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Iniciacin de embriognesis somtica en explantes florales de Cacao

(Theobroma cacao)
Eder Durango Ballesteros, Maracay 2009
Escuela socialista de agricultura tropical

INTRODUCCIN
Las tcnicas de cultivo de tejidos contribuyen a mejorar el sistema de multiplicacin de las
especies, ya que es capaz de mantener la uniformidad gentica de genotipos deseables. La
embriognesis somtica (ES) es un sistema que permite obtener clones con una
arquitectura dimrfica normal y un sistema radical de gran anclaje, adems de los otros
potenciales que esta tcnica presenta para el mejoramiento gentico, intercambio y
conservacin de material (Maximova et al., 2002) Recientemente, Li et al. (1998)
desarrollaron un mtodo eficiente de produccin de embriognesis somtica a partir de
explantes florales.
METODOLOGA

Colecta de botones florales de cacao. Los botones florales se colectaron de plantas de


cacao adultas, establecidas en el campo de la Estacin Experimental del INIA, en horas de
la maana (8-9 a.m.), seleccionando botones florales inmaduros de cacao de 3-5mm de
longitud y se depositaron en frascos de vidrio limpios conteniendo agua destilada fra. Se
transportaron al laboratorio en una cava con hielo.

En el laboratorio, los botones florales se sometieron a un shock trmico de de 5C por 30


minutos.

Desinfeccin de botones florales. Se realiz con solucin de cloro al (1%) por 10 minutos
con agitacin constante; el exceso de cