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TESE DE DOUTORADO
por
COMISSO EXAMINADORA:
RESUMO
Tese de Doutorado
Programa de Ps-Graduao em Medicina Veterinria
Universidade Federal de Santa Maria
ALTERAES NO ENCFALO DE BOVINOS SUBMETIDOS
VIGILNCIA DAS ENCEFALOPATIAS ESPONGIFORMES
TRANSMISSVEIS
na The University of Georgia em Athens, Estados Unidos. Durante esse perodo, foi desenvolvido um protocolo
de imunoistoqumica para a deteco de antgeno da raiva em blocos de parafina com encfalos fixados em
formol. A descrio desse protocolo e os resultados parciais desse trabalho esto includos nesta tese. A maioria
das concluses desta tese esto nos trabalhos acima citados. Concluses adicionais so que o MAPA programou
e colocou em funcionamento um sistema de vigilncia para a BSE relativamente eficiente. No entanto, pontos
fracos do programa incluem um insuficiente nmero de encfalos encaminhados aos laboratrios credenciados
de bovinos que testaram negativo para raiva nos laboratrios oficiais de diagnstico de raiva no Brasil, de
bovinos importados e de bovinos submetidos ao abate de emergncia em frigorficos com servio de inspeo
federal. Do material examinado durante esses 5 anos, as doenas inflamatrias mais freqentes na regio de
abrangncia do LPV/UFSM foram raiva, meningoencefalite por herpesvrus bovino-5 e febre catarral maligna, e
as doenas degenerativas mais comuns so encefalopatia heptica e intoxicao por Solanum fastigiatum.
Palavras-chave: doenas de bovinos, neuropatologia veterinria.
ABSTRACT
Doctoral Thesis in Veterinary Medicine
Programa de Ps-Graduao em Medicina Veterinria
Universidade Federal de Santa Maria, RS, Brazil
CHANGES OBSERVED IN THE BRAINS OF CATTLE SUBMITTED TO
THE BRAZILIAN SURVEILLANCE PROGRAM FOR THE
TRANSMISSIBLE SPONGIFORM ENCEPHALOPATHIES
Athens, USA where a protocol for immunohistochemistry (IHC) for detection of rabies antigen in formalin fixed
paraffin blocks from bovine brain was established under the supervision of Prof. Corrie Brown. The description
of this protocol and the partial results of the IHC diagnosis for rabies in cattle are included in the text of this
Thesis. Most of the conclusions drawn from the work presented here are detailed in the papers listed above.
Additionally conclusions are that the MAPA design and implemented an adequate system for BSE surveillance.
Weak points in the program are that not enough samples from cattle that tested negative in the official
laboratories for rabies diagnosis in Brazil, from imported cattle and from cattle submitted to emergence slaughter
in abattoirs under federal Meat Inspection are arriving at the LPV/UFSM. From the material examined, it was
also concluded that the more frequent inflammatory diseases in the brain of cattle are rabies,
meningoencephalitis by bovine herpesvirus 5 and malignant catarrhal fever and the more frequent degenerative
diseases are hepatic encephalopathy and poisoning by Solanum fastigiatum.
Key words: diseases of cattle, veterinary neuropathology.
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 Nas encefalopatias espongiformes transmissveis (ou doenas prinicas), a PrP
(PrPc), uma protena normal de neurnios, convertida em uma isoforma anormal composta
de placas -plissadas (PrPsc) atravs da interao de PrPsc com PrPc. (Reproduzido de Zachary
J.F. 2007. Nervous system, p.833-971. In: McGavin M.D. & Zachary J.F. (ed.) Pathologic
Basis of Veterinary Disease. 4th ed. Mosby Elsevier, St Louis. 1476p)...................................21
FIGURA 2 Sinais clnicos, alteraes histolgicas no crebro e infectividade tecidual em
intervalos aps o desafio com o agente da BSE por via oral durante um estudo experimental
sobre patognese (reproduzido de Bradley R. 2002. Bovine spongiform encephalopathy.
Update. Acta Neurobiol. Exp. 62:183-195)..............................................................................24
FIGURA 3 Evoluo da epidemia no Reino Unido. Nmero total de casos: 184.453. Fonte:
www.oie.int. *Dados colhidos at setembro de 2006...............................................................27
FIGURA 4 Nmero de casos de BSE (1989-2006) relatados em bovinos ao redor do mundo
(excluindo o Reino Unido). Nmero total de casos: 5.601. Fonte: www.oie.int..................... 27
FIGURA 5 GBR (Geographical BSE Risk). No nvel I, representados pela cor verde, so
includos Argentina, Austrlia, Islndia, Nova Zelndia, Nova Calednia, Panam, Paraguai,
Cingapura, Uruguai e Vanuatu. No nvel II, representados pela cor verde-clara, so includos,
Botsuana, Brasil, Costa Rica, Crocia, El Salvador, ndia, Qunia, Colmbia, Maurcia,
Nambia, Nicargua, Nigria, Noruega, Paquisto, Suazilndia e Sucia. No nvel III,
representados pela cor azul, esto frica do Sul, Albnia, Alemanha, Andorra, ustria,
Bielorrssia, Blgica Bulgria, Canad, Chile, Dinamarca, Eslovquia, Eslovnia, Espanha,
Estados Unidos, Estnia, Finlndia, Frana, Holanda, Hungria, Irlanda, Israel, Itlia, Japo,
durante
programa
de
vigilncia
das
encefalopatias
espongiformes
LISTA DE QUADROS
QUADRO 1 Encefalopatias espongiformes transmissveis (TSEs) em pessoas...................18
QUADRO 2 Encefalopatias espongiformes transmissveis (TSEs) em animais..................19
QUADRO 3 Nomenclatura das diferentes isoformas da protena pron...............................22
QUADRO 4 Resumo dos testes rpidos para deteco postmortem de isoformas alteradas de
PrP no encfalo de bovinos.......................................................................................................31
QUADRO 5 Laboratrios credenciados para a vigilncia das encefalopatias espongiformes
transmissveis (EETs) e respectivos estados de atuao..........................................................40
QUADRO 6 Categorias de amostras recebidas pelos laboratrios credenciados como parte
do programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes transmissveis..........................42
QUADRO 7 Lista de diagnsticos de doenas ou leses do sistema nervoso central de
ruminantes utilizada no programa DXSNC..............................................................................49
QUADRO 8 Procedimentos para explicar erros de registros em cadernos de anotaes, de
acordo com listagem numrica.................................................................................................51
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Diagnsticos realizados em 279 encfalos de bovinos examinados entre 20012005, durante o programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes transmissveis, no
Laboratrio
de
Patologia
Veterinria
da
Universidade
Federal
de
Santa
Maria.......................................................................................................................................217
SUMRIO
RESUMO...........................................................................................................................
ABSTRACT.......................................................................................................................
LISTA DE FIGURAS.......................................................................................................
LISTA DE QUADROS...................................................................................................... 11
LISTA DE TABELAS....................................................................................................... 12
1. INTRODUO.............................................................................................................
15
2. REVISO DE LITERATURA..................................................................................... 17
2.1 Encefalopatia espongiforme bovina (BSE)...............................................................
17
93
102
3.3 Neurocitopatologia....................................................................................................
126
147
4.2 Febre catarral maligna em bovinos no Rio Grande do Sul: epidemiologia, sinais
clnicos e patologia.........................................................................................................
151
160
174
180
14
186
191
201
211
215
6. DISCUSSO..................................................................................................................
221
7. CONCLUSES.............................................................................................................. 226
8. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS........................................................................
227
15
1 INTRODUO
Em 1986, casos de uma doena com sinais clnicos peculiares e leses
histolgicas caractersticas no encfalo foram observados em bovinos por veterinrios
ingleses e pesquisadores do Central Veterinary Laboratory de Weybridge, na Inglaterra.
Essa doena foi rapidamente classificada como uma nova encefalopatia espongiforme
(Wells et al. 1987) e foi denominada como encefalopatia espongiforme bovina (BSE). O
que de incio era apenas mais uma curiosidade do restrito nmero de doenas
neurolgicas de bovinos, transformou-se, nos anos subseqentes, em uma epidemia
catastrfica. A percepo negativa da epidemia atingiu seu clmax quando, em 1996,
foram relatados, no Reino Unido, os 10 primeiros casos de uma nova forma de
encefalopatia espongiforme em pessoas (a variante da doena de Creuztfeldt-Jakob vCJD) (Will et al. 1996) que apresentava slidas evidncias de ser relacionada
ingesto de alimentos oriundos de bovinos infectados pelo agente da BSE; a doena dos
bovinos passava ento a ser percebida no s como uma doena epidmica, mas
tambm como uma zoonose.
O Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento do Brasil (MAPA)
reconheceu em seguida que teriam de ser adotadas medidas de vigilncia que
impedissem a entrada da BSE no pas e, ao mesmo tempo, permitissem seu rpido
reconhecimento e controle caso essa introduo ocorresse. O Laboratrio de Patologia
Veterinria (LPV) do Departamento de Patologia (DP) da Universidade Federal de
Santa Maria (UFSM) foi um colaborador de primeira hora do MAPA e j em janeiro de
1991 um docente do LPV/UFSM (Prof. Claudio Barros) fez parte de uma misso
Inglaterra para avaliar a situao da BSE. Em 2001, o LPV/UFSM comeou a liderar a
organizao de uma rede de laboratrios para diagnstico diferencial de doenas do
sistema nervoso central (SNC) de bovinos (incluindo BSE), ministrando cursos em
vrios locais do Brasil e editando manuais sobre a doena. O LPV/UFSM tornou-se o
laboratrio de referncia nacional do MAPA para o diagnstico das encefalopatias
espongiformes transmissveis. Isso levou a um aumento no nmero de encfalos
examinados pelo laboratrio e criou uma oportunidade para que assuntos relacionados
patologia do SNC de bovinos fossem estudados de maneira criteriosa e sistemtica. Este
trabalho o resultado desse estudo realizado em cinco anos (2001-2005).
16
De janeiro de 2001 at dezembro de 2005, foram examinados no LPV/UFSM,
3.338 encfalos de bovinos. Esse material formou o ncleo central deste estudo. Todos
os encfalos foram avaliados para determinar a morfologia, a distribuio e a freqncia
de alteraes do SNC de bovinos, a fim de fornecer dados teis que facilitem a
interpretao dessas alteraes por patologistas que tm a tarefa de examinar o SNC de
bovinos para fins de diagnstico. Alm disso, pretendeu-se fazer uma breve reviso
histrica da BSE para coloc-la no contexto desse estudo e descrever os mtodos de
vigilncia adotados pelo governo brasileiro para evitar a introduo da doena no pas.
O trabalho foi ento dividido em quatro partes: 1) reviso bibliogrfica sobre a BSE; 2)
descrio do programa de vigilncia para BSE institudo pelo MAPA; 3) descrio e
interpretao das alteraes relacionadas s doenas, no-leses e alteraes incidentais
do SNC dos bovinos examinados desde 2001 at 2005, e 4) publicao de trabalhos
cientficos de algumas doenas e leses observadas durante o servio de vigilncia, com
nfase na descrio de achados epidemiolgicos, clnicos e anatomopatolgicos que
facilitem o diagnstico diferencial das doenas que afetam o SNC de bovinos na rea de
abrangncia do LPV/UFSM.
17
2 REVISO DA LITERATURA
2.1.2 Definio
A BSE uma doena neurodegenerativa progressiva de bovinos (Stevenson et
al. 2000). Casos foram observados pela primeira vez em 1985-86 na Inglaterra, em
bovinos que provavelmente haviam se infectado quando bezerros no inverno de 19811982 (Collee & Bradley 1997a). A BSE caracterizada clinicamente por nervosismo,
18
reao exagerada a estmulos externos, dificuldade de locomoo, principalmente nos
membros plvicos (Wells et al. 1987), e recebeu logo de incio a denominao
coloquial de doena da vaca louca. Pertence a um grupo de doenas denominadas
encefalopatias espongiformes transmissveis (TSEs) ou doenas prinicas, i.,
causadas por prons (Woolhouse & Anderson 1997, Foster et al. 2001, Weissman et al.
2002, Soto 2004, Weissman 2004, Johnson 2005, Mabbot & McPherson 2006, Sa et
al. 2006). As TSEs ocorrem em seres humanos (Quadro 1) e animais (Quadro 2) e
caracterizam-se por serem doenas neurolgicas progressivas e invariavelmente fatais,
apresentarem um longo perodo de incubao (meses ou anos), desenvolver leses
(alteraes espongiformes) restritas ao SNC, serem transmissveis natural ou
experimentalmente e no induzirem resposta imune-inflamatria.
Quadro 1. Encefalopatias espongiformes transmissveis (TSEs) em pessoas
Doena espordica
Doena de Creutzfeldt-Jakob (CJD).
(sem antecedentes prvios conhecidos)
Ocorre em todo o mundo com uma
incidncia de cerca de um caso por um
milho de pessoas
Doena adquirida pela contaminao com Kuru (canibalismo, epidmica na
o agente infeccioso
populao For de Papua-Nova Guin)
CJD iatrognica (transplantes,
administrao de hormnios)
Nova variante da CJD (vCJD, ingesto de
alimentos contaminados pelo agente da
BSE)
Doena familiar
CJD familiar. Representa 10%-15% de
(herdada geneticamente)
todos os casos de CJD
Sndrome de Gerstmann-StrusslerScheinker (GSS). Incidncia de cerca de
um caso por 10 milhes de pessoas
Insnia fatal familiar
Doenas prinicas atpicas. No se ajustam
facilmente aos critrios diagnsticos das
TSEs
Reproduzido de Ridley R.M. & Baker H.F. 1998. Fatal protein. The story of CJD, BSE and other prion
diseases, p. 3. Oxford University Press, Oxford, England. 249p.
19
Quadro 2. Encefalopatias espongiformes transmissveis (TSEs) em animais
Doena endmica rara de ovinos e caprinos.
Scrapie
Considerada o prottipo das TSEs
Encefalopatia transmissvel dos
Doena de visons criados para fins comerciais
visons (TME)
(pele). Provavelmente causada pela
alimentao dos visons com carne de ovelha
contaminada com scrapie
Doena depauperante crnica
Doena de origem obscura que afeta alces
(CWD)
selvagens e em cativeiro nos Estados Unidos e
Canad
Encefalopatia espongiforme dos
Doena epidmica em bovinos de leite,
bovinos (BSE)
principalmente no Reino Unido. Causada
provavelmente pela alimentao de bovinos
com raes contendo restos de ovinos
infectados por scrapie, de bovinos infectados
por BSE ou de ambos
Encefalopatia espongiforme felina Doena observada em gatos domsticos e em
(FSE)
alguns outros feldeos selvagens em cativeiro
(puma, guepardo e ocelote). Causada
provavelmente pela alimentao desses
animais com rao contendo material
contaminado por BSE
Encefalopatia espongiforme em
Identificada em vrios ruminantes de zoolgico
outras espcies
(por ex., kudu, rix rabe e cimitar). Causada
provavelmente pela alimentao desses
animais com rao contendo material
contaminado por BSE
Reproduzido de Ridley R.M. & Baker H.F. 1998. Fatal protein. The story of CJD, BSE and other prion
diseases, p. 8, Oxford University Press, Oxford, England. 249p.
2.1.3 Etiologia
A primeira transmisso de uma TSE foi conseguida por cientistas franceses
(Cuill & Chelle 1936), que inocularam um ovino intraocularmente com material de
crebro de outro ovino afetado por scrapie. O animal do experimento desenvolveu a
doena, mas somente 18 meses aps a inoculao, o que suscitou dvidas entre causa e
efeito. No entanto, no ano seguinte a transmissibilidade das TSEs foi acidentalmente
confirmada quando um veterinrio inoculou 18.000 ovinos na Esccia com uma vacina
contra uma doena viral daquela regio, a louping ill (Ridley & Baker 1998). Essa
vacina era feita com um extrato de crebro inativado com formol e uma partida fora
feita com crebros de ovinos afetados por scrapie. Surpreendentemente, 2-3 anos aps
a vacinao, 35% do rebanho vacinado desenvolveu scrapie, naquela poca j uma
conhecida encefalopatia espongiforme de ovinos. Subseqentemente, a scrapie foi
20
experimentalmente transmitida para ovinos e camundongos. A semelhana das leses
morfolgicas de scrapie com uma TSE de humanos (Hadlow 1959) denominada Kuru,
que ocorria na Nova Guin em pessoas que praticavam canibalismo ritualstico, levou
suspeita da natureza infecciosa da doena humana. Isso foi comprovado com a
reproduo da Kuru em chimpanzs pela inoculao de homogenados de crebros de
pessoas mortas por Kuru (Gajdusek et al. 1966). A confirmao da transmissibilidade
de outra TSE humana, a doena de Creutzfeldt-Jakob (CJD), foi um seguimento bvio
dessas pesquisas sobre a transmissibilide das TSEs (Gibbs et al. 1968). Assim essas
enfermidades comearam a ser percebidas como um grupo distinto de doenas.
No entanto, a natureza do agente etiolgico era desconhecida e controversa e
permanece controversa at os dias de hoje. O agente foi inicialmente denominado
vrus lento (Cho 1976) devido ao longo tempo decorrido entre a infeco e o
desenvolvimento dos sinais clnicos. Doenas produzidas por vrus lentos no traziam
a cognio de doena crnica, mas de doena em que os eventos patogenticos
desenvolvem-se em cmara lenta. A teoria viral, embora desacreditada por muitos,
no foi ainda totalmente abandonada por alguns pesquisadores. No entanto, o agente
difere dos vrus e de outros agentes convencionais. J em 1967, pesquisadores
relataram que o agente da scrapie era extremamente resistente a tratamentos que
normalmentre destruam os cidos nuclicos, como a luz ultravioleta e radiao (Alper
et al. 1967). Os achados desses autores indicavam que cidos nuclicos no eram
necessrios para a replicao do agente e conduziram a hipteses alternativas. Uma
delas que o agente fosse um virino, i., uma molcula de informao (muito
provavelmente um fragmento de cido nuclico) protegida por uma capa protica
(Kimberlin 1982). As dimenses diminutas do cido nuclico e a forte capa protica
poderiam explicar a resistncia aos procedimentos que normalmente destroem os
cidos nuclicos. Apesar disso, nenhum fragmento de cido nuclico foi encontrado
em mais de 30 anos de pesquisa que se seguiram.
J em 1967 foi proposto pela primeira vez que o agente responsvel pela
transmisso da scrapie era apenas uma protena capaz de replicar no organismo
(Griffith 1967). Esse trabalho lanou a hiptese conhecida hoje como hiptese de
apenas protena (protein only-hypothesis) que foi levada adiante pelos trabalhos de
Stanley Prusiner, que batizou a protena de pron, sigla em ingls para (proteinaceous
infectious particle) (Prusiner 1982) ou PrP. As evidncias para a hiptese de apenas
uma protena se acumularam ao longo dos anos subseqentes e geraram a hiptese
21
quase universalmente aceita como etiologia das TSEs. Foi demonstrado tambm que a
PrP pode existir em duas formas: a isoforma normal, um polipeptdeo de 33-35 kd,
encontrada principalmente em neurnios (denominada PrPc, c de clula) e uma
isoforma anormal, um polipeptdio de 27 a 30 kd denominado de PrPsc (sc de scrapie, a
doena prottipo das TSEs) que uma desfigurao na estrutura tridimensional da
protena normal (PrPc). Embora o mecanismo de formao da PrPsc no seja
completamente entendido, uma transformao ps-translacional da PrPc sugerida
(Figura 1). Esse mecanismo prope que a PrPsc atue como um molde sobre o qual a
estrutura da PrPc alterada: a disposio espacial de aminocidos em -hlice
predominante em PrPc alterada para uma disposio em placas -plissadas,
caractersticas da PrPsc. Um glossrio dos vrios tipos de prons est no Quadro 3 (Soto
2004).
22
2.1.4 Patognese
As TSEs so causadas pela transformao da PrPc em PrPsc e essas doenas so
caracterizadas por vacuolizao de neurnios, astrogliose, apoptose neuronal e
acmulo da protena corrompida no SNC. Esse acmulo assume, por vezes, a
conformao do amilide, i., placas - plissadas (Soto 2004).
23
Nas TSEs, na maioria das vezes, a infeco ocorre por via oral. Estudos em
humanos e em ovinos com scrapie indicam que os prons ingeridos por via oral so
absorvidos no intestino, principalmente nas placas de Peyer, e transportados pelo sangue
e pela linfa. Aps replicar em rgos do sistema reticuloendotelial (SRE) como bao,
apndice e tonsilas ou outros tecidos linfides, os prons so transportados para o
encfalo, principalmente pelos nervos perifricos (Aguzzi 2003). A penetrao no
encfalo atravs da barreira hematoenceflica tambm possvel (Mabbott &
MacPherson 2006).
Um estudo da patognese da BSE em bovinos (Wells et al. 1998, Wells 2003)
examinou o desenvolvimento espacial e temporal da infeco e as alteraes
patolgicas em bezerros de 4 meses aps inoculao oral com 100 g de homogenado
de crebro de bovino afetado por BSE. Os bezerros foram mortos seqencialmente em
intervalos de 4 meses e um grande nmero de tecidos foi colhido para ensaios
convencionais de infectividade em camundongos. O bezerro que mostrou os sinais
clnicos mais cedo adoeceu 35 meses aps a dosagem. A infectividade em tecidos noneurais esteve confinada poro distal do leo (6-18 meses e 36-40 meses aps a
dosagem). No SNC o aparecimento mais precoce da PrP anormal (32 meses aps
dosagem) coincidiu com a infectividade mais precoce e ocorreu antes de serem
observadas as alteraes histolgicas no crebro, aos 36, 38 e 40 meses aps a
dosagem. A infectividade foi tambm demonstrada em gnglios sensoriais do sistema
nervoso perifrico 32-40 meses aps a dosagem. Traos de infectividade foram
observados na medula ssea de bovinos sacrificados 38 meses aps a exposio. A
patognese da BSE em bovinos, embora parea em muitos aspectos semelhante da
scrapie e de outras TSEs de animais aps exposio oral (Soto 2004), difere pelo fato
de apresentar um mnimo envolvimento do SRE (Wells 2003).
Na Figura 2 (Bradley 2002) esto representados os intervalos de aparecimento,
sinais clnicos, alteraes histolgicas no encfalo e infectividade tecidual aps o
desafio com BSE por via oral.
24
2
6
38 40
Sinais clnicos
Alteraes no encfalo
leo distal
Bulbo
Medula espinhal
Gnglio da raiz dorsal
Gnglio trigeminal
Crtex frontal
Medula ssea
Figura 2. Sinais clnicos, alteraes histolgicas no crebro e infectividade tecidual em
intervalos aps o desafio com BSE por via oral durante um estudo experimental sobre
patognese (Reproduzido de Bradley R. 2002. Bovine spongiform encephalopathy. Update. Acta
Neurobiol. Exp. 62:183-195).
2.1.5 Epidemiologia
A BSE disseminou-se na populao bovina atravs da alimentao com raes
de farinha de carne ou de osso contaminadas pelo pron. A ingesto de 1 grama de
encfalo de um animal infectado suficiente para produzir a doena. No h evidncia
de que a BSE se dissemine horizontalmente, mas sugere-se que a transmisso maternal
ou vertical possa acontecer em nveis baixos (Wilesmith et al. 1997).
A fonte da infeco pode ter sido a entrada na cadeia alimentar (farinha de carne
e osso) de ovinos infectados com scrapie ou bovinos afetados por uma forma espordica
da doena, at ento no detectada. Alternativamente, ruminantes exticos de
zoolgicos afetados por uma TSE no detectada podem ter sido a fonte da infeco,
quando suas carcaas foram processadas para alimentao animal (Ridley & Baker
1998). Para testar a hiptese de que a BSE se originou de ovinos infectados por scrapie,
vrias fontes de scrapie em ovinos e caprinos foram transmitidas para bovinos por
injeo intracerebral ou outras vias parenterais, mas a transmisso no foi conseguida
por via oral e o agente no se alterou na sua primeira passagem de bovino para bovino
por inoculao intracerebral. Dessa forma, acredita-se que o isolado de BSE um
agente de TSE, que aps vrias passagens, tornou-se adaptado em bovinos. No se
exclui a possibilidade de que uma cepa de scrapie poderia ter produzido o fentipo da
BSE atravs de passagens seriadas em bovinos (Wells & Wilesmith 2004). A entrada
dos primeiros bovinos infectados na cadeia alimentar desencadeou a epidemia.
25
Com freqncia aparecem vrias teorias, impossveis de comprovar, mas
tambm difceis de refutar, sobre a origem do agente da BSE. Por exemplo,
recentemente (Colchester & Colchester 2005) foi sugerido que o agente da BSE tenha
se originado de restos de cadveres humanos provenientes do subcontinente indiano.
Nessa rea, por motivos religiosos, os restos de pessoas que morrem devem ser lanados
num rio, preferencialmente o Rio Ganges. Nas dcadas de 1960 e 1970, o Reino Unido
importou centenas de milhares de toneladas de ossos inteiros e modos e parte de
cadveres de mamferos. Cerca de 50% dessas importaes vieram da ndia e Paquisto
e foram comercializadas no Reino Unido como fertilizante e como alimento animal.
Muito desse material foi dragado de rios no subcontinente indiano e consistia de restos
humanos, que, segundo os autores, poderiam conter o pron (de uma pessoa com a
doena de Creutzfeldt-Jakob) que deu origem epidemia na Inglaterra. Essa teoria
bastante contestada (Shankar & Satishchandra 2005), mas foi publicada num peridico
cientfico (The Lancet) de prestgio.
Alteraes nos processos de fabricao das raes de farinha de carne e de osso
podem ter contribudo para o aparecimento da doena. Essas mudanas foram as
seguintes (Collee & Bradley 1997b): a farinha de carne e de osso era produzida na
Inglaterra a partir de carcaas de animais rejeitados para consumo ou mesmo mortos na
fazenda. Esse processo era feito por um tipo de indstria conhecido no Reino Unido e
nos Estados Unidos como rendering plants, que pode ser traduzido livremente por
graxaria, mas que so fbricas que recebem restos de animais de fazenda mortos,
doentes e em outras condies no-adequadas para consumo. O uso dessa farinha de
carne na alimentao de bovinos foi iniciado na Inglaterra em 1940 e interrompido
pela lei em julho de 1988, aps o surgimento da BSE. Nessa poca havia 46 graxarias
no Reino Unido. O material era fragmentado e processado em vrios sistemas em
temperaturas que variavam de pouco abaixo de 100C at 150C. O sebo derretido
(tallow) quando separado dos slidos ricos em protenas (greaves o resduo noderretido que sobra aps a gordura animal ser processada e, portanto pode ser
traduzido livremente por torresmo). A farinha de carne e de osso era feita moendo-se o
torresmo. Nesse estgio, o torresmo bruto poderia conter cerca de 14% de gordura,
mas o processamento do torresmo tradicionalmente inclua ainda mais um passo,
visando aumentar o ndice de gordura derretida extrada no processo atravs de calor
adicional prolongado (cerca de 8 horas a 70C) na presena de solvente de
hidrocarboneto. Aps esse processo, o torresmo continha menos que 1% de gordura. O
26
resduo de solvente no torresmo era recuperado por tratamento de vapor sob presso.
No final da dcada de 1970 e incio da dcada de 1980 esses dois passos no processo
(remoo da gordura do torresmo por solvente e recuperao do solvente por vapor)
foram omitidos por razes comerciais (o preo do sebo tinha cado) e de segurana (o
solvente de hidrocarbonetos era cancergeno). Assim, o agente da BSE que estivesse
presente nesse material, no seria mais submetido ao do solvente e tenderia a ficar
mais protegido no torresmo com porcentagem maior de gordura. Em 198182, a ltima
graxaria retirou o solvente do processo da fabricao de farinha de carne e osso, o que
estaria de acordo com o aparecimento da BSE em 198586.
