2013

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Inmunologa
Laura Berzal Plaza

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1. INTRODUCCIN AL SISTEMA INMUNE.

SELECCIN CLONAL
La inmunologa es la rama de las ciencias que estudia todos aquellos mecanismos mediante los
cuales el organismo reconoce a nivel molecular sustancias extraas, diferencindolas de las
propias. Las clulas y molculas responsables de la inmunidad constituyen el sistema
inmunitario.
La respuesta inmunitaria se define como una reaccin a macromolculas (ej. Protenas,
polisacridos y pequeas sustancias qumicas) que son reconocidas como extraas.
Por tanto, la funcin fisiolgica del sistema inmunitario es la defensa frente a:
-

Agentes patgenos:
Virus
Bacterias
Hongos
Parsitos: helmintos, protozoos o artrpodos
Segn la localizacin de los agentes patgenos se activan diferentes componentes del
sistema inmune. Los agentes patgenos pueden ser intracelulares (ej. Virus y bacterias
que se dejan fagocitar) o extracelulares.

Clulas propias que expresan o secretan sustancias extraas:

Clulas envejecidas: clulas senescentes. Las clulas se deterioran y comienzan
a expresar marcadores moleculares que las identifican como clulas diana para
su destruccin
Clulas neoplsicas: clulas tumorales. Expresan en su superficie marcadores
tumorales que no se expresan en clulas normales y por tanto son reconocidos
como extraos.
Clulas alognicas: clulas de otro individuo. Expresan marcadores no propios
del individuo y por tanto tambin son reconocidas como clulas extraas al
organismo.

Cuando el sistema inmunitario no reconoce los componentes propios se desencadenan

respuestas autoinmunes.

HISTORIA
Los historiadores atribuyen al ateniense Tucdides la primera mencin a la inmunidad frente a
una infeccin que l llam peste. El trmino inmune se utilizaba para referirse a aquellas
personas que no contraan la enfermedad
La inmunologa, en su forma moderna, es una ciencia experimental, en la que las explicaciones
de los fenmenos inmunitarios se basan en observaciones experimentales y en las
conclusiones extradas de ellas. La evolucin de la inmunologa como disciplina experimental
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ha dependido de nuestra capacidad para manipular la funcin del sistema inmunitario en

condiciones controladas. El primer ejemplo claro de esta manipulacin fue la vacunacin
exitosa de Jenner contra la viruela. Jenner inyect material procedente de una pstula de
viruela vacuna en el brazo de un nio de 8 aos. Cuando se inocul despus a este nio la
viruela de forma intencionada, no surgi la enfermedad.

RESPUESTA INMUNE
La respuesta frente a los microbios est mediada por dos tipos de reacciones:
-

Reacciones tempranas de la inmunidad innata

Reacciones tardas de la inmunidad adaptativa

La inmunidad innata (tambin llamada inmunidad natural o nativa) constituye la primera lnea
de defensa contra los agentes extraos. Consta con mecanismos de defensa celulares y
bioqumicos que existen incluso antes que la infeccin, permitiendo responder con rapidez a
ella. Estos mecanismos reaccionan generalmente con patrones moleculares microbianos, y en
menor medida con productos de clulas daadas. La especificidad de la respuesta inmune
innata es alta: el nmero de componentes diferentes que se pueden reconocer es de 103.
Los mecanismos de la inmunidad innata son especficos frente a estructuras que son comunes
a grupos de microbios relacionados. Estos mecanismos pueden no distinguir diferencias ligeras
entre microbios.
Los principales componentes de la inmunidad innata son:
-

Barreras fsicas y qumicas, como el epitelio y las sustancias qumicas antimicrobianas

producidas en las superficies epiteliales
Clulas fagocticas: macrfagos y neutrfilos
Clulas dendrticas y linfocitos citolticos naturales (NK1)
Protenas sanguneas, incluidos miembros del sistema del complemento2 y otros
mediadores de la inflamacin
Protenas denominadas citocinas, que coordinan y regulan muchas de las actividades
de las clulas de la inmunidad innata.

La inmunidad adaptativa reconoce detalles moleculares. Las caractersticas definitorias de la

inmunidad adaptativa son una exquisita especificidad frente a molculas diferentes (entorno
1016) y una capacidad de recordar y responder de forma ms intensa a exposiciones repetidas
al mismo microbio (desarrolla memoria inmunolgica). Los principales componentes de la
inmunidad adaptativa son unas clulas denominadas linfocitos y sus productos de secrecin
(anticuerpos). Las sustancias ajenas que suscitan respuestas inmunitarias y son reconocidas
por receptores especficos3 se llaman antgenos. Los receptores especficos reconocen
exclusivamente una porcin molecular del antgeno. Est porcin se denomina eptopo.

Natural killer
Conjunto de protenas que se activan en cascada
3
Los receptores especficos sern o bien linfocitos T o bien inmunoglobulinas secretadas por linfocitos B.
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La mayora de los antgenos son componentes de protenas:

-

Secuencia de aa
Parte de una protena, como por ejemplo, un bucle.

Pero tambin hay otras sustancias que pueden funcionar como antgenos: determinados
azcares, lpidos, autacoides y hormonas, y macromolculas como glcidos complejos,
fosfolpidos y cidos nucleicos

TIPOS DE RESPUESTA INMUNITARIA ADAPTATIVA

Existen dos tipos de respuestas inmunitarias adaptativas, en las que intervienen componentes
diferentes del sistema inmunitario y que sirven para eliminar microbios de distinto tipo.
En la inmunidad humoral los linfocitos B producen anticuerpos que pasan a la sangre y a las
secreciones mucosas. Los anticuerpos reconocen los antgenos, neutralizan la infecciosidad de
los microorganismos y los marcan como una diana para su eliminacin mediante diversos
mecanismos efectores.
La inmunidad celular queda a cargo de los linfocitos T. Los microbios intracelulares, como los
virus y algunas bacterias, sobreviven y proliferan en el interior de fagocitos y de otras clulas
del anfitrin, donde los anticuerpos circulantes secretados por linfocitos B no los tienen a su
alcance. Los linfocitos pueden actuar de dos formas diferentes:
-

Linfocito T cooperador CD4+: secretan protenas llamadas citocinas. Las citocinas

secretadas por los linfocitos T cooperadores estimulan la proliferacin y diferenciacin
de los propios linfocitos T, y activan otras clulas, incluidos los linfocitos B y los
macrfagos. Una vez activados, los macrfagos eliminan los microbios que han
fagocitado
Linfocito T citotxico CD8+ (CTL): mata a las clulas infectadas y elimina los reservorios
de la infeccin.
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COMPONENTES
ADAPTATIVO

CELULARES

DEL

SISTEMA

INMUNITARIO

Las principales clulas del sistema inmunitario adaptativo son los linfocitos, las clulas
presentadoras de antgenos y las clulas efectoras.
El inicio de la respuesta inmunitaria adaptativa y su desarrollo requiere la captacin de los
antgenos y su exposicin ante unos linfocitos especficos. Las clulas que cumplen esta
funcin se denominan clulas presentadoras de antgenos (APC). Entre ellas, las ms
especializadas son las clulas dendrticas, encargadas de atrapar los antgenos que penetran
desde el medio externo, trocearlos, transportarlos hacia los rganos linfticos y presentar los
eptopos a linfocitos T vrgenes para desencadenar las respuestas inmunitarias. Los macrfagos
tambin son capaces de llevar a cabo est funcin.

TEORA DE LA SELECCIN CLONAL

Inicialmente se pensaba que el antgeno modelaba el sitio de interaccin con el anticuerpo.
Posteriormente se ha aceptado la teora de la seleccin clonal. En el timo y la mdula sea se
generan clones linfocitos B y T vrgenes especficos para un antgeno determinado4. Cuando el
antgeno interacciona con su receptor especfico activa la proliferacin del clon. Se produce
entonces la expansin clonal: todas las clulas nuevas tienen especificidad idntica. Tras el
contacto con el antgeno los linfocitos pasan de ser vrgenes a efectores.
Tambin es importante explicar el concepto de delecin clonal que tiene lugar durante los
primeros estados del desarrollo: la delecin clonal consiste en la eliminacin de linfocitos
autorreactivos, es decir, que tengan especificidad para molculas propias.

Cada clon de linfocito tiene un receptor especfico para un antgeno determinado

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Memoria inmunitaria
La activacin inicial de los linfocitos genera clulas de memoria longevas, que pueden
sobrevivir durante aos despus de la infeccin. Las clulas de memoria representan una
reserva expandida de linfocitos especficos frente al antgeno. Esta es una de las bases de la
vacunacin.

RESPUESTAS INAPROPIADAS DEL SI

-

No tolerar antgenos propios: fenmenos de autoinmunidad

Generar respuestas exageradas ante elementos inocuos: alergias
Rechazar trasplantes: se trata a los pacientes con inmunosupresores para mantener la respuesta
silenciada hasta que el organismo se acostumbre.

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2. CLULAS DEL SISTEMA INMUNE.

ANTGENOS DE DIFERENCIACIN
La generacin de todas las clulas sanguneas, llamada hematopoyesis, ocurre al principio,
durante el desarrollo fetal, en los islotes sanguneos del saco vitelino y en el mesnquima
paraartico. Entre el tercer y cuarto mes de gestacin se desplaza al hgado. En el nacimiento,
la hematopoyesis tiene lugar en la mdula sea de la mayora de los huesos del esqueleto,
pero cada vez se restringe ms a la mdula de los huesos planos, de manera que en la
pubertad la hematopoyesis se produce sobre todo en el esternn, las vrtebras, los huesos
ilacos y las costillas.
Los eritrocitos, los granulocitos (neutrfilos, eosinfilos y basfilos), los monocitos (que darn
lugar a los macrfagos), las clulas dendrticas, las plaquetas y los linfocitos B, T y NK se
originan todos en una clula troncal hematopoytica (HSC) comn localizada en la mdula
sea. Esta clula troncal comn es CD34+.
Las HSC son pluripotentes, lo que significa que una misma HSC puede generar todos los tipos
diferentes de clulas sanguneas maduras. Las HSC dan lugar a dos tipos de clulas
multipotentes: los progenitores linfoide comn y mieloide comn.
-

A partir del progenitor linfoide comn se originan linfocitos T, linfocitos B, clulas NK y

clulas dendrticas linfoides. La mayora de los pasos en la maduracin del linfocito B
tienen lugar en la mdula sea, pero los acontecimientos finales pueden producirse
despus de que las clulas abandonen la mdula y entren en los rganos linfticos
secundarios, en particular en el bazo. La maduracin de linfocitos T se produce
completamente en el timo y, por tanto, requiere que progenitores linfoides comunes o
alguna progenie poco caracterizada de estas clulas pase de la mdula a la sangre y
despus al timo. Se cree que
la maduracin de la clula
NK
tiene
lugar
completamente
en
la
mdula sea.
Los progenitores mieloides
comunes dan lugar a
eritrocitos,
plaquetas,
mastocitos,
granulocitos,
monocitos
y
clulas
dendrticas mieloides.

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LOCALIZACIN DE LAS CLULAS DEL SISTEMA INMUNE

-

Los linfocitos efectores y de memoria circulan en la sangre, la linfa y los tejidos

linfticos. Ello asegura que la inmunidad sea sistmica (es decir, que los mecanismos
protectores acten en cualquier lugar del cuerpo).
Los fagocitos (neutrfilos y macrfagos) estn presentes de forma innata en los
tejidos.
Las clulas dendrticas y los linfocitos NK estn presentes tambin en los tejidos.

MARCADORES DE DIFERENCIACIN LEUCOCITARIA

Cada poblacin leucocitaria dispone de un repertorio de molculas de superficie (protenas de
membrana) que se utilizan como marcadores fenotpicos para distinguir las diferentes
poblaciones. Aproximadamente existen 400 de estas molculas de superficie identificadas.
Suelen ser molculas funcionales que reflejan el estado de diferenciacin y de activacin
celular.
Existen diferentes tipos de marcadores:
-

De estirpe celular
CD3: linfocito T
CD19: linfocito B
Estado de diferenciacin
CD1: linfocitos T inmaduros
Estado de activacin:
CD25: Receptor de IL-2

La forma ms frecuente de determinar si se expresa un marcador fenotpico de superficie en

una clula es probar si anticuerpos especficos frente a un marcador se unen a la clula. En
este contexto, los investigadores o los mdicos utilizan los anticuerpos como herramienta
analtica. Hay miles de preparados puros de diferentes anticuerpos, llamados anticuerpos
monoclonales, cada uno especfico frente a una molcula diferente y etiquetado con sondas
que pueden detectarse fcilmente en las superficies celulares.
Aplicaciones de los anticuerpos monoclonales (AcM)
-

Identificacin de subpoblaciones leucocitarias en muestras clnicas

Seleccin positiva o negativa de subpoblaciones celulares
Modificacin de la respuesta inmunitaria in vivo: por ejemplo en leucemias y en
linfomas.

LINFOCITOS
Los linfocitos son las clulas ms caractersticas de la inmunidad adaptativa, que expresan
receptores especficos para el antgeno.

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LINFOCITOS T
Los linfocitos T, los mediadores de la inmunidad celular, se nombraron as porque sus
precursores, que surgen en la mdula sea, migran al timo y maduran all. Todos los linfocitos
T son CD3+. Los dos principales subgrupos de linfocitos T son:
-

Linfocitos T CD4+ cooperadores: expresan un receptor para el antgeno (TCR) de tipo

. Este receptor reconoce molculas del MHC II.
Th1: Se encargan de la activacin de los macrfagos y actan frente a
microbios intracelulares. Estn implicados en enfermedades autoinmunes y en
lesiones tisulares asociadas a enfermedades crnicas
Th2: se encargan de la activacin de los mastocitos y eosinfilos, as como de
la activacin alternativa de macrfagos. Actan frente a parsitos
helmnticos. Estn implicados en enfermedades alrgicas
Th17: desencadenan la respuesta inflamatoria neutrfila y monoctica. Actan
frente a bacterias extracelulares y hongos. Estn implicados en procesos de
autoinmunidad especfica de rgano. Expresan IL-17
Linfocitos T CD8+ citotxicos: expresan un TCR denominado receptor que reconoce
molculas del MHC I.
Linfocitos T CD4+ reguladores: expresan el TCR . Los linfocitos T reguladores
suprimen la funcin de otros linfocitos T. Se encargan pues de la regulacin de
respuestas inmunitarias y mantenimiento de tolerancia frente a lo propio.
iTreg
Linfocitos T CD4+ y CD8+ con receptor para el antgeno . Estas clulas con receptor
son minoritarias. Una de sus localizaciones es la mucosa intestinal.

Los linfocitos no pueden tener ambos tipos de receptores ( y ) simultneamente.

LINFOCITOS B
Los linfocitos B son las clulas que producen los anticuerpos. Maduran en la mdula sea. Los
principales subgrupos de los linfocitos B son:
-

Linfocitos B foliculares
Linfocitos B de la zona marginal
Linfocitos B B-1.

CLULAS NK
Los linfocitos citolticos naturales fueron descritos por primera vez por Moller. Son linfocitos
distintos de los linfocitos T y B que desempean funciones importantes en las respuestas
inmunitarias innatas, sobre todo contra virus y bacterias intracelulares. Los linfocitos NK
constituyen del 5 al 15% de las clulas mononucleares de la sangre y el bazo. Los linfocitos NK
surgen de precursores de la mdula sea y aparecen como linfocitos grandes con numerosos
grnulos citoplsmicos. Pueden identificarse en la sangre por la expresin de CD56 y la falta de
CD3. No expresan ni TCRs ni Igs.

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La activacin del linfocito NK est regulada por un equilibrio entre seales generadas por
receptores activadores (KAR) y receptores inhibidores (KIR). Cuando un linfocito NK
interacciona con otra clula, el resultado viene determinado por la integracin de las seales
generadas por la serie de receptores activadores e inhibidores que expresa el linfocito NK y
que interactan con los ligandos de otra clula.
La mayora de los linfocitos NK expresan receptores inhibidores que reconocen molculas del
MHC-I. Esto es til porque las clulas normales expresan molculas de la clase I del MHC. De
este modo, los linfocitos NK interpretan la presencia de molculas de la clase I del MHC como
marcadores de lo propio normal y sano, y su falta como una indicacin de infeccin o dao.
Los linfocitos Nk no recibirn seales inhibidoras de las clulas infectadas o daadas.
Los receptores activadores de los linfocitos NK reconocen un grupo heterogneo de ligandos,
algunos de los cuales pueden expresarse en clulas normales y otros, sobre todo, en clulas
que hayan sufrido estrs, estn infectadas por microbios o se hayan transformado

Las funciones de los linfocitos Nk son:

-

Matar clulas infectadas: los linfocitos NK tienen grnulos que contienen protenas
mediadoras de la muerte de las clulas diana. Cuando los linfocitos NK se activan, los
grnulos se exocitan y las protenas quedan adyacentes a las clulas diana. Una
protena del grnulo del linfocito NK, llamada perforina, facilita la entrada de otras
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protenas de los grnulos, llamadas granzimas, en el citoplasma de las clulas diana.

Las granzimas inician una sealizacin que finaliza en la muerte de la clula por
apoptosis.
Activar a los macrfagos para que destruyan los microbios fagocitados

FAGOCITOS
Los fagocitos son clulas con capacidad de ingerir, capturar y digerir sustancias. Entre ellos
encontramos neutrfilos (polimorfonucleares), macrfagos (mononucleares) y clulas
dendrticas (mononucleares). Adems, tanto los macrfagos como las clulas dendrticas
tienen un papel muy importante en la presentacin de antgenos.
CLULAS DENDRTICAS (DC)
A partir de la clula troncal hematopoytica localizada en la mdula sea surgen un progenitor
mieloide comn y un progenitor linfoide comn.
Del progenitor mieloide comn se desarrollan:
-

Clulas dendrticas convencionales: son el subgrupo de DC ms numeroso en los

rganos linfticos. Residen en los tejidos. Al activarse por el encuentro con microbios o
citocinas, las DC del epitelio y los tejidos maduran y migran a los ganglios linfticos de
drenaje, donde inician respuestas de linfocitos T. Son las nicas capaces de presentar
el antgeno a linfocitos T vrgenes5. Las clulas dendrticas convencionales comparten
gran parte de los marcadores con los macrfagos. Las DC tradicionales derivadas de los
tejidos se clasifican de la siguiente manera.
Clulas de Langerhans: localizadas en el epitelio y en los ganglios linfticos que
drenan la piel
Tipo intersticial o drmico: DC de la mayora de los dems tejidos.
Clulas dendrticas que se diferencian a partir de monocitos. Se les denomina
DC mieloides propiamente dichas.
Clulas dendrticas plasmacitoides: su principal funcin es la secrecin de grandes
cantidades de interfern de tipo I en respuesta a las infecciones vricas.

Del progenitor linfoide comn se desarrolla

-

Clula dendrtica linfoide

Existe otro grupo de clulas dendrticas cuyo origen no es hematopoytico. Son las
denominadas clulas dendrticas foliculares. Son clulas dendrticas que se encuentran
entremezcladas entre cmulos especializados de linfocitos B activados, llamados centros
germinales, en los folculos linfticos de los ganglios linfticos, el bazo y los tejidos linfticos de
las mucosas (rganos linfoides secundarios). Las clulas dendrticas foliculares no endocitan ni
proteolizan los antgenos, sino que los muestran en su superficie.

Una clula virgen es una clula que todava no ha tenido ningn contacto con el antgeno

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MACRFAGOS
A partir del progenitor mieloide comn surge el monoblasto. El monoblasto se incorpora al
torrente sanguneo, donde se transforma en monocito. Una vez que penetran en los tejidos,
los monocitos maduran y se transforman en macrfagos. Los macrfagos de diferentes tejidos
reciben diferentes nombres:
-

Clulas microgliales: SNC

Clulas de Kupffer: recubren los sinusoides vascuares del hgado
Macrfagos alveolares: vas respiratorias del pulmn
Osteoclastos: hueso.

FUNCIONES
-

Ingerir y matar microbios

Ingerir clulas muertas
Ingerir clulas apoptsicas antes de que estas liberen su contenido e induzcan
respuestas inflamatorias
Mostrar antgenos a los linfocitos T efectores, que responden activando a los
macrfagos para que maten a los microbios.

NEUTRFILOS
Los neutrfilos, tambin llamados leucocitos polimorfonucleares6, son la poblacin ms
abundante de leucocitos circulantes y median las primeras fases de las reacciones
inflamatorias. El ncleo de un neutrfilo est segmentado en tres a cinco lbulos conectados.
El citoplasma contiene grnulos de dos tipos:
-

Grnulos especficos: lisozima, colagenasa y elastasa

Grnulos azurfilos: contienen enzimas y otras sustancias microbicidas

Estn especializados en la destruccin de bacterias. Pueden migrar rpidamente a los lugares

de infeccin tras la entrada de microbios. Despus de entrar en los tejidos y llevar a cabo su
funcin, los neutrfilos mueren.
PROCESO DE FAGOCITOSIS
Es un proceso que implica la interaccin entre el macrfago y el agente infeccioso. Existen dos
tipos de receptores que median dicha interaccin:
-

Receptores para polisacridos que forman parte de la pared bacteriana

Receptores para anticuerpos

Una vez que se produce la interaccin entre receptor y ligando, el macrfago internaliza el
agente infeccioso, crendose un fagosoma. El fagosoma se fusiona con el lisosoma,
obtenindose as el fagolisosoma. En el fagolisosoma se activan sistemas microbicidas:

Leucocitos polimorfonucleares: neutrfilo, basfilo, eosinfilo

Sistema fagoctico mononuclear: clula dendrtica, macrfago

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-

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NADPH oxidasa
xido ntrico sintasa

Parte de los fragmentos proteolticos proteicos son presentados por los macrfagos a
linfocitos T efectores.

MASTOCITOS, BASFILOS Y EOSINFILOS

Los mastocitos, basfilos y eosinfilos son 3 clulas adicionales que participan en las
respuestas inmunitarias adaptativas. Los tres tipos de clulas comparten la caracterstica
comn de tener grnulos citoplsmicos llenos de varios mediadores inflamatorios y
antimicrobianos. Otra caracterstica comn de estas clulas es su implicacin en respuestas
inmunitarias que protegen contra helmintos y respuestas inmunitarias que causan
enfermedades alrgicas.

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3. ANATOMA Y FUNCIONES DE LOS TEJIDOS

LINFOIDES
Los tejidos linfticos se clasifican en:
-

rganos linfticos primarios o centrales: los linfocitos expresan por primera vez
receptores para el antgeno y consiguen la madurez fenotpica y funcional. En ningn
caso entran en contacto con el antgeno. Los rganos linfticos primarios son el timo y
la mdula sea, para los linfocitos T y B respectivamente
rganos linfticos secundarios o perifricos: se inician y desarrollan las respuestas del
linfocito a antgenos extraos. Los rganos linfticos secundarios son los ganglios
linfticos, el bazo y el tejido linfoide difuso. Dentro del tejido linfoide difuso
encontramos:
MALT: componentes del sistema inmunitario asociados a la mucosa digestiva y
bronquial
Sistema inmunitario asociado a la piel
Sistema inmunitario asociado a la mucosa de la faringe
Sistema inmunitario asociado a la mucosa de la boca

RGANOS LINFTICOS PRIMARIOS

MDULA SEA
En la mdula sea los precursores leucocitarios estn acunados por clulas del estroma. Las
clulas del estroma aporten los factores de crecimiento necesarios para su maduracin. Las
clulas maduras se separan de las clulas del estroma y se incorporan al torrente sanguneo.
Los precursores leucocitarios cambian su programa migratorio conforme van madurando: esto
es lo que les permite unirse al torrente circulatorio.
Los linfocitos B comienzan su maduracin en la mdula sea. Es aqu donde los linfocitos B
adquieren la inmunoglobulina de superficie y se vuelven inmunocompetentes. Los linfocitos B
sufren un tipo especial de seleccin. Cada linfocito tiene que estar ensamblado
adecuadamente a su receptor para inmunoglobulinas. En el caso de que este ensamblaje no
fuese correcto, el linfocito es destruido. Las clulas que pasan esta seleccin pueden pasar a la
circulacin.
La maduracin de linfocitos T se produce completamente en el timo y, por tanto, requiere que
progenitores linfoides comunes o alguna progenie poco caracterizada de estas clulas pase de
la mdula a la sangre y despus al timo.
TIMO
El timo es el lugar de maduracin del linfocito T. El timo es un rgano bilobulado situado en la
regin anterior del mediastino. Cada lbulo se divide en mltiples lbulillos por medio de
tabiques fibrosos, y cada lobulillo consta de una corteza externa y una mdula interna. La
corteza contiene un cmulo denso de linfocitos T, a diferencia de la mdula, que est poblada
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de forma ms escasa. Los macrfagos y clulas dendrticas se localizan casi exclusivamente en

la mdula.
Los timocitos precursores localizados en la mdula sea migran hacia el timo para completar
su maduracin. Se alojan en la corteza y, a medida que van madurando, se desplazan hacia la
mdula, de manera que esta contiene, sobre todo, linfocitos T maduros.
Los timocitos corticales ms inmaduros que acaban de llegar desde la medula sea no
expresan ni el TCR, ni el CD3+, ni el CD4+ ni el CD8+. Reciben el nombre de timocitos con doble
negatividad.
Ha de producirse una reorganizacin positiva del gen del TCR para que los timocitos expresen
el receptor. La mayora de ellos expresan receptores de tipo y solo una pequea poblacin
expresar receptores . Aquellos timocitos que no tienen TCR mueren en la corteza.
Una vez que los linfocitos expresan el TCR, han de aprender a reconocer lo propio. La seleccin
positiva es el proceso que conserva los linfocitos T que reconocen el MHC propio (con
pptidos propios) con avidez baja. Al mismo tiempo, las clulas se comprometen en las lneas
CD4 o CD8 en funcin de si el TCR reconoce, respectivamente, molculas de las clases II o I del
MHC. La seleccin negativa es el proceso mediante el cual se eliminan los linfocitos T cuyos
TCR se unen con fuerza a antgenos peptdicos propios del MHC.
Los linfocitos maduros e inmunocompetentes abandonan el timo y se dirigen a rganos
linfticos secundarios.

RGANOS LINFTICOS SECUNDARIOS

BAZO
El parnquima esplnico se divide desde el punto anatmico y funcional en:
-

Pulpa roja: compuesta sobre todo por sinusoides vasculares llenos de sangre
Pulpa blanca: rica en linfocitos

El seno marginal forma el lmite entre la pulpa roja y la pulpa blanca. En este seno marginal
hay:
-

Acmulos de linfocitos B superespecializados encargados de eliminar bacterias, sobre

todo neumococos.
Macrfagos especializados en capturar antgenos.

La organizacinde la pulpa blanca es anloga a la de los ganglios linfticos, con zonas de

linfocitos B y T segregadas. Los linfocitos B se organizan formando folculos. Los linfocitos T se
organizan entorno a una arteriola central formando la vaina linftica periarteriolar (PALS)

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GANGLIOS LINFTICOS
Los ganglios linfticos estn situados a lo largo de los conductos linfticos. Estn especializados
en recoger antgenos procedentes del epitelio y del lquido intersticial de la mayora de los
tejidos.
Los ganglios linfticos estn rodeados por una cpsula fibrosa. Entre la cpsula fibrosa y la
corteza se localiza el seno subcapsular. Los linfticos aferentes se vacan en el seno
subcapsular. Por los linfticos aferentes pueden llegar o bien antgenos solubles, o bien
antgenos capturados por clulas dendrticas. Una vez en el seno subcapsular, los antgenos
solubles son capturados por macrfagos o clulas dendrticas.
Por debajo del seno subcapsular encontramos la corteza. La corteza externa contiene
agregados de linfocitos B denominados folculos. Algunos folculos contienen zonas centrales
llamadas centros germinales. Los folculos sin centros germinales se denominan folculos
primarios, y los que tienen centros germinales son los folculos secundarios. En la zona
interfolicular o parafolicular se localizan los linfocitos T. La segregacin anatmica de los
linfocitos B y T en diferentes zonas del ganglio depende de gradientes quimotcticos que
dirigen la migracin. En los ganglios linfticos predominan los linfocitos T.
Las sustancias transportadas por la linfa que entran en el seno subcapsular del ganglio se
clasifican por su tamao molecular:
-

Los virus y otros antgenos de masa molecular alta son captados por los macrfagos y
presentados a los linfocitos B corticales
Los antgenos solubles de masa molecular baja son transportados fuera del seno por
los tubos FRC hasta las clulas dendrticas corticales. Las clulas dendrticas presentan
los antgenos a los linfocitos T.

Las clulas producidas durante esta estimulacin antignica pasan a la linfa por el vaso
linftico eferente7.
Los linfocitos t y B vrgenes estn constantemente recirculando y visitando ganglios. Es la
forma de patrullaje/vigilancia ms eficiente.
CENTROS GERMINALES
En los centros germinales de los folculos secundarios las clulas dendrticas foliculares presentan
antgenos a los linfocitos B en proceso de maduracin. Los linfocitos B, que hasta entonces solo son
capaces de producir IgM, comienzan a generar otras clases de inmunoglobulinas. Se consiguen as
anticuerpos mejores y ms neutralizantes.
En los centros germinales los linfocitos B tambin adquieren memoria inmunolgica.

Ante una estimulacin antignica de gran intensidad, los vasos eferentes se cierran y se favorece la
llegada de clulas por los linfticos aferentes. Los ganglios se hinchan. Al cabo de 5-6 das las clulas
producidas durante la estimulacin pasan a la circulacin.

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PEQUEO RESUMEN DE LA RESPUESTA INMUNE

Los antgenos solubles o capturados por clulas dendrticas penetran en el rgano linfoide
secundario por los vasos aferentes. Una vez en el interior del rgano linfoide son presentados
a clulas vrgenes que se encuentran circulando. Los productos de la respuesta inmune se
vierten o bien al sistema linftico (en el caso de los ganglios) o bien al torrente circulatorio (en
el caso del bazo).

TEJIDO LINFTICO ASOCIADO A LAS MUCOSAS Y LA PIEL

Cada barrera epitelial importante del cuerpo, sobre todo la piel y las mucosas digestiva y
bronquial, tiene acmulos de clulas inmunitarias distribuidas de forma difusa que
proporcionan respuestas inmunitarias especializadas contra patgenos que atraviesan las
barreras. El tamao de estas formaciones es muy variable. En ellas predominan los linfocitos B.
En la piel y en el tracto digestivo existen millones de microorganismos beneficiosos para el ser
humano. El sistema inmune a de diferenciar los microorganismos patgenos de los inocuos.

TRACTO DIGESTIVO: las dos formaciones de linfocitos ms importantes son las placas
de Peyer (en el intestino delgado) y las amgdalas (en la faringe). En el tracto digestivo
contamos con millones de comensales (bacterias) que facilitan el transcurso de la
digestin. Los acmulos de linfocitos son sobre todo rganos de tolerancia. Las
citoquinas y los factores solubles inmuno-reguladores adquieren gran importancia. Ha
de mantenerse un equilibrio con los microorganismos beneficiosos. Cuando el
equilibrio se rompe (deja de secretarse interleuquina B y los linfocitos t reguladores
funcionan inadecuadamente), aparecen enfermedades.
Los linfocitos de las mucosas del tracto digestivo son los encargados de producir IgA.
La mayor parte de la IgA se localiza en estas formaciones y no en la sangre.
PIEL: al igual que en el tracto digestivo, en la piel existen muchos microorganismos
beneficiosos para el ser humano. Debemos de distinguir y tolerar los microorganismos
inocuos de los agentes patgenos.
- La epidermis consiste en mltiples capas de epitelio escamoso estratificado,
compuestas casi por completo de clulas especializadas llamadas
queratinocitos. Adems de formar una barrera fsica, los queratinocitos
responden a los microorganismos patgenos y a lesiones, produciendo
pptidos antimicrobianos (matan a los microbios) y varias citocinas
(promueven y regulan las respuestas inmunitarias
- Normalmente hay varias poblaciones de CD (clulas dendrticas) en la piel que
contribuyen a las respuestas inmunitarias innatas y al inicio de las respuestas
de los linfocitos T a lso antgenos microbianos y ambientales que entran en el
cuerpo a travs de la piel
- La piel humana normal contiene muchos linfocitos T, el 95% de los cuales
tienen un fenotipo de memoria: Th1, Th2,Th17 y T reguladores.

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La prdida del equilibrio en la piel causa enfermedades como la soriasis: en esta

enfermedad los linfocitos T producen citoquinas, activando macrfagos y
queratinocitos. Se forman as las placas soriticas de hiperproliferacin

RECIRCULACIN
Los linfocitos vrgenes son linfocitos T o B maduros que residen en los rganos linfticos
secundarios o se encuentran circulando de uno a otro. Nunca se han encontrado con un
antgeno extrao. Los linfocitos vrgenes se denominan linfocitos en reposo, porque no se
dividen activamente ni estn realizando ninguna funcin efectora.
Cuando un linfocito virgen entra en contacto con el antgeno en un rgano secundario se
detiene, se activa y se expande clonalmente, dando lugar a linfocitos efectores y clulas de
memoria. Los linfocitos efectores cambian su patrn de migracin: no circulan por los rganos
linfticos secundarios, si no que se dirigen a los tejidos perifricos para encontrarse con el
antgeno en sus vas de entrada.
Por qu las clulas vrgenes migran de un ganglio a otro?
En los ganglios existe una estructura conocida como endotelio alto especializado (HEV). Los
linfocitos vrgenes se unen a la dirigina vascular de las vnulas del endotelio alto gracias a
receptores Homing (selectina L).
Cuando los linfocitos vrgenes entran en contacto con el antgeno y se activan, pierden este
receptor y adquieren otros diferentes que les capacitan para migrar al tejido perifrico.

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4. INMUNIDAD INNATA. FAGOCITOSIS

La inmunidad innata es la primera lnea de defensa contra las infecciones. Sus caractersticas
principales son:
-

Es inmediata, sin necesidad de sensibilizacin previa. Las clulas y molculas de la

inmunidad innata existen en un estado funcional completo antes de encontrarse con
los microbios.
Especificidad: reconoce patrones moleculares generales de forma no muy especfica. El
sistema inmunitario innato ha evolucionado para reconocer solo un nmero limitado
de molculas (103), mientras que el sistema inmunitario adaptativo es capaz de
reconocer una serie mucho mayor de sustancias extraas (109).
Carece de memoria inmunolgica

La inmunidad innata estimula la respuesta inmunitaria adaptativa y puede influir en su

naturaleza para que alcance una eficacia ptima contra diferentes tipos de microbios.

RECONOCIMIENTO DEL SISTEMA INMUNITARIO INNATO DE LOS

MICROBIOS Y DE LO PROPIO DAADO
Las sustancias microbianas que estimulan la inmunidad innata se llaman patrones moleculares
asociados a microorganismos patgenos (PAMP, del ingln pathogen-associated molecular
patterns). Diferentes clases de microbios (virus, bacterias gramnegativas, bacterias
grampositivas, hongos) expresan diferentes PAMP:
-

ARN bicatenario que se encuentra en los virus que se estn replicando

Secuencias de DNA CpG no metiladas presentes en las bacterias
Iniciacin por N-formilmetionina tpica de las protenas bacterianas
Glcidos y lpidos complejos propios de los microbios. Ej. Lipopolisacarido LPS en las
bacterias gramnegativas, el cido lipoproteico en las bacterias grampositivas y los
oligosacridos ricos en manosa de muchos microbios.

Estos productos microbianos son, a menudo, esenciales para la supervivencia de los microbios.
Esta caracterstica del reconocimiento inmunitario innato es importante, porque asegura que
los microbios no puedan deshacerse de las dianas de la inmunidad innata con el fin de intentar
evitar ser reconocidos por el anfitrin.
El sistema inmunitario innato tambin reconoce molculas endgenas que producen o liberan
clulas daadas o que se estn muriendo. Estas sustancias se llaman patrones moleculares
asociados a la lesin (DAMP, del ingls damage-associated molecular patterns). Los DAMP
pueden producirse como resultado del dao celular causado por infecciones, pero tambin
pueden indicar otro tipo de lesiones celulares causadas por quemaduras, traumatismos o
disminucin del riesgo sanguneo. Las clulas que mueren por apoptosis no suelen liberar
DAMP.

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RECEPTORES
El sistema inmunitario innato usa varios tipos de receptores celulares, presentes en diferentes
localizaciones en las clulas, que reconocen PAMP y DAMP. Estos receptores de
microorganismos patgenos y de molculas asociadas a la lesin se llaman a menudo
receptores para el reconocimiento del patrn.
Estos receptores se localizan en:
-

La membrana plasmtica
La membrana endosmica
Citoplasma

Adems, hay muchas protenas en la sangre y en los lquidos extracelulares que reconocen
PAMP.
La mayora de los tipos celulares expresan receptores para el reconocimiento del patrn. Los
fagocitos (neutrfilos y macrfagos) y als clulas dendrticas expresan la mayor variedad y
cantidad de estos receptores.
TIPOS DE RECEPTORES Y LOCALIZACIN
TIPO DE RECEPTOR

LOCALIZACIN

Receptores de tipo toll (TLR)

Membrana plasmtica y
membrana endosmica de
clulas dendrticas, fagocitos,
clulas endoteliales de
linfocitos B
Citoplasma de fagocitos,
clulas epiteliales y otras
clulas

Receptores de tipo NOD

(NLR)

Receptores de tipo RIG (RLR)

Receptores similares a la
lecitina del tipo C

Citoplasma de fagocitos
Membrana plasmtica de
fagocitos

Receptores para N-formilmet-leu-fe

Membranas plasmticas de
fagocitos

PAMP O DAMP QUE

RECONOCE
LPS bacteriano,
peptidoglucanos y cidos
nucleicos vricos

Peptidoglucanos de la pared
celular bacteriana (flagelina,
dipptido muramilo, LPS) y
productos de clulas daadas
(cristales de urato
ARN vrico
Glcidos de superficie
microbiana con glucosa y
manosa terminales y
glucanos presentes en
paredes celulares de hongos
Pptidos que contienen Nformilmetionil.

RECEPTORES TOLL
Los receptores de tipo toll (TLR) reconocen productos de una amplia variedad de microbios.
Toll se identific originariamente en Drosophila como un gen implicado en el establecimiento
del eje dorsoventral durante la embriogenia de la mosca de la fruta. Despus se descubri que
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la protena Toll mediaba respuestas antimicrobianas en estos organismos. Este descubrimiento

llev a la identificacin de homlogos a Toll en los mamferos, que se denominaron receptores
de tipo toll. Hay 9 TLR funcionales diferentes en losseres humanos,
llamados TLR1 a TLR9.
Los TLR son glucoprotenas integrales de membrana. Presentan dos
dominios:
-

Dominio extracelular: Repeticiones ricas en leucina

flanqueadas por estructuras ricas en cistena. Participan en la
unin del ligando. El dominio extracelular tiene forma de
herradura.
Dominio intracelular: dominio TIR. Es un dominio homlogo al
receptor de IL-1. Es esencial para la produccin de seales.

LIGANDOS PARA EL TLR

-

LPS, componente de la pared bacteriana de las bacterias Gram

cido lipoproteico, componente de la pared bacteriana de las paredes Gram +
Flagelina, componente protenico de los flagelos de las bacterias mviles
ARN bicatenarios de algunos virus
Polisacridos con manosa micticos (mananos)
Protenas de choque tmico (HSC) que se secretan como consecuencia del estrs
celular
Caja del grupo de movilidad alta 1 (HMGB1), protena implicada en la transcripcin y
reparacin del DNA. 8

LOCALIZACIONES DE LOS TLR

Los TLR se encuentran en la membrana plasmtica y en la membrana endosomal de clulas
dendrticas, fagocitos, clulas endoteliales de linfocitos B.
-

Los TLR 1,2,4,5 y 6 se expresan en la membrana plasmtica, donde reconocen PAMP

del ambiente extracelular. Ej. El TLR2 reconoce el LPS y el TLR 4 el cido lipoproteico
de paredes bacterianas.
Los TLR 3, 7, 8 y 9 se expresan dentro de las clulas, en el retculo endoplsmico y las
membranas endosmicas, donde detectan cidos nucleicos. Ej. El TLR9 est
especializado en reconocer las secuencias no metiladas del DNA bacteriano.

Las HPS y las HMGB1 suelen ser intracelulares, pero pueden hacerse extracelulares cuando las liberan
clulas daadas o muertas.

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FUNCIONAMIENTO DE LOS TLR

El reconocimiento por el TLR de ligandos microbianos da lugar a la activacin de varias vas de
transmisin de seales y finalmente, a factores de transcripcin que inducen la expresin de
genes cuyos productos son importantes para las respuestas inflamatorias y antivricas.
-

En primer lugar, la unin del

ligando induce la dimerizacin
de los receptores TLR. Los
receptores TLR pueden
homodimerizar o
heterodimerizar.
A esto le sigue el reclutamiento
de protenas adaptadoras que
contienen un dominio TIR. Ej.
Protena adaptadora MyD88
Las protenas adaptadoras
facilitan el reclutamiento y
activacin de varias cinasas
Finalmente se activan factores
de transcripcin como el NF-KB
o el AP1

Diferentes TLR utilizan diferentes combinaciones de adaptadores e intermediarios de la

transmisin de seales.
-

Un TLR que se conecta con el adaptador MyD88 lleva a la activacin de NF-B

Un TLR que se conecta con el adaptador llamado TRIF lleva a la activacin de IRF3

Todos los receptores, a excepcin de TRF3, envan las seales a travs de MyD88 y son capaces
de activar NF-B y de inducir una respuesta inflamatoria.
Los TLR endosomales que han de dar lugar a una respuesta antiviral (TRF 4, 7 y 9) inducen
factores de respuesta a interfern.

