450
aumentos.

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