Os primeiros casos de BSE ocorreram pela primeira vez na Inglaterra em 19851986 e 97% dos casos ocorreram no Reino Unido (Bradley 2002), embora a doena j
tenha se espalhado por 24 pases (Alemanha, ustria, Blgica, Canad, Dinamarca,
Eslovquia, Eslovnia, Espanha, Estados Unidos, Finlndia, Frana, Grcia, Holanda,
Irlanda, Israel, Itlia, Japo, Liechtenstein, Luxemburgo, Polnia, Portugal, Repblica
Tcheca, Sucia, Sua), num nmero relativamente pequeno de bovinos nativos.
Acredita-se que nesses casos o agente infeccioso foi adquirido por via oral na rao de
farinha de carne e de osso importada da Gr-Bretanha. altamente provvel que a alta
incidncia de BSE no Reino Unido tenha ocorrido pela concatenao de diversas
circunstncias, que ocorreram somente nessa rea e incluem: alta taxa de ovinos em
relao aos bovinos, alta prevalncia de scrapie na populao ovina, e a massiva
alimentao dos bovinos com farinha de carne e osso e as mudanas no seu processo
de fabricao (Wells & Wilesmith 2004). A evoluo da epidemia pode ser
acompanhada nas Figuras 3 e 4. O uso dessa farinha de carne e osso para animais de
produo foi banido em janeiro de 2001 em toda a Unio Europia. Por isso
improvvel que grandes epidemias, como a que ocorreu no Reino Unido, ocorram em
outros pases.
No curso da epidemia da BSE, at dezembro de 2002, 43 e 93 casos de
encefalopatia espongiforme foram diagnosticados em ruminantes selvagens mantidos
em cativeiro e em gatos (domsticos e selvagens), respectivamente. Estudos
epidemiolgicos demostraram que esses animais foram expostos com a mesma
alimentao usada para bovinos ou a rao comercial utilizada na indstria pet que
continha tecidos bovinos considerados de alto risco (ex.: cabeas) (Wells e Wilesmith
2004). Em relao vCJD, 146 pessoas foram diagnosticadas com a doena no Reino
Unido e mais 10 no resto do mundo (Prusiner 2004).
27
40000
37280
35090
35000
30000
25359
25000
24438
20000
14407
14562
15000
8149
10000
5000
7228
4393
3235
2301
144312021144 611
343 225 83
2514
446
0
87
19
s 8 9 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 1 2 3 4 5 *
nte 198 198 199 199 199 199 199 199 199 199 199 199 200 200 200 200 200 200 006
a
2
e
1600
1587
1400
1200
996 976
1000
800
600
654
464 404
400
200
0
134 131
80 49
31 24 23 15 10
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Lu Lie
28
Menos que 50 casos de BSE em bovinos importados do Reino Unido foram
relatados em outros pases. Considerando que mais que 50.000 bovinos foram
exportados pela Inglaterra no perodo crtico aps 1985, surpreendente que um
nmero to pequeno de casos tenham sido relatados em outros pases. tambm
surpreendente que relativamente poucos casos de BSE tenham sido relatados em
bovinos de outros pases da Europa e da Amrica do Norte, uma vez que grande
quantidade de farinha de carne e de osso (> de 71.000 toneladas) tenha sido exportada
pelo Reino Unido para esses pases at 1990 (Collee & Bradley 1997a).
A idade mdia de ocorrncia da BSE 5 anos; a idade do bovino mais novo
afetado era 20 meses e a do mais velho 18 anos. No foi detectada predileo por raa
ou sexo. Bovinos adultos de leite eram principalmente afetados na epidemia porque
essa categoria recebia, quando bezerro, farinha de carne e de osso que continha o
agente e porque geralmente bovinos dessa categoria vivem mais e alcanam a idade de
desenvolvimento da doena. Na Inglaterra, bezerros machos paridos por vacas leiteiras
so abatidos para consumo ao redor de dois anos de idade. Poucos animais so
afetados por rebanho. Trinta e cinco por cento das fazendas tiveram apenas um caso e
69% tiveram 4 casos ou menos (Collee & Bradley 1997a). A baixa incidncia por
rebanho (<3% em qualquer determinado perodo de 6 meses desde que a epidemia no
Reino Unido comeou) atribuda baixa exposio dos bovinos a pacotes de
infectividade que eram amplamente espaados em diferentes partidas de rao
(Kimberlin & Wilesmith 1994).
29
no comportamento so mais evidentes quando o bovino perturbado. Lamber
freqente do focinho, franzir do nariz e ranger de dentes so sinais clnicos comuns.
Outros sinais clnicos possveis de ocorrer so salivao e um olhar assustado com
olhos esbugalhados. Alguns bovinos exibem movimentos nervosos das orelhas. Nos
estgios terminais da BSE, o bovino apresenta dificuldade em levantar-se ou pode
permanecer em decbito permanente. Sinais clnicos relacionados com distrbios da
sensibilidade incluem reao exagerada ao toque (a mais comum), ao som e luz. Os
distbios da locomoo comumente observados so andar rgido, incoordenao,
hipermetria e ataxia generalizada. A hipermetria mais acentuada nos membros
plvicos e confere aos bovinos um passo alto, semelhante ao observado em cavalos
com harpejamento. A ataxia grave evolui para quedas e finalmente paresia dos
membros plvicos e decbito.
2.1.6 Patologia
No h leses macroscpicas diretamente relacionadas doena, mas as leses
microscpicas da BSE so bastante especficas (Wells et al. 1989, Wells et al. 1991,
Simmons et al. 1996). So leses degenerativas, simtricas e bilaterais e localizam-se
em certas regies da substncia cinzenta do tronco enceflico (Wells et al. 1989, Wells
et al. 1991). Qualitativamente essas alteraes consistem de alterao espongiforme,
vacuolizao neuronal, reao astrocitria e degenerao neuronal (Wells & Wilesmith
2004). Duas apresentaes de vacuolizao neuronal so observadas. Na neurpila, h
vacolos nos neuritos de at 20 m de dimetro (alterao espongiforme). No
pericrio, ocorrem vacolos maiores, solitrios ou mltiplos, que chegam a 30-40 m
de dimetro. Esses vacolos distendem o pericrio, produzindo neurnios balonosos
que conservam apenas uma fina margem de citoplasma. A presena de vacolos na
neurpila da substncia cinzenta e no pericrio dos neurnios so os critrios para o
diagnstico positivo de BSE, no exame histolgico (Wells et al. 1991).
A distribuio das leses bastante regular. As reas mais afetadas so o
ncleo do trato solitrio, trato espinhal do nervo trigmeo, ncleo vestibular, formao
reticular do bulbo, substncia cinzenta periaqueductal do mesencfalo, rea
paraventricular do tlamo e septo talmico. A densidade de vacolos maior no bulbo,
mesencfalo e tlamo. A medula espinhal foi avaliada em apenas 10 casos confirmados
30
da doena e as alteraes vacuolares foram confinadas ao corno dorsal da substncia
cinzenta nas regies cervical, torcica e lombar (Wells & Wilesmith 2004).
O mapeamento das leses em 684 crebros afetados por BSE revelou que, em
99,6% dos casos, o corte do bulbo no nvel do bex apresentou as alteraes
caractersticas da doena, principalmente as alteraes espongiformes no ncleo do
trato solitrio e no trato espinhal do nervo trigmeo, indicando que esse o corte do
encfalo mais importante para o diagnstico (Wells et al. 1991). Estudos em
camundongos e ovinos tm demonstrado que h dois principais determinantes para o
padro da leso observada nas TSEs: o gentipo do hospedeiro (principalmente em
relao ao gene PRNP) e o agente ou cepa do pron. A uniformidade das leses da BSE
sugere que h pouca variao no gentipo do hospedeiro e que h um nico agente ou
cepa de pron (Wells & Wilesmith 2004). Em 2004, surgiram casos de BSE na Itlia
que demonstraram padro de localizao do PrPsc na imunoistoqumica diferente do
padro observado em casos antes observados, que consistem de depsitos granulares
no pericrio e na neurpila. Esses casos atpicos caracterizavam-se por depsitos de
placas amilides, depsitos gliais e granulares extracelulares no tlamo, substncia
branca subcortical e camadas profundas do crtex cerebral. O padro bioqumico foi
similar ao encontrado nos casos espordicos de CJD (Casalone et al. 2004). Esse novo
fentipo de BSE ficou conhecida com BASE (bovine amyloidotic spongiform
encephalopathy encefalopatia espongiforme amiloidtica bovina). Trs casos
atpicos de BSE tambm foram observados na Frana e um no Japo (Biacabe et al.
2004, Yamakawa et al. 2003).
Ultra-estruturalmente, a BSE caracterizada por numerosos vacolos nos
processos neuronais, reao astrocitria caracterizada por processos com abundantes
filamentos gliais, distrofia neuroaxonal e estruturas tubulovesiculares. Vacolos
intracelulares com membrana foram observados predominantemente nos dendritos e
dentro de poucos axnios mielinizados. Esses vacolos continham fragmentos de
membrana circulares, cmaras secundrias, vesculas e material amorfo (Liberski et al.
1992).
2.1.7. Diagnstico
No h ainda teste para diagnosticar BSE no bovino vivo. A doena clnica pode
ser confirmada postmortem pelo exame microscpico do tecido enceflico ou pela
31
deteco da isoforma anormal do pron (PrPsc), que pode ser feita por microscopia
eletrnica ou por mtodos imunolgicos. Quando extratos de crebros de animais
afetados com TSEs so examinados ao microscpio eletrnico, as PrPsc aparecem como
estruturas em forma de bastonete denominadas SAFs (scrapie associated fibrils).
Mtodos imunolgicos incluem a deteco da protena (PrPsc) por imunoistoqumica,
por western immunoblotting (Farquar et al. 1989, Grassi et al. 2001), pelos chamados
testes rpidos baseados em ELISA ou em immunoblotting (Quadro 4). Alguns desses
testes podem fornecer resultados acurados e rpidos (alguns em menos de duas horas) e
testar grande nmero de animais com relativamente pouca mo-de-obra tcnica.
Quadro 4. Resumo dos testes rpidos para deteco postmortem de isoformas alteradas
de PrP no encfalo de bovinos
Tcnica
Princpio
Limite de
Vantagens
Desvantagens
deteco
Prionics-Check Eletroforese em
5.020
Boa
Poucos testes
Western test
gel e Western
pmol
reproducibilidade, por unidade de
blot
baixos ndices de
tempo, baixa
falsos positivos
sensibilidade
Enfer test
ELISA simples
1.010
Rpido e simples
Potencial para
pmol
falsos positivos
CEA/Biorad test ELISA
sanduche
usando dois
anticorpos
diferentes
Prionics-Check ELISA
LIA test
sanduche
usando dois
anticorpos
diferentes
0.52.0
pmol
Alta sensibilidade
1.05.0
pmol
Rpido,
automatizado e
simples
Conformational- Ligao
dependent
diferencial de
immunoassay anticorpo a PrP
nativo e
desnaturado
0.55.0
pmol
Independente da
digesto da
protease, alta
sensibilidade
Mais demorado
e mais
trabalhoso;
potencial para
falsos positivos
Variabilidade
dependendo da
preparao da
amostra;
potencial para
falsos positivos
Complicado e
envolve mais
passos que os
outros testes
Reproduzido de Soto C. 2004. Diagnosing prion diseases: needs, challenges and hopes. Nature Reviews,
Microbiology 2:809-819.
32
A avaliao de risco de um pas em relao BSE feito atravs do GBR
(Geographical BSE Risk) que um indicador qualitativo da probabilidade da presena
de um ou mais bovinos infectados com BSE, num determinado momento, num pas.
Essa forma de avaliao foi criada pela Unio Europia. Nesse sistema, os pases so
includos em uma das quatro categorias do GBR que determinam o risco de cada pas.
No nvel I so includos pases em que a ocorrncia de BSE altamente improvvel; no
nvel II, pases em que a possibilidade da BSE improvvel mas no excluda; no nvel
III, pases em que a possibilidade de BSE provvel, mas no confirmada ou
confirmada em baixos nveis e no nvel IV, pases em que a BSE confirmada em altos
nveis. A Figura 5 mostra os pases classificados e os respectivos nveis para o GBR.
Figura 5. GBR (Geographical BSE Risk). No nvel I, representados pela cor verde, so
includos Argentina, Austrlia, Islndia, Nova Zelndia, Nova Calednia, Panam,
Paraguai, Cingapura, Uruguai e Vanuatu. No nvel II, representados pela cor verdeclara, so includos, Botsuana, Brasil, Costa Rica, Crocia, El Salvador, ndia, Qunia,
Colmbia, Maurcia, Nambia, Nicargua, Nigria, Noruega, Paquisto, Suazilndia e
Sucia. No nvel III, representados pela cor azul, esto frica do Sul, Albnia,
Alemanha, Andorra, ustria, Bielorrssia, Blgica Bulgria, Canad, Chile, Dinamarca,
Eslovquia, Eslovnia, Espanha, Estados Unidos, Estnia, Finlndia, Frana, Holanda,
Hungria, Irlanda, Israel, Itlia, Japo, Letnia, Liechtenstein, Litunia, Luxemburgo,
Macednia, Malta, Mxico, Polnia, Repblica Tcheca, Romnia, So Marinho, Sua,
Turquia e Chipre. No nvel IV esto Reino Unido e Portugal. Fonte: www.efsa.eu.int
33
At 2005, o Brasil era includo no nvel I do GBR. Em meados de 2005, aps
um relatrio oficial da Unio Europia, o Brasil foi rebaixado para o nvel II. Segundo
esse documento (EFSA scientific report, 2005), a vigilncia brasileira em relao
BSE foi passiva de 1980 a 2000 e a partir de 2001 comeou a vigilncia ativa.
No h tratamento ou vacina para impedir o aparecimento da BSE. A proteo
dos pases que ainda no possuem casos de BSE depende da execuo de medidas para
prevenir a introduo da doena no pas que inclui no importar bovinos de pases com
casos de BSE ou de pases cuja situao epidemiolgica seja desconhecida; se
ocorrerem importaes, determinar medidas para que o agente no se recicle, banindo
a alimentao de ruminantes com protena de origem animal ou com cama de frango e
impedir a permanncia de cadveres no campo.
H a possibilidade da ocorrncia de casos espordicos de BSE quando prons
patognicos se originam espontaneamente em uma populao bovina, e esses bovinos
podem no ser detectados na amostragem de testes convencionais (histopatologia e
imunoistoqumica). Por isso, recomendvel o uso dos testes rpidos em frigorficos
para aumentar a amostragem dos bovinos a serem testados. No entanto, esses testes
possuem limitaes, pois dependem de altos nveis de PrPsc acumulados no crebro do
bovino. So ideais para serem usados em bovinos velhos (Prusiner 2004). Para
deteco de bovinos assintomticos jovens, pesquisas para amplificar PrPsc no sangue
in vivo tm sido desenvolvidas. Dessa forma, um teste sangneo poderia ser utilizado
para deteco da PrPSc antes do sacrifcio do animal (Sa et al. 2006).
A mais nova tecnologia publicada para o controle e utpica erradicao da BSE
a produo de bovinos knockout para PrPc (PRNP-/-). Bezerros produzidos dessa
maneira,
estavam
clinicamente,
fisiologicamente,
histopatologicamente,
34
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37
2.2 SERVIO DE VIGILNCIA PARA A BSE NO BRASIL
2.2.1 Programa Nacional de Controle da Raiva dos Herbvoros e outras
Encefalopatias (PNCRH)
O PNCRH um dos programas da rea da sade animal do Ministrio da
Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA) (Figura 6) vinculado ao Departamento
de Sade Animal (DSA). Esse programa, que at o advento da BSE era dedicado
exclusivamente ao controle da raiva dos herbvoros, foi ampliado em 09/12/97, pela
Portaria Ministerial 516, (Anexo 1) para atender s exigncias da vigilncia da BSE e da
scrapie. Essa portaria foi alterada pela Instruo Normativa (IN) 005, de 1. de maro de
2002 (Anexo 2). O PNCRH coordenado pela Coordenao da Raiva dos Herbvoros e
outras Encefalopatias (CRHE) que foi criada em fevereiro de 2005, e faz parte da
Coordenao Geral de Combate s Doenas (Figura 7) do DSA, da Secretaria de Defesa
Agropecuria (SDA).
Ministro
Assistncia Direta
Secretaria
Executiva
Secretarias Especiais
Secretaria de
Secretaria de
Poltica
Produo e
Agroenergia
Secretaria de
Superintendncias
Federais de
Agricultura, Pecuria
e Abastecimento em
cada Estado (SFAs)
Desenvolvimento
Secretaria de Relaes
Internacionais do
Agronegcio
Agropecurio e
EMBRAPA
Empresa Brasileira
de Pesquisa
Agropecuria
Cooperativismo
Secretaria de Defesa
Agropecuria
Departamento de
Departamento
Departamento
Inspeo de Produtos
de Sade
de Fiscalizao
de Origem Animal
Animal
de Insumos
Coordenao
Geral de Apoio
Laboratorial
(CGAL)
38
Nessa rea, h mais oito programas: Programa Nacional de Educao Sanitria
Animal (PNESA), Programa Nacional de Sanidade Avcola (PNSA), Programa
Nacional de Sanidade dos Caprinos e Ovinos (PNSCO), Programa Nacional de
Sanidade Sudea (PNSS), Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e
da Tuberculose (PNCEBT), Programa Nacional de Sanidade dos Eqinos (PNSE),
Programa Nacional de Erradicao da Febre Aftosa (PNEFA) e Programa Nacional de
Sanidade dos Organismos Aquticos (PNSOA).
39
impressa do manual tambm distribuda gratuitamente a mdicos veterinrios do
MAPA e a todos os mdicos veterinrios da iniciativa privada que participam do curso
para padronizao das atividades do PNCEBT e noes bsicas sobre BSE.
40
Quadro 5. Laboratrios credenciados para a vigilncia das
encefalopatias
espongiformes transmissveis (EETs) e respectivos estados de atuao.
Laboratrio
Estados de procedncia do material para exame histopatolgico
UFSM
RS, SC, PR, GO
UFRGS
RS, MT, RJ, ES
UFMS
MS, RO, AC
LANAGRO/PE Regio Nordeste, AM, PA, RR, TO, AP
IMA/MG
MG
IB/SP
SP
41
Pela IN SDA n 18, de 27 de feveveiro de 2004 (Anexo 5), o Setor de Patologia
da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foi credenciado para realizar o exame de
imunoistoqumica para as EETs.
O PNCRH possui um comit Cientfico Consultivo sobre Encefalopatias
Espongiformes Transmissveis (CEET) formado pela instruo de Servio DDA n 07,
de 06 de maro de 2003 e substituda pela portaria DDA n. 69, de 17 de agosto de 2004
(Anexo 6). Esse comit constitudo pelos seguintes profissionais: Claudio Severo
Lombardo de Barros, profissional especializado do laboratrio de referncia nacional
para o diagnstico de EET (UFSM), Amauri Alcindo Alfieri, profissional especializado
em virologia e medicina veterinria preventiva (UEL), Antnio Carlos Alessi,
profissional especializado em diagnstico de EET (UNESP/Jaboticabal), Cleber
Oliveira Soares, profissional especializado em medicina veterinria preventiva
(EMBRAPA Gado de Corte/MS), Vicente Mateo Astudillo Calds, profissional
especializado em epidemiologia, (Centro Panamericano de Febre Aftosa/RJ), Edwiges
Maristela Pituco, profissional especializada em virologia (IB/SP) e Vitor Salvador Pico
Gonalves, profissional especializado em epidemiologia, (UNB/DF). O CEET tem
funo de assessorar o MAPA em assuntos relacionados s EETs. Os membros desse
comit renem-se periodicamente para discutir assuntos relacionados legislao
nacional das EETs e direes sugeridas por rgos internacionais como Escritrio
Internacional de Epizootias (OIE) e Comunidade Europia.
42
repassados para um livro Ata e para um programa de computador denominado DXSNC,
que um banco de dados construdo no programa Access do Office. O livro Ata deve
conter, no mnimo, as seguintes informaes: nmero do DXSNC, protocolo do
remetente, nome do veterinrio remetente e procedncia (municpio/estado), nome da
pessoa que recebeu o material no laboratrio, nome do proprietrio remetente e
procedncia (municpio/estado), espcie, sexo, idade e raa do ruminante, data de
recebimento, de encaminhamento do material, data de sada do diagnstico e o resultado
(Anexo III do Anexo 3). Essas informaes e outras informaes adicionais como
categoria da amostra, condies de recebimento da amostra, endereo completo do
proprietrio, nmero do SIF (servio de Inspeo Federal) remetente (se for o caso) e
encaminhamento ou no para imunoistoqumica so tambm preenchidos no programa
de computador. As categorias de amostras esto listadas no Quadro 6. A Figura 9
demonstra a pgina de abertura e os dados a serem preenchidos no programa DXNSC.
Quadro 6. Categorias de amostras recebidas pelos laboratrios credenciados como parte
do programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes transmissveis
N da categoria
Caracterstica da categoria
Categoria 1
Encfalo de bovino com sinais clnicos de distrbios nervosos
que apresentaram resultado negativo para raiva em laboratrios
da rede oficial
Categoria 2
Encfalo de bovino com sinais clnicos de distrbios nervosos
Categoria 3
Encfalo de bovino com doena depauperante, crnica ou
caquetizante ou em decbito.
Categoria 4
Encfalo de animais importados de pases de risco para BSE
Categoria 5*
Encfalo de bovino proveniente de abatedouro
Categoria 6
Encfalo de bovino proveniente de abate de emergncia
Categoria 7
Encfalo de ovino com sinais clnicos de distrbios nervosos
Categoria 8
Encfalo de ovino proveniente de abatedouro
Categoria 9
Encfalo de caprino com sinais clnicos de distrbios nervosos
Categoria 0
Encfalo de caprino proveniente de abatedouro
* Categoria excluda no programa de vigilncia atual.
43
B
Figura 9. Programa de computador DXSNC. A. Pgina de tela de abertura do
programa. B. Pgina de cadastro da amostra.
44
Na categoria 1 so includos os bovinos que apresentaram resultado negativo
nas provas de imunofluorescncia direta e/ou prova biolgica para a raiva em
laboratrios da rede oficial. Nesse caso, os materiais provenientes desses laboratrios
so encaminhados para os laboratrios de patologia credenciados pelo MAPA, a fim de
tentar esclarecer a causa dos sinais neurolgicos do bovino. Os laboratrios de raiva da
rede oficial constam no Anexo 7. Na categoria 2 so includos os bovinos com sinais
clnicos de distrbios nervosos que so atendidos na rea de abrangncia de cada
laboratrio ou material enviado por mdicos veterinrios da regio. Na categoria 3 so
includos bovinos que apresentam doena caquetizante ou depauperante ou que esto
em decbito, mas sem sinais clnicos prvios de distrbios nervosos. Exemplos de
bovinos nessa categoria na rea de abragncia do LPV/UFSM so os afetados por
intoxicao crnica por samambaia (Pteridium aquilinum) e bovinos que apresentam
emagrecimento progressivo por diversas causas. Na maioria das vezes, o exame
histolgico do encfalo desses bovinos no revela alteraes. Na categoria 4 so
includos todos os ruminantes importados (bovinos, ovinos ou caprinos). Essa categoria
tem prioridade sobre as outras categorias, pois mesmo que tenham sido feitas as provas
de IFD e/ou biolgica para a raiva e mesmo que esses animais apresentem alguma
doena caquetizante ou neurolgica, eles devem sempre ser inseridos na categoria 4 e
no na 1, 2 ou 3, 7 ou 9. O cumprimento dessa norma importante, pois todos os
animais importados de pases onde houve diagnstico de BSE em animais nativos,
devem, no final da vida reprodutiva, ser sacrificados e os proprietrios, indenizados; sob
hiptese alguma qualquer animal dessa categoria pode ser enviado para abate e
consumo. Essa conduta facilita a rastreabilidade dos ruminantes importados no pas, ou
seja, garante que o ruminante importado no entrou na cadeia alimentar e, atravs do
exame histolgico, pode-se comprovar de que esse animal no tinha leses de EET. H
uma rea especfica no formulrio de envio do material que deve ser preenchida para o
caso de ruminante importado; os dados dessa rea incluem nome e nmero (geralmente
o nmero de registro ou nmero do Sistema Brasileira e Identificao e Certificao de
Origem Bovina e Bubalina - SISBOV) do animal, se o animal apresenta sinais clnicos
nervosos e se o proprietrio recebe ou no indenizao (Anexo II do Anexo 3). A
indenizao s ocorre quando o animal est vivo e o proprietrio solicita sua destruio.
Os dados referentes ao ruminante importado tambm so transcritos para o laudo
histopatolgico (Anexo 13). A IN n 8, de 13 de fevereiro de 2001, que regia as normas
para animais importados no pas, foi revogada. Vigora a Instruo Normativa n 18, de
45
15 de dezembro de 2003 (Anexo 8). Na categoria 5 eram includos os encfalos de
bovinos provenientes de matadouro com mais de 30 meses e que tinham sido
alimentados com rao de origem animal em algum perodo de sua vida. Essa categoria
foi excluda do programa devido proibio da protena animal na alimentao de
ruminantes de acordo a vigente IN n 8, de 25 de maro de 2004 (Anexo 9) e porque
no era, sob o ponto de vista do MAPA, uma amostra epidemiologicamente adequada
para pesquisa de possveis casos de BSE. Na categoria 6 so includos encfalos de
bovinos provenientes do abate de emergncia. A Instruo de Servio N
002/2003/DOI/DIPOA rege as normas e procedimentos para animais encaminhados ao
abate de emergncia (Anexo 10). Os motivos do abate de emergncia desses bovinos
so geralmente fratura em membros plvicos ou torcicos ou contuses generalizadas.
Alguns desses bovinos j chegam mortos ao frigorfico, e mesmo assim, o encfalo
retirado para exame histopatolgico. O formulrio que acompanha esse material consta
no Anexo 11. Na categoria 7 so includos ovinos com sinais clnicos nervosos; na
categoria 8, ovinos provenientes de abatedouros. A categoria 9 composta por
caprinos com sinais clnicos nervosos e a categoria 0 composta por caprinos
provenientes de abatedouros. Na rotina diagnstica do LPV/UFSM, o nmero de
encfalos de ovinos e caprinos bem menor que o de bovinos. Isso se reflete, em parte,
pelo nmero total de caprinos e ovinos no Brasil estimado respectivamente em
9.581.653 e 14.556.484 de cabeas, em comparao s 195 milhes de cabeas de
bovinos no pas1.
Os encfalos tambm so analisados em relao condio da amostra e devem
ser alocados em uma das seguintes categorias listadas a seguir: (1) autolisado, (2)
congelado, (3) partes anatmicas pertinentes no includas, (4) danificao durante o
transporte, (5) amostras no identificadas, (6) encfalo inadequadamente retirado e (7)
no se aplica (quando adequado). Esse dado importante para o MAPA e para o
laboratrio que est processando o material, pois permitem que os tcnicos do MAPA
verifiquem a eficcia da coleta de encfalos no campo e avaliem a necessidade da
realizao de cursos de treinamento para os mdicos veterinrios. O curso de
treinamento de coleta do encfalo para mdicos veterinrios oficiais do MAPA, bem
como para os da iniciativa privada so realizados nos cursos de Treinamento em
Mtodos de Diagnstico e Controle de Brucelose e Tuberculose Animal e Noes de
IBGE, 2003.
46
Encefalopatias Espongiformes Transmissveis. Esses cursos so ministrados em
diversas Universidades do pas e tm durao de 5 dias. Para habilitao de novos
ministrantes, o MAPA promove cursos em Braslia, DF, geralmente ministrados pelo
Prof. Claudio Barros ou pelo Prof. David Driemeier. O curso em Braslia geralmente
dura dois dias e consiste de uma parte terica com palestras visando noes gerais sobre
as encefalopatias espongiformes transmissveis, e uma parte prtica que consiste na
retirada do encfalo de cabeas de bovinos provenientes de abatedouro e
reconhecimento das principais reas anatmicas do encfalo para correto envio do
material ao laboratrio. Na ocasio dos cursos, os mdicos veterinrios recebem o
Manual de Procedimentos para o Diagnstico das Doenas do Sistema Nervoso Central
de Bovinos, que conforme mencionado anteriormente, contm todas as informaes
bsicas para a coleta e remessa do material para os laboratrios.
A condio da amostra de encfalo importante para o laboratrio, porque
decide as partes anatmicas a serem processadas. Por exemplo, materiais provenientes
de frigorfico geralmente consistem apenas do tronco enceflico. Muitas vezes, esse
material est coberto por cogulos de sangue, devido ao mtodo de eutansia (pistola
pneumtica), e isso dificulta a fixao em formol. Materiais provenientes de
laboratrios que realizam exames para raiva, geralmente no apresentavam amostras em
boas condies (Figura 10), mas medida que os cursos de habilitao tm sido
ministrados pelo MAPA, a qualidade da condio da amostra tende a melhorar. A
integridade do encfalo muito importante para o exame histopatolgico. Quanto maior
a manipulao, maior a possibilidade da introduo de artefatos no tecido nervoso.
47
Figura 10. Condio da amostra que chega ao laboratrio para o exame histolgico.
Essa amostra catalogada como partes anatmicas pertinentes no includas devido
ausncia do bulbo na altura do bex, local anatmico onde se realiza o diagnstico de
BSE.
48
2.2.5 Resultado da amostra
Durante a leitura das lminas, so anotados os achados incidentais bem como os
associados a doenas em cada seo de encfalo examinada. Esses achados so
descritos na seo histopatologia do laudo histopatolgico (Anexo 13). No
diagnstico vai o nome da doena em questo ou sem alteraes histopatolgicas.
Mesmo quando se descrevem vrios achados incidentais, como alteraes associadas
idade, o diagnstico continua sendo sem alteraes histopatolgicas. Um exemplo
comum so os encfalos provenientes de frigorficos. Geralmente, macro e
microscopicamente observa-se hemorragia subdural e intracerebral, mas o diagnstico
no hemorragia traumtica, pois essa leso foi infligida em um encfalo
previamente normal. O mesmo acontece com animais que apresentam raros manguitos
perivasculares no encfalo. Esse um achado incidental, pode ser descrito na seo
histopatologia do laudo, e o diagnstico no ser dado como meningoencefalite nosupurativa, mas como sem alteraes histopatolgicas.
A importncia de se cadastrar laboratrios de diagnstico para a vigilncia
epidemiolgica da BSE se deve possibilidade de se aliar epidemiologia e sinais
clnicos aos achados macro e microscpicos, e dessa forma, realizar a correta
interpretao das leses e escolha do diagnstico mais apropriado. Alguns diagnsticos
dependem de dados epidemiolgicos (ex.: intoxicao por plantas, intoxicao por
carbamato, ttano). No Quadro 7, observa-se a lista de diagnsticos utilizada no
programa DXSNC. O nmero de casos de cada doena pode variar dependendo da
regio do pas, mas todos os laboratrios devem ter a mesma lista de diagnsticos. Um
diagnstico inserido em um laboratrio deve ser imediatamente comunicado ao MAPA
e aos outros laboratrios para a adio ao programa DXSNC.
49
Quadro 7 Lista de diagnsticos de doenas ou leses do sistema nervoso central de
ruminantes utilizada no programa DXSNC.
Abscessos cerebrais
Intoxicao por Halimium braziliensis
Artrite encefalite caprina
Intoxicao por organofosforados
Babesiose cerebral
Intoxicao por Prosopis juliflora
Botulismo (por outros mtodos)*
Intoxicao por Sida carpinifolia
Cenurose
Intoxicao por Solanum fastigiatum
Cetose (por outros mtodos)
Leucose enzotica
Compresso medular
Listeriose
Encefalomalacia focal simtrica
Maedi-Visna
Encefalopatia heptica
Meningite bacteriana
Febre catarral maligna
Meningoencefalite no-purulenta
inespecfica
Febre vitular (por outros mtodos)
Meningoencefalite por herpesvrus
Hemorragia traumtica
Meningoencefalite purulenta inespecfica
Hipomagnesemia (por outros mtodos)
Neoplasia
Intoxicao por Aspergillus clavatus
Polioencefalomalacia
Intoxicao por Ateleia glazioviana
Raiva
Intoxicao por carbamatos
Scrapie
Intoxicao por Claviceps paspali
Sem alteraes histopatolgicas
Intoxicao por Cynodon dactilon
Ttano (por outros mtodos)
Intoxicao por Dyplodia maydis
Em andamento**
* Por outros mtodos significa que o diagnstico foi realizado pelo exame de outros rgos, pelos sinais
clnicos e dados epidemiolgicos.
**Quando o diagnstico ainda est pendente.
50
Os laudos (Anexo 13) so remetidos ao laboratrio que enviou o material fixado
em formol (geralmente os laboratrios da rede oficial), para a Coordenao Geral de
Apoio Laboratorial (CGAL) e uma cpia permanece no laboratrio que gerou o
resultado, para futuras auditorias. A partir de 2004, os laudos so gerados pelo programa
de computador DXSNC. Os laboratrios devem encaminhar o relatrio das atividades
mensais ao Departamento de Sade Animal, at o 10 dia til do ms subseqente.
51
um dos nmeros apresentados no Quadro 8 ser colocado ao lado da rubrica com um
crculo em volta.
52
53
ANEXO
NORMAS TCNICAS PARA O CONTROLE DA RAIVA DOS HERBVOROS
DOMSTICOS
CAPTULO I
DAS DISPOSIES PRELIMINARES
Art. 1 Para efeito destas Normas, considera-se como proprietrio aquele que seja
possuidor, depositrio ou a qualquer ttulo mantenha em seu poder animais susceptveis
raiva.
Art. 2 O proprietrio dever notificar de imediato, ao Servio Veterinrio Oficial, a
ocorrncia ou a suspeita de casos de raiva, assim como a presena de animais atacados por
morcegos hematfagos ou a existncia de abrigos de tal espcie.
Art. 3 O Servio Veterinrio Oficial dever tomar as providncias necessrias ao
atendimento dos animais e coleta de material para diagnstico da raiva e de outras
encefalites diferenciais.
Art. 4 Os servidores que trabalham em laboratrio ou em atividades de controle da
doena devem estar protegidos mediante imunizao preventiva, segundo esquema
recomendado pela Organizao Mundial da Sade.
54
CAPTULO II
DO OBJETIVO E DA ESTRATGIA DE ATUAO DO PROGRAMA
Art. 5 O Programa Nacional de Controle da Raiva dos Herbvoros tem como objetivo
baixar a prevalncia da doena na populao de herbvoros domsticos.
Art. 6 A estratgia de atuao do Programa baseada na adoo da vacinao dos
herbvoros domsticos, do controle de transmissores e de outros procedimentos de defesa
sanitria animal que visam proteo da sade pblica e o desenvolvimento de fundamentos
de aes futuras para o controle dessa enfermidade.
CAPTULO III
DA VACINAO
Art. 7 Na profilaxia da raiva dos herbvoros, ser utilizada vacina inativada, na
dosagem de 2 (dois) ml, administrada pelo proprietrio, atravs da via subcutnea ou
intramuscular.
Art. 8 Nas reas de ocorrncia de raiva, a vacinao ser adotada sistematicamente,
em bovdeos e eqdeos com idade igual ou superior a 3 (trs) meses, sob a superviso do
mdico veterinrio.
1 A vacinao de bovdeos e eqdeos com idade inferior a 3 (trs) meses e a de
outras espcies poder ser realizada a critrio do mdico veterinrio.
2 Animais primovacinados devero ser revacinados aps 30 (trinta) dias.
Art. 9 O atestado de vacinao anti-rbica ser expedido por mdico veterinrio,
sendo vlido pelo perodo de proteo conferido pela vacina usada.
Pargrafo nico. Para complementar a comprovao da vacinao, poder ser
solicitado ao proprietrio dos animais:
I - a nota fiscal de aquisio da vacina, a qual deve constar o nmero da partida, a
validade e o laboratrio produtor;
II - a anotao da data da vacinao, o nmero de animais vacinados por espcie e a
respectiva identificao dos animais.
Art. 10. A durao da imunidade das vacinas para uso em herbvoros, para efeito de
revacinao, ser de no mximo 12 (doze) meses.
CAPTULO IV
DA PRODUO, CONTROLE E COMERCIALIZAO DE VACINAS
Art. 11. A produo e o controle de todas as partidas de vacina obedecero s normas
do Departamento de Defesa Animal, junto ao qual todas as vacinas devero estar previamente
licenciadas.
Art. 12. S ser aprovada vacina com prazo de validade igual ou superior a 1 (um)
ano.
Art. 13. Desde a produo at seu uso, a vacina anti-rbica dever ser mantida em
temperatura entre dois e oito graus centgrados.
Art. 14. Sempre que exigido pelo Servio Veterinrio Oficial, o estabelecimento
responsvel pela comercializao da vacina fica obrigado a comunicar a compra, a venda e o
estoque de vacina.
Art. 15. Sempre que necessrio, ser procedida a coleta, para anlise fiscal, de vacinas
anti-rbicas, elaboradas no pas ou importadas, onde quer que se encontrem, visando
avaliao da sua eficcia.
CAPTULO V
DO CONTROLE DE TRANSMISSORES
55
Art. 16. As equipes que atuam em focos de raiva devero realizar inquritos para
determinao de outras espcies que no a dos morcegos, que possam atuar como
transmissores.
Art. 17. O mtodo escolhido para controle de transmissores depender da espcie
animal, da topografia da regio e das possveis restries legais.
Art. 18. At que sejam realizados estudos a respeito de outros produtos, o mtodo para
o controle de morcegos hematfagos basear-se- na utilizao de substncias anticoagulantes.
Art. 19. A aplicao de substncias anti-coagulantes em morcegos hematfagos dever
ser realizada sob a superviso de mdico veterinrio.
Art. 20. A aplicao de substncias anti-coagulantes, ao redor das leses recentes
provocadas por morcegos hematfagos em herbvoros, dever ser feita pelo produtor, sob
orientao de mdico veterinrio.
Art. 21. As substncias anti-coagulantes e as redes de nylon empregados no controle
de morcegos hematfagos constituem materiais de uso exclusivo do programa.
Art. 22. Em refgios, recomenda-se a utilizao de outros mtodos de controle de
morcegos hematfagos, desde que os locais sejam de fcil acesso e apresentem condies
para os trabalhos, a critrio do mdico veterinrio.
Art. 23. Os refgios de morcegos hematfagos, notadamente os da espcie Desmodus
rotundus, notificados ao Servio Veterinrio Oficial, devero ser cadastrados e revisados
periodicamente, visando a manter o efetivo controle das populaes de morcegos neles
existentes.
Art. 24. Ocorrendo raiva em carnvoro silvestre, dever ser realizado levantamento
epidemiolgico, a fim de verificar a origem do caso e, se existir um surto atingindo uma ou
mais espcies, promover-se- o controle dessa populao, por meio de capturas sistemticas,
para determinar a atividade viral e a extenso do surto.
CAPTULO VI
DAS OUTRAS MEDIDAS DE VIGILNCIA EPIDEMIOLGICA
Art. 25. Na vigilncia epidemiolgica da doena, ser estabelecido um sistema de
informaes que compreender a notificao obrigatria de casos e informaes contnuas.
Art. 26. Ser efetuado um diagnstico permanente da situao epidemiolgica, bem
como a anlise dos fatores condicionantes, a magnitude, a distribuio e a propagao da
raiva.
Art. 27. Ser considerada rea de ocorrncia de raiva aquela onde a doena tenha sido
confirmada durante os 2 (dois) anos precedentes.
Art. 28. Ser considerada zona ou rea controlada aquela na qual o controle da raiva
tenha alcanado nveis satisfatrios, com os bovdeos e eqdeos devidamente vacinados e a
populao de transmissores reduzida.
Art. 29. Ser considerada rea de atuao imediata aquela na qual seja reconhecido
estado endmico de raiva, bem como a que requeira pronta interveno.
Art. 30. A realizao de vacinaes focais e perifocais compreender todas as
propriedades existentes na rea infectada, abrangendo um raio de at 12 (doze) km, devendo
ser procedida do mesmo modo com relao ao combate aos transmissores.
Art. 31. A vigilncia dos transmissores dever ser constantemente mantida por meio
da verificao do coeficiente de mordeduras e da dinmica de suas populaes.
CAPTULO VII
DA COLETA DE MATERIAL E DOS EXAMES DE LABORATRIO
56
Art. 32. A coleta de material de animais suspeitos de raiva ser orientada por mdico
veterinrio e efetuada por este ou por auxiliar que tenha recebido treinamento adequado e que
esteja devidamente imunizado.
Art. 33. Do animal suspeito de raiva devero ser coletadas amostras do sistema
nervoso central aps o bito, ou quando sacrificado na fase adiantada da doena (fase
paraltica).
Art. 34. Ao laboratrio devero ser remetidas amostras do sistema nervoso central do
animal suspeito, bem como 10% (dez por cento) dos morcegos hematfagos capturados.
Art. 35. Os exames dos materiais coletados sero processados por meio da tcnica de
imunofluorescncia direta e prova biolgica (inoculao em camundongos ou clulas), ou
outra tcnica que venha a ser recomendada pela Organizao Mundial da Sade, em
laboratrio oficial ou privado, credenciado pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento MAPA.
CAPTULO VIII
DA EDUCAO SANITRIA E DIVULGAO
Art. 36. Na educao sanitria e divulgao, devero ser utilizados todos os meios e
informaes disponveis, assim como representantes dos nveis polticos, eclesisticos e
educacionais, visando a atingir o maior nmero possvel de criadores e outros membros da
comunidade rural.
Art. 37. A organizao dos diferentes atores sociais da comunidade em Conselhos
Municipais ou Intermunicipais de Sanidade Animal, integrados a um Conselho Estadual de
Sanidade Animal, determina uma condio fundamental para a efetiva soluo do problema
raiva dos herbvoros domsticos.
CAPTULO IX
DISPOSIES GERAIS
Art. 38. O pessoal tcnico e auxiliar encarregado do controle da raiva dever receber
treinamento especializado contnuo nos setores de controle de vacina, epidemiologia,
estatstica, planejamento e administrao de campanhas sanitrias, diagnstico de laboratrio,
bioecolgia e controle de morcegos hematfagos, manejo de no-hematfagos e educao
sanitria.
Art. 39. As atividades de combate raiva tero carter nacional e as unidades da
federao devero estabelecer legislao especfica baseada nas presentes Normas.
Art. 40. Os laboratrios produtores de vacinas tero o prazo de 180 (cento e oitenta)
dias, aps a publicao da presente Instruo Normativa, para as adequaes necessrias ao
atendimento pleno da mesma.
Art. 41. Incorporar a vigilncia da encefalopatia espongiforme bovina, da paraplexia
enzotica dos ovinos (scrapie) e de outras doenas que apresentem sintomatologia nervosa de
carter progressivo, ao sistema de vigilncia da raiva dos herbvoros domsticos.
Art. 42. A Secretaria de Defesa Agropecuria - SDA, do Ministrio da Agricultura,
Pecuria e Abastecimento, baixar instrues complementares sobre a matria e resolver os
casos omissos.
57
Anexo 3 Instruo Normativa n 15, de 15 de fevereiro de 2002
MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO
SECRETARIA DE DEFESA AGROPECURIA
INSTRUO NORMATIVA SDA N. 15, de 15 de fevereiro de 2002
O SECRETARIO DE DEFESA AGROPECURIA DO MINISTRIO DA
AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere
o art. 83, inciso IV do Regimento Interno da Secretaria, aprovado pela Portaria Ministerial n.
574, de 8 de dezembro de 1998, a Instruo Normativa n 24, da Secretaria de Defesa
Agropecuria, de 07 de junho de 2001 e a necessidade da instituio de Normas de
Credenciamento de Laboratrios para o diagnstico de Encefalopatia Espongiforme
Transmissveis e o que consta do Processo n. 21000.000109/2002-97, resolve:
Art. 1 Aprovar as Normas de Credenciamento e Monitoramento de Laboratrios de
Diagnstico das Encefalopatias Espongiforme Transmissveis em ruminantes EET.
Art. 2 - O credenciamento a que se refere o artigo anterior estar limitado s
necessidades do Departamento de Defesa Animal no que se refere ao nmero e localizao
geogrfica.
Art. 3 - Esta Portaria entra em vigor na data de sua publicao.
LUIZ CARLOS DE OLIVEIRA
ANEXO
REQUISITOS DE QUALIDADE PARA O CREDENCIAMENTO E MONITORAMENTO DE
LABORATRIOS DE DIAGNSTICO DAS ENCEFALOPATIAS ESPONGIFORMES
TRANSMISSVEIS EM RUMINATES EET
1 - Objetivos
Estabelecer os requisitos de qualidade no diagnstico das encefalopatias espongiformes
transmissveis visando o credenciamento de laboratrios pelo Departamento de Defesa
Animal - DDA.
2 - Aplicao
2.1- A presente Norma aplica-se ao laboratrio que disponha de mdico veterinrio com
especializao em patologia veterinria.
2.2- O credenciamento a que se refere a presente Norma est vinculado diretamente ao
Mdico Veterinrio patologista, que ser nomeado responsvel tcnico pelo diagnstico de
EET, mediante avaliao pelo DDA.
3 - Definies
3.1- Para efeito da presente Norma define-se:
58
3.1.1- ENCFALO: a parte do sistema nervoso central, exceto a medula espinhal, incluindo
mielencfalo, metencfalo, mesencfalo, diencfalo e telencfalo.
3.1.2- TRONCO ENCEFLICO: a parte compreendida pelo mielencfalo (bulbo) e
metencfalo (com exceo do cerebelo) e diencfalo. o que resta do encfalo quando se
exclui o telencfalo e o cerebelo.
4 - Amostras
4.1- Amostra a ser colhida: material enceflico devidamente coletado, conforme est
estabelecido no manual de procedimentos especfico, aprovado pelo DDA.
4.2- Amostra a ser testada: fragmentos do encfalo juntamente com a rede admirvel
carotdea, o gnglio do nervo trigmeo e a hipfise devero ser fixados em formol a 10% e
processados conforme descrito no ANEXO I.
5 - Recebimento das Amostras
5.1- As amostras devero estar acompanhadas de Formulrio de Requisio, conforme
modelo estabelecido no ANEXO II.
5.2 - No devero ser recebidas amostras congeladas para exame histolgico.
5.3- As amostras sero registradas em livro prprio contendo as seguintes informaes: n do
protocolo; remetente e endereo; responsvel pelo recebimento; proprietrio e endereo;
espcie; sexo; idade; raa; data de encaminhamento; data de entrada; data de sada e resultado,
conforme modelo indicado no ANEXO III.
6 - Conservao e Estocagem
6.1- A amostra a ser analisada dever ser conservada em formol a 10%, at a montagem dos
blocos de parafina e a confeco das lminas.
6.2- Os blocos de parafina e as preparaes histolgicas devero ser arquivados por pelo
menos sete anos.
7- Segurana biolgica
7.1- Devero ser respeitadas as normas de segurana biolgica em todos os procedimentos
realizados com o material do exame.
7.2- As amostras quando descartadas devero ser incineradas.
8 - Mtodos de Diagnstico
8.1- O exame histolgico um dos indicados para o diagnstico da encefalopatias
espongiformes transmissveis, conforme descrito no ANEXO I.
8.2- O DDA baixar os requisitos necessrios ao credenciamento de laboratrios de
diagnstico de EETs, atravs de outras metodologias analticas, conforme a necessidade.
8.3- Qualquer alterao na metodologia analtica dever ser previamente aprovada pelo DDA.
8.4- Quando houver um caso suspeito, a amostra dever ser encaminhada ao Laboratrio de
Referncia das EET para anlise.
9 - Resultados e Relatrios
9.1- O resultados dos exames devero ser emitidos em formulrios prprios, conforme
modelo proposto pelo DDA e de acordo com o seguinte fluxograma:
9.1.1- Resultado NEGATIVO: Ser encaminhado ao rgo requisitante e ao DDA;
9.1.2- O Resultado SUSPEITO ou DUVIDOSO deve ser imediata e obrigatoriamente
comunicado ao DDA e ao Laboratrio de Referncia para o diagnstico das EET no Brasil;
9.1.3- Todo laboratrio credenciado dever encaminhar ao DDA, at o dcimo dia til do ms
subseqente, relatrio das atividades mensais, em formulrios prprios.
59
10 - Do Laboratrio
10.1- O laboratrio deve possuir instalaes e equipamentos aprovados para a realizao do
exame histolgico.
10.1.1- Protocolo: sala destinada ao recebimento das amostras, registro, expedio dos
resultados e arquivo dos mesmos.
10.1.2- Sala de Exame: Local onde as amostras sero processadas. Dever estar provido de
bancada impermevel e resistente desinfeco, fontes de eletricidade suficientes e
adequadas ao perfeito funcionamento dos equipamentos, fonte de gs quando necessria, e
paredes com superfcie lavvel.
10.1.3- Esterilizao e lavagem: Dever estar provido de fontes de eletricidade, tanques ou
pias que permitam a esterilizao e a lavagem de todo material utilizado na realizao da
anlise.
10.2- As instalaes devem atender s normas de segurana biolgica.
10.3- O laboratrio deve possuir instalaes, equipamentos e fluxos operacionais, aprovados
para realizao de exame histolgico.
10.4- O laboratrio deve designar um responsvel tcnico, com experincia especfica
comprovada, que realizar os exames.
10.5- Os laudos laboratoriais e o relatrio mensal, devero ser obrigatoriamente, assinados
pelo responsvel tcnico ou seu substituto.
11 - Do responsvel tcnico e substituto
Para efeito de credenciamento e monitoramento, o responsvel tcnico e seu eventual
substituto, sero submetidos a auditorias tcnicas com acompanhamento do ensaio no prprio
laboratrio, realizadas por auditores designados pelo DDA.
ANEXO I
PROCESSAMENTO HISTOLGICO PARA DIAGNSTICO DAS ENCEFALOPATIAS
ESPONGIFORMES TRANSMISSVEIS EET
PROGRAMAO DE PROCESSAMENTO DO MATERIAL
O material aps clivado dever ser processado rotineiramente para exame histolgico.
Isso poder ser feito em processador de tecidos automtico (histotcnico) regulado conforme
as convenincias do laboratrio, mas obedecendo, em geral, os tempos abaixo discriminados.
Esse processamento poder ser feito manualmente.
CUBAS
Copo becker 1 (formol)
Copo becker 2
Copo becker 3
Copo becker 4
Copo becker 5
Copo becker 6
Copo becker 7
Copo becker 8
Estufa 1
Estufa 2
REAGENTES
lcool 95%
lcool 95%
lcool 95%
lcool absoluto
lcool absoluto
Xilol
Xilol
Xilol
Parafina
Parafina
TEMPO DE IMERSO
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:30 horas
1:30 horas
60
1- Xilol ....................... 5 minutos
2- Xilol ....................... 5 minutos
3- lcool absoluto ...... 2 minutos
4- lcool 95% ............ 2 minutos
5- lcool 80% ............ 2 minutos
6- lcool 70% ............ 1 minuto
7- gua corrente ......... lavar
8- Hematoxilina .......... 20-40 segundos
9- gua corrente ......... lavar
10- gua de amnia .... imergir at azular
11- gua corrente ........ lavar
12- Eosina ................... 1-2 minutos
13- lcool 70% ........... rapidamente
14- lcool 80% ........... rapidamente
15- lcool 90% ........... rapidamente
16- lcool absoluto .... 5 minutos
17- lcool absoluto .... 5 minutos
18- Xilol ...................... 5 minutos
19- Xilol ...................... 5 minutos
20-Montar as lminas utilizando blsamo do Canad (ou Entelan) para fixar a lamnula.
61
ANEXO II
Formulrio de requisio de exames
Material n: Laboratrio / n do protocolo / ano Municpio:_______________ UF:_________
Veterinrio Remetente:_______________________________CRMV-UF n: _____________
Endereo:_________________________________________ Telefone: ( )_______________
Email:____________________________________________ Fax: ( )___________________
Para preenchimento exclusivo quando for bovino importado ( IN n 08, de 13/02/2001)
Nome do animal: _____________________________ Nmero do animal: _______________
Com sintomatologia nervosa? Sim
No
Para indenizao? Sim
No
Proprietrio:_________________________________ Propriedade: _____________________
Endereo:____________________________________Municpio:______________UF:_____
Email: ___________________ Telefone: ( )________________ Fax: ( ) _________________
Espcie: Bovina ( ) Ovina ( ) Caprina ( ) Raa:_______________________ Idade: ___ meses
Havia outras espcies afetadas? Sim ( ) No ( ) Categoria afetada: Macho ( ) Fmea ( )
Nmero de animais: no rebanho (_____) doentes (_____) mortos (_____)
O animal morto j foi vacinado para: Raiva ( ) Clostridiose ( ) Outras ___________________
O animal consumia concentrado? Sim ( ) No ( )
Data do incio do surto/doena: __/__/____ Durao do surto/doena: ________________
Tipos de sinais clnicos apresentados:
Morte sbita ( )
Cegueira
()
Torneio
( ) Paralisia flcida dos
Depresso
()
Incoordenao ( )
Convulses ( ) membros posteriores ( )
Ataxia
()
Ttano
()
Dismetria
()
Com paralisia, mas Agressividade ( )
Tremores
( ) Paralisia flcida dos
ainda alerta
()
Opisttono
()
Nistagmo
( ) membros anteriores ( )
Durao dos sinais clnicos (desde o incio at a morte): ______________________horas
Havia animais que se recuperaram dos sinais clnicos? Sim ( ) No ( ) Que percentual? ____%
Dia e hora da morte: _____/_____/_____ s _________:__________
Tempo decorrido entre a morte e a coleta do material: ______________ horas
Tempo decorrido entre a morte e a fixao do material: _____________ horas minuto
Material conservado em: _______________________________________________________
Veterinrio responsvel pela coleta:______________________CRMV-UF n :____________
Endereo:__________________________________________ Telefone: ( ) ______________
Email:____________________________________________ Fax: ( ) ___________________
Observaes:
Local / Data:_______________________, _____/_____/______
62
ANEXO III
MODELO PARA LIVRO DE REGISTRO DE AMOSTRAS PARA O DIAGNSTICO DE EET EM RUMINANTES
Nprotocolo
Remetente/
Endereo
Responsvel
Proprietrio/
pelo recebimento
Endereo
Espcie Sexo
Idade
Raa
Data de
entrada
Data de
Data de
encaminhamento sada
Resultado
63
Anexo 4 Rede de laboratrios credenciados pelo MAPA para o diagnstico das
encefalopatias espongiformes transmissveis de ruminantes no Brasil
1. DEPARTAMENTO DE PATOLOGIA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA
MARIA UFSM
Resp.: Dr. Claudio Severo Lombardo de Barros
CEP.:97105-900- Santa Maria/RS
Fone: 55 (55) 3220.8168 Fax: 55 (55) 3220.8284
e-mail: claudioslbarros@uol.com.br
2. LABORATRIO DE PATOLOGIA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DO MATO
GROSSO DO SUL UFMS
Resp.: Dr. Eurpedes Batista Guimares
Av. Senador Felinto Muller, 2443 Caixa Postal 549 - CEP.: 79070-900 - Campo Grande/MS
Tel.: 55 (67) 345.3615 Fax: 55 (67) 345.3600
e-mail: ebg@nin.ufms.br
3. LABORATRIO DE PATOLOGIA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO
GRANDE DO SUL UFRGS
Resp.: Dr. David Driemeier
Av. Bento Gonalves, 9090 Caixa Postal 15094 - CEP.: 91540-000 - Porto Alegre/RS
Telefone: 55 (51) 3316.6107 Fax: 55 (51) 3316.7305
e-mail: davetpat@ufrgs.br
4. LABORATRIO NACIONAL AGROPECURIO LANAGRO/ RECIFE- PE
Resp.: Dra. Ana Karina Cunha Callado
Rua Manoel de Medeiros, s/n - Dois Irmos
CEP: 52171-030 Recife/PE
Tel.: 55 (81) 3441-6311 e 3441-6024
e-mail: anakarina@agricultura.gov.br
5. LABORATRIO DO INSTITUTO MINEIRO DE AGROPECURIA - IMA/MG
Resp: Dr. Anilton Csar Vasconcelos
Avenida do Contorno n 1707 A Floresta - CEP 30110-070 - Belo Horizonte /MG
Tel.:55 (31) 3213-4263 , 3499-2887 Fax 55 (31) 3213-4263
e-mail: laboratorioanimalima@bhsol.com.br; anilton@icb.ufmg.br
6. LABORATRIO DE ANATOMIA PATOLGICA DO INSTITUTO BIOLGICO
DE SO PAULO SP
Resp.: Dra Claudia del Fava
Avenida Conselheiro Rodrigues Alves n 1252, Vila Mariana - CEP 04014-002-So Paulo/SP
Tel: 55 (11) 5087 1779 Fax 55 (11) 5087-1779
e-mail: lara@biologico.sp.gov.br
64
Anexo 5 Instruo Normativa n 18, de 27 de fevereiro de 2004
ANEXO
REQUISITOS DE QUALIDADE PARA O CREDENCIAMENTO E MONITORAMENTO DE
LABORATRIOS DE DIAGNSTICO DAS ENCEFALOPATIAS ESPONGIFORMES
TRANSMISSVEIS (EET) EM RUMINANTES, PELA TCNICA DE IMUNOHISTOQUMICA (IHQ)
1. Objetivo
Estabelecer os requisitos de qualidade no diagnstico das EET, pela IHQ, visando o
credenciamento de laboratrios pelo MAPA.
2. Aplicao
2.1. A presente Norma aplica-se ao laboratrio que disponha de Responsvel Tcnico (RT)
Mdico Veterinrio com experincia comprovada em patologia veterinria e domine a tcnica
de IHQ.
65
3. Definies
3.1. BULBO: poro do tronco enceflico que inicia aproximadamente na altura da
insero do primeiro par de nervos cervicais e se estende rostralmente at o bordo caudal da
ponte
3.2. BEX: marcao anatmica no tronco enceflico que consiste na juno das tnias do
IV ventrculo no ngulo posterior
3.3. CEREBELO: poro do metencfalo localizada caudalmente aos lobos occipitais do
telencfalo e sobre a ponte e o bulbo (medula oblonga), formando a maior parte do teto do
quarto ventrculo
3.4. RGOS LINFIDES: locais de produo de clulas linfides, como timo, bao e
linfonodos e, agregados linfides: tonsilas, placas de Peyer e 3 plpebra.
4. Amostras
4.1. A amostra de eleio a ser testada constituda por fragmento de tecido devidamente
fixado em formol a 10% e est discriminada conforme a espcie:
4.1.1. Bovinos - bulbo na altura do bex
4.1.2. Ovinos e Caprinos - bulbo na altura do bex, cerebelo e rgos linfides
5. Recebimento das Amostras
5.1. As amostras devero estar acompanhadas de Formulrio de Requisio de Exame,
devidamente preenchido, conforme modelo estabelecido no ANEXO III.
5.2. As amostras sero registradas em livro prprio conforme modelo estabelecido no
ANEXO IV.
6. Conservao e Estocagem
6.1. A amostra a ser analisada dever ser conservada em formol a 10%, at a incluso em
blocos de parafina e a confeco das lminas.
6.2. Os blocos de parafina e as preparaes histolgicas devero ser arquivados por, pelo
menos, sete anos.
7. Segurana biolgica
7.1. O laboratrio dever seguir os procedimentos de biossegurana preconizados para
doenas prinicas.
7.2. Na ocorrncia de amostra positiva devero ser adotados os seguintes procedimentos:
7.2.1. O material utilizado para o diagnstico, no dia, dever ser submetido a um
processo de desinfeco com Hidrxido de Sdio a 2N por 2 horas e, aps bem enxaguado,
autoclavado a 134 C, por 1 hora.
7.2.2. O material a ser descartado dever ser duplamente embalado em sacos
adequados para lixos infecciosos e incinerado posteriormente.
8. Mtodo de Diagnstico
8.1. A tcnica de IHQ, descrita no ANEXO I, um dos mtodos indicados para o
diagnstico das EET
8.2. Procedimentos no manejo de reativos utilizados na tcnica de IHQ so descritos no
ANEXO II
8.3. Qualquer alterao na metodologia analtica dever ser previamente aprovada pelo
MAPA
9. Resultados e Relatrios
66
9.1. O resultado dos exames dever ser emitido em formulrio prprio conforme modelo
proposto pelo MAPA no anexo V, em duas vias, uma para arquivo do laboratrio e outra para
o rgo requisitante, de acordo com o seguinte fluxo:
9.1.1. Resultado NEGATIVO: Ser encaminhado ao rgo requisitante e ao setor
competente do MAPA;
9.1.2. Resultado SUSPEITO ou DUVIDOSO: deve ser imediata e obrigatoriamente
comunicado ao setor competente do MAPA e ao Laboratrio de Referncia para o diagnstico
das EET no Brasil;
9.1.3. Todo laboratrio credenciado dever encaminhar ao setor competente do
MAPA, at o dcimo dia til do ms subseqente, relatrio das atividades mensais, por
sistema especfico.
10. Do Laboratrio
10.1. O laboratrio deve possuir instalaes e equipamentos adequados para a realizao
do exame de IHQ
10.2. As instalaes devero obedecer a um fluxo operacional coerente com a tcnica
desenvolvida.
11. Instalaes e equipamentos
11.1. Instalaes
11.1.1. Protocolo: ambiente destinado ao recebimento das amostras, registro,
expedio dos resultados e arquivo dos mesmos.
11.1.2. Exame: ambiente onde as amostras sero processadas. Dever estar provido
de bancada impermevel e resistente desinfeco, fontes de eletricidade suficientes e
adequadas ao perfeito funcionamento dos equipamentos e paredes com superfcie lavvel.
11.1.3. Esterilizao e lavagem: dever estar provido de fontes de eletricidade,
tanques ou pias que permitam a esterilizao e a lavagem de todo material utilizado na
realizao da anlise.
11.2. Equipamentos
11.2.1. Arquivo
11.2.2. Microcomputador
11.2.3. Caixas para arquivo das lminas e blocos de tecidos
11.2.4. Micrtomo
11.2.5. Processador automtico de tecidos (opcional)
11.2.6. Autoinclusor de parafina (opcional)
11.2.7. Banho Maria histolgico
11.2.8. Refrigerador/ freezer -20C (vinte graus Celsius negativos)
11.2.9. Capela de fluxo contnuo
11.2.10. Capela de fluxo laminar
11.2.11. Estufa
11.2.12. Agitador de tubos (opcional)
11.2.13. Pipetas monocanais de 1-10 l, 10-100 l e 200-1000 l, ou similares
11.2.14. Vidraria de laboratrio
11.2.15. Armrio para estoque dos reagentes e solues
11.2.16. Microscpio ptico
11.2.17. Medidor de pH
11.2.18. Balana analtica
11.2.19. Autoclave
11.2.20. Destilador
11.2.21. Deionizador (opcional)
67
12. Do responsvel tcnico titular e substituto
12.1. O RT titular e seu eventual substituto, designado(s) pelo laboratrio, dever(o) ser
submetido(s) a treinamento, no laboratrio de referncia, na tcnica utilizada.
12.2. Aps o treinamento, e para efeito de credenciamento ou monitoramento, o RT titular
e seu eventual substituto, ser(o) submetido(s) a auditorias tcnicas com acompanhamento
do ensaio no prprio laboratrio, realizadas por auditores designados pelo MAPA.
12.3. Os laudos laboratoriais e o relatrio mensal devero ser, obrigatoriamente, assinados
pelo responsvel tcnico titular ou seu substituto.
ANEXO I
PROTOCOLO PARA O DIAGNSTICO DAS EET EM RUMINANTES PELA
TCNICA DE IHQ
1. Fixao e Descontaminao do material
1.1. Os tecidos frescos devem ser fixados em formalina a 10%, preferencialmente tamponada.
O crebro e linfonodos inteiros necessitam de, pelo menos, 3 a 5 dias de fixao antes de
serem clivados. Bipsias de linfonodos requerem, pelo menos, 2 dias de fixao. Fragmentos
de tecidos que tenham espessura em torno de 7 milmetros podem ser fixados em 1 dia.
1.2. Aps o tempo necessrio fixao, os tecidos so clivados em fragmentos de
aproximadamente 2 milmetros de espessura e colocados em cassetes para incluso.
1.3. Os tecidos so descontaminados em uma soluo de cido frmico a 95-98% por 1 hora,
em uma cabine de fluxo contnuo. Os cassetes devem estar totalmente imersos na soluo.
1.4. Enxaguar rapidamente os tecidos por 3 vezes em 10 volumes de gua e, em seguida,
submet-los a lavagem contnua em gua corrente at a total eliminao do odor do cido.
1.5. Enxaguar em gua bidestilada ou deionizada por 10 minutos.
1.6. Colocar os cassetes em soluo de formalina fresca tamponada a 10%, por 24 horas.
2. Processamento e incluso dos tecidos em parafina.
2.1. O material, depois de clivado, dever ser processado rotineiramente para exame
histolgico. Este poder ser feito em processador automtico de tecidos (histotcnico) ou
manualmente, regulado conforme as convenincias do laboratrio, mas obedecendo, em geral,
os tempos abaixo discriminados.
CUBAS
Copo becker 1 (formol)
Copo becker 2
Copo becker 3
Copo becker 4
Copo becker 5
Copo becker 6
Copo becker 7
Copo becker 8
Estufa 1
Estufa 2
REAGENTES
lcool 95%
lcool 95%
lcool 95%
lcool absoluto
lcool absoluto
Xilol
Xilol
Xilol
Parafina
Parafina
TEMPO DE IMERSO
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:30 horas
1:30 horas
2.2. Aps o processamento descrito acima feita a incluso do material em parafina a 5865C.
68
3. Preparao dos cortes histolgicos e lminas
3.1. A amostra a ser testada e os controles da prova, nos blocos de parafina, so cortados
em 4 a 6 micrmetros de espessura e colocados em lminas especiais com carga eltrica (tipo
Probe On Plus), seguindo as orientaes de uso do fabricante. Devem ser utilizadas 2 lminas
controle positivo e 2 lminas controle negativo.
3.1.1. Como controle positivo devem ser usados tecidos de animais comprovadamente
positivos para Scrapie, inativados com cido Frmico a 95-98% por 1 hora.
3.1.2. No caso de utilizar o sistema do tipo MicroProbe as lminas devem ser pareadas
de maneira que forme um espao capilar, com as partes pintadas fazendo contato, e colocadas
no suporte prprio para lminas (tipo Slide Holder.).
3.2. Para remoo da parafina as lminas podem ser colocadas na estufa a 65C por 20
minutos.
3.2.1. No caso de utilizar o sistema do tipo MicroProbe, aps este perodo, as lminas
so imersas em xilol, por 10 minutos a 65C, trocar o xilol e imergi-las por mais 3 minutos a
65C, realizar 3 enxages rpidos.
4. Reidratao dos tecidos
4.1. Lavar em xilol por 5 minutos
4.2. Lavar em xilol por 5 minutos
4.3. Lavar em lcool absoluto por 2 minutos
4.4. Lavar em lcool 95% por 2 minutos
4.5. Lavar em lcool 80% por 2 minutos
4.6. Lavar em lcool 70% por 1 minuto
5. Bloqueio da Peroxidase endgena
5.1. Enxaguar as lminas com uma soluo de gua oxigenada (H2O2) e metanol a 3% (1ml
de H2O2 a 30% em 30ml de metanol) preparada antes do uso.
5.2. Incubar por 10 minutos a 22-25C com a mesma soluo.
5.3. Enxaguar as lminas submergindo-as 4 vezes em gua deionizada ou bidestilada. Se
necessrio, as lminas podem ficar algumas horas submersas em gua.
6. Ativao do antgeno
6.1. Incubar os tecidos em uma soluo de cido frmico 95% por 5 minutos a 22-25C, em
um recipiente resistente ao cido.
6.2. Lavar cuidadosamente e neutralizar em tampo Tris-HCl, usando 3 enxges rpidos,
seguido de incubao por 1 minuto em tampo fresco. O pH do lavado final deve ficar entre 7
e 8.
6.2.1. Para o controle do pH, colocar as lminas sobre um papel medidor de pH e continuar
as lavagens at atingir o pH adequado.
6.3. Transferir o suporte com as lminas para um recipiente resistente ao calor, contendo
soluo tampo adequada.
6.4. Tampar o recipiente, envolv-lo em papel alumnio e autoclavar a 121C por 20
minutos. A contagem do tempo iniciada quando a temperatura atinge 121C.
6.5. Transferir as lminas para o tampo Tris com tween20 (TBST) por 10 minutos. Se
necessrio, as lminas podem ser mantidas em tampo por algumas horas.
7. Colorao Imunoistoqumica
7.1. Nesta etapa a temperatura ambiente (22-25C) deve ser mantida.
7.2. Agregar a soluo de proteinase K sobre o corte do tecido na lmina e incubar por 1
minuto. Enxaguar por 3 vezes, 20 segundos, em TBST.
69
7.2.1. No caso de utilizar o sistema do tipo MicroProbe agregar 150 microlitros de
soluo de proteinase K em um pocinho dosificador tipo Isolon e incubar por 1 minuto.
7.3. Enxaguar por 3 vezes, 20 segundos, em TBST.
7.4. Agregar o anticorpo monoclonal F99/97.6.1 diludo conforme recomendaes do
fabricante, em diluente de anticorpo e preparado no dia do uso, incubando por 10 minutos.
7.5. Enxaguar com TBST, 3 vezes por 20 segundos.
7.6. Agregar o complexo Biotina-IgG anti-camundongo e incubar por 10 minutos, a 2225C.
7.7. Enxaguar com TBST, 3 vezes por 20 segundos.
7.8. Agregar a Peroxidase-Estreptavidina ou Peroxidase-Avidina e incubar por 10 minutos a
22-25C.
7.9. Enxaguar com TBST, 3 vezes por 20 segundos.
7.10. Agregar substrato DAB cromgeno e incubar por 4 a 5 minutos.
7.11. Enxaguar com gua destilada, 2 vezes por 20 segundos.
7.12. Contracorar com hematoxilina
7.13. Enxaguar com gua corrente, 3 vezes por 20 segundos.
7.14. Deixar em gua corrente por 2-5 minutos at atingir a colorao azulada.
7.14.1. Este processo pode ser substitudo submergindo as lminas 5 vezes em banho
contendo uma soluo de hidrxido de amnio ou Scotts Water Substitute.
7.15. Enxaguar com gua corrente, 2 vezes por 20 segundos.
7.16. Deixar as lminas na gua at comear a montagem com lamnula.
8. Desidratao dos tecidos
8.1. Lavar em lcool 70% por 2 minutos
8.2. Lavar em lcool 80% por 2 minutos
8.3. Lavar em lcool 95% por 2 minutos
8.4. Lavar em lcool absoluto por 2 minutos
8.5. Lavar em xilol por 5 minutos
8.6. Lavar em xilol por 5 minutos
9. Montar as lminas utilizando blsamo do Canad natural ou sinttico para fixar a lamnula.
10. Ler em microscpio ptico.
11. Registrar o resultado.
70
ANEXO II
MANEJO DOS REATIVOS
ANTICORPOS:
- A soluo Estoque de anticorpos, em uso, deve ser armazenada entre 2 e 7C.
- No so recomendados o congelamento e o descongelamento repetidos.
- Os anticorpos so diludos no dia do uso e mantidos sob refrigerao.
- O congelamento de anticorpos pr-diludos, especialmente quando esto combinados, no
recomendado.
SUBSTRATO CROMGENO DAB:
- Utilizar conforme recomendaes do fabricante.
- Deve ser mantido sob refrigerao at o seu uso.
- Se apresentar um precipitado deve ser bem agitado antes do uso.
TAMPO TRIS-HCl A 0.1 M
- Dissolver 12,1 gramas de Tris base em 800ml de gua bidestilada.
- Ajustar o pH para 7,6 com HCl concentrado e completar para 1 litro.
- Pode ser mantido em temperatura de 22-25C.
TAMPO TRIS COM TWEEN20 (TBST)
- Adicionar 6,06 gramas de Tris base e 17,5 gramas de Cloreto de Sdio (NaCl) em 800ml de
gua bidestilada.
- Ajustar o pH para 7,6 com cido Clordrico (HCl) concentrado e completar para 1 litro de
gua, homogeneizando bem.
- Adicionar 1ml de Tween20 e homogeneizar evitando formar espuma.
- Conservar em temperatura de 22-25C.
SOLUO DE HIDRXIDO DE AMNIA
- Adicionar 2,5ml de Hidrxido de amnia 14,8 N em 1 litro de gua bidestilada.
- Conservar em temperatura de 22-25C num frasco com tampa para evitar a evaporao.
SCOTTS WATER SUBSTITUTE
- Diluir 10 gramas de Sulfato de Magnsio em 1 litro de gua bidestilada.
- Conservar em temperatura de 22-25C.
71
ANEXO III
Modelo para Formulrio de requisio de exames
Material n: Laboratrio / n do protocolo / ano Municpio:_______________ UF:_________
Veterinrio Remetente:_______________________________CRMV-UF n: _____________
Endereo:_________________________________________ Telefone: ( )_______________
Email:____________________________________________ Fax: ( )___________________
Para preenchimento exclusivo quando for bovino importado ( IN n 08, de 13/02/2001)
Nome do animal: _____________________________ Nmero do animal: _______________
Com sintomatologia nervosa? Sim
No
Para indenizao? Sim
No
Proprietrio:_________________________________ Propriedade: _____________________
Endereo:____________________________________Municpio:______________UF:_____
Email: ___________________ Telefone: ( )________________ Fax: ( ) _________________
Espcie: Bovina ( ) Ovina ( ) Caprina ( ) Raa:_______________________ Idade: ___ meses
Havia outras espcies afetadas? Sim ( ) No ( ) Categoria afetada: Macho ( ) Fmea ( )
Nmero de animais: no rebanho (_____) doentes (_____) mortos (_____)
O animal morto j foi vacinado para: Raiva ( ) Clostridiose ( ) Outras ___________________
O animal consumia concentrado? Sim ( ) No ( )
Data do incio do surto/doena: __/__/____ Durao do surto/doena: ___________________
Tipos de sinais clnicos apresentados:
Morte sbita
()
Agressividade ( )
Paralisia flcida dos posteriores
()
Depresso
( ) Opisttono ( )
Paralisia flcida dos anteriores
()
Ataxia
( ) Torneio
()
Paralisia facial
()
Com paralisia, mas alerta ( ) Convulses ( )
Paralisia da lngua
()
Cegueira
()
Dismetria
()
Ranger de dentes
()
Incoordenao
( ) Tremores
()
Tetania
( ) Nistagmo
()
Durao dos sinais clnicos (desde o incio at a morte): ______________________horas
Havia animais que se recuperaram dos sinais clnicos? Sim ( ) No ( ) Que percentual? ____%
Dia e hora da morte: _____/_____/_____ s _________:__________
Tempo decorrido entre a morte e a coleta do material: ______________ horas
Tempo decorrido entre a morte e a fixao do material: _____________ horas minuto
Material conservado em: _______________________________________________________
Veterinrio responsvel pela coleta:______________________CRMV-UF n :____________
Endereo:__________________________________________ Telefone: ( ) ______________
Email:____________________________________________ Fax: ( ) ___________________
Observaes:
Local / Data:_______________________, _____/_____/______
72
ANEXO IV
MODELO PARA LIVRO DE REGISTRO DE AMOSTRAS PARA O DIAGNSTICO DE EET EM RUMINANTES
N
no IHQ
N no
DXSNC
N
protocolo
Remetente
Endereo
Responsvel
pelo
recebimento
Proprietrio
Endereo
N do
animal
Espcie
Sexo
Idade
Raa
Data de
entrada
Data de
encaminha
mento
Data
de
sada
Resultado
73
ANEXO V
Identificao do laboratrio:
Protocolo remetente:
Categoria de exame:
Espcie:
Raa:
Sexo:
Proprietrio:
Data de entrada:
Idade:
Procedncia:
Data enc.:
Nmero de blocos:
Histrico:
Diagnstico:
Assinatura:
Responsvel Tcnico:
Data:
Data de Sada:
74
Anexo 6 Portaria N 69, de 17 de agosto de 2004
MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO
SECRETARIA DE DEFESA AGROPECURIA
DEPARTAMENTO DE DEFESA ANIMAL
PORTARIA N 69, DE 17 DE AGOSTO DE 2004
O DIRETOR DO DEPARTAMENTO DE DEFESA ANIMAL, DA SECRETARIA
DE DEFESA AGROPECURIA, DO MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E
ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 84, inciso VIII do Regimento
Interno da Secretaria, aprovado pela Portaria Ministerial n 574, de 8 de dezembro de 1998,
tendo em vista o disposto no Regulamento de Defesa Sanitria Animal, aprovado pelo
Decreto n 24.548, de 3 de julho de 1934, e a Portaria SDA n 14, de 15 de maro de 2002,
resolve:
Art. 1 Estabelecer a composio do Comit Cientfico Consultivo sobre
Encefalopatias Espongiformes Transmissveis - CEET, especificando a rea de atuao de
cada um dos membros constituintes:
I - Claudio Severo Lombardo Barros, profissional especializado do laboratrio de
referncia nacional para o diagnstico de EET, lotado no departamento de patologia
veterinria da Universidade Federal de Santa Maria, em Santa Maria - RS;
II - Amauri Alcindo Alfieri, profissional especializado em virologia e medicina
veterinria preventiva, lotado no departamento de medicina veterinria preventiva da
Universidade Estadual de Londrina, em Londrina - PR;
III - Antnio Carlos Alessi, profissional especializado em diagnstico de EET, lotado
no departamento de patologia veterinria da Universidade Estadual Paulista, em Jaboticabal SP;
IV - Cleber Oliveira Soares, profissional especializado em medicina veterinria
preventiva, lotado no centro nacional de pesquisa de gado de corte da Empresa Brasileira de
Pesquisa Agropecuria - EMBRAPA, em Campo Grande - MS;
V - Vicente Mateo Astudillo Calds, profissional especializado em epidemiologia,
lotado no Centro Panamericano de Febre Aftosa, no Rio de Janeiro - RJ;
VI - Edwiges Maristela Pituco, profissional especializada em virologia, lotada no
laboratrio de viroses de bovdeos do Instituto Biolgico de So Paulo, em So Paulo - SP;
VII - Vitor Salvador Pico Gonalves, profissional especializado em epidemiologia,
lotado no departamento de medicina veterinria preventiva da Universidade de Braslia, em
Braslia - DF;
Art. 2 Este Comit Cientfico Consultivo ser coordenado pelo Departamento de
Defesa Animal.
Art. 3 O Coordenador do CEET poder, se necessrio, solicitar pessoal tcnico dos
setores pblico ou privado para prestar-lhe assessoramento.
Art. 4 Esta Portaria entra em vigor na data de sua publicao, ficando revogada a
Instruo de Servio DDA n 07, de 06 de maro de 2003.
JORGE CAETANO JUNIOR
75
Anexo 7 Laboratrios de diagnstico de raiva (verso de 27 de outubro de 2006)
1) REGIO NORTE
AMAZONAS
INSTITUIO: Laboratrio Central de Sade Pblica (LACEN/AM)
DIRETOR: Tirza Peixoto Mattos
ENDEREO: Rua Emlio Moreira, 510 Centro - CEP: 69.020-040 - Manaus /AM
TELEFONE: (92) 3233-0595 FAX: (92) 2129-4000
TCNICO RESPONSVEL: Luiz Mario Fernandes
E-mail: lacenam@bol.com.br
ACRE
INSTITUIO: Laboratrio de Diagnstico da Raiva - Superintendncia Federal de Agricultura no
Acre SFA /AC - Convnio SFA / Secretaria de Estado da Sade / Secretaria Municipal de Sade /
UFAC/ IDAF-AC
ENDEREO: Rodovia AC 40, n 793 - CEP: 69.910-490 - Rio Branco/AC
TELEFONE: (68) 3212-1333/1335 FAX: (68) 3212- 1313/1318
TCNICO RESPONSVEL: Dra Selucia Wanderley da Nbrega
E-mail: mlira@mdnet.com.br
AMAP
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado do Par.
PAR
INSTITUIO: Lanagro/PA
DIRETOR: Dr. Francisco Airton Nogueira
ENDEREO: Av. Almirante Barroso, 1234 - Bairro do Marco Belm - CEP:66095-000 Belm/PA
TELEFONE: (91) 3226.4233 /4310 /8814 FAX: (91) 3236-2682
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Ofir de Sales Ramos
INSTITUIO: Instituto Evandro Chagas IEC/FUNASA
DIRETOR: Jorge Fernando Soares Travassos da Rosa
ENDEREO: Av Almirante Barroso 492 - CEP: 66090-000 - Belm/PA
TELEFONE: (91) 3226-7732/ 3211-4407 FAX: (91) 3226-1284
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Elizabeth Salb Travassos da Rosa
RONDNIA
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado do Par.
RORAIMA
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado do Par.
TOCANTINS
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado do Par.
76
2) REGIO NORDESTE
ALAGOAS
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado de Pernambuco.
BAHIA
INSTITUIO: Laboratrio Central de Sade Pblica - LACEN
DIRETORA: Ayda Maria da Silva Costa
ENDEREO: Rua Waldemar Falco, 123 Brotas - CEP: 40.295-001 Salvador/BA
TELEFONE: (71) 3356-1414 / 3356-2299 FAX: (71) 3356-0139
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Conceio Aparecida Nagata
E-mail: lacen.diretoria@bahia.ba.gov.br
CEAR
INSTITUIO: Unidade de Laboratrio Animal UNILAN Secretaria de Agricultura do Cear.
DIRETOR: Dra. Amalia Augusto
ENDEREO: Av. Jorge Dummar 1.703 Montese - Fortaleza /CE - CEP: 60410-300
TELEFONE: (85) 3494-7700 FAX: (85) 3494-8108
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Humberto Hugo Matos Chaves
INSTITUIO: Secretaria de Sade do Estado - Centro de Controle de Zoonose
DIRETOR: Jos Eldon Menezes Linhares
ENDEREO: Av Toms Osterne de Alencar s/n Bairro So Miguel - Crato/CE CEP: 63.122-020
TELEFONE: (88) 3521-2698
TCNICO RESPONSVEL: Jos Eldon Menezes Linhares
MARANHO
INSTITUIO: Universidade Estadual do Maranho UEMA
DIRETOR: Jos Gomes Pereira
ENDEREO: Cidade Universitria Paulo VI, Tirirical So Lus/MA
TELEFONE: (98) 3245 2688, 3257 3676
FAX: 3276 9451
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Hamilton Pereira Santos
CEP: 65.057.630
PERNAMBUCO
INSTITUIO: Laboratrio de Apoio Animal - LAPA/RECIFE
DIRETORIA: Dra. Diana Sione Barbosa Pinheiro
ENDEREO: Rua Dom Manuel de Medeiros s/n - Bairro Dois Irmos Recife/PE -CEP: 52.171-030
TELEFONE: (81) 3441- 6024/6311 RAMAL: 224 Fax (81) 3441-6477
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Jos Lindembergue M. Machado
E-mail: rai-lanagro-pe@agricultura.gov.br
PIAU
INSTITUIO: Laboratrio de Patologia Animal LAPAN - Secretaria de Desenvolvimento Rural
DIRETOR: Jos Antonio Filho
ENDEREO: Av. Joo Cabral, s/n - Granja do Piraj - CEP: 64000-000 - Teresina?PI
TELEFONE:(86) 3226-2150, ramal 244
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Rosangela Cavalcante de Carvalho
77
INSTITUIO: Laboratrio de Controle de Zoonose - SMS
DIRETORIA: Lina Vera de Oliveira Arago
ENDEREO: Rua Minas Gerais 909 Matadouro - CEP: 64003-850 - Teresina/PI
TELEFONE: (86) 3213-2006 441- 6024/6311 RAMAL: 224 Fax (81) 3441-6477
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Jos Lindembergue M. Machado
SERGIPE
INSTITUIO: HEMOLACEN
DIRETOR: Edvar Freire Caetano
ENDEREO: Rua Campo de Brito, 551 Bairro So Jos Aracaju/SE
TELEFONE: (79) 3234 6016/12 FAX: (79) 3214 1863
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Lauro Abud Mdico
RIO GRANDE DO NORTE
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado do Cear ou Pernambuco.
PARABA
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado do Cear ou Pernambuco.
3) REGIO CENTRO-OESTE
DISTRITO FEDERAL
INSTITUIO: Gerncia de Controle de Reservatrios e Zoonoses
ENDEREO: SAIN, rea Especial, LOTE 4 Braslia/DF
TELEFONE: (61) 3326-4023/ 3344-0784/ 3341-2084
TCNICO RESPONSVEL: Pricles Nonimitisu Teixeira Massunaga
GOIS
INSTITUIO: Laboratrio de Anlise e Diagnstico Veterinrio LABVET - Agncia Goiana de
Defesa Agropecuria Pecuria - AGRODEFESA
DIRETOR: Marli Francisca Cndida Santos
ENDEREO: Rodovia R2 s/n Saida para Nova Veneza Campus II - Goinia/GO
CEP: 74001-970 Caixa Postal: 963
TELEFONE: (62) 3205.1254
FAX: (62) 3205.1254
TCNICO(S): Dra. Rosely Mendes de Resende
Dra. Marlia da Silva Aguiar
MATO GROSSO
INSTITUIO: Laboratrio de Apoio Sade Animal - LASA/INDEA/MT
DIRETOR: Dra. Rosane Marini Melo
ENDEREO: Avenida Jurumurim s/n Bairro Carumb - CEP: 78.005-970 - Cuiab/MT
TELEFONE/FAX: (65) 3653-1711
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Giovana Campos de Almeida - CRMV-MT 2195
MATO GROSSO DO SUL
INSTITUIO: Agncia Estadual de Defesa Sanitria Animal e Vegetal de MS - IAGRO
DIRETOR: Dr. Joo Crisostomo Mauad Cavallero
78
ENDEREO: Avenida Senador Filinto Mller, 1146 - Bairro Universitrio - CEP: 79.074-902
Campo Grande/MS
TELEFONE: (67) 3346.2788 FAX: 3346.2898
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Veronique Micheline Claude Louvet Cortada
4) REGIO SUDESTE
ESPRITO SANTO
INSTITUIO: Instituto de Defesa Agropecuria e Florestal do Esprito Santo IDAF - Instituto
Biolgico do Estado do Esprito Santo - IBEES
DIRETOR: Paulo Sgio de Azevedo
ENDEREO: Fazenda Santana - Vila Osis, Santana Cariacica/ES - CEP: 29153-520
TELEFONE / FAX: (27) 3336.4538 -3286.2649
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Luz Carlos Barbosa
MINAS GERAIS
INSTITUIO: Laboratrio de Sade Animal - IMA/SEAPA/MG - Instituto Mineiro de
Agropecuria IMA Sec. de Agricultura, Pecuria e Abastecimento
DIRETOR: Dr. Altino Rodriges Neto
ENDEREO: Av. Raja Gabaglia, 245 - Cidade Jardim CEP: 30430-090 - Belo Horizonte/MG
TELEFONE: (31) 3213.8209 FAX: (31) 3213.4263
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Marilda Ferreira Martins
E-mail: laboratorioanimalima@bhsol.com.br
INSTITUIO: Laboratrio de Zoonose - SMS
DIRETOR: Eliane Golalves Paiva Lopes
ENDEREO: Rua Edna Quintel 173 Bairro So Bernardo - CEP: 31750-030
TELEFONE: (31) 3277-7410 / 3277-7411 (canil) FAX: (31) 3277-7368
TCNICO RESPONSVEL: Francisco Elias Nogueira da Gama
E-MAIL: paiva@pbh.gov.br - lazops@pbh.gov.br
RIO DE JANEIRO
INSTITUIO: PESAGRO
DIRETOR: Helena Magalhes
ENDEREO: Alameda So Boa Ventura,770 - Fonseca - Niteri/RJ - CEP: 24120-19
TELEFONE: (21) 3603-9651 FAX:2627-143
TCNICO RESPONSVEL: Cludio de Moraes Andrade
E-MAIL: lba@pesagro.gov.br
INSTITUIO: Laboratrio do Instituto Municipal de Medicina Veterinria "JORGE VAITSMAN"
DIRETOR: Tatiana Vieira Rezende
ENDEREO: Av. Bartolomeu de Gusmo, 1120- CEP: 20941-160
TELEFONE: (21) 2568-0189
TCNICO RESPONSVEL: Marlon Vicente da Silva
E-MAIL: marlonsilva@perj.rj.gov.br
SO PAULO
INSTITUIO: Instituto Biolgico de So Paulo - Secretaria de Agricultura e Abastecimento
DIRETOR: Dr. Silivio Marci Santos
79
ENDEREO: Av. Conselheiro Rodrigues Alves, 1252 - Vila Mariana CEP: 04014-002 So Paulo/SP
TELEFONE: (11) 5087-1779
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Elenice Maria Sequetin Cunha
E-mail: cunha@biologico.sp.gov.br
INSTITUIO: Laboratrio Regional de Presidente Prudente - APA
ENDEREO: Rodovia Raposo Tavares, Km 563 CEP: 19100-000 Presidente Prudente/SP
TELEFONE: (18) 3222-8688
TCNICO RESPONSVEL: Avelino Albas
E-mail: aalbas@bol.com.br
INSTITUIO: Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia - Universidade de So Paulo - USP
DIRETOR: Cssio Xavier de Mendona Jnior
ENDEREO: Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva, 87, Cid. Universitria No. 87 - CEP: 05508900, So Paulo/SP.
TELEFONE: (11) 3031-3074 (Secretaria direto, FMVZ-USP), (11) 3091-7653 Depto. VPS
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Fumio Honma Ito, Dr. Paulo Eduardo Brando, Rosana Paick
Utiama (Tcnica laboratrio), Antonio da Costa Neto (Encarregado biotrio)
INSTITUIO: Universidade de Medicina Veterinria - UNESP/Campus Araatuba
DIRETOR: Dr. Paulo Roberto Botacin
ENDEREO: Rua Clvis Pestana 793 J. Amlia - CEP: 16050-680 Araatuba/SP
TELEFONE: (18) 3636-3200 (R231)
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Luzia Helena de Queirz Silva
E-mail: lhqsilva@fmva.unesp.br
INSTITUIO: Universidade de Medicina Veterinria e Zootecnia - UNESP/Campus Botucatu
DIRETOR: Dr. Edson Ramos de Siqueira
ENDEREO: Distrito Rubio Jnior, s/n - CEP: 18618-000 - Botucatu/SP
TELEFONE: (14) 3811-6115
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Hlio Langoni
INSTITUIO: Instituto Pasteur de So Paulo
DIRETOR: Neide Yume Takaoka
ENDEREO: Av. Paulista 393 Paraso - CEP: 01311-000 - So Paulo/SP
TELEFONE: (11) 3288-0088 RAMAL: 126 FAX: (11) 3289-0831
5) REGIO SUL
PARAN
INSTITUIO: Centro de Diagnstico Marcos Enrietti - Secretaria de Estado da Agricultura e do
Abastecimento
DIRETOR: Dra. Ana Beatriz de Oliveira
ENDEREO: Rua Jaime Balo, 575 Juvev CEP: 80040-340 Curitiba/PR
TELEFONE: (41) 3352-2499 FAX: (41) 3352-2499
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Maria Aparecida de Carvalho
E-mail: seabcdme@pr.gov.br
INSTITUIO: Centro Laboratrio Central de Sade Pblica
DIRETOR: Ana Luiza Conter Borges
ENDEREO: Rua Ubaldino do Amaral, 545 Centro - CEP: 80060-190 Curitiba/PR
TELEFONE: (41) 3264-4111 FAX: (41) 3264-4448
TCNICO RESPONSVEL: Anaclete Fellini
80
E-mail: lacen@lepus.celepar.br
RIO GRANDE DO SUL
INSTITUIO: Universidade Federal de Pelotas - UFPEL
DIRETOR: Reitor Prof Antonio Csar Borges
ENDEREO: Campus Universitrio, Prdio 42, Municpio Capo Leo Centro de Zoonose
TELEFONE / FAX: (53) 3275-7424
TCNICO RESPONSVEL: Prof Alexandre da Rocha Gonalves
INSTITUIO: Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
DIRETOR: Reitor Prof Clovis da Silva Lima
ENDEREO: Campus Universitrio - Bairro Camobi - CEP: 97105-900 - Setor de Virologia - Prdio
20, sala 4200 - Santa Maria/RS
TELEFONE / FAX: (55) 3220-8034
TCNICO RESPONSVEL: Prof Rudi Weiblen
INSTITUIO: Centro de Pesquisas Veterinrias Desidrio Finamour - IPVDF
DIRETOR: Augusto Csar da Cunha
ENDEREO: Estrada Municipal do Conde, n 6000 Eldorado do Sul - CEP: 92990-000
TELEFONE: (51) 3481.3711
TCNICO RESPONSVEL: Prof Jlio Csar de Almeida Rosa
SANTA CATARINA
INSTITUIO: Laboratrio de Diagnostico Animal / Diviso Tcnica Avanada em Santa Catarina
LANAGRO/RS
DIRETOR: Dr. Eduardo Mazoni Gonzles
ENDEREO: Rua Joo Grumiche s/n - CEP: 88102-650 - So Jos/SC
TELEFONE: (48) 3247-0177 / 3247-0977 FAX: 3234-4332
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Jaime Salvatierra Oporto
E-mail: labsaojose@cidasc.sc.gov.br
81
Anexo 8 Instruo Normativa N 18, de 15 de dezembro de 2003
MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO
GABINETE DO MINISTRO
INSTRUO NORMATIVA N 18, DE 15 DE DEZEMBRO DE 2003
O MINISTRO DE ESTADO DA AGRICULTURA, PECURIA E
ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 87, Pargrafo nico, inciso
II, da Constituio, tendo em vista o disposto no Regulamento de Defesa Sanitria Animal,
aprovado pelo Decreto n. 24.548, de 3 de julho de 1934, e Considerando a no ocorrncia da
Encefalopatia Espongiforme Bovina - EEB no Brasil, condio que deve ser mantida e
preservada, em benefcio do patrimnio pecurio nacional, e o que consta do Processo n.
21000.010302/2003-17, resolve:
Art. 1 Proibir o abate de bovino e bubalino importados de pas onde houve ocorrncia
de caso autctone da EEB ou de pas considerado de risco para esta doena.
Art. 2 Proibir o comrcio e a transferncia para outro estabelecimento de criao, de
bovino e bubalino citados no artigo anterior, sem prvia autorizao do servio oficial de
defesa sanitria animal.
Art. 3 Ocorrendo a morte dos animais mencionados no art.1, somente podero ser
enterrados ou destrudos aps comunicao ao servio oficial de defesa sanitria animal e com
prvia autorizao deste, que realizar os procedimentos tcnicos recomendados nos anexos
desta Instruo Normativa.
Art. 4 Todo bovino e bubalino importados, cujo pas de origem tenha registrado a
ocorrncia de caso autctone da EEB ou seja considerado de risco, quando perder os atributos
que justificam a sua destinao, dever ser sacrificado e destrudo com acompanhamento do
servio oficial de defesa sanitria animal.
Art. 5 Caber indenizao, pelo Governo Federal, ao proprietrio de bovino ou
bubalino importados anteriormente publicao desta Instruo Normativa, sacrificado nos
termos do art. 4.
Pargrafo nico. Aps a publicao desta Instruo Normativa, no caber
indenizao, quando o pas de origem do bovino ou bubalino importados venha apresentar
caso autctone da EEB ou seja considerado de risco para essa doena.
Art. 6 Aprovar os Procedimentos Tcnicos a serem adotados, quando da instruo do
processo de sacrifcio ou sacrifcio e indenizao, de bovino ou bubalino importados de pas
considerado de risco para EEB, constantes do Anexo I desta Instruo Normativa.
Art. 7 Caber ao Departamento de Defesa Animal - DDA, da Secretaria de Defesa
Agropecuria - SDA, a implementao dos procedimentos aprovados por este Ato.
Art.8 O descumprimento total ou parcial desta Instruo Normativa sujeitar o
infrator s sanes previstas no Cdigo Penal Brasileiro.
Art. 9 Esta Instruo Normativa entra em vigor na data de sua publicao.
Art. 10 Ficam revogadas a Instruo Normativa n 08, de 13 de fevereiro de 2001, e a
Instruo de Servio DDA n 01, de 7 de janeiro de 2002.
ROBERTO RODRIGUES
82
ANEXO I
PROCEDIMENTOS TCNICOS PARA A INSTRUO DO PROCESSO DE SACRIFCIO E
INDENIZAO OU SACRIFCIO DE BOVINO OU BUBALINO IMPORTADOS DE PAS
DE RISCO PARA ENCEFALOPATIA ESPONGIFORME BOVINA EEB
83
ANEXO II
AO ILMO SR. ..............................................................................................................................
Eu,............................................................................, de nacionalidade ......................................,
estado civil .........................................., profisso. ......................................................................,
residente.......................................................................................................................................,
Municpio ..................................., UF..............., portador do CPF n.........................................
e do RG n.........................................................., venho respeitosamente solicitar a V. S. o
descarte de..............(n) bovino(s) ou bubalino(s) importado(s) de pases considerados de risco
para a Encefalopatia Espongiforme Bovina (EEB) pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento, discriminado(s) abaixo, de que sou proprietrio e que se o(s) mesmo(s)
encontra(m)-se na propriedade.....................................................................................................,
municpio...................................................................................., UF..........................................,
com base no art. 4 da Instruo Normativa n____, de ___ de _____________de 2003.
Cdigo de identificao Espcie Sexo Raa Pas de Origem
individual (SISBOV)
________________, ___ de ___________ de _____
____________________________________
Assinatura do proprietrio ou do seu representante legal
84
ANEXO III
AUTO DE AVALIAO E SACRIFCIO N____/ UF
(quando couber indenizao)
Aos ____dias do ms de __________ de ______ , a Comisso de Avaliao e Sacrifcio,
designada pela Portaria n________ , de _____ de __________ de _______ , do Delegado
Federal da Agricultura no Estado de _________________________, procedeu avaliao e
ao sacrifcio de ___________(n) bovdeo(s) importado(s) de pases considerados de risco
para a Encefalopatia Espongiforme Bovina (EEB) pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento, na forma do item II do anexo I da Instruo Normativa n _____________, de
________de ___________ de 2003, existente(s) na propriedade a seguir caracterizada:
LOCALIZAO E IDENTIFICAO DA PROPRIEDADE / PROPRIETRIO:
Nome da Propriedade:
Localizao:
Municpio: CEP: Unidade da Federao:
Cdigo da Propriedade no SISBOV:
Nome do Proprietrio:
CPF: Nacionalidade: Profisso:
Endereo do Proprietrio:
Municpio: UF: CEP:
ANIMAL(IS) A SER(EM) INDENIZADO(S):
Cdigo de Espcie Sexo Raa Pas de Origem
identificao
individual
(SISBOV)
Total de
Arrobas
TOTAL
GERAL
Nome / rgo
Nome / rgo
Nome / rgo
MEMBROS DA COMISSO
Assinatura:
Assinatura:
Assinatura:
Valor
Arroba
(R$)
Valor
Total
(R$)
85
ANEXO IV
DECLARAO DO PROPRIETRIO
___________________________________(proprietrio), _______________(nacionalidade),
________________________(estado
civil),______________(profisso),
________________(n do RG), ______________________________________(n do CPF) e
____________________________ (endereo), declara que est de pleno acordo com o Auto
de Avaliao n /_____(UF),de ___/___/__ referente a _________(n) animal(is) importado(s)
de pases considerados de risco para a Encefalopatia Espongiforme Bovina (EEB) pelo
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento, de sua propriedade, efetuado pela
Comisso de Avaliao, designada pela Portaria n _________ do Delegado Federal da
Agricultura no Estado de ______________________, cujo montante foi calculado em R$
_____________________________(____________________________________________).
_______________ , ____ de ___________ de _______
_______________________________________________
Assinatura do proprietrio ou representante legal
86
ANEXO V
AUTO DE SACRIFCIO
(quando no couber indenizao)
Aos _____ dias do ms de __________ de _______ , os abaixo firmados, em cumprimento ao
item III do Anexo I da Instruo Normativa n __________________, de __________ de
___________ de 2003, procederam ao sacrifcio e destruio do(s) animal (is) abaixo
especificado(s).
LOCALIZAO E IDENTIFICAO DA PROPRIEDADE / PROPRIETRIO:
Nome da Propriedade:
Localizao:
Municpio: CEP: Unidade da Federao:
Cdigo da Propriedade no SISBOV:
Nome do Proprietrio:
CPF: Nacionalidade: Profisso:
Endereo do Proprietrio:
Municpio: UF: CEP:
ESPCIE A SER SACRIFICADA: BOVINA / BUBALINA
Sexo
Cdigo
de
identificao
individual do animal (SISBOV)
Macho
Nmero de cabeas
Fmea
Total de animais
sacrificados
) _________________________________________
Assinatura:
Assinatura:
TESTEMUNHAS:
Nome/ RG
Nome/ RG
Assinatura:
Assinatura:
87
Anexo 9 Instruo Normativa N 8, de 25 de maro de 2004
MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO.
GABINETE DO MINISTRO
INSTRUO NORMATIVA N 8, DE 25 DE MARO DE 2004 (*)
O MINISTRO DE ESTADO DA AGRICULTURA, PECURIA E
ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 87, Pargrafo nico, inciso
II, da Constituio, tendo em vista o disposto no art. 71 do Regulamento do Servio de Defesa
Animal, aprovado pelo Decreto n 24.548, de 3 de julho de 1934, nos artigos 1 e 2 da Lei n
6.198, de 26 de dezembro de 1974, e o que consta do processo n 21000.008269/2003-65, e
considerando a epidemiologia da Encefalopatia Espongiforme Bovina - EEB e a necessidade
de manuteno da situao sanitria do Brasil em relao a essa doena, resolve:
Art. 1 Proibir em todo o territrio nacional a produo, a comercializao e a
utilizao de produtos destinados alimentao de ruminantes que contenham em sua
composio protenas e gorduras de origem animal.
Pargrafo nico. Incluem-se nesta proibio a cama de avirio, os resduos da criao
de sunos, como tambm qualquer produto que contenha protenas e gorduras de origem
animal.
Art. 2 Fica tambm proibida a produo, a comercializao e a utilizao de produtos
para uso veterinrio, destinados a ruminantes, que contenham em sua formulao insumos
oriundos de ruminantes.
Art. 3 Excluem-se da proibio de que tratam os artigos anteriores, o leite e os
produtos lcteos, a farinha de ossos calcinados (sem protena e gorduras), e a gelatina e o
colgeno preparados exclusivamente a partir de couros e peles.
Pargrafo nico. A critrio da Secretaria de Defesa Agropecuria, mediante anlise de
risco, podero ser excludos outros produtos e insumos.
Art. 4 Os rtulos e as etiquetas dos produtos destinados alimentao de no
ruminantes, que contenham qualquer fonte de protenas e gorduras de origem animal, exceto
os produtos mencionados no art. 3 desta Instruo, devero conter no painel principal e em
destaque, a seguinte expresso: USO PROIBIDO NA ALIMENTAO DE
RUMINANTES.
Art. 5 Os produtos destinados alimentao de ruminantes esto sujeitos a anlises de
fiscalizao para a identificao dos ingredientes utilizados como fonte de protena.
Art. 6 As Secretarias de Defesa Agropecuria e de Apoio Rural e Cooperativismo, em
suas respectivas reas de competncia, expediro instrues complementares para os casos
que requeiram posterior regulamentao ou para os casos omissos.
Art. 7 Esta Instruo Normativa entra em vigor na data de sua publicao.
ROBERTO RODRIGUES
(*) Republicada por haver sado com incorreo, do original, no DOU de 26 de maro de 2004, Seo 1, p 5.
88
Anexo 10 Instruo de servio N 002/2003/DOI/DIPOA
MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO
SECRETARIA DE DEFESA AGROPECURIA
DEPARTAMENTO DE INSPEO DE PRODUTOS DE ORIGEM ANIMAL DIPOA
DIVISO DE OPERAES INDUSTRIAIS - DOI
INSTRUO DE SERVIO N 002/2003/DOI/DIPOA
ASSUNTO: procedimentos e normas necessrios para operacionalizao do sistema de
vigilncia epidemiolgica para deteco de Encefalopatias Espongiformes Transmissveis
EET em ruminantes.
REFERNCIAS: Instruo Normativa SDA n 18, de 15 de fevereiro de 2002, Instruo de
Servio Conjunta DDA/DIPOA, julho de 2003, Inspeo de Carnes-Padronizao de
Tcnicas, Instalaes e Equipamentos e Manual de procedimentos para Diagnstico
Histolgico Diferencial da Encefalopatia Espongiforme dos Bovinos (BSE).
HARMONIZAO DE PROCEDIMENTOS: a ser observada pela Inspeo Federal junto
aos estabelecimentos que abatem animais das espcies bovinas, ovinas e caprinas, na coleta
do tronco enceflico.
1. POPULAO ALVO
Todos os animais, destinados a MATANA DE EMERGNCIA (MEDIATA e
IMEDIATA), das espcies bovina, bubalina, ovina e caprina.
2. NA INSPEO ANTE-MORTEM
2.1. Na chegada dos animais, identific-los a partir dos dados contidos no documento
de identificao animal DIA (animais a serem abatidos em estabelecimentos habilitados ao
mercado internacional) e na GTA (procedncia, propriedade, sexo, nmero de animais,
idade);
2.2. Todos os animais, que foram retidos no Curral de Observao, (aps o exame
geral e destinados a MATANA DE EMERGNCIA junto com os animais que chegam ao
estabelecimento em precrias condies fsicas ou de sade, impossibilitados de atingir a Sala
de Matana por seus prprios meios), devero ser objeto de coleta do tronco enceflico.
3. NA INSPEO POST-MORTEM
3.1. Transportar, para o Departamento de Inspeo Final D.I.F. (Art.152 RIISPOA),
todas as carcaas-cabeas, previamente identificadas, dos animais citados acima,
independente das peas marcadas nas linhas de inspeo de cabeas e de vsceras.
4. NO DEPARTAMENTO DE INSPEO FINAL D.I.F. (ART. 152 RIISPOA)
4.1. Identificar o conjunto carcaa-cabea;
4.2. Fixar na cabea um lacre numerado, independentemente das peas terem sido
marcadas nas linhas de inspeo de cabeas e de vsceras, anotando no mapa de condenao o
nmero da carcaa, do lacre e a identificao do animal.
4.3 Encaminhar para a Seo respectiva, as cabeas que no apresentarem leses, para
a retirada em local parte das carnes (desossa) e desarticulao da mandbula.
4.4 Encaminhar para a Seo de Cabea, as cabeas da populao alvo, que tenham
sido identificadas pelo DIF, para retirada do tronco enceflico.
89
5. SEO DE CABEAS
5.1. Separar as cabeas que estejam com identificao (lacre) em continentes
apropriados.
5.2. Efetuar a abertura da cabea para retirada do tronco enceflico conforme Manual
de procedimentos para diagnstico histolgico diferencial da encefalopatia espongiforme dos
bovinos (BSE).
5.3. Aps a separao do tronco enceflico do crebro, dever este ser conservado em
formol a 10%.
6. ENVIO E COLETA DOS MATERIAIS
6.1. Conforme Instruo Normativa SDA n 18, de 15 de fevereiro de 2002 Art. 2 os
Servios de Sanidade Animal das Delegacias Federais da Agricultura, devero providenciar o
envio dos materiais coletados nos frigorficos aos laboratrios credenciados pelo DDA.
6.2. As orientaes sobre a forma de coletar, conservao e acondicionamento das
amostras, como tambm os respectivos materiais necessrios (formol e frasco) sero
fornecidos pelos Mdicos Veterinrios lotados no SSA/DFA em cada estado.
Esta Instruo de Servio estar sujeita aos procedimentos habituais de Superviso e
Auditoria.
Braslia/DF, 12 de agosto de 2003.
De acordo
Rui Saldanha Vargas
90
Anexo 11 Formulrio de colheita e envio de materiais para o programa de vigilncia
das Encefalopatias Espongiformes Transmissveis em frigorficos
EXCLUSIVO PARA VIGILNCIA EM FRIGORFICOS
Frigorfico: __________________________________________ SIF:___________ Municpio:__________________________________
Veterinrio Remetente: ____________________________________________________CRMV-UF n: __________________________
Endereo: ________________________________________________________________Telefone: (
)________________________
Email: _______________________________________________________________________ Fax: (
)________________________
AMOSTRA n:controle/SIF/UF/ano
Proprietrio:_______________________________________________________________________ UF:____________
Propriedade:__________________________________________Municpio:____________________________________
Bovina
Ovina
Caprina
Espcie:
Sexo:
Macho
Fmea
Aptido leiteira
Categoria:
Raa:_____________________________ Idade:_____________meses
Corte (confinado)
Corte (semi-confinado)
AMOSTRA n: controle/SIF/UF/ano
Espcie:
Bovina
Ovina
Caprina
Fmea
Sexo:
Macho
Categoria:
Aptido leiteira
Raa:_____________________________ Idade:_____________meses
Corte (confinado)
Corte (semi-confinado
_________________________________________________
Assinatura e carimbo do Medico Veterinrio Responsvel
____
Data:_____/_____/_____
91
Anexo 12 Ficha de encaminhamento de encfalos no LPV-UFSM
Data: ____/____/____
Professor/Ps-Graduando_________________________________
Bulbo _______________________________________________________
Ponte________________________________________________________
Mesencfalo __________________________________________________
Cerebelo _____________________________________________________
Tlamo ______________________________________________________
Crtex frontal (1) _____________________________________________
Crtex parietal (2) ____________________________________________
Crtex occipital (3) ____________________________________________
Hipocampo __________________________________________________
Ncleos da base _______________________________________________
Gnglio de Gasser + rete mirabile ________________________________
Fragmento adicional (________________) _________________________
Diagnstico: ___________________________
Categoria: ____
92
Anexo 13 Modelo de laudo histopatolgico de material do programa DXSNC
DXSNC
0047/04
LAUDO HISTOPATOLGICO DE MATERIAL DO PROGRAMA DXSNC
Protocolo remetente
CAD -0034/04
Espcie
bovina
Categoria de exame:
4 (animal importado)
Raa:
Limousin
Proprietrio:
Jlio Loureno Golin
Data de entrada:
15.01.04
Sexo:
fmea
Idade:
11 anos
Procedncia:
Itapetininga, SP
Data Enc.:
22.01.04
Nmero de blocos:
3
Data de Sada:
16.02.04
Exame macroscpico
94
1. Introduo
A identificao de artefatos, de estruturas normais que se assemelham a leses, de
leses no associadas a sinais clnicos e de achados postmortem um aspecto importante
no diagnstico de doenas do sistema nervoso central (SNC) e permite a identificao
correta dos achados antemortem significativos. Essas alteraes so divididas em quatro
grupos: no-leses, leses de pouco significado clnico, alteraes postmortem e artefatos.
Em no-leses so includos aspectos morfolgicos macro e microscpicos normais do
SNC que podem ser interpretados como leses quando no so conhecidos do patologista.
Leses de pouco significado clnico incluem aquelas que no contribuem para o quadro
clnico do animal e so apenas achados de necropsia ou histolgicos incidentais.
Alteraes postmortem no so verdadeiras leses, pois ocorrem aps a morte em virtude
de autlise ou putrefao. Artefatos podem ser produzidos pela colheita e mtodo de
conservao do SNC ou associados causa da morte do animal.
Esta seo demonstra, atravs de figuras e texto resumido, as alteraes macro e
microscpicas descritas acima, bem como alteraes ligadas a doenas, observadas em
encfalos de bovinos encaminhados ao Laboratrio de Patologia Veterinria da
Universidade Federal de Santa Maria (LPV/UFSM) durante o perodo de 2001 a 2005,
como parte do Programa Nacional de Vigilncia da Raiva dos Herbvoros e outras
Encefalopatias (PNCRH) do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
(MAPA).
2. Exame macroscpico
2.1 Alteraes ligadas a doenas
Em qualquer rgo examinado macroscopicamente, devem ser analisados os
seguintes parmetros: distribuio, cor, forma, tamanho, consistncia e aspectos especiais,
como peso, presena de lquido e odor. Alguns desses aspectos so muito importantes no
exame macroscpico do SNC, porque muitas vezes definem o diagnstico.
Distribuio o arranjo espacial das leses. um parmetro usado macro e
microscopicamente. As leses podem ser focais, multifocais (e suas subdivises), difusas,
Exame macroscpico
95
Figura 1. Encfalo, superfcie de corte na altura do tlamo. Nestas figuras podem ser descritos trs aspectos:
distribuio (focal e multifocal a coalescente), cor (amarela) e consistncia (amolecida). Descrio: A. H
um abscesso no lado esquerdo do tlamo com aproximadamente 3 cm de dimetro. O complexo gnglio de
Gasser + rete mirabile carotdea + hipfise est aderido na base do encfalo. B. H trs abscessos
multifocais a coalescentes na regio ventral direita do tlamo. Comentrio: nos casos observados durante o
programa de vigilncia da BSE, esses abscessos foram comumente associados ao uso da tabuleta para
desmame em bezerros; ocorrem secundariamente leso da narina pela tabuleta e geralmente a hipfise e o
osso basisfenide esto afetados (Loretti et al. 2003). Em B a leso da cavidade nasal foi causada por miase
secundria a traumatismo em uma das narinas.
Figura 2. Encfalo. A.Vista dorsal. B. Superfcie de corte na altura dos ncleos basais. Nestas figuras
podem ser descritos dois aspectos: distribuio (difusa) e cor (vermelha). Descrio: A. Hiperemia difusa
das leptomeninges. B. Cor vermelho-cereja do crtex cerebral e dos ncleos basais. Comentrio: a
hiperemia dos vasos leptomenngeos ocorre em casos de leptomeningite, incluindo raiva (Rech et al. 2006a).
A cor vermelho-cereja em toda a substncia cinzenta do encfalo um achado patognomnico de babesiose
cerebral por Babesia bovis em bovinos (Rodrigues et al. 2005). As leses microscpicas dessas alteraes
esto ilustradas na Figura 58.
Exame macroscpico
96
Figura 3. Encfalo. Vista dorsal. Nestas figuras so descritos os seguintes aspectos: cor (vermelha),
distribuio (multifocal) e aspectos especiais como presena de lquido (hemorragia). Descrio: A. Abaixo
da dura-mter, a superfcie dorsal do telencfalo est parcialmente recoberta por cogulos de sangue. B.
Hemorragias multifocais so observados na superfcie dorsal do telencfalo e cerebelo e um cogulo de
sangue visto na superfcie dorsal da medula oblonga. Comentrio: hemorragias subdurais so geralmente
decorrentes de traumatismo. No primeiro caso a leso foi provocada porque o animal se debateu contra a
cerca. A hemorragia na cavidade craniana uma leso que ocupa espao. No segundo caso, a hemorragia foi
decorrente de sucessivas quedas devido intoxicao por Solanum fastigiatum, que causa leso nas clulas
de Purkinje e, conseqentemente, desequilbrio e quedas (Rech et al. 2006b). As leses microscpicas de
hemorragia traumtica esto ilustradas nas Figuras 38A e B. As leses microscpicas de intoxicao por S.
fastigiatum podem ser observadas nas Figuras 48 e 51.
Figura 4. Encfalo. Nestas figuras so descritas cor (vermelha) e consistncia (amolecida). Descrio: A.
Vista dorsal do crtex telenceflico. reas multifocais de malacia hemorrgica. B. Depresso do crtex
telenceflico e reas gelatinosas (malacia recente) no putmen. Comentrio: malacia o termo usado para
designar uma alterao macroscpica caracterizada por amolecimento do tecido nervoso. Essa leso
freqentemente observada em casos de meningoencefalite por herpesvrus bovino-5 (Rissi et al. 2006). A
leso microscpica de malacia pode ser observada na Figura 62.
Exame macroscpico
97
B
Figura 5. Cerebelo. Nestas figuras so descritas
distribuio (bilateral, simtrica e focal), forma e
aspectos especiais (presena de lquido, hipoplasia e
atrofia). Descrio: A. Simtrica e bilateralmente,
parte dos hemisfrios cerebelares esto hipoplsicos.
B. Na superfcie dorsal do hemisfrio cerebelar direito
h um cisto rompido de aproximadamente 2 cm de
dimetro que desloca o verme cerebelar para o lado
esquerdo da linha mdia. C. O cisto atrofiou parte do
tecido cerebelar. Comentrio: hipoplasia cerebelar
um defeito congnito que pode ser hereditrio ou
produzido por um agente ambiental. Em bovinos,
hipoplasia cerebelar relatada em infeces intrauterinas pelo vrus da diarria viral bovina.
Figura 6. Medula espinhal. Nestas figuras so descritos aspectos especiais (compresso). Descrio: A.
Vista lateral. Osteomielite das 9 e 10 vrtebras torcicas com compresso da medula espinhal adjacente. B.
Vista dorsal. Abscesso no assoalho do canal medular com compresso da medula espinhal adjacente.
Comentrio: abscessos vertebrais com conseqente compresso da medula espinhal so freqentemente
observados em bovinos jovens e so geralmente hematognicos e relacionados com onfaloflebite. A leso
microscpica decorrente da compresso pode ser observada na Figura 52.
Exame macroscpico
98
B
Figura 7. Encfalo. Melanose menngea. Descrio:
A. Vista dorsal do encfalo. reas pretas localizadas
na meninge das regies parietais e occipitais prximas
ao sulco. B. Vista ventral. A melanose se estende para
as reas lateroventrais do encfalo. C. Melanose
acentuada que se estende desde os lobos frontais at a
regio medial do crtex occipital. Comentrio: essa
no-leso observada macroscopicamente nas
leptomeninges. Microscopicamente, a melanose se
caracteriza pela distruibuio linear dos melancitos
nas leptomeninges (Figura 25).
Exame macroscpico
99
vezes pode ficar presente na superfcie ventral do encfalo e o tber cinrio, estrutura que
prende a hipfise ao encfalo.
Figura 8. Corpo pineal e tber cinrio. Descrio: A. Vista dorsal do encfalo para visualizao da epfise,
dorsal e cranial aos colculos rostrais do mesencfalo (os hemisfrios cerebrais foram parcialmente
separados). B. Vista ventral do encfalo para visualizao do tber cinrio (estrutura no centro da ilustrao).
Comentrio: o tber cinrio o nome dado estrutura que fixa a hipfise ao encfalo. O aspecto
microscpico da epfise pode ser observada na Figura 24.
Exame macroscpico
100
Em casos de morte por sangria, em que ocorre seco da traquia e dos vasos do
pescoo, o esforo da inspirao pode introduzir ar sob presso pelas cartidas (ou via
retrgrada pela jugular); o ar ento atinge os vasos do encfalo, distende os espaos
perivasculares e confere um aspecto de esponja, principalmente substncia cinzenta
(Figura 10). Quando se retira o encfalo da caixa craniana com o auxlio de um machado,
um artefato comumente observado a presena de bolhas de ar que so introduzidas nos
vasos das leptomeninges durante os golpes do machado e que pode ser interpretado
erroneamente como embolia gasosa (Figura 11). Alteraes postmortem incluem o
amolecimento do encfalo como um todo ou o desenvolvimento de orifcios causados pela
distenso do tecido nervoso pelos gases produzidos pelas bactrias da putrefao, o que d
o chamado aspecto de queijo suo ao encfalo (Figura 12).
Exame macroscpico
101
Figura 10. Encfalo fixado em formol. Superfcie de corte na altura do crtex parietal (A) e na altura dos
ncleos basais (B). Descrio: A e B. A substncia cinzenta tem aspecto finamente espongiforme.
Comentrio: essa leso formada por embolia gasosa. O aspecto microscpico desta alterao encontra-se
na Figura 39.
Figura 11. Encfalo na caixa craniana. Descrio: as leptomeninges apresentam mltiplas bolhas de ar.
Comentrio: as batidas do machado na cavidade craniana podem incorporar ar nos vasos das leptomeninges.
Esse artefato desaparece aps a fixao e no observado em sees histolgicas.
Figura 12. Encfalo fixado em formol. Descrio: A. Superfcie de corte na altura dos ncleos basais. B.
Superfcie de corte na altura do bulbo ao nvel do bex. Bolhas de putrefao multifocais aleatrias.
Comentrio: bolhas de putrefao so achados infreqentes nos encfalos autolisados de bovinos e na
maioria das vezes encontradas na regio ventral do encfalo, principalmente nos ncleos basais. O aspecto
microscpico desse achado postmortem visto na Figura 44C.
Exame microscpico
102
3. Exame Microscpico
O exame microscpico do SNC deve ser realizado de forma padronizada e
sistemtica e com conhecimento bsico da neuroanatomia. Para anlise representativa das
diversas reas do encfalo, recomenda-se a realizao de cortes transversais seriados em
intervalos de 0,5-1 cm que so assim examinados em ambas as faces. Para o exame
histolgico, os cortes foram sistematicamente processados conforme descrito na Figura 13.
B
Figura 13. Regies do encfalo a serem colhidas para o diagnstico das doenas do sistema nervoso central.
A. Hemisfrio cerebral mostrando o local dos cortes; 1, bulbo na altura do bex (BO); 2, cerebelo (CE); 3,
ponte com pednculos cerebelares (PO); 4, mesencfalo na altura dos colculos rostrais (ME); 5, crtex
occipital (CO); 6, diencfalo atravs da aderncia intertalmica - crtex parietal (CP), hipocampo (HC) e
tlamo (TA) e 7, lobo frontal na altura do joelho do corpo caloso e dos ncleos da base (NB) crtex frontal
(CF). B. Sees obtidas dos 7 locais mostrados em A.
Exame microscpico
103
Exame microscpico
104
d
e
f
Figura 14. Identificao submacroscpica dos principais segmentos do sistema nervoso central (SNC). HE.
Descrio: A. Medula espinhal. Observe o H medular (substncia cinzenta) e a fissura ventral mdia. B.
Bulbo na altura do bex. Observe a rea postrema (a) simtrica e bilateral. C. Ponte na altura dos pednculos
cerebelares. HE. D. Mesencfalo na altura dos colculos rostrais. A estrutura marcada com a letra b o
aqueduto mesenceflico. E. Tlamo. A estrutura marcada com a letra c o terceiro ventrculo. F. Cerebelo.
A camada rosa-clara externa a camada molecular. A camada basoflica interna das folhas a camada de
clulas granulares. Entre essas duas camadas situa-se a camada de clulas de Purkinje (no observada neste
aumento). Essas trs camadas formam a substncia cinzenta do cerebelo. A camada mais interna (rosaescura) a substncia branca. G. Hipocampo. As diferentes partes do hipocampo podem ser visualizadas na
Figura 15C. H. Crtex telenceflico. A substncia rosa-escura interna uma poro da substncia branca
subcortical denominada coroa radiada. I. Ncleos da base. Observe a cpsula interna (d), o ncleo caudado
(e) e o ventrculo lateral (f). Comentrio: especialmente em fragmentos do SNC sempre importante
observar macroscopicamente a lmina com o fragmento de encfalo ou medula espinhal antes de analis-lo
microscopicamente. Essa observao til na identificao de reas especficas do SNC e tambm na
localizao das leses. Geralmente as leses do SNC so identificadas atravs de alteraes nas propriedades
tintoriais.
Exame microscpico
105
Figura 15. Tamanho e disposio dos neurnios em diversos segmentos do sistema nervoso central (SNC).
Descrio: A. Neurnio do tronco enceflico. A estrutura marcada com o asterisco o cone de implantao
do axnio. HE. 100x. B. Neurnios do cerebelo. Os neurnios marcados em 1 e 2 so respectivamente
denominados neurnio de Purkinje e neurnio de Golgi. Neurnios da camada de clulas granulares so
clulas pequenas (cerca de 7 m de dimetro) e esto rodeando o neurnio de Golgi. HE. 40x. C. Aspecto
microscpico das camadas do hipocampo. O hipocampo uma estrutura laminar dividida em trs partes:
subiculum, corno de Ammon e giro denteado. Na figura esto representados: stratum pyramidale (1),
camada de clulas moleculares (2) e stratum radiatum (3). HE. 2x. D. Neurnios do tlamo (diencfalo). E.
Disposio laminar dos neurnios do crtex telenceflico. HE. 10x. F. Neurnios do crtex telenceflico.
HE. 100x. Comentrio: A. Neurnios da medula espinhal e tronco enceflico contm abundante pericrio e
grande ncleo com proeminente nuclolo. Observe a substncia de Nissl no citoplasma. Neurnios do tronco
enceflico so geralmente dispostos em ncleos (agrupamentos de neurnios em meio substncia branca
do SNC) (Figura 18C). Neurnios do tlamo e crtex telenceflico so menores e possuem o citoplasma
reduzido.
Exame microscpico
106
Figura 16. Clulas da glia. HE. Descrio: A. Oligodendrcitos satlites. Essas clulas ficam justapostas
aos neurnios. HE. 100x. Como tm o citoplasma claro contra o citoplasma do neurnio, muitas vezes do a
impresso errnea qu fagocitam um pedao do pericrio neuronal. B. Oligodendrcito interfascicular.
Oligodendrcitos so clulas pequenas, arredondadas, com citoplasma hipercromtico semelhantes a
linfcitos. HE. 40x. C. Astrcitos. Observe o ncleo grande vesicular, com indistinto nuclolo e inaparente
citoplasma de dois astrcitos localizados entre os oligodendrcitos interfasciculares. HE. 100x. D. Micrglia.
Observe o ncleo pequeno, hipercromtico e em forma de vrgula ou bastonete (seta). Em encfalos normais,
essas clulas so praticamente imperceptveis. HE. 100x. Comentrio: Oligodendrcitos e astrcitos formam
a macrglia. Oligodendrcitos satlites regulam o microambiente perineuronal, por outro lado,
oligodendrcitos interfasciculares so responsveis por mielinizar os axnios no sistema nervoso central
(SNC). Astrcitos participam em processos de regulao, reparao, suporte e formao de barreiras no
SNC. Micrglia o termo dado aos macrfagos residentes do SNC. Essas clulas derivam dos moncitos e
migram para o SNC logo depois de ocorrer a sua vascularizao.
Exame microscpico
107
Figura 18. Organizao do sistema nervoso central. Descrio: A. A substncia cinzenta consiste de corpos
neuronais e uma rede composta de axnios finamente mielinizados, dendritos, oligodendrcitos satlites,
astrcitos protoplasmticos e micrglia e seus processos. HE. 100x. B. A substncia branca consiste de
axnios bem mielinizados, oligodendrcitos interfasciculares e astrcitos fibrosos. HE. 100x. C. Ncleo do
tronco enceflico. HE. 10x. D. Ncleos basais. A substncia rsea proeminente a substnia branca. HE.
10x. Comentrio: neurpila definida como a rede de processos neuronais (dendritos e axnios) e de clulas
gliais que se localiza na substncia cinzenta. Em HE a substncia rosa finamente fibrilar que se observa
entre neurnios e clulas gliais (N). Parnquima neural o nome usado para definir a substncia rseaescura formada por axnios e processos das clulas gliais da substncia branca. No tronco encflico e
diencfalo muitas vezes difcil discernir entre a substncia cinzenta e substncia branca. Certas regies do
encfalo como ncleos basais, telencfalo e cerebelo possuem distinta diviso entre substncia cizenta e
branca. A substncia branca do telencfalo denominada coroa radiada.
Exame microscpico
108
Figura 19. Meninges. Descrio: A. Leptomeninge, tambm denominada de pia-aracnide, formada por
vasos sangneos e tecido fibrovascular e reveste o SNC. Nesta figura, abaixo das leptomeninges, observa-se
o crtex telenceflico. HE. 10x. B. Dura-mter, tambm denominada paquimeninge, composta por duas
camadas anelares densas de tecido conjuntivo fibroso. Nesta figura, abaixo da dura-mter, observam-se as
leptomeninges e a substncia branca da medula espinhal. HE. 10x. Comentrio: No encfalo, a dura-mter
permanece aderida ao crnio quando se retira o encfalo do crnio. Em sees histolgicas, possvel
visualizar a dura-mter somente em sees da medula espinhal.
3.1.1 No-leses
Exame microscpico
109
medida que o animal cresce, essas clulas migram para a camada interna de clulas
granulares (Fuller & Burger 1997).
Figura 20. Cerebelo. Bovino jovem. Descrio: A. Camada externa de clulas granulares que se localiza
entre a pia-mter e a camada molecular. Numerosas clulas migram para a camada de clulas granulares. B.
Maior aumento de A. Comentrio: a camada externa de clulas germinativas pode ser confundida com
meningite. A migrao dessas clulas pode ser confundida com arbustos gliais, leso que ocorre quando h
encefalite e clulas inflamatrias na camada molecular (Figura 55).
vl
Figura 21. Placa subependimria e acmulos focais de neuroblastos. Descrio: A. A placa subependimria
consiste em acmulo de clulas germinativas entre o epndima e o parnquima neural na altura dos
ventrculos laterais (vl). Em reas prximas aos ventrculos laterais, dentro do parnquima neural so
observados acmulos de neuroblastos. HE. 10x. B. As clulas germinativas esto dispostas em camadas de
trs a cinco clulas. HE. 40x. Comentrio: a placa subependimria persiste em bovinos adultos e pode ser
erroneamente interpretada como infiltrado inflamatrio linfoctico. Os acmulos focais de neuroblastos
podem ser confundidos com microgliose.
Exame microscpico
110
Figura 22. rgo subcomissural. Descrio: A. Observe as clulas colunares altas com citoplasma
levemente eosinoflico e ncleo basal, distribudas em estruturas acinares. HE. 20x. B. Estrutura semelhante
em maior aumento. HE. 40x. Comentrio: o rgo subcomissural uma estrutura especializada em secretar
aldosterona Devido estrutura glandular observada microscopicamente, o rgo sucomissural pode ser
interpretado erroneamente como neoplasma de origem epitelial, principalmente quando se realiza seo
oblqua do tlamo.
Figura 23. rea postrema. Descrio: A. Observe a localizao da rea postrema bilateral, simtrica e
caudodorsalmente ao ncleo dorsal do vago. Vista submacroscpica. B. O achado tpico dos rgos
circumventriculares inclui a neurpila frouxamente arranjada com proeminente vasculatura. HE. 20x.
Comentrio: a rea postrema situa-se na poro caudal do assoalho do quarto ventrculo. Essa estrutura pode
ser observada microscopicamente, quando se realiza o corte do encfalo no bulbo na altura do bex. Em
humanos sua funo fisiolgica tem sido apontada como regio quimioreceptora do encfalo para instigar a
resposta emtica, e regulao do controle cardiovascular devido a resposta sistmica angiotensina II (Leslie
& Osborne 1984). Em sees histolgicas, a rea postrema pode ser erroneamente confundida com gliose,
ou quando os capilares esto proeminentes pode ser confundida com neoplasma.
Exame microscpico
111
Figura 24. Corpo pineal. Descrio: A. O tecido nervoso (canto superior direito) est separado do corpo
pineal pelas leptomeninges. Nesta figura, as leptomeninges esto pigmentadas. Observe a hipercelularidade
da epfise. HE. 10x. B. Maior aumento de A. Comentrio: devido estrutura histolgica hipercelular o corpo
pineal pode ser facilmente confundido com neoplasma.
Exame microscpico
112
B
Figura 26. Aparncia cromatoltica e necrtica dos
neurnios do tronco enceflico e do gnglio de
Gasser. Descrio: A. Observe que o citoplasma de
um grande neurnio do tronco enceflico apresenta
colorao rosa. HE. 40x. B. O citoplasma do
neurnio e o ncleo diminuem de tamanho e coramse intensamente. HE. 40x. C. Aspecto necrtico de
diversos neurnios do gnglio de Gasser. HE. 10x.
Comentrio: a aparncia necrtica de alguns
neurnios pode ser decorrente da intensa
manipulao do encfalo ou do gnglio de Gasser
na remoo da cavidade craniana antes da fixao
em formol. Esses neurnios tambm so chamados
de neurnios escuros.
Exame microscpico
113
Figura 27. Lipofuscina. Descrio: um pigmento granular amarelo-ouro que se acumula no pericrio dos
neurnios e em seus prolongamentos, bem como no citoplasma de macrfagos. A. Pigmento amarelo-ouro
que preenche parcialmente o pericrio do neurnio. HE. 40x. B. Ncleo vermelho do mesencfalo. Na
colorao de cido peridico de Schiff (PAS), lipofuscina aparece como pigmento granular magenta. C.
Agregados granulares no pericrio do neurnio. PAS. 100x. D. Lipofuscina na neurpila, provavelmente
dentro do citoplasma da micrglia. PAS. 100x Comentrio: lipofuscina caracteriza-se pela fuso de um
lisossomo primrio e uma vescula fagoctica e observada na microscopia de luz como pigmento granular
que se deposita no citoplasma das clulas medida que o animal vai envelhecendo. Geralmente se deposita
em um dos plos do pericrio dos neurnios, mas pode ser observado na neurpila ou no citoplasma de
clulas gliais. A presena desse pigmento na neurpila pode ocorrer pelo processo de exocitose; ou outra
teoria plausvel a morte das clulas gliais que contm esse pigmento, e aps certo tempo, lipofuscina pode
ser observada apenas extracelularmente (Jahns et al. 2006a).
Exame microscpico
114
Exame microscpico
115
Figura 29. Calcificao dos vasos do encfalo. Descrio: mineralizao ou calcificao dos vasos do
encfalo aparece como depsitos basoflicos que substituem a parede normal dos vasos. A. Observe os
depsitos basoflicos na parede de vasos. Ocasionalmente, a mineralizao obstrui parcial ou totalmente a
luz do vaso e assume padro de corpora amylacea. HE. 20x. B. Maior aumento de leso semelhante. HE
40x. C. Na colorao de Von Kossa, a mineralizao aparece como depsitos pretos ou marrons. Observe a
fase incial de depsito de mineral, com depsitos multifocais na mdia dos vasos. Von Kossa. 20x. D. Maior
aumento de leso semelhante com obstruo parcial do lmen do vaso. Comentrio: na maioria das vezes, a
mineralizao dos vasos no provoca conseqncias clnicas, embora trombose ou isquemia podem ocorrer
associadas leso. Neste estudo, mineralizao dos vasos foi mais freqente na cpsula interna de bovinos
velhos e foi considerado um achado incidental relacionado idade.
Figura 30. Incluses hialinas em neurnios do gnglio de Gasser. Descrio: A. Incluses hialinas ou
colides circulares no citoplasma de neurnios. HE. 20x. B. Maior aumento de leso semelhante. HE. 40x.
Comentrio: essas incluses foram encontradas em um bovino de 16 anos de idade no gnglio de Gasser.
Em humanos, incluses hialinas eosinoflicas semelhantes so observadas no ncleo hipoglosso da medula.
Essas incluses consistem de cisternas dilatadas do retculo endoplasmtico e aumentam em nmero com a
idade. Podem ser confundidas com incluses virais (Fuller & Burger 1997) ou degenerao neuronal.
Exame microscpico
116
Figura 31. Corpora amylacea. Descrio: A. Estrutura circular lamelar basoflica de tamanho varivel (10
a 30 m de dimetro). HE. 100x. B. Estrutura lamelar circular magenta. PAS. 100x. Comentrio: corpora
amylacea so corpsculos poliglucosanos que esto nos processos astrocitrios. Devem ser diferenciados de
corpsculos de Lafora que tambm esto relacionados idade, mas se localizam no interior dos neurnios,
tanto no pericrio quanto nos axnios (Summers et al. 1995). Os que se localizam no axnio so difceis de
diferenciar de corpora amylacea, porque ambos parecem estar livres na neurpila. Algumas vezes podem ser
erroneamente interpretados como fungos, j que tem afinidade pelas mesmas coloraes especiais usadas
para detectar esses patgenos (Fuller & Burger 1997).
Figura 32. Concrees do rgo pineal. Descrio: A. Concrees laminares redondas a ovais, fortemente
basoflicas de tamanhos variveis. HE. 40x. B. Concrees multifocais coradas em preto. Von Kossa. 40x.
Comentrio: as laminaes podem corresponder a atividade flutuante da pineal influenciada pela mudana
circadiana da intensidade solar. A estrutura mineral constituda morfologicamente por hidroxiapatita e
carbonato de apatita, sendo clcio e fsforo os principais constituintes. As concrees geralmente localizamse entre as fibras nervosas (axnios), e ocasionalmente dentro de clulas gliais (Vigh et al. 1998).
Exame microscpico
117
Leses de pouco significado clnico podem criar confuso com leses especficas
de certas doenas importantes do SNC. Uma delas a vacuolizao do citoplasma dos
neurnios do ncleo vermelho do mesencfalo (Figura 33) que pode ser confundida com
leso de BSE. Deve ser lembrado que apenas a vacuolizao neuronal no diagnstica
para BSE (Wells et al. 1991). As alteraes espongiformes da BSE ocorrem na neurpila e
no pericrio de neurnios em lugares especficos do tronco enceflico (Wells et al. 1991).
No entanto, alteraes espongiformes afetando a neurpila e os corpos neuronais so
descritas em casos naturais e experimentais de raiva em gambs, raposas (Charlton et al.
1987), e em um bovino (Foley & Zachary 1995), em filhotes atxicos de Rottweiler
(Jardim et al. 1999), e em cabras com paresia progressiva (Lancaster et al. 1987).
Vacuolizao neuronal rica em lipdios observada em guaxinin (Procyon lotor) (Hamir
& Fischer 1999).
A vacuolizao incidental dos neurnios do ncleo vermelho do mesencfalo
encontrada em 64% dos encfalos de bovinos adultos normais, mas j foi encontrada em
bovinos com 12 meses de idade (Gavier-Widen et al. 2001). Em nosso estudo, a
vacuolizao desses neurnios foi encontrada em bovinos de oito meses de idade.
B
Figura 33. Vacuolizao dos neurnios do ncleo
vermelho do mesencfalo. Descrio: A.
Vacuolizao intracitoplasmtica de mltiplos
neurnios. HE. 4x. B. Vacolo intracitoplasmtico
solitrio em um neurnio. HE. 40x. C. Mltiplos
vacolos no pericrio do neurnio separados por
fina margem de citoplasma e deslocamento do
ncleo para a periferia. HE. 40x. Comentrio:
vacolos do pericrio e neuritos so leses
caractersticas da BSE, mas a localizao dessas
leses no SNC muito importante para o
diagnstico. Alm disso, as leses esto geralmente
associadas a sinais clnicos.
Exame microscpico
118
Exame microscpico
119
Figura 35. Exemplar de Sarcocystis sp. Descrio: Cisto de Sarcocystis sp. na camada de clulas granulares
do cerebelo medindo 100 x 60 m com numerosos zotos. Comentrio: Sarcocystis sp. no incitam resposta
inflamatria porque se localizam dentro de clulas endoteliais. A ruptura desses cistos pode provocar a
formao de pequenos granulomas.
Figura 36. Esferides axonais e manguitos perivasculares. Descrio: A. Esferide axonal no parnquima
neural. HE. 40x. B. Manguito perivascular linfoplasmocitrio composto por uma a trs camadas de clulas
inflamatrias HE. 10x. Comentrio: a deteco de poucos esferides axonais no encfalo tambm um
achado incidental comum em ces (Borras et al. 1999), ovinos e caprinos (Hooper 1999), eqinos (Jahns et
al. 2006a) e sunos (Jahns et al. 2006b).
Exame microscpico
120
Figura 37. Alteraes incidentais na hipfise e rete mirabile carotdea. Descrio: A. Cistos multifocais
preenchidos por material eosinoflico homogneo (colide) na adenoipfise. HE. 20x. B. Sangue no seio
cavernoso com fibrina e neutrfilos. HE. 20x. Comentrio: cistos na hipfise so achados incidentais em
bovinos e eqinos velhos (Innes & Saunders 1962) e se ocorre acentuada dilatao da cavidade hipofisria
ou coalescncia dos cistos, eles podem ser observados macroscopicamente. Os agregados de eritrcitos,
neutrfilos e fibrina no seio cavernoso ao redor da rete mirabile carotdea de bovinos sem leses no sistema
nervoso podem ser explicados pelo fato da lenta dinmica vascular desse local. Essa alterao deve ser
diferenciada de abscessos de pituitria, onde as leses so mais extensas, rompem a arquitetura normal e
atingem o sistema nervoso central.
Exame microscpico
121
B
Figura 38. Hemorragia traumtica. Descrio: A.
Hemorragia subdural moderada. As leptomeninges
esto expandidas por eritrcitos. HE. 4x. B.
Hemorragia ao redor de vaso de mdio calibre no
parnquima cerebral. HE. 10x. C. Estase acentuada
de sangue no seio cavernoso da rete mirabile
carotdea. HE. 10x. Comentrio: o uso do dardo
cativo para dessensibilizao nos frigorficos produz
hemorragia acentuada no encfalo dos bovinos.
Essas leses devem ser corretamente interpretadas
pois foram infligidas em um encfalo previamente
normal. Grande quantidade de sangue no seio
cavernoso da rete mirabile carotdea observado
quando os bovinos so dessensibilizados com a
introduo da faca na medula oblonga.
Figura 39. Distenso dos espaos perivasculares causada por aspirao de ar. Descrio: A. Crtex
telenceflico. Acentuada distenso dos espaos perivasculares. HE. 4x. B. Maior aumento de A. HE. 20x.
Comentrio: apesar de em menor aumento essa leso ser caracterizada por alterao espongiforme, a
vacuolizao localizada ao redor dos espaos de Virchow-Robin. O aspecto macroscpico desta alterao
pode ser observado na Figura 10.
Exame microscpico
122
Figura 40. Artefatos relacionados colheita e manuseio do encfalo. Descrio: A. Acmulo focal de
fragmentos sseos no tecido nervoso. HE. 10x. B. Crtex telenceflico. Mltiplos neurnios esto
encolhidos com o citoplasma basoflico e ncleo levemente picntico. HE. 40x. Comentrio: neurnios de
Cammermeyer devem ser diferenciados de neurnios vermelhos (Figura 47) que apresentam o citoplasma
eosinoflico.
Figura 41. Microrganismos ectpicos no tecido nervoso. Descrio: A. Protozorio do rmen na superfcie
do telencfalo. HE. 20x. B. Crtex telenceflico. Corte transversal de fragmento de plo. HE. 40x.
Comentrio: microrganismos ectpicos so adquiridos no momento da fixao do encfalo ou na hora da
confeco da lmina. No h reao inflamatria associada a essas estruturas.
Exame microscpico
123
Figura 42. Artefatos relacionados fixao do encfalo. Descrio: A. Aspecto linear finamente vacuolar
da superfcie do telencfalo logo abaixo das leptomeninges. HE. 20x. B. Cerebelo. O tecido nervoso
apresenta aspecto quebradio com fendas lineares entrecruzadas. HE. 10x. Comentrio: o aspecto linear nas
margens do encfalo um artefato normalmente encontrado em encfalos corretamente fixados e
decorrente de diferenas de presso osmtica entre o formol e o tecido nervoso. Fendas lineares so
provocadas pela congelao do encfalo antes de fix-lo em formol.
3.1.4 Autlise
Exame microscpico
124
Figura 43. Artefatos relacionados autlise. Descrio: A. Halos perineuronais. HE. 10x. B. Halos ao redor
de oligodendrcitos. HE. 40x. Comentrio: halos perineuronais, perivasculares e perigliais provocados por
autlise no devem ser confundidos com edema.
B
Figura 44. Artefatos relacionados autlise.
Descrio: A. Bacilos da putrefao dispersos na
neurpila. HE. 40x. B. Bacilos de putrefao
obliterando a luz de um vaso sangneo. HE. 20x. C.
Vacolos aleatrios. HE. 4x. Comentrio: esses
bacilos so do gnero Clostridium; logo aps a
morte do bovino proliferam no trato gastrointestinal,
invadem a corrente circulatria e colonizam diversos
rgos, inclusive o encfalo. Quando essas bactrias
produzem gases, formam-se bolhas e o aspecto
macroscpico dessa alterao chamado queijo
suo. Esse aspecto macroscpico pode ser
observado na Figura 12.
Exame microscpico
125
Figura 45. Artefatos relacionados autlise. Cerebelo. Descrio: A. Aspecto macroscpico. A regio
perifrica das folhas cerebelares est fixada (amarela), ao contrrio da poro interna que est parcialmente
fixada (rsea-clara). B. Aspecto submacroscpico. Palidez das pores profundas das folhas cerebelares. HE.
C. Rarefao da camada de clulas granulares. HE. 10x. D. Dissoluo das clulas da camada de clulas
granulares com preservao das clulas de Purkinje. HE. 40x. Comentrio: conglutinao cerebelar j foi
descrita como leso antemortem significativa.
Neurocitopatologia
126
4. Neurocitopatologia
A correta descrio das leses observadas no SNC de bovinos exige o
conhecimento de termos especficos usados em neuropatologia. Alteraes a serem
reconhecidas incluem: cromatlise neuronal, neurnios vermelhos, vacuolizao do
pericrio associada com doenas de depsito lisossomal, incluses intracitoplasmticas ou
intranucleares, vacolos intracitoplasmticos, esferides axonais, degenerao walleriana,
gliose, astrocitose, astrogliose, astrcitos Alzheimer tipo 2, gemistcitos, microgliose,
ndulos gliais, satelitose, neuronofagia, clulas gitter, manguitos perivasculares,
congesto, vasculite, tumefao endotelial, edema, degenerao esponjosa ou status
spongiosus. Esses termos sero discutidos medida que fotos das leses especficas so
apresentadas.
A seguir sero ilustradas as leses microscpicas ligadas a doenas observadas
durante os 5 anos de vigilncia epidemiolgica para BSE em bovinos no LPV/UFSM. As
leses sero correlacionadas com as doenas do SNC diagnosticadas no Brasil.
importante salientar que o correto diagnstico de uma doena em um rebanho, depende
algumas vezes do conjunto de dados epidemiolgicos, dos sinais clnicos, dos achados de
necropsia e da histopatologia, algumas vezes associados com exames complementares
(toxicolgicos, virolgicos, bacteriolgicos). A descrio das doenas que afetam o SNC
de bovinos no Brasil pode ser encontrada em uma reviso recente sobre o assunto (Barros
et al. 2006a).
Neurocitopatologia
127
Figura 46. Cromatlise central de neurnio do gnglio de Gasser. Raiva. Descrio: A. Observe o aumento
de volume e arredondamento do citoplasma do neurnio e a localizao da substncia de Nissl na periferia
do pericrio. HE. 20x. B. Leso semelhante em maior aumento. HE. 40x. Comentrio: cromatlise central
foi observada no gnglio de Gasser em casos de raiva. Foi considerada uma leso degenerativa que precede a
morte neuronal. Intoxicao por Aspergillus clavatus produz cromatlise dos neurnios do tronco enceflico,
geralmente associada com vacuolizao.
Neurocitopatologia
128
Figura 47. Neurnios vermelhos no crtex telenceflico. Meningoencefalite por herpesvrus bovino-5
(BoHV-5). Descrio: os neurnios desta rea apresentam o citoplasma angular, hipereosinoflico,
desaparecimento da substncia de Nissl e ncleo picntico. Observa-se tambm edema perivascular e
perineuronal (espongiose) e tumefao do endotlio vascular. HE. 10x. Comentrio: Doenas de bovinos no
Brasil em que neurnios vermelhos ocorrem caracteristicamente incluem casos agudos de
polioencefalomalacia por diversas causas como deficincia de tiamina, intoxicao por enxofre, intoxicao
por sal, mudanas bruscas na alimentao de pasto ruim para excelente e intoxicao por chumbo. Sem
dvida, a causa mais freqente dessa alterao meningoencefalite por BoHV-5. As causas de
polioencefalomalacia ainda esto sendo investigadas no Brasil, pois acredita-se que, na maioria das vezes,
difiram das causas dessa doena em outros pases.
Neurocitopatologia
129
Figura 48. Vacuolizao neuronal. Intoxicao por Solanum fastigiatum. Descrio: A. Todos os neurnios
de Purkinje esto tumefeitos e com fina vacuolizao do pericrio e deslocamento do ncleo para a periferia.
HE. 20x. B. Leso semelhante em maior aumento. HE. 40x. Comentrio: Solanum fastigiatum uma planta
txica encontrada no sul do Brasil e induz neurolipidose em bovinos. A vacuolizao confinada s clulas
de Purkinje. Esferides axonais podem ser observados na camada de clulas granulares e na substncia
branca do cerebelo (Figura 51). No Brasil, doena de depsito lisossomal induzida pela ingesto de outras
plantas txicas em bovinos incluem as manosidoses causadas por Ipomoea carnea subsp. fistulosa (regio
Nordeste) e Sida carpinifolia (regio Sul) e lipofuscinose causada por Phalaris angusta (regio Sul). Com
exceo de Solanum fastigiatum, em todas as outras intoxicaes, vacuolizao ocorre em outras partes do
encfalo e em outros rgos. Prosopis juliflora (regio Nordeste) tambm provoca vacuolizao neuronal
em ncleos do tronco enceflico, mas essa planta no causa de doena de depsito lisossomal.
Neurocitopatologia
130
Figura 50. Vacuolizao neuronal em um caso de scrapie. Descrio: A. Vacuolizao no pericrio de dois
neurnios, que se tornaram balonosos e conservam apenas uma fina margem de citoplasma. HE. 40x. B.
Vacuolizao no pericrio de neurnios e na neurpila (alterao espongiforme). HE. 20x. Comentrio: a
distribuio das vacuolizaes na BSE bastante regular e ocorre principalmente no ncleo do trato
solitrio, no trato espinhal do nervo trigmeo, no ncleo vestibular, na formao reticular do bulbo, na
substncia cinzenta periaqueductal do mesencfalo, na rea paraventricular do tlamo e no septo talmico.
No Brasil, o diagnstico histolgico confirmado por imunoistoqumica.
Neurocitopatologia
131
Figura 51. Esferides axonais. Intoxicao por Solanum fastigiatum (doena de depsito lisossomal).
Descrio: A. Observam-se duas estruturas eosinoflicas ovais (esferides) no parnquima neural. HE. 40x.
B. Observe a presena de estrutura eosinoflica fusiforme na camada de clulas granulares, prximo aos
neurnios de Purkinje. Essa estrutura denominada torpedo. HE. 20x. Comentrio: em casos de intoxicao
por Solanum fastigiatum, esferides axonais ocorrem devido degenerao do pericrio que prejudica o
transporte de substncias entre o pericrio e o axnio. Esferides axonais podem ser observados tanto na
camada de clulas granulares quanto na substncia branca medular do cerebelo.
Quando um axnio interrompido, sua parte distal necrosa e o termo utilizado para
essa alterao chama-se degenerao walleriana. Em 1850, Augustus Volney Waller
descreveu esse processo em nervos perifricos; o termo degenerao walleriana tambm
usado para descrever necrose de fibras nervosas no SNC secundria leso axonal.
Quanto maior o dimetro do axnio, mais rapidamente ocorre degenerao walleriana.
Neurocitopatologia
132
Figura 52. Degenerao walleriana. Compresso medular por abscesso na vrtebra. Descrio: A. Seco
longitudinal da medula espinhal. A bainha de mielina periaxonal est distendida e, em alguns casos, contm
axnios tumefeitos. HE. 20x. B. Macrfago em espao periaxonal. HE. 40x. Comentrio: quando
macrfagos invadem a rea, formam as chamadas cmaras de digesto.
precursores
(localizados
nas
regies
periventriculares)
sofrem
Neurocitopatologia
133
Figura 53. Reao dos oligodendrcitos leso. Descrio: Satelitose em um caso de raiva. Ao redor do
neurnio, h proliferao adjacente de oligondendrcitos satlites. HE. 40x. Comentrio: satelitose uma
das leses que caracterizam a inflamao no SNC e geralmente observada em infeces virais.
Neurocitopatologia
134
Figura 54. Astrocitose e astrogliose. Descrio: A. Camada molecular do cerebelo. Intoxicao por
Solanum fastigiatum. Aumento do nmero e tamanho dos astrcitos na camada molecular e conseqente
maior densidade de fibras astrocitrias (astrocitose e astrogliose). Imunoistoqumica para protena fibrilar
glial cida (GFAP). 20x. B. Cerebelo controle para comparao. Imunoistoqumica para GFAP. 20x.
Comentrio: intoxicao por Solanum fastigiatum induz degenerao e necrose das clulas de Purkinje de
cerebelo. O espao deixado pelas clulas de Purkinje substitudo por hipertrofia e hiperplasia dos astrcitos
de Bergmann. Essa leso pode ser visualizado na colorao de HE como astrocitose na camada molecular do
cerebelo. Nesse exemplo particular, a fibrose astrocitria denominada isomrfica pois segue a mesma
disposio das fibras do cerebelo normal (Innes & Saunders 1962).
Neurocitopatologia
135
B
Figura 55. Reao da micrglia leso. Raiva.
Descrio: A. Gliose focal. HE. 40x. B. Microgliose
difusa. Observe o aumento do nmero de clulas
dispersas difusamente na neurpila. HE. 10x. C.
Arbustos gliais na camada molecular do cerebelo.
HE. 10x. Comentrio: esses focos podem estar
infiltrados com outras clulas inflamatrias e
astrcitos. As leses observadas acima so
caractersticas de encefalites causadas por vrus. Em
enfermidades de bovinos no Brasil, microgliose
difusa e focal so observadas em casos de raiva e
meningoencefalite por herpesvrus bovino-5.
Arbustos gliais o termo especfico dado
microgliose observada a camada molecular do
cerebelo.
Figura 56. Neuronofagia. Raiva. Descrio: A. Crtex telenceflico. Observe as clulas da glia ao redor de
um neurnio necrtico. HE. 40x. B. Gnglio de Gasser. Partes de um neurnio necrtico so fagocitados por
clulas da glia. HE. 20x. Aps a fagocitose total, esse espao preenchido por clulas gliais ou clulas
satlites que formam os chamados ndulos de Babes. Comentrio: essas figuras ilustram a fase inicial (A) e
final (B) de neuronofagia. Neuronofagia tambm uma leso caracterstica de outros tipos de inflamao no
SNC. freqentemente vista em casos de meningoencefalite por herpesvrus bovino-5.
Neurocitopatologia
136
Figura 57. Leptomeningite. Descrio: A. Crtex telenceflico. Exsudato purulento nas leptomeninges. HE.
20x. B. Tronco enceflico. Exsudato histiolinfoplasmocitrio expandindo as leptomeninges. HE. 10x.
Comentrio: em enfermidades de bovinos do Brasil, leptomeningites ocorrem freqentemente em bezerros
jovens, secundrias a onfaloflebites, so predominantemente causadas por bactrias (Escherichia coli,
Arcanobacterium pyogenes e Streptococcus spp.) e cursam com exsudato purulento. A exceo tuberculose
e intoxicao por Vicia spp. que produz exsudato granulomatoso e listeriose que produz infiltrado
mononuclear. Meningoencefalite no-supurativa um achado caracterstico das infeces virais como raiva,
meningoencefalite por herpesvrus bovino-5 e febre catarral maligna.
Neurocitopatologia
137
Leses
recentes
ou
focais
so
freqentemente
perceptveis
Figura 58. Congesto vascular e hemorragia. Descrio: A. Crtex telenceflico. Raiva. Congesto vascular
dos vasos das leptomeninges e do tecido nervoso. HE. 4x. B. Maior aumento de A. Observe que os capilares
esto mais proeminentes. HE. 20x. C. Crtex telenceflico. Babesiose. Congesto difusa dos capilares e
edema perivascular e perineuronal. Em alguns eritrcitos possvel observar microrganismos basoflicos que
correspondem s formas de B. bovis. HE. 100x. C. Crtex telenceflico. Intoxicao por Solanum
fastigiatum. Hemorragia nas leptomeninges. Comentrio: congesto vascular uma alterao inespecfica
que ocorre no SNC geralmente em resposta a agentes infecciosos, mas pode ser til em casos de babesiose
cerebral, quando no possvel a observao macroscpica do encfalo (Figura 2B). A anlise criteriosa dos
eritrcitos numa proporo histolgica adequadamente delgada (5 m) e corada pode revelar a presena do
microrganismo em seces coradas por HE. Apesar da cor vermelho-cereja na substncia cinzenta do
encfalo ser leso caracterstica de babesiose cerebral, o esfregao do crtex telenceflico corado com
pantico rpido evidencia numerosos capilares parasitados por Babesia bovis. Hemorragias no SNC
geralmente so de origem traumtica, mas podem ser decorrentes de acentuada leso vascular, como em
casos de meningoencefalite por herpesvrus bovino-5.
Neurocitopatologia
138
Figura 59. Tumefao endotelial e vasculite. Descrio: A. Tlamo. Raiva. Tumefao das clulas
endoteliais e manguito perivascular constitudo de linfcitos, plasmcitos e macrfagos. HE. 100x. B.
Cerebelo. Febre catarral maligna (FCM). O infiltrado inflamatrio mononuclear infiltra a parede dos vasos
da meninge. H necrose fibrinide da parede do vaso. HE. 20x . Comentrio: vasculite no SNC em casos de
FCM melhor visualizada em artrias de pequeno e mdio calibre. O melhor lugar para se observar
vasculite em casos de FCM na rete mirabile carotdea.
B
Figura 60. Manguito perivascular. Descrio: A.
Tlamo.
Raiva.
Manguito
perivascular
linfoplasmocitrio composto por 2-4 camadas de
clulas. HE. 10x. B. Mesencfalo. Carcinoma de
clulas escamosas. Manguito perivascular composto
por clulas epiteliais neoplsicas que comprime a
luz do vaso. HE. 20x. C. Mesencfalo. Intoxicao
por Vicia spp. Espesso manguito perivascular
formado de linfcitos, plasmcitos, macrfagos
epiteliides e eosinfilos. HE. 20x (Rech et al.
2004). Comentrio: manguitos perivasculares
geralmente
so
compostos
por
infiltrado
inflamatrio, mas podem ser formados por clulas
neoplsicas. Neste caso, as clulas tumorais so
originrias de carcinoma do olho com extenso ao
longo da bainha de nervos (Barros et al. 2006c).
Neurocitopatologia
139
B
Figura 61. Neutrfilos no sistema nervoso central
(SNC). Descrio: A. Abscesso focal caracterizado
por neutrfilos viveis e degenerados e colees de
bactrias intralesionais nas margens do abscesso.
HE. 10x. B. Ponte. Listeriose. Microabscesso na
neurpila. HE. 40x. C. Crtex telenceflico.
Meningoencefalite por herpesvrus bovino-5
(BoHV-5). Difuso infiltrado inflamatrio composto
por neutrfilos na neurpila. HE. 10x. Comentrio:
abscessos no SNC tm origem bacteriana e no Brasil
so associados ao uso da tabuleta para desmame
interrompido. Microabscessos associados com
infiltrado inflamatrio perivascular mononuclear
localizados no tronco enceflico so achados
microscpicos caractersticos de listeriose. Infiltrado
difuso de neutrfilos comum em casos de
meningoencefalite por BoHV-5 e freqentemente
essa leso precede a malacia.
Neurocitopatologia
140
B
Figura 62. Clulas gitter. Descrio: A. Malacia.
Intoxicao por Ramaria flavo-brunnescens (Barros
et al. 2006b). Observe o tecido necrtico do lado
esquerdo da figura e numerosas clulas gitter do
lado direito. HE. 20x. B. Numerosas clulas gitter
esto ao redor de um grande vaso. HE. 20x. C.
Leso residual. O tecido necrtico foi removido
pelas clulas gitter com permanncia de poucas
clulas gitter e vasos. HE. 20x. Comentrio: Apesar
de malacia ser um termo macroscpico para
descrever amolecimento do parnquima do sistema
nervoso central, o termo empregado quando h
necrose do componente neuroectodrmico com
manuteno do componente vascular e infiltrao de
moncitos que se transformam em clulas gitter. Em
qualquer outro tecido, esse mesmo tipo de clula
referido como macrfago espumoso.
Neurocitopatologia
141
Figura 63. Edema. Descrio: A. Crtex telenceflico. Babesiose cerebral. Edema perivascular. HE. 100x.
B. Degenerao esponjosa na interface da coroa radiada com o crtex telenceflico. Intoxicao por Senecio
brasiliensis. Vacolos ovais ou alongados de 5-40 m em dimetro, com ocasional coalescncia, na interface
do parnquima neural da corona radiada e neurpila do crtex telenceflico. HE. 10x. Comentrio: Em
enfermidades de bovinos no Brasil, degenerao esponjosa primria ocorre em casos de intoxicao por
Ateleia glazioviana (regio Sul) e intoxicao por Tetrapterys spp. (regio Centro-Oeste). Degenerao
esponjosa secundria ocorre em decorrncia de leses hepticas crnicas como intoxicao por Senecio spp.
(regio Sul).
Neurocitopatologia
142
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Alm dos trabalhos acima mencionados, foi publicado um resumo (Rech R.R., Rissi
D.R., Pierezan F., Inkelmann M.A. & Barros C.S.L. 2006. Raiva em herbvoros: 27 casos.
Encontro Nacional de Laboratrios de Diagnstico Veterinrio, Campo Grande, p. 43-44) que
relatam os dados preliminares de um estudo de raiva ainda em andamento. Aps o resumo
foram inseridos a impresso do pster deste resumo, a descrio da tcnica de
imunoistoqumica para raiva com anticorpo policlonal, padronizada na The University of
Georgia, sob a orientao da professora Corrie Brown, no perodo de maro a dezembro de
2006. Fotografias ilustram os resultados deste experimento.
A segunda parte dos trabalhos publicados inclui co-autoria em trabalhos de outros
autores principais, mas que tambm foram elaborados com material do programa DXSNC
durante o perodo de realizao da tese e incluem:
1) Rodrigues A., Rech R.R., Barros R.R., Fighera R.A. & Barros C.S.L. 2005. Babesiose cerebral em bovinos:
20 casos. Cincia Rural 35:121-125.
2) Barros R.R., Irigoyen L.F., Kommers G.D., Rech R.R., Fighera R.A. & Barros C.S.L. 2006. Intoxicao por
Ramaria flavo-brunnescens (Clavariaceae) em bovinos. Pesq. Vet. Bras. 26:87-96.
146
3) Rissi D.R., Oliveira F.N., Rech R.R., Pierezan F., Lemos R.A.A. & Barros C.S.L. 2006. Epidemiologia,
sinais clnicos e distribuio das leses enceflicas em bovinos afetados por meningoencefalite por
herpesvrus bovino-5. Pesq. Vet. Bras. 26:123-132.
4) Barros R.R., Rech R.R., Viott A.M. & Barros C.S.L. 2006. Carcinoma de clulas escamosas no olho de
bovino com invaso cerebral atravs dos nervos cranianos. Cincia Rural 36:1651-1654.
Chapter
Poisonous Plants Affecting the Central
Nervous System (CNS) of Cattle in Brazil
R.R. Rech1, A. Rodrigues1, D.R. Rissi1, F. Riet-Correa2, and C.S.L.
Barros1
1
Introduction
With the growing importance of surveillance for BSE (bovine spongiform
encephalopathy), pursuing and accurately diagnosing CNS (central nervous
system) disease in cattle has increased substantially. In Brazil, there are many
plants that will induce CNS disease in cattle, including those plants causing
lysosomal storage disease (Ipomoea carnea sub. fistulosa, Phalaris angusta,
Sida carpinifolia and Solanum fastigiatum var. fastigiatum), primary neuronal
degeneration (Ipomoea asarifolia, Prosopis juliflora) and plants causing spongy
degeneration of the CNS white matter (Ateleia glazioviana, Tetrapterys spp. and
Senecio spp.). In addition, recently Marsdenia sp. was described causing CNS
disease in cattle but no morphological changes could be associated with the
disease.
Rech et al.
need to consume large amounts of the plant for several weeks to develop the
disease which runs a protracted course. Clinical signs are nonspecific and
include lethargy, slow movements and rough hair coat (Tokarnia et al. 1960).
No gross lesions are found; microscopically there is cytoplasmic vacuolation of
neurons (mainly Purkinje cells) and several other cells, (e.g. tubular epithelium,
hepatocytes and thyroid cells). Toxic substances in Ipomoea fistulosa include
the indolizidine alkaloid swainsonine, 2-epi-lentiginosine, calystegines and Nmetyl-trans-4-hydroxi-1-proline (Haraguchi et al. 2003).
Phalaris angusta
Phalaris spp. (Gramineae) poisoning in ruminants occurs in three forms: a
sudden death syndrome; acute Phalaris poisoning associated with transient
nervous signs; and a chronic form referred to as Phalaris staggers, characterized
by gradual development of neurological signs and characteristic lesions in the
CNS. Outbreaks of Phalaris staggers, a neuronal lipofuscinosis, have been
described in cattle in Southern Brazil associated with the consumption of P.
angusta (Gava et al. 1999). Morbidity and mortality rates are 5% and 50%
respectively. Cattle poisoned by P. angusta present constant movement of the
ears, apprehension, hypersensitivity to external stimuli such as touch and noise,
spasticity, convulsive seizures and lateral recumbency with paddling (Gava et al.
1999). In the chronic form there are diffuse brown-green bilateral symmetrical
areas of discoloration of the thalamus, brain stem and cerebellar gray matter.
Microscopically pigmented neurons, usually involving specific nuclei, are
evident. The pigment is loosely dispersed in the perykarion as golden or dark
brown pigment granules of lipofuscin (Sousa and Irigoyen 1999) which are
strongly positive using the PAS stain but negative for hemosiderin (Prussian
blue stain). Tryptamine and -carboline are active principles extracted from
Phalaris spp. but the toxic principle and pathogenesis remain to be fully
clarified. While the observation of the pigment in neurons is diagnostically
useful in suspected cases of toxicity, especially in young animals, the
accumulation of lipofuscin seems insufficient to explain the clinical signs and
mortality. Some have proposed that central nervous system signs result from
serotonergic effects of toxins on upper motor neurons. The principal differential
diagnoses for neuronal pigmentation include old age lipofuscinosis and
poisoning by other plants such as Trachyandra laxa and T. divaricata, which is
not reported in Brazil.
Sida carpinifolia
The consumption of S. carpinifolia (Malvaceae) induces a chronic
degenerative disease in goats (Driemeier et al. 2000), horses (Loretti et al.
2003), sheep (Seitz et al. 2005) and cattle (Gava 2003, personal communication)
in Southern Brazil. The plant is palatable to livestock but morbidity and
mortality rates are low; the toxic principle of S. carpinifolia (swainsonine)
inhibits the degradation of oligosaccharides. Cattle seem less susceptible than
goats, but there was one as yet unpublished outbreak where five out of twenty
cattle were affected. Clinical signs include tremors and ataxia which deteriorate
if the animal is disturbed. There are no gross changes. Microscopically there is
fine vacuolation of the cytoplasm of neurons of the CNS and peripheral ganglia
and of several other cells of other organs. These lesions are reversible if the
ingestion of the plant is discontinued. Neuronal lesions caused by the ingestion
of S. carpinifolia were observed as incidental lesions in two cows that died of
rabies (Driemeier 2003, personal communication).
Rech et al.
Ipomoea asarifolia
Ipomoea asarifolia (Convolvulaceae) is a tremorgenic plant with an
unknown active principle. The intoxication occurs in the Northeast (Dbereiner
et al. 1960) and affects mainly young sheep, but goats and cattle are also
affected (Medeiros et al. 2003). Ingestion occurs during the dry season due to
lack of more suitable forage. Clinical signs include muscle tremors, hypermetria
and hypersensitivity to noise. When the bovine is left alone the clinical signs
subside but a wide base stance is maintained. If the ingestion of the plant is
discontinued, clinical signs gradually abate. Histologically there are
degeneration and loss of Purkinje cells, axonal spheroids in the granular layer
and foci of demyelination in the white matter of the cerebellum.
Prosopis juliflora
The intoxication by the pods of Prosopis juliflora is a chronic neurological
disease frequent in cattle in the semi-arid region of Northeastern Brazil and is
characterized by atrophy of the masseter muscle, protusion and involuntary
movements of the tongue, decreased tonus of mandibular muscles, head tilt
during rumination, abundant drooling, yawning, dysphagia and continuing
mastigatory movements (Tabosa et al. 2000a). The pods are used as feed for
cattle in the dry season and when ingested for long periods cause degeneration
of neurons of motor (trigeminal) nuclei in the brainstem which result in atrophy
and paralysis of masticatory muscles leading to starvation due to difficulty in
apprehension and maintenance of food in the mouth. Piperidinic alkaloids were
isolated from the plant (Tabosa et al. 2000b) but their role in the intoxication is
uncertain. Necropsy findings include changes related to starvation and atrophy
of masticatory muscles. Microscopically there is chromatolysis and fine
perikaryal vacuolation in neurons of the trigeminal motor nuclei with eventual
loss of these cells. Ultrastructurally the neuronal lesion consists of mitochondrial
swelling with disorientation and fragmentation of mitochondrial cristae.
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8. Lavar em TST duas vezes por 3 minutos cada (agitar bem a cada vez).
9. Aplicar o anticorpo secundrio (monoclonal anti-FITC SIGMA F5636) na diluio de
1:5000 em PBS e incubar por 60 minutos em temperatura ambiente.
10. Lavar em TST duas vezes por 3 minutos cada vez.
11. Aplicar o anticorpo biotinilado de ligao (anti-camundongo e anti-coelho do kit
LSAB2) e incubar por 15 minutos.
12. Lavar em TST duas vezes por 3 minutos cada vez.
13. Aplicar o conjugado fosfatase alcalina estreptavidina do kit LSAB2 e incubar por 15
minutos em temperatura ambiente.
14. Lavar em TST duas vezes por 3 minutos cada vez.
15. Aplicar o reagente cromgeno fast red (diluir 1 tablete em 2 ml de soluo tamponada
0,1M Tris pH 8,3) e incubar por 20 minutos em temperatura ambiente.
16. Lavar em gua destilada duas vezes por trs minutos.
17. Contracorar com hematoxilina de Meyer (Biomeda cat#M10) por 6 minutos.
18. Lavar em gua corrente por 1 minuto.
19. Colocar as lminas em soluo tampo (2ml Tris tamponado 2,0M, pH 7,5 em 198ml
de gua destilada) por 10 segundos.
20. Enxgar em gua destilada por 1 minuto.
21. Montar a lmina usando meio de montagem aquoso (Faramount: DAKO cat# S3025).
185
Introduo
A raiva uma encefalite viral aguda, progressiva, causada por um vrus RNA
neurotrpico da famlia Rhabdoviridae, gnero Lyssavirus. Os principais
reservatrios mamferos incluem carnvoros e quirpteros. Descrevem-se 5
surtos e 2 casos isolados de raiva em bovinos, dois em ovinos e um em eqino
diagnosticados entre 2002 e 2005 no LPV-UFSM.
Fig. 1. Propriedades onde ocorreram os surtos de raiva no Rio Grande do Sul. Observe os terrenos acidentados e a proximidade com as encostas de morros.
Fig. 2. Sinais clnicos. A. Bovino em decbito na fase final da doena. As marcas no cho foram causadas por movimentos de pedalagem. B. Sialorria acentuada. C.
Bovino com a cabea e o pescoo apoiados no cho demonstrando fraqueza.
Discusso
Apesar de no terem sido observadas mordidas de morcegos nos animais
afetados, provvel que em todos os casos a transmisso tenha ocorrido por
morcegos hematfagos (Desmodus rotundus), devido ao relato de proprietrios
da presena de furnas com morcegos nos terrenos acidentados prximos s
propriedades acometidas. Achados pouco relatados por outros autores e
observados consistentemente neste estudo foram a hiperemia das leptomeninges
e a ganglionite no supurativa associada a CN, que pode otimizar o diagnstico
histopatolgico, principalmente quando h MENS sem a presena de CN e
quando a IFD negativa. A idade e os sinais clnicos de bovinos afetados por
raiva so muito variveis, por isso a raiva deve ser sempre considerada no
diagnstico diferencial das doenas do sistema nervoso central de bovinos no
Brasil.
Quadro 1. Dados epidemiolgicos dos casos de raiva em bovinos.
Surto
Municpio/Estado
Total de
Bovinos
bovinos
afetados
Surto 1
Garruchos (RS)
750
28
Surto 2
Itaara (RS)
179
27
Surto 3
Jlio de Castilhos e
1150
8
Val de Serra (RS)
Surto 4
So Joo do Polnise,
258
33
Silveira Martins e Faxinal
do Soturno (RS)
Surto 5
Coronel Vivida (PR)
426
20
Caso isolado 1
So Pedro do Sul (RS)
8
1
Caso isolado 2 So Pedro do Buti (RS)
16
1
Total
2787
118
Fig. 3. Leses no encfalo. A. Achado macroscpico. Hiperemia acentuada das leptomeninges. B. Achado histolgico. Encefalite no supurativa caracterizada por
manguito perivascular constitudo por linfcitos e plasmcitos. Hematoxilina-eosina. C. Achado histolgico. Corpsculos de incluso intracitoplasmticos eosinoflicos
em neurnios de Purkinje. Os corpsculos de Negri foram mais freqentes nos neurnios de Purkinje e nos grandes neurnios do tronco enceflico. Hematoxilina-eosina.
Bovinos
examinados
2
6
3
7
4
1
1
24
Fig. 4. Achados histolgicos no gnglio de Gasser. A. Ganglionite difusa acentuada (leso de van Gehuchten e Nelis). Hematoxilina-eosina. B. Neuronofagia.
Observam-se clulas da micrglia fagocitando restos neuronais. Hematoxilina-eosina. C. Corpsculo de Negri com 15 m de dimetro. Hematoxilina-eosina.
215
2500
2182
2000
1500
1000
352
500
311
373
120
0
2001
2002
2003
2004
2005
8%
92%
Com alteraes
Sem alteraes
216
2500
2022
2000
1500
1000
500
385
326
308
61
191
192
105
20
0
Cat. 1
Cat. 2
Cat. 3
Cat. 4
Cat. 5
Cat. 6
0.7%
41.6%
46.2%
10.0%
Inflamatrias
Neoplsicas
1.4%
Circulatrias
Degenerativas
Congnitas
Figura 14. Categoria de leses encontradas em 279 encfalos de bovinos com alteraes
histolgicas examinados entre 2001-2005, durante o programa de vigilncia das
encefalopatias espongiformes transmissveis no Laboratrio de Patologia da
Universidade Federal de Santa Maria.
217
Tabela 1. Diagnsticos realizados em 279 encfalos de bovinos examinados entre 20012005, durante o programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes
transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da Universidade Federal de
Santa Maria.
Diagnstico
Nmero de
%
bovinos
Abscessos cerebrais
10
3,6
Babesiose cerebral
19
6,8
Cetose (por outros mtodos)
1
0,3
Compresso medular
1
0,3
Encefalomalacia focal simtrica
6
2,1
Encefalopatia heptica
70
26,0
Febre catarral maligna
13
4,6
Hemorragias traumticas
9
3,2
Hidranencefalia
1
0,3
Hipoplasia cerebelar
1
0,3
Intoxicao por Ateleia glazioviana
3
1,0
Intoxicao por Claviceps paspali
1
0,3
Intoxicao por Solanum fastigiatum
22
7,8
Intoxicao por Vicia spp.
7
2,5
Listeriose
3
1,0
Meningite bacteriana
1
0,3
Meningoencefalite no-purulenta inespecfica
38
13,6
Meningoencefalite por herpesvrus bovino
26
9,3
Meningoencefalite purulenta inespecfica
4
1,4
Neoplasias
4
1,4
Polioencefalomalacia
11
3,9
Raiva
27
9,7
Ttano (por outros mtodos)
1
0,3
Total
279
100%
Tabela 2. Diagnsticos por categoria da amostra realizados em 3.338 encfalos de
bovinos examinados entre 2001-2005, durante o programa de vigilncia das
encefalopatias espongiformes transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da
Universidade Federal de Santa Maria.
Diagnstico
Nmero de bovinos
Categoria 1
326
Abscessos cerebrais
3
Babesiose cerebral
1
Encefalopatia heptica
4
Hemorragias traumticas
3
Intoxicao por Solanum fastigiatum
1
Listeriose
2
Meningoencefalite no-purulenta inespecfica
32
Meningoencefalite por herpesvrus
5
Meningoencefalite purulenta inespecfica
3
Polioencefalomalacia
4
Raiva
3
Sem alteraes histopatolgicas
265
218
Tabela 2. Continuao
Diagnstico
Categoria 2
Abscessos cerebrais
Babesiose cerebral
Cetose (por outros mtodos)
Compresso medular
Encefalite no-purulenta inespecfica
Encefalomalacia focal simtrica
Encefalopatia heptica
Febre catarral maligna
Hemorragia traumtica
Hidranencefalia
Hipoplasia cerebelar
Intoxicao por Ateleia glazioviana
Intoxicao por Claviceps paspali
Intoxicao por Solanum fastigiatum
Meningite bacteriana
Meningoencefalite no-purulenta inespecfica
Meningoencefalite por herpesvrus
Meningoencefalite purulenta inespecfica
Neoplasia
Polioencefalomalacia
Raiva
Sem alteraes histopatolgicas
Ttano (por outros mtodos)
Categoria 3
Encefalopatia heptica
Intoxicao por Solanum fastigiatum
Intoxicao por Vicia spp.
Neoplasia
Sem alteraes histopatolgicas
Categoria 4
Hemorragias traumticas
Listeriose
Meningoencefalite no-purulenta inespecfica
Sem alteraes histopatolgicas
Categoria 5
Sem alteraes histopatolgicas
Categoria 6
Sem alteraes histopatolgicas
Nmero de bovinos
308
7
18
1
1
1
6
57
13
2
1
1
3
1
20
1
3
21
1
1
7
24
117
1
105
9
1
7
3
85
385
4
1
2
378
2022
2022
192
192
219
3022
3500
3000
2500
2000
1500
1000
272
500
23
21
0
Autolisado
Congelado
Partes anatmicas
pertinentes noincludas
Adequado
2500
2096
2000
1500
1000
500
312
4 3 40 73
70
0 16
37
80
314
227
13 1 45
0
2001
Autolisado
2002
Congelado
2003
2004
2005
Adequado
220
2500
2004
2000
1500
1000
500
137 164
300
273
7 18
8 3 24
Cat. 1
Cat. 2
Cat. 3
7 96
80
185
0 0 18
1 06
Cat. 5
Cat. 6
0
Autolisado
Congelado
Cat. 4
Adequado
Figura 17. Nmero de encfalos de bovinos examinados entre 2001-2005, por categoria
da amostra, durante o programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes
transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da Universidade Federal de
Santa Maria.
221
6 DISCUSSO
At 2001, o Brasil possua apenas a vigilncia passiva para BSE, i., baseada na
deteco e notificao compulsria de casos de bovinos com sinais clnicos de
distrbios nervosos observados em ruminantes. A partir de 2002, quando laboratrios de
patologia veterinria foram credenciados pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento (MAPA) (Quadro 5, Figura 8 e Anexo 3 da seo 2), o Brasil passou a
realizar a vigilncia ativa para BSE, que define e testa as populaes de risco (Quadro
6) para a doena. A partir da, gradativamente, maior nmero de encfalos de bovinos e
outros ruminantes foram examinados. Em 5 anos (2001-2005) foram examinados 3.338
encfalos de bovinos no Laboratrio de Patologia Veterinria da Universidade Federal
de Santa Maria (LPV/UFSM). Um estudo retrospectivo realizado no LPV/UFSM
mostrou que de 1964-1999 foram examinados 473 encfalos em 6.021 necropsias de
bovinos (Sanches et al. 2000). Esses nmeros indicam que at a implantao do
programa DXSNC, eram examinados cerca de 13 encfalos de bovinos/ano. Nos cinco
anos aps a implantao do programa, 667 encfalos de bovinos foram analisados a
cada ano, i. o nmero de encfalos examinados anualmente foi 51 vezes maior.
De 3.338 encfalos de bovinos examinados durante os 5 anos, 92% no
apresentaram alteraes histopatolgicas (Figura 12). Alguns desses bovinos
apresentavam sinais clnicos de distrbios nervosos ou tinham doena crnica ou
depauperante (Categorias 1, 2 e 3). Como observado na Figura 12, 81% dos encfalos
de bovinos das Categorias 1 e 3 e 38% dos encfalos do bovino da Categoria 2 no
apresentaram alteraes histopatolgicas. A baixa freqncia de leses histolgicas no
encfalo de bovinos da Categoria 3 compreensvel. Nessa categoria estavam includos
bovinos com doena crnica depauperante ou caquetizante que na grande maioria das
vezes no eram relacionadas com leses no encfalo. Exemplo disso so bovinos
afetados por neoplasmas do trato alimentar superior associados ao consumo de
samambaia, que apresentavam perda de peso progressiva (Moreira Souto et al. 2006).
Na Categoria 2, a ausncia de leses histolgicas em cerca de um tero dos encfalos
examinados, pode ser explicada de trs maneiras: 1) essa categoria inclua bovinos com
doenas que, apesar de produzir sinais clnicos de distrbios nervosos, no produzem
alteraes morfolgicas observveis no encfalo (por ex., ttano, cetose, botulismo); 2)
inclua doenas cujos sinais clnicos mimetizam distrbios nervosos como doenas
musculares (por ex., intoxicao por Senna occidentalis, intoxicao por ionforos) e 3)
222
inclua doenas que apesar de no apresentarem sinais clnicos de distrbios nervosos,
mesmo assim eram relatadas pelo clnico (por vrias razes) como casos neurolgicos.
Esses ltimos casos incluem aqueles em que o clnico sente a necessidade de eliminar
do diferencial doenas como raiva, e desse modo, mesmo que no existisse sinais
clnicos de distrbios nervosos eles seriam mencionados, para justificar o pedido de
exame para raiva. Embora por definio todos os bovinos da Categoria 1 apresentassem
sinais clnicos nervosos, a ausncia de leses histolgicas na maioria dos casos se deve
ao fato de que a inadequada colheita ou fixao do encfalo (Figura 10 da seo 2) torna
difcil a percepo e interpretao dos achados histolgicos. Quarenta e nove por cento
dos encfalos na Categoria 1 apresentavam mau acondicionamento da amostra
(autolisado, congelado ou partes anatmicas pertinentes no-includas). Isso pode
prejudicar o diagnstico de algumas enfermidades que possuem distribuio especfica
de leses no SNC.
Em todos os encfalos de todas as categorias de bovinos analisadas, achados de
pouco significado clnico, associados colheita ou fixao do material foram anotados
nos laudos histopatolgicos. Esses achados foram descritos na seo 3 deste estudo e
devem ser diferenciados de achados associados a doenas para evitar interpretao
errnea. Por exemplo, a conglutinao cerebelar mostrada na Figura 45 da seo 3 j foi
interpretada como leso cerebelar antemortem significativa. Nesse sentido, tambm
importante que os laboratrios adotem critrios de padronizao do diagnstico e
preenchimento dos laudos histopatolgicos.
As doenas diagnosticadas em cada laboratrio credenciado refletem a
prevalncia dessas doenas na regio. Essa afirmao verdadeira, mesmo que o
laboratrio credenciado receba material para exame histopatolgico oriundo de outros
estados do pas. Atualmente, o LPV/UFSM recebe material para anlise histolgica dos
seguintes Estados: Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paran e Gois. A maioria dos
materiais de outros Estados so provenientes de frigorficos (Categorias 5 e 6) e no
apresentam alteraes histopatolgicas (Figura 13).
Dos 2% (279 casos) de encfalos que apresentaram alteraes histopatolgicas,
as leses mais freqentemente observadas foram inflamatrias (46,2%) e degenerativas
(41,6%) (Figura 14). O diagnstico mais prevalente foi encefalopatia heptica (26%),
seguido por meningoencefalite no-purulenta inespecfica (13,6%) e raiva (9,7%)
(Tabela 1). A maior freqncia da encefalopatia heptica est relacionada com sua causa
primria. No Rio Grande do Sul, a causa mais freqente de morte em bovinos adultos
223
a intoxicao por Senecio spp. (Rissi et al. 2007) e a encefalopatia heptica em bovinos
secundria insuficincia heptica que ocorre na seneciose. Trinta e dois dos 38 casos
(84%) de meningoencefalite no-purulenta inespecfica (Tabela 2) so de encfalos
provenientes da Categoria 1, i., de laboratrios da rede oficial que testaram negativo
para raiva. Como foi mencionado anteriormente, 49,6% desses materiais no so
coletados ou fixados adequadamente. Trs principais enfermidades virais cursam com
meningoencefalite no-purulenta no Brasil: raiva, meningoencefalite por herpesvrus e
febre catarral maligna (FCM) (Langohr et al. 2003, Rech et al. 2005, Rech et al. 2006a,
Rissi et al. 2006). Leses histolgicas caractersticas so observadas em cada uma
dessas enfermidades (Barros et al. 2006a), no entanto, na maioria das vezes, essas leses
so observadas analisando diversos fragmentos de diferentes regies anatmicas do
SNC ou de estruturas associadas como o complexo gnglio de Gasser, rete mirabile
carotdea e hipfise (GRH) (Rech et al. 2006c).
A terceira enfermidade mais prevalente foi a raiva (9,7%) seguida por
meningoencefalite por herpesvrus (9,3%). Essa ordem de freqncia j havia sido
observada em levantamento anterior feito no LPV/UFSM (Sanches et al. 2000). No
entanto, no caso da raiva a prevalncia encontrada neste estudo foi 5 vezes menor
(9,7%) do que a observada no estudo anterior (49,5%). O nmero de casos das
alteraes degenerativas quase dobrou em relao ao estudo anterior (24,2% para 42%),
especificamente os de encefalopatia heptica (10,4% para 26%). A diferena na
prevalncia de casos de encefalopatia heptica nos dois estudos se deve ao aumento de
casos de intoxicao por Senecio spp. em bovinos no RS. Provavelmente fatores ligados
ao clima e diminuio do rebanho ovino podem ter contribudo para o o aumento da
incidncia de casos de seneciose bovina. Em um estudo realizado entre 2003 e 2004,
envolvendo casos de seneciose bovina no Rio Grande do Sul foi observada alta
freqncia de encefalopatia heptica nessa intoxicao (Masuda et al. 2005).
A predominncia das alteraes degenerativas sobre as alteraes inflamatrias
reflete, em grande parte, a crescente importncia da intoxicao por plantas em bovinos
na regio de influncia do LPV/UFSM (Rech et al. 2007, Rissi et al. 2007). Dos 279
diagnsticos com leses no encfalo de bovinos, 109 (39%) foram atribudos
intoxicao por plantas (Tabela 1). Dessas, a intoxicao por Vicia spp. (7 casos) foi
includa na categoria de alteraes inflamatrias (Rech et al. 2004). O segundo
diagnstico mais prevalente de intoxicao por plantas, foi a intoxicao por Solanum
fastigiatum (7,8% dos casos). Apesar de a intoxicao por Solanum fastigiatum
224
raramente causar a morte dos bovinos, uma enfermidade que causa acentuados sinais
clnicos de distrbios nervosos (Rech et al. 2006b). As doenas menos prevalentes
foram as alteraes neoplsicas e congnitas (1,4% e 0,7% dos diagnsticos
respectivamente). Nos neoplasmas foram considerados os multicntricos, como o
linfoma (Fighera & Barros 2004), metastticos como o carcinoma de clulas escamosas,
e a extenso direta de carcinoma de clulas escamosas do olho (Barros et al. 2006c) e de
osteossarcoma das fossas nasais. No foi observado neoplasma primrio do SNC. Das
alteraes congnitas (hidranencefalia e hipoplasia cerebelar) foram descritos os
aspectos morfolgicos, mas a causa no foi determinada.
Devido anlise sistemtica do SNC de bovinos, novos diagnsticos foram
adicionados ao programa, por exemplo, encefalomalacia focal simtrica em bovinos
intoxicados por Ramaria flavo-brunnescens (Barros et al. 2006b). Novas leses foram
descritas, por exemplo, diminuio da espessura da camada molecular do cerebelo em
bovinos intoxicados por Solanum fastigiatum (Rech et al. 2006b) e meningoencefalite
granulomatosa em bovinos intoxicados por Vicia spp. (Rech et al. 2004).
Em relao condio da amostra, existe sensvel diferena nos valores quando
se observam as diferentes categorias de bovinos (Figura 17). Como foi mencionado
anteriormente, o ndice de materiais no-adequados na Categoria 1 foi de 49,6% seguido
da Categoria 4 (22%), Categoria 2 (11,3%), Categoria 3 (8,5%), Categoria 6 (3,6%) e
Categoria 5 (0,9%). Esses ndices mostram que o material proveniente dos frigorficos
(Categoria 5 e 6) , em sua grande maioria, adequado para o diagnstico, apesar de
consistir apenas do tronco enceflico. Nos poucos casos em que o material no
adequado, ocorre pela perda de partes importantes do tronco enceflico devido presso
intracraniana provocada pela pistola pneumtica na hora da dessensibilizao. Os baixos
ndices de materiais no-adequados das Categorias 2 e 3 so explicados pelo fato de que
na maioria das vezes esses encfalos so coletados pela equipe do LPV/UFSM em
necropsias a campo. Muitas vezes, mdicos veterinrios da regio enviam a cabea do
bovino e a equipe do LPV/UFSM faz a retirada do encfalo e do complexo GRH. A
Categoria 4 apresenta ndice alto de materiais inadequados. Isso particularmente
preocupante por se tratar de uma das categorias mais visadas para a vigilncia da BSE,
pois esses bovinos so provenientes de pases de risco. Alm disso, o nmero total de
bovinos importados recebidos no perodo de 5 anos do estudo (n=385) muito pequeno.
Pelos dados oficiais do Brasil foram importados, a partir de 1992, 10.626 bovinos, e
pelos dados dos pases exportadores 12.545 bovinos foram exportados para o Brasil
225
(EFSA, Scientific Report 2005).
Quando se compara a condio da amostra em relao aos anos comprendidos
no estudo (Figura 16), observa-se que no houve melhora significativa na colheita
correta do encfalo. De 2003-2005, a percentagem de material no-adequado oscila
entre 11,4%, 37% e 15%, respectivamente. Esses dados indicam que o MAPA deve
continuar com os cursos de padronizao da colheita e remessa do material para exame
histopatolgico, visando a reduo desses nmeros.
226
7 CONCLUSES
Este estudo demonstra que o Brasil desenvolveu um programa de vigilncia
adequado para a BSE. A localizao geogrfica dos laboratrios credenciados, o
treinamento do pessoal desses laboratrios e os mtodos de diagnstico empregados
permitem afirmar, com razovel margem de segurana, que casos clnicos de BSE
seriam detectados caso aparecessem no pas. O estudo, no entanto apontou algumas
falhas nesse sistema de vigilncia. Uma delas a pouca afluncia de material para teste
originrio de bovinos que testaram negativo para raiva, de bovinos importados e de
bovinos de abate de emergncia em frigorficos com inspeo federal; outra so as ms
condies das amostras enviadas para diagnstico.
A partir do estudo sistemtico dos encfalos de bovinos submetidos ao
laboratrio no programa de vigilncia foi possvel estabelecer vrias concluses sobre
doenas comuns do sistema nervoso central (SNC) de bovinos, como raiva, intoxicao
por Solanum fastigiatum, intoxicao por Vicia spp., intoxicao por Ramaria flavobrunnescens, meningoencefalite por herpesvrus bovino, babesiose cerebral e febre
catarral maligna. Essas concluses esto mencionadas nos trabalhos especficos
publicados sobre cada um desses assuntos e includos nesta tese.
O sistema de vigilncia da BSE aumentou significativamente o nmero de
encfalos de bovinos examinados no Laboratrio de Patologia Veterinria (LPV) da
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM). Isso resultou em aumento de material
didtico, favorecendo o ensino de neuropatologia veterinria no LPV/UFSM ao mesmo
tempo em que apontou linhas de pesquisa para outros ps-graduandos do laboratrio
com interesse nessa rea.
Durante o exame de rotina do SNC de bovinos neste estudo foram observados,
anotados e ilustrados vrios artefatos, alteraes de pouco significado clnico e
alteraes postmortem que distraem o patologista das leses realmente importantes
durante o exame de rotina. Conclumos que a catalogao ilustrada desses achados
contribui para que se evitem essas distraes.
Em nosso meio, as enfermidades inflamatrias que produzem leses no encfalo
de bovinos com maior freqncia so raiva, meningoencefalite por herpesvrus bovino e
febre catarral maligna. As enfermidades degenerativas que produzem leses no encfalo
de bovinos com maior freqncia so encefalopatia heptica e intoxicao por Solanum
fastigiatum. Neoplasmas so alteraes de ocorrncia rara no SNC de bovinos.
227
8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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