Mi ARNs

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH
FACULTAD DE CIENCIAS DE INGENIERIA ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL

DE INGENIERIA AMBIENTAL Y SANITARIA
AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN
DEDICATORIA
Dedicamos este trabajo a Dios

y a cada de nuestros padres y
personas que da a da nos
apoyan con lo mejor que
pueden
MICROARNS EN LA BI0LOGIA GENERAL

INTRODUCCIN:
Con el reciente descubrimiento de los microARNs (miARNs), ARNs que no codifican

para protenas, un gran nmero de laboratorios han centrado sus investigaciones en esta
familia de ARNs de pequeo tamao. Los miARNs se encuentran en los genomas de
plantas, animales y virus regulando la expresin gnica, a nivel postranscripcional,
mediante su unin a la regin 3 no traducida (3-UTR) de mARNs especficos.
Dependiendo del grado de complementariedad entre un miARN determinado y su
transcrito diana, el miARN puede desencadenar la degradacin del transcrito diana
(cuando la complementariedad es casi perfecta) o a la inhibicin de la traduccin de la
protena. Aun- que la primera publicacin sobre un miARN apareci hace ms de 20
aos, en los ltimos aos se ha producido un incremento en el nmero y diversidad de
esta clase de ARNs reguladores. Actualmente se est realizando un gran esfuerzo para
determinar cundo, cmo y dnde se producen los miARNs y sus funciones en las
clulas, tejidos y organismos.
Se piensa que cada miARN puede regular mltiples genes y que, en eucariotas
superiores, existen ms de mil genes de miARN.1 Algunos investigadores ya han
mostrado evidencias de que los miARNs pueden actuar Como reguladores de procesos
biolgicos tan diversos Como el desarrollo embrionario, el metabolismo graso, la
secrecin de la insulina, la hematopoyesis, el desarrollo del muscular, la proliferacin y
muerte celular, el desarrollo del cerebro y la diferenciacin y mantenimiento de las
clulas madre

DESCUBRIMIENTO DE (ARNs)
El descubrimiento de los miARNs surgi en los aos setenta de la estrecha colaboracin

entre cientficos, en concreto los tres cientficos que descubrieron el primer miARN
(lin-4) en c. ELEGANT fueron lee, feinbaum y ambros.en un principio estos autores
Esteban interesados en un mutante de lombriz lin-4 descubierto en el laboratorio de
Brenner en Sdney en los aos setenta. Por aquel entonces no se cuestionaban la posible
existencia de ARNs no codificantes o la regulacin antisentido. La clonacin de lin-4
comenz Durante el verano de 1988 y el grupo de ambros fue capaz de clonar Un
fragmento de 700 Pb. Estos cientficos secuenciaron una y otra vez el fragmento varias
veces pero no consiguieron encontrar una orf (open reading frame) o pauta abierta de
lectura en todo el fragmento.
A pesar de los experimentos realizados con este fragmento no fueron capaces de

eliminar su funcin. Fue entonces cuando se dieron cuenta de que lin-4 no poda
codificar para ninguna protena, pues ellos no se esperaban que pudiese transcribirse a
un transcrito de tan slo 22 Pb. En este sentido estos autores no prestaron demasiada
atencin a la seal que apareca en el fondo de los genes en sus ensayos de proteccin
de la RNasa.
A pesar de que ellos comprobaron que no codificaba para ninguna protena, s

comprobaron que lin-4 era esencial para la sincronizacin del desarrollo pos
embrionario de los gusanos. Este descubrimiento fue muy sorprendente, ya que se
saba que la regulacin gnica en eucariotas era llevada a cabo por protenas y no por
molculas
de
ARN.
Fue en mayo de 1992 cuando finalmente los ensayos de

proteccin de RNasa confirmaron que el mayor producto gnico de lin-4 constaba de

22pb
RESUMEN
Los microARNs son pequeas molculas de ARN de simple cadena, no codificante, de
unos 22 nucletidos de longitud, que actan como reguladores de la expresin gnica a
travs de su unin a mensajeros de ARN especficos. Hasta el momento se haban
descrito alrededor de 2.800 microARNs, los cuales estn incluidos en diferentes bases
de datos pblicas. No obstante, este nmero deber actualizarse significativamente a
raz de un reciente estudio de la Universidad Thomas Jefferson, en EE.UU., en el que
sus autores han anunciado el descubrimiento de ms de 3.700 nuevos microARNs en el
genoma humano.
Muchos de los nuevos microARNs se expresan de forma especfica en los tejidos

analizados, lo que apunta a que conforme se analicen nuevos tipos celulares, el nmero
de microARNs identificados aumentar. Esta caracterstica podra ser explotada para
identificar biomarcadores especficos de tejidos o tipos celulares. Adems, cerca de un
57% de los nuevos microARNs son especficos de la especie humana (ms del 94%
nicos de primates) lo que implica que los procesos que regulan son exclusivos de
humanos y podran tener gran relevancia para entender las causas de diversas
enfermedades.
Los microARNs son pequeas molculas que regulan la expresin de genes. No

producen protenas, sino que controlan los ARNs que las hacen y por lo tanto son
jugadores claves en muchos procesos fisiolgicos y de desarrollo. Los investigadores
dijeron que sus resultados sugieren que todava se deben descubrir muchos ms
microARNs (microARNs) en otros tejidos del cuerpo.
Tales descubrimientos probablemente estimulen el descubrimiento de pistas sobre la
forma en la que los microARNs controlan la expresin gnica y posiblemente

clarifiquen las diferencias que existen en la regulacin por microARN entre clulas
normales y cancerosas.
I.
El ARN
1. Qu es el ARN?
El ARN (cido ribonuclico) es un cido nuclico de cadena sencilla compuesto por los
nucletidos Adenina (A), Uracilo (U), Guanina(G) y Citosina (C). En las clulas sirve
como intermediario de la informacin gentica ya que copia sta del ADN y en el
citoplasma dirige la sntesis de protenas segn su secuencia de nuecletidos. Adems de
este ARNm o mensajero otros tipos incluyen el ARNt o de transferencia encargado de
dirigir a cada aminocido a su lugar cuando es requerido en la sntesis proteica y el ARN r
o ribosmico, que formando parte del ribosoma es esencial en la actividad enzimtica de
ste para generar enlaces peptdicos entre aminocidos adyacentes en el proceso de sntesis
de
protenas.
El ARN est compuesto por Adenina, Citosina, Guanina y Uracilo y el azcar que forma el
esqueleto de la cadena junto con el fosfato es ribosa a diferencia del ADN que tiene
desoxirribosa. Esto, y el ser de cadena sencilla le proporciona gran susceptibilidad a ser
degradado por RNAsa por lo que es muy poco estable. El ARN es el cido nuclico clave
en la sntesis de protenas ya que copia la informacin de cada codn de un gen del ADN y
una vez maduro, es decir sin ningn intrn y con los exones unidos, pasa al citoplasma
donde unindose a un ribosoma dirige la sntesis proteica. Los aminocidos que se van
incorporando son facilitados por otro ARN el ARNt o de transferencia del que hay un tipo
al menos para cada aminocido. El ARNt posee una zona que lee el codn por
complementariedad de bases, el anticodn, y una zona por la que une un aminocido
concreto, el correspondiente al codn que lee. Esta unin es mediada por la enzima ARNt
aminoaciltransferasa. Otro ARN es el ARNr o ARN ribosmico. Este ARNr forma parte
del ribosoma y es esencial en el proceso enzimtico por el que se facilita el enlace
peptdico entre el grupo cido de un aminocido y el grupo amino del siguiente
aminocido. Por lo tanto una caracterstica muy importante del ARN como molcula
biolgica es su capacidad bivalente, de almacenar informacin en la secuencia, como el
ADN, y de actuar enzimticamente (ribozimas) como las protenas . Debido a esto se cree

que debi jugar un papel central en el origen de la vida ya que la misma molcula tiene la
capacidad de servir como herramienta bioqumica ( enzima) y de autorreplicarse al ser un
cido nuclico.
2. Descubrimiento e historia
Los cidos nucleicos fueron descubiertos en 1868 por Friedrich Miescher, que los
llam nuclena ya que los aisl del ncleo celular. Ms tarde, se comprob que las
clulas procariotas, que carecen de ncleo, tambin contenan cidos nucleicos. El papel
del ARN en la sntesis de protenas fue sospechado en 1939. Severo Ochoa gan
el Premio Nobel de Medicina en 1959 tras descubrir cmo se sintetizaba el ARN.
En 1965 Robert W. Holley hall la secuencia de 77 nucletidos de un ARN de
transferencia de una levadura, con lo que obtuvo el Premio Nobel de Medicina en 1968.
En 1967, Carl Woese comprob las propiedades catalticas de algunos ARN y sugiri
que las primeras formas de vida usaron ARN como portador de la informacin gentica
tanto como catalizador de sus reacciones metablicas (hiptesis del mundo de
ARN). En 1976, Walter Fiers y sus colaboradores determinaron la secuencia completa
del ARN del genoma de un virus ARN (bacterifagoMS2).
En 1990 se descubri en Petunia que genes introducidos pueden silenciar genes
similares de la misma planta, lo que condujo al descubrimiento del ARN
interferente. Aproximadamente al mismo tiempo se hallaron los micro ARN, pequeas
molculas de 22 nucletidos que tenan algn papel en el desarrollo de Caenorhabditis
elegans. El descubrimiento de ARN que regulan la expresin gnica ha permitido el
desarrollo de medicamentos hechos de ARN, como los ARN pequeos de
interferencia que silencian genes.
-Estructura primaria

Como el ADN, el
ARN est formado por una
cadena de monmeros repetitivos llamados nucletidos. Los nucletidos se unen uno

tras otro mediante enlaces fosfodister cargados negativamente.
Cada
nucletido
est
formado
por
una
molcula
de monosacrido de
cinco carbonos (pentosa) llamada ribosa (desoxirribosa en el ADN), un grupo fosfato, y

uno
de
cuatro
posibles
compuestos
nitrogenados
llamados
bases: adenina, guanina, uracilo (timina en el ADN) y citosina.
Comparacin entre el ARN y el ADN
ARN
ADN
Pentosa
Ribosa
Desoxirribosa
Purinas
Adenina y Guanina
Adenina y Guanina
Pirimidinas
Citosina y Uracilo
Citosina y Timina
Los carbonos de la ribosa se numeran de 1' a 5' en sentido horario. La base

nitrogenada se une al carbono 1'; el grupo fosfato se une al carbono 5' y al carbono 3' de
la ribosa del siguiente nucletido. El pico tiene una carga negativa a pH fisiolgico lo
que confiere al ARN carcter polianinico. Las bases pricas (adenina y guanina)
pueden formar puentes de hidrgeno con las pirimidnicas (uracilo y citosina) segn el

esquema C=G y A=U. Adems, son posibles otras interacciones, como elapilamiento de
bases13 o tetrabucles con apareamientos G=A.
Muchos ARN contienen adems de los nucletidos habituales, nucletidos modificados,
que se originan por transformacin de los nucletidos tpicos; son caractersticos de
los ARN de transferencia (ARNt) y el ARN ribosmico (ARNr); tambin se encuentran
nucletidosmetilados en el ARN mensajero eucaritico.
-Estructura secundaria
Apareamiento de bases complementarias en un ARN de hebra nica.

A diferencia del ADN, las molculas de ARN son de cadena simple y no suelen formar
dobles hlices extensas. No obstante, s se pliega como resultado de la presencia de
regiones cortas con apareamiento intramolecular de bases, es decir, pares de bases
formados por secuencias complementarias ms o menos distantes dentro de la misma
hebra. El ARNt posee aproximadamente el 60% de bases apareadas en cuatro brazos
con estructura de doble hlice.
Una importante caracterstica estructural del ARN que lo distingue del ADN es la
presencia de un grupo hidroxil en posicin 2' de la ribosa, que causa que las dobles
hlices de ARN adopten una conformacin A, en vez de la conformacin B que es la
ms comn en el ADN. Esta hlice A tiene un surco mayor muy profundo y estrecho y
un surco menor amplio y superficial. Una segunda consecuencia de la presencia de
dicho hidroxilo es que los enlaces fosfodister del ARN de las regiones en que no se

forma doble hlice son ms susceptibles dehidrlisis qumica que los del ADN; los
enlaces fosfodister del ARN se hidrolizan rpidamente en disolucin alcalina, mientras
que los enlaces del ADN son estables. La vida media de las molculas de ARN es
mucho ms corta que las del ADN, de unos minutos en algunos ARN bacterianos o de
unos das en los ARNt humanos.
-Estructura terciaria
La estructura terciaria del ARN es el resultado del apilamiento de bases y de los enlaces
por puente de hidrgeno entre diferentes partes de la molcula. Los ARNt son un buen
ejemplo; en disolucin, estn plegados en forma de "L" compacta estabilizada por
apareamientos de Watson y Crick convencionales (A=U, C=G) y por interacciones de
bases entre dos o ms nucletidos, como tripletes de bases; las bases pueden
donar tomos de hidrgeno para unirse al esqueleto fosfodister; el OH del carbono 2'
de la ribosa es tambin un importante dador y aceptor de hidrgenos.
3. Biosntesis del ARN

La biosntesis de ARN est catalizada normalmente por la enzima ARN polimerasa que
usa una hebra de ADN como molde, proceso conocido con el nombre de transcripcin.
Por tanto, todos los ARN celulares provienen de copias de genes presentes en el ADN.
La transcripcin comienza con el reconocimiento por parte de la enzima de
un promotor, una secuencia caracterstica de nucletidos en el ADN situada antes del
segmento que va a transcribirse; la doble hlice del ADN es abierta por la
actividad helicasa de la propia enzima. A continuacin, la ARN polimerasa progresa a lo
largo de la hebra de ADN en sentido 3' 5', sintetizando una molcula complementaria
de ARN; este proceso se conoce como elongacin, y el crecimiento de la molcula de
ARN se produce en sentido 5' 3'. La secuencia de nucletidos del ADN determina
tambin dnde acaba la sntesis del ARN, gracias a que posee secuencias caractersticas
que la ARN polimerasa reconoce como seales de terminacin.
Tras la transcripcin, la mayora de los ARN son modificados por enzimas. Por ejemplo,
al pre-ARN mensajero eucariota recin transcrito se le aade un nucletido de guanina
modificado (7-Metilguanosina) en el extremo 5' por medio de un puente de trifosfato
formando un enlace 5' 5' nico, tambin conocido como "capucha" o "caperuza", y
una larga secuencia de nucletidos de adenina en el extremo 3' (cola poli-A);
posteriormente se le eliminan los intrones (segmentos no codificantes) en un proceso
conocido comosplicing.
En virus, hay tambin varias ARN polimerasas ARN-dependientes que usan ARN como
molde para la sntesis de nuevas molculas de ARN. Por ejemplo, varios virus ARN,
como los poliovirus, usan este tipo de enzimas para replicar su genoma.
4. Tipos de ARN
El ARN mensajero (ARNm) es el tipo de ARN que lleva la informacin del ADN a
los ribosomas, el lugar de la sntesis de protenas. La secuencia de nucletidos del
ARNm determina la secuencia de aminocidos de la protena.21 Por ello, el ARNm es
denominado ARN codificante.
10

No obstante, muchos ARN no codifican protenas, y reciben el nombre de ARN no

codificantes; se originan a partir de genes propios (genes ARN), o son los intrones
rechazados durante el proceso de splicing. Son ARN no codificantes el ARN de
transferencia (ARNt) y el ARN ribosmico (ARNr), que son elementos fundamentales
en el proceso detraduccin, y diversos tipos de ARN reguladores.
Ciertos
ARN
no
codificantes,
denominados ribozimas,
son
capaces
de catalizar reacciones qumicas como cortar y unir otras molculas de ARN, o

formar enlaces peptdicosentre aminocidos en el ribosoma durante la sntesis de
protenas.
4.1 ARN implicados en la sntesis de protenas
-ARN mensajero
El ARN mensajero (ARNm o RNAm) lleva la informacin sobre la secuencia
de aminocidos de la protena desde el ADN, lugar en que est inscrita, hasta
el ribosoma, lugar en que se sintetizan las protenas de la clula. Es, por tanto, una
molcula intermediaria entre el ADN y la protena y apelativo de "mensajero" es del
todo descriptivo. En eucariotas, el ARNm se sintetiza en el nucleoplasma del ncleo
celular y donde es procesado antes de acceder al citosol, donde se hallan los ribosomas,
a travs de los poros de la envoltura nuclear.
-ARN de transferencia
Los ARN de transferencia (ARNt o tRNA) son cortos polmeros de unos 80 nucletidos
que transfiere un aminocido especfico al polipptidoen crecimiento; se unen a lugares
especficos del ribosoma durante la traduccin. Tienen un sitio especfico para la
fijacin del aminocido (extremo 3') y un anticodn formado por un triplete de
nucletidos que se une al codn complementario del ARNm mediante puentes de
hidrgeno.
-ARN ribosmico o ribosomal
El ARN ribosmico o ribosomal (ARNr o RNAr) se halla combinado con protenas para
formar los ribosomas, donde representa unas 2/3 partes de los mismos. En procariotas,
11

la subunidad mayor del ribosoma contiene dos molculas de ARNr y la subunidad

menor, una. En los eucariotas, la subunidad mayor contiene tres molculas de ARNr y la
menor, una. En ambos casos, sobre el armazn constituido por los ARNm se asocian
protenas especficas. El ARNr es muy abundante y representa el 80% del ARN hallado
en el citoplasma de las clulas eucariotas. Los ARN ribosmicos son el componente
cataltico de los ribosomas; se encargan de crear los enlaces peptdicos entre los
aminocidos del polipptido en formacin durante la sntesis de protenas; actan, pues,
como ribozimas.
-ARN reguladores
ARNs Muchos tipos de ARN regulan la expresin gnica gracias a que son
complementarios de regiones especficas del ARNm o de genes del ADN.
-ARN de interferencia
Los ARN interferentes (ARNi o iRNA) son molculas de ARN que suprimen la
expresin de genes especficos mediante mecanismos conocidos globalmente
comoribointerferencia o interferencia por ARN. Los ARN interferentes son molculas
pequeas (de 20 a 25 nuclotidos) que se generan por fragmentacin de precursores ms
largos. Se pueden clasificar en tres grandes grupos:
Micro ARN
Los micro ARN (miARN o RNAmi) son cadenas cortas de 21 22 nucletidos hallados
en clulas eucariotas que se generan a partir de precursores especficos codificados en
elgenoma. Al transcribirse, se pliegan en horquillas intramoleculares y luego se unen a
enzimas formando un complejo efector que puede bloquear la traduccin del ARNm o
acelerar su degradacin comenzando por la eliminacin enzimtica de la cola poli A.
ARN interferente pequeo
Los ARN interferentes pequeos (ARNip o siARN), formados por 20-25 nucletidos, se
producen con frecuencia por rotura de ARN virales, pero pueden ser tambin de origen
endgeno.
12

ARN asociados a Piwi

Los ARN asociados a Piwi son cadenas de 29-30 nucletidos, propias de animales; se
generan a partir de precursores largos monocatenarios (formados por una sola cadena),
en un proceso que es independiente de Drosha y Dicer. Estos ARN pequeos se asocian
con una subfamilia de las protenas "Argonauta" denominada protenas Piwi. Son
activos las clulas de la lnea germinal; se cree que son un sistema defensivo contra
los transposones y que juegan algn papel en la gametognesis.
-ARN antisentido
Un ARN antisentido es la hebra complementaria (no codificadora) de un hebra ARNm
(codificadora). La mayora inhiben genes, pero unos pocos activan la transcripcin. El
ARN antisentido se aparea con su ARNm complementario formando una molcula de
doble hebra que no puede traducirse y es degradada enzimticamente. La introduccin
de un transgen codificante para un ARNm antisentido es una tcnica usada para
bloquear la expresin de un gen de inters. Un mARN antisentido marcado
radioactivamente puede usarse para mostrar el nivel de transcripcin de genes en varios
tipos de clulas. Algunos tipos estructurales antisentidos son experimentales, ya que se
usan como terapia antisentido.
-ARN largo no codificante
Muchos ARN largos no codificantes (ARNnc largo o long ncARN) regulan la expresin
gnica en eucariotas; uno de ellos es el Xist que recubre uno de los dos cromosomas
Xen las hembras de los mamferos inactivndolo (corpsculo de Barr).Diversos estudios
revelan que es activo a bajos niveles. En determinadas poblaciones celulares, una cuarta
parte de los genes que codifican para protenas y el 80% de los lncRNAs detectados en
el genoma humano estn presentes en una o ninguna copia por clula, ya que existe una
restriccin en determinados ARNs.
-Riboswitch
Un riboswitch es una parte del ARNm (cido ribonucleico mensajero) al cual pueden
unirse pequeas molculas que afectan la actividad del gen.Por tanto, un ARNm que
13

contenga un riboswitch est directamente implicado en la regulacin de su propia

actividad que depende de la presencia o ausencia de la molcula sealizadora.
4.2 ARN con actividad cataltica
-Ribozimas
El ARN puede actuar como biocatalizador. Ciertos ARN se asocian a protenas
formando ribonucleoprotenas y se ha comprobado que es la subunidad de ARN la que
lleva a cabo las reacciones catalticas; estos ARN realizan las reacciones in vitro en
ausencia de protena. Se conocen cinco tipos de ribozimas; tres de ellos llevan a cabo
reacciones de automodificacin, como eliminacin de introneso autocorte, mientras que
los otros (ribonucleasa P y ARN ribosmico) actan sobre substratos distintos. As, la
ribonucleasa P corta un ARN precursor en molculas de ARNt, mientras que el ARN
ribosmico realiza el enlace peptdico durante la sntesis proteica ribosomal.
-Espliceosoma
Los intrones son
separados
del
pre-ARNm
durante
el
proceso
conocido
como splicing por los espliceosomas, que contienen numerosos ARN pequeos
nucleares (ARNpn
snRNA). En
otros
casos,
los
propios
intrones
actan
como ribozimas y se separan a si mismos de los exones.