RESPUESTA INFLAMATORIA
La principal va por la que el sistema inmunitario innato se enfrenta a las infecciones y a la
lesin tisular es estimulando la inflamacin aguda. Una de las principales citoquinas
proinflamatorias es la IL-1.
La principal fuente celular de Il-1 son los fagocitos mononucleares activados, es decir, los
macrfagos. La IL-1 tambin puede ser producida por neutrfilos, las clulas epiteliales y las
clulas endoteliales.
La produccin de Il-1 suele precisar de dos seales distintas: una que activa la transcripcin
gnica y la produccin de un precursor polipeptidico de 33 kD (proleucina) y una segunda seal

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que activa al inflamosoma para que escinda mediante protelisis al precursor para generar una
protena madura de 17 kD.

FAGOCITOSIS
La fagocitosis es un proceso activo de engullido de partculas que precisa energa:
-

En primer lugar, los neutrfilos y los macrfagos expresan receptores que reconocen
de forma especfica microbios.
Una vez que el microbio se une al receptor, la membrana plasmtica del fagocito
comienza a redistribuirse y extiende una proyeccin en forma de copa alrededor del
microbio
Se forma una vescula intracelular, conocida con el nombre de fagosoma, que contiene
la partcula extraa y se desprende de la membrana plasmtica.
La fusin de las vacuolas fagocticas (fagosomas) con los lisosomas da lugar a la
formacin de fagolisosomas, donde se concentran la mayora de los mecanismos
microbicidas

TIPOS DE MECANISMOS MICROBICIDAS

-

Especies reactivas del oxgeno (ROS): el principal generador de radicales libres es la

oxidasa del fagocito. La funcin de esta enzima es reducir el oxgeno molecular en
especies reactivas de oxgeno, como los radicales superxido. El superxido se
transforma por accin enzimtica en perxido de hidrgeno.
xido ntrico: el xido ntrico es producido por un enzima conocida como xido ntrico
sintasa
Enzimas proteolticas: una de las enzimas importantes de los neutrfilos es la elastasa,
una proteasa de serina de amplio espectro que se sabe necesaria para matar muchos
tipos de bacterias.

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5. BASES DE LA RESPUESTA INMUNITARIA:

INMUNIDAD ADAPTATIVA
Existen dos tipos de respuestas inmunitarias adaptativas:
En la inmunidad humoral los linfocitos B producen anticuerpos que pasan a la sangre y a las
secreciones mucosas. Los anticuerpos reconocen los antgenos, neutralizan la infecciosidad de
los microorganismos extracelulares y los marcan como una diana para su eliminacin mediante
diversos mecanismos efectores.
La inmunidad celular queda a cargo de los linfocitos T. Los microbios intracelulares, como los
virus y algunas bacterias, sobreviven y proliferan en el interior de fagocitos y de otras clulas
del anfitrin, donde los anticuerpos circulantes secretados por linfocitos B no los tienen a su
alcance. Los linfocitos pueden actuar de dos formas diferentes:
-

Linfocito T cooperador CD4+: secretan protenas llamadas citocinas. Las citocinas

secretadas por los linfocitos T cooperadores estimulan la proliferacin y diferenciacin
de los propios linfocitos T, y activan otras clulas, incluidos los linfocitos B y los
macrfagos. Una vez activados, los macrfagos eliminan los microbios que han
fagocitado
Linfocito T citotxico CD8+ (CTL): mata a las clulas infectadas y elimina los reservorios
de la infeccin.

ANTGENOS Y ANTICUERPOS
Un antgeno es cualquier sustancia capaz de ser reconocida de forma especfica por algn
anticuerpo o por el receptor de las clulas T (BCR o Igs y TCR)
Un anticuerpo es cualquier protena capaz de reconocer y unirse a los antgenos.
Distinguimos tres tipos de receptores de antgenos:
-

En las clulas B se llaman BCR (que son las inmunoglobulinas/anticuerpos)

En las clulas T se llaman TCR. Este tipo de receptor tiene una restriccin, pues
solamente va a ser capaz de reconocer el antgeno cuando sea presentado por un MHC
En las clulas presentadoras de antgenos (APCs) es el MHC (complejo mayor de
histocompatibilidad)

ANTGENOS
Los antgenos son muy heterogneos:
-

Protenas: son las que tienen mayor inmunogenicidad (aquellas mayores de 4kDa).
Polisacridos de alto peso molecular
Lpidos y cidos nucleicos: son poco inmunognicos, salvo cuando van asociados a
protenas.

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-

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Haptenos: son molculas de bajo peso molecular (como frmacos o metales pesados)
que pueden ser antgenos, pero son incapaces de generar respuesta inmune si no es
en presencia de un acarreador (de naturaleza proteica).

En este mbito, debemos introducir otros dos conceptos:

-

Inmungeno: cualquier sustancia capaz de ser reconocida por TCR, BCR o Igs y que
genere una respuesta inmune
Tolergeno: cualquier sustancia capaz de ser reconocida por TCR, BCR o Igs y que
genere tolerancia

En la estructura de los antgenos encontramos los determinantes antignicos/eptopos, que

son cualquier forma o superficie disponible en una molcula que pueda reconocer un
anticuerpo. Un antgeno puede tener varios eptopos, que podrn ser reconocidos por
anticuerpos diferentes. Los eptopos pueden ser:
-

Conformacionales. Estn formados por aminocidos que no estn en una secuencia,

pero se yuxtaponen en el espacio en la protena plegada.
Lineales. El eptopo est formado por varios aminocidos adyacentes. Si aparecen
determinantes lineales en la superficie externa o en una regin de conformacin
extendida en la protena original plegada, pueden ser accesibles a los anticuerpos. Lo
ms frecuente es que los determinantes lineales sean inaccesibles en esta
conformacin original y aparezcan solo cuando se destanuraliza la protena.
Neoantignicos. Las protenas pueden verse sujetas a modificaciones (glucosilacin,
fosforilacin, protelisis). Estas modificaciones, al alterar la estructura de la protena,
pueden producir nuevos eptopos que denominamos neoantignicos.

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INTERACCIN ANTGENO/ANTICUERPO
Las inmunoglobulinas cuentan con una regin especfica encargada de reconocer los
antgenos. Existe una complementariedad estrica entre ambos que hace que el encuentro sea
eficiente. Pero adems, la interaccin est mediada por fuerzas de unin. Todo ello permite un
encuentro reversible pero con cierta estabilidad.
Los tipos de interaccin Ag-Ac son enlaces dbiles no covalentes. Los ms comunes son las
interacciones electrstaticas que permiten una unin estable entre eptopo y partopo (que
es lugar especfico de unin del eptopo al ancitcuerpo):
-

Carga-Dipolo
Dipolo inducido
Dispersin (van der Waals)
Puentes de Hidrgeno

La fuerza en la interaccin Ag-Ac depende de:

-

Afinidad por la unin Ag-Ac: define la fuerza con la que un nico sitio de unin en un
anticuerpo se une al eptopo del antgeno. Esta afinidad se mide por una constante de
disociacin Kd(10-7-10-11). A Kds ms bajas, mayor afinidad en la interaccin del
complejo Ag-Ac. Por tanto, la afinidad ser el resultado de la suma de las fuerzas de
atraccin y repulsin entre el eptopo y el partopo.
Avidez: define la capacidad sumatoria que tiene un anticuerpo para unir un antgeno.
La avidez es mayor que la afinidad, ya que un anticuerpo tiene al menos dos sitios de
unin a antgenos (pues tienen forma de Y). Avidez= Afinidad x Valencia*
Especificidad: un anticuerpo reconoce un antgeno concreto y cualquier cambio
estructural en el antgeno hace que no sea reconocido por ese mismo anticuerpo.

*La valencia de la interaccin puede ser:

-

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Monovalente. Los antgenos monovalentes, o

eptopos separados en las superficies celulares,
interactan con un solo lugar de unin en la
molcula de anticuerpo.
Bivalente: cuando en una superficie celular estn
suficientemente cerca determinantes repetidos,
pueden unirse las dos zonas de unin al antgeno
de una sola molcula de IgG, lo que lleva a una
interaccin con alta avidez.
Polivalente: es el caso de las IgM que tienen 10
lugares idnticos de unin al antgeno, que podran
unirse en teora y de forma simultnea a 10
determinantes repetidos en una superficie celular,
lo que da lugar a una interaccin polivalente de
mayor avidez.

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ANTICUERPOS: SUPERFAMILIA DE LAS INMUNOGLOBULINAS

Otra forma comn de llamar a los anticuerpos es inmunoglobulina, que se refiere a la porcin
que confiere inmunidad de la fraccin de globulinas gamma. En inmunologa, se usan los
trminos inmunoglobulina y anticuerpo de forma intercambiable.
La superfamilia de las Igs son glicoprotenas solubles o de membrana- cuya funcin principal
es unir el antgeno para eliminar los microorganismos que lo producen.
-

Igs de membrana: constituyen el receptor de los linfocitos B (BCR) que no han

finalizado su maduracin
Igs solubles: son secretadas por las clulas plasmticas (que son linfocitos B
competentes)

La especificidad de ambas Igs es la misma siempre que procedan de un mismo clon de linfocito
B.

Cuentan con una porcin extracelular, transcelular e intracelular, donde se localiza una cola
citoplasmtica muy pequea (que por s misma genera una sealizacin poco eficiente). Es por
ello que suelen ir acoplados a co-receptores que refuercen la seal que activa al linfocito B.
*Los CDs son molculas que se expresan en la superficie de las clulas inmunes y que nos
permiten determinar en qu linaje celular las clasificamos, pero adems actan como coreceptores. Muchos de los CDs pertenecen a la familia de las Igs.
RECEPTOR DE LINFOCITOS B
Se trata de una Ig de membrana cuya funcin es unir especficamente un antgeno. Dispone de
una cola citoplasmtica pequea e interacciona con el co-receptor CD79, para reforzar la
seal y activar el linfocito B.
ESTRUCTURA
Las Igs se estructuran en lminas antiparalelas (polipptidos antiparalelos). Los dos
extremos de la Y presentan las regiones determinantes de complementariedad (CDR), que
son aquellas que deben quedar expuestas para el reconocimiento especfico del antgeno.
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Cada Ig est formada por:

-

2 cadenas pesadas (H) idnticas de peso molecular entre 55 a 77 kDa

2 cadenas ligeras (L) idnticas en la parte exterior con un peso molecular de
entre 23 a 26 kDa

Todas las cadenas (ligeras con pesadas, y pesadas entre s) estn unidas mediante puentes
disulfuro (S-S) tremendamente estables. Uniendo las cadenas pesadas y las ligeras
encontramos una especie de horquilla (hinge) que proporciona flexibilidad de reconocimiento
al anticuerpo. As, ambos brazos pueden abrirse o cerrarse para adaptarse a los antgenos de la
superficie celular.
En la regin N-terminal de las cadenas pesadas y ligeras de las Igs radica la especificidad, es
decir, son las regiones de reconocimiento del antgeno. Para que un anticuerpo sea capaz de
reconocer varios antgenos, esta regin N-terminal debe variar, por lo que se considera un
dominio variable.
La regin C-terminal siempre tiene la misma secuencia, no obstante ejerce diferentes
funciones efectoras en funcin del antgeno que se encuentre-. Se trata de un dominio
constante.

En las cadenas pesadas hablamos de VH para referirnos a la regin variable y CH para

referirnos a la regin constante. El dominio constante de las cadenas pesadas (CH) puede ser
de distinto tipo (;;;; o ), dependiendo del istopo de Ig del que estemos hablando. Las
cadenas ligeras puede ser de dos tipos: en el 60% de los casos sern , y en el 40% restante
sern . Para la regin variable hablaremos de Vk o V; y para la regin constante hablaremos
de Ck y C.
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ACCIN DE ENZIMAS PROTEOLTICAS SOBRE LOS ANTICUERPOS

DIGESTIN CON PAPAINA
Nos permite llevar a cabo el estudio de:

Fc. Corresponde al extremo C-terminal de las dos

cadenas pesadas. Este fragmento est constituido por
la regin constante de la cadena pesada y es
caracterstica de cada clase de inmunoglobulinas. Es
en esta regin donde radican las funciones efectoras
de la molcula como son la fijacin del complemento,
la interaccin con los receptores celulares de
monocitos y macrfagos, la interaccin con la protena
A de S. aureusy G de Streptococcussp... La regin Fc es
caracterstica de especie.
F(ab). Corresponde al extremo N-terminal de una
cadena pesada y a una cadena ligera, unidas por
puentes disulfuro. Tiene reconocimiento monovalente
del eptopo.

DIGESTIN CON PEPSINA

Permite llevar a cabo el estudio de F(ab)2, que corresponde al extremo N-terminal de las dos
cadenas pesadas y a las dos cadenas ligeras. Tiene reconocimiento divalente del eptopo.

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REGIONES HIPERVARIABLES
La mayora de las diferencias en la secuencia y la variabilidad entre diferentes anticuerpos se
limitan a tres secuencias cortas en la regin V de la cadena pesada y a tres secuencias en la
regin V de la cadena ligera. Estas se llaman regiones hipervariables (CDR1, CDR2 y CDR3). En
una molcula de anticuerpo, las tres regiones hipervariables de un dominio VL y las tres del
dominio VH se unen para formar una superficie de unin antgeno (son las determinantes del
reconocimiento antignico). Esto es posible gracias a la organizacin de las cadenas de
inmunoglobulinas en lmina beta antiparalela, que dejan expuestos los loops donde residen
las regiones hipervariables.

Estas regiones cuentan con un menor plegamiento en el DNA, porque son las que van a estar
ms expuestas y van a entrar en contacto con el antgeno. Por tanto las regiones hipervariables
determinan la especificidad. Un linfocito B con una especificidad antignica, va a producir Igs
con la misma especificidad igual regin variable.

GENERACIN DE DIVERSIDAD EN EL SISTEMA INMUNE

El sistema inmune debe ser capaz de reconocer virtualmente todo agente patgeno tanto si
existe como si aun no ha sido generado. Por qu somos capaces de responder a todo? Porque
en nuestro genoma codificamos anticuerpos especficos diferentes gracias a procesos de
recombinacin gnica.
Cada individuo puede producir clulas B y T con 1015 a 1018 especificidades diferentes.
Tenemos anticuerpos y receptores de linfocitos T (TCR) que reaccionan prcticamente con
cualquier compuesto incluyendo aquellos que son sintticos y que nunca existiran en la
naturaleza. La mayora de esta diversidad es generada mediante un reordenamiento de
segmentos gnicos de los cromosomas que codifican para las cadenas de estos receptores, lo
cual ocurre de forma previa a la exposicin a antgeno. A pesar de las diferencias entre los
anticuerpos y los receptores de las clulas T, los procesos moleculares que dan lugar a la
diversidad son similares. La diversidad de clulas B y T producidas se llama repertorio. De este
repertorio, una fraccin pequea (<5%) responder contra un determinado antgeno.

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La diversidad de las regiones hipervariables de las Igs y de los receptores de linfocitos T

permite al anticuerpo (receptor) reconocer y encajar con una gran diversidad de antgenos.
Desde hace tiempo se han postulado una serie de teoras encaminadas a explicar este abanico
de posibilidades de reconocimiento:
1. Hiptesis de la cadena lateral (Ehrlich). Un linfocito B expone en su membrana todos
los receptores posibles (cadenas laterales), cada uno con una especificidad distinta.
Esta teora se desech porque necesitaramos millones de anticuerpos para reconocer
los millones de sustancias extraas que pueden llegar a la superficie de las clulas.
2. Hiptesis instructiva (Landsteiner). Los anticuerpos son molculas flexibles a los que el
antgeno instruye a adoptar una conformacin complementaria para su
reconocimiento. Segn esto, el sistema inmune reacciona produciendo anticuerpos
especficos frente a nuevos compuestos. Cul era este mecanismo? No se pudo
demostrar.
3. Teora de la seleccin clonal (Jerne y Burnett). El sistema inmune es capaz de generar
receptores (anticuerpos) antes incluso de que tenga lugar el contacto con el antgeno.
Esta teora postula que cada antgeno estimular a aquel linfocito o grupo de linfocitos
que posean en su membrana receptores capaces de reconocer y unirse
especficamente a l y, como consecuencia, se producir su proliferacin y
diferenciacin en clulas con las mismas caractersticas de reconocimiento que los
linfocitos originales (seleccin clonal). Pero cmo se crean los anticuerpos sin que
exista contacto con el antgeno? Dreyer y Bennet propusieron una hiptesis
demostrada finalmente por Tonegawa.
4. Dreyer y Bennett. Estos cientficos postularon que para que existiese tal elevada
capacidad de reconocimiento, algo deba pasar en la regin de reconocimiento del
anticuerpo que permitiese esa variabilidad. Identificaron las secuencias hipervariables
en las cadenas pesadas y ligeras. Estas regiones hipervariables estaban codificadas en
varios fragmentos gnicos.
El problema que planteaba esta teora es que era contraria al Dogma Central de la
Biologa un gen, una protena.
5. Tonegawa demostr la hiptesis de Dreyer y Bennet, proporcionando una solucin al
problema de la diversidad. Postula que hay una cantidad limitada de genes que
permutan de forma casi infinita para dar lugar a inmunoglobulinas con especificidades
para todos los antngenos. Fue Premio Novel en 1987. Tonegawa propone:
- Existen mltiples genes que codifican para las regiones variables (V) y
constantes (C) en la lnea germinal.
- Se pueden dar mutaciones somticas en dichos genes, haciendo que
codifiquen protenas distintas
- Se pueden dar recombinaciones somticas entre elementos genticos

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2013/14

A la hora de hablar de la estructura de las inmunoglobulinas, se contemplan tres tipos de

variabilidades:
a) Isotpicas: variaciones en la lnea germinal generadas por cambios en los segmentos
constantes de las cadenas pesadas y ligeras. Producen los distintos isotipos de Igs.
b) Alotpicas: variaciones determinadas por la variabilidad allica interespecie. No todos
los individuos tenemos la misma informacin gentica, pero s todos debemos
responder frente a los antgenos. Los clones de linfocitos que se generen en un
individuo u otro varan.
c) Idiotpicas: variaciones que afectan a los segmentos hipervariables de las cadenas
pesadas y ligeras.

MECANISMOS IMPLICADOS EN LA GENERACIN DE DIVERSIDAD

Desde la lnea germinal aparecen los siguientes mecanismos para determinar el repertorio de
linfocitos que vamos a tener:
1. Existen mltiples genes V (variables) de la lnea germinal
2. Los genes que codifican para los receptores de linfocitos estn organizados en forma
de segmentos gnicos con diversidad combinatorial: VJ(cadenas ligeras) y VDJ
(cadenas pesadas)
3. Las cadenas pesadas (H) pueden agruparse con dos tipos de cadenas ligeras: o
4. Entre las regiones codificantes del DNA hay intrones. Todos los procesos que
impliquen un corte (para eliminar los intrones) pueden cursar con fallos enzimticos,
de manera que lleven a cabo la escisin tres o cuatro nucletidos por delante o por
detrs del sitio de corte apropiado. En esto se fundamenta la mutagnesis insercional
o diversidad N; si el corte genera un nmero de nucletidos mayor del esperado pero
mltiplo de 3, se genera una una protena codificante. Si se genera un fragmento con
un nmero de nucletidos que no es mltiplo de 3, se deber eliminar.
5. Conversin gnica: exclusin allica. Para cada gen, heredamos un alelo materno y un
alelo paterno. As tanto nuestra madre como nuestro padre nos dejan alelos que
codifican para las cadenas ligeras kappa y lambda, y para las cadenas pesadas. Se
escoge un alelo de cada uno (por ejemplo cadena ligera kappa del padre y cadena
pesada del padre) para dar lugar a las Igs.
6. Imprecisiones de la recombinacin. La imprecisin en la recombinacin somtica
amplifica la diversidad combinatorial.
En el linfocito maduro se produce el siguiente mecanismo:
7. Hipermutaciones somticas en H y L (cadenas pesadas y ligeras). Son 10000 veces ms
frecuentes despus de la activacin de la clula B. Los linfocitos B de la mdula sea
inmaduros expresan IgM e IgD. La presentacin del antgeno e interaccin con el
linfocito T son necesarios para que se produzcan cambios en el isotipo de las Igs.
Adems, genera la maduracin de afinidad: seleccin de mutantes que posean una
afinidad por el antgeno elevada en las respuestas secundarias.

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2013/14

MECANISMOS EN LA LNEA GERMINAL

LOCALIZACIN CROMOSMICA DE LAS CADENAS DE LAS Igs
Los fragmentos gnicos que codifican para las cadenas pesadas y ligeras se encuentran en
cromosomas distintos, lo cual es otro motivo de variabilidad.
-

La cadena pesada (H) est localizada en el cromosoma 14 humano

La cadena ligera est situada en el cromosoma 2
La cadena ligera est localizada en el cromosoma 22 humano

La recombinacin gentica de la cadena pesada precede a la de la cadena ligera.

ORGANIZACIN GNICA DE LA CADENA PESADA DE LAS Igs
Los segmentos gnicos que formarn parte de la regin variable de la cadena pesada de las Igs
son los siguientes:
-

Segmento V (variable). Son aproximadamente 50 segmentos y tienen un

tamao de 95 aa
Segmentos D (diversidad). Son aproximadamente 20 segmentos y tienen un
tamao de 3-6 aa. Estas regiones estn ausentes en la cadena liviana (ligera)
Segmento J (unin). Abarca aproximadamente 6 segmentos y tienen un
tamao de 13 aa

El segmento gnico C (constante) formar parte de las regiones constantes de la cadena

pesada y son aproximadamente 9 (un locus por cada isotipo de Ig) y un tamao de alrededor
de 110 aa.
Estos segmentos que codifican para la cadena pesada estn localizados en el cromosoma 14.
En primer lugar tiene lugar la reorganizacin de los segmentos gnicos de la regin variable de
la cadena pesada. La informacin de los dominios variables se encuentra en tres segmentos (VD-J). Las diversas regiones VDJ se agrupan de mltiples formas diferentes (diversidad
combinatorial).
Los genes funcionales de los receptores de antgeno se crean solo en los linfocitos B y T en
desarrollo despus de los fenmenos de reorganizacin del DNA que hacen que segmentos
gnicos V, D y J seleccionados aleatoriamente se siten contiguos unos a otros.
Los factores de los linfocitos que median la recombinacin VDJ reconocen secuencias de DNA
denominadas secuencias sealizadoras de la recombinacin (RSS), localizadas en los extremos
3 de los segmentos de los genes V; en los extremos 5 de los segmentos de los genes J y
flanqueando a cada uno de los segmentos D a ambos lados. La secuencia de las RSS est
formada por:
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Una secuencia muy conservada de 7 nucletidos denominada heptmero

(normalmente CACAGTG)
Un espaciador de exactamente 12 o 23 nucletidos no conservados (regla 1213)
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-

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Una secuencia muy conservada y rica en AT que se llama nonmero

Las enzimas especficas que catalizan el proceso son el complejo de las VDJ recombinasas. Las
especficas en linfocitos son RAG-1 y RAG-2.
El proceso de recombinacin se puede dividir en cuatro fenmenos que suceden de forma
secuencial:
1. Sinapsis: dos segmentos codificadores seleccionados con
sus SSR adyacentes son aproximados por un fenmeno de
formacin de un bucle y se mantienen en esta posicin
para su posterior escisin, procesamiento y unin.
2. Escisin: se generan roturas enzimticas en la doble
cadena en las uniones entre las SSR y las secuencias
codificantes. Muchas veces estas roturas son asimtricas
3. Codificacin y procesamiento: los extremos codificadores
rotos (pero no los extremos SSR) son modificados
mediante la adicin o eliminacin de nucletidos P
(palindrmicos) y N. Los nucletidos P son aadidos por la
DNA polimerasa para corregir las roturas asimtricas. Los
nucletidos N son aadidos por la TdT para alargar y unir
los extremos codificantes rotos.
4. Unin: los extremos codificadores rotos, as como los
extremos
seal,
son
aproximados y ligados por un
proceso conocido como unin
de extremos no homlogos,
mediado por ligasas.

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2013/14

Una vez reorganizados, los segmentos VDJ quedan localizados por delante de un segmento C
y un segmento C. Las cadenas pesadas C dan lugar a una IgM, mientras que las cadenas
pesadas C dan lugar a una IgD. Es por esto que los linfocitos B inmaduros de la mdula sea
inicialmente expresan IgM y, posteriormente, son capaces de expresar IgD gracias al splicing
alternativo (eliminacin del segmento C)

LOCUS DE LAS CADENAS LIGERAS DE LAS Igs

Las cadenas ligeras estn codificadas en dos loci diferentes: el loci kappa en el cromosoma 2 y
el loci lambda en el cromosoma 22. Estos loci, codifican para las cadenas ligeras/livianas kappa
y lambda. Adems, cuentan con segmentos gnicos V y J, pero no segmentos D.
Si la reorganizacin de la cadena pesada es exitoso, ocurre el rearreglo de la cadena kappa. Si
el rearreglo de la cadena kappa es exitoso, la clula B expresa IgM con cadenas livianas kappa.
Pero si el rearreglo de la cadena kappa no es existoso, ser el gen lambda quien se reorganice.
As, si el rearreglo de lambda es exitoso, la clula B expresa IgM con cadenas livianas lambda.
Las regiones VL y JL se recombinan de manera aleatoria (diversidad combinatorial). El
mecanismo de recombinacin es el mismo que el explicado en las cadenas pesadas, pero sin
entrar en juego segmentos D.

RESUMEN DE LOS MECANISMOS IMPLICADOS EN LA GENERACIN DE DIVERSIDAD

-

Recombinacin de segmentos gnicos

Mutagenesis
insercional
o de unin derivada de los cortes del encima (introduccin de
34 LAURA BERZAL
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nucletidos P y N)
Posible unin de la cadena pesada o bien a una cadena ligera o a una cadena ligera

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MECANISMOS EN EL LINFOCITO MADURO: HIPERMUTACIONES

SOMTICAS, AUMENTO DE LA AFINIDAD, SECRECIN DE
INMUNOGLOBULINAS
HIPERMUTACIN SOMTICA
La hipermutacin somtica es el cambio de la regin constante de la Ig. Al cambiar la regin
constante, tendremos un nuevo isotipo de Ig. No obstante, el anticuerpo posee los mismos
dominios V y, por tanto, idntica especificidad por el antgeno.
La presentacin del antgeno e interaccin con el linfocito T son necesarios para que se
produzca la hipermutacin somtica.
PROCESO DE HIPERMUTACIN
En el cromosoma 14, junto a los segmentos VDJ existen unas regiones denominadas Switch.
Estas regiones son reconocidas por el enzima AID, enzima capaz de sustituir la citosina en
uracilo. Los uracilos son muy inestables y fcilmente eliminables por accin de la Pendonucleasa. Los huecos resultantes son reconocidos por los enzimas encargados de llevar a
cabo el cambio de isotipo: los segmentos VDJ se separan de los segmentos C y C. Pueden
unirse a:
-

C1: IgA1
C2: IgA2
C: IgE
C1, C2, C3, C4: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, respectivamente.

AUMENTO DE LA AFINIDAD

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El aumento de afinidad se consigue gracias a mutaciones somticas de las regiones V. A

medida que aumentan las mutaciones, la Kd de los linfocitos B es menor. El aumento de
afinidad por mutaciones en las regiones V no provoca cambios en las funciones efectoras de
los linfocitos (*las funciones efectoras dependen de las regiones constantes).
SECRECIN DE ANTICUERPOS
Los linfocitos B activados pueden cambiar la produccin de anticuerpos que se unen en gran
medida a la membrana, que contienen regiones transmembrana y citoplsmicas, a anticuerpos
secretados. Las regiones transmembrana y citoplsmica quedan expuestas y se producen
cambios en las funciones efectoras.

ISOTIPOS DE Ig
Los diferentes isotipos vienen definidos por la cantidad de hidratos de carbono unidos a la
regin constante de la cadena pesada de las inmunoglobulinas.
LAS REGIONES CONSTANTES DE LAS CADENAS PESADAS SON LAS RESPONSABLES DE LAS
FUNCIONES EFECTORAS DE LAS Ig. Los hidratos de carbono determinan la capacidad de las
inmunoglobulinas de activar el sistema de complemento y de unirse a los receptores Fc. Los
receptores Fc se encuentran localizados sobre todo en clulas del sistema innato.
Cuantos ms isotipos distintos sea capaz de generar un linfocito B, mayor ser el nmero de
funciones efectoras que pueda llevar a cabo.

IgG: representa entre el 80-85% del total de las Igs. Es la Ig ms abundante en suero. Es la
nica Ig que se puede transmitir al feto a travs de la placenta (transferencia pasiva de la
respuesta inmune). Es el anticuerpo ms importante en la respuesta secundaria a
antgenos timo-dependientes.
Entre sus funciones efectoras encontramos:
Neutralizacin del antgeno
Fijacin del complemento
Interaccin con receptores Fc

IgM: es la segunda inmunoglobulina ms abundante en suero. Forma pentmeros,

aumentando as su avidez. Para la formacin del pentmero, los diferentes monmeros se
unen mediante una cadena J (pequeo pptido rico en cistena). Es la Ig ms importante
en la respuesta inmune primaria. Entre sus funciones efectoras encontramos:
Neutralizacin de bacterias Gram y virus
Activacin de la va clsica del complemento

IgA: se localiza en secreciones mucosas, la piel, glndulas mamarias, saliva y lgrimas9.

Puede formar monmeros, dmeros y trmeros. Para formar dmeros y trmeros, los
monmeros se unen mediante una cadena J. Es muy importante en la inmunidad del

SECRECIN DE IgA: el proceso de secrecin est mediado por un pptido secretor. La IgA y el pptido
se secretan en vesculas. Una vez en el exterior, el pptido se elimina.

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recin nacido (se transmite al recin nacido durante la lactancia). Entre sus funciones
efectoras encontramos:
Neutralizacin de antgenos en las mucosas

IgD: no existe en todas las especies, nicamente en primates y roedores. Es bsicamente

un BCR (se localiza unida a la membrana de linfocitos). Es ms flexible que el resto de
inmunoglobulinas. Su expresin se pierde en clulas de memoria. Sus funciones efectoras
no se conocen con exactitud pero se piensa que est implicada en la maduracin de los
linfocitos B y que puede actuar como receptor para los linfocitos T.

IgE: su concentracin en suero es baja. Son Ig implicadas en la defensa frente a helmintos:

se encuentra unida a eosinfilos y mastocitos permitiendo que libere protenas
inflamatorias, protena principal bsica y protena principal catinica, eficaces en la
destruccin del parsito. Las IgE estn implicadas en fenmenos de hipersensibilidad.

FUNCIONES EFECTORAS DE LAS INMUNOGLOBULINAS

Como ya se ha repetido mltiples veces, las funciones efectoras de las Ig vienen determinadas
por su regin constante. Las funciones efectoras de los anticuerpos son:

Activacin del complemento: en principio, todas las Ig son capaces de activar la va

clsica del complemento. Pero la activacin del complemento por la va clsica es
llevada a cabo fundamentalmente por la IgM, seguida de la IgG. La regin variable de
los anticuerpos se une al antgeno, y es la regin constante la encargada de
interaccionar con las protenas del complemento. Se desencadena as una accin
citotxica de gran eficacia capaz de destruir la membrana celular de la clula afectada
o del agente patgeno.
Opsonizacin: los anticuerpos se unen a los antgenos, marcndolos. Los anticuerpos
que envuelven el antgeno son reconocidos por los receptores Fc de los macrfagos y
los neutrfilos. Se estimula la fagocitosis y la destruccin del patgeno.
Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos: los anticuerpos se unen a los
antgenos, marcndolos. Los anticuerpos que envuelven al antgeno son reconocidos
por clulas citotxicas, como los linfocitos NK.
Neutralizacin: Es el fenmeno por el cual algunos isotipos de inmunoglobulinas como
IgG, IgM e IgA son capaces unirse a una toxina, bacteria o virus y neutralizar su
actividad. En el caso de los virus, los anticuerpos cubren la parte viral necesaria para el
anclaje del virus a la clula.
Proteccin de mucosas: La IgA se localiza en las mucosas para potegerlas de la entrada
de agentes infecciosos. Su configuracin en forma de dmero o de tetrmero le
permite disponer de entre 4 y 8 sitios de unin al antgeno. Posee gran capacidad de
neutralizar algunos virus.
Aglutinacin: los anticuerpos crean conglomerados de partculas, bacterias y/o virus,
evitando su unin a otras clulas.
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2013/14

Eliminacin de parsitos: cuando la IgE unida a la membrana de los mastocitos

reconoce un antgeno, se activa la degranulacin del mastocito. Las quemoquinas y
citoquinas producidas por el mastocito atraen eosinfilos. Adems, se liberan una
serie de sustancias que provocan vasoconstriccin y movimientos peristlticos, con el
objetivo de destruir al agente infeccioso. Es una respuesta clave en la defensa frente a
helmintos.

APLICACIONES DE LOS ANTICUERPOS EN MEDICINA

Los distintos clones de linfocitos B generan diferentes anticuerpos frente a un mismo agente
patgeno. Los anticuerpos tienen diferente especificidad y van dirigidos a un eptopo distinto
del patgeno. Estos anticuerpos reciben el nombre de anticuerpos policlonales.
Pero en medicina lo que realmente interesa en producir cantidades ilimitadas de anticuerpos
idnticos, procedentes de un mismo clon de linfocito B, que reconozcan eptopos nicos con la
misma afinidad. Este tipo de anticuerpos se denominan anticuerpos monoclonales.
Cmo podemos obtener anticuerpos monoclonales en grandes cantidades?
En primer lugar se necesita un antisuero: mezcla de distintos clones de linfocitos B activados
gracias a la inoculacin de un antgeno a un ratn. Como los linfocitos B normales no pueden
crecer de forma indefinida, es necesario inmortalizarlos. Esto se consigue mediante la
hibridacin somtica celular entre u linfocito B normal (productor de anticuerpos) y una clula
de un mieloma. Estas lneas celulares productoras de anticuerpos, inmortalizadas y derivadas
de la fusin se denominan hibridomas. Por ltimo, hay que proceder a la seleccin de los
hibridomas que secretan el anticuerpo con la especificidad deseada. A partir del hibridoma
deseado podrn obtenerse grandes cantidades del anticuerpo monoclonal.
En resumen, para la sntesis de anticuerpos monoclonales han de seguirse los siguientes pasos

Inmunizacin del ratn

Aislamiento de los clones de linfocito B para crear el antisuero
Fusin de los linfocitos B con Melanocitos
Seleccin de los hibridomas de inters
Cultivo de los hibridomas de inters
Produccin de anticuerpos monoclonales en masa.

Si deseamos utilizar los anticuerpos monoclonales en pacientes, debemos humanizarlos. Los

anticuerpos humanizados (anticuerpos quimricos) estn constituidos por la regin variable
del anticuerpo del ratn (30%), y la regin constante de un anticuerpo humano (70%).
Si queremos humanizar an ms el anticuerpo, utilizaremos solo las regiones hipervariables
del anticuerpo del ratn. El resto de la molcula estar constituida por elementos procedentes
de anticuerpos humanos.
APLICACIONES DE LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES
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Investigacin:
Deteccin, cuantificacin y aislamiento de protenas
Activacin de enzimas
Soporte molecular: se utilizan para estabilizar otras molculas
Clnica:
Pruebas analticas y de diagnstico: deteccin de partculas tales como
marcadores tumorales, molculas de superficie
Uso teraputico: en enfermedades autoinmunes, cncer, transplantes,
enfermedades infecciosas Por ejemplo hay anticuerpos especficos que
bloquean receptores de molculas angiognicas

ANTICUERPOS MONO Y POLI ESPECFICOS

Por regla general, los anticuerpos son monoespecficos: solo son capaces de reconocer un
nico eptopo. Ahora bien, tambin existen anticuerpos poliespecficos: capaces de reconocer
varios eptopos.
Un exceso de especificidad de los anticuerpos monoespecficos puede conllevar a un fallo en la
respuesta inmune. Hay anticuerpos que solo reconocen eptopos que presentan una
conformacin determinada. En casos en los que esta conformacin se ve alterada, puede
producirse un fallo en la interaccin antgeno-anticuerpo.
Las primeras inmunoglobulinas que se expresan son a M y la D. En el feto principalmente
presenta la G, que es transferida por la madre. Tras el nacimiento se produce un aumento de
M y G a medida que se desarrolla el sistema inmunolgico. Para el cambio de isotipo es
necesario la interaccin con antigeos y por eso se desarrolla el SI.

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6. ONTOGENIA DE LOS LINFOCITOS B

En la mdula sea10, gracias a diversos factores estimulantes de colonias, a partir de un
progenitor comn linfoide se origina un pro-linfocito B, que no expresa receptor en su
membrana. En el pro-linfocito b ya comienza la reorganizacin de los segmentos gnicos que
darn lugar a la regin variable de la cadena pesada de la Ig. El pro-linfocito B da lugar a un
pre-linfocito B. El pre-linfocito B expresa un pre-receptor IgM en su membrana.
En el siguiente estadio, el linfocito B inmaduro expresa un receptor IgM maduro. Finalmente,
el linfocito B maduro expresa tanto IgM como IgD. El linfocito B maduro no es 100%
competente, pues no es capaz de segregar inmunoglobulinas (solo puede reconocer antgenos
con sus receptores de membrana). Ha de migrar a los ganglios linfticos y rganos linfticos
secundarios11 donde:

Se lleva a cabo la presentacin del antgeno

Se encuentra con el linfocito T.

Es entonces cuando el linfocito T madura completamente. Aqu tiene lugar la proliferacin y

amplificacin clonal. Los linfocitos B se transformarn en una clula de memoria o en una
clula plasmtica capaz de producir cualquier isotipo de Ig. En total existen 9 isotipos de
inmunoglobulinas: IgE, IgD, IgM, IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4.
En este proceso de maduracin de linfocitos, existen puntos de control en diversos estadios:
-

Mdula sea:
Todos los pre-linfocitos B que no expresan un pre-receptor IgM en su
membrana son eliminados
Todos los linfocitos b maduros que no expresan tanto el receptor IgM como
IgD son eliminados
Los linfocitos B maduros que reconocen un autoantgeno con especificidad alta
sufren seleccin negativa12. Estos linfocitos no mueren, si no que quedan en
un estado de anergia clonal. Durante este periodo, el linfocito es capaz de
reorganizar nuevamente su receptor.
Podemos encontrar fenmenos de seleccin negativa en otros rganos linfoides.
Cuando se producen fallos en la seleccin negativa una vez que los linfocitos ya han
salido de la mdula, pueden generarse enfermedades autoinmunes.

Debido a la seleccin negativa, solo pasan a la circulacin el 5-10% del total de linfocitos que se
producen en un da.

10

En la mdula sea, la maduracin del linfocito es independiente del antgeno y del linfocito T
La maduracin del linfocito en los rganos linfoides secundarios es dependiente del antgeno y de los
linfocitos T.
12
Los procesos de seleccin negativa y positiva son dependientes de autoantgeno
11

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Marcadores de superficie del linfocito B maduro

-

CD21: receptor del complemento

CD40: interacciona con el receptor CD40L presente en el linfocito T.
CD79a y CD79b: forman parte del complejo BCR

En los ganglios linfticos, para completar su maduracin, el linfocito B ha de entrar en contacto

con el linfocito T. Esta interaccin se lleva a cabo entre el CD40 del linfocito B y el CD40L del
linfocito T y entre el B7 del linfocito B y el CD28 del linfocito T

ANTGENOS
No todos los antgenos son igual de inmunognicos. Los polisacridos son menos
inmunognicos que las protenas; y las protenas pequeas son menos inmunognicas que las
protenas grandes.
Los antgenos se pueden clasificar en dos grupos:

Antigenos timo dependientes: son antgenos de naturaleza proteica. No son capaces

de activar los linfocitos B directamente, sino que antes han de interaccionar con los
linfocitos T.
Antigenos timo independientes: no son capaces de interaccionar con los linfocitos T.
Activan a los linfocitos B directamente. Generan una respuesta secundaria muy dbil,
de intensidad similar a la respuesta primaria generada por una protena. Al no
interaccionar con linfocitos T, no favorecen la maduracin de la afinidad de linfocitos B
ni la generacin de clulas de memoria

Diferencias entre la respuesta primaria y secundaria

Cantidad y tipo de
anticuerpo
Afinidad
Tiempo de respuesta

Antgeno

41

RESPUESTA PRIMARIA
IgM en pequeas cantidades

RESPUESTA SECUNDARIA
IgG en grandes cantidades

Afinidad reducida
Se necesita un periodo de
tiempo largo, pues no hay
clulas de memoria

Gran afinidad
Se necesita un periodo de
tiempo corto gracias a la
existencia de clulas de
memoria
Una pequea dosis de
antgeno es capaz de generar
la respuesta del SI

Se requieren grandes
cantidades de antgeno

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7. COMPLEMENTO
El sistema del complemento est constituido por un conjunto de protenas: en su mayora son
protenas plasmticas, aunque tambin las hay ancladas a la membrana. El sistema del
complemento juega un papel primordial tanto en la inmunidad innata como en la inmunidad
adaptativa (es uno de los principales efectores de la inmunidad humoral). Las protenas del
complemento se activan por protelisis secuencial slo cuando se unen a una superficie celular
o a un complejo antgeno anticuerpo. En solucin, se inactivan por hidrlisis.
Tras la protelisis de las protenas del complemento, siempre surgen dos fragmentos: el
fragmento grande y el fragmento pequeo.
NOMENCLATURA DEL COMPLEMENTO
El sistema del complemento puede ser activado por 3 vas diferentes: la va clsica, la va
alternativa y la va de las lectinas. La nomenclatura es diferente para cada va:
-

Va clsica: las protenas se designan con la letra C, seguida de un nmero (ej.C1, C2).
Tras la protelisis, los fragmentos grandes se denominan con la letra b, mientras que
los pequeos con la letra a (ej. De la protelisis de C4 obtenemos C4a, C4b).
Va alternativa: las protenas se designan con letras maysculas (ej. B o C). Tras la
protelisis, los fragmentos grandes se denominan con la letra b, mientras que los
pequeos con la letra a (ej. Bb o Cb).
Va de las lectinas: en esta va estn implicadas lectinas de unin a manosa y ficolinas y
MASPs.

Todas estas vas convergen en un mismo enzima, el denominado C3 convertasa.

VA CLSICA
La va clsica es activada por anticuerpos. Los isotipos ms eficaces a la hora de activar esta va
son IgM, IgG1 y IgG3. Hay determinados isotipos, como por ejemplo IgG4, que no son capaces
de activar este sistema.
La va clsica se inicia con la protena C1. C1 es un complejo protenico multimrico grande,
formado por 3 subunidades:
-

C1q: es la responsable de la unin a la regin Fc de las cadenas pesadas de los

anticuerpos
C1r y C1s: son proteasas

Cada regin Fc de una Ig tiene un nico sitio de unin a C1q y cada molcula de C1q debe
unirse a dos cadenas pesadas de Ig para activarse. Aunque las IgM libres (circulantes) son
pentamricas, no se unen a C1q porque las regiones Fc de las IgM libres son inaccesibles. La
unin de IgM a un antgeno induce un cambio conformacional que expone los sitios de unin a
C1q. Por su estructura pentamrica, una sola molcula de IgM puede unirse a dos C1q.

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2013/14

Dado que cada molcula de IgG solo tiene una regin Fc, deben acercarse mltiples molculas
de IgG para que se pueda unir C1q. Mltiples anticuerpo de IgG quedan agrupados nicamente
cuando se unen a la superficie de un antgeno.
La unin de C1q a dos regiones Fc produce la activacin de C1r y C1s. El C1s activado escinde la
siguiente protena de la cascada, C4, generando C4b y C4a. C4b queda unido covalentemente a
los complejos antgeno-anticuerpo o a la superficie de una clula (ej. Una bacteria). C2 forma
entonces un complejo con C4b unido a la superficie celular. C1s escinde C2, generando C2a y
C2b. C2b permanece unido a C4b. El complejo C4b2b resultante es la C3-convertasa de la va
clsica. La C3-convertasa de la va clsica escinde C3, dando lugar a C3a y C3b. C3b se une a la
convertasa, formando el complejo C4b2b3b. Este complejo, conocido como C5-convertasa de
la va clsica, escinde C5.
A partir de aqu, comienza la formacin del complejo de ataque a la membrana (CAMP). C5b
mantiene transitoriamente una conformacin capaz de unirse a las protenas siguientes de la
cascada, C6 y C7. C7 es hidrfobo, y se inserta en la doble capa lipdica de las membranas
celulares, donde se convierte en un receptor de alta afinidad para una molcula de C8. La
formacin del CAMP completamente activo se alcanza tras la unin de C9. C9 es una protena
srica que polimeriza formando poros en la membrana plasmtica. Finalmente, se produce un
desequilibrio electroltico y la lisis celular.

VA ALTERNATIVA
Los nombres de va clsica y va alternativa surgieron porque la va clsica se descubri y
describi en primer lugar, aunque la va alternativa es fisiolgicamente ms antigua, y
responsable de la activacin del complemento en el 80-90% de los casos.
La va alternativa de activacin del complemento da lugar a la protelisis de C3 y la unin
estable de su producto de degradacin, C3b, a las superficies microbianas, sin participacin de
los anticuerpos. La va alternativa tambin se puede desencadenar a partir del C3b de las
membranas generado por medio de la va clsica.
C3 es una protena plasmtica que se hidroliza constantemente de forma espontnea dando
lugar a C3H2O. C3H2O es capaz de unirse a una protena plasmtica denominada factor B. El
factor B unido a C3H2O es escindido por una proteasa plasmtica denominada factor D. se
generan dos fragmentos: Ba y Bb. Bb permanece unido a C3H2O. El complejo C3H2O-Bb es la
denominada C3-convertasa de fase lquida de C3
La C3-convertasa de fase lquida de C3 escinde una nueva protena C3, generando C3a y C3b. El
C3b queda anclado en la superficie de la clula. Este C3b recluta un factor B. El factor B es
escindido por el factor D. Bb queda unido a C3b, formando el complejo C3b-Bb, conocido como
C3-convertasa de la va alternativa.
La funcin de la C3-convertasa de la va alternativa es escindir ms molculas de C3,
consiguiendo as una amplificacin secuencial. Se genera C3a y C3b. C3b se une a la propia
convertasa de la va alternativa. Esto da lugar a la formacin de un complejo conocido como
C5-convertasa de la va alternativa.
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A partir de este punto, la va alternativa sigue los pasos anteriormente explicados en la va

clsica.

VA DE LAS LECTINAS
La va de las lectinas se desencadena sin la necesidad de anticuerpos.
-

En primer lugar, las lectinas de unin a manosa y ficolinas, se unen a residuos de

manosa de la superficie de bacterias o virus.
Las MASP13 (serin proteasas) se asocian a la lectina de unin a manosa. MASP-2
escinde C4. Los fenmenos posteriores de esta va son idnticos a los que se producen
en la va clsica.

FUNCIONES DEL SISTEMA DEL COMPLEMENTO

Para ejercer sus funciones, las protenas del complemento han de ser reconocidas por
receptores expresados en distintos tipos de clulas (macrfagos, clulas dendrticas, linfocitos
B). Algunos de ellos son:
-

CR1 o CD35: presente en fagocitos.

CR2: expresado por linfocitos B
CR3 y CR4: expresado por fagocitos mononucleares, neutrfilos y linfocitos NK
C1q

1. OPSONIZACIN Y FAGOCITOSIS
Los anticuerpos unidos a los eptopos de la superficie de una bacteria son capaces de activar el
complemento. Entre otras cosas, se forma C3b, que queda anclado a la superficie bacteriana.
El C3b es reconocido por el receptor CR1 de los fagocitos. Este reconocimiento favorece que
los fagocitos engloben la bacteria y la eliminen.
2. LISIS BACTERIANA
La lisis bacteriana se lleva a cabo gracias a la formacin del complejo de ataque a la
membrana, cuya formacin tiene lugar mediante las vas explicadas anteriormente.
3. ELIMINACIN DE INMUNOCOMPLEJOS Y CLULAS APOPTTICAS
La unin de C1q a dos regiones Fc de un inmunocomplejo produce la activacin de la va
clsica. Se genera C3b. El C3b es reconocido por un CR1 de la membrana de un eritrocito. El
eritrocito capta el inmunocomplejo y lo conduce hasta el bazo o el hgado, rganos donde
existe una importante red de macrfagos tisulares. Los macrfagos, que tambin tiene
receptores CR1, fagocitan y destruyen el inmunocomplejo. Si los inmunocomplejos no se
eliminan debido a fallos en el complemento, se depositan en determinadas zonas del
organismo (ej. Glomrulo renal) produciendo patologas importantes.
13

En concreto MASP-2 y MASP-3

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4. RESPUESTA INFLAMATORIA LOCAL

Los fragmentos proteolticos del complemento C3a, C4a y C5a inducen la inflamacin aguda:
-

Producen un importante aumento de la permeabilidad vascular: separan las clulas

endoteliales, favoreciendo la llegada de los componentes del SI al foco infeccioso
Actan como sustancias quimiotcticas, capaces de reclutar leucocitos
Estimulas la actividad microbicida de algunos leucocitos (ej. Neutrfilos).

5. ACTIVACIN DE LINFOCITOS B Y SELECCIN DE LINFOCITOS B DE ALTA AFINIDAD

CR2 (o CD21) est presente en los linfocitos B, las clulas dendrticas foliculares y algunas
clulas epiteliales.
Los linfocitos B reconoce simultneamente el antgeno (mediante el BCR) y molculas del
complemento depositadas sobre el antgeno (mediante CR2). As se consigue mayor eficacia en
la activacin del linfocito.
Las clulas dendrticas foliculares presentan antgenos a los linfocitos. Los receptores Fc de la
clula dendrtica se unen a un complejo antgeno-anticuerpo, con objeto de presentrselo al
linfocito B. Si adems, el receptor CR2 reconoce un componente del complemento unido a un
antgeno, y a su vez este antgeno es reconocido por el BCR del linfocito B, se favorece la
seleccin del linfocito como un linfocito B de alta afinidad.

REGULACIN DE LA ACTIVACIN DEL COMPLEMENTO

La activacin de la cascada del complemento se encuentra regulada eficazmente para evitar la
activacin del complemento en las clulas normales del husped y limitar la duracin de la
activacin en las clulas microbianas y los complejos antgeno-anticuerpo.
La regulacin del complemento est mediada por muchas protenas circulantes y de la
membrana celular.
-

Inhibidor de C1 (C1 INH): inhibe la actividad proteoltica de C1r y C1s.

Inhibidores de la C3 convertasa y la C5 convertasa. Entre ellos encontramos protenas
de membrana (CD55, CR1, MCP) y protenas plasmticas14 (C4BP y factor H).
En la va clsica impiden la unin del C2b al C4b
En la va alternativa impiden la unin del Bb al C3b
Adems, todas las protenas citadas (CD55, CR1, MCP, C4BP y factor H) actan como
cofactores del factor I. El factor I es capaz de hidrolizar el C3b, dando lugar a
fragmentos inactivos (iC3b, C3d, C3dg)
Inhibicin del MAC: la formacin del complejo de ataque a la membrana se inhibe por
una protena de membrana denominada CD59. CD59 se une a C5b, impidiendo la
polimerizacin de C9.

14

Las protenas plasmticas diferencian las clulas normales del husped de las clulas bacterianas
porque en las superficies bacterianas hay menor cantidad de cido silico. Se depositan en las
superficies de clulas normales para evitar la activacin del complemento y la destruccin de dichas
clulas

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Adems de regulacin negativa, existe una regulacin positiva: la properdina se deposita sobre
todo en la superficie de las bacterias y activa de forma crnica la va alternativa

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8. LINFOCITOS T. RECEPTOR TCR

Los linfocitos T no son capaces de reconocer los antgenos protenicos en su conformacin
nativa. Solo responden a fragmentos peptdicos de antgenos protenicos que les son
presentados por las clulas presentadoras de antgenos (APC). Las APC que se encargan de
procesar (trocear en pptidos) las protenas antignicas son los macrfagos y las clulas
dendrticas.
La iniciacin de esta respuesta requiere:
-

Reconocimiento especfico del antgeno por los linfocitos T

Adhesin estable de los linfocitos T a las APC
Transduccin de seales activadoras al interior del linfocito T

Las APC exponen los fragmentos peptdicos en su membrana. Una vez que un clon de linfocito
T reconoce estos fragmentos, se produce la expansin clonal de dicho linfocito y la activacin
de otras clulas del sistema inmune.

INTERACCIN ENTRE APC Y LINFOCITO

Las clulas presentadoras de antgenos exponen los fragmentos peptdicos unidos a protenas
de su membrana (protenas del MHC). El linfocito T reconoce los complejos pptido-protena
del MHC gracias a su receptor TCR.
Un TCR es capaz de reconocer un nico complejo pptido- MHC. Existen millones de
combinaciones diferentes, y por tanto, millones de TCR diferentes.

ESTRUCTURA DEL TCR

El TCR es un heterodmero, formado por dos cadenas polipeptdicas transmembranarias,
denominadas y , unidas entre s covalentemente, mediante puentes disulfuro. Tanto la
cadena como la estn formadas por las siguientes regiones:
-

Dominio variable (V) N-terminal: regin ms alejada de la membrana plasmtica

Dominio constante (C)
Regin transmembrana
Pequea cola citoplasmtica

Por tanto, la porcin extracelular del heterodmero es estructuralmente semejante a una

molcula de Ig. Los dominio V, C, V y C estn formados por lminas antiparalelas
(dominio inmunoglobulina).
La variabilidad existente entre los TCR se debe a variaciones en pequeas secuencias de aa
localizadas en las regiones V de las cadenas y . Estas pequeas secuencias de aa son las
denominadas regiones hipervariables (CDR). Existen 3 CDR en la cadena y 3 CDR en la cadena
, denominadas CDR1, CDR2 y CDR3.
Las cadenas estn codificadas en un locus y las cadenas , en un locus diferente.
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Estas cadenas estn codificadas por mltiples segmentos gnicos que sufren reordenamientos
somticos durante la maduracin de linfocitos T. Aunque los genes del TCR estn presentes en
todas las clulas, solo los linfocitos T son capaces de llevar a cabo la reorganizacin gentica.
-

Cadena : el dominio V est codificado por los segmentos gnicos V y J. El dominio

C, queda codificado por el segmento C.
Cadena : el dominio V est codificado por los segmentos gnicos V,D y J. El dominio
C queda codificado por el segmento C

Las recombinasas Rag1 y Rag2 se encargan de reorganizar los segmentos de las regiones
variables. En la reorganizacin de los segmentos tambin se produce un aumento de
variabilidad gracias a:
-

Cortes asimtricos
Adicin de nucletidos N y P. Al incluir nuevos nucletidos se originan cambios en la
fase de lectura: estos cambios pueden dar lugar a receptores aberrantes o a nuevos
receptores funcionales.

Aproximadamente
somos
capaces de generar 1016 TCR
diferentes
La regin hipervariable CDR3
queda localizada en la zona
de unin de los VJ de las
cadenas alfa y en la zona de
unin de los VDJ de las
cadenas beta. Es en esta
regin hipervariable donde
se
genera
mayor
variabilidad.

MHC
Las protenas del MHC estn formadas por dos cadenas polipeptdicas. Cada MCH consta con
una hendidura extracelular encargada de unirse a los pptidos. Existen dos tipos de MCH
-

MHC1: formado por una cadena y una cadena 2. La hendidura queda delimitada
por dos dominios de la cadena , el dominio 1 y el dominio 2
MHC2: formado por una cadena y una . La hendidura queda delimitada por el
dominio 1 (localizado en la cadena ) y el dominio 1 (localizado en la cadena )

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RECONOCIMIENTO DE LOS ANTGENOS

Las regiones hipervariables (CDR) de los dominios V de las cadenas y son las encargadas de
reconocer los complejos pptido-MHC.
El TCR contacta con el complejo pptido-MHC con una orientacin diagonal:
-

Las regiones CDR1 de las cadenas y quedan en contacto con los extremos del
pptido
Las regiones CDR2 se unen al MHC
Las regiones CDR3 interaccionan con el centro del pptido.

TRANSDUCCIN DE SEALES
Las protenas CD3 y se asocian de forma no covalente al TCR. Cuando el TCR reconoce
antgenos, estas protenas asociadas transducen las seales, permitiendo la activacin del
linfocito T.
-

Las protenas son homodmeros, constituidos por dos cadenas

Las protenas CD3 son heterodmeros. Pueden estar constituidas por una cadena y
una o bien por una cadena y una

Adems de encargarse de la transduccin de seales, las protenas CD3 son fundamentales

para mantener la estabilidad del TCR.
Las protenas CD3 y presentan unas colas intracelulares con dominios ITAM. Los dominios
ITAM son ricos en tirosina. La transduccin de la seal se inicia por fosforilacin de tirosinas de
los dominios ITAM. A continuacin, protenas con un dominio SH3 (dominio de reconocimiento
de tirosinas fosforiladas) continan la cascada de sealizacin.

CORRECEPTORES
CD4 y CD8 son protenas capaces de unirse a molculas del MHC. Transducen seales que,
junto con las seales emitidas por el complejo TCR (TCR+CD3+ ), inician la activacin de los
linfocitos T.
CD4 y CD8 son glucoprotenas transmembrana:
-

El CD4 reconoce molculas del MHC2. Se expresa como un monmero.

El CD8 reconoce molculas del MCH1. Se expresa como un dmero.

La transduccin de seales est mediada por una tirosina kinasa (Lck) que se asocia de manera
no covalente, pero intensa, a las colas citoplasmticas de CD4 y CD8. Cuando el linfocito T
reconoce un complejo pptido-MHC mediante el TCR, la interaccin simultnea de CD4 o CD8
con el MCH acerca el correceptor unido a la LcK al complejo TCR. La Lck fosforila las tirosinas
de los dominios ITAM de las protenas CD3 y , inicindose la cascada de sealizacin.

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COESTIMULADORES
La familia mejor estudiada y ms importante de receptores coestimuladores de los linfocitos T
es la familia ce CD28. El CD28 interacciona con las protenas B71 y B72 de clulas
presentadoras de antgenos.
Cuando el linfocito T interacciona con el antgeno, comienza a expresar CTLA4. El CTLA4
compite con el CD28. CD28 no puede interaccionar con B71 y B72, atenundose as la
respuesta del linfocito T.

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9. COMPLEJO PRINCIPAL DE
HISTOCOMPATIBILIDAD
El complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) est presente en todos los vertebrados. En
cada especie, recibe un nombre diferente. En los seres humanos, nos referimos a l con las
siglas HLA. Las protenas que forman parte del HLA estn codificadas por genes HLA. Existen
numerosos alelos HLA en la poblacin, por lo que existen bastantes variaciones entre los
individuos.

DESCUBRIMIENTO DEL MHC

Se observ que existan una serie de molculas responsables del rechazo agudo de injertos
tisulares que se realizaban entre cepas consanguneas de ratones. Estas molculas (presentes
en los tejidos trasplantados) provocaban una respuesta inmunolgica que terminaba por
destruir el tejido. Al conjunto de todas estas molculas se le denomin complejo mayor de
histocompatibilidad.
Por ello, muchas veces se utiliza el trmino antgeno HLA para referirnos a las protenas del
MHC.
Existen muchas enfermedades causadas por disfunciones del MHC. Por ejemplo, la intolerancia
al gluten est estrechamente ligada a este complejo.

FUNCIONES DEL MHC

Las molculas del MHC estn implicadas en mltiples interacciones entre las clulas del SI.
Los linfocitos T no son capaces de reconocer los antgenos protenicos en su conformacin
nativa. Solo responden a fragmentos peptdicos de antgenos protenicos que les son
presentados por las clulas presentadoras de antgenos (APC). Las clulas presentadoras de
antgenos exponen los fragmentos peptdicos unidos a protenas del MHC.
Existen dos tipos de linfocitos T:
-

CD8+: linfocitos T citotxicos (Cd).

CD4+: linfocitos T cooperadores (Th)

Por otro lado, existen dos tipos de MHC:

-

MHC1: formado por una cadena y una cadena 2.

MHC2: formado por una cadena y una .

Los linfocitos CD8+ reconocen las molculas pertenecientes al MHC1, mientras que los CD4+
reconocen las molculas del MHC2.

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MHC1: VA ENDGENA
Las molculas del MCH1 se encargan de la presentacin de antgenos intracelulares (virus o
bacterias) la mayora de los cuales han sido sintetizados por la propia clulas (protena vrica).
Son molculas que informan al SI de la salud de la clula.
En el interior de la clula, la protena antignica es marcada por una serie de molculas,
quedando destinada a ser degradada por el proteosoma. El proteosoma es una estrucutra
tubular formada por una serie de anillos proteicos yuxtapuestos. Los anillos proteicos de los
extremos estn constituidos por protenas reguladoras, mientras que los de la regin central,
por proteasas. Las proteasas se encargan de digerir las protenas antignicas para dar lugar a
pptidos de un tamao menor de 20 aa.
Simultneamente al procesamiento de protenas antignicas, los ribosomas del RE sintetizan
protenas del MHC1. La cadena y la cadena son sintetizadas por separado. Una vez
formadas, las chaperonas las acompaan y median su ensamblaje. Entre las cadenas alfa y
beta no se establecen enlaces covalentes.
Los pptidos generados por el proteosoma se transportan hacia el RE. All, la protena TAP se
encarga de su transporte15 hacia la luz del RE. Los pptidos translocados hacia el interior del RE
se fijan a las molculas del MHC116. Estas ltimas estn unidas al transportador TAP a travs de
una protena denominada tapasina.
El complejo formado por el MCH1-pptido pasa del RE al aparato del Golgi, donde es
glicoxilado. Una vez lleva a cabo la glicoxilacin, las molculas del MHC1 con pptidos unidos se
expresan en la superficie celular. Los linfocitos T CD8+ reconocen especficamente estos
antgenos peptdicos matan las clulas infectadas, eliminando los reservorios de la infeccin.
CUNDO SE LLEVA A CABO ESTE PROCESO?
Se trata de un proceso continuo. La clula no es capaz de diferenciar sus propias protenas de
las protenas virales o bacterianas. Por tanto, est continuamente presentando pptidos
unidos a molculas del MCH1. Estos pptidos derivarn de sus propias protenas (cuando no
hay infeccin) o de un antgeno (cuando hay infeccin).
QU CELULAS LLEVAN A CABO ESTE PROCESO?
Todas las clulas del organismo, a excepcin de los hemates y alguna otra excepcin, expresan
molculas del MCH unidas a sus pptidos.

15

Es un transporte activo, dependiente de ATP

El tamao del pptido influye en la estabilidad de los complejos MHC-pptido. El tamao ptimo es de
unos 9 aa.
16

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MHC2
Las MCH2 estn presentes en los siguientes tipos celulares:
-

APC. Clulas dendrticas, macrfagos y monocitos.

Linfocitos B: los linfocitos B tambin son capaces de expresar molculas del MCH2.
Adquieren as la capacidad de presentar antgenos
Linfocitos T activos: los linfocitos T, cuando se activan, comienzan a expresar
molculas del MCH2. No se sabe muy bien la funcin que cumplen.
Clulas no pertenecientes al sistema inmune: en un contexto patolgico, de
inflamacin, clulas que no son del sistema inmune expresan molculas del MCH2.

Adems de expresar MCH2, todos los tipos celulares anteriores expresan MCH1.
Las molculas del MCH2 se encargan de la presentacin de antgenos extracelulares. Informan
al SI de la salud del entorno en el que se encuentran las clulas.
En primer lugar, el antgeno protenico extracelular ha de introducirse en la APC mediante:
-

Fagocitosis
Pinocitosis (antgenos solubles)
Endocitosis mediada por receptores. Por ejemplo, las Ig de membrana de linfocitos B
son capaces de reconocer e internalizar antgenos.

Despus de su interiorizacin, los antgenos protenicos quedan localizados en vesculas. Estas

vesculas se funden con los lisosomas, dando lugar a una estructura conocida como
fagolisosoma. En el fagolisosoma se lleva a cabo la degradacin del antgeno protenico,
gracias al pH cido y a la presencia de proteasas y reductasas17.
Simultneamente a este proceso, los ribosomas del RE sintetizan molculas de MHC2. Los
dmeros del MHC2 tienen una estructura inestable y su plegamiento y ensamblaje es facilitado
por carabinas residentes en el RE. Para evitar que los pptidos del RE se unan a las molculas
de MHC2, existe una cadena proteica, denominada cadena invariable, que bloquea el sitio de
unin del MHC2. Se forma as un trmero, formado por una cadena alfa, una beta y una cadena
invariable.
Pero, las cadenas invariables son capaces de trimerizar consigo mismas, dando lugar a
complejos formados por 9 molculas (3 cadenas invariables, cada una de ellas unida a una
cadena alfa y una beta).
Los complejos de 9 molculas, tras pasar por el aparato de Golgi, son transportados en
vesculas hacia el fagolisosoma. Las vesculas se fusionan con el fagolisosoma, dando lugar a
una estructura conocida como MIIC, visible al microscopio.
Dentro del MIIC se eliminan las cadenas invariables por accin combinada de las mismas
enzimas proteolticas que generan pptidos a partir de protenas y la molcula HLA-DM. Las
enzimas proteolticas degradan la cadena invariable dejando nicamente un residuo de 24 aa
17

Las reductasas son enzimas capaces de cortar puentes disulfuro.

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que bloquea el sitio de unin MHCII al pptido. Es la HLA-DM la encargada de eliminar este
ltimo residuo. La HLA-DM es una molcula MCH2 especial, encargada de facilitar los
intercambios entre el residuo de la cadena invariable y el pptido. No sigue la ruta de
membrana, est fija en el MIIC.
Finalmente, los complejos estables pptido-MHC2 son transportados en vesculas hasta la
membrana de las APC.
CUNDO SE LLEVA A CABO ESTE PROCESO?
Es un proceso continuo:
-

Cuando hay infeccin, las APC presentan pptidos procedentes de antgenos

extracelulares
Cuando no hay infeccin, las APC presentan pptidos captados del exterior,
procedentes de nuestras propias clulas.

EXCEPCIN
La activacin de los linfocitos CD8+ solo puede ser llevada a cabo por una clula dendrtica.
Esto constituye un especial problema, porque los antgenos que estos linfocitos reconocen se
producen en cualquier tipo de clula infectada, no necesariamente en una clula dendrtica.
Algunas clulas dendrticas especializadas tienen la capacidad de ingerir clulas infectadas y de
presentan antgenos de estas clulas unidos a sus MHC1 a los linfocitos T CD8+. Este proceso se
llama presentacin cruzada o cebado cruzado.

ESTRUCTURA DE LAS MOLCULAS DEL MHC

Todas las molculas del MHC estn formadas por una cadena y una . El pptido queda
localizado en una hendidura/surco.
MHC2
Las molculas del MHC2 estn compuestas de dos cadenas polipeptdicas (1 y 1) unidas de
forma no covalente (no existen puentes disulfuro extracatenarios). Las cadenas son parecidas
en su longitud, peso molecular y secuencia. Tiene una cadena alfa 1 y beta 1. Son cadenas
parecidas entre s en su longitud, peso molecular y secuencia.
Las MHC2 son protenas de membrana tipo 1: el dominio amino terminal de ambas cadenas
queda en el exterior de la clula. Parte de las protenas de las cadenas estn glicoxiladas.
Existen puentes disulfuro intracatenarios, que estabilizan la estructura de las cadenas.
Dominios de las MHC2
Cada cadena presenta:

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-

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2 dominios extracelulares: 1 y 2 en caso de la cadena ; y 1 2 en caso de la

cadena . Los segmentos 2 y 2 estn plegados como los dominios Ig. Los pptidos se
unen a la hendidura formada por los dominios 1 y 1.
1 dominio transmembrana
1 pequea cola citoplasmtica

MHC1
Las molculas de clase I estn formadas por dos cadenas polipeptdicas ( y 2m18) unidas de
forma no covalente. La cadena presenta mayor longitud que la , y est anclada a la
membrana plasmtica. La cadena no tiene un dominio transmembranario. Al igual que en las
molculas de MHC2, existen puentes disulfuro intracatenarios que estabilizan la estructura de
las cadenas.
Dominios de la cadena :
-

3 dominios extracelulares: 1, 2, 3. El dominio 3 est plegado como los dominios

de Ig. La hendidura donde queda localizado el pptido est formada por los dominios
1 y 2.
1 dominio transmembrana
1 pequea cola citoplasmtica

Dominios de la cadena :
La cadena no atraviesa la membrana plasmtica. Esta cadena en s misma constituye un
nico dominio.
ESTREUCTURA DE LAS HENDIDURAS DEL MHC
La hendidura de las MHC presenta un suelo y dos paredes laterales. El suelo est formado por
8 lminas antiparalelas. Las paredes, sin embargo estn constituidas por hlices . En estos
surcos, los pptidos se alojan desnaturalizados, extendidos, no se pliegan.
En las molculas del MHC2, las hlices de una y otra pared estn alejadas entre s. La
hendidura no est cerrada en sus extremos (en la regin central queda cerrada por las lminas
). Los pptidos pueden entrar o salir por estos extremos.
Las molculas del MHC 2 pueden albergar pptidos mucho ms largos que las del MHC1. En
muchos casos, se unen pptidos a medio cortar, que terminan de ser procesados una vez en la
hendidura.
Las molculas del MHC2 admiten mayor variacin entre los pptidos que las del MHC1.
Dependiendo el tipo de aa que encontramos en el surco (bsicos, cidos, polares), se podrn
unir unos pptidos u otros. Por ejemplo, si los aa son hidrofbicos, y el pptido contiene
prolina (tambin hidrofbica), se va a producir la unin. Pero si la hendidura contiene
asprticos y glutmicos, y en el pptido hay prolina, se producir una repulsin.
18

2m: 2 microglobulina.

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MOLCULAS DE CLASE 1 DEL TIPO B-27 (HLA-B27)

Los pptidos que se unen a las molculas HLA-B27, pueden presentan cualquier aa en las posiciones 1, 3,
4, 5, 6, 7 y 8. Sin embargo, en la segunda posicin ha de haber arginina; y en la novena, leucina,
fenilalanina o lisina.

A base de mutaciones al azar, los microorganismos pueden generar protenas que no tengan
ninguna secuencia apropiada para las molculas del MHC. Por ejemplo, si un virus muta de
forma que ninguna molcula del MHC es capaz de reconocerlo, el virus se vuelve invisible. En
general, esto sucede en seres vivos con MHC simples. Sin embargo, en los seres humanos no se
produce este fenmeno. Nuestro MHC es complejo. Para entender est complejidad hay que
conocer la gentica del MHC

GENTICA DEL MHC

Todos los genes del sistema HLA se agrupan en el brazo corto del cromosoma 6, con una
excepcin: la cadena 2m est codificada en el cromosoma 15.
En el brazo corto del cromosoma 6, los genes del MHC1 estn en la zona ms telomrica;
mientras que los del MHC2 quedan en la zona ms centromrica. Entre ambas zonas, existe
una regin donde encontramos genes denominados genes de clase III (a pesar del nombre,
estos genes no tienen nada que ver con el MHC).

MHC2
Tenemos 3 tipos diferentes de molculas de clase 2:
-

HLA-DP: la cadena est codificada por el gen DPA y la cadena por el DPB1
HLA-DQ: la cadena est codificada por el gen DQA1 y la cadena por el DQB1
HLA-DR: la cadena est codificada por el gen DRA1 y la cadena por el DRB1

Existen copias adicionales de los genes de las MHC2 (ej. DPA2, DPB2). En general, estas
copias no funcionan, no generan una cadena proteica, son pseudogenes. Sin embargo, existen
3 excepciones: el DRB3, DRB4 y DRB5 son funcionales.
En la zona centromrica del brazo corto del cromosoma 6, adems de los genes para las
cadenas y de las MHC2, encontramos:
- Los genes que codifican para la molcula DM: DMA (codifica para la cadena ) y DMB
(para la )
- Los genes que codifican para las dos cadenas del transportador TAP
- El gen de la tapasina.

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MHC1
Tenemos 3 tipos diferentes de molculas de clase 1:
-

HLA-A
HLA-B
HLA-C

La cadena es idntica para todas las molculas de clase 1. Est codificada por un nico gen
localizado en el cromosoma 15. Los genes que codifican para las cadenas son los siguientes:
-

HLA-A: codifica para la cadena de la molcula HLA-A

HLA-B: codifica para la cadena de la molcula HLA-B
HLA-C: codifica para la cadena de la molcula HLA-C

En la zona centromrica del brazo corto del cromosoma 6, adems de los genes para las
cadenas de las MHC1 encontramos:
-

Genes que codifican para las cadenas de molculas del MHC1 no clsicas:
o HLA-E
o HLA-F
o HLA-G
Genes que codifican para HFE, molculas que se utilizan en muchos procesos distintos,
como por ejemplo, el metabolismo del hierro. Cuando estos genes se ven afectados
por mutaciones, el individuo tiende a acumular hierro en su organismo.
Genes HLA no funcionales.
Genes que codifican para MICA, MICB y ULBP: protenas que se expresan solo en
condiciones patolgicas (la clula est infectada, tiene una desregulacin
metablica). Estas protenas no presentan pptidos, ellas mismas son la seal de
alerta.
Genes para CD1 : cadena proteica que dimeriza con la cadena 2m. La molcula
resultante de esta dimerizacin es capaz de presentar lpidos a linfocitos T especiales.
Genes que codifican para FcRN: molcula encargada del transporte de IgG.

VARIABILIDAD
Como ya hemos explicado, existen 3 molculas diferentes de clase 1 y tres molculas
diferentes de clase 2. Este hecho incrementa muchsimo nuestra capacidad de reconocer
pptidos diferentes.
Adems, somos organismos diploides. Heredamos un alelo del padre y un alelo de la madre.
Cada cadena de una molcula del MHC estar codificada en dos genes distintos. Si la secuencia
de aa es ligeramente diferente entre un gen y otro, podremos duplicar el nmero de molculas
distintas del MHC (polimorfismo). Los alelos que se reciben del padre y de la madre son
codominantes (ambos se expresan).
Normalmente, los genes que codifican para las molculas del MHC se transmiten juntos a la
descendencia: son haplotipos, raramente se produce recombinacin.
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DESEQUILIBRIO DE LIGAMIENTO
En los seres humanos, determinados alelos HLA presentes en diferentes locus, se heredan
conjuntamente con ms frecuencia de lo que cabra esperar por una asignacin al azar. Por
ejemplo, imaginemos dos alelos diferentes, uno codifica para HLA-A y otro para HLA-B. La
frecuencia de cada uno de estos alelos es de un 20%. Por azar, cabra esperar que estos alelos
apareciesen juntos en un 4% de los individuos. Sin embargo, este porcentaje es mucho mayor.
Se dice entonces que los alelos estn ligados. Este fenmeno es muy frecuente en el sistema
HLA, no solo para dos alelos, sino para muchos ms. El conjunto de alelos que suelen
heredarse juntos se denomina haplotipo. Los diferentes haplotipos son caractersticos de
distintas poblaciones del mundo.

CONCEPTOS DE RESTRICCIN Y RESPUESTA ALOGNICA

RESTRICCIN
El TCR de los linfocitos T no interacciona exclusivamente con el antgeno, sino tambin con la
molcula del MHC. Los linfocitos T son especficos para cada combinacin pptico-MHC. Un
linfocito capaz de reconocer un pptido unido a un MHC concreto, puede no reconocer ese
mismo pptido unido a una molcula de MHC diferente. Esto es lo que se conoce como
restriccin.
Por qu no se produce reconocimiento si cambia la molcula de MHC?
-

El pptido no es capaz de unirse a la nueva molcula de MHC

El pptido se une al MHC, pero la estructura global del complejo no encaja con el TCR
La molcula del MHC tiene una estructura que no encaja con el TCR

RESPUESTA ALOGNICA
Es una respuesta inmunitaria frente a clulas/tejidos u rganos de otro individuo de la misma
especie.
-

Respuesta alognica directa: los linfocitos T reconocen directamente los complejos

MHC-pptido. A primera vista, resulta sorprendente que los linfocitos T seleccionados
normalmente para limitarse al MHC propio sean capaces de reconocer molculas de u
MHC extrao. Cuando la idea de restriccin estaba en pleno desarrollo, se lleg a
pensar que esto no poda suceder. Pero hay que tener en cuenta que las clulas de
otro individuo presentan una gran variedad de combinaciones MHC-pptido y que el
individuo aceptor posee linfocitos T con TCR diferentes. Por azar, existir algn
linfocito T con un TCR capaz de reconocer una de las combinaciones MHC-pptido.
Respuesta alognica indirecta: las clulas procedentes de otro individuo son captadas,
ingeridas y digeridas por una APC. Estas clulas expresaban molculas de HLA, que
tambin son digeridas. Los pptidos resultantes de la digestin de las molculas de
HLA de las clulas de otro individuo, son presentados por las APC a linfocitos T.

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En el ser humano tienen lugar ambos procesos. En la respuesta alognica tambin participan
los linfocitos B y las clulas NK. Como consecuencia de esta respuesta, los trasplantes de
clulas, tejidos u rganos pueden ser rechazados por el organismo aceptor.
RESPUESTA ALOGNICA Y EMBARAZO
El embrin presenta genes HLA heredados de la madre, pero tambin genes HLA heredados del padre. En la
madre, se general anticuerpos contra las molculas HLA extraas del embrin. No obstante, es una respuesta
inmune contenida y controlada, que no causa ningn problema.

MOLCULAS NO CLSICAS DEL MHC1

Las molculas no clsicas son menos polimrficas que las molculas clsicas (existen menos
alelos diferentes en la poblacin). Su funcin principal no es la de presentar pptidos. Parecen
llevar acabo funciones reguladoras, sobre todo de las clulas NK.
Las molculas no clsicas del MHC1 son:
-

HLA-E: se expresa en la mayora de las clulas de nuestro organismo. Las HLA son
protenas de membrana. Toda protena de membrana est precedida por un pptido
seal. Una vez que lleva a cabo su funcin, el pptido es escindido. Las molculas HLAE se unen a los pptidos seal procedentes de otras molculas de HLA. Sin embargo,
no son capaces de interaccionar con su propia secuencia seal. Las molculas de HLA-E
informan de que la sntesis del resto de molculas HLA es correcta.
Existen determinados patgenos capaces de sabotear la expresin de HLA de clase 1.
Ej. CMV (citomegalovirus). En la actualidad, el 95% de los adultos estn infectados por
este virus. Es un virus complejo, que en general no causa patologa. El genoma del
CMV codifica para protenas que interfieren en las sntesis de HLA de clase 1. Las HLA
de clase 1 son retenidas en el retculo y devueltas al citosol, donde se produce su
degradacin.

HLA-F

HLA-G: Se localiza principalmente en la placenta. Est relacionada con la regulacin de

la respuesta inmune durante el embarazo.

INTERACCIN ENTRE LINFOCITOS NK Y MOLCULAS DEL MHC

Una de las funciones de los linfocitos NK es matar clulas infectadas y clulas tumorales. Las
clulas infectadas y las clulas tumorales expresan niveles ms bajos de HLA que las clulas
sanas.

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Las clulas NK expresan una serie de receptores inhibidores capaces de reconocer las
molculas del MHC1. En mamferos se han descrito 4 tipos de receptores inhibidores. No
obstante, el ser humano solo presenta 3 de estos 4 tipos de receptores:
-

KIR: pertenece a la superfamilia de las Ig. Existen 12 tipos de receptores KIR. Un

receptor KIR es especfico para una molcula determinada de HLA.
LILRB1: pertenece a la superfamilia de las Ig. Es capaz de reconocer mltiples
molculas de HLA de clase 1
CD94: receptor de HLA-E

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10. LINFOCITOS T. ONTOGENIA Y

DIFERENCIACIN EN EL TIMO
RECORDATORIO
Las clulas presentadoras de antgenos exponen los fragmentos peptdicos unidos a protenas
de su membrana (protenas del MHC). El linfocito T reconoce los complejos pptido-protena
del MHC gracias a su receptor TCR. El TCR confiere especificidad: es capaz de reconocer un
nico complejo pptido- MHC. Existen millones de TCR distintos. Las diferencias entre unos y
otros radican en las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y DR3 de las cadenas y .
El TCR del linfocito no solo interacciona con el pptido, sino tambin con el MHC. Existen una
serie de protenas asociadas al receptor de linfocitos T que participan en la transduccin de la
seal:
-

CD3 y
Correceptores CD4+ y CD8+
Coestimulador CD28

La maduracin de linfocitos T se produce completamente en el timo: los progenitores linfoides

comunes, o alguna progenie poco caracterizada, migran desde la mdula sea hacia el timo, y
se alojan en la corteza. A medida que van madurando, se desplazan hacia la mdula, de
manera que esta contiene, sobre todo, linfocitos T maduros. Entre los linfocitos T del timo se
localizan las clulas del estroma: los macrfagos, las clulas dendrticas y las clulas epiteliales
se encargan de la presentacin de antgenos propios unidos a sus MHC1 y MHC2. Las APC se
limitan casi exclusivamente a la mdula, aunque podemos encontrar alguna en la corteza.

ETAPAS EN LA MADURACIN DE LINFOCITOS T

CORTEZA
EXPANSIN PROLIFERATIVA
Los precursores de linfocitos T que llegan a la corteza del timo no expresan TCR: an no se ha
llevado a cabo la recombinacin de los segmentos gnicos que darn lugar a las cadenas y .
Se produce una expansin proliferativa con el objetivo de obtener el mayor nmero de
precursores posibles para poder realizar el mayor nmero de recombinaciones posibles. Esta
es una de las razones por las que la celularidad es mayor en la mdula que en la corteza del
timo.

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CONVERSIN DE UN LINFOCITO DOBLE NEGATIVO (DN) EN UN LINFOCITO DOBLE POSITIVO

(DP)
Los precursores de linfocitos T que llegan a la mdula sea no expresan ni CD8+ ni CD4+. Por
ello reciben el nombre de linfocitos con doble negatividad. La mayora de los linfocitos
negativos dobles dar lugar a linfocitos con doble positividad (expresan tanto el CD4+ como el
CD8+).
-

En los linfocitos con doble negatividad se produce la reorganizacin de la cadena del

TCR. Un exn D se recombina con un exn J, para dar lugar a un segmento DJ. El
segmento DJ se recombina con el exn V, obtenindose as VDJ. Cuando VDJ se une a
un exn C, comienza la sntesis de la cadena del TCR
La cadena dimeriza con una protena pT. El dmero formado por ambas cadenas se
expresa en la membrana del linfocito T con doble negatividad. El conjunto pT-
expresado en la membrana recibe el nombre de pre-TCR
Una vez en la membrana, el pT del pre-TCR lleva a cabo las siguientes funciones:
Se une a la protena CD3. En el momento en que se forma este complejo, CD3
manda una serie de seales intracelulares que:
Inducen la proliferacin del clon de linfocito T
Inhiben la apoptosis
Inhiben la recombinacin del otro locus de la cadena (recibimos un
locus de la madre y un locus del padre).
Activa la transcripcin gentica de las recombiansas Rag1 y Rag2, para que
lleven a cabo la sntesis de la cadena
Induce la expresin de membrana de CD4+ y CD8+. Los linfocitos que expresan
CD4+ y CD8+ se denominan linfocitos con doble positividad.

REORGANIZACIN DE LA CADENA ALFA

La onda de expresin del gen Rag inducida por el pT, promueve la recombinacin de la
cadena del TCR. Un exn V se recombina con un exn J, formando un segmento VJ. A
continuacin, el segmento VJ se combina con un segmento C. La cadena recin sintetizada
sustituye al pT, dando lugar a un receptor TCR.
*RECORDATORIO: no solo existen TCR , sino tambin . El gen para la cadena del TCR
est dentro del locus para la cadena . En el momento en que se produce la recombinacin de
los segmentos de la cadena , el gen se inactiva.
Un 95% de los clones sufren recombinaciones aberrantes o terminan por no recombinar por
fallos en el procesamiento. Estos clones mueren por apoptosis.

MDULA
CONVERSIN DE UN LINFOCITO DOBLE POSITIVO (DP) EN UN LINFOCITO SINGLE POSITIVE
En la mdula tmica encontramos dos tipos de clulas:
-

Linfocitos T con doble positividad: expresan TCR, CD8+ y CD4+

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-

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Clulas del estroma: clulas presentadoras de antgenos que expresan molculas del
MHC1 y MHC2 unidas a pptidos propios.

En temas anteriores se ha explicado que un clon de linfocito T es especfico para un nico

complejo MHC-pptido. Sin embargo, esto no es del todo cierto. Los linfocitos pueden
reconocer varios complejos MHC-pptido, aunque con distintas afinidades: el complejo MHCpptido que interaccione con mayor afinidad, ser el nico capaz de activar al linfocito T.
1. SELECCIN NEGATIVA
Los linfocitos cuyos receptores reconocen complejos MHC-pptido con avidez alta sufren
apoptosis.
2. AUSENCIA DE SELECCIN POSITIVA
Los linfocitos cuyos receptores no reconocen en absoluto o reconocen muy dbilmente los
complejos MHC-pptido sufren apoptosis. Si no hay interaccin con ningn complejo significa
que el linfocito no es capaz de reconocer nuestro MHC.
3. SELECCIN POSITIVA
La seleccin positiva es el proceso por el cual se estimula/promociona la supervivencia de los
linfocitos cuyo TCR reconoce con avidez baja a los complejos MHC-pptido.
CONCLUSIN: en el timo se promocionan aquellos linfocitos que reconocen los complejos
MHC-pptido con una avidez intermedia, ni muy fuerte (seleccin negativa) ni muy dbil
(ausencia de seleccin positiva).
Durante la seleccin positiva, las clulas con doble positividad se convierten en clula single
positive: si el linfocito T interacciona dbilmente con un complejo MHC2-pptido, se elimina
CD8+; si por el contrario interacciona con un complejo MHC1-pptido, se elimina CD4+

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11. ACTIVACIN DE LINFOCITOS T Y

LINFOCITOS T EFECTORES.
Fases de la respuesta inmune mediada por linfocitos T.
Una vez generado un linfocito T en el timo, estos sufren una seleccin positiva donde algunos
de ellos sern eliminados mientras que otros madurarn. Cuando un linfocito T maduro sale
del timo se encuentra patrullando, de forma permanente, el organismo viajando a travs de la
linfa. Es en los ganglios linfticos, donde los linfocitos T se encuentran con el antgeno, la
interaccin del mismo con el linfocito T provoca que se desencadene la respuesta inmune
primaria. La respuesta inmune primaria consta de diferentes fases:
1. FASE DE ACTIVACIN
En esta fase se producen una serie de cambios en el linfocito que conducen a un posterior
proceso de proliferacin intenso, que da lugar a la expansin clonal. Esto supone que
partiendo de un nico linfocito T con un TCR determinado para el reconocimiento de ese
antgeno, se genere un conjunto de linfocitos que expresan ese mismo TCR.
2. FASE DE DIFERENCIACIN
Los linfocitos T adquieren una serie de caractersticas que los convierten en linfocitos T
efectores, los cuales ya estaran preparados para combatir a los agentes externos al
organismo.
Cuando hablamos de linfocitos T efectores vamos a hablar, fundamentalmente, de dos tipos:
- Linfocitos T citotxico (CTL), se diferencian a partir de linfocitos CD8 cuando reconocen
antgenos de patgenos intracelulares que se encuentran en el citoplasma, los cuales
son presentados por el MHC-I. Estos linfocitos se van a especializar en matar las clulas
infectadas.
- Linfocitos T colaboradores o helpers: se diferencian a partir de linfocitos CD4 cuando
interaccionan con antgenos que provienen de organismos que infectan la clula y que se
localizan dentro de organelas o vesculas en el interior de la clula, bien porque infectan
la clula dentro de esas vesculas, o bien porque han sido fagocitados por clulas
especializadas. Estos antgenos se van a presentar en MHC-II y van a dar lugar a la
activacin de linfocitos CD4. La funcin de los linfocitos CD4 es la de cooperar con otro
tipo de clulas del sistema inmune: bien con macrfagos, que se van a especializar en la
eliminacin de clulas infectadas; con clulas B, que van a dar lugar a la respuesta
inmune celular, o bien interaccionando con las clulas B en la produccin de
anticuerpos.

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3. FASE EFECTORA
Cuando las clulas adquieren sus propiedades efectoras, pasan a dar lugar a la fase efectora
de la respuesta inmune. En el caso de las CD4, la interaccin con otras clulas del sistema
inmune; y en el caso de las CD8, la lisis de clulas infectadas.
4. CLULAS MEMORIA
Algunos linfocitos T no se transforman en linfocitos T efectores, sino que se diferencian en
clulas memoria. Estas clulas tienen caractersticas que les van a permitir reaccionar
rpidamente en el caso de que aparezca posteriormente, la misma infeccin. Esta reaccin
se denomina respuesta T secundaria.

Los linfocitos T vrgenes o naive van a encontrar siempre el antgeno en los rganos linfoides
secundarios o perifricos, ya que estn continuamente recirculando entre la sangre y la linfa.
Estos rganos linfoides estn especializados para que se produzca en ellos el encuentro entre
antgeno y los propios linfocitos T naive. Los linfocitos T requieren para su activacin, la
interaccin con el antgeno tras ser presentado por una
clula presentadora de antgenos, bien sea una clula
dendrtica o un macrfago que migran al rgano linfoide
desde la zona de infeccin. Esto provoca que los linfocitos
T se activen y se diferencien en clulas efectoras y en
clulas de memoria, que pueden permanecer en los
rganos linfticos o migrar hacia tejidos no linfticos. En
los focos infecciosos, los linfocitos efectores vuelven a
activarse por los antgenos y realizan muchas de sus
funciones, tales como la activacin de los macrfagos.

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Organizacin de los ganglios linfticos perifricos

En el ganglio linftico tenemos dos regiones:
Corteza: distinguimos dos zonas distintas:
-

Folculos, son estructuras donde se encontraran los linfocitos B. Algunos

folculos tienen zonas de intensa proliferacin celular y es lo que denominamos
centros germinales, constituyendo los folculos secundarios; mientras que los
que carecen de centro germinal constituirn los folculos primarios.

Zona paracortical, que es la zona donde se localizan fundamentalmente los

linfocitos T.

Mdula: encontramos fundamentalmente macrfagos y clulas dendrticas, formando los

denominados cordones medulares.

RESPUESTA PRIMARIA: ORGANOS LINFTICOS

1. Fase de reconocimiento de Ag (APCs)
En el ganglio linftico se produce una entrada constante de antgenos introducidos por APCs
que se localizan a lo largo de todo el ganglio. Al mismo tiempo, se produce la recirculacin de
linfocitos T naive que se localizan en la zona paracortical o zona T.
Los linfocitos naive migraran durante un tiempo determinado a lo largo de toda esta zona T en
la que hay gran cantidad de clulas dendrticas. Eso permite que en un espacio relativamente
reducido, un linfocito T sea capaz de interaccionar con un gran nmero de clulas dendrticas,
que le van a presentar numerosos antgenos que proceden de los tejidos. Con esto,
aumentamos mucho la probabilidad de que un linfocito T naive, en su paso por esa zona T,
encuentre un antgeno determinado en el contexto de una clula dendrtica, y sea capaz de
activarse.
Cuando el linfocito T se activa, permanecera un tiempo prolongado dentro del ganglio
linftico, sufriendo procesos de activacin, proliferacin y diferenciacin. En caso de que dicho
encuentro no se produjese, el linfocito T terminara abandonando el ganglio.La migracin est
regulada por una serie de quimiocinas que van a reaccionar con receptores especficos en el
linfocito.
La interaccin entre el linfocito naive y las clulas dendrticas se produce a travs de molculas
de adhesin. En primer lugar, se produce una primera interaccin que va a permitir que el
linfocito T interaccione de una forma bastante fluida, hasta que se produce el encuentro con
un MHC-pptido especfico, en cuyo caso empezara el proceso de activacin y las propias
seales de activacin haran que la adhesin se fortaleciera.

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Por tanto, qu necesita un linfocito T naive para activarse?

Interaccin del TCR con el MHC - pptido,

Concurso del complejo CD3Z para transmitir seales hacia el interior del linfocito T
Concurso de los correceptores CD4 o CD8.

Sin embargo, este conjunto de molculas que mandan esta seal hacia el interior del linfocito
son incapaces de activar un linfocito T naive.
2. Fase de activacin de linfocitos T naive: co estimulacin
La activacin de los linfocitos T se inicia en los
rganos linfoides perifricos.
Para que un linfocito T naive se active requiere una
seal adicional. Esta seal adicional viene dada por la
interaccin de una molcula en la membrana del
linfocito, CD28.
CD28 es una molcula co-estimuladora homodimrica
de membrana cuyas subunidades tienen un dominio
extracelular tipo Ig. Esta molcula interacciona con
dos ligandos que estn presentes en la membrana de
las APCs: B7-1 y B7-2, que son dos molculas coestimuladoras expresadas nicamente por APCs
profesionales.
Por tanto, para la activacin completa de un linfocito
T naive se requieren dos seales:

Seal 1: mediada por la interaccin del TCR con el

antgeno.
Seal 2: mediada por la interaccion del CD28 con B7

Estas dos interacciones, inducen la proliferacin celular, ayudan a la

secrecin de IL- 2 y a la diferenciacin de los linfocitos T (IL- 12).
Tambin son capaces de producir seales negativas para frenar la
activacin de linfocitos T (CTLA 4).
Otras molculas que se expresan en el proceso de diferenciacin, son las que pertenecen a
una gran familia de receptores y ligandos, que es la familia del TNS. Hay tres molculas con sus
correspondientes ligandos, importantes para las propiedades efectoras de los linfocitos T:

CD40L: se expresa en los linfocitos T al diferenciarse tras la activacin, e interacciona

con CD40, que se expresa en linfocitos B, en macrfagos y en clulas dendrticas. El
reconocimiento antignico por parte de los linfocitos T estimula la expresin del
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ligando de CD40 (CD40L) que se une al CD40 de la APC y estimula la expresin de

molculas B7 y la secrecin de citoquinas que activan los linfocitos T. Por lo tanto, el
CD40L de los linfocitos T mejora las APC.

Es posible que, tras el reconocimiento antignico, los linfocitos T expresen CD40L incluso sin
coestimulacin, aunque para una expresin mantenida de CD40L se precisa la coestimulacin
B7

41BB, que interacciona con un ligando 41BBL, que se expresa en las CPA.
NFAT: NFAT-L, es un ligando de membrana que interacciona con NFAT en las clulas a
las que se enfrenta el linfocito T. NFAT se expresara tanto en APC como en clulas
diana. La interaccin de NFAT-L con NFAT lo que induce es muerte por apoptosis.

3. Fase de expansin clonal

Esta fase sirve para, a partir de un clon que expresa un nico receptor, tener muchos clones
con ese mismo receptor. Lo que hace proliferar a los linfocitos T es una citoquina, la
interleucina-2.
La interleucina-2 interacciona y media su proceso de induccin
de la proliferacin a travs de un receptor de membrana
formado por tres subunidades distintas: , y . Las subunidades
y funcionan tambin como receptor de interleucina pero de
baja afinidad y no es capaz de inducir la proliferacin de linfocitos
T.
Los linfocitos T naive expresan en la membrana de forma
constitutiva el receptor de baja afinidad y no produce
interleucina-2. Cuando se produce la activacin a travs del TCR,
la cascada de seales determina la expresin de:
- El gen de la interleucina-2 que se secreta al medio.
- La subunidad del receptor de alta afinidad de la interleucina-2.

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Tras la activacin, se sintetiza esta subunidad, se transporta hasta la membrana y en la

membrana se une a las otras dos subunidades, formando el receptor de alta afinidad.
Por qu es importante la seal co estimuladora?
Porque es necesaria para la sntesis y secrecin de la interleucina-2. Tras la seal 1 por tanto,
se induce la expresin del gen de IL-2 asi como la expresin de la cadena cadena .
Dada la inestabilidad del mensajero de la interleucina, es necesaria la accin de CD28 (seal 2)
para estabilizar el RNA mensajero de la interleucina-2 y que se produzca la protena. Asimismo,
CD28 tambin contribuye en alguna medida a la regulacin de la transcripcin del gen de
interleucina-2.
Cuando no tenemos esta segunda seal, no se induce la proliferacin del linfocito. Cuando se
estimula un linfocito naive intensamente a travs de TCR-CD3, se produce un fenmeno que se
denomina anergia, que consiste en una inactivacin funcional del linfocito. Una vez que el
linfocito se ha activado y se ha diferenciado, los linfocitos T efectores son capaces de activarse
sin coestimulacin.
Qu importancia tiene que el linfocito naive se active sin coestimulacin?
Es importante para lo que denominamos tolerancia perifrica, lo que significa que la mayor
parte de los linfocitos que salen del timo son incapaces de reconocer Ag propios. Pero no
todos los posibles Ag que hay en el organismo van a estar presentes en el timo.
Por el mecanismo de tolerancia central, que dependa de la seleccin negativa, no se van a
poder eliminar todos los linfocitos potencialmente autorreactivos frente al organismo. En
distintos tejidos dentro del organismo estos linfocitos van a ser potencialmente capaces de
encontrarse con Ag que reconocen muy intensamente el TCR.
Sin embargo, el hecho de que los tejidos no expresen molculas coestimuladoras, hace que si
un linfocito se encuentra en un tejido con un Ag con el que reaccione intensamente a travs de
TCR, este linfocito quede inactivado.

TIPOS DE LINFOCITOS T EFECTORES

1. CD8 o citotxicos, que reconocen MHC de clase I asociado a Ag procedentes de
organismos que infectan la clulas o que estn en el citoplasma y tienen una funcin
efectora citotxica.
2. CD4 o colaboradores, que reconocen Ag asociados al MHC de clase II, y se dividen en
dos grandes grupos:

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o

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TH1: son linfocitos capaces de activar la funcin efectora de ciertas clulas que estn
infectadas por microorganismos intracelulares que se localizan en vesculas, bien
porque infectan a la clula en estas vesculas, o bien porque han llegado ah por
procesos de fagocitosis de clulas infectadas o de bacterias que se encuentran en el
medio extracelular. Contribuyen a regular lo que se denomina respuesta efectora T
celular. Su activacin se produce en presencia de IL-12 e IFN y se activan en
infecciones bacterianas, las cuales, activan a los macrfagos.
TH2: son linfocitos que tambin reconocen MHC de clase II, pero interaccionaran
fundamentalmente con linfocitos B y regulan la produccin de ciertos tipos de Ig.
Contribuyen a regular lo que se denomina respuesta efectora T humoral. Su
activacin se produce en presencia de IL-4 e IL-5 y se activa en infecciones por
parsitos.

Los distintos tipos de molculas efectoras que producen estos linfocitos T pueden ser o bien
molculas solubles, o bien molculas que se expresan o bien molculas de membrana.
Las molculas que se expresan pueden ser citotoxinas, especializadas en la lisis celular,
como perforina y granzima.
Las molculas solubles son las citoquinas, que producen distintos tipos de respuestas
celulares: interfern- (IFN) y la interleucina-4. El IFN- define muy bien la subpoblacin
de linfocitos TH1, mientras que la interleucina-4 se utiliza para definir las poblaciones de
linfocitos TH2. No obstante, tanto TH1 como TH2 pueden producir otros tipos de
citocinas.
Molculas de membrana: entre las cuales hay que destacar al ligando de NFAT, que es
muy importante para la funcin de las CD8 y para la funcin de algn tipo de linfocitos
de CD4.

DIFERENCIACION DE CD4 A TH1 O TH2.

Lo que hace que un linfocito CD4 se diferencie en TH1 o TH2 est regulado por las citocinas
que haya presentes en el medio en el momento en que se vaya a producir la activacin del
linfocito T.
Los linfocitos T activados a travs de Ag se diferenciaran hacia linfocitos TH1 cuando la
activacin se produce en presencia de IL-12 y de IFN -. Estas citocinas son producidas
fundamentalmente por clulas del sistema inmune innato en respuesta a microorganismos.
Los macrfagos son capaces de producir IL-12; y las clulas NK son capaces de producir IFN-.
Decimos que es una respuesta innata, porque no depende de Ag.
Por otro lado, la IL-4 hace que un CD4 se diferencie en TH2.

Otra caracterstica importante es que hay posibilidad de regulacin cruzada entre poblaciones
TH1 y TH2, puesto que si tenemos un linfocito TH2 que produce TGC- e IL-10, a travs de
ambas citocinas, los linfocitos TH2 son capaces de inhibir la diferenciacin hacia TH1:

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- El TCG- bloquea esta diferenciacin, reduciendo la expresin de linfocitos T ya que

induce la expresin de CTLA-4 que es un antagonista de CD28, por lo que se inhibe la
primera seal.
- IL-10 actuando sobre los macrfagos.
Por tanto, las clulas TH2 inhiben la diferenciacin hacia TH1.

A su vez, las clulas TH1 producen IFN-, que es una citocina capaz de inhibir la diferenciacin
hacia TH2.
Una vez que se ha establecido un tipo de diferenciacin, las citocinas que se producen son
capaces de bloquear la diferenciacin en el otro sentido. De manera que, en muchos tipos de
respuesta, se puede producir una mezcla de las dos respuestas, TH1 y TH2.
En otros casos, en funcin del estmulo inicial, se inicia la diferenciacin hacia un lado o hacia
otro y el propio proceso, por un lado se produce una retroalimentacin positiva ya que TH1
potencia diferenciacin hacia TH1 y TH2 potencia diferenciacin hacia TH2, y por otro lado
inhibirn la diferenciacin en el sentido contrario.
Por lo tanto, lo que determina que la diferenciacin vaya en un sentido u otro es el tipo de
infeccin.
Cuando tenemos infecciones bacterianas que activaran los macrfagos que expresaran
INF e IL-2 lo que potencia la diferenciacin hacia TH1.
En el caso de que la infeccin este provocado por un helminto (parsito muy grande que el
macrfago no puede fagocitar) se induce la respuesta de tipo TH2, por lo que se secretan
IL-4 e IL-5. El TH2 sintetiza IL4 que induce la sntesis de IgE para potenciar la granulacin de
los mastocitos y activar a los eosinfilos para poder matar pero extracelularmente.
Luego el tipo de microorganismo, a travs de su efecto en las clulas del sistema inmune
innato, es capaz de condicionar el que se produzca un tipo de respuesta que va a eliminar
dicho microorganismo.

CARACTERISTICAS DE LOS LINFOCITOS T CITOTXICOS EFECTORES

(CD8)
Presentan dos caractersticas bsicas:

Tienen la capacidad de interaccionar en los tejidos simplemente por encuentro con el

MHC y el pptido.

La respuesta es muy polarizada: la funcin de las clulas efectoras depende de una

serie de molculas que pueden estar presentes, o bien en la membrana o bien
secretarse al medio. Durante la respuesta efectora, estas molculas se reorientan, se
polarizan hacia la clula diana.
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El encuentro entre el linfocito efector y la clula diana se produce, teniendo lugar una serie de
interacciones mediante molculas de adhesin. El linfocito T efector tiene un TCR que
reconoce el MHC - pptido, por lo que se produce la interaccin y adems, se produce una
relocalizacin de los receptores de clulas T hacia la zona de contacto con la clula diana.
Se relocalizara tambin el citoesqueleto de actina, el centro organizador de
microtbulos y la maquinara de secrecin de la clula, as como algunos de los Ag de las
molculas de membrana importantes para la funcin efectora. Todo esto se polariza hacia la
clula diana, de manera que la funcin de las molculas de membrana que determinan la
funcin efectora del linfocito T va a estar restringida hacia la clula diana.

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12. INTERACCIN ENTRE LINFOCITOS B Y T

Los linfocitos T CD4+ Th1 y Th2 son capaces de cooperar con los linfocitos B en los rganos
linfticos secundarios. Esta interaccin permite la super-expansin clonal y la mutacin
somtica (swich de Igs) de los linfocitos B
Antes de interaccionar entre s, los linfocitos B y T han de ser activados por separado:
-

Zona T del ganglio linftico: Las APC presentan antgenos extraos unidos a sus MHC2
a los linfocitos T CD4+. Los linfocitos T activados expresan CD40L y receptores para
citoquinas.
Zona B del ganglio linftico (folculos primarios): los antgenos solubles se unen a las
IgM de membrana del linfocito B. Las IgM poseen colas citoplasmticas muy cortas.
Por ello se asocian con CD79: protena transmembrana formada por una cadena y
una . CD79 presenta unas colas intracelulares con dominios ITAM. Los dominios ITAM
son ricos en tirosina. La transduccin de la seal se inicia por fosforilacin de tirosinas
de los dominios ITAM. Gracias a esta primera fase de activacin:
Aumenta la supervivencia del linfocito B: se promueve la proliferacin y se
inhibe la apoptosis.
El linfocito B comienza a expresar receptores para citoquinas (CCR7)

Una vez activados, ambos linfocitos migran hacia el lmite entre las zonas B y T del ganglio
linftico gracias al gradiente de citoquinas.

PRESENTACIN DEL ANTGENO

Antes de migrar al lmite entre las zonas B y T del ganglio linftico, los linfocitos B internalizan
los antgenos protenicos que se han unido a sus IgM. A continuacin los procesan y exponen
los pptidos resultantes unidos a sus MHC2.
Cuando los linfocitos T CD4+ interactan fsicamente con los linfocitos B presentadores del
antgeno ocurre lo siguiente:
-

El TCR del linfocito T reconoce el complejo MHC2-peptido extrao19 presentado por el

linfocito B.
El CD40L del linfocito T reconoce el CD40 de la superficie del linfocito B. El CD40 inicia
una serie de cascadas enzimticas en el interior del linfocito B, que llevan a la
activacin de factores de transcripcin. Estos factores de transcripcin estimulan la
proliferacin del linfocito B y aumentan la sntesis y secrecin de Ig. Adems, permiten
la transcripcin de genes que codifican para el enzima AID, necesaria para llevar a cabo
el cambio de isotipo por splicing alternativo: se mantiene el reordenamiento de las
regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras, pero la regin constante cambia.
El linfocito T secreta citocinas (ej. Interfern- e interleuquina 4) que se unen a los
receptores para citocinas de la superficie del linfocito B, estimulndolo.

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El pptido unido al MHC2 del linfocito B es idntico al pptido presentado por la APC al linfocito T en
la zona T.

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FOLCULOS SECUNDARIOS
En el centro germinal de los folculos secundarios se produce la maduracin de la afinidad de
los linfocitos B que ya han sido activados por los linfocitos T y son capaces de producir un
swich de Igs contra un antgeno determinado.
En los centros germinales podemos distinguir dos zonas:
-

Zona oscura: zona de elevada densidad celular debido a la hiperproliferacin de los

linfocitos B que han interaccionado con los linfocitos T.
Zona clara: zona de menor densidad celular

Los linfocitos B de la zona oscura sufren mutaciones de las regiones V de las cadenas pesadas y
ligeras con una frecuencia sumamente alta. Estas mutaciones pueden producir:
-

Un aumento de afinidad
Prdida de afinidad
Igs aberrantes que no se unan al antgeno
Nada

Por tanto, el siguiente paso en el proceso de maduracin de la afinidad es la seleccin de

linfocitos B ms tiles. Las encargadas de llevar a cabo esta seleccin son las clulas foliculares
dendrticas. Estas clulas se encargan de presentar el antgeno a los linfocitos B. Las clulas
dendrticas foliculares carecen de MHC2. El antgeno puede unirse a dos tipos de receptores:
-

Receptores de complemento CR1

Receptores Fc que anclan un anticuerpo que a su vez est unido al antgeno

Si el clon de linfocito B, despus de haber pasado por la mutacin somtica reconoce con la
misma o ms afinidad al antgeno sobrevive. Pero si el clon de linfocito B no expresa
anticuerpo, no tiene afinidad o reconoce con baja eficacia al antgeno, muere por apoptosis.
Por ello, en la zona clara hay menor celularidad.
Los clones de linfocitos B que han sido seleccionados positivamente se diferencian a:
-

Clulas de memoria
Clulas plasmticas especializadas en la produccin de anticuerpos. Las clulas
plasmticas sufren una expansin del RER.

Los antgenos que promueven esta cooperacin entre linfocitos T y B son antgenos proteicos
denominados antgenos timo-dependientes. No obstante, existen otro tipo de antgenos no
proteicos (antgenos timo-independientes) capaces de activar al linfocito B sin necesidad de
que interaccione con el linfocito T. Estos antgenos timo-independientes son capaces de unirse

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simultneamente a varias IgM provocando una amplificacin de la seal de activacin del

linfocito B

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13. CITOTOXICIDAD CELULAR: CLULAS NK Y

LINFOCITOS CD8+
La citotoxicidad celular est mediada por dos tipos de clulas:
-

Clulas NK (natural killer): participan en la lisis de clulas sobre todo durante la

respuesta innata. Son capaces de realizar su funcin citoltica espontneamente, sin
necesidad de diferenciacin y expansin clonal. Los linfocitos NK surgen de
precursores de la mdula sea y aparecen como clulas grandes con numerosos
grnulos citoplasmticos. No expresan BCR ni TCR; sino que utilizan otro tipo de
receptores para distinguir las clulas estresadas o infectadas por microorganismos
patgenos de las clulas sanas. Las clulas NK Pueden identificarse en la sangre por la
expresin de CD56 y la falta de CD3.
Linfocitos T CD8+ citotxicos: participan en la lisis de clulas durante la respuesta
adaptativa. Gracias a su TCR, reconocen complejos MHC1- pptido extrao expresados
en clulas infectadas. La respuesta de los linfocitos T CD8+ es mucho ms especfica
que las de las clulas NK. Pero tiene lugar mucho ms tarde en el tiempo.

CLULAS NK
La activacin del linfocito NK est regulada por un equilibrio entre seales generadas por
receptores activadores y receptores inhibidores. Estos receptores reconocen molculas de la
superficie de las clulas y generan seales activadoras o inhibidoras que promueven o inhiben
las respuestas NK.
-

Receptores activadores: presentan dominios ITAM (ricos en tirosinas) en sus colas

citoplasmticas.
Tras la unin del ligando al receptor activador, se produce la fosforilacin de
tirosinas del dominio ITAM.
El dominio ITAM fosforilado recluta tirosina-kinasas, activndolas tambin por
fosforilacin.
Las tirosina-kinasas activadas contribuyen al envo de ms seales por
fosforilacin de otras protenas
Receptores inhibidores: presentan dominios ITIM (ricos en tirosinas) en sus colas
citoplasmticas.
Tras la unin del ligando al receptor activador, se produce la fosforilacin de
tirosinas del dominio ITIM.
El dominio ITAM fosforilado recluta y activa fosfatasas
Las fosfatasas activadas defosforilan las protenas fosforiladas por las tirosinakinasas de los receptores activadores.

La mayora de los receptores inhibidores reconocen molculas del MHC1, expresadas por casi
todas las clulas sanas del cuerpo. Los linfocitos NK interpretan la presencia de MHC1 como
marcador de lo propio, normal y sano; y su falta, como una indicacin de infeccin o dao.
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No sabe con exactitud el tipo de ligando que reconocen los receptores activadores, pero s
podemos afirmar que estos ligandos se expresan en mayor cantidad en clulas infectadas o
estresadas que en clulas sanas.
-

Clula normal: los receptores activadores reconocen ligandos de la clula diana y

activan una protena tirosina-kinasa. Los receptores inhibidores reconocen el MHC-1 y
activan una fosfatasa. La fosfatasa inhibe la actividad de la tirosina kinasa y los
linfocitos NK no matan a la clula diana.
Clula infectada (se altera o disminuye la expresin del MHC1 y se induce la expresin
de ligandos activadores adicionales): los receptores activadores reconocen ligandos de
la clula diana y activan una protena tirosina-kinasa. Los receptores inhibidores no se
unen a su ligando. El linfocito NK libera una serie de citoquinas que producen la
muerte celular.
Las clulas estresadas por una transformacin neoplsica, adems del MHC1, expresan
mayores cantidades de ligandos activadores, que se unen a los receptores activadores
del linfocito NK e inducen una mayor fosforilacin de tirosina-kinasas de la que pueden
compensar las fosfatasas.

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RECEPTORES IMPORTANTES DE LOS LINFOCITOS NK

-

NKG2D: receptor activador. Se une a protenas que se encuentran en clulas

infectadas por virus y en clulas tumorales, pero no en clulas normales.
CD94/NKG2A: receptor activador que reconoce HLA-E
Receptores Fc: activadores. Reconocen Igs

FUNCIONES EFECTORAS DE LOS LINFOCITOS NK

Las funciones efectoras de los linfocitos NK son: matar a las clulas infectadas o estresadas y
activar a los macrfagos para que destruyan los microbios fagocitados.

Muerte de la clula diana: los linfocitos NK tienen grnulos que contienen protenas
mediadoras de la muerte de las clulas diana. Cuando los linfocitos NK se activan, se
produce la exocitosis de los grnulos y la liberacin de las protenas al exterior de la clula.
A partir de este punto, existen varias teoras:
- Una protena del grnulo, llamada perforina, forma poros en la membrana de la
clula diana. Estos poros permiten la entrada al citoplasma de la clula de otras
protenas del grnulo: las granzimas. Las granzimas inician una cascada de
sealizacin que causan la muerte de las clulas diana por apoptosis
- Antes de entrar en la clula, las perforinas y granzimas forman complejo. Los
complejos son reconocidos por receptores de la clula diana. Se inicia un proceso
de endocitosis. Una vez en el interior, la vescula endoctica se rompe y la granzima
se libera al citosol. Se inicia una cascada de sealizacin que causan la muerte de
las clulas diana por apoptosis
- En ,los grnulos existen tres protenas: perforina, granzima y protena SG. Se
forman complejos de las tres protenas que penetran en la clula por endocitosis.
Una vez en el interior, la vescula endoctica se rompe y la granzima se libera al
citosol. Se inicia una cascada de sealizacin que causan la muerte de las clulas
diana por apoptosis

La liberacin de grnulos debe producirse de forma muy controlada. Esto requiere un buen
reconocimiento de la clula diana y la sinapsis de las membranas de la clula diana y la clula
NK.

Activacin de macrfagos (loop positivo): cuando se produce una infeccin, los macrfagos
son capaces de liberar IL-12. La IL-12 es capaz de actuar sobre los linfocitos NK, que
comienzan a secretar interfern gamma (IFN-). El IFN- acta nuevamente sobre los
macrfagos, activndolos para que destruyan los microbios fagocitados. Adems, el IFN-
producido por los linfocitos Nk de los ganglios linfticos tambin puede dirigir la
diferenciacin de los linfocitos T vrgenes en linfocitos Th1. Los linfocitos Th1 a su vez se
encargan de:
- La activacin de los macrfagos. Gracias a su TCR son capaces de reconocer
complejos MHC2-pptido extrao de la superficie de los macrfagos.

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-

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Interaccin con linfocitos B. Esta interaccin es necesaria para que el linfocito B

produzca el swich de Igs. Una vez liberadas al torrente sanguneo, las IgG
producidas por los linfocitos B recin activados en el ganglio, opsonizan clulas
infectadas. Las clulas NK, reconocen las IgGs unidas a la clula infectada gracias a
sus receptores Fc

LINFOCITOS T CD8+
Los linfocitos T CD8 + se encargan de la lisis de las clulas que expresan MHC1 unido a pptidos
extraos. El mecanismo de la citotoxicidad mediada por CD8+ es prcticamente el mismo que
el de los linfocitos NK. Los CD8+ tienen grnulos que contienen protenas mediadoras de la
muerte de las clulas diana. Cuando los linfocitos NK se activan, se produce la exocitosis de los
grnulos y la liberacin de las protenas al exterior de la clula. Las protenas actan sobre la
clula diana segn las tres teoras explicadas anteriormente.
Adems, los linfocitos CD8+ son capaces de mediar una lisis granulo-independiente. Cuando el
TCR interacciona con el complejo MHC2-pptido extrao, se induce la expresin de FAS-L (FAS
ligando) en el linfocito T. FAS ligando interacciona con la protena FAS, que se expresa de
manera constitutiva en la clula diana. Esta interaccin produce la apoptosis de la clula diana.

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14. CITOQUINAS
Las citoquinas son protenas producidas y secretadas por muchos tipos celulares. Actan como
mediadores solubles, permitiendo a las clulas del SI comunicarse entre s. Regulan todos los
aspectos de la inmunidad innata y adaptativa.
Las citoquinas no se almacenan en el interior de las clulas, en cuanto se sintetizan, son
secretadas al exterior. Su sntesis se inicia gracias a una activacin celular que permite la
transcripcin de un gen hasta el momento silenciado. La activacin de la transcripcin es
transitoria.
La mayora de las citoquinas actan o bien sobre la misma clula que secreta la citoquina
(accin autocrina) o bien sobre una clula cercana (accin paracrina). Cuando se producen en
grandes cantidades pueden entrar en la circulacin y actuar a distancia (accin endocrina). Las
citoquinas se unen a receptores localizados en las clulas diana. La afinidad del receptor por la
citoquina es elevadsima.
Las citoquinas comparten las siguientes caractersticas:
-

Pleitropismo: las citoquinas son capaces de actuar sobre diferentes tipos de clulas y
tener mltiples efectos biolgicos
Redundancia: muchas citoquinas pueden desempear la misma accin
Efectos antagnicos: producen efectos contrarios.

Hay muchas formas distintas de clasificar las citoquinas. Para poder estudiarlas, nosotros
emplearemos la siguiente clasificacin:
-

Citoquinas de la inmunidad innata: se expresan durante los primeros momentos de la

infeccin. Inducen procesos inflamatorios.
Citoquinas de la inmunidad adaptativa: son responsables de la activacin y
diferenciacin de linfocitos T y B.
Citoquinas hematopoyticas: regulan la generacin de diferentes tipos de clulas
inmunitarias a partir de los precursores presentes en la mdula sea.
Quemoquinas: estimulan la migracin celular.

A continuacin iremos desarrollando los diferentes tipos de citoquinas. Para ello se tendr en
cuenta:
-

Fuente: clula encargada de la sntesis y secrecin de la citoquina

Estmulo capaz de inducir la sntesis de la citoquina
Clula diana: clula sobre la que acta la citoquina
Efecto

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INMUNIDAD INNATA
Factor de necrosis tumoral (TNF)

FUENTE
El TNF lo producen los macrfagos, las clulas dendrticas y los neutrfilos

ESTMULO
La produccin de TNF es estimulada por:
PAMP: Ej. LPS
Interfern , producido por clulas NK en un primer momento, y despus por
los linfocitos T que llegan al foco inflamatorio.

CLULA DIANA
Los receptores para TNF estn presentes en la mayora de tipos celulares.

EFECTO
Inicia una cascada de sealizacin intracelular que finaliza con:
- La activacin del factor de transcripcin NF-B. Se induce as la expresin gnica
- La activacin de caspasas que provocan la apoptosis de la clula diana.

Cuando se incrementan los niveles de TNF, se producen una serie de efectos sistmicos:
-

El TNF acta sobre el hipotlamo para inducir una aumento de la temperatura

corporal: FIEBRE
El TNF induce a los hepatocitos del hgado a secretar protenas de fase aguda. Estas
protenas sirven como signos de infeccin a la hora de elaborar un diagnstico clnico.
Adems, aumentan la capacidad de combatir infecciones. Las protenas de fase aguda
se unen a manano, un oligosacrido presente en la superficie de las bacterias. A
continuacin, el complemento reconoce las protenas de fase aguda unidas a las
bacterias.

En las infecciones graves, el TNF puede producirse en cantidades excesivas, y causar

alteraciones clnicas y patolgicas.
-

El TNF reduce la contractilidad miocrdica y el tono del msculo liso vascular, lo que
produce una reaccin acentuada de la presin arterial
El TNF provoca trombosis intravascular, sobre todo como resultado de la prdida de
las propiedades anticoagulantes normales del endotelio.
La produccin prolongada de TNF causa prdida del apetito, con la consiguiente
prdida de clulas musculares y adipocitos. El paciente entra en un estado de
caquexia.
El TNF produce hipoglucemia.

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Interleuquina 1 (IL-1)

FUENTE
La IL-1 es producida por macrfagos, neutrfilos, clulas epiteliales y clulas endoteliales.

ESTMULO
La produccin de IL-1 es estimulada por:
PAMP: Ej. LPS
Interfern , producido por clulas NK en un primer momento, y despus por
los linfocitos T que llegan al foco inflamatorio.

CLULA DIANA
Clulas endoteliales, clulas epiteliales y linfocitos.

EFECTO
Inicia una cascada de sealizacin intracelular que finaliza con la activacin de los factores
de transcripcin NF-B y AP-1. Se induce as la expresin gnica

NF-B
Tanto el TNF como la IL-1 son capaces de iniciar una cascada de sealizacin que finaliza con la activacin del factor de
transcripcin NF-B.
Cuando NF-B se activa en clulas endoteliales, stas comienzan a expresar molculas de adhesin (selectinas e
integrinas). Las molculas de adhesin frenan a las clulas que circulan por el torrente sanguneo (leucocitos). Estas
clulas salen por diapdesis de los vasos y se dirigen al foco de infeccin.

Interfern de tipo 1
Los interferones de tipo 1 son citoquinas que median la respuesta inmunitaria innata
temprana frente a las infecciones vricas. Existen varios interferones de tipo 1. Los ms
importantes son:
-

IFN
IFN

FUENTE
- IFN: secretado por macrfagos, neutrfilos y clulas dendrticas
- IFN: secretado por varios tipos celulares

ESTMULO
Los estmulos ms potentes capaces de activar la sntesis de interfern de tipo 1 son los
cidos nucleicos vricos. Ej. Receptores de tipo RIG presentes en el citoplasma de las
clulas, reconocen cidos nucleicos vricos e inician vas de transmisin de seales que
finalizan con la transcripcin de IFN.
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*En la inmunidad adaptativa, los linfocitos T activados son capaces de estimular a los
macrfagos para que sinteticen interfern de tipo 1.

CLULA DIANA
El receptor de los interferones tipo 1, es un heterodmeros expresado por todas las clulas
nucleadas.

EFECTO
- Los interferones de tipo 1 activan la transcripcin de genes que confieren a las clulas
que an no han sido infectadas resistencia frente a la infeccin vrica ESTADO
ANTIVRICO. Por ejemplo, el IFN activa la sntesis de RNA-asas que rompen las cadenas
de RNA vricas.
- Aumentan la expresin de MHC1 en clulas infectadas, incrementando as la
probabilidad de que sean reconocidas por CD8+
- Provocan el secuestro de linfocitos vrgenes en los ganglios linfticos, lo que maximiza
sus oportunidades de encontrarse con el antgeno microbiano y activarse.
Normalmente, los linfocitos estn circulando por los ganglios linfticos a la espera de
ser activados. Est circulacin se produce gracias a un gradiente de esfingosina 1
fosfato. La esfingosina 1 fosfato es ms abundante en la linfa que en los ganglios. Los
linfocitos (que expresan receptores para la esfingosina 1 fosfato), salen de los ganglios
a favor de gradiente de concentracin.
Cuando se produce la infeccin, el interfern de tipo 1 induce la expresin de CD69
por parte del linfocito. El CD69 reduce la expresin en superficie del receptor para la
esfingosina 1 fosfato. Es por ello que los linfocitos quedan retenidos en los ganglios.
Los interferones de tipo 1 aumentan la citotoxicidad de los linfocitos NK y de los CTL
CD8+. Adems, promueven la diferenciacin de los linfocitos T vrgenes en el subgrupo
Th1 de linfocitos T cooperadores.

INTERFACE ENTRE LA RESPUESTA INNATA Y AL ADAPTATIVA

Interleuquina 12 (IL-12)

FUENTE
La IL-12 es secretada por macrfagos y clulas dendrticas

ESTMULO
Las clulas dendrticas y los macrfagos expresan CD40. La interaccin entre este CD40 y el
CD40L de los linfocitos T induce la sntesis de IL-12

CLULA DIANA
Las clulas diana son diferentes clulas implicadas en la inmunidad adaptativa: CD4+, CD8+
y clulas NK

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EFECTO
- Estimula la diferenciacin de los linfocitos T CD4+ en linfocitos efectores Th1.
- Aumenta la capacidad citotxica de linfocitos CD8+ y clulas NK
- Produce un crculo de activacin entre los macrfagos y los linfocitos NK y CD8+:
La IL-12 induce la expresin de IFN por parte de CD8+ y clulas NK.
El IFN impacta sobre los macrfagos, incrementando la sntesis de IL-12

INMUNIDAD ADAPTATIVA
Interleuquina 2 (IL-2)

FUENTE
La IL-12 es producida por los linfocitos T, sobre todo los CD4+

ESTMULO
Interaccin del linfocito T con el antgeno y coestimuladores

CLULA DIANA
La IL-12 acta sobre el propio linfocito T que la produce (respuesta autocrina) o sobre
linfocitos T adyacentes (respuesta paracrina)

EFECTO
- Estimula la supervivencia, proliferacin y diferenciacin de los linfocitos T activados
por el antgeno
- Es necesaria para la supervivencia y funcin de los linfocitos T reguladores (iTreg).

Interfern gamma (IFN)

FUENTE
El IFN es producido por linfocitos Th1 CD4+, clulas NK y linfocitos CD8+

ESTMULO
- Los linfocitos NK secretan interfern gamma en respuesta a ligandos activadores
localizados en la superficie de clulas infectadas o estresadas, o en respuesta a la IL-12
- Los linfocitos T producen interfern gamma en respuesta al reconocimiento del
antgeno. La produccin de interfern gamma por parte del linfocito aumenta gracial a
IL-12 y la IL-18

CLULA DIANA
Macrfagos, linfocitos B y linfocitos T CD4+

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EFECTO
- Activa a los macrfagos para que maten a microbios fagocitados.
- Promueve el cambio de isotipo en los linfocitos B
- Promueve la diferenciacin de los linfocitos T CD4+ en el subgrupo Th1.

Interleuquina 4 (IL-4)

FUENTE
La IL-4 es producida por mastocitos, basfilos y linfocitos Th2 activados

ESTMULO
Procesos alrgicos (unin de IgE a receptores Fc) o infecciones producidas por helmintos.

CLULA DIANA
Linfocitos Th2

EFECTO
- Inhibe la diferenciacin hacia los subgrupos Th1 y Th17
- Promueve la diferenciacin del CD4+ ha Th2. *En la diferenciacin hacia Th2 es muy
importante la IL-10. La IL-10 acta sobre los macrfagos, inhibiendo la sntesis de IL-12.

CITOQUINAS HEMATOPOYTICAS
Las citoquinas hematopoyticas son aquellas que regulan la generacin de diferentes tipos de
clulas inmunitarias a partir de los precursores presentes en la mdula sea. En el timo, la
hiperproliferacin de precursores procedentes de la mdula sea, est mediada por una
citoquina hematopoytica, la IL-17.

QUEMOQUINAS
Las Quemoquinas regulan la migracin de clulas del SI. Las Quemoquinas CCL-19 y CCL-21
permiten:
-

La migracin de precursores desde la mdula sea hasta el timo

La migracin de linfocitos T desde el timo hasta los ganglios linfticos.

La expresin de CCl-19 y CCL-21 es constitutiva.

Existe una citoquina, cuya expresin no es constitutiva, denominada CXCL10. Esta quemoquina
es secretada por el endotelio en caso de que sea necesaria la sealizacin.

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15. INTERACCIONES LEUCOCITARIAS

En este tema se desarrollarn las siguientes interacciones entre clulas del sistema inmune:
-

Linfocito T- APC: este tipo de interaccin activa y promueve la proliferacin del

linfocito T e induce la secrecin de citoquinas por parte de ste.
Linfocito T- epitelio tmico: gracias a esta interaccin se produce la seleccin negativa
de linfocitos T autorreactivos y la seleccin positiva de linfocitos T que reconocen con
elevada afinidad antgenos extraos.
Linfocito T CD8+- clula diana: conlleva a la destruccin de la clula infectada.
NK- clulas diana: conlleva a la destruccin de la clula infectada y a la activacin de
macrfagos

INTERACCIN LINFOCITO T-APC

En los rganos secundarios perifricos, los linfocitos T interaccionan constantemente con
clulas presentadoras de antgenos. Existen dos tipos de contacto entre el linfocito T y las
clulas presentadoras de antgenos:
-

Contactos improductivos: el TCR reconoce el complejo MHC2-pptido extrao con una

afinidad demasiado baja, o ni siquiera lo reconoce. El contacto se disuelve lo ms
rpidamente posible
Contactos productivos: el TCR reconoce el complejo MHC2-pptido extrao con
elevada afinidad y el linfocito T se activa.

ETAPAS EN LA INTERACCIN DEL LINFOCITO T CON LA APC

YUXTAPOSICIN DE LA MEMBRANAS PLASMTICAS DE AMBAS CLULAS
Las membranas de ambas clulas quedan yuxtapuestas gracias a interacciones de baja afinidad
entre protenas glicoxiladas:
-

El CD2 de los linfocitos (glicoxilado) reconoce las protenas CD58 y CD48 (tambin
glicoxiladas) presentes en la APC.
La integrina LFA-1 del linfocito interacciona con la protena ICAM-3 presente en la
APC. Por norma general, las integrinas median interacciones de alta afinidad. Sin
embargo, en los linfocitos T podemos encontrar integrinas en 2 conformaciones: una
de baja y otra de alta afinidad.

Estas interacciones de baja afinidad han de cumplir dos requisitos:

-

Han de ser interacciones ntimas: las membranas del linfocito T y la APC han de
quedar yuxtapuestas para que los TCR y los complejos MHC2-pptido extrao queden
prximos entre s e interaccionen en caso de que el contacto sea productivo
Han de ser reversibles. Si el contacto no es productivo, estas uniones han de poder
disolverse sin demasiado gasto de energa. El 99,5% de los contactos entre linfocitos T
y APC son rpidos e improductivos. Los linfocitos T se mueven locamente entorno a las
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APC estableciendo mltiples contactos hasta encontrar el complejo MHC2-pptido

extrao capaz de activarlos.
Si el contacto es productivo y el TCR interacciona con el complejo MHC2-pptido extrao,
pasamos a la siguiente etapa: la activacin del linfocito T
ACTIVACIN DEL LINFOCITO T
El TCR del linfocito T interacciona con el complejo MHC2-pptido extrao de la APC. Se inician
una serie de cascadas de activacin que o bien se dirigen al ncleo o bien se extienden por la
membrana plasmtica del linfocito T.

PROPAGACIN DE LAS SEALES POR LA MEMBRANA DEL LINFOCITO T

Este fenmeno se denomina propagacin lateral de las seales. Esta propagacin
induce el cambio conformacional de las integrinas: estas protenas pasan de tener una
conformacin de baja afinidad a tener una conformacin de alta afinidad. La integrina
LFA-1 de alta afinidad interacciona con la protena ICAM-1 de la APC. En el linfocito T
existe otra integrina de alta afinidad, la VLA-4. No se sabe con exactitud cul es el
ligando de VLA-4. Una de las hiptesis que se barajan es que VLA4 interacciona con
protenas de la matriz extracelular secretada por las clulas dendrticas.
Antes de continuar con la activacin de los linfocitos T, vamos a explicar el proceso
mediante el cual las integrinas adquieren una conformacin de alta afinidad. En este
proceso se distinguen 3 etapas:
Paso de una conformacin de baja afinidad a una conformacin extendida: las
integrinas de baja afinidad estn plegadas sobre s mismas, de modo que solo
son capaces de interaccionar con ICAM3.
El TCR interacciona con el complejo MHC2-pptido extrao
Se reclutan proten-kinasas
Las proten-kinasas reclutan adaptadores proximales
Los adaptadores proximales reclutan GTP Exchange factors (GEFs)
Los GEFs activan a RAP-1, una GTP-asa. Para ello, retiran GDP y unen
GTP. RAP-1 unido a GTP est activo.
Rap-1 promueve un cambio conformacional en la cola de la integrina,
creando un sitio de unin
En este sitio de unin se acoplan dos protenas, denominadas talina y
quinglina
La talina y la quinglina permanecen ancladas al citoesqueleto y utilizan
la fuerza mecnica de los filamentos de actina para estirar la integrina.
En este proceso, la actina no solo se utiliza para obtener la fuerza necesaria
para el estiramiento de la integrina, sino que sirve como una plataforma de
estabilizacin para todos los intermediarios que participan en la cascada de
sealizacin.

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Paso de una conformacin extendida a una conformacin desplegada/de alta

afinidad: es un proceso complejo en el que interviene el manganeso.
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En la zona de contacto entre la APC y el linfocito T, las integrinas se disponen de dos

maneras distintas:

En los linfocitos T efectores que ya han tenido contacto con el antgeno, y en

las clulas de memoria, las integrinas se localizan en una estructura espacial
concntrica, en forma de anillo. Estos dominios en forma de anillo se
denominan SMAC.
En los linfocitos T vrgenes, donde el citoesqueleto de actina esta
medianamente desorganizado, la segregacin espacial de las integrinas no es
tan perfecta. Se observan numerosos focos de concentracin de integrinas. Se
produce una sinapsis multifocal.

CASCADA DE SEALIZACIN HACIA EL NCLEO

Estas cascadas de sealizacin finalizan con la activacin de factores de transcripcin
como NFAT o NF-B. NF-B activa la transcripcin de genes que codifican para:
CD69: marcador de activacin de linfocitos T muy utilizado en el laboratorio.
CD25: receptor de IL-2
IL-2. Un mismo linfocito T aumenta la expresin de receptores para IL-2 y
simultneamente comienza a secretar IL-2. Esto es lo que se conoce como
loop autocrino.

Adems de estas dos cascadas de sealizacin, una hacia la membrana y otra hacia el ncleo,
tiene lugar otro proceso: trfico de informacin gentica entre el linfocito T y la APC.
El linfocito t secreta una serie de vesculas en cuyo interior encontramos micro-RNAs. Estas
vesculas llegan hasta el interior de la APC. No se sabe exactamente que funcin cumple este
trfico de informacin gentica desde el linfocito T hasta la APC.

SINAPSIS LINFOCITO T- EPITELIO TMICO

Las clulas del epitelio tmico son capaces de comportarse como clulas presentadoras de
antgenos. Presentan tanto antgenos propios, como no propios. De esta forma se lleva a cabo
la seleccin positiva o negativa de los timocitos CD4+ y CD8+ procedentes de la mdula.
*Las clulas NKT son un tipo especial de linfocitos T. Se generan cuando en el timo, el TCR de
un timocito no interacciona con un complejo MHC-pptido, sino con CD1D presente en otro
timocito (interaccin timocito-timocito).

SINAPSIS LINFOCITO T CD8+ - CLULA DIANA

Este tipo de sinapsis dura un mximo de 10 minutos.
En los linfocitos CD8+, la actina forma una malla realmente tupida que impide la salida de
cualquier tipo de vescula. Cuando se produce el contacto entre el TCR del linfocito T y el
complejo MHC1-pptido extrao de la clula diana, se genera un polo en esta maraa de
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actina, permitiendo as la salida de las vesculas con sustancias citolticas. No se sabe

exactamente cmo se genera este poro. Existen dos hiptesis:
-

Aumento de la contractilidad de la actina.

Protenas que producen el desensamblaje de los filamentos de actina

SINAPSIS NK- CLULAS DIANA

Las clulas NK carecen de TCR. En su lugar presentan una serie de receptores activadores e
inhibidores. Un ejemplo de receptor activador es el NKG2D. Una vez que se produce un
contacto productivo, los receptores activadores permanecen en la zona donde se ha producido
el contacto, mientras que los receptores inhibidores quedan fuera de la zona de contacto.

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16. MIGRACIN LEUCOCITARIA

Una propiedad nica del SI que lo distingue de todos los dems sistemas tisulares del cuerpo
es el movimiento constante y muy regulado de sus principales componentes celulares. Existen
dos tipos de migracin:
-

Intratisular: migracin de clulas dentro de una localizacin a otra dentro de tejido

slido
Extravasacin: salida de leucocitos desde la sangre o linfa a un rgano slido

Entre las migraciones de clulas del SI que tienen lugar en el ser humano cabe destacar:
-

Migracin de linfocitos desde su lugar de maduracin (timo o mdula sea) a los

rganos linfticos secundarios.
Migracin de leucocitos de la lnea mieloctica (neutrfilos, macrfagos, clulas
dendrticas) desde la mdula sea a tejidos infectados. En el foco inflamatorio, las APC
captan antgenos y se dirigen hacia los rganos linfticos secundarios, donde activan a
los linfocitos T.
Migracin de linfocitos efectores desde los rganos linfticos secundarios a cualquier
tejido infectado, donde llevan a cabo sus funciones efectoras.

En caso de tumor, el micro-entorno tumoral es capaz de engaar a las clulas del SI. Las
citoquinas tumorales provocan la transformacin de las clulas dendrticas en macrfagos de
tipo II. Los macrfagos de tipo II secretan citoquinas que favorecen la proliferacin de clulas
tumorales y que impiden la entrada de leucocitos agresivos en el foco del tumor.

EXTRAVASACIN
Durante la clase de hoy vamos a explicar:
-

La migracin de leucocitos hacia el foco inflamatorio

La migracin y recirculacin de linfocitos T vrgenes

MIGRACIN DE LEUCOCITOS HACIA EL FOCO INFLAMATORIO

En primer lugar vamos a definir el concepto de HOMING. El homing es el proceso mediante el
cual, un tejido especfico recluta leucocitos que viajan por la sangre. Este proceso se produce
gracias a seales y receptores tanto del leucocito como del endotelio de los vasos sanguneos.
De esta forma el linfocito es capaz de saber cundo, dnde y cmo tiene que migrar
El reclutamiento de los linfocitos sanguneos hacia los tejidos puede dividirse en 3 pasos:
-

Rodamiento: los leucocitos ruedan sobre el endotelio de los vasos sanguneos, cada
vez a menor velocidad. Esta primera etapa est mediado por selectinas.
Adhesin: los leucocitos se frenan por completo, gracias a integrinas
Diapdesis: el leucocito sale del vaso sanguneo para dirigirse al foco de inflamacin.

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RODAMIENTO
Tanto los leucocitos como las clulas endoteliales expresan en su membrana selectinas y
ligandos para selectinas.
-

El leucocito expresa:
L-selectina
Ligando ESL-1
Las clulas endoteliales expresan:
E-selectina y P-selectina (reconoce el ligando ESL-1 expresado por el leucocito)
Ligandos PSGL-1, GlyCAM1, CD34, MAdCAM1 (estos ligandos son reconocidos
por la L-selectina del leucocito).

En la fase de rodamiento, los leucocitos se acercan al endotelio, de modo que las selectinas
interaccionan con sus ligandos. Los ligandos de las selectinas son protenas glicoxiladas. Por
tanto, estas interacciones se consideran interacciones de baja afinidad.
*Deficiencia del enzima -3-fucosil transferasa: este enzima participa en la glicoxilacin de los
ligandos para selectinas. Si se produce una deficiencia de este enzima, se expresarn los
ligandos sin glicoxilar. Estos ligandos no glicoxilados NO SON RECONOCIDOS por las selectinas.
No se produce el rodamiento y, en consecuencia, no hay respuesta inflamatoria. Para tratar
esta inmunodeficiencia se suministra al paciente fucosa oral.
ADHESIN
Los leucocitos se frenan por completo, gracias a integrinas. Para que se produzca este frenado
es necesario que las integrinas pasen de un estado de baja afinidad a un estado de alta
afinidad. Este proceso se conoce como transactivacin de integrinas.
La transactivacin de integrinas est mediada por quimiocinas. Las quimiocinas se expresan en
la superficie luminal de las clulas endoteliales. Estas quimiocinas son reconocidas por
receptores con 7 dominios transmembrana acoplados a protenas G, localizados en los
leucocitos. Durante el rodamiento, los receptores de los leucocitos interaccionan con las
quimiocinas del endotelio. Gracias a las selectinas, que frenan progresivamente los leucocitos
durante el rodamiento, aumenta el tiempo de interaccin quimiocina-receptor.
La interaccin quimiocina-receptor genera una serie de seales que se propagan por la
membrana del leucocito e inducen el cambio conformacional de las integrinas: estas protenas
pasan de tener una conformacin de baja afinidad a tener una conformacin de alta afinidad.
Las integrinas de alta afinidad son capaces de interaccionar con sus ligandos, localizados en el
endotelio. Por ejemplo, la integrina VLA-4 interacciona con VCAM-1; y la integrina FLA-1
interacciona con ICAM-1
No obstante, el frenado del leucocito no solo depende de la afinidad, sino tambin de la
avidez.
-

Afinidad: fuerza de interaccin entre un ligando y un receptor

Avidez: nmero de ligandos o nmero de receptores por unidad de rea.
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El linfocito es capaz de polarizar la expresin de integrinas: las integrinas suelen expresarse en

dominios de membrana especficos. En concreto, aparecen en zonas de la membrana ricas en
colesterol (tienen afinidad lateral por esta molcula).
El frenado completo del linfocito requiere alta afinidad y alta avidez.
-

Integrina de alta afinidad que interacciona con un ligando univalente: dbil

Integrinas de baja afinidad agregadas que interaccionan con un ligando polivalente:
dbil.
Integrinas de alta afinidad agregadas que interaccionan con un ligando polivalente:
fuerte.

Adems de provocar el frenado completo del leucocito, la interaccin de la integrina con el

ligando genera una cascada de sealizacin que finaliza con la reorganizacin del
citoesqueleto del leucocito. Esta reorganizacin esta mediada por el enzima RAC1,
perteneciente a la familia de las Rho-GTP-asas. RAC1 rpoduce la polimerizacin de la actina y la
formacin de pseudpodos.
Antes de continuar con el proceso, vamos a explicar la estructura de las integrinas.
-

Las integrinas son protenas heterodimricas, formadas por una cadena y una .
Existen entre 15-20 cadenas y entre 10-15 cadenas diferentes.
No todas las combinaciones entre las diferentes cadenas y son posibles: por ejemplo,
la cadena 1 solo es capaz de interaccionar con la cadena 1.
Hay dos combinaciones importantes que es necesario saberse:
4-1: integrina VLA-4
L-2: integrina FLA1

DIAPDESIS
Una vez que el linfocito est bien adherido, explora el endotelio gracias a sus pseudpodos con
el objetivo de encontrar un punto dbil por donde poder extravasarse.
Durante el proceso de diapdesis, el endotelio no acta de forma pasiva, sino que colabora en
la extravasacin del linfocito.
Existen dos tipos de rutas:
-

Ruta paracelular: el linfocito sale del vaso sanguneo abrindose espacio entre dos
clulas endoteliales. Este proceso requiere rotura transitoria y reversible de las
uniones adherentes entre clulas endoteliales. Las encargadas de romper estas
uniones son las metaloproteasas localizadas en la punta de los pseudpodos del
leucocito. Por otro lado, este proceso se ve favorecido por el TNF y la trombina
secretados en el foco inflamatorio. Ambas molculas producen la contraccin del
endotelio. Al contraerse, las clulas endoteliales se separan y dejan espacios entre
ellas, permitiendo la salida del leucocito.
Ruta transcelular: la clula endotelial acta como una clula fagoctica. Engulle al
linfocito por el dominio apical y lo libera por el basolateral.
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Como ya se ha comentado, el HOMING se produce gracias a ligandos y receptores expresados

tanto por el leucocito como por el endotelio de los vasos sanguneos, durante las fases de
rodamiento y adhesin. Estos receptores y ligandos varan, segn el leucocito que vaya a
extravasarse

NEUTRFILOS
- Fase de rodamiento:
Expresan L-selectina, que se une al ligando PSGL-1 expresado por el
endotelio
Expresan el ligando ESL-1, reconocido por las P-selectinas y E-selectinas del
endotelio
- Fase de adhesin
Expresan receptores de quimiocinas:
CXCR1: se une a IL-8
CXCR2: se une a IL-8
Expresan integrinas
LFA-1 y Mac-1: se unen a ICAM-1

MONOCITOS
- Fase de rodamiento:
Expresan L-selectina, que se une al ligando PSGL-1 expresado por el
endotelio
Expresan el ligando ESL-1, reconocido por las P-selectinas y E-selectinas del
endotelio
- Fase de adhesin
Expresan receptores de quimiocinas:
CCR2: se une a CCL2
CX3CR1: se une a fractalquina
Expresan integrinas
LFA-1: se unen a ICAM-1
VLA-4: se une a VCAM-1

LINFOCITOS T EFECTORES
- Fase de rodamiento:
Expresan L-selectina, que se une al ligando PSGL-1 expresado por el
endotelio
- Fase de adhesin
Expresan receptores de quimiocinas:
CCR5: se une a CCL5
CXCR3: se une a CXCL3
Expresan integrinas
LFA-1: se unen a ICAM-1

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MIGRACIN Y RECIRCULACIN DE LINFOCITOS T VRGENES

Los linfocitos T vrgenes/linfocitos T nave llegan a los ganglios linfticos por los vasos linfticos
aferentes. Para introducirse en los ganglios han de extravasarse. Esta extravasacin se divide
en 3 fases, que transcurren como se ha explicado anteriormente:
-

Fase de rodamiento:
Expresan L-selectina, que se une al ligando PSGL-1 expresado por el
endotelio
Fase de adhesin
Expresan receptores de quimiocinas:
CCR7: se une CCL19 y CCL21
Expresan integrinas
LFA-1: se unen a ICAM-1

Si el linfocito T no reconoce al antgeno, permanece virgen y abandona los ganglios. Pero si el

linfocito T reconoce un antgeno, queda antes de abandonar el ganglio, queda retenido y se
transforma en un linfocito T efector.
La salida de los linfocitos T de los ganglios linfticos depende de una sustancia quimiotctica
lipdica denominada esfingosina-1-fosfato, que se une al receptor de esfingosina-1-fosfato
(S1PR1) de los linfocitos. La concentracin de esfingosina-1-fosfato es mayor en la sangre y en
la linfa que en los tejidos. En los tejidos el enzima esfingosina-1-fosfato liasa destruye la
esfingosina-1-fosfato.
Los linfocitos T vrgenes que circulan por la sangre o linfa expresan una baja concentracin de
receptores S1PR1, debido a la elevada concentracin de esfingosina-1-fosfato, que provoca la
internalizacin de los receptores. Una vez que los linfocitos T vrgenes entran en el ganglio
linftico, donde las concentraciones de sfingosina-1-fosfato son bajas, vuelven a expresarse
receptores S1PR1 en la superficie. Los linfocitos T activados o no abandonan el ganglio linftico
a favor de gradiente de concentracin.
Existe un frmaco inmunosupresor, denominado esfingolimo, capaz de unirse a los receptores
S1PR1. Aumenta as al retencin de linfocitos T en los ganglios linfticos.

INTEGRINAS COMO DIANAS TERAPETICAS

-

Esclerosis mltiple: La esclerosis mltiple es una enfermedad autoinmune que

produce la desmielinizacin del SNC. La natalizumab es capaz de unirse a la
integrina VLA-4 impidiendo la extravasacin de los leucocitos. No obstante, este
frmaco no se utiliza en terapia.
Psoriasis: enfermedad autoinmune. El efalizumab es un frmaco inmunosupresor
capaz de unirse a LFA-1, impidiendo la extravasacin de los leucocitos. S se utiliza
en terapia.

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17. TOLERANCIA. AUTOINMUNIDAD

La tolerancia inmunitaria se define como la falta de respuesta a un antgeno inducida por la
exposicin anterior a ese antgeno. Cuando un linfocito se encuentra son su antgeno puede
activarse (se produce entonces la respuesta inmunitaria) o puede inactivarse o eliminarse
(tolerancia). Los antgenos que inducen tolerancia se llaman tolergenos o antgenos
tolerognicos; mientras que los que generan respuesta inmunitaria se denominan
inmungenos.
La tolerancia a los antgenos propios es una propiedad fundamental del sistema inmunitario
normal. Los linfocitos que reconocen antgenos propios con alta afinidad y no son eliminados o
inactivados generan respuestas autoinmunes.

HISTORIA
A lo largo de la historia se han llevado a cabo varios estudios acerca de la tolerancia:
-

Tolerancia inducida: en general, los antgenos extraos suministrados por va

subcutnea o intradrmica favorecen la inmunidad; mientras que los administrados
por va oral o venosa inducen tolerancia. Ej. Cuando se suministran antgenos extraos
a ratones por va subcutnea, se genera una respuesta inmune. Ahora bien, si primero
se les inyectan estos antgenos en sangre y a continuacin se les suministran
nuevamente por va subcutnea, ya no se genera respuesta inmune. Se induce
tolerancia antignica.
Tolerancia embrionaria: inmediatamente despus del nacimiento, los mamferos son
prcticamente inmunodeficientes. Si exponemos a un embrin o a un neonato a
determinados antgenos, puede generarse tolerancia a estos antgenos. La tolerancia
embrionaria fue descubierta en los aos 30 gracias a una serie de experimentos con
ratones: el virus de la coriomeningitis generaba respuesta inmune en ratones adultos.
Sin embargo, induca tolerancia en ratones neonatos. El virus es capaz de engaar al SI
de forma que este reconozca antgenos vricos como propios.

En los aos 40, los dos conceptos anteriores se unificaron: se llevaron a cabo una serie de
trasplantes de piel entre cepas distintas de ratones. Al trasplantar piel de un ratn adulto de la
cepa A a un ratn adulto de la cepa B, se generaba respuesta inmunolgica y rechazo. Se
seleccionaron entonces ratones neonatos de la cepa B y se les inyect linfocitos de la cepa A.
Los ratones neonatos generaron tolerancia a estos linfocitos (microquimerismo20). A
continuacin se volvi a llevar a cabo el trasplante de piel de la cepa A a la cepa B. No se
produjo rechazo.

20

Tolerancia inducida a linfocitos

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TOLERANCIA FRENTE A LO PROPIO

La tolerancia frente a lo propio puede inducirse en linfocitos autorreactivos inmaduros en los
rganos linfticos primarios (tolerancia central) o en linfocitos autorreactivos maduros en
zonas perifricas (tolerancia perifrica).
La tolerancia central asegura que el repertorio de linfocitos maduros sea incapaz de responder
a antgenos propios expresados en los rganos linfticos primarios (el timo para los linfocitos T
y la mdula sea para los linfocitos B). Sin embargo, la tolerancia central no es perfecta: los
linfocitos maduros reaccionan contra antgenos propios que se expresan solo en los tejidos
perifricos. Mecanismos adicionales de tolerancia perifrica intervienen en los tejidos
perifricos para impedir l activacin de linfocitos autorreactivos que pueden haberse escapado
de la tolerancia central.
Ciertas regiones anatmicas (ojo, SNC) cuentan con barreras fsicas que impiden el paso de los
linfocitos. Si estas barreras se ven afectadas y los linfocitos entran en contacto con antgenos
de esta zona, no los reconocern como antgenos propios y se producirn respuestas
autoinmunes (esclerosis mltiple).

TOLERANCIA DEL LINFOCITO T

TOLERANCIA CENTRAL
Durante la maduracin en el timo, se promocionan aquellos linfocitos T que reconocen los
complejos MHC-pptido propio con una avidez intermedia, ni muy fuerte (seleccin negativa)
ni muy dbil (ausencia de seleccin positiva).
-

Los linfocitos T que reconocen antgenos propios con una avidez muy baja, o que ni
siquiera los reconocen, mueren por apoptosis
Los linfocitos T que reconocen antgenos propios con alta avidez o bien son
eliminados, o bien evolucionan a linfocitos T reguladores (tolerancia). Los linfocitos T
reguladores son un linaje especial de linfocitos que siguen una va de maduracin no
convencional. Tienen una funcin esencial en la tolerancia perifrica.

CONCEPTO IMPORTANTE: GEN AIRE

El timo es capaz de expresar antgenos protenicos que suelen estar presentes solo en ciertos
tejidos perifricos (ej.rodopsina). Estos antgenos perifricos se expresan en clulas epiteliales
medulares tmicas bajo el control de la protena AIRE21 (codificada por el gen aire). La protena
AIRE es un factor de transcripcin que permite la expresin de estos antgenos perifricos.
AIRE expande zonas de la cromatina normalmente inaccesibles a la maquinaria de
transcripcin.
El sndrome autoinmue poliendocrino se debe a mutaciones inactivantes de este factor de
transcripcin.

21

Del ingls autoinmune regulator

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TOLERANCIA PERIFRICA
Los mecanismos de tolerancia perifrica son los responsables de la tolerancia del linfocito T a
antgenos propios especficos de tejidos, que no abundan o no estn presentes en el timo.
Existen tres mecanismos de tolerancia perifrica:
-

Apoptosis: existen dos posibles vas

Extrnseca
Intrnseca
- Anergia: inactivacin funcional de los linfocitos T. No hay seales de muerte, pero
tampoco de activacin
- Supresin del linfocito T por interaccin con linfocitos T reguladores.
Contacto clula a clula
Secrecin de citoquinas supresoras
Secuestro metablico: los linfocitos reguladores impiden a los linfocitos T
acceder a fuentes de seales de supervivencia. Estos linfocitos T o bien se
vuelven anrgicos o bien mueren por apoptosis.
1. Apoptosis
-

Va extrnseca: la interaccin repetida de un linfocito T con un mismo antgeno da lugar

a la expresin de receptores de muerte y de sus ligandos. El receptor mortal ms
importante es Fas y su ligando es FasL. Cuando los linfocitos T se activan de forma
repetida expresan tanto Fas como FasL. Fas se puede unir a un FasL situado en el
mismo linfocito o situado en linfocitos adyacentes.

Va intrnseca: en condiciones normales, se produce activacin del linfocito T por una

seal de estimulacin (enviada por el TCR) y una seal de coestimulacin (enviada por
CD28). La seal de coestimulacin induce la expresin de BCL2 y BCLX, inhibidores de
apoptosis.
Ahora bien, cuando no hay coestimulacin, o cuando el TCR interacciona con
demasiada afinidad con los complejos MHC-pptido, se activa una protena
denominada BIM. BIM se une a dos protenas efectoras proapoptticas, llamas Bak y
Bax. Bax y Bak abren un poro en la mitocondria y se vierte al citoplasma el contenido
superoxidativo de la misma. La clula muere por apoptosis.

2. Anergia
La exposicin de linfocitos T maduros a un antgeno sin coestimulacin provoca la inactivacin
funcional de los linfocitos.
En este proceso, las clulas autorreactivas no mueren, sino que pierden su capacidad de
responder al antgeno. La activacin completa de los linfocitos T requiere el reconocimiento
del antgeno por el TCR y por coestimuladores. CD28 (localizado en el linfocito T) es un
coestimulador encargado de reconocer B7-1 y B7-2 (localizados en la APC)

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El CTLA4 tambin se une a las molculas B7-1 y B7-2. El CTLA-4 tiene ms afinidad por las
molculas B7 que el CD28. As impide que las molculas B71 y B72 de la APC se unan al CD28.
Adems de secuestrar el B7, inhibiendo las seales de coestimulacin, el CTLA4 es capaz de
inhibir las seales producidas por el TCR. El CTLA-4 presenta una cola citoplasmtica con
tirosinas que se fosforilan y reclutan fosfatasas (no es un dominio ITIM). Estas fosfatasas
inhiben las seales del TCR.
En caso de infeccin grave, las clulas presentadoras de antgenos expresan B7 en mayores
cantidades. Se satura el CTLA4 y el B7 es capaz de unirse a los CD28.
Las clulas tumorales expresan grandes cantidades de CTLA-4 evitando as que los linfocitos T
reconozcan eptopos tumorales. En ensayos clnicos con anticuerpos anti-CTLA4 para inducir
respuestas inmunitarias frente al cncer, algunos de los pacientes tratados sufrieron
manifestaciones de autoinmunidad con inflamacin de varios rganos.
Existen otros receptores que actan de forma similar a CLA4, como por ejemplo PD1.
3. Linfocitos reguladores
Los linfocitos T reguladores son un linaje de linfocitos encargados de suprimir las respuestas
inmunitarias frente a lo propio.
Las caractersticas fenotpicas de los linfocitos T reguladores son las siguientes:
-

Expresan un factor de transcripcin caracterstico denominado FoxP3. *El defecto en

FoxP3 causa un sndrome conocido como IPEX
Expresan CTLA-4 en grandes cantidades
Expresan CD25 (receptor de Il-2) en grandes cantidades.
Proliferan lentamente, a diferencia de los linfocitos T efectores.

Los linfocitos T reguladores presentes en los distintos tejidos y rganos se diferencian:

-

En el timo
Algunos linfocitos T nave (linfocitos T vrgenes) de la periferia son capaces de
convertirse en linfocitos T reguladores por mecanismos que an no se conocen con
exactitud. Estos linfocitos reciben el nombre de linfocitos T reguladores inducibles.

Existen dos tipos de linfocitos reguladores:

-

Linfocitos T reguladores CD4+: por ejemplo, Tr1 y Th1. Tr1 y Th1 se encargan de la
tolerancia en las mucosas. Las rutas de tolerancia oral dependen absolutamente de
estas poblaciones.
Linfocitos T reguladores CD8+: destruyen linfocitos autorreactivos (citotoxicidad
celular)

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MECANISMOS DE ACCIN DE LOS LINFOCITOS T REGULADORES CD4+

-

Secuestro metablico: los linfocitos T efectores requieren Il-2 para proliferar. Los
linfocitos T reguladores secuestran la Il-2, impidiendo la proliferacin de los linfocitos T
efectores.
Adems, los T reguladores secretan adenosina. La adenosina sale a travs de un
complejo formado por CD39-CD76, interacciona con el receptor de adenosina del
linfocito T efector y activa fosfatasas. El linfocito T efector entra en un estado de
anergia.
Contacto clula a clula: los linfocitos T reguladores son pegajosos. Se unen a los
linfocitos T efectores y les inyectan AMPc. La saturacin con AMPc genera un bloqueo
metablico.
Secrecin de citoquinas supresoras:
Il-10: es un inhibidor de los macrfagos y las clulas dendrticas activados:
Inhibe la produccin de Il-12 por parte de los macrfagos y las clulas
dendrticas. Il-12 es un estmulo fundamental para la produccin de
IFN
Inhibe la expresin de coestimuladores (B71 y B7222) y molculas
MHC2 en las clulas dendrticas y los macrfagos. Al inhibir la
expresin de molculas MHC2, inhibe la activacin de linfocitos T
TGF-: inhibe la proliferacin y funciones efectoras de los linfocitos
Il-35

TOLERANCIA DEL LINFOCITO B

TOLERANCIA CENTRAL
Existen 3 mecanismos de tolerancia central en el linfocito B:
-

Edicin del receptor: cuando los linfocitos B inmaduros de la mdula sea reconocen
antgenos propios con elevada afinidad, el BCR enva una seal suficientemente
intensa como para activar las recombinasas Rag1 y Rag2. Las recombinasas Rag1 y rag2
inician una nueva ronda de recombinacin VJ en el locus de la cadena ligera. Se
expresa una nueva cadena ligera, lo que da lugar a un receptor de linfocito B con una
nueva especificidad.
Eliminacin: si la edicin fracasa, los linfocitos B inmaduros mueren por apoptosis
Anergia: linfocitos B inmaduros que reconocen antgenos propios con una avidez muy
baja.

TOLERANCIA PERIFRICA
-

22

Anergia
Apoptosis
Receptores inhibidores: el receptor CD22 (localizado en los linfocitos B) acta de la
misma forma que CTLA4

B71=CD80; B72=CD86

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2013/14

AUTOINMUNIDAD
El SI de un sujeto reacciona contra antgenos propios. La autoinmunidad se debe a un fracaso
de los mecanismos de tolerancia frente a lo propio:
-

Defectos en la seleccin negativa de linfocitos B y T

Escasez de linfocitos T reguladores
Fallos en la apoptosis

La autoinmunidad se caracteriza por ser un proceso crnico y autoamplificado. Los linfocitos T

autorreactivos expresan una serie de protenas capaces de activar nuevos clones
autorreactivos.
Existen diferentes factores que contribuyen al desarrollo de la autoinmunidad:
-

Propensin gentica: entre los genes asociados a la autoinmunidad, cabe destacar los
genes que codifican para las molculas del MHC.
Infecciones:
Activacin de las APC: los microbios activan las APC. En caso de padecer
enfermedad autoinmune, esta se ve agravada por presencia de microbios
Determinados agentes patgenos expresan eptopos semejantes a antgenos
propios. Ej: el estreptococo expresa un eptopo bacteriano muy similar a la
miosina cardaca. El organismo genera anticuerpos que atacan tanto al
microbio como al corazn. Se genera miocarditis.
Disrupcin del privilegio inmune: invasin de zonas que cuentan con barreras
fsicas que impiden el paso de linfocitos (ojo y el SNC). Algunas infecicones so
capaces de producir daos en estas barreras fsicas.

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2013/14

18. HIPERSENSIBILIDAD I
Las reacciones de hipersensibilidad son reacciones inmunes anmalas, excesivas o crnicas,
que generan lesiones tisulares y enfermedades.
Las reacciones de hipersensibilidad pueden estar provocadas por:
-

Reacciones de autoinmunidad
Reacciones contra antgenos extraos.

Las reacciones de hipersensibilidad se clasifican en funcin de los mecanismos efectores

responsables de las lesiones celulares y tisulares:
-

Hipersensibilidad inmediata/hipersensibilidad de tipo I: mediada por el anticuerpo IgE

Hipersensibilidad de tipo II: mediada por anticuerpos IgM o IgG que reconocen
antgenos de la superficie celular o de la matriz extracelular
Hipersensibilidad de tipo III: mediada por inmunocomplejos (macromolculas
formadas por unin de anticuerpos y antgenos)
Hipersensibilidad de tipo IV: mediada por linfocitos T y macrfagos.

HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO II
La hipersensibilidad de tipo II est causada por anticuerpos (IgM e IgG) que reconocen
antgenos de membrana o de la matriz celular. Los anticuerpos reconocen antgenos
especficos de determinadas clulas o tejidos. Estas enfermedades no son, por tanto,
sistmicas.
Los anticuerpos contra antgenos tisulares producen enfermedades por tres mecanismos
principales:
-

Opsonizacin y fagocitosis: los anticuerpos opsonizan las clulas. Las clulas

opsonizadas son reconocidas por cualquier clula con receptores para la regin Fc de
los anticuerpos (fagocitos y clulas NK). La clula opsonizada es fagocitada (fagocitos)
o eliminada (clulas NK).

Activacin de la va clsica del complemento: se generan una serie de reacciones que

finalizan con:

La formacin del complejo de ataque a la membrana y la destruccin de la

clula
Formacin de fragmentos pequeos que conllevan a la activacin de
leucocitos y la fagocitosis de ms clulas (respuesta inflamatoria)

Interaccin de los anticuerpos con receptores celulares: es un mecanismo efector

exclusivo de patologas. No ocurre en situaciones normales.
Los anticuerpos se unen a receptores celulares normales actuando como agonistas o
antagonistas:
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Agonistas: los anticuerpos se unen a los receptores para TSH presentes en las
clulas epiteliales de la glndula tiroides. Se produce una hiperactivacin de la
glndula HIPERTIROIDISMO
Antagonistas: interaccionan con el receptor de acetilcolina de las clulas
musculares. Se interponen en la sinapsis neuromuscular MIASTENIA
GRAVIS, enfermedad que cursa con parlisis.

ENFERMEDADES CAUSADAS POR HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO I I

ENFERMEDADES AUTOINMUNES
-

Hiper/hipotiroidismo: anticuerpos que actan como agonistas o antagonistas de la

hormona TSH
Miastenia gravis
Pnfigo vulgar: los auto-anticuerpos interaccionan con la desmoglena, protena
encargada de mantener el contacto entre las clulas epiteliales. Se produce la rotura
de epitelios y la salida de lquido hacia el exterior (se forman ampollas). Para el
diagnstico del pnfigo vulgar se utiliza la inmunofluorescencia indirecta:
Incubamos piel de un sujeto sano
Vertemos suero del paciente sobre la piel del sujeto sano
Si el suero del paciente presenta anticuerpos contra la desmoglena, estos se
unirn al epitelio.
Aadimos otro anticuerpo, capaz de reconocer el anticuerpo contra la
desmoglena. Este segundo anticuerpo est marcado con fluorescena
Observamos la muestra al microscopio de fluorescencia.
Citopenias (prdida de clulas sanguneas):
Anemia hemoltica
Trombocitopenia
Neutropenia

REACCIONES CONTRA ANTGENOS EXTRAOS

- Reacciones transfusionales.
-

Enfermedad hemoltica del recin nacido: trastorno sanguneo potencialmente mortal

en un feto o en un beb recin nacido. Aunque habitualmente la sangre fetal no se
mezcla con la sangre de la madre, durante el tercer trimestre del embarazo o durante
el parto, los eritrocitos fetales pueden alcanzar el torrente sanguneo materno. Si el
feto es Rh+ y la madre Rh-, esta ltima generar anticuerpos contra los eritrocitos del
feto. En un primer embarazo, esto no conlleva ningn problema. Sin embargo, en un
segundo embarazo en el que el feto vuelva a ser Rh+, los anticuerpos ya creados
atraviesan la placenta, dando lugar a la enfermedad.
Para evitar la produccin de anticuerpos por parte de la madre, durante el primer
embarazo se le suministran anticuerpos contra los eritrocitos del feto va
intramuscular. Si algn eritrocito fetal pasa al torrente sanguneo materno, es
rpidamente eliminado, antes de que la madre genere al anticuerpo. Los anticuerpos
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2013/14

que se suministran tienen una vida media muy corta y no son capaces de atravesar la
placenta.
-

Rechazo hiperagudo de un trasplante: cuando el paciente tiene anticuerpos

preformados contra las molculas del MHC de los tejidos del donante, se produce una
respuesta inmunitaria inmediata que conlleva a la prdida del rgano en varias horas.
Antes de llevar a cabo el trasplante, es necesario comprobar que el receptor carece de
anticuerpos preformados. No es habitual la presencia de anticuerpos contra molculas
de un MHC extrao, no propio. La presencia de estos anticuerpos puede deberse a
transfusiones, transplantes anteriores o embarazos consecutivos.

HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO 3
Enfermedades causadas por inmunocomplejos circulantes que se depositan en diferentes
rganos. Los inmunocomplejos pueden depositarse en cualquier rgano. Se trata, por tanto,
de enfermedades sistmicas.
Los inmunocomplejos pueden componerse de anticuerpos unidos a antgenos propios o a
antgenos extraos. La sintomatologa de las enfermedades no depende del tipo de antgeno,
sino del lugar donde se deposite el inmunocomplejo.
La acumulacin de inmunocomplejos puede deberse a:
-

Formacin crnica de los mismos:

Los inmunocomplejos se forman de modo natural en determinadas
infecciones. Estos inmunocomplejos son posteriormente eliminados por el
sistema del complemento. No obstante, en una infeccin crnica (hepatitis o
sida) puede producirse una acumulacin y depsito de los mismos.
Las enfermedades autoinmunes son una fuente crnica de inmunocomplejos:
se producen auto-anticuerpos dirigidos contra un auto-antgeno.
La produccin crnica de inmunocomplejos tambin puede deberse a una
fuente exgena de un antgeno (plantas, animales). Si no evitamos la
exposicin a estos antgenos exgenos contra los que generamos anticuerpos,
se producir acumulacin de inmunocomplejos.
El mal funcionamiento de la va clsica del complemento: se favorece la acumulacin
de inmunocomplejos.

Factores que favorecen la persistencia de inmunocomplejos:

-

Tamao: los inmunocomplejos pequeos escapan a la funcin de los fagocitos.

Isotipo de Ig: la IgA no es capaz de activar el complemento. Un inmunocomplejo
formado por IgA es difcilmente eliminable.

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2013/14

Factores que favorecen el depsito de los inmunocomplejos

Los inmunocomplejos se depositan preferentemente en las zonas de alta presin sangunea:
-

En el glomrulo renal: provocan glomerulonefritis

En la sinovia articular: producen artritis.

Patogenia
Los inmunocomplejos se depositan y activan el complemento. La liberacin de fragmentos
pequeos favorece la llegada de leucocitos y aumenta la permeabilidad vascular. Al aumentar
la permeabilidad vascular, los inmunocomplejos son capaces de pasar el tejido del glomrulo o
de la sinovia, donde siguen activando el complemento. Adems, los NK y fagocitos tisulares
reconocen las regiones Fc de las Ig del inmunocomplejo, activndose. Todo ello conlleva a
dao tisular.

ENFERMEDADES CAUSADAS POR HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO III

ENFEREMDADES CONTRA ANTGENOS EXTRAOS
-

Enfermedad del suero: fue descrita en el ao 1911 por el doctor Clemens von Pirquet.
En aquella poca, la difteria se trataba con suero procedente de caballos inmunizados
con la toxina diftrica. El suero de los caballos contena anticuerpos antitoxnicos que
bloqueaban la accin de la toxina. Von Pirquet observ que, al cabo de varios das, los
pacientes que haban sido tratados con el suero equino, desarrollaban artritis,
vasculitis e insuficiencia renal. Von Pirquet lleg a la conclusin de que los pacientes
generaban inmunocomplejos complejos que se depositaban en las articulaciones, los
vasos sanguneos y el rin.
Hoy en da, la enfermedad del suero es provocada por diferentes antgenos exgenos.

Poliarteritis nodosa: producida por acumulacin de inmunocomplejos generados

durante una hepatitis B crnica

Glomerulonefritis postestreptococica: acumulacin de inmunocomplejos generados

durante una infeccin por estreptococos

ENFERMEDADES AUTOINMUNES
-

Lupus eritematoso sistmico: afecta especialmente a mujeres. Cursa con eritemas,

artritis, glomerulonefritis y citopenias (anemia, trombopenia, linfopenia).
El lupus est favorecido por diferentes factores:

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Susceptibilidad gentica
Exposicin a la luz UV
Dficit en la eliminacin de cuerpos apoptticos. Existe un exceso de
autoantgenos (DNA de doble cadena) procedentes de los cuerpos apoptticos
que no son eliminados por el complemento. Los linfocitos B autorreactivos
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2013/14
generan anticuerpos contra estos autoantgenos. Los anticuerpos
generalmente reconocen ribonucleoprotenas e histonas del DNA de doble
cadena.

Diagnstico: el diagnstico del lupus se lleva a cabo mediante inmunofluorescencia

indirecta.

Incubamos clulas epiteliales.

Vertemos el suero del paciente sobre la muestra.
Si en el suero existen anticuerpos que reconocen el DNA de doble cadena, se
unirn a los ncleos de las clulas.
Aadimos otro anticuerpo, capaz de reconocer el anticuerpo contra el DNA de
doble cadena. Este segundo anticuerpo est marcado con fluorescena
Observamos la muestra al microscopio de fluorescencia.

Crioglobulinemia

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19. HIPERSENSIBILIDAD II
HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO IV
La hipersensibilidad de tipo IV est mediada por linfocitos T de memoria y macrfagos. Las
reacciones inflamatorias estn desencadenas por:
-

Linfocitos T CD4+: secretan citocinas.

Th1: secretan IFN-. El IFN- activa a los macrfagos. Los macrfagos activados
fagocitan y destruyen la clula del husped. Adems, el IFN- acta sobre los
linfocitos B: los linfocitos B producen Ig. Estas Ig median la accin del
complemento, se unen a los receptores Fc de fagocitos y clulas NK
Th17: secretan IL-17 e IL-22, citocinas proinflamatorias.
Linfocitos T CD8+: eliminan las clulas del husped.
Secretan citocinas citotxicas como grancimas y perforinas.
Inducen la muerte celular mediante el sistema FAS-FASL

La hipersensibilidad de tipo IV se denomina hipersensibilidad retardada: se desencadena a las

24-48 horas despus de la exposicin al antgeno.
MECANISMOS EFECTORES
Los mecanismos efectores de la hipersensibilidad de tipo IV son los mimos que emplean los
linfocitos T para eliminar los antgenos extraos.
-

Los linfocitos reconocen un antgeno gracias a su TCR:

T CD4+ liberan citocinas
T CD8+ producen la muerte de las clulas del husped.

Los linfocitos T provocan una reaccin inflamatoria y dao tisular.

ENFERMEDADES CAUSADAS POR HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO IV

ENFEREMDADES AUTOINMUNES
Causadas por linfocitos T autorreactivos que reconocen antgenos propios
-

Diabetes mellitus: los linfocitos T autorreactivos reconocen antgenos presentes en las

clulas de los islotes de Langerhans (son las responsables de la produccin de
insulina). Los sntomas de la diabetes mellitus son sobre todo metablicos:
Hiperglucemia
Cetoacidosis
Sed
Poliuria
Es una patologa muy grave que puede conllevar a complicaciones como la
arterioesclerosis

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Artritis reumatoide: los linfocitos T autorreactivos reconocen antgenos de la sinovia

de las articulaciones. Es una enfermedad crnica que en ausencia de tratamiento
puede llegar a producir la destruccin completa de la membrana sinovial, e incluso el
cartlago. Cursa con sntomas como artritis, rigidez (sobre todo por las maanas),
inflamacin, deformidad articular Pueden llegar a verse afectados otros rganos,
como el pulmn y la piel.
En la artritis reumatoide tambin intervienen linfocitos B autorreactivos que generan
autoanticuerpos:
Factor reumatoide: autoanticuerpo dirigido contra las IgG del propio individuo
Anti-pptido cclico citrulinado: esta clase de autoanticuerpos aparecen muy
rpidamente, incluso antes de que comiencen a manifestarse los sntomas de
la enfermedad.
La enfermedad est ligada a ciertos polimorfismos del sistema HLA (susceptibilidad
gentica).

Esclerosis mltiple: los linfocitos T autorreactivos reconocen la mielina del SNC. La

esclerosis mltiple es una enfermedad que cursa en brotes. Produce la
desmielinizacin del SNC. Cursa con sntomas como: parlisis, ceguera, incontinencia
urinaria

TRATAMIENTO DE LAS ENFERMEDADES AUTOINMUNES

No hace mucho, las enfermedades autoinmunes se trataban con inmunosupresores. Estos tratamientos
tenan muchos efectos secundarios y no se podan alargar en el tiempo.
Hoy en da, gracias al conocimiento de la patogenia de este tipo de enfermedades, se han puesto en
prctica terapias ms especficas. En concreto, el uso de AcM (anticuerpos monoclonales) ha mejorado
mucho la calidad de vida y pronstico de los pacientes.
-

Artritis reumatoide: se utilizan dos tipos de AcM

o Anticuerpos anti-TNF
o Anticuerpos anti-CD20: dirigidos contra los linfocitos B autorreactivos. Se dejan de
generar as lso autoanticuerpos.
Esclerosis mltiple: se utilizan anticuerpos anti-VLA4. La VLA4 es una integrina utilizada por los
linfocitos para atravesar la barrera hematoenceflica. Si bloqueamos el paso de linfocitos hacia
el SNC, evitamos que reconozcan la mielina y la destruyan.

ENFERMEDADES CAUSADAS POR ANTGENOS EXTRAOS

-

Dermatitis de contacto: mediada por linfocitos T CD8+ que reconocen antgenos

externos (procedentes de metales o de algunas plantas).
El linfocito T no reconoce antgenos no proteicos. Los antgenos externos entran a
travs de la piel y se unen a una protena, formando un neoantgeno. Los
neoantgenos son presentados por una clula de Langerhans a los linfocitos T CD8+ de
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2013/14

memoria. El linfocito CD8+ lisa las clulas del husped provocando una reaccin
inflamatoria que conocemos como eccema.
-

Tuberculosis: mediada por linfocitos T CD4+ que reconocen antgenos de la

micobacterium tuberculosis. La micobacterium tuberculosis es una bacteria
intracelular, difcil de eliminar. Las clulas del husped infectadas liberan antgenos
bacterianos. Los antgenos bacterianos se unen a las APC. Las APC presentan estos
antgenos a los linfocitos T CD4+. Los linfocitos T CD4+ liberan IFN-, que activa a los
macrfagos.
En la tuberculosis es caracterstica la formacin de granulomas: bolas de linfocitos T
activados y macrfagos gigantes sustentados por colgeno.
Diagnstico: test de la tuberculina. Inyectamos a un paciente, antgenos de la
micobacteria a nivel intradermal. Si este paciente ya ha entrado en contacto con la
bacteria, los linfocitos T de memoria ya preformados inducen una respuesta
inflamatoria que provoca un edema o eritrema.

HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO I
La hipersensibilidad de tipo I est mediada por IgEs unidas a la membrana de mastocitos,
basfilos y eosinfilos. Es una hipersensibilidad inmediata, que tiene lugar en pocos minutos
tras la exposicin al antgeno.
La mayora de las reacciones alrgicas (aunque no todas) estn mediadas por hipersensibilidad
de tipo I. No obstante, en este tema utilizaremos la palabra alrgeno para referirnos a los
antgenos responsables de las reacciones de hipersensibilidad inmediata.
Antes de continuar con los mecanismos efectores, vamos a explicar dos conceptos
importantes:
-

Anafilaxis: reaccin de hipersensibilidad inmediata muy grave, que puede provocar la

muerte del paciente por asfixia o por colapso cardiovascular
Atopia: predisposicin de ciertos individuos a generar IgEs contra determinados
antgenos ambientales (pelo de animales, polen)

FASE DE SENSIBILIZACIN
Primera exposicin del paciente al alrgeno. Las clulas dendrticas del epitelio a travs del
cual entran los alrgenos capturan los antgenos, los transportan a los ganglios linfticos y se
los presentan a los linfocitos T vrgenes CD4+. Los linfocitos T se diferencian entonces a
linfocitos Th2. Los Th2 secretan Il-4 e Il-3.
Los linfocitos B reconocen ambas citocinas, sufren un cambio de isotipo de cadena pesada y
comienzan a secretar IgE.
Las IgE recin sintetizadas se unen a los receptores Fc de mastocitos, basfilos y eosinfilos.

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2013/14

SEGUNDA EXPOSICIN AL ANTGENO

-

Fase temprana: las IgE de la superficie de macrfagos, mastocitos y eosinfilos se

aproximan entre ellas (proceso conocido como entrecruzamiento de Igs). El alrgeno
se une a los anticuerpos y los mastocitos, basfilos y eosinfilos liberan los grnulos de
secrecin. Estos grnulos contienen aminas vasoactivas y mediadores lipdicos
(leucotrienos y protaglandinas)

Fase tarda: mediada por citocinas producidas por los Th2, mastocitos, basfilos y
eosinfilos. Estas citocinas producen reacciones inflamatorias al cabo de varias horas:

IL-4 e IL-3: mantienen la secrecin de IgE

TNF: citoquina proinflamatoria que provoca un aumento de la expresin de
molculas de adhesin y quimioquinas, con el consiguiente auemnto del
reclutamiento de leucocitos.
IL-5: induce proliferacin y activacin de eosinfilos
Eotaxina: reclutamiento de eosinfilos
MIP1-: reclutamiento de leucocitos
GM-CSF: aumento de la produccin de linfocitos en la mdula sea.

FACTORES QUE PREDISPONEN A PADECER UNA HIPERSENSIBILIDAD DE

TIPO I
La diferenciacin hacia Th2 est favorecida por:
-

Activacin crnica o repetida de linfocitos T en ausencia de estmulos de la inmunidad

innata: si los linfocitos T vrgenes interaccionan con su antgeno en ausencia de un
microclima de inflamacin se diferenciarn hacia Th2. La ausencia de estmulos
proinflamatorios favorece la secrecin de Il-4 e Il-13 (citoquinas que inducen
diferenciacin hacia Th2)
Interacciones de baja afinidad entre el linfocito T y la APC
Bajas cantidades de antgeno

*Interacciones de alta afinidad y elevadas cantidades de antgeno favorecen la diferenciacin

hacia Th1.
Existen 3 tipos de factores que aumentan la predisposicin a padecer alergias:
-

Mecanismo genticos
Mecanismos ambientales
Caractersticas de los propios alrgenos.

FACTORES GENTICOS
Existen muchos polimorfismos de diferentes genes que aumentan la predisposicin a padecer
hipersensibilidad:
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-

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Polimorfismos que afectan a genes que codifican para la Il-4, Il-5 e Il-13. La IL-5 est
implicada en la activacin de eosinfilos, mientras que las otras dos en la
diferenciacin hacia Th2.
Polimorfismos que afectan a genes que codifican para el MHC2.
Polimorfismos que afectan a genes que codifican para los receptores de IgEs de la
superficie de macrfagos, basfilos y eosinfilos.

AMBIENTALES
Teora de la higiene: en los pases desarrollados, la incidencia de infecciones ha disminuido
mucho, gracias a la utilizacin de vacunas y antibiticos. Al no haber situaciones
proinflamatorias de vez en cuando, se favorece la diferenciacin hacia Th2. Cuanta ms
higiene, menos condiciones proinflamatorias.
CARACTERSTICAS DE LOS ALRGENOS.
No todas las molculas son capaces de actuar como alrgenos. Para que una molcula pueda
ser considerada un alrgeno, capaz de provocar una hipersensibilidad de tipo I, ha de tener las
siguientes caractersticas:
-

Ha de ser una protena, o bien unirse a una protena (neoantgeno).

No produce reacciones inflamatorias.
Bajo peso molecular
Elevada solubilidad: la mayora de alrgenos entran a travs de la mucosa respiratoria
o de la mucosa intestinal.

Muchos de los alrgenos son enzimas (por ejemplo, las proteasas del veneno de algunos
insectos).
Para que se desencadene una reaccin de hipersensibilidad, es necesaria la exposicin
repetida al alrgeno.

MECANISMOS CELULARES Y MOLECUALRES QUE SUBYACEN A LAS

ALERGIAS
Los mastocitos, basfilos y eosinfilos son las clulas efectoras de las reacciones de
hipersensibilidad de tipo I. Aunque cada uno de estos tres tipos celulares tiene caractersticas
nicas, los tres poseen grnulos citoplasmticos que contienen los principales mediadores de
las reacciones alrgicas (aminas vasoactivas y mediadores lipdicos).
Tanto los mastocitos como los eosinfilos y los basfilos, son leucocitos procedentes de la
mdula sea. Los mastocitos son fundamentalmente clulas tisulares: se dirigen desde la
mdula sea hasta el tejido conectivo, donde terminan de madurar. Normalmente no se
encuentran mastocitos maduros en la circulacin sangunea. Sin embargo, los eosinfilos y
basfilos maduros son granulocitos sanguneos. Forman parte de los leucocitos de sangre
perifrica y solo pasan a los tejidos cuando hay una quimiocina que los atrae.
En la superficie de mastocitos, basfilos y eosinfilos encontramos receptores para IgE.
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2013/14

RECEPTOR DE IgE
Los receptores para IgE estn formados por 1 subunidad , una subunidad y dos subunidades
(las dos cadenas gamma son idnticas entre s).
-

La cadena es la encargada de unirse a la regin Fc de la IgE

La cadena y las cadenas son responsables del envo de seales intracelulares, a
travs de una cascada de sealizacin.

La cadena presenta dos colas citoplasmticas: una de ellas con un dominio ITAM y la otra
unida a una tirosn-kinasa denominada Lyn. Las cadenas presentan 1 nica cola
citoplasmtica cada una, con dominios ITAM.
La cascada de sealizacin tiene lugar de la siguiente forma:
-

La llegada del alrgeno induce el entrecruzamiento de los receptores. Este

entrecruzamiento produce la activacin de Lyn
Lyn fosforila las tirosinas de los dominios ITAM
Las tirosinas fosforiladas reclutan a la tirosn-kinasa SyK.
Lyn fosforila a Syk, activndola.
SyK activa a la fosfolipasa C.
La fosfolipasa C escinde el PIP2 localizado en la membrana citoplasmtica de la clula
en
DAG: permanece anclado a la membrana. El DAG se encarga de la activacin
de la PKC.
IP3: el IP3 produce un aumento del calcio intracelular.
La activacin de la PKC junto con el aumento del calcio intracelular conllevan a la
fosforilacin de la cadena ligera de la miosina. La fosforilacin de la cadena ligera de la
miosina provoca la contraccin de los grnulos y la liberacin de su contenido al
exterior celular.

Adems de la cascada anteriormente explicada, existen otras dos cascadas de sealizacin

-

Una de ellas, finaliza con la activacin de la MAP kinasa. La activacin de la MAP

kinasa, junto con el aumento del Ca2+ intracelular, provoca la activacin de la
fosfolipasa A2. La fosfolipasa A2 sintetiza cido araquidnico a partir de la fosfatidil
colina. A partir del cido araquidnico, se sintetizan mediadores lipdicos 8leucotrienos
y prostaglandinas).
La otra, conlleva a la sntesis de citoquinas que median las reacciones de fase tarda.
Esta sntesis de citoquinas tambin es mediada por la MAP kinasa activa. La MAP
kinasa induce la transcripcin de genes que codifican para estas citoquinas.

COMPONENTES DE LOS GRNULOS

-

Aminas vasoactivas (en concreto histamina). Producen:

Aumento de la permeabilidad vascular
Aumento de la contraccin del msculo liso.

111

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-

2013/14

Proteasas: rompen las protenas que encuentran a su alrededor, produciendo un dao

tisular
Componentes lipdicos (prostaglandinas, leucotrienos y factor activador de las
plaquetas). Producen:
Contraccin del msculo liso, especialmente de los bronquios
(broncoconstriccin)
Vasodilatacin
Aumento de la permeabilidad vascular
Actan como potentes quimiotcticos.

Los tres componentes anteriormente descritos, estn presentes en los grnulos de mastocitos,
basfilos y eosinfilos. Adems, los grnulos de eosinfilos contienen:
-

Protena bsica principal

Protena catinica de eosinfilo.

Ambos componentes tienen poco que ver con la hipersensibilidad de tipo I. Estn implicados
en la eliminacin de helmintos.

ENFERMEDADES MEDIADAS POR LA HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO I

Las enfermedades ms frecuentes provocadas por hipersensibilidad de tipo I son:
-

Retinitis y conjuntivitis alrgicas

Patologas cutneas
Alergia a alimentos
Asma
Anafilaxis/shok anafilctico

RINITIS Y CONJUNTIVITIS ALRGICA

Reaccin que tiene lugar a nivel de la mucosa de las vas respiratorias altas y a nivel de la
mucosa de la conjuntiva.
Los mediadores contenidos en los grnulos se liberan y producen:
-

Edema: salida de lquido hacia el tejido por un aumento de la permeabilidad vascular.

En caso de la retinitis, el edema produce congestin nasal.
Dao tisular: picores, prurito, enrojecimiento
Eritema

Uno de los sntomas caractersticos de la rinitis es la rinorrea (produccin constante de

mocos).
La rinitis y la conjuntivitis se tratan con antihistamnicos y corticoides locales.
PATOLOGAS CUTNEAS

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Las patologas cutneas ms frecuentes son la dermatitis atpica y la urticaria. Ambas cursan
con edema, picor y enrojecimiento de la piel. La dermatitis atpica afecta principalmente a
nios y cursa en brotes.
ALERGIA A ALIMENTOS
La reaccin de hipersensibilidad tiene lugar a nivel del intestino. Cursa con aumento del
peristaltismo y con edema. Los sntomas son: dolor clico, vmitos y diarrea.
ASMA
El asma es una enfermedad inflamatoria que produce la obstruccin intermitente y reversible
de los bronquios e hiperreactividad bronquial a los broncoconstrictores. Los pacientes sufren
insuficiencia respiratoria aguda.
Las aminas vasoactivas no cumplen un papel importante en este tipo de reaccin de
hipersensibilidad; los realmente implicados son los leucotrienos.
Los Th2, eosinfilos y mastocitos perpetan los sntomas.
SHOK ANAFILCTICO
El shok anafilctico se debe a la presencia del antgeno en el torrente sanguneo. La anafilaxia
est caracterizada por el aumento de la permeabilidad vascular y el consiguiente edema de
muchos tejidos. Debido a la salida de plasma se produce una bajada de la volemia. Esta bajada
del volumen sanguneo puede provocar un fallo cardaco, a menudo mortal.
Solo algunos alrgenos son capaces de provocar un shok anafilctico. Ej: veneno de insectos
antibiticos y algunos alimentos (frutos secos o mariscos).

DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES CAUSADAS POR HIPERSENSIBILDIAD

DE TIPO I
-

Prick test: consiste en provocar una reaccin de hipersensibilidad de tipo I a nivel

cutneo. Por ejemplo, si sospechamos que un paciente tiene alergia al cacahuete, le
inyectamos antgenos del cacahuete a nivel subcutneo. Si hay reaccin alrgica, la
zona se inflamar.
Pruebas de laboratorio: cuantificacin delas IgEs especficas que posee el paciente
para un tipo de alrgeno. Esta cuantificacin se lleva a cabo mediante una tcnica
parecida al ELISA.

TRATAMIENTO
-

Antihistamnicos: se utilizan sobre todo para las reacciones ms leves (rinitis,

conjuntivitis). En el asma bronquial los antiestamnicos no sirven para nada, pues las
aminas vasoactivas (histamina) no cumplen un papel importante.
Cromoglicato sdico: frmaco que disminuye la degranulacin de mastocitos,
basfilos eosinfilos.

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-

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Broncodilatadores: utilizados para combatir el asma bronquial. Los broncodilatadores

ms usados son los agonistas adrenrgicos.
Corticoides: disminuyen la reaccin inflamatoria.
Omalizumab: anticuerpos anti IgE

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20. INMUNIDAD E INFECCIONES

En los temas precedentes se han descrito los componentes del sistema inmunitario, as como
su maduracin y funcin. En este tema, integraremos toda esta informacin y expondremos
las principales caractersticas de la inmunidad frente a diferentes tipos de microorganismos
patgenos, as como los mecanismos que utilizan los microbios para resistirse a las defensas
inmunitarias.
Como ya se ha visto en microbiologa, existen 5 grandes grupos de patgenos: virus, bacterias,
hongos, protozoos y helmintos. El desarrollo de una enfermedad infecciosa tiene lugar en
varios pasos:
-

Entrada del microorganismo

Invasin y colonizacin de los tejidos del anfitrin
Evasin de la inmunidad del anfitrin
Lesin tisular.

Algunos microorganismos provocan enfermedades crnicas (el SI no es capaz de eliminarlos).

No obstante, no todos los patgenos son capaces de provocar enfermedad: bien porque el SI
termina con ellos o bien porque se establece un equilibrio entre el microorganismo y el
anfitrin. La capacidad de causar o no enfermedad depende del poder infeccioso del
microorganismo y de la eficacia del SI.
La lesin tisular y la enfermedad se debe a:
-

Acciones directas: mediadas por el microorganismo. Ej: produccin de toxinas (endo o

exotoxinas), efecto citoptico directo de virus
Acciones indirectas: mediadas por el SI. Ej: formacin de inmunocomplejos que se
depositan en el glomrulo renal dando lugar a glomerulonefritis.

MECANISMOS DE DEFENSA DEL ANFITRIN

-

Barreras fsicas: epitelio de la piel o de las mucosas

Inmunidad innata: respuesta inespecfica. No aumenta tras la exposicin repetida al
microorganismo. En ella participan los fagocitos, clulas dendrticas, clulas NK,
complemento, citocinas y quimiocinas.
Inmunidad adaptativa: respuesta especfica. Aumenta en exposiciones repetidas al
antgeno. Est mediada por los linfocitos T (inmunidad celular) y por los anticuerpos
producidos por los linfocitos B (inmunidad humoral).

1. BARRERA EPITELIAL
Los epitelios actan no solo actan como una barrera mecnica, sino tambin como una
barrera qumica, gracias a su pH bajo y a la produccin de determinadas sustancias que
inhiben el crecimiento de microorganismos (enzimas y defensinas). Las defensinas son
pptidos antibacterianos sintetizados por las propias clulas epiteliales. La produccin de
estas defensinas puede ser:
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Constitutiva: se producen siempre
Inducida: por unin de patrones bacterianos a toll-like receptors.

Entre otras funciones, las defensinas: rompen la pared bacteriana, actan como sustancias
quimiotcticas para los macrfagos e inducen la maduracin de las clulas dendrticas.

2. INMUNIDAD INNATA
Constituye la primera lnea de defensa contra los agentes extraos. Consta con
mecanismos de defensa celulares y bioqumicos que existen incluso antes que la infeccin,
permitiendo responder con rapidez a ella. En ella participan los fagocitos, clulas
dendrticas, clulas NK, complemento, citocinas y quimiocinas.
3. INMUNIDAD ADAPTATIVA
Inmunidad celular: mediada por linfocitos T
CD4+: Th1, Th2 y Th17
CD8+
Inmunidad humoral: mediada por linfocitos B que producen anticuerpos que
circulan por el torrente sanguneo.
La inmunidad adaptativa cuanta con memoria inmunolgica. Los linfocitos T y B
responden de forma ms rpida y eficaz en la segunda entrada del microorganismo. La
memoria inmunolgica es la base de la vacunacin.

No todos estos mecanismos del SI se activan en todas las infecciones por microorganismos. La
respuesta depende sobre todo del sitio de replicacin del microorganismo (intracelular o
extracelular). *Aunque sean intracelulares, todos los patgenos presentan una fase
extracelular.

BACTERIAS EXTRACELUALRES
MECANISMOS DE DEFENSA DEL ANFITRIN
1. RESPUESTA INNATA
- Complemento: activacin de la va clsica (se deposita C3 en la superficie de la
bacteria) y de la va de las lectinas (las lectinas de unin a manosa reconocen los
residuos de manosa de la superficie bacteriana). La va clsica participa de forma
retardada, pues su activacin requiere de un anticuerpo.
- Fagocitosis: los fagocitos poseen muchos receptores capaces de reconocer
antgenos bacterianos. Una vez fagocitada, la bacteria es destruida en el
fagolisosoma. Adems, los macrfagos activados secretan citocinas
proinflamatorias (TNF, Il-1, Il-8, Il-6, Il-12) que favorecen el reclutamiento de
leucocitos
- Reaccin inflamatoria

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2. RESPUESTA ADAPTATIVA
- Inmunidad humoral: anticuerpos secretados por los linfocitos B. Los anticuerpos
llevan a cabo las siguientes funciones:
Neutralizacin
Opsonizacin y fagocitosis
Activacin de la va clsica del complemento
Inmunidad celular: mediada por linfocitos T CD4+
MECANISMOS DE EVASIN DE LAS BACTERIAS
A lo largo de la historia, las bacterias han ido desarrollando diferentes mecanismos con el
objetivo de evadir la accin del SI. Algunos de estos mecanismos son:
-

Variacin antignica: capacidad de modificar sus antgenos de superficie. Escapan as

de los anticuerpos especficos para los antgenos.
Inhibicin de la fagocitosis: por ejemplo, el neumococo tiene una cpsula rica en
polisacridos que impide que el macrfago lo engulla. Otras bacterias, como los
estafilococos, cuentan con un enzima denominado catalasa. La catalasa bloquea la
accin de los radicales libres de oxgeno.
Inhibicin del complemento: capturan algunas de las protenas reguladoras solubles
(ej. C1 inhibidor).

ACCIONES INDIRECTAS MEDIADAS POR EL SI

-

Shok sptico: inflamacin generalizada provocada por la llegada de bacterias al

torrente sanguneo. Las citocinas Il-1 y TNF desencadenan una reaccin inflamatoria
que conlleva a un aumento de la permeabilidad vascular, la salida de lquido de los
capilares y la bajada de la volemia.
*Existen bacterias extracelulares capaces de producir superantgenos. Los
superantgenos ms conocidos son las exotoxinas del estafilococo aureus. Estas
toxinas son capaces de activar a los linfocitos T de forma simultnea (activacin
antgeno inespecfica), dando lugar a una situacin clnica muy similar al shok sptico.

Depsito de inmunocomplejos en el glomrulo renal glomerulonefritis

Anticuerpos que reconocen antgenos propios. Ej: fiebre reumtica (un tipo de
miocarditis). Los estreptococos poseen un antgeno muy similar a la miosina del
msculo cardaco. Tras una infeccin estreptococcica, los anticuerpos generados se
depositan sobre el msculo cardaco.

BACTERIAS INTRACELUALRES
MECANISMOS DE DEFENSA DEL ANFITRIN
1. RESPUESTA INNATA:
- Fagocitos: neutrfilos y macrfagos. Los macrfagos secretan Il-12, citocina
encargada de activar a las clulas NK
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-

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Clulas NK: secretan IFN, citocina encargada de activar a los macrfagos. La

activacin del linfocito NK est regulada por un equilibrio entre seales generadas
por receptores activadores y receptores inhibidores. La mayora de los receptores
inhibidores reconocen molculas del MHC1, expresadas por casi todas las clulas
sanas del cuerpo. Los linfocitos NK interpretan la presencia de MHC1 como
marcador de lo propio, normal y sano; y su falta, como una indicacin de infeccin
o dao. En la clula infectada se altera o disminuye la expresin del MHC1

2. RESPUESTA ADAPTATIVA
- Inmunidad celular: mediada por linfocitos T tanto CD4+ como CD8+.
- La inmunidad humoral es inefectiva, pues las bacterias estn en el interior de las
clulas, fuera del alcance de los anticuerpos.
MECANISMOS DE EVASIN DE LAS BACTERIAS
-

Bacterias que no infectan APC. Al no infectar APC, estas no pueden presentar los
antgenos a los linfocitos T
Ruptura del fagolisosoma (Ej.Listeria): las sustancias microbicidas del fagolisosoma
se pierden en el citoplasma
Inhibicin de la formacin del fagolisosoma.
Induccin de anergia de linfocitos T
Alteracin del MHC de las PC, impidiendo as la correcta presentacin del
antgeno.

ACCIONES INDIRECTAS MEDIADAS POR EL SISTEMA INMUNE

-

Formacin de granulomas: bolas de linfocitos T activados y macrfagos gigantes

sustentados por colgeno.

VIRUS
Los virus son patgenos intracelulares obligados.
MECANISMOS DE DEFENSA DEL ANFITRIN
1. RESPUESTA INNATA:
- Citocinas especficas: interferones de tipo 1 (IFN e IFN). Entre las funciones de
los IFN de tipo 1 encontramos:
o Inhibicin de la replicacin vrica (tiene lugar en el interior de las clulas)
o Aumento de la expresin de MHC1 de las clulas presentadoras de
antgenos
o Activacin de las clulas NK.
- Clulas NK
2. RESPUESTA ADAPTATIVA:
- Inmunidad celular: linfocitos T, tanto CD4+ como CD8+.

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Inmunidad humoral: anticuerpos que actan de forma secundaria en la fase

extracelular del patgeno. Los anticuerpos median la activacin del complemento
y de clulas con receptores para las regiones Fc.

MECANISMOS DE EVASIN DE LOS VIRUS

-

Interfieren en los procesos de presentacin el antgeno: impiden la sntesis de

molculas del MHC e interrumpen el procesamiento de los pptidos antignicos
Inhiben la accin de las NK:
Sintetizan anlogos de las MHC1, que se expresan en la superficie de las
clulas que han infectado. Estas clulas no sern reconocidas por las clulas
NK. Ej. Citomegalovirus
Inducen la expresin de molculas HLA-E
Aumentan la sntesis del MHC1 convencional.
Varan sus antgenos de superficie. Ej. El virus de la gripe.
Sintetizan citocinas inmunosupresoras (Il-10).
Bloquean la apoptosis de las clulas actuando a diferentes niveles de las vas de
apoptosis
Inhiben el complemento. Inducen la sntesis de molculas reguladoras del
complemento en la superficie de la clula infectada.
Interferencia en la maduracin e las clulas presentadoras de antgenos.

ACCIONES INDIRECTAS MEDIADAS POR EL SISTEMA INMUNE

-

Depsito de Inmunocomplejos. Ej: poliarteritis nodosa como consecuencia de acmulo

de inmunocomplejos formados por anticuerpos que reconocen el virus de la hepatitis
B
Dao tisular debido a la lisis masiva de clulas. Ej. en la hepatitis se produce una lisis
masiva de hepatocitos por parte de los linfocitos T CD8+.

PARSITOS
La mayora de los parsitos tienen ciclos vitales complejos y suelen provocar infecciones
crnicas, debido a que en cada una de las etapas de su ciclo, el parsito tiene una composicin
antignica distinta.
MECANISMOS DE DEFENSA DEL ANFITRIN
1. RESPUESTA INNATA:
- Fagocitos: muchas veces, los parsitos son ms grandes que el fagocito. En estos casos,
la fagocitosis es ineficaz.
- Citocinas: IFN-. Las funciones de esta citocina son:
Activacin macrofgica
Toxicidad directa
Diferenciacin hacia Th1
Favorece la produccin de radicales libres
Induce la sntesis de molculas proapoptticas como FAS y FASL

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2. RESPUESTA ADAPTATIVA:
- Respuesta celular: linfocitos T CD8+
- Respuesta humoral: mediada por anticuerpos
Se ha desarrollado un tipo de inmunidad adaptativa especfica frente a helmintos. Se pone en
marcha un tipo de citotoxicidad especfico, mediado por IgE.
Los antgenos de los helmintos favorecen la diferenciacin hacia Th2. Las respuestas Th2
inducen la produccin de IgE. Las IgE se unen a los antgenos de superficie de los parsitos. A
continuacin, son reconocidas por mastocitos, basfilos y eosinfilos, que liberan sus grnulos
sobre el helminto. La protena catinioca y la protena bsica principal, liberadas por
eosinfilos, son especialmente relevantes.
MECANISMOS DE EVASIN DE LOS PARSITOS
-

Variacin antignica: en cada etapa de su ciclo vital, la composicin antignica vara.

Induccin de anergia de linfocitos T
Supresin inmune generalizada:
Inhibicin de la maduracin de las APC
Activacin de linfocitos T reguladores
Evasin de la fagocitosis: inhiben la formacin del fagolisosoma
Desarrollo de tegumentos que les vuelven especialmente resistentes frente a la accin
del complemento y enzimas citotxicas.
Inhibicin del complemento: inducen la expresin de protenas reguladoras en la
superficie de las clulas a las que infectan.

HONGOS
Los diferentes hongos que afectan al ser humano pueden ser intra o extracelulares. Por lo
tanto, las respuestas inmunitarias frente a ellos suelen ser combinaciones de las inducidas por
las bacterias intracelulares y extracelulares.
*Poco importante. No caer en el examen.

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21. INMUNODEFICIENCIAS
Denominamos inmunodeficiencias a trastornos causados por defectos de uno o ms
componentes del SI. El SI deja de proteger al organismo frente a infecciones y procesos
cancerosos. Los pacientes que sufren inmunodeficiencias presentan:
-

Alta susceptibilidad a padecer infecciones. Adems, una vez que contraen una
infeccin, esta se hace crnica.
Alta susceptibilidad a padecer determinados tipos de tumores
Reacciones autoinmunes
Reacciones de hipersensibilidad.

Las inmunodeficiencias se clasifican ampliamente en 2 grupos:

-

Congnitas/primarias: causadas por defectos en genes tanto de la inmunidad innata

como de la inmunidad adaptativa. Son enfermedades muy raras (incidencia realmente
baja) que afectan a los pacientes desde la primera infancia. Aunque la incidencia es
muy baja, se han descrito ms de 100 sndromes diferentes causados por
inmunodeficiencias primarias. Estas inmunodeficiencias han facilitado el estudio del SI:
han ayudado a comprender el papel de muchos de sus componentes.

Adquiridas/Secundarias: no son hereditarias. Aparecen como consecuencia de otra

serie de factores como:
Malnutricin
Tratamientos con frmacos inmunosupresores o citotxicos:
La quimioterapia no solo termina con las clulas cancergenas, sino
tambin con las clulas del SI, creando un estado de
inmunodeficiencia adquirida.
Frmacos utilizados para tratar enfermedades autoinmunes
Frmacos utilizados para evitar el rechazo de rganos tras un
trasplante.
Infeccin de las clulas del SI: VIH.
Al igual que las anteriores, las inmunodeficiencias adquiridas afectan tanto a clulas de
la inmunidad innata como de la inmunidad adaptativa. La incidencia de enfermedades
causadas por inmunodeficiencias secundarias es mucho mayor que la causada por
inmunodeficiencias primarias.

Existe otro modo de clasificar las inmunodeficiencias, atendiendo al componente del SI que se
ve afectado

Alteracin de linfocitos T
Alteracin de linfocitos B
Defectos combinados de ambos tipos celulares (linfocitos T y linfocitos B)
Defectos en la interaccin entre la APC y el linfocito T
Alteracin de fagocitos
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Defectos en los componentes del complemento

INMUNODEFICIENCIAS CONGNITAS
Los pacientes con inmunodeficiencias congnitas son ms susceptibles a las infecciones. Estas
infecciones se vuelven crnicas y graves. Los antibiticos solo las resuelven parcialmente.
Con frecuencia, estn causadas por patgenos oportunistas, que no producen enfermedad en
individuos inmunocompetentes.

Las infecciones por bacterias extracelulares estn provocadas por

Defecto de anticuerpos
Defecto del complemento
Las infecciones intracelulares (virus o bacterias), estn provocadas por:
Defecto de linfocitos T
Las infecciones cutneas profundas, abscesos cutneos y fstulas, estn provocados
por defecto de fagocitos.

PRUEBAS Y DIAGNSTICO DE INMUNODEFICIENCIAS CONGNITAS

Cuando sospechemos que un paciente pueda padecer una inmunodeficiencia, en primer lugar
tenemos que tener en cuenta:

Su historia clnica: es interesante tener en cuenta antecedentes familiares, como por

ejemplo, el fallecimiento de un lactante a causa de una infeccin.
Infecciones de repeticin y patologas autoinmunes que haya sufrido el paciente

Si una vez valorado esto, la sospecha contina, se lleva a cabo una valoracin del sistema
inmune:
1. En primer lugar, se llevar a cabo una valoracin general. Se pide un anlisis de sangre que
contenga la siguiente informacin:
Cuantificacin de Igs
Cuantificacin de linfocitos y fagocitos (hemograma). No se cuantifican los
linfocitos en general, sino las distintas subpoblaciones por separado (CD4+,
CD8+, linfocitos B y linfocitos NK). *La cuantificacin de linfocitos se lleva a
cabo por citometra de flujo.
2. A continuacin se realiza una avaluacin de la funcin de las clulas. No se evala la
funcin de todos los tipos celulares del SI. Solo se evaluarn las clulas que se sospecha
que puedan estar alteradas.
Linfocitos T.
Estimulacin con mitgenos (fitohemaglutinina y PHA): se comprueba as
la correcta proliferacin de linfocitos T
Valoracin de respuesta especfica a un antgeno: se evoca una reaccin de
hipersensibilidad de tipo IV. Por ejemplo, mediante la prueba de la

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tuberculina. Si la funcin de los linfocitos T est alterada, no se producir
la reaccin de hipersensibilidad.

Linfocitos B
Nefelometra: cuantificacin de Igs a nivel general. Los niveles de Igs
incrementan con la edad: que un recin nacido tenga niveles de
anticuerpos bajos es perfectamente normal.
Cuantificacin de Igs especficas para un antgeno:
Cuantificacin de isohemaglutininas: anticuerpos que se sintetizan
de forma natural contra los grupos sanguneos que no son el
propio.
Anticuerpos que se generan contra determinadas toxinas con las
que previamente se ha vacunado al paciente. *Hay que tener
cuidado on las vacunaciones de pacientes inmunodeprimidos,
pues pueden resultar potencialmente mortales.
Fagocitos
Valoracin del Burst respiratorio mediante citometra de flujo. Se lleva a
cabo gracias al test de dihidrorodamina-rodamina. Si la actividad de
fagocitos es normal, tras ser estimulados, fabrican radicales libres de
oxgeno, que oxidan la dihidrorodamina a rodamina. Mientras que la
dihidrorodamina no es fluorescente, la rodamina s lo es, pudindose
cuantificar mediante citometra de flujo.
Valoracin de la capacidad quimiotctica y de migracin: se lleva a cabo
por citometra de flujo, centrndonos solo en las molculas de adhesin de
la superficie de los fagocitos.
Complemento
Hemolisis: se incuban eritrocitos con anticuerpos dirigidos contra los
antgenos de los propios eritrocitos. Se vierte el suero del paciente: si hay
complemento, se unir a los Igs y lisar los eritrocitos. Si los niveles de
protenas del complemento son bajos, o directamente no hay
complemento, no hay lisis
Nefelometra y tcnicas de biologa celular: nos permiten conocer con
exactitud qu componente del complemento es el que est afectado.

DEFICIENCIAS DE LINFOCITOS T
Estn provocadas por alteraciones de molculas que participan en distintas etapas de la
activacin de los linfocitos T

Deficiencia de CD3: los linfocitos T no se activan

Deficiencias en la cadena gamma del receptor de interleuquinas
Defectos en las vas de sealizacin intracelular: por ejemplo dficit de JAK3
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Los pacientes con fallos en los linfocitos T sufren infecciones muy graves desde las pocas
semanas o meses de vida.

DEFICIENCIAS DE LINFOCITOS B
GAMMA GLOBULINEMIA
Enfermedad ligada al cromosoma X. Se produce un bloqueo en la maduracin de los linfocitos
B, de forma que estos quedan en la mdula sea en el estado de pre-B. Este bloqueo en la
maduracin se debe a un defecto del gen que codifica para la Btk (torisina-kiansa).
Los pacientes carecen de linfocitos B maduros y anticuerpos en sangre perifrica. Sufren
especialmente infecciones provocadas por bacterias extracelulares, como estafilococos y
estreptococos. En nios son frecuentes las bronquitis y neumonas de repeticin, incluso
infecciones graves como encefalitis.
Los pacientes con gamma globulinemia tambin suelen padecer parasitosis por Giardia
Lamblia: cursa con enteritis y malabsorcin).
DFICIT SELECTIVO DE IgA
Es la inmunodeficiencia congnita ms frecuente. Se debe a la falta de maduracin de
linfocitos B hacia clulas plasmticas productoras de IgA.
El nmero de linfocitos B y T es normal, al igual que los niveles de IgM e IgG.
En general, se trata de sujetos asintomticos. En caso de manifestarse algn tipo de trastorno
seran: infecciones del tracto intestinal y respiratorio y enfermedades autoinmunes (lupus,
enfermedad celaca).
INMUNODEFICIENCIA COMN VARIABLE
Conjunto heterogneo de trastornos provocados por dficit de IgM, IgG e IgA. Estos dficits
pueden deberse a:

Dficit de linfocitos B
Fallos en la interaccin entre el linfocito B y el linfocito T: en este caso, el nmero de
linfocitos B circulantes es perfectamente normal, aunque se trata de linfocitos B
alterados.

Las enfermedades causadas por una inmunodeficiencia comn variable aparecen en la infancia
o comienzo de la edad adulta: malabsorcin, diarrea, linfomas, enfermedades autoinmunes
SNDROME HIPER IgM
Ligado al cromosoma X. Est provocado por una alteracin del gen que codifica para el CD40L
de los linfocitos T. Esto conlleva a un bloqueo en la interaccin entre el linfocito B y el linfocito
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T. No se produce el cambio isotpico del linfocito B, de forma que este sintetiza exclusivamente
IgM. Si llevamos a cabo una cuantificacin de anticuerpos veremos que los niveles de IgM
estn aumentados, mientras que los de IgA e IgG estn disminuidos.
Los pacientes que padecen este sndrome padecen infecciones por bacterias extracelulares.

INMUNODEFICIENCIAS COMBINADAS SEVERAS (SCID)

Grupo heterogneo de trastornos provocados por dficit de linfocitos tanto B como T. Los
pacientes con este tipo de inmunodeficiencia son susceptibles a padecer cualquier tipo de
infeccin.
La patologa ms comn de este grupo es la inmunodeficiencia combinada severa ligada al
cromosoma X. Esta patologa est provocada por un dficit de la cadena gamma del receptor
de citoquinas. Se ven afectados los siguientes receptores

Receptor de Il-2. Queda bloqueada la maduracin de linfocitos T y linfocitos NK

Receptor de Il-7: tiene un papel importante en la maduracin de timocitos hacia
linfocitos T
Receptor de Il-15: afecta a la maduracin de linfocitos NK.

DFICITS DE CLULAS FAGOCTICAS

DFICITS DE ADHESION LEUCOCITARIA
Como ya se explic en temas anteriores, la migracin de los leucocitos puede dividirse en tres
etapas:

Rodamiento: mediado por selectinas

Adhesin firme: mediada por integrinas
Diapdesis.

Existen dos tipos de dficits de adhesin leucocitaria:

Dficit de tipo 1: defecto del gen que codifica para el CD18 (una de las cadenas de la
integrina LFA1). Queda bloqueada la etapa de adhesin firme.
Dficit de tipo 2: ausencia de molculas en el linfocito T capaz de unirse a las
selectinas expresadas por el endotelio. Queda bloqueada la etapa de rodamiento.

ENFERMEDAD GRANULOMATOSA CRNICA

Afecta a un gen que codifica para una protena que forma parte del citocromo 558. El
citocromo 558 es necesario para la formacin del anin superxido, utilizado por los fagocitos
para degradas los patgenos que han fagocitado.
Se desarrollan gran cantidad de granulomas, debido a esta incapacidad de eliminar los
patgenos.

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DEFICIENCIAS DEL COMPLEMENTO

Los defectos en la va clsica se asocian con el depsito de inmunocomplejos; mientras que los
defectos en la va de las lectinas y en la va alternativa con las infecciones.
Dependiendo del componente del sistema de complemento que se vea afectado, surgirn unas
patologas u otras:

Dficit de los primeros componentes de la va clsica (C1, C2 y C4): se produce un

depsito de inmunocomplejos. Los pacientes desarrollan lupus eritematoso sistmico
debido al depsito de estos inmunocomplejos en el glomrulo, los vasos sanguneos y
las articulaciones.

Dficit de C3. C3 es el punto de conversin de las tres vas del complemento. Los
dficits de C3 provocan depsitos de inmunocomplejos y susceptibilidad a padecer
infecciones bacterianas.

Dficit del MAC (complejo de ataque a la membrana): susceptibilidad a sufrir

infecciones bacterianas, sobre todo por Niseisseria meningitidis.

Dficit de lectina de unin a manosa: susceptibilidad a padecer infecciones

bacterianas. Paradjicamente confiere proteccin contra infecciones causadas por
micobacterias (las micobacterias necesitan ser fagocitadas para producir la infeccin).

No solo se ven afectados los componentes que participan de forma activa en el sistema del
complemento, sino que tambin pueden verse afectadas las protenas encargadas de la
regulacin.

23

Inhibidores de C3 (factor H y factor I). La desregulacin de estos inhibidores provoca

Sobreactivacin de C3: las personas con lupus eritematoso sistmico generan
un anticuerpo (factor nefrtico 3) dirigido contra la C3 convertasa de la va
alternativa. El factor nefrtico 3 protege a la C3 convertasa del factor H, y la
estabiliza.
Sobreactivacin de C3 por ausencia dficit de factor H o factor I.23

Inhibidores del complejo de ataque a la membrana (CD55 y CD59). CD55 y CD59 se

anclan a la membrana gracias a una molcula de fosfatidil inositol glicano. Una vez en
la membrana, inhiben la sntesis del MAC (complejo de ataque a la membrana). Un
dficit de fosfatidil inositol glicano impide el anclaje de CD59 y CD55 a la membrana,
provocando una enfermedad conocida como hemoglobinuria paroxstica nocturna.
La hemoglobinuria paroxstica nocturna cursa con lisis de eritrocitos debido a una
formacin exagerada de MAC

Transcurrido cierto tiempo, la sobreactivacin genera un dficit secundario de C3.

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Inhibidor de C1. Este inhibidor no solo se encarga de la regulacin de C1, sino tambin
de la regulacin de proteasas (participan en el sistema de coagulacin) y quininas. Las
quininas producen vasodilatacin. En ausencia de C1, se produce una enfermedad
denominada angioedema hereditario: cursa con aumento de la permeabilidad
vascular y edema de la mucosa intestinal y respiratoria. Los pacientes presentan
vmitos y diarreas, o insuficiencia respiratoria.

INMUNODEFICIENCIAS SECUNDARIAS /ADQUIRIDAS

No son hereditarias. Aparecen como consecuencia de otra serie de factores como:

Tratamientos citotxicos: no solo acaban con las clulas tumorales, sino tambin con
clulas sanas del husped, incluidas las del SI
Radioterapia
Quimioterapia
Frmacos inmunosupresores: corticoides utilizados para combatir enfermedades
autoinmunes y evitar el rechazo de rganos tras un trasplante.
Extirpacin del bazo: produce inmunodeficiencias secundarias contra determinados
agentes patgenos, como por ejemplo el neumococo.
Malnutricin
Cnceres que afectan a tejidos hematopoyticos
Infeccin de las clulas del SI: ej. VIH.

En este apartado nos vamos a centrar en el VIH.

VIH
El VIH pertenece a la familia de los retrovirus y a la subfamilia de los lentivirus.
Se han identificado tres tipos de VIH:
-

Uno de ellos provoca inmunodeficiencia adquirida en primates

Los dos restantes, denominados VIH1 y VIH2 estn estrechamente ligados a los
humanos.
Progresin clnica: la progresin clnica de VIH1 es ms rpida que la de VIH2
Distribucin: VIH1 es el ms frecuente en todo el mundo. VIH2 queda
restringido al continente africano, determinadas zonas de Asia, y Portugal.
*Portugal tena colonias en frica, de ah al mayor prevalencia de VIH2

ESTRUCTURA
-

El VIH presenta dos cadenas idnticas de RNA, asociadas a una serie de enzimas
Retrotranscriptasa/ transcriptasa inversa
Proteasas
Integrasas

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-

2013/14

Estas dos cadenas, junto con las enzimas, quedan envueltas por una cpside formada
por protenas P24. El conjunto de la cpside, las dos cadenas de RNA y las enzimas
recibe el nombre de core.
El core queda a su vez recubierto por una matriz formada por protenas P17. A esta
matriz se anclan las protenas gp41 y gp120.
La matriz queda envuelta por una bicapa lipdica derivada de la membrana de la clula
husped. Las protenas gp41 y gp120 ancladas a la matriz, atraviesan la bicapa lipdica
quedando incluidas en ella.

En su genoma, el VIH presenta tres genes esenciales:

-

Gaga: codifica para protenas de la cpside y de la matriz

Pol: codifica para las enzimas virales (transcriptasa inversa, proteasas e integrasa)
Env: codifica para las protenas gp120 y gp41

Adems de estos tres genes, existen genes adicionales que aseguran la infeccin celular y al
replicacin eficiente.
CICLO VITAL DEL VIRUS
El VIH afecta a las clulas del SI que expresan receptores CD4: linfocitos T CD4+ (de memoria
preferentemente), monocitos y clulas dendrticas.
El contagio del VIH puede producirse por dos vas:
-

Horizontal: por contacto directo

Relaciones sexuales
Va intravenosa
Jeringuillas infectadas (frecuente en drogodependientes)
Transfusiones sanguneas
Vertical/perinatal: transmisin madre-hijo, en el momento del parto o durante la
lactancia.

Una vez en el organismo, el virus se introduce en aquellas clulas del sistema inmune con
receptores CD4. Adems de receptores CD4, los monocitos, clulas dendrticas y linfocitos T
CD4+ expresan receptores para quimiocinas.
El VIH es un virus fusognico: la membrana viral se fusiona con la clula del husped:
-

La protena gp120 se une al receptor CD4. Esta unin induce un cambio

conformacional de gp120
gp120 en su nueva conformacin es capaz de unirse al receptor de quimiocinas. Esta
unin provoca un cambio conformacional de gp41
Gracias al cambio conformacional, gp41 expone un pptido, conocido como pptido
de fusin, que se ancla a la membrana de la clula del husped.
Se produce la fusin de las membranas del virus y de la clula y la internalizacin del
core viral.
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-

2013/14

Una vez en el interior de la clula husped, tiene lugar la decapsidacin, con la

consiguiente liberacin de las dos cadenas de RNA.
La retrotranscriptasa sintetiza el denominada DNA proviral, a patir de las cadenas de
RNA
La molcula de DNA proviral se inserta en el DNA de la clula husped.
Una vez que el DNA est insertado, o bien permanece de forma latente, o bien
comienza la transcripcin. *La transcripcin del DNA viral se ve favorecida por las
citocinas que se generan durante las infecciones.

Imaginemos que comienza la transcripcin del DNA proviral que est insertado en el genoma
de la clula del husped. Se sintetiza:
-

RNA viral
Enzimas virales
Protenas de la cpside y de la matriz
Protenas gp120 y gp41. *Las protenas gp120 y gp41 no solo se anclan a la matriz del
virus, sino que comienzan a expresarse en la superficie de la clula del husped. Las
clulas del husped que expresan estas protenas son capaces de fusionarse con otras
clulas con receptores CD4. As, algunos virus infectan nuevas clulas sin necesidad de
pasar al espacio extracelular.

Una vez sintetizados todos los elementos necesarios, se ensamblan los nuevos virus. Los virus
salen de la clula, rodendose de parte de la bicapa lipdica de la misma.
Qu receptores de quimiocinas son los que participan?

CCR5: se expresa en los tres tipos celulares, pero son ms abundantes en los linfocitos
T CD4+ y en los monocitos
CXCR4: se expresa en los tres tipos celulares, pero es ms abundante en linfocitos T
CD4+ y clulas dendrticas.

En las primeras etapas de la infeccin, hablamos de virus M-trpicos: virus con afinidad por los
receptores CCR5. En la fase de sida (ltima fase de la enfermedad), hablamos de virus Ctrpicos, con mayor afinidad por receptores CXCR4.
Existen sujetos con una mutacin del gen que codifica para el CCR5 (mutacin 32 CCR5 delta)
que presentan una inmunidad natural contra el VIH
*En la actualidad se utilizan frmacos que impiden la unin de las protenas gp41 y gp120 a
CCR5
FASES DE LA ENFERMEDAD DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA
1. FASE DE INFECCION AGUDA: el VIH infecta los linfocitos T CD4+, las clulas dendrticas y los
macrfagos de las mucosas. Las clulas dendrticas conducen el virus hacia los ganglios
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linfticos. En los ganglios linfticos el virus infecta multitud de linfocitos T CD4+. Si produce
una replicacin muy activa (aumenta la viremia/carga viral). Cuando los linfocitos T CD4+
pasan al torrente sanguneo la infeccin se disemina. *Una clula infectada es capaz de
infectar otras 20 clulas ms. En esta fase se pierde gran cantidad de linfocitos T de
memoria.
2. FASE DE LATENCIA: suele durar aos. El SI controla relativamente la replicacin viral,
gracias a linfocitos T CD8+ y anticuerpos dirigidos contra antgenos del virus. Baja la
viremia/carga viral. La prdida de linfocitos T CD4+ contina, aunque de forma ms
progresiva. El virus provoca tambin alteraciones funcionales de clulas dendrticas y
monocitos. Es muy importante tener en cuenta que, como en cualquier otra infeccin, se
producen citocinas proinflamatorias, que favorecen la replicacin del virus.

3. FASE DE SIDA: los pacientes tienen una gran predisposicin a padecer patologas debido a
la escasez de linfocitos T CD4+
- Infecciones por patgenos oportunistas, sobre todo por citomagalovirus,
micobacterias, y criptococos.
- Tumores (linfomas, cncer del SNC, cncer de cuello de tero).
PRDIDA DE CD4+ Y DEFECTOS EN MACRFAGOS Y CLUALS DENDRTICAS
La prdida de CD4+ se debe a factores tanto directos como indirectos:
-

Efectos citopticos directos:

La replicacin viral es tan activa, que la cantidad de virus que salen del t
CD4+ terminan por romper la clula
La replicacin viral interviene en la sntesis proteica del T CD4+,
provocando su muerte
Efectos indirectos
Activacin crnica de linfocitos T CD4+: como ya hemos estudiado en
temas anteriores, la activacin crnica predispone a la apoptosis. En la
fase de latencia, el porcentaje de clulas infectadas es muy bajo; la muerte
de linfocitos T CD4+ se debe principalmente a esta activacin crnica de los
mismos.
Linfocitos T CD8+ que terminan con los linfocitos CD4+ infectados.
Anticuerpos que opsonizan los linfocitos T CD4+ infectados. A
continuacin, los linfocitos opsonizados son engullidos por macrfagos.
Defectos en la maduracin tmica.

Los macrfagos y clulas dendrticas infectadas generalmente no mueren. La expresin del

receptor CD4 en estas clulas es mucho menor, y por tanto, la replicacin viral tambin ser
menor. No obstante, si que se producen alteraciones en la presentacin de antgenos y en la
sntesis de citocinas

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NIVELES DE LINFOCITOS T CD4+ Y CARGA VIRAL DURANTE EL DESARROLLO DE LA

ENFERMEDAD.
-

Fase de infeccin aguda: disminucin brusca de los linfocitos T CD4+ y aumento de

la carga viral (la carga viral se mide en copias del virus/ ml de plasma)
Fase de latencia: inicialmente, se recuperan los niveles de T CD4+, pero estos
comienzan a caer de forma progresiva. En consecuencia, la carga viral disminuye
en un primer momento, pero comienza a aumentar conforme disminuyen los
niveles de CD4+.
Fase de sida: los niveles de T CD4+ caen por debajo de 200 clulas/L. Se dispara la
carga viral. Finalmente se produce la muerte del paciente.

SNTOMAS EN LAS DIFERENTES FASES DE LA ENFERMEDAD

1. FASE DE INFECCION AGUDA: solo desarrollan sntomas entre el 50-70% de los pacientes.
Aparece un cuadro similar a la gripe o la mononuclesis. Muy pocas veces se sospecha de
una infeccin por sida
2. FASE DE LATENCIA: puede prolongarse durante aos. Es asintomtica. El SI es competente
y puede radicar infecciones producidas por otros patgenos. No obstante, las infecciones
producidas por otros patgenos favorecen la replicacin del VIH: el SI produce citoquinas
proinflamatorias.
3. FASE DE SIDA: aparicin de tumores y enfermedades oportunistas. La enfermedad suele
ser diagnosticada en fase de sida, y el tratamiento antirretroviral se inicia en este punto.
Los pacientes que pasan por estas 3 fases se denominan pacientes tpicos. Existe un porcentaje
pequeo de pacientes en los que la enfermedad cursa de forma diferente:
-

Pacientes en los que la enfermedad progresa muy rpidamente. Sin tratamiento

pueden llegar a fallecer en tan solo 4 aos
Pacientes infectados por el VIH que nunca llegan a desarrollar la enfermedad. Su SI
consigue mantener la replicacin viral a raya. Estos sujetos han sido muy
estudiados, pero hasta la fecha no se ha llegado a comprender por qu su SI es
capaz de controlar la infeccin.

DIAGNSTICO A NIVEL DE LABORATORIO

El VIH se diagnostica por mtodos serolgicos. Son muy importantes los anticuerpos que se
producen durante la fase de latencia.

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Una vez que el sida es diagnosticado, es muy importante conocer los niveles de linfocitos T
CD4+ y la carga viral (la cuantificacin de la carga viral se lleva a cabo por PCR). Solo hablamos
de fase de sida cuando los niveles de linfocitos T CD4+ estn por debajo de 200 clulas/L
Otros factores a tener en cuenta son:
-

Marcadores de activacin crnica de linfocitos T: estos marcadores son el HLA-DR

y el CD38. A mayor nmero de estos marcadores, ms avanzada estar la
infeccin.
Hipergammaglobulinemia policlonal.

MECANISMOS DE ELUSIN DEL SI POR PARTE DEL VIH

La retrotranscriptasa inversa del VIH comete muchos errores. En cada replicacin se

genera una oleada de virus con antgenos diferentes a los de la oleada anterior. Los
linfocitos T CD8+ y los anticuerpos pierden su eficacia.
El VIH mata a las propias clulas del SI.
Internaliza el MHC1 y MHC2 de las clulas a las que infecta
El virus puede permanecer de forma latente durante aos en los linfocitos T de
memoria, ya que estos tienen una vida media muy larga.

TRATAMIENTO
La terapia utilizada se denomina HAART: se basa en una combinacin de inhibidores de la
retrotranscriptasa inversa, inhibidores de las proteasas e inhibidores de las integrasas.
Hoy en da, la infeccin de VIH es una infeccin crnica, pero no mortal.
Algunos pacientes, tras recibir este tipo de terapia sufren el sndrome inflamatorio de la
reconstitucin inmunitaria:
-

Los pacientes con sida, sufren una serie de infecciones oportunistas

El resultado de la terapia es tan bueno, que se incrementan rpidamente los
niveles de linfocitos T CD4+
Estos linfocitos T luchan contra los patgenos oportunistas, provocando un cuadro
inflamatorio agudo que puede llegar a ser muy peligroso.

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22. INMUNOTERAPIA
En este apartado, nos vamos a centrar fundamentalmente en 3 aspectos de la inmunoterapia
-

Inmunizacin
AcM (anticuerpos monoclonales) teraputicos
Inmunoterapia contra el cncer

INMUNIZACIN
Denominamos inmunizacin al proceso mediante el cual un individuo adquiere inmunidad
frente a un determinado agente patgeno. Distinguimos dos tipos de inmunizacin
-

Inmunizacin pasiva: Consiste en suministrar al paciente anticuerpos contra un

determinado agente patgeno. Confiere inmunidad sin necesidad de que el receptor
desarrolle una respuesta inmunitaria. En la actualidad, este tipo de inmunizacin se
utiliza muy poco
Inmunizacin activa: vacunacin. Es el propio individuo el que desarrolla una respuesta
inmune larga, duradera y eficaz. El descubrimiento de la vacunacin se produjo en
1700, gracias a los experimentos de Edward Jenner

VACUNACIN
La vacunacin consiste en la inoculacin de un agente infeccioso atenuado o inactivo; o un
toxoide (toxina modificada). Existen 3 posibles vas de vacunacin:
-

Va intradrmica
Va intramuscular
Va oral

Simulamos as una primoinfeccin con el objetivo de evocar una respuesta inmune adaptativa.
De esta forma, si el individuo es infectado por el patgeno real, ser capaz de defenderse
rpidamente.
El tipo de vacuna depender de:
-

La naturaleza del microorganismo. La elaboracin de vacunas contra ciertos

microorganismos es especialmente complicada. Por ejemplo, el VIH es un virus de
difcil acceso, pues se integra en el genoma humano. Adems, presenta una
variabilidad antignica elevadsima.

El tipo de patologa que queremos prevenir: las patologas pueden estar causadas bien
por el propio microorganismo, o bien por las toxinas producidas por este
microorganismo. En caso de infecciones provocadas por toxinas, no se inocula el
microorganismo, sino la toxina inactivada. Las toxinas inactivadas se denominan
toxoides.

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2013/14

CARACTERSTICAS DE UNA VACUNA EFICAZ

-

No ha de producir la enfermedad
Ha de evocar una inmunidad duradera (durante varios aos)
Han de activar tanto la inmunidad humoral (sntesis de anticuerpos) como la
inmunidad celular (linfocitos T)
No ha de tener efectos adversos (ej. generar alergias)
Ha de ser econmica, estable y de fcil administracin.

COMPOSICIN DE UNA VACUNA

Toda vacuna se compone de 3 elementos:
-

Antgeno: componente encargado de evocar la inmunidad. Existen varios tipos de

antgenos:
Microorganismos vivos atenuados o inactivados: la virulencia de estos
microorganismos es muy baja, de forma que evocan una respuesta inmune sin
producir la enfermedad. Activan una inmunidad humoral y celular de larga
duracin.
No obstante, con este tipo de vacunas hay que tener cuidado (sobre todo en
pacientes inmunodeprimidos), pues existe una posibilidad de reversin del
microorganismo atenuado a un microorganismo realmente patgeno. Algunos
ejemplos de este tipo de vacunas son: varicela, rubeola y sarampin.

Microorganismos muertos: los microorganismos mantienen su composicin

antignica y son capaces de evocar una inmunidad celular y humoral de larga
duracin. Son ms seguras que las vacunas con microorganismos vivos,
aunque un poco menos eficaces. Algunos ejemplos de este tipo de vacunas
son: gripe, rabia y fiebre tifoidea.

Antgenos purificados (protenas o glicoprotenas) procedentes del propio

microorganismo: por ejemplo, toxinas como la de la difteria o el ttanos. Estas
toxinas se inactivan o atenan y pasan a denominarse toxoides.

Antgenos (pptidos o glucopptidos) sintticos: se sintetizan en el laboratorio

de forma artificial. Reciben el nombre de antgenos recombinantes. Evocan
inmunidad humoral. Un ejemplo de este tipo de vacunas es la vacuna contra el
virus de la hepatitis B

Vectores virales: utilizamos vectores virales para liberar un determinado

antgeno

Vacunas de DNA: plsmidos de DNA con un gen que codifica para un

determinado antgeno del microorganismo contra el que estamos vacunando.

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2013/14

Coadyugantes: grupo heterogneo de molculas que potencian la respuesta inmune.

Entre estas molculas encontramos productos bacterianos (LPS) o citocinas. Gracias a
los coadyugantes se crea un ambiente proinflamatorio. Este ambiente proinflamatorio
evoca una respuesta innata que aumenta la eficacia de la respuesta adaptativa.

Sistema de liberacin: aceite, emulsin En estos medios quedan contenidos los

antgenos y los coadyugantes.

INMUNOTERAPIA CONTRA EL VIH

Encontrar una vacuna realmente eficaz contra el VIH es una tarea verdaderamente
complicada, debido a las siguientes causas:
-

Integracin del DNA proviral en el genoma de la clula husped (el virus puede
permanecer latente durante aos). Se dificulta as el acceso de los componentes del SI.
La existencia de mltiples cepas con composiciones antignicas diferentes.
La falta de modelos de enfermedad en animales pequeos. El VIH afecta
exclusivamente a primates y humanos. Los ensayos clnicos con primates son
excesivamente caros.
El desconocimiento de los mecanismos del SI capaces de terminar con la infeccin. Si
no conocemos cules son estos mecanismos, no podemos ni activarlos ni potenciarlos
mediante vacunas.
La incapacidad del sistema inmune de creas anticuerpos eficaces, capaces de bloquear
la infeccin. *Los antgenos virales no evocan una inmunidad humoral eficaz.

Debido a la ausencia de vacunas, se han intentado aplicar otro tipo de inmunoterapias, que no
han sido tiles:
-

Administracin de citocinas: Il-2 e Il-12

Terapia pasiva: administracin de citotxicos dirigidos contra los antgenos del virus

*El 13 de septiembre de 2013 (hace apenas dos meses), un grupo de investigadores ha sido
capaz de evocar la sntesis de anticuerpos realmente eficaces gracias al descubrimiento de una
nueva vacuna, vacuna cuyo antgeno es un vector viral.
Aunque no se ha averiguado la forma de acabar con la enfermedad, gracias a las terapias
antirretrovirales (explicadas en el tema anterior) la enfermedad de la inmunodeficiencia
humana se ha convertido en una enfermedad crnica, que no provoca la muerte. No obstante,
debido a esta cronicidad, los pacientes desarrollan un sndrome conocido como sndrome de
inflamacin crnica: la presencia del virus en el organismo provoca un ambiente
proinflamatorio constante.
Por otro lado, determinados frmacos contra el sida provocan alteraciones en el metabolismo
de los lpidos, generando enfermedades como ateroesclerosis.

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AcM TERAPETICOS
Los primeros anticuerpos monoclonales fueron sintetizados en el ao 1975. Actualmente,
estos anticuerpos se utilizan en mltiples terapias, como por ejemplo, el tratamiento del
cncer.
SNTESIS DE AcM
Hoy en da, los AcM se sintetizan mediante clonacin en genotecas de bacterifagos. El
proceso es el siguiente:
-

En primer lugar, se inocula el antgeno de inters a un ratn. El ratn se inmunizar

frente a este antgeno.
A continuacin, extirpamos el bazo y extraemos el RNA de los linfocitos B maduros.
A partir del RNA, sintetizamos cDNA.
Amplificamos el cDNA por PCR, utilizando primers especficos para los genes de las Igs.
Introducimos el cDNA en fagos, formando fagos recombinantes
Infectamos bacterias con los fagos recombinantes. La replicacin de los fagos dar
lugar a la sntesis de anticuerpos, que se expresan en la superficie de la bacteria.
Los anticuerpos son testados con el mismo antgeno con el que se inmuniz al animal.
De esta forma seleccionamos las bacterias que nos interesan.

Los anticuerpos que se obtienen mediante este proceso son anticuerpos murinos (de ratn). Si
suministramos anticuerpos murinos a un paciente, su SI los reconocer como elementos
extraos y los terminarn por destruir. El tiempo de la terapia sera muy limitado. Adems, los
receptores para la regin Fc localizados en clulas NK y fagocitos, reconocen peor los
anticuerpos murinos que los anticuerpos humanos.
Para solventar este problema, se sintetizan anticuerpos humanizados:
-

Anticuerpos quimricos (Fc humana + regiones variables murinas): se conservan solo

las regiones variables del anticuerpo murino. La regin Fc es sustituida por una regin
Fc humana. Desventajas: estos anticuerpos continan siendo reconocidos como
elementos extraos por el SI. Aunque la duracin de la terapia es mayor, tambin
terminan por ser destruidos. Ejemplos utilizados actualmente en clnica:
Rituximab: anti CD20
Infliximab: anti TNF. Se utiliza contra la artritis reumatoide, la soriasis y el
lupus eritematoso
Anticuerpos totalmente humanizados que solo conservan las regiones CDR murinas.
Aun as, se genera una respuesta inmune leve. Ejemplos utilizados actualmente en
clnica:
Tratuzumab: empleado en el cncer de mama
Natalizumab: dirigido contra VLA-4. Se utiliza en el tratamiento de la esclerosis
mltiple. Se evita as que los linfocitos autorreactivos alcancen el SNC.
Anticuerpos humanos: se consiguen gracias a ratones transgnicos (ratones con genes
humanos).
Ofatumumab: anti CD20
Adalimumab: anti TNF
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NOMENCLATURA DE LOS MEDICAMENTOS A BASE DE AcM

-

Anticuerpos quimricos: contienen xi

Anticuerpos humanizados con regiones CDR murinas: contienen zu
Anticuerpos humanos: contienen una u

Adems de los AcM, gracias a los nuevos avances, actualmente tambin se sintetizan:
-

Anticuerpos biespecficos: presentan especificidad para dos molculas distintas. Estos

anticuerpos estn formados por una mitad de un anticuerpo, y otra mitad de otro.
Blinatumomab: anti CD19 y anti CD3. El anticuerpo reconoce simultneamente
un linfocito B y un linfocito T CD8+. Se produce una aproximacin entre ambos
tipos celulares, y el linfocito T CD8+ provoca la muerte del linfocito B. Se utiliza
en el tratamiento de la leucemia B.
Miniantibodys, trimerobodys: formados por distintas combinaciones de
molculas. Estn en proceso de investigacin.

MECANISMOS DE ACCIN DE LOS AcM

-

Activacin del complemento

Activacin de clulas NK
Activacin de fagocitos.
Aproximacin de clulas citotxicas a clulas tumorales
Muerte celular: la muerte celular esta mediada por anticuerpos monoclonales unidos a
toxinas. El complejo AcM+toxina es fagocitado por la clula. Una vez en el interior, la
toxina provoca la muerte celular.

INMUNOTERAPIA DEL CANCER

Hoy en da, se est investigando un nuevo tipo de terapia antitumoral conocida como
vacunacin contra el cncer. Esta terapia consiste en obtener clulas dendrticas ms
eficientes a la hora de presentar antgenos tumorales. El proceso es el siguiente:
-

Obtenemos clulas dendrticas del paciente

In vitro, o bien introducimos
antgenos tumorales en el
interior
de
las
clulas
dendrticas, o bien, las
transvectamos con plsmidos
que codifican para estos
antgenos tumorales.

Suministramos al paciente la
clula dendrtica con antgenos tumorales en el interior.
Una vez en el paciente, estas clulas dendrticas comienzan a presentar lso antgenos,
activando al SI.

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2013/14

*No solo podemos transvectar las clulas dendrticas con plsmidos que codifiquen para
antgenos tumorales, sino tambin con plsmidos que codifiquen para citocinas estimulantes.
Por ejemplo, si transvectamos plsmidos que codifiquen para la Il-2, lograremos una activacin
ms eficaz del linfocito T CD8+ que esta interaccionando con la clula dendrtica.
Adems de la vacunacin, existen otro tipo de inmunoterapias contra el cncer:
-

Terapia sistmica con citocinas: consiste en inocular al paciente Il-2 e IFN. Se utiliza
en melanoma metastsico y cncer renal, aunque el xito es bastante reducido.
Bloqueo de la inmunosupresin: consiste en suministrar AcM dirigidos contra
molculas inhibidoras de los diferentes componentes del SI:
Anticuerpos anti-CTLA-4: como por ejemplo, el Ipilimumab. Se emplea en
cncer metastsico
Anticuerpos anti-linfocitos T reguladores: los linfocitos T reguladores bloquen
la accin de los linfocitos T efectores. Si inhibimos los linfocitos T reguladores,
tendremos muchos ms linfocitos T efectores capaces de luchar contra el
tumor.

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SEMINARIO 1
TCNICAS Y POLIMORFISMO DEL HLA
En clnica, cundo se necesita llevar a cabo un estudio del sistema HLA?
-

En los trasplantes. Es necesario llevar a cabo el estudio de receptores y donantes en

trasplante de rganos slidos y hematolgicos
En diagnstico: por ejemplo en la intolerancia al gluten. Si el supuesto celaco no
presenta los HLA de riesgo, hay que cuestionar el diagnstico
Prevencin: una madre que sufre una enfermedad HLA. Se hace un estudio de sus
hijos. Si los hijos no presentan los factores de riego HLA, se descarta la posibilidad de
tener la enfermedad.
Alergia a un frmaco: hay molculas de frmacos que encajan en determinadas
molculas de HLA. Si el paciente tiene esta molcula de HLA que reconoce el frmaco,
puede incluso morir.

Para llevar a cabo este estudio se utilizan diversas tcnicas.

Hay dos grupos de tcnicas:
-

Clsicas: mtodos inmunolgicos. Se utilizan anticuerpo dirigidos contra las molculas

del HLA.
Modernas: tcnicas genticas y moleculares. Actualmente se estudian los genes que
codifican para las molculas del HLA.

Un paciente puede generar anticuerpos contra las molculas HLA. Tambin se puede llevar a
cabo el estudio de estos anticuerpos.

DESCUBRIMIENTO DEL POLIMORFISMO DEL MHC MEDIANTE REACTIVOS

INMUNOLGICOS
Las molculas HLA se denominan tambin antgenos HLA porque son capaces de producir
respuestas inmunitarias.
La manera de estudiar las molculas HLA es purificando las clulas del individuo que hay que
estudiar. Necesitamos tener anticuerpos que sepamos lo que reconocen. Necesitamos
anticuerpos dirigidos contra uno de los antgenos que queramos estudiar, es decir,
anticuerpos con especificidad dirigida.
En general, las clulas que se utilizan son linfocitos. Los anticuerpos pueden venir de la
industria. Esto es actualmente. Antes los anticuerpos se cogan de la sangre de los pacientes
que estaban contaminados.
Antiguamente, por tanto, la cantidad de clulas y anticuerpos disponibles era pequea.

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Inmunologa

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El recipiente donde se hace el estudio es la placa de Terasaki. Son placas de un tamao

bastante pequeo en la que se pueden hacer 60 reacciones y cada una de estas reacciones en
un volumen minsculo (habitualmente se utiliza 1 microlitro).
De dnde sacamos los linfocitos? Los sacamos de la sangre circulante. Hacemos una
extraccin de sangre de la persona que queremos estudiar. Si esta persona ha fallecido
tambin podemos obtener linfocitos de ganglios linfticos, del bazo. Sacar linfocitos de
cualquiera de estas fuentes es relativamente sencillo mediante centrifugacin. Si queremos
estudiar molculas HLA de clase 2 tendremos que quedarnos con los linfocitos B. Si son de
clase 1 podemos quedarnos con una mezcla de ambos. Ponemos los linfocitos en los pocillos
de la placa.
A continuacin, en cada pocillo de la placa, ponemos un anticuerpo contra una molecula HLAdeterminada. En algunos pocillos, los anticuerpos se unirn a los linfoctios y en otros pocillos
no. Necesitamos un procedimiento para ver donde ha habido reconocimiento. En los aos 60
lo que se hizo fue aadir complemento, que se puede extraer y purificar del suero. Se peude
utilizar suero de animales. El que se utiliza normalmente es suero de conejo.
Las clulas que hayan sido reconocidas por el anticuerpo, van a ver su membrana plasmtica
alterada. Las que no hayan sido reconocidas, el complemento no se une y no sucede nada.
Hay algunos colorantes, los colorantes supravitales, que una clula sana impide su entrada al
citoplasma. Pero cuando la membrana esta alterada, el colorante puede entrar. Aadimos un
colorante de este tipo. Tendremos dos clases de pocillos:
-

Si hay reconocimiento la clula estar teida

Si no hay reconocimiento la clula no se tie

Luego se evalan los pocillos al microscopio. En un microscopio normal no veriamos nada. Son
microscopios en los que la lente esta debajo y la luz viene de arriba.
El nombre de este mtodo es NIH-CDC.
Este mtodo nos permite distinguir los antgenos HLA. Se invent en los aos 60 y an se
utiliza.

Imaginemos que el individuo al que estudiamos es un donante de rganos que acaba de

fallecer y queremos saber que molculas HLA tiene. Tenemos 60 pacientes que esperan un
rin. Tenemos suero de los 60. En la placa tenemos una gota de suero de cada uno de los
pacientes. Hacemos el mismo procedimiento pero:
-

Sueros de los individuos que esperan el rgano

Clulas del donante

Si las clulas absorben el colorante, significa que el paciente tiene anticuerpos contra las
molculas HLA del donante. No sabemos cual es la molecula HLA del donante, pero si sabemos

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que el paciente tiene anticuerpos que reconocen esas molculas HLA del donante. Antes de
poner el rgano ya tiene anticuerpos.
Sin embargo, si las clulas del donante no absorben el colorante, significa que el paciente no
tiene anticuerpos contra las clulas HLA de ese donante.

Con estos mtodos, cuantas molculas de HLA somos capaces de ver?

Tenemos 3 tipos diferentes de molculas de clase 1:
-

HLA-A
HLA-B
HLA-C

Dentro de cada una de ellas existen varias molculas de HLA-A, varias de HLA-B y varias de
HLA-C. *Se denominan con nmeros. HLA-A1, HLA-A2
Tenemos 3 tipos diferentes de molculas de clase 2:
-

HLA-DP
HLA-DQ
HLA-DR

*Al igual que las de clase 1, tenemos varias clases de cada una de ellas.
En los aos 60 comenzaron a secuenciarse los genes de las molculas de HLA mediante el
mtodo enzimtico. Todo el mundo quera conocer la secuencia de cada molcula de HLA.
Para una misma molcula, haba ms de una secuencia. Por ejemplo, para una molcula HLAA2 haba varias secuencias distintas.
La secuenciacin a da de hoy todava es una de las tcnicas trabajosas de estudiar el sistema
HLA, pero se utilizan nuevas tcnicas:
-

PCR para amplificar el gen

Para hacer la secuenciacin todava vale el mtodo enzimtico, pero automatizado.

Todas estas ventajas han permitido que la secuenciacin entren no solo en el laboratorio d
experimentacin, sino tambin en laboratorios clnicos.
Ha da de hoy es imposible predecir cuantos alelos HLA tiene la especie humana. Se han
identificado miles de alelos que codifican para molculas de HLA.
Problema: Cmo llamamos a todas estas variaciones?. Un comit se dedic exclusivamente a
poner nombre.
HLA-A*02:101:01:02N
*Se ha obtenido la informacin mediante un mtodo gentico. A la derecha queda el nombre
del alelo y a la izquierda queda el nombre del gen.
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El nmero en verde indica que tipo de molcula de HLA-A es. Si es HLA-A1, HLA-A2
La primera molcula HLA-A*02 se denomina HLA-A*02:01, la siguiente que se descubre HLAA*02:02 Estas molculas se diferencian entre s en algunos aminocidos
Molculas con los mismos aa, que se diferencian entre s en la secuencia de nucletidos, ya
que hay tripletes que codifican para el mismo aa. Entonces, aunque no tengan la misma
secuencia de nucletidos, pueden tener la misma secuencia de aa.
El cuarto nmero se utiliza para indicar cambios en los intrones.

Cmo de diferentes pueden ser dos alelos que codifiquen para una molcula de HLA?.
Por ejemplo, dos secuencias de aa de dos molculas de HLA-A2 pueden ser hasta un 10%
diferentes. Los cambios de aa se concentran sobre todo en el dominio amino terminal. El
polimorfismo, por tanto, lo que cambia es la capacidad de la molcula de HLA-A2 de
interaccionar con pptidos. Resulta, que lo que esta en zonas del dominio N-terminal que no
toca ni al TCR ni a los pptidos est bastante conservado. Los cambios se producen en la zona
del dominio terminal que interacciona con el pptido y con el TCR.
El polimorfismo se concentra en ciertas zonas. No es polimorfismo que se produzca por
recombinacin, si no que es un polimorfismo que se ha acumulado durante aos.
Hay tcnicas menos finas que la secuenciacin que nos permiten definir con precisin grupos
de alelos. Son ms finas que la NIH-CDC, pero menos que la secuenciacin

HLA Y TRANSPLANTE
En transplante hay que distinguir:
-

El trasplante de rganos slidos

El trasplante hemopoytico

TRANSPLANTE HEMOPOYTICO
El donante perfecto es un hermano gemelo, porque es genticamente idntico en principio.
Pero un hermano HLA idntico no es perfecto por qu?. En un hermano HLA idntico solo
tenemos garantizado que en HLA no hay incompatibilidades. Pero puede haber reacciones
inmunolgicas contra otro tipo de molculas.
Lo siguiente que buscamos, es un hermano del paciente cuyo HLA sea idntico al del paciente
cmo demostramos que el HLA del paciente es idntico que el del donante? Se realizan
estudios familiares en los que se ve la herencia de los alelos.
Cuando no hay un donante dentro de la familia, no suele ser til recurrir a familiares de
segundo grado. Hay que recurrir a los bancos de donantes. Los bancos a los que se recurre
para buscar transplantes no solo estn en Madrid. No hacemos bsquedas locales. Se busca en

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todo el planeta. Hay una red de bases de datos donde se introduce el genotipo de un paciente
y saber en un plazo relativamente breve si hay donantes que son idnticos o que podran serlo.
TRANSPLANTE DE RGANOS
Pueden producirse dos situaciones:
-

Que el paciente tenga ya los anticuerpos antes de que el rgano sea trasplantado. Para
saber si esto es as se realiza una prueba cruzada. Ej: el mtodo NIH-CDC explicado
anteriormente.
Que el paciente desarrolle anticuerpos una vez que recibe el trasplante

Si hay anticuerpos desde antes, no se lleva a cabo el trasplante.

Un 20% de los pacientes, pierden el rgano al cabo de 5 aos, bien por razones inmunolgicas
(crea anticuerpos contra el rgano) o bien por razones no inmunolgicas

A qu genes se presta atencin en trasplantes de rin?

HLA-A, HLA-B y HLA-DRB1.
Cada uno de estos genes tiene 2 alelos. A cada paciente se le miran seis alelos en total.
Se puede trasplantar un rin con estos seis alelos distintos. Se hace. No se hace por
accidente. Despus de 5 aos, en bastantes casos, los riones siguen funcionando. Por qu
siguen funcionando? Gracias a inmunosupresin. Para que no se produzca el rechazo se le da
al paciente frmacos que inhiben el sistema inmune. El paciente ha de mantenerse durante
toda su vida bajo una inmunosupresin. Los frmacos inmunosupresores tienen diferentes
toxicidades (por ejemplo, pueden elevar el colesterol). El inmunosupresor deprime el sistema
inmune lo suficiente como para que no se rechace el rgano de manera violenta. Pero ante
una infeccin, el paciente tiene un sistema inmune menos eficaz. Es un precio que hay que
pagar. Se necesita un equilibrio, ni quedarse corto en inmunosupresores porque se pierde el
rgano, ni pasarse para que el paciente no muera por infecciones.
Hay una minora de casos en los que los trasplantes se hacen de donantes HLA idnticos. La
mayora reciben inmunosupresin. Lgicamente, cuanto ms parecido sea el donante y el
receptor, menos episodios de rechazo hay.
En tiempos modernos, se ha reducido el nmero de rechazos. Han cambiado los frmacos
inmunosupresores. Hay inmunosupresores que con menos toxicidad mantienen el sistema
inmune a raya para que los rganos no se rechacen. Las supervivencias han aumentado.
Hay gran debate entre distintas escuelas de trasplante entre si hay que dar mucha importancia
a que el donante y el receptor sean idnticos, o si teniendo inmunosupresores, priorizamos
otros factores, como el tiempo de espera que lleva un paciente, o si el candidato es un nio o
una persona mayor. No hay una respuesta unnime a si hay que priorizar o no el parecido
gentico. Este debate tiene consecuencias: por ejemplo, en Espaa no hay una sola lista de
trasplante renal.
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Una caracterstica que distingue el rin de los otros rganos grandes es que un rin que no
funciona puede ser sustituido por una dilisis. Por tanto, un paciente en espera a un rin
puede estar meses o aos. Puede esperar a un rin adecuado genticamente.

Pero si lo que falla es el corazn o un pulmn?

El paciente no puede esperar durante aos. Un estudio HLA de baja resolucin, mediante las
tcnicas ms sencillas se tarda 5 o 6h. Esto puede ser demasiado segn qu circunstancias. Por
ejemplo, los riones pueden estar fuera del cuerpo sin ser trasplantado durante varias horas.
Pero sin embargo, con el corazn, el hgado y el pulmn no aguantan todas estas horas. Si el
paciente no puede esperar y el rgano no aguanta tantas horas Las probabilidades de
trasplante se reducen.
Cmo se implantan entonces estos rganos? Se implantan al azar. Hay siempre que
inmunodeprimir al paciente. Eso s, la prueba cruzada siempre hay que hacerla.
En estos trasplantes no hay emparejamiento gentico entre donante y receptor. Como se sabe
de antemano que seguramente sean incompatibles, la inmunosupresin es ms fuerte.

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SEMINARIO 2: PRUEBAS ANALITICAS

PARA EL ESTUDIO DEL SI
Este es un seminario dirigido a conocer las pruebas ms habituales que se utilizan para
conocer el SI.
Guion:
-

Tcnicas para el estudio de la inmunidad innata

Tcnicas para el estudio de la inmunidad adquirida
Autoinmunidad

Hay dos tipos de inmunidad: innata y adquirida.

-

La inmunidad innata es la que se tienen desde el nacimiento.

Inmunidad adquirida
o Activa: anticuerpos generados por el individuo.
Natural: despus de una infeccin
Artificial: despus de recibir una vacuna
o Pasiva: anticuerpos ya fabricados previamente
Natural: el recin nacido a travs de Igs que atraviesan la placenta
Artificial: anticuerpos que vienen de otras fuentes. Suministro de
globulinas intravenosas.

La inmunidad innata es rpida y puede aparecer entre las 0-4 horas de la infeccin inicial. La
inmunidad adaptativa puede ser un poco ms tarda (3-4 das despus de la infeccin). Ambas
tienen como objetivo la eliminacin del agente patgeno
La adaptativa requiere el transporte del antgeno a los rganos linfticos secundarios, la
presentacin de este antgeno y la proliferacin de linfocitos T y B. es ms lenta.

INMUNIDAD INNATA
COMPLEMENTO
Un mecanismo fundamental de la inmunidad innata es el sistema de complemento. El
complemento tiene 3 vas
-

Va clsica: se activa por complejos antgeno anticuerpo

Va alternativa: se activa por antgenos de superficie de patgenos
Va de las lectinas: se activa por manano.

Estas 3 vas convergen en la C3 convertasa.

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El sistema de complemento tiene funcin ltica, principalmente: elimina los patgenos. Pero
tambin
-

Opsonizacin y fagocitosis
Eliminacin de inmunocomplejos
Coagulacin e inflamacin mediada por los fragmentos pequeos.

La funcin principal del complemento es la lisis, la eliminacin de los patgenos. Los ensayos
de activacin de las vas del complemento se han diseado en funcin de la capacidad de
lisar.
-

CH-50: mide la capacidad de activacin de la va clsica

AP-50. Capacidad de activar la va alternativa

CH-50
La va clsica se activa fundamentalmente por inmunocomplejos. Basndose en esta premisa,
hace muchos aos (hacia los aos 50) alguien puso en prctica un sistema en el que utilizaba
como antgeno eritrocitos de carnero; y un anticuerpo de conejo. Este complejo antgenoanticuerpo es capaz de activar la va clsica. Tenemos en el laboratorio inmunocomplejos de
estos y los hacemos reaccionar con el suero de un paciente. Si la va clsica del paciente
funciona adecuadamente, se lisaran estos inmunocomplejos. Esta lisis la medimos fcilmente
porque se suelta hemoglobina. Esto se mide con espectofotmetro.

AP-50
En la va alternativa se activa por antgenos de la superficie celular. Se utilizan eritrocitos de
conejo. Estos eritrocitos se ponen en presencia de un suero humano. Si el complemento
funciona, se lisarn estos eritrocitos. Esta lisis la medimos fcilmente porque se suelta
hemoglobina. Esto se mide con espectofotmetro.

Estos experimentos se hacen en tubos de ensayo. En cada tubo se aade ms o menos suero
del paciente. Se elabora un grfico de lisis segn la dilucin del suero .
Qu tipo de parmetros hay que medir en el complemento?
Adems de hacer los estudios anteriores, hay que medir otra serie de parmetros:
-

Deficiencias por consumo.

o Situaciones en los que est bajo el C3, C4 y C1q (componentes de la va
clsica).
o Situacin en los que est bajo el C3 y el C4 pero el C1q es normal (va
alternativa)

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En estas situaciones nos planteamos o bien que el individuo tiene una infeccin o
una enfermedad autoinmune. Por ello, estn reducidas las protenas del
complemento
-

Deficiencias primarias/congnitas
C3 y C4 estn normales. CH-50 o AP-50 es 0. Deficiencias en otros
componentes del complemento, que no son ni C3 ni C4. Hemos de
hacer estudios para caracterizar que componente es el que falta: por
ejemplo, aadimos diferentes componentes y uno de ellos restituye la
actividad ltica.

En qu situaciones se pide un estudio de complemento?

-

Lupus eritematoso
Infecciones repetitivas
Angioedema hereditario
Patologas renales.
o Sndrome urmico hemoltico
o Glomerulonefritis

DEFICIENCIAS PRIMARIAS
La inmunodifusin doble es una tcnica que se hace en una placa de agar con varios pocillos.
Ponemos anticuerpos frente a los componentes de complemento. A continuacin ponemos el
suero del paciente. Si el anticuerpo reconoce su antgeno, aparece una banda. Pero si el
elemento del complemento reconocido por uno de los anticuerpo de los pocillos, no est en el
suero del paciente, no habr banda.
Las deficiencias primarias en C5, C6 suelen cursar con infecciones de repeticin.
Pero hay otra serie de protenas reguladoras: factor H y Factor I (de la va alternativa); C1
inhibidor. Hay mutaciones en estos genes que causan enfermedades.
La deficiencia del C1 inhibidor causa angioedema hereditario: es una de las llamadas
enfermedades raras (prevalencia baja). Cursa con episodios de edemas recurrentes, en cara,
articulaciones, abdomen. Estas enfermedades cursan en brotes.
El problema ms serio que tienen los pacientes es que se les inflame la garganta y fallezcan por
asfixia.
A estos pacientes se les puede administrar el C1 inhibidor en el momento del ataque. Estos
enfermos no responden a los antiestamnicos.
Los parmetros que hay que medir para diagnosticarla son los niveles de C3, C4 y C1 inhibidor.
-

Angiodema de tipo 1: niveles bajos de C1 inhibidor. C4 bajo

De tipo 2: los niveles de C1 inhibidor estn normales o aumentados, pero es una
protena disfuncional. C4 bajo
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En estos pacientes se puede caracterizar la mutacin del gen que codifica para C1 inhibidor
Sndrome hemoltico urmico y glomerulonefritis:
Afectan a la microvasculatura renal. Se deben a fallos en la va alternativa. En estas
enfermedades hay activacin anmala del sistema del complemento.
-

Sndrome urmico hemoltico: se da en general en nios. Hay una bacteria que puede
causar esta patologa. Cuando la enfermedad es de tipo infecciosa remite. Pero hay
otras enfermedades denominadas atpicas, que es por mutacin en los genes de
componentes de la va alternativa. Se caracteriza por anemia hemoltica y
trombocitopenia. Produce hematuria y fracaso renal. Se trata con inhibidores de
complemento.
Glomerulonefritis: tiene una evolucin larga. Se crean una especie de trombos en el
endotelio del glomrulo renal.

En estas patologas se estudian los niveles de C3 y C4, factor H, factor I y factor B y tambin se
mide la presencia de anticuerpo anti factor H (autoinmune)
Tambin se estudian la presencia de mutaciones en genes de la va alternativa.
En estas dos enfermedades se han descrito polimorfismos y mutaciones en genes, as como
autoanticuerpo.

INMUNIDAD INNATA MEDIADA POR CLULAS

La fagocitosis es un mecanismo dirigido a engullir y eliminar patgenos. Los patgenos son
degradados en el interior de la clula y se eliminan residuos que pasan a la circulacin. Este
proceso de fagocitosis esta alterado en algunos individuos.
La muerte de los patgenos es dentro de la clula. Debido a
-

Ph
Anin superxido
NO

Basndonos en estas propiedades se disean estudios para medir la fagocitosis

-

Estudios in vitro: se utilizan clulas de E.coli marcadas con fluorescena. Si los fagocitos
se las tragan, los fagocitos sern fluorescentes.
Por el tamao de clulas: cuando fagocitan las bacterias, los leucocitos aumentan de
tamao.
Medir la actividad oxidativa. Se estudia si se forma anin superxido adecuadamente.
Si el individuo no genera el anin superxido se detecta mediante una tcnica de
fluorescencia. La enfermedad granulomatosa crnica es una inmunodeficiencia severa.
Los fagocitos no causan la muerte intracelular. Hay infecciones severas. Las causas de
no generar el anin es por mutaciones en genes de las protenas encargadas de
generar este anin.

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INMUNIDAD ADQUIRIDA
Reacciones mediadas por complejos antgeno -anticuerpo
Es una asociacin biomolecular mediadas por uniones no covalentes. Es una reaccin
altamente especfica; pero no es una reaccin irreversible. Es una unin reversible.
Un anticuerpo tiene 2 cadenas pesadas y dos cadenas ligeras.
Para valorar la reaccin antgeno anticuerpo hay reacciones cualitativas y otras cuantitativas
-

Reacciones cualitativas
o Inmunodifusin doble bidimensional
o Inmunoelectroforesis
o Inmunofijacin
Cuantitativas
o Inmunodifusin radial
o ELISA

Una forma de analizar la reaccin antgeno y anticuerpo muy elemental es la reaccin de

precipitacin:
-

Anticuerpo policlonales: anticuerpos que reconocen distintos eptopos de un mismo

antgeno. Se generan redes o agregados antgeno-anticuerpo. A medida que aadimos
cantidades de anticuerpo, aumenta la cantidad de precipitado. Si se aumenta la
cantidad de antgeno se disuelven los precipitados. La reaccin de precipitacin solo se
produce en anticuerpo policlonales.
Anticuerpos monoclonales: reconocen el mismo eptopo del antgeno. No hay
precipitacin.

Tenemos un gel de agar. En el gel hacemos unos pocillos. En el agar ponemos anticuerpos y en
el pocillo antgeno. Por difusin, antgeno y anticuerpo se unen y se produce una franja de
precipitacin. Esto es lo que se llama inmunodifusin radial.
La inmunodifusin doble ya se ha explicado en el apartado de inmunidad innata.
Inmunoelectroforesis: es una tcnica inmunolgica combinada con electroforesis 8separacin
de protenas frente a un campo elctrico).
Tenemos una placa de agar en la que se hace una trinchera y dos pocillos. En cada pocillo
ponemos uno suero de nio enfermo y otro de paciente normal. Por electroforesis se sepan las
protenas del suero. En la ranura ponemos un anticuerpo contra una protena del suero.
Protenas y anticuerpo difunden. Si un individuo no tiene la protena, no hay precipitado y no
vemos nada
Inmunofijacin: separamos las protenas por electroforesis y se marcan con anticuerpos.
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ESTUDIOS EN LQUIDO CEFALORRAQUIDEO

Anomalas de inmunoglobulinas en lquido cefalorraqudeo. Un individuo normal, cuando uno
analiza las gamma globulinas ve las mismas bandas que en el lquido que en el suero. Hay
enfermedades en las que aparecen nuevas bandas. Hay sntesis local de inmunoglobulinas. Las
bandas que aparecen son las bandas oligoclonales. Es un criterio diagnstico de esclerosis
mltiple.
Hace tiempo la medida de las inmunoglobulinas se hace por inmunodifusin radial. Hoy en da
esta automatizado y se lleva a cabo por nefelometra. Mide la dispersin de los complejos
antgeno anticuerpo.
Tcnicas de ELISA se hacen en placas
-

Indirecto: el antgeno est pegada a la placa. Luego se aade anticuerpo y luego un

anticuerpo que reconozca el primero
Directo: se ponen anticuerpos en la placa, luego se aade el antgeno y luego un
segundo anticuerpo.

Aglutinacin/hemaglutinacin: si tenemos un paciente y queremos saber de que grupo

sanguneo es aadimos diferentes anticuerpos. Si por ejemplo aadimos un anticuerpo antiA y
aglutina (se une al antgeno) es que es del grupo A

Hay un test para ver la inmunidad in vivo. Test de Prausnitz-Kustner

Autoinmunidad es una respuesta frente a componentes propios. Se generan autoanticuerpos
frente a componentes propios. Estos problemas, en el laboratorio se detectan por
inmunofluorescencia. Se excita un determinado fluorforo que estn pegados a anticuerpos.

Se utilizan anticuerpos sobre Hep-2. Estas lneas son el sustrato. Es una lnea celular de un
epitelioma de laringe.

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SEMINARIO III: REACCIN

ANTGENOANTICUERPO EN DIFERENTES PATOLOGAS
Consecuencias biolgicas de una reaccin antgeno anticuerpo:
-

Citotoxicidad mediada por NK

Aglutinacin
Opsonizacin
Neutralizacin
Inflamacin
Activacin del complemento
Proteccin de mucosas
Eliminacin de parsitos: las IgE se unen a los receptores Fc de eosinfilos

Adems los anticuerpos se pueden utilizar para diagnstico y para tratamiento.

La penicilina supuso que en la 2 guerra mundial, muchos de los pacientes que padecan
infecciones no muriesen. La mortandad por infecciones bajo muchsimo. Pero hubo muchos
otros muertos por causa de la penicilina.
Un hapteno es una molcula muy pequea, es parte de un antgeno. Un hapteno es incapaz de
desarrollar por s mismo una respuesta inmune. Pero se une a una protena (acarreador) que
suele ser la albumina y esto hace que se produzca un anticuerpo. El anillo betalactmico de la
penicilina (hapteno) se une a una protena y creaba una respuesta inmune (alergia a la
penicilina).
En una primera inyeccin de penicilina, no haba respuesta. Pero en una segunda inyeccin los
anticuerpos producidos por la primera inyeccin (principalmente de la clase IgE) reconocan los
haptenos unidos a protenas y se produca un shok anafilctico muchas veces mortal.
Hay que tener siempre en cuenta que puede haber una reaccin antgeno anticuerpo letal.
HAPTENO: molcula muy chica que se une a una protena transportadora
PATOLOGAS EN RECIN NACIDOS: en el feto se transfieren las IgGs maternas. Cuando nace
produce sus propios anticuerpos. En los primeros 9 meses de vida la mayora de IgG es de la
madre. Pero hay enfermedades autoinmunes (miastenia gravis) que se transfieren de madre a
hijo. En la miastenia gravis se producen anticuerpos dirigidos frente a la sinapsis de la acetil
colina. Una madre con miastenia gravis pasara los anticuerpos al hijo y el nio nacer con
parada respiratoria. Hay nios que nacen con enfermedad autoinmune por los anticuerpos de
su madre. Ha estos nios se les hacen transfusiones de sangre hasta que todos los anticuerpos
maternos se eliminan.
AVIDEZ DE LOS ANTICUERPOS:
A una embarazada hay que hacerle serologas. Hay que prevenir la toxoplasmosis: enfermedad
provocada por toxoplasma por consumicin de carnes crudas, verduras crudas. No tiene
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importancia en sujetos inmunocompetentes. Si al embarazada tiene toxoplasma, el bebe

nacer con malformaciones (ej.ceguera).
Al hacer la serologa vemos si la embarazada solo tiene anticuerpos de la clase IgG contra el
toxoplasma. Si esto es as es porque la embarazada ha tenido algn contacto en la vida con
toxoplasma. Pero no est infectada
Pero si tenemos solo IgM positiva y no IgG estamos ante una infeccin aguda. El paso siguiente
es ver si el feto est infectado. Si no est infectado se continua el embarazo. Si est infectado
hay que avisar a la madre de los riesgos.
Si tenemos IgG positiva e IgM positiva. Qu hacemos? Hay que ayudarse de la avidez. Hay que
determinar la avidez de IgG. Si es de alta avidez, esa IgG lleva ya mucho tiempo de evolucin y
la seora tuvo contacto con toxoplasma hace tiempo. Pero si la IgG es de baja afinidad hay que
recurrir a la amniocentesis.
La avidez mide la constante de unin de la reaccin antgeno anticuerpo.
Ag+Ab Ag-Ab (reversible)

Prueba de ELISA-avidez: La prueba de ELISA-Avidez-IgG consiste en un ensayo

inmunoenzimtico en el que se emplea un agente desestabilizante de puentes de hidrgeno
(Urea) para disociar la unin antgeno-anticuerpo

REACCIN ALRGICA
Lo primero que hay que hacer cuando una persona llega a la consulta con un cuadro de alergia
es eliminar los sntomas. A continuacin hay que ver que es lo que los ha provocado.
Las reacciones alrgicas estn provocadas por IgE que se unen a la superficie de mastocitos
basfilos y eosinfilos. Cuando IgE se une al alrgeno, se liberan los grnulos con aminas
vasoactivas y mediadores lipdicos.
Una vez eliminado el cuadro hay que descubrir que es lo que lo ha provocado (polen,
insectos)
En primer lugar lo que vamos a hacer son pruebas cutneas. En la piel se ponen determinados
antgenos. Se observa que antgenos provocan una reaccin. Pero a un nio chico no podemos
someterle a estas pruebas. Ni con personas ancianas o con grandes reacciones alrgicas.
Lo que se hace es un enzimoinmunoensayo o ELISA.
Bsicamente consiste en que en unos pocillos ponemos antgenos que queremos probar (de la
leche, de la yema de huevo) Se cogen los sueros y se incuban con los antgenos. Luego estos
anticuerpos se revelan con sustratos enzimticos. Se aade un ligando con un enzima que si
hay anticuerpos se unen a ellos. Luego se aade el sustrato. Lo que vemos al final esque

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cuando no hay ninguna coloracin no hay anticuerpos (resultado negativo) y si hay coloracin
el resultado ser positivo (hay anticuerpos).
Todas las pruebas siempre llevan el antgeno promedio. Pero por ejemplo, en el huevo hay
muchos antgenos diferentes y hay personas alrgicas a diferentes antgenos del huevo.

SEROLOGA
La palabra serologa es imprescindible en todas las infecciones vricas. En una serologa se
determina la existencia de anticuerpos frente a un determinado agente (virus que producen
hepatitis A, B, C; VIH, toxoplasma)

HEPATITIS A
La hepatitis A no es una hepatitis complicada ni peligrosa en individuos inmunocompetentes y
sanos. Es una hepatitis que se da en nios. Casi no se ve en el medio occidental. De hecho, si
hacemos una serologa de hepatitis A probablemente muy pocas personas jvenes tendrn
serologa positiva (IgM o IgG frente al virus de la hepatitis A)
Un paciente que presenta transaminasas muy altas, cansado.. Lo primero que debemos pensar
es que tiene una hepatitis A. Si la IgM es positiva y no hay IgG estamos en hepatitis aguda. La
IgG se va formando tambin con el transcurso de los das. Queda en la sangre del paciente
durante toda su vida.
Si solo hay IgG, la hepatitis se pas hace tiempo.
Esta serologa se hace mediante ELISA.

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Hepatitis B. Ahora mismo tenemos una alta incidencia de hepatitis B. Puede ser mortal.
Uno de sus grandes problemas es que puede evolucionar a un carcinoma heptico o a cirrosis.
Cada vez hay un mayor nmero de infectados, debido a las migraciones.
A los nios se les vacuna en el nacimiento.
El mecanismo de transmisin: sexual, vertical (de madre-hijo) y parenteral.
Sntomas: fiebre, ictericia, dolores, orina y heces de color oscuro. Esplenomegalia.
Evolucin serolgica: la serologa es complicada. Primero anticuerpos anticore (anti-HBc):
-

Los anticuerpos IgM anti-HBc caen con el tiempo

Los anticuerpos IgG anti-HBc se mantienen de por vida.

Si antes de hacer quimioterapia no hacemos serologa previa, puede que el paciente se cure de
cncer y muera de una hepatitis fulminante.
Luego hay otro anticuerpo, el anticuerpo antisuperficie (anti-HBs) que es siempre de la clase
IgG. Sube cuando la hepatitis se resuelve. Anticuerpos antisuperficie los tiene todo el mundo
que ha sido previamente vacunado.
Hay hepatitis B crnicas: si no se tratan el paciente acabar con carcinoma o cirrosis.

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Hepatitis C (VHC)
Es muy fcilmente contagioso. Los cirujanos se contagian, sobre todo los de digestivo. Se
necesita muy poco aporte viral.
No produce una gran hepatitis. Se aloja en el sujeto y convive tranquilamente hasta que
aparece despus de muchos aos.
En los aos 80, se contagiaron muchas personas por transfusiones.
Tambin se contagia por trasplante de rganos, hemodilisis.
El periodo de incubacin puede ser de 2-22 semanas.
Solo hay ictericia entre el 30%-40% de los casos. Se cronifica.
El curso serolgico es tremendamente complicado de entender. Los anticuerpos que se crean
no protegen frente a la infeccin.
-

Subidas y bajadas de transaminasas

Anticuerpos anti-C: no sirven de proteccin
Copias de virus que hay en sangre periferica (cuantificacin del RNA viral).

VIH
AFECTA A LAS CLULAS CD4
Se necesitan semanas para hacer anticuerpos IgM. Existe una fasede primoinfeccin. En esta
fase lo que hay que hacer es una determinacin del antgeno circulante (virus en sangre).
Al cabo de la semana se empiezan a ver anticuerpos IgM y al cabo del mes de IgG.
Es de las pocas infecciones en las que la determinacin del antgeno circulante es posible.
Una vez que tenemos una prueba positiva, volvemos a hacer otro Elisa, sobre todas y cada una
de las protenas del virus. Pero no se utilizan las protenas nativas del virus, sino protenas
hechas con ingeniera gentica (protenas recombinantes)

LOS ANTICUERPOS COMO TRATAMIENTO

AcM se utilizan en muchos tratamientos.
-

Los anticuerpos son capaces de unirse a una clula, activar el complemento y matarla.
Vamos aprovechar esta actividad pero la vamos a dirigir nosotros, por ejemplo, contra
clulas cancerosas

Inmunizacin pasiva: Si hay una persona que tiene una buena inmunizacin frente a
algo, se cogen sus anticuerpos y se le pasan a otra persona poco inmunizada frente a
ese algo. Ej. Caso de transmisin de anticuerpos equinos. Haba nios infectados con
difteria. Los nios moran muchsimo. Se infect uno de los caballos con antgenos de
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difteria. El caballo hizo anticuerpos. Se administr pasivamente a los nios anticuerpos

del caballo. La prevalencia de difteria call muchsimo.
Pero se dio un problema: al poner una segunda dosis del anticuerpo del caballo, el
nio ha hecho anticuerpos contra l, y se crea una reaccin anafilctica

Lo que hay que hacer es humanizar los anticuerpos. Un anticuerpo con actividad de anticuerpo
que nos sea reconocido por el SI. Los anticuerpos quimricos (anticuerpos humanizados).
Medicamentos que acaban en mab: anticuerpos utilizados en enfermedades autoinmunes o en
determinados tipos de tumores.
-

Rituximab: leucemias linfticas crnicas.

Herceptin: contra el cncer de mama. AmC contra los recpetores hormonales
Campath: esclerosis mltiple

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SEMINARIO 4
Vamos a ver que tcnicas utilizamos para estudiar los marcadores de diferenciacin
leucocitaria. Estas molculas de diferenciacin sirven para cuantificar poblaciones (por
ejemplo linfocitos T CD4 de un paciente con VIH) para diagnosticar patologas hematolgicas
como leucemias o linfomas.

CITOMETRA DE FLUJO
Un citmetro de flujo es un aparato que nos sirve para analizar clulas en suspensin. Con este
aparato no podemos cuantificar clulas de un tejido a no ser que consigamos que las clulas
del tejido se disgreguen. La muestra ideal para este tipo de anlisis es el LCR, muestra
sangunea y medula sea.
Un citmetro de flujo analiza clulas o partculas que estn en suspensin.
Qu caractersticas analizamos con este mtodo?
-

Tamao y complejidad de las clulas

Analizar las molculas que las clulas expresan en superficie o a nivel intracelular:
estas molculas son los marcadores de diferenciacin leucocitaria.

Estas dos caractersticas conforman el inmunofenotipo de una clula. Este inmunogenotipo es

lo que analizamos con el citmetro
El citmetro consta de 3 sistemas
-

Sistema de los fluidos/fludica

Sistema de pticas
Sistema electrnico

FLUDICA
Aspira la muestra del paciente y la introduce dentro del aparato. La dirige hacia el punto de
interseccin con el lser. Introduce las clulas de 1 en una

PTICA
Emite seales luminosas con el lser del citmetro. El lser interacciona con la clula.
Hay pticas de coleccin: recogen las seales luminosas que proceden del laser y ya han
pasado por la celula.

ELECTRNICO
Traduce las seales luminosas en seales electrnicas que se digitalizan y es lo que vemos en
la pantalla del ordenador
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FUNCIONAMIENTO
El sistema de fluidos aspira clulas que se introducen por un capilar, de una en una, junto con
algo isotnico. Las clulas van subiendo hacia el punto de interseccin con el lser.
Qu sucede cuando las clulas lleguen al punto de interseccin con el lser?. El lser incide
sobre las clulas y la luz se desva, se produce una dispersin de la luz.
Cuando la clula pasa por delante del lser se produce una dispersin de la luz hacia delante.
El ngulo que se crea hacia adelante es proporcional al tamao/volumen de la clula. Este
ngulo se denomina ngulo de dispersin frontal.
Pero la luz tambin sale disparada hacia los lados. Esto depende de cmo es la superficie de la
clula, de si tiene mucha granularidad o complejidad

Leucemia aguda: vemos clulas cuyo tamao y complejidad conocemos bien. Luego hay clulas
con tamao y complejidad que no tenemos en una medula sea normal.
El citmetro tiene dos tipos de detectores
-

Forward scatter: deteccin de luz hacia delante. Esta a 0 con respeco al laser
Side scatter: deteccin de la luz hacia los lados. Esta a 90 con respecto al laser

Cmo vemos que antgenos expresan las clulas?

Estos antgenos de superficie e intracelulares los detectamos por inmunofluorescencia, que se
hace antes de la citometra.
Teimos clulas con una molcula fluorescente. Incubamos el linfocito con un anticuerpo
monoclonal, por ejemplo anti CD3. Este anti CD3 est marcado con una sustancia fluorescente
o fluorocromo. Cuando el lser del citmetro incida sobre esta clula marcada con un
fluorocromo hay una determinada longitud de onda que el citmetro es capaz de recoger.
El fluorocromo absorbe la energa luminosa que viene del lser y la libera con una longitud de
onda superior. Con lo cual, la longitud de onda la detectan unos determinados detectores del
citmetro. Utilizando varios fluorocromos detectamos varias molculas de superficie.
Algunos ejemplos de fluorocromos: fluorestena, etidio, ficoeritrina
Las longitudes de onda se detectan en receptores de fluorescencia
-

FL1
FL2
FL3

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Cada uno de ellos detecta una determinada longitud de onda

Cuando las clulas van pasando, adems de la dispersin de la luz hacia delante y hacia los
lados, tenemos fluorescencia. La fluorescencia es recogida por los receptores de fluorescencia
EJEMPLO CONCRETO PARA CUANTIFICAR LINFOCITOS T CD4 DEL PACIENTE CON VIH
Incubamos la sangre del paciente con 4 AcM. Marcamos
-

Con fluoresteina el anti CD45

Ficoeritrina el antiCD3
Anti CD4 perCP
Anti CD8 aloficocianina

Todo esto lo incubamos durante 20 min y luego lisamos los hemates, porque en este anlisis
en concreto no nos interesan.
Luego vamos al citmetro y lo analizamos
Al software le decimos que analice durante un minuto, o cuando llegue a un milln de clulas.
Pasan las clulas por el capilar y por el lser.
El citmetro nos dice el porcentaje de clulas que iban marcados con fluoresteina, el
porcentaje con ficoeritrina, el porcentaje con perCP, y con aloficocianina
-

Fluoresteina: porcentaje de clulas CD45 positivas

Etc

Lo ms importante de esto es poder hacer marcajes simultneos.

El CD3 sirve para saber los que son linfocitos. No solo los linfocitos T CD4 son CD4 +. Por
ejemplo, tambin son CD4+ los monocitos y las dendrticas. Solo los que estn marcados con
CD3 y con CD4 simultneamente son linfocitos T CD4+
El citmetro tambin es capaz de decirme el porcentaje de clulas que emiten
simultneamente en varias fluorescencias.
En concreto los T CD4+ van marcados con anti CD4, con anti CD3 y con anti CD45.
Los linfocitos doble positivos (timocitos) estn marcados con CD4, CD3, CD8 y CD45. Qu
pintan los linfocitos e sangre perifrica? En un sujeto sano no hay que verlos. Solo en leucemia
de timocitos.
El citmetro traduce la intensidad de la fluorescencia en pulsos de voltaje. Cuanta ms
fluorescencia, ms alto es el pulso del voltaje. Esto lo hace para todos los parmetros, tamao
complejidad y fluorescencias.
El voltaje lo digitaliza y dibuja puntos. Las grficas de puntos es lo que podemos ver.

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Imaginemos que han pasado el milln de clulas. De cada clula el citmetro recibe seal de
tamao, complejidad y fluorescencia.
Para cada clula del milln tenemos un determinado valor en cada uno de estos parmetros.
Coge la primera clula y contrasta los puntos de la fluorescencia. Crea un grafico Dot-plot. (FL1
contra FL2).

Ejemplos reales de dot-plot

Primer ejemplo: comparamos el tamao con la complejidad.
Reconocemos 3 nubes de puntos. Tamao eje X y complejidad
eje Y
-

Poco tamao y poca complejidad : linfocitos

Intermedias: monocitos
Mayor tamao y ms complejidad:
polimorfonucleares (granulocitos)

Aparte de los dot-plot tambin podemos utilizar histogramas. En el histograma enfrentamos

un parmetro (complejidad, CD3).. y el nmero de clulas/eventos en el eje Y
Cuando una clula pasa, aunque no est marcada con fluorocromo emite fluorescencia
inespecfica. Hay que calibrar el citmetro pasando una muestra sin marcar. Se ve la
fluorescencia que emite de forma inespecfica. El calibraje aparece como una raya horizontal
en la grfica. En la primera, todo lo que en el eje X queda menos de 10 se considera negativo.
Dot plot enfrentados el CD3 contra el CD8
En el eje de las X CD3. Todo lo que sea mayor de 10
es + para CD3. Y en el eje Y todo lo que este mayor
de 10, es positivo para CD8.
-

Amarillas: positivas en CD3 y CD8. Son

citotxicos
Verdes: son los linfocitos CD4. CD8
negativas y CD3 positivas
Rojas: CD8+ y CD3 negativas. Son los NK
Grises: negativas. Linfocitos B, monocitos o
neutrfilos. No se puede saber

Hay otro tipo de Dot-plot. Es muy til a la hora de

cuantificar las leucemias.

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En el eje X ponemos un parmetro de fluorescencia con la complejidad de las clulas.

Dependiendo de lo que exprese una clula y su complejidad, diagnosticamos las patologas.

CD45
Es una molcula expresada por todos los leucocitos.
Nos sirve para distinguir poblaciones en medula sea
En el ejemplo tenemos dot plot de complejidad y
fluorescencia.
-

Las poco complejas con mucho CD45 son los

linfocitos.
Un poco menos complejas es el monocito.
Y un poco menos an es el granulocito.

Esto es muy til en medula sea, porque con tamao y

complejidad no nos permiten ver las diferentes
poblaciones.
Es muy til para distinguir los progenitores en la medula sea, que con tamao y complejidad
estn mezclados con los linfocitos y no se distinguen. La poblacin negativa para CD45 son los
precursores de la serie roja.

Que informacin nos proporciona el citmetro

Por una parte nos da informacin sobre el
-

Nmero de clulas.
Inmunofenotipo:
o Linaje
o Estadio de diferenciacin
o Clonalidad: si los linfocitos B son todos kappa son todos lambda
o Aberraciones: expresin de un marcador que pertenece a otro linaje. Pasa
mucho en las leucemias. Un linfocito B expresa un marcador mieloide (CD33,
CD66)
o Asincronismos: expresin de un marcador de un estadio de diferenciacin que
no es.
Cuantificar el DNA
Ver si las clulas son viables o no. Si estn vivas o no. Esto nos interesa cuando nos
llegan medulas seas del extranjero en los trasplantes de medula sea. La mdula
llega por avin desde otro pas y hay que ver si las clulas estn vivas o no.

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Marcadores de diferenciacin ms importantes en diagnostico

ESPECIFICAS DE LINAJE
-

Mieloide: cMPO (mieloperoxidasa intracelular), CD33, CD13, CD65

Linfoide B: cCD79a (intracelular), cCD22 (intracelular), CD19, Ig de superficie
Linaje linfoide T: cCD3 (intracelular en clulas inmaduras), CD3 (a nivel de superficie),
CD2, CD7, CD5, CD4, CD8

ESPECIFICAS DE ESTADIO DE DIFERENCIACION

-

Celula progenitora/madre/pluripotencial: CD34. En trasplante de medula se

cuantifican estas clulas.
Progenitoras linfoides: Tdt (enzima nuclear)
Clulas B inmaduras. CD10 y CD38
Clulas B maduras: Ig de superficie, FMC7
Clulas plasmticas: CD138

*En medula sea la serie granuloctica nace sin grnulos y tiene menos complejidad. La va
adquiriendo.
En medula: zona de CD34 es la zona central. Si esto esta aumentado hay leucemia aguda. Hay
que ver de qu linaje es la leucemia. Hay que ver marcadores, como por ejemplo B (CD19)
Molcula CD66 en una clula inmadura: aberracin

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