-ARN pequeo nucleolar
Los ARN pequeos nucleolares (ARNpno o snoRNA), hallados en el nuclolo y en
los cuerpos de Cajal, dirigen la modificacin de nucletidos de otros ARN; el proceso
consiste en transformar alguna de las cuatro bases nitrogenadas tpicas (A, C, U, G) en
otras. Los ARNpno se asocian con enzimas y los guan aparendose con secuencias
especficas del ARN al que modificarn. Los ARNr y los ARNt contienen muchos
nucletidos modificados.
-ARN mitocondrial
La mitocondrias tienen su propio aparato de sntesis proteica, que incluye ARNr (en los
ribosomas), ARNt y ARNm. Los ARN mitocondriales (ARNmt o mtARN) representan
14

el 4% del ARN celular total. Son transcritos por una ARN polimerasa mitocondrial
especfica.
5. Genomas de ARN
El ADN es la molcula portadora de la informacin gentica en todos los organismos
celulares, pero, al igual que el ADN, el ARN puede guardar informacin gentica.
Los virus ARN carecen por completo de ADN y su genoma est formado por ARN, el
cual codifica las protenas del virus, como las de la cpside y algunos enzimas. Dichos
enzimas realizan la replicacin del genoma vrico. Los viroides son otro tipo
de patgenos que consisten exclusivamente en una molcula de ARN que no codifica
ninguna protena y que es replicado por la maquinaria de la clula hospedadora.
6. Hiptesis de mundo ARN

La hiptesis del mundo de ARN propone que el ARN fue la primera forma de vida en la
Tierra, desarrollando posteriormente una membrana celular a su alrededor y
convirtindose as en la primera clula. Se basa en la comprobacin de que el ARN
puede contener informacin gentica, de un modo anlogo a como lo hace el ADN, y
que algunos tipos son capaces de llevar a cabo reacciones metablicas, como autocorte
o formacin de enlaces peptdicos.
Durante aos se especul en qu fue primero, el ADN o las enzimas, ya que las enzimas
se sintetizan a partir del ADN y la sntesis de ADN es llevada a cabo por enzimas. Si se
supone que las primeras formas de vida usaron el ARN tanto para almacenar su
informacin gentica como realizar su metabolismo, se supera este escollo.
Experimentos con los ribozimas bsicos, como el ARN viral Q-beta, han demostrado
que las estructuras de ARN autorreplicantes sencillas pueden resistir incluso a fuertes
presiones selectivas (como los terminadores de cadena de quiralidad opuesta).
15

II.
MicroARNs (microARNs) en biologa celular
1. Los microARNs
Los microRNAs (miRNAs) son una clase de pequeas molculas de RNA endgenas
(sintetizadas en la propia clula) con una longitud entre 19 y 22 nucletidos, de cadena
sencilla y no codificantes (no contienen informacin que de lugar a protenas) que
actan como reguladores postranscripcionales, fundamentalmente inhibiendo la
expresin gnica. El avance en su caracterizacin y el incremento de su asociacin con
distintas patologas estn convirtiendo el estudio de los microRNAs en todo un trending
topic de la Biologa Molecular.
El genoma de cada ser vivo es el que determina a qu especie pertenece, su sexo, su
morfologa o incluso su predisposicin a padecer determinadas enfermedades.
Bsicamente, la informacin gentica que pasa de una generacin a la siguiente se
encuentra escrita en el cido desoxirribonucleico (ADN, en ingls DNA). Para que el
mensaje escrito con cuatro letras (adenina, guanina, citosina y timina) en la molcula
de DNA se materialice en forma de sntesis de protenas, debe existir un flujo de
informacin en el cual se copia la secuencia en formato de molculas de cido
ribonucleico (ARN, en ingls RNA). Estas molculas, de composicin qumica similar,
pero ms inestables, se encargan de llevar el mensaje desde el ncleo, que es donde
estn los cromosomas compuestos mayoritariamente por DNA, hasta el citoplasma de la
16

clula, en el cual tiene lugar la traduccin del RNA mensajero que tiene como resultado
la sntesis deprotenas, que son quienes realizan las funciones celulares.
Estos procesos requieren de una estricta regulacin que variar en funcin del momento
fisiolgico del individuo, el tejido al cual pertenezca la clula en cuestin o de si existe
una patologa como el cncer en la que, bsicamente, lo que ocurre es una alteracin de
la regulacin de la funcin celular. Las biomolculas presentes en la clula,
principalmente protenas y cidos ribonucleicos, se encargan de ejecutar dicha
regulacin.
Existen distintos tipos de molculas de RNA. El RNA mensajero (mRNA) es aquel que
se genera como copia de la informacin contenida en los genes (DNA) gracias al
proceso de transcripcin y que, despus de una serie de modificaciones dar lugar a un
mRNA maduro. ste contiene las instrucciones para la sntesis de una protena merced a
la traduccin realizada por los ribosomas. En dicho proceso intervienen tambin otros
dos tipos de RNA: el RNA ribosmico (rRNA), que colabora en la estructura y
funcionalidad de los ribosomas, y el RNA de transferencia (tRNA), que se encarga de
aadir las unidades estructurales de la protena leyendo, segn el cdigo gentico, la
secuencia indicada en el mRNA.
El mRNA contiene las instrucciones adecuadas para la sntesis de una protena. El tRNA
se encarga de traducir el lenguaje escrito en el mRNA en forma de nucletidos a
aminocidos,
que
son
los
componentes
de
las
protenas
(fuente:
http://nexgenbio.com/psrvrnai.htm)
A principios de los aos noventa se caracterizaron las primeras molculas de miRNA,
pero no fue hasta principios de la dcada pasada cuando se comenz a identificar su
funcin. Los miRNAs maduros se producen a partir de un precursor de mayor tamao
(pri y pre-miRNA) que se encuentra codificado en el genoma y regulan determinados
genes diana mediante la unin a regiones complementarias de mRNA. Este
acoplamiento suele tener como resultado un aumento de la tasa de degradacin del
mRNA o una inhibicin de la traduccin. El resultado, en ambos casos, es una
disminucin de la expresin del gen codificado en el mRNA diana.
17

Debido a su participacin en la regulacin de la expresin gnica, cada vez ms son

objeto de estudio para la caracterizacin de ciertas patologas originadas por
alteraciones genticas, como lo es el cncer, y para su posible aplicacin como
marcadores moleculares de pronstico y respuesta a tratamiento.
Actualmente, en funcin de su origen, biognesis y mecanismo efector se distinguen 3
familias principales de pequeos ARN reguladores:
siRNA (pequeos ARN de interferencia)
miRNA (micro ARN)
piRNA (ARN pequeos asociados a protenas Piwi)
2. La familia de los microRNAs.

Los microRNAs estn constituidos por ARN de cadena simple de entre 19-25
nucletidos originados a partir de la transcripcin de genes endgenos por los mismos
sistemas que actan en la generacin de ARNm (DNA polimerasa II). Estos genes se
han descrito mayoritariamente en seres multicelulares tanto de origen vegetal como
animal. En el ser humano se han identificado a la fecha cerca de 700 de los mismos,cifra
que contina aumentando estimndose en ms de 1000 la cifra real. Los microRNAs
son codificados a partir de regiones intergnicas o bien a partir de intrones de genes que
codifican para protenas. Los miRNAs en forma de complejo con protenas especficas
dirigen las actividades efectoras de estos complejos denominados RISC. Estos
reconocen sitios de unin a nivel de las regiones 3 no traducibles de los ARNm.
Mediante esta unin inducen 3 tipos de efectos alternativos: a) inhibicin de la
traduccin (sntesis ribosomal de protenas); b) degradacin del ARNm o c) secuestro de
los ARNm en cuerpos citoplasmticos que inactivan a los mismos.
3. Caractersticas generales de los miRNA
Se asocian a la regin 3 UTR de los ARNm diana.
Hacen falta muchos sitios de unin para activar la respuesta de los miRNA (la
unin de uno solo no produce efectos significativos).
18

Un ARNm puede estar regulado por diferentes miRNA.
Un nico miRNA puede controlar la actividad de cientos de ARNm

diferentes.Los primeros estudios a gran escala publicados en Nature en 2008, que
utilizan
una
variante
de
la
tcnica
de espectrometra
de
masas denominada SILAC (marcado estable de aminocidos con istopos pesados

en cultivo celular, Stable Isotope Labelling with Amino acids in Cell culture) para
detectar las protenas afectadas al reducir o aumentar los niveles de un miRNA
concreto, muestran que en efecto, un nico miRNA puede reducir los niveles de
cientos de protenas mediante el bloqueo de su traduccin, no slo degradando sus
ARNm.El descubrimiento ms llamativo de estos estudios es que los efectos de los
miRNA sobre las protenas son habitualmente bastante modestos, modificando sus
niveles de expresin tan slo en un factor 2. Sin embargo, a pesar de que los efectos
de los miRNA pueden ser sutiles, tambin pueden ser potentes: los miRNA parecen
intervenir en la regulacin de la expresin gnica realizando un ajuste fino, de
forma compleja e interconectada.
La especificidad y la funcin de los miRNA estn determinados por

los nucletidos 2 a 7 de la parte 5' de los miRNA maduros (la llamada regin
"semilla" del miRNA): dichos nts deben ser obligatoriamente complementarios al
ARNm diana.
Un miRNA puede ser funcional aunque no haya sido sintetizado en el ncleo: un

miRNA introducido en la clula por transfeccin puede inhibir eficazmente la
sntesis de protenas. En este caso, como ocurre con los siRNAs, el efecto del
miRNA se puede modular extracelularmente utilizando molculas qumicas
pequeas. En un estudio publicado en agosto 2008, se desarroll un ensayo basado
en clulas para monitorizar la actividad de la ruta del RNAi, y los autores detectaron
que la molcula enoxacin (Penetrex) mejora la degradacin del ARNm mediada por
siRNA, y promueve la biognesis de los miRNA endgenos. Este artculo prueba
que pequeas molculas qumicas pueden mejorar la eficacia de la ruta del RNAi, lo
que podra ser til en el desarrollo de herramientas para la investigacin y
teraputicas.
19

El miRNA es el responsable de la especificiad de sustrato (el ARNm diana) del

miRNP (complejo micro-ribo-nucleo-proteico, el miRNA unido al complejo RISC).
4. Las funciones biolgicas de los microRNAs y su participacin en

la transformacin maligna.
Las evidencias experimentales han demostrado, que los miRNAs participan en procesos
que regulan el desarrollo embrionario y tisular (especialmente hematopoyesis y
desarrollo neural), la apoptosis, proliferacin y diferenciacin celular. Adicionalmente,
el hecho que una fraccin significativa de genes de miRNA mapean en regiones
cromosmicas frecuentemente alteradas en diverso tipo de cnceres humanos,
rpidamente llevo a la idea de su eventual participacin en la iniciacin y progresin del
cncer. Su participacin como nuevos oncogenes o supresores tumorales ha sido
demostrada en linfomas, cncer colorrectal y mamario, cncer pulmonar y tumores del
sistema nervioso central, entre otros.
La funcin de los miRNA est relacionada con la regulacin de la expresin gnica. De
esta forma un miRNA es complementario de una parte de uno o ms ARN mensajeros
(ARNm). Los miRNA de animales suelen mostrar complementariedad imperfecta con la
regin 3' UTR, y generalmente inhiben la traduccin del ARNm, mientras que los de
plantas suelen mostrar complementariedad perfecta con regiones codificantes e inducen
el corte y la posterior degradacin del ARNm diana (como ocurre con los siRNAs en
animales).
Antes de clasificarlos como parte de la ruta del RNAi, los miRNA fueron identificados
inicialmente en gusanos, en los que regulan las fases del desarrollo, pero en la
actualidad se sabe que estn implicados en una amplia variedad de procesos
del desarrollo y podran tener una funcin en el establecimiento de redes y en el ajuste
fino de la expresin gnica en la clula.Dado que el nmero de dianas potenciales de los
miRNA aumenta al nmero de miles (alrededor del 30% de los genes humanos), los
miRNA podran constituir otra capa del circuito regulatorio que existe en las
clulas.10 Segn esto, cualquier desregulacin de los miRNA podra conllevar grandes
problemas regulatorios en la clula, induciendo quiz fenotipos cancerosos. De hecho,
20

se ha mostrado que los perfiles de expresin de los miRNA estn modificados en un

gran nmero de tipos de cncer y que la sobreexpresin forzada de los miRNA podra
conducir al desarrollo de tumores.
-Funcin en la infeccin viral y la respuesta inmune
Funcin anti-viral: el miRNA miR-32 tiene como diana una secuencia presente
en la UTR del extremo 3 de todos los ARNm retrovirales
Funcin pro-viral: el miRNA miR-122, que se expresa especficamente en el

hgado, es necesario para que el virus de la hepatitis C se exprese de manera
eficiente.
Muchos
miRNA
que
estn
regulados
diferencialmente
en
lneas
celulares hematopoyticas tienen funciones importantes en la regulacin del

desarrollo y la funcin de las clulas del sistema inmune, y en las interacciones
husped-patgeno.
-Funcin en cncer
Los miRNA pueden funcionar como supresores de tumores o como oncogenes;
queda por demostrar su influencia concreta en cada tipo de cncer.De hecho, un
estudio mostr que cerca del 50% de los miRNA anotados en humanos estn
localizados en reas del genoma conocidas como sitios frgiles,que estn asociadas
con el desarrollo de cncer.
La expresin de ciertos miRNA est correlacionada con varios tipos de cncer, por
lo que funcionaran como oncogenes. Por ejemplo, un informe de Sonoki y
colaboradores relacion el gen mir-125b-1 con leucemia, y describi un paciente
con leucemia linfoblstica aguda de precursores de clulas B que portaba una
insercin del pre-miRNA en ellocus de la cadena pesada de la inmunoglobulina.
21

Aunque los investigadores no pudieron determinar cmo se modulaba la expresin

de mir-125b-1 en las clulas tumorales, este estudio apoya el papel de este gen
como un oncomir.
La primera indicacin de que los miRNA podran funcionar como supresores
de tumores proceden de un informe de Calin y colaboradores 54 que mostraba que
pacientes diagnosticados con una forma frecuente de leucemia en adultos (leucemia
linfoide crnica de las clulas B o LLC), presentan a menudo deleciones o subregulacin (downregulation) de dos genes de miRNA presentes en un cluster, mir15a y mir-16-1. Deleciones dentro del locus 13q14 ocurren en ms del 65% de los
casos de LLC, y en ms del 50% de los linfomas de las clulas del manto, el 16
40% de los mielomas mltiples y el 60% de los cnceres de prstata. Por tanto, se
predijo que un gen supresor detumores deba residir en esta regin de 30-kb. Es
interesante notar que mir-15a y mir-16-1 mapean dentro del intrn de un gen de
ARN no-codificante para protena, de funcin desconocida, denominado LEU2.
Por otro lado, algunos estudios establecen una conexin entre la reduccin de la
expresin de let-7 (que regula la proliferacin y diferenciacin celular en C.
elegans) y el incremento de la tumorignesis y el pronstico grave de los pacientes
afectados.Adems, durante el desarrollo normal, LIN28 (un promotor de
pluripotencia) puede prevenir la acumulacin de let-7. De acuerdo con estos
resultados, se ha propuesto que let-7 regulara la capacidad pluripotente
(stemness) de las clulas, reprimiendo la auto-renovacin y promoviendo la
diferenciacin, tanto durante el desarrollo normal como en cncer.
Por otro lado, se ha observado adems que los microRNA contribuyen a la
progresin maligna del cncer, especficamente mediando la invasin tumoral y la
formacin demetstasis.
-Funcin durante el desarrollo
Por ejemplo, en C. elegans, los miRNA permiten un paso rpido a travs de las
diferentes fases del desarrollo:57 los miRNA lin-4 y let-7 controlan el momento en los
que se define el destino de las clulas neuronales e hipodrmicas durante el desarrollo
larvario.Lin-4, let-7 y otros genes de miRNA estn consevados en mamferos, y su
22

funcin potencial en el desarrollo embrionario de mamferos estn bajo estudio activo.

En C. elegans, los niveles de expresin de LIN-14 y LIN-28 disminuyen debido a la
expresin del ARN de lin-4 al final del primer estadio larvario, para permitir la
progresin a estadios laravarios posteriores. En los estadios larvarios finales, la
expresin de LIN-41 y otros genes podra verse reducida por la expresin del ARN de
let-7, liberando la represin de la expresin de la protena LIN-29 y permitiendo la
progresin al estadio adulto. Dado que el ARNm de lin-29 no posee sitios
complementarios al ARN de let-7, probablemente lin-29 no es una diana directa de let7.
Por
otro
lado,
en miocitos de
mamferos,
la
activacin
del
factor
de transcripcin SRF induce la expresin de miR-11 y miR-12, que a su vez reprime

la expresin del factor de transcripcin Hand2 y el ligando de Notch, Delta, afectando
por tanto la expansin de las clulas progenitoras o su diferenciacin. SRF tambin
induce la expresin de miR-133a-171 y miR-133a-2,lo que inhibe a su vez SRF en un
lazo de retroalimentacin (feedback loop). En msculo opera una ruta similar, excepto
que la inhibicin por retroalimentacin de Mef2 y MyoD ocurre cuando la expresin
de HDAC4 est reducida debido al silenciamiento ejercido por miR-11 y miR-12.
Uno de los primeros miRNA detectados con una funcin en el desarrollo del sistema
inmune fue miR-181a; este miRNA se expresa en altos niveles en las clulas del timo y
en niveles menores en las clulas del corazn, los ndulos linfticos y la mdula sea.
En la mdula sea, miR-181a se expresa en niveles mayores por clulas B B220+ B que
por clulas T CD3+. Especficamente, la expresin de miR-181a en clulas B derivadas
de la mdula sea disminuye durante la maduracin de las clulas B desde el estadio del
desarrollo de pro-clula-B al estadio pre-clula-B. Adems, la expresin ectpica de
miR-181a en clulas enriquecidas en clulas madre y progenitoras hematopoyticas
result en un incremento en el porcentaje de clulas B CD19+ y un descenso en el
porcentaje de clulas T CD8+ en ensayos de reconstitucin de la mdula sea a corto
plazo en ratones, demostrando que la especificidad de lneas celulares de los miRNA
podra tener una funcin en la regulacin del desarrollo de los linfocitos.
Por otro lado, tambin se ha detectado una distribucin espacial de los miRNA: en
embriones del pez cebra (zebrafish), los patrones de localizacin de miRNA
23

individuales indican que su actividad podra estar limitada a los tejidos y rganos en los
que se expresan. Por ejemplo, miR-206 se expresa sobre todo en el msculo, miR-126 en
los vasos sanguneos y el corazn, miR-200a en el sistema de la lnea lateral (un sistema
mecanosensorial que detecta el movimiento del agua) y rganos sensoriales, y miR30c80 en el precursor de los riones.
-Nuevas funciones maternas
Dos estudios independientes en 2007 en ratones indican que una cantidad significativa
de miRNA maternos se heredan por los zigotos, y que dichos miRNA maternos podran
tener un papel importante en las etapas tempranas del desarrollo embrionario (efecto
materno).
5. Rol de los microRNAs en la hematopoyesis normal y procesos
oncohematolgicos.
Una serie de microRNAs se expresan diferencialmente en los distintos linajes
hematopieticos determinando el destino
y diferenciacin de precursores hacia linajes B o T (miR-181), mieloide (miR-223),
eritroide (miR-221
y 222), entre otros efectos. El anlisis de los perfiles de expresin de estos mcroRNAs
ha revelado su participacin en distintos tipos de procesos malignos de origen
hematolgico. En la leucemia linfoide crnica se he detectado la inhibicin de miR-15 y
miR-16 en pacientes portadores de la delecin 13q14 lo cual se asocia con un aumento
de Bcl-2 el cual es blanco de estos microRNAs.
6. Biognesis de los microRNAs

Casi paralelamente al descubrimiento de los miRNAs, se describi una nueva y efectiva
forma de inhibir la traduccin de los RNAs mensajeros a placer del experimentador.
Esta tcnica consiste en generar un RNA de doble hebra (dsRNA, del ingls "doublestranded RNA") correspondiente a un fragmento del mRNA que se desea interferir. Al
introducir el dsRNA en las clulas, se dispara la degradacin del mRNA endgeno que
comparte las secuencias presentes en el dsRNA. A este fenmeno se le llam
interferencia por RNA o en corto RNAi (del ingls "RNA interference"), el cual ha
24

impactado en gran medida la investigacin bsica en el rea biolgica por constituir una
herramienta que por su versatilidad ha resultado de gran utilidad. Gracias al
descubrimiento del RNAi y a la gran curiosidad que despert su mecanismo de accin,
se empezo a identificar los factores involucrados, ayudando a delinear un modelo muy
detallado. Interaccin de microRNAs con sus mensajeros blanco.
a) Apareamiento de let-7 con el mensajero de lin41. El apareamiento imperfecto ocurre
en la regin 3' no traducida (3'UTR), en dos sitios diferentes.
b) Apareamiento de miR172 con el RNAm de APETALA2 (AP2). El apareamiento casi
perfecto ocurre en la regin codificante de AP2. En ambos casos se muestran los
mensajeros con una caja morada para indicar la regin codificante del RNAm. 136 a b
Flores F, Martnez MA, Arenas C, Covarrubias A y Reyes JL cmo ste se lleva a cabo:
el dsRNA es procesado para generar molculas pequeas de aprximadamente 21 a 22
nucletidos llamados siRNAs (por "small interfering RNAs"), con las mismas
caractersticas bioqumicas de los miRNAs que les permiten utilizar la maquinaria
celular para silenciar RNAms endgenos. Lo ms interesante es que al estudiar el
fenmeno de RNAi se ha descubierto que muchas de las protenas involucradas en esta
va tambin participan en el procesamiento y actividad de los miRNAs . En
consecuencia, se ha podido definir tambin el panorama general de la biognesis de los
miRNAs en animales, los genes de miRNAs se transcriben por las RNA polimerasas II
o III y el transcrito primario es llamado pri-miRNA. En general, se piensa que los primiRNAs son transcritos de varios cientos de nucletidos, aunque en realidad no se ha
hecho un anlisis exhaustivo de las secuencias que los delimitan, ya sea en plantas o
animales. Dentro del pri-miRNA se encuentra una estructura de tallo-asa de entre 60-70
nt conocida como el premiRNA, la cual resulta de su procesamiento en el ncleo de las
clulas animales por un complejo protenico llamado microprocesador, el cual est
formado por Drosha (una RNAsa tipo III) y una protena con dominios de unin a RNA
de doble hebra llamada Pasha. El pre-miRNA es trasladado al citoplasma mediante la
exportina 5 en un proceso dependiente de GTP. Una vez en el citoplasma, sufre otro
procesamiento en el que se remueve el asa terminal y se reduce a una cadena doble de
~21 pares de bases (pb). La remocin del asa es llevada a cabo por otra RNAsa del tipo
III llamada Dicer. Es entonces cuando el RNA pequeo de doble cadena es reclutado al
complejo conocido como RISC (del ingls "RNA Induced Silencing Complex") que es
25

el efector del silenciamiento de los RNAms. En este complejo se encuentra una protena
llamada Argonauta (Ago) cuyas funciones son:
1) Degradar una de las dos hebras del RNA pequeo, producto de Dicer, para dar como
resultado final al miRNA funcional.
2) Posteriormente detener la traduccin cuando la homologa y por lo tanto su
hibridacin es parcial; o por el contrario para degradar al RNAm blanco cuando su
hibridacin con el miRNA es total. En animales, la secuencia o secuencias blanco
reconocidas por los miRNAs se localizan generalmente en las regiones 3' no traducida
de los RNA mensajeros. Las plantas no poseen un complejo microprocesador como en
el caso de animales, sino que en su lugar la protena DCL1 (DICER-LIKE 1, un
homlogo de Dicer) se encarga de procesar los pri-microRNAs a premicroRNAs y
despus stos a RNAs pequeos de doble cadena. Dos distintos transcritos primarios
que pueden ser precursores, ya sea conteniendo uno o varios miRNAs, son
primeramente convertidos por el microprocesador en pre-miRNAs que son llevados al
citoplasma por exportina . El mensajero blanco se muestra unido a ribosomas y a RISC,
con el miRNA dirigiendo la inhibicin de su traduccin. El miRNA se muestra como
una cadena en azul a lo largo de su maduracin. REB 26(4): 135-141, 2007 Biognesis
y funciones de los microRNAs 137 138 Flores F, Martnez MA, Arenas C, Covarrubias
A y Reyes JL Como particularidad, y a diferencia de lo que ocurre en animales, en
plantas existe una modificacin qumica por la cual el extremo 3' del miRNA maduro es
metilado por la protena HEN1. Una vez procesados, los RNAs dplex de
aproximadamente 21 pb son transportados al citoplasma por HASTY (un homlogo de
exportina 5) por un mecanismo dependiente de Ran-GTP y ya en el citoplasma, son
reclutados por el complejo RISC, en donde una de las dos hebras del RNA es degradada
para dar lugar al miRNA maduro. El complejo RISC que contiene a AGO1 y un miRNA
puede entonces encontrar un mensajero blanco (8). Contrario a lo que ocurre en
animales en las plantas la hibridacin microRNA/mRNA es total y se lleva a cabo
generalmente en la regin codificante del mRNA, lo cual dispara la degradacin del
mensajero reconocido. Adems de estas diferencias en la biognesis, en plantas se ha
encontrado una gran diversidad de RNAs pequeos distintos a los miRNAs. Por
ejemplo, el mRNA no-codificante de los genes TAS de Arabidopsis es utilizado como
templado para la generacin de ta-siRNAs (del ingles "transacting siRNAs"), otro tipo
26

de RNAs reguladores pequeos. El transcrito de TAS es inicialmente reconocido y

cortado por un miRNA para poder ser convertido despus a dsRNA por las protenas
RDR6 y SGS. El RNA de doble hebra es procesado posteriormente por otra protena
tipo Dicer, DCL4 a ta-siRNAs de ~21 nt. De esta manera los ta-siRNAs pueden ser
finalmente incorporados en RISC y dirigir el silenciamiento de otros transcritos (8).
Otro tipo de RNAs pequeos reguladores descubiertos en plantas son los nat-siRNAs
("natural antisense transcript siRNAs"). Estos se originan cuando dos transcritos
independientes provenientes de cadenas opuestas de una misma regin Figura 3.
Biognesis y mecanismo de accin ms comn en plantas. En plantas, generalmente el
transcrito primario contiene un solo miRNA. DCL1 se encarga de los primeros pasos de
maduracin para que HASTY exporte el miRNA al citoplasma. Una de las dos cadenas
es seleccionada e incorporada en RISC para dirigir la degradacin el mensajero blanco.
En pocos casos tambin se ha observado la inhibicin de su traduccin. El miRNA se
muestra en color azul. REB 26(4): 135-141, 2007 Biognesis y funciones de los
microRNAs 139 genmica son producidos, lo cual ocurre de forma natural en ciertos
genes. Las regiones comunes de estos mensajeros pueden entonces aparearse, dando
lugar a RNAs de doble hebra. Los dsRNAs resultantes son procesados por DCL2
generando nat-siRNAs de ~24 nt que pueden entonces ser reclutados a RISC y ser
capaces de silenciar transcritos especficos. Al igual que para los miRNAs o los
tasiRNAs, un grupo de protenas especficas son necesarias para la biognesis de los
nat-siRNAs, muchas de las cuales se comparten en las diferentes vias de biognesis (8).
Con esta gran variedad de RNAs pequeos presente en las plantas, surge la pregunta si
algo similar ocurre en animales.
7. Cmo se identifica a un microRNA?

La identificacin de miRNAs es una tarea muy laboriosa y compleja. La razn de ello es
sencilla, no todos los RNAs de 21 nucletidos son miRNAs. Cuando alguien se da a la
tarea de identificar miRNAs por tcnicas de clonacin, la degradacin de RNA es algo
inherente al mtodo que se escoje, sea cual sea la tcnica. As que, entre los cientos y en
algunos casos miles, de secuencias de posibles miRNAs es necesario descartar todas
aquellas de las cuales se sospeche sean un producto de degradacin de un RNA de
mayor tamao. Desafortunadamente, la nica forma de descartarlas es identificndolas
27

una por una y sto slo ocurre despus de haberlas clonado y secuenciado. En general,
los miRNAs slo corresponden a un pequeo porcentaje del total de las secuencias
obtenidas, ya que en su mayora se aislan fragmentos de RNAs ribosomales, fragmentos
de RNAs mensajeros abundantes, de tRNAs, etc., en pocas palabras, es posible clonar
cualquier RNA que se degrade. Entonces, cmo se identifica a un microRNA? Una de
las estrategias ms utilizadas consiste en realizar un anlisis bioinformtico a partir de
los cientos de secuencias de RNAs pequeos obtenidas, comparndolas con diferentes
bases de datos. Todo ello con la finalidad primaria de identificar a qu corresponde cada
una de las secuencias aisladas. De esta manera se eliminan los fragmentos que
corresponden a RNAs previamente conocidos. Sin embargo, no todos los RNAs
depurados corresponden a miRNAs; todava podran existir muchas secuencias que no
hayan sido identificadas que podran ser confundidas con miRNAs. Por lo tanto, el
siguiente paso es ubicar el o los posibles loci en el genoma, y explorar si los posibles
transcritos de estas secuencias en l, pueden formar una estructura de tipo tallo y asa. La
formacin del tallo y asa en la secuncia del locus correspondiente es un requerimento
esencial para considerar a un miRNA como verdadero, aunque no necesariamente todos
los tallos y asas son premiRNAs. Por esta ltima razn se hace obligatorio un anlisis
bioinformtico adicional dirigido a identificar secuencias homlogas conservadas en
otras especies. Por ejemplo, el miRNA let-7 es exactamente igual entre C. elegans, D.
melanogaster y H. sapiens. Por ltimo y como confirmacin, generalmente se hacen
experimentos tipo Northern blot con la finalidad de comprobar la expresin individual
de las secuencias candidato. De esta manera es como se ha registrado una gran cantidad
de miRNAs en la base de datos MirBase (http://microrna. sanger.ac.uk), los cuales son
el resultado de largas horas de depuracin bioinformtica. Muchos microRNA.
muchos blancos? La identificacin masiva de miRNAs ha promovido la generacin de
algoritmos computacionales para poder predecir los posibles mensajeros regulados por
cada miRNA. Basados en los resultados obtenidos de los experimentos bioqumicos del
mecanismo de accin de miRNAs y siRNAs y usando como RNAms blanco genes
reporteros, se tiene una idea de cules son los requerimentos de estabilidad
miRNA/RNAm, lo cual permite que se puedan predecir dichos pares. Para el caso de
plantas, se han hecho numerosos avances en la identificacin de los mRNA regulados
por miRNAs, ya que, generalmente, en estos organismos existen RNAms que presentan
un alto grado de complementariedad con el miRNA, lo cual facilita su identificacin.
28

Sin embargo, en animales, la historia no es as de sencilla; como se mencion arriba, los

miRNAs en animales se unen a su RNAm blanco de manera parcial, sto es, algunas
posiciones no estn apareadas, como es el caso de let-7. Por lo tanto, mientras menos
nucletidos sean necesarios, para el aparamiento, mayor ser el nmero de posibles
secuencias que podran hibridar. Este hecho constituye un paradigma en el estudio de
los miRNAs en animales, ya que se ha estimado que para cada miRNA, podra existir
cerca de 200 blancos posibles y para cada blanco hasta 20 diferentes miRNAs que lo
reconocen. Como podr imaginarse el lector, estas interacciones pueden dar lugar a
redes de regulacin miRNAs/RNAms muy complejas y representan un gran reto para la
dilucidacin de los diferentes mecanismos de control de genes particulares y de grupos
gnicos implicados en procesos particulares. 140 Flores F, Martnez MA, Arenas C,
Covarrubias A y Reyes JL microRNAs y control celular Adems de los procesos
celulares antes mencionados en los que se ha visto la participacin de los miRNAs, se
han encontrado algunas condiciones patolgicas relacionadas con la sobreacumulacin
o la ausencia de los mismos ya que, recientemente, se han descubierto algunos miRNAs
que actan como supresores tumorales u oncogenes al regular blancos involucrados en
el ciclo celular. Por ejemplo, los miRNAs miR-15a y miR- 16-1 regulan negativamente
BCL2, un gen antiapopttico cuyo producto frecuentemente se encuentra aumentado en
leucemias y linfomas (10). En tumores colo-rectales, se ha reportado que los niveles de
expresin de los miRNAs miR-143 y miR-145 estn significativamente reducidos. Los
niveles de miR-1 estn elevados en pacientes con afeccin de la arteria coronaria;
mientras que los niveles de mir-133 estn reducidos en pacientes con hipertrofia
cardiaca (12, 13). Por otro lado, en A. thaliana, adems de la participacin en el control
del desarrollo, se ha encontrado miRNAs involucrados en la regulacin de la percepcin
de nutrientes.El miRNA miR-395 se expresa en deficiencia de sulfato afectando la
expresin de enzimas involucradas en la asimilacin del mismo y el miRNA miR-399 se
expresa en respuesta a la deficiencia de fosfato, teniendo como blanco al transcrito del
gen UBC24 que codifica para una enzima involucrada en la degradacin de protenas.
Finalmente, incluso se ha identificado a un nat-siRNA como importante en la respuesta
a estrs salino en A. thaliana. As, los microRNAs no slamente son importantes como
reguladores del desarrollo celular o reguladores que previenen o promueven ciertas
enfermedades, sino como molculas que mantienen el equilibrio metablico general.
Retos a futuro Evidentemente, para los investigadores interesados en los mecanismos
29

bsicos de los miRNAs, el reto ms importante a largo plazo es identificar el nmero

real de miRNAs en las diferentes especies, as como encontrar los RNAms que son
regulados por stos, todo ello con el fin de integrar las diferentes redes de control que
pudieran existir en un organismo dado para un proceso determinado. Considerando el
nmero creciente de miRNAs que se registran en el MirBase, sta tarea no ser nada
fcil. Esto, sin tomar en cuenta el papel regulador que puedan tener los otros RNAs
pequeos existentes en la clula, tales como los ta-siRNAs, natsiRNAs, piRNAs u otros
cuya existencia an no hemos descubierto. Una idea que ha entusiasmado tanto a
investigadores como a las grandes compaas farmacuticas es el uso del fenmeno de
RNAi. A la fecha se ha intentado utilizar esta metodologa utilizando RNAs pequeos
de doble cadena (siRNAs) para inducir el silenciamiento de RNAms blanco especficos
por la va de RNAi, sin embargo, este tipo de herramientas se ha visto enriquecida con
la posibilidad de silenciar el transcrito que se desee, utilizando miRNAs artificiales,
dise- ados especficamente para el blanco deseado. Sin embargo, ahora el reto ms
grande en el desarrollo de este tipo de tecnologa es hacer llegar el miRNA de una forma
efectiva a la clula o tejido blanco. An con estas limitaciones, el potencial de esta
tecnologa deja abierta la esperanza de poder utilizarla en el diseo de terapias para
contrarrestar enfermedades que afectan al humano como el SIDA, el cncer, las
enfermedades neurodegerativas, etc. Cabe mencionar que esta metodologa se ha
convertido en una herramienta poderosa que, junto con el RNAi, ha ampliado las
posibilidades para el anlisis de diferentes procesos biolgicos en organismos diversos
ya que, permite disminuir o anular (silenciar) la produccin de una protena dada,
emulando la generacin de mutaciones dirigidas en genes especficos. Sin duda, un
conocimiento ms profundo de cmo los RNAs pequeos se regulan, cmo funcionan y
qu procesos celulares regulan estos, impactar no slo al mayor y mejor entendimiento
de los mismos, sino que tambin incrementar el potencial utilitario de esta herramienta
para resolver diversos problemas que aquejan a la raza humana y al medio ambiente que
la rodea.
8. Modo de funcionamiento
A pesar del importante progreso realizado en la comprensin de la biognesis y la
funcin de los miRNA, los mecanismos utilizados por los miRNA para regular la
30

expresin gnica permanecen bajo un intenso debate.En efecto, existen trabajos

publicados que indican que los miRNA en clulas animales reprimen la expresin
gnica de cuatro formas diferentes:
Degradacin de la protena durante la traduccin
Inhibicin de la elongacin de la traduccin
Terminacin prematura de la traduccin (disgregacin de los ribosomas)
Inhibicin de la iniciacin de la traduccin
Adems, los miRNA en animales pueden inducir una degradacin significativa de los
ARNm diana (como los miRNA de plantas), a pesar del apareamiento imperfecto
ARNm-miRNA. Sin embargo, el mecanismo de degradacin suele ser diferente: los
miRNA inducen la degradacin de los ARNm diana mediante la eliminacin de la
caperuza (en el extremo 5') y de la cola de poliadeninas (poly-A, en el extremo
3').Finalmente, los microARN podran tambin silenciar sus ARNm dianas
secuestrndolos en foci (sitios) citoplsmicos discretos, los cuerpos de procesamiento de
ARNm o P bodies, que carecen de maquinaria de traduccin. Sin embargo, a pesar de
las discrepancias existentes entre los diferentes mecanismos propuestos, los apoyos
experimentales para cada mecanismo son variados, y son el objeto actual de intensos
estudios, para tratar de elucidarlas. Se ha sugerido que las diferencias observadas se
deben a deficiencias en los experimentos realizados, en algunos casos originadas por la
utilizacin de modelos errneos en los estudios de regulacin de la traduccin.
Por ltimo, en estudios recientes se ha detectado que en determinadas condiciones, los
miRNA pueden tambin activar la sntesis proteica.
microRNAs: futuro prometedor en el tratamiento del cncer
9. Mecanismo de accin de los miRNAs

Los mecanismos por los que un microRNA lleva a cabo la regulacin de la expresin
proteica se han estudiado ampliamente. En un proceso mediado por un complejo
31

proteico llamado RISC (RNA-induced silencing complex) los microRNAs maduros

actan a modo de conductores, dirigiendo la represin hacia RNAs mensajeros diana.
Un microRNA en su extremo 5 tiene una regin conocida como seed (semilla) de
unos 8 nucletidos de longitud y que es vital para que se de el correcto reconocimiento
del RNA mensajero diana cuya traduccin debe ser reprimida. Un solo microRNA
puede tener mltiples RNAs mensajeros diana, o al revs: varios microRNAs pueden
actuar sobre un mismo RNA mensajero diana en un mecanismo de sinergia.
El hecho de que un microRNA reconozca o no a su diana y se lleve a cabo la represin
de la traduccin depende principalmente de la complementariedad de bases entre los
nucletidos que conforman la regin semilla en el extremo 5del microRNA y los
nucletidos del extremo 3UTR del RNA mensajero diana.
Cuando este apareamiento de bases es perfecto o completo, el mecanismo de represin
mediado por ribonucleasas del complejo RISC induce el corte del RNA mensajero
diana y por lo tanto una reduccin de los niveles proteicos finales. No obstante, cuando
el apareamiento de bases entre la regin semilla del microRNA y el 3UTR del RNA
mensajero es incompleto o imperfecto, los microRNA actan de nuevo a travs del
complejo RISC pero de una forma diferente, ya que reprimen la traduccin proteica
del RNA mensajero diana pero no daan su estructura mediante la accin de
ribonucleasas, como ocurra en el caso anterior. As, se reducen los niveles proteicos de
su producto final pero los niveles del RNA mensajero permanecen intactos.
Dado esto, su accin como reguladores de la expresin proteica se resume a:
ser inductores directos de la degradacin de mRNAs diana, represores directos de la
maquinaria de traduccin y, por lo tanto, reguladores indirectos a su vez de la
proliferacin y diferenciacin celular.
10. Papel de los microRNAs en los procesos oncolgicos

La relacin entre microRNAs y cncer es cada vez ms evidente y ello suma inters a la
figura de estos RNA reguladores. El desarrollo y la aparicin de un cncer a nivel
32

molecular es fruto principalmente de alteraciones o mutaciones en las protenas

encargadas de controlar la proliferacin y el ciclo celular (tales como MYC,
protenas de la familia RAS, supresoras de tumores como p53, etc.). Los niveles de
estas mismas protenas en una clula son a su vez controlados mediante represin
post-transcripcional,
en
muchas
ocasiones
por
los micoRNAs, de
tal
forma
que alteraciones en la secuencia de un microRNA o en su biognesis guiarn

ineludiblemente a la modificacin de su expresin proteica y consecuentemente a la
desregulacin de estos procesos de proliferacin y diferenciacin celular. Esto, en
conjunto, produce un aumento del riesgo a padecer un determinado tipo de cncer.
En resumen, si la protena objeto de regulacin por un microRNA es una molcula

clave en el control del ciclo celular, cualquier fallo en el proceso de control por parte del
microRNA puede ser susceptible de desembocar en alteraciones cancergenas. A
continuacin, se adjuntan unos grficos propios acerca de los procesos por los que un
microRNA puede actuar como desencadenante de un proceso tumoral:
a) Funcionamiento fisiolgico de un miRNA en la clula.
b) Mecanismo a travs del cual un microRNA puede promover el desarrollo tumoral: la
reduccin en la cantidad que se produce de un microRNA (supresor de tumores)
encargado de reprimir la expresin gnica de una protena oncognica dirigir la
funcin celular hacia la formacin de un tumor. En esta foto, dicha reduccin en la
carga del microRNA puede deberse a un defecto gentico en cualquier etapa de su
biognesis (marcadas con smbolo de interrogacin), que definitivamente guie la
situacin hacia una expresin defectuosa del microRNA.
c) Mecanismo a travs del cual una alteracin en la biognesis de un microRNA puede
promover el desarrollo tumoral. En este caso, se da la amplificacin de la biognesis o
sobreexpresin de un microRNA oncognico (cuya funcin normal es reprimir la
expresin de un supresor de tumores), que gua hacia una menor actividad de supresin
tumoral y que establece el caldo de cultivo perfecto para el desarrollo del tumor.
Adems de estos mecanismos, cualquier alteracin gentica en la regin semilla 5de un
33

microRNA puede provocar que ste cambie su diana y altere cascadas de sealizacin
que provoquen por su parte el desarrollo tumoral.
11.
Investigacin de miRNAs y sus aplicaciones
Actualmente, la investigacin se centra en identificar y asociar qu alteraciones

genticas de la secuencia de los propios microRNAs o de protenas implicadas en
su biognesis estn directamente relacionadas con la aparicin de qu tipos de
cncer y, de esta forma, emplear estas molculas como marcadores sanguneos de
prediccin y de diagnstico de procesos tumorales.
Dado que estamos hablando de transcriptmica (DNA ya transcrito a RNA), la
fiabilidad es mayor que si estudiamos polimorfismos de DNA y por ello, el diagnostico
o prediccin basado en microRNAs es un mtodo que puede incrementar en gran
medida las posibilidades de deteccin precoz (con alta precisin) de patologas tan
prevalentes en nuestra sociedad como son cncer de mama, coln, pulmn, prstata, etc.
Diversas entidades del sector estn actualmente desarrollando kits que permitan,
mediante una biopsia lquida (extraccin sangunea, menos invasiva y ms cmoda para
el paciente), detectar biomarcadores como microRNAs a travs de una forma rpida
sencilla y fiable.
No detectar con margen de actuacin suficiente diversas patologas como el cncer
suele ser una de las principales causas de mortalidad. Por tanto, la capacidad de usar los
microRNA puede suponer un cambio radical en la deteccin prematura de patologas
con elevada prevalencia en la sociedad,
incrementando las posibilidades de
supervivencia de los pacientes. Adems, los microRNAs nos permiten detectar aquellos
patrones de expresin en sangre que cientficamente se asocian a una recuperacin ms
o menos rpida tras una operacin quirrgica, o una respuesta ms o menos favorable
frente a un tratamiento farmacolgico, permitiendo diferenciar la respuesta de
los pacientes frente a distintos tratamientos, optimizando as los beneficios y
permitindonos ofrecer la conocida medicina personalizada.
34

Las aplicaciones de los microRNA no se limitan a la deteccin con potencial

diagnostico o predictivo. Al actuar como verdaderos puntos de control de la expresin
gnica podemos, adems, desarrollar terapias que permitan la introduccin de
microRNAs en clulas tumorales a modo de molculas teraputicas que redirijan la
traduccin proteica de una clula maligna hacia una expresin de genes supresores de
tumores y una represin de genes oncognicos causantes de la enfermedad que reduzca
su malignidad, mejorando as la respuesta del paciente.
Las evidencias sugieren que la combinacin de esta nueva terapia con los frmacos
tradicionales podra llegar a conseguir grandes avances en la mejora de la calidad y
esperanza de vida de los pacientes. Aunque la investigacin de microRNAs an est
siendo desarrollada y no hay resultados concretos que nos permitan la aplicacin de
estas terapias, son numerosos los ensayos clnicos que estn demostrando que son una
herramienta prometedora en el tratamiento del cncer y otras enfermedades.
12.MECANISMOS QUE ALTERAN LA EXPRESIN DE miRNAs

EN EL CNCER HUMANO
La expresin alterada de los miRNAs es el principal mecanismo que desencadena su
ganacia o prdida de funcin en las clulas cancergenas. La activacin de factores de
transcripcin oncognicos como myc es otro importante mecanismo que altera la
expresin de los miRNAs.47 Otra va puede ser la ocurrencia de aberraciones
cromosmicas, ya que el aumento de la expresin de los miRNAs se ha asociado con
amplificacin genmica38 y la disminucin de su expresin se ha asociado con delecin
cromosomal, adems de otros mecanismos como las mutaciones puntuales y la
metilacin aberrante de los promotores.48 Por otra parte, la represin global de la
biognesis de los miRNAs emerge como un mecanismo cncer-especfico, ya que las
mutaciones en componentes clave de la maquinaria de procesamiento de los miRNAs,
como Drosha, DICER1 y XPO5 promueven la transformacin maligna y la
carcinognesis.
35

13. APLICACIONES CLNICAS DE LOS miRNAs

Teniendo en cuenta que la expresin alterada de los miRNAs est relacionada con el
desarrollo del cncer y la formacin de metstasis, ellos tienen un gran potencial para
funcionar como biomarcadores para el estado de la enfermedad y la progresin, as
como para el diagnstico, el pronstico, la clasificacin y la evaluacin de factores de
riesgo. En este sentido, ellos presentan algunas ventajas como el hecho de que los
miRNAs maduros son relativamente estables, el estudio de su expresin no requiere de
grandes cantidades de muestra, se pueden medir en biopsias de tejido fresco e incluso se
han detectado en tejido fijado en formalina y embebido en parafina. Estudios recientes
demuestran que tambin pueden ser medidos en algunos fluidos biolgicos como
suero/plasma o saliva, lo que ofrece una va menos invasiva para el pesquisaje.Los
perfiles de expresin de miRNAs han sido utilizados para distinguir muestras tumorales
de tejidos normales, para identificar tejido tumoral de origen desconocido o de tumores
pobremente diferenciados, as como para distinguir diferentes subtipos
de
tumores. Algunas alteraciones de los miRNAs ocurren en pacientes a etapas tempranas,

por lo que pueden ser tiles para la deteccin precoz del cncer.
Desde el punto de vista pronstico, se ha demostrado su utilidad como indicador del
resultado clnico, de la tendencia a la recurrencia y la metstasis y, adicionalmente,
puede ser predictor de la respuesta a un determinado tratamiento. Los miRNAs no se
han detectado solo en el tejido canceroso, sino tambin en el tejido circundante, por lo
que pueden servir para detectar alteraciones en el microambiente del tumor. Se sospecha
que el polimorfismo de nico nucletido (SNPs, por sus siglas en ingls) dentro de los
genes que codifican miRNAs o sus blancos moleculares, es perjudicial y puede
aumentar el riesgo de un individuo a desarrollar enfermedades como el cncer.
Se han explorado algunas estrategias con fines teraputicos para normalizar la expresin
de los miRNAs. Una de ellas tiene el objetivo de reducir la expresin de los miRNAs
con accin oncognica. Para ello se han sintetizado oligonucletidos-modificados antimiRNAs (OMAs), conocidos como "antagomirs", que son complementarios a los
miRNAs endgenos y permiten su inhibicin de una manera especfica. Para su
36

aplicacin en la clnica ser necesario alcanzar su liberacin efectiva en el tejido blanco,

aspecto que se encuentra en investigacin. De igual forma, se ha desarrollado un nuevo
tipo de inhibidores de miRNAs llamado "miRNA esponjas", que contienen mltiples
sitios para unir a los miRNAs diana y son capaces de inhibirlos con la misma eficacia
que los OMAs.Otra estrategia consiste en elevar la expresin de miRNAs con funcin
de supresores tumorales. Esto puede lograrse utilizando liposomas, polmeros,
nanopartculas o vectores virales, que contengan los miRNAs con expresin reducida y
de esta forma restaurar sus niveles normales. Estos novedosos diseos todava requieren
de una evaluacin ms exhaustiva para que constituyan oportunidades teraputicas para
los pacientes con cncer.
14.PERSPECTIVAS FUTURAS
Las investigaciones sobre miRNAs deben enfocarse en la identificacin de firmas
moleculares tejido-especficas que regulen las metstasis; explorar los miRNAs que
desempean un papel importante en la regulacin de las clulas madres cancergenas;
traducir los avances del laboratorio en el desarrollo de nuevos marcadores pronsticos y
nuevas estrategias teraputicas, as como desarrollar nuevas tcnicas para la deteccin
de miRNAs.
METODOLOGIA
37

TECNICA DE TRIZOL PARA EXTRACCIN DE ARN

1. HOMOGENIZACIN
- En un tubo Eppendorf de 1.5 mL, homogenizar el pellet de clulas blancas (obtenidas previo
sometimiento de sangre total a gradiente de Ficoll-Hypaque para obtencin de PBL- leucocitos
de sangre perifrica) con 1 mLde reactivo TRIZOL
- Mezclar suavemente por pipeteo con micro pipeta
2. FASE DE SEPARACIN
- Incubar la muestra homogenizada durante 5 minutos a temperatura ambiente,
permitiendo as la completa disociacin de los complejos de nucleoprotenas
- Adicional 200ul de cloroformo, tapar perfectamente el tubo
- Agitar fuertemente durante 15 segundos
- Incubar por 2 a 3 minutos a temperatura ambiente y en posicin vertical
- Centrifugar las muestras a 10000rpm (o 12000g) por 10 minutos preferiblemente a
temperatura de 2 a 8C
- Luego de centrifugar, la mezcla se separa en una fase inferior roja, fase de fenol
cloroformo, en una interfase y en una fase incolora superior, la cual contiene
exclusivamente el ARN
3. FASE DE PRECIPITACIN
- Transferir la fase acuosa cuidadosamente a un tubo Eppendorf nuevo (aqu puede
separarse igualmente la fase orgnica para posterior purificacin de ADN o protenas)
Adicional 0.5 mL de isopropanol para precipitar el ARN de la fase acuosa
- Incubar el tubo por 10 minutos a temperatura ambiente y en posicin vertical

- Centrifugar a 10000rpm (o 12000g) por 10 minutos, preferiblemente a temperatura de
2 a 8C
- El ARN debe verse precipitado antes de la centrifugacin como un pellet parecido a un
gel.
4. FASE DE LAVADO
38

- Remover el sobrenadante cuidadosamente y eliminarlo

- Adicionar 1 mL de etanol al 75% al pellet para lavarlo
- Mezclar por agitacin
- Centrifugar a 6000rpm por 5 minutos preferiblemente a 2- 8 C
- Eliminar cuidadosamente el sobrenadante
5. FASE DE DISOLUCIN
- Secar a temperatura ambiente, colocando el Eppendorf con el ARN sobre
una toalla de papel estril
- Adicionar 30ul de agua libre de RNAsas
- Disolver el RNA por pipeteo suave, opcionalmente puede incubarse 10
minutos a 55-60C para lograr una completa disoluci
Homogenizar pellet de clulas

blancas con TRIzol
Adicionar cloroformo
39

Separacin de fases
Tomar la fase acuosa
Adicionar isopropanol
Descartar el sobrenadante
Adicionar etanol al 75% al pellet.
Mezclar
Eliminar el sobrenadante
Dejar secar a T ambiente

Adicionar agua libre de RNAsas
y homogeniza
DISCUSIONES
40

Los microRNAs regulan genes vinculados a procesos tales como desarrollo,

diferenciacin celular, apoptosis, seales de transduccin, organognesis y proliferacin
celular, entre otros. Actualmente, en funcin de su origen, biognesis y mecanismo
efector se distinguen 3 familias principales de pequeos ARN reguladores:
- siRNA (pequeos ARN de interferencia)
- miRNA (micro ARN)
- piRNA (ARN pequeos asociados a protenas Piwi).
HEMATOLOGIA, Vol. 12 N 2: 44-45 Mayo-Agosto, 2008
Los microRNAs (miRNAs) son una clase de pequeas molculas de RNA endgenas
(sintetizadas en la propia clula) con una longitud entre 19 y 22 nucletidos, de cadena
sencilla y no codificantes (no contienen informacin que d lugar a protenas) que
actan como reguladores postranscripcionales, fundamentalmente inhibiendo la
expresin gnica. El avance en su caracterizacin y el incremento de su asociacin con
distintas patologas estn convirtiendo el estudio de los microRNAs en todo un trending
topic de la Biologa Molecular.
El genoma de cada ser vivo es el que determina a qu especie pertenece, su sexo, su
morfologa o incluso su predisposicin a padecer determinadas enfermedades.
Bsicamente, la informacin gentica que pasa de una generacin a la siguiente se
encuentra escrita en el cido desoxirribonucleico (ADN, en ingls DNA). Para que el
mensaje escrito con cuatro letras (adenina, guanina, citosina y timina) en la molcula
de DNA se materialice en forma de sntesis de protenas, debe existir un flujo de
informacin en el cual se copia la secuencia en formato de molculas de cido
ribonucleico (ARN, en ingls RNA). Estas molculas, de composicin qumica similar,
pero ms inestables, se encargan de llevar el mensaje desde el ncleo, que es donde
estn los cromosomas compuestos mayoritariamente por DNA, hasta el citoplasma de la
clula, en el cual tiene lugar la traduccin del RNA mensajero que tiene como resultado
la sntesis de protenas.
41

CONCLUSIONES
Desde su descubrimiento y hasta el da de hoy los micro-ARNs se han

convertido en uno de los temas ms estudiados y abordados; por lo cual,
actualmente se encuentra disponible gran cantidad de informacin que ha
llevado a comprender mejor y facilitar el entendimiento de los procesos
biolgicos en que estn involucrados los micro ARNs, de manera muy especial
los relaciones con regulacin de la expresin gnica. No obstante, y a pesar de
toda la informacin existente, an quedan muchos mecanismos por comprender
y descifrar totalmente, pero el entender la generacin del micro ARN es el paso
inicial en esta tarea.
miR- 155 es el micro ARN ms claramente asociado con la inflamacin
provocada por el alcohol en diferentes tejidos.
Las molculas de micro-ARN son necesarias para que el mensaje de los genes
sea efectivo, ya que se trata de elementos regulatorios de la expresin gnica que
actan en el punto intermedio que lleva del gen a la protena, en el llamado
ARN mensajero.
Un micro- ARN puede regular unos 200 mensajeros diferentes, de forma que los
cambios o variantes pueden tener un efecto multiplicativo en la regulacin,
haciendo que se desajuste el proceso y se produzcan consecuencias graves.
42

RECOMENDACIONES
Los grandes avances de la genmica y la protemica han propiciado la creacin

de colecciones de muestras biolgicas y de biobancos destinados a la
investigacin biomdica. Estas colecciones, y sus mltiples datos asociados,
permitirn realizar estudios longitudinales, obtener subproductos como ADN o
ARN e incluso prever estudios futuros. Para mantener la integridad de las
muestras se debern disear desde el principio los procedimientos de obtencin,
transporte, subproductos que se obtendrn, condiciones de conservacin, destino
final y bioseguridad, as como disponer de una supervisin adecuada de los
equipos.
El control de todas estas condiciones proporcionar valor aadido a las
muestras, ya que permitir asegurar su calidad y trazabilidad. Nos proponemos
ofrecer una visin general de las recomendaciones relativas a la seguridad
biolgica, transporte y conservacin de muestras biolgicas destinadas a la
investigacin biomdica en el mbito de las enfermedades respiratorias, de
acuerdo con la legislacin vigente.
Para que estas muestras tengan valor diagnstico y a la vez puedan utilizarse en
la investigacin habr que cumplir una serie de protocolos. Algunos de ellos
sern muy generales, mientras que otros sern ms especficos del tipo de
muestra o del mbito de estudio. La calidad de las muestras vendr dada tanto
por su rpida obtencin como por un correcto procesamiento y transporte hasta
el laboratorio. Todo ello es tan importante como su conservacin a largo plazo.
43

BIBIOGRAFIA
Prescott, L. M., Harley, J. P., y Klein, D. A. Microbiologa. 4 edicin. McGrawHill Interamericana, 1999.
Madigan, M. T., Martinko, J. M., y Parker, J. Brock Biologa de los
Microorganismos. 10 edicin. Prentice-Hall. Madrid, 2003.
Daz, R., Gamazo, C, y Lpez-Goi, I. Manual prctico de Microbiologa. 2
edicin. Masson, S.A. Barcelona, 1999.
P. de Kruiff. Los cazadores de microbios. 2 edicin. Aguilar, Madrid, 1960.
ANEXOS
44

45

46

47

Mi ARNs

Загружено:

Сведения о документе

Оригинальное название

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

Mi ARNs

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

FACULTAD DE CIENCIAS DE INGENIERIA ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

Dedicamos este trabajo a Dios

MICROARNS EN LA BI0LOGIA GENERAL

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

Con el reciente descubrimiento de los microARNs (miARNs), ARNs que no codifican

MICROARNS EN LA BI0LOGIA GENERAL

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

El descubrimiento de los miARNs surgi en los aos setenta de la estrecha colaboracin

A pesar de los experimentos realizados con este fragmento no fueron capaces de

A pesar de que ellos comprobaron que no codificaba para ninguna protena, s

Fue en mayo de 1992 cuando finalmente los ensayos de

MICROARNS EN LA BI0LOGIA GENERAL

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

proteccin de RNasa confirmaron que el mayor producto gnico de lin-4 constaba de

Muchos de los nuevos microARNs se expresan de forma especfica en los tejidos

Los microARNs son pequeas molculas que regulan la expresin de genes. No

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

MICROARNS EN LA BI0LOGIA GENERAL

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

ARN est formado por una

cadena de monmeros repetitivos llamados nucletidos. Los nucletidos se unen uno

cinco carbonos (pentosa) llamada ribosa (desoxirribosa en el ADN), un grupo fosfato, y

bases: adenina, guanina, uracilo (timina en el ADN) y citosina.

Comparacin entre el ARN y el ADN

Los carbonos de la ribosa se numeran de 1' a 5' en sentido horario. La base

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

Apareamiento de bases complementarias en un ARN de hebra nica.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

3. Biosntesis del ARN

MICROARNS EN LA BI0LOGIA GENERAL

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

MICROARNS EN LA BI0LOGIA GENERAL

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

No obstante, muchos ARN no codifican protenas, y reciben el nombre de ARN no

de catalizar reacciones qumicas como cortar y unir otras molculas de ARN, o

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

la subunidad mayor del ribosoma contiene dos molculas de ARNr y la subunidad

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

ARN asociados a Piwi

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

contenga un riboswitch est directamente implicado en la regulacin de su propia

como ribozimas y se separan a si mismos de los exones.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN

6. Hiptesis de mundo ARN

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - UNH

AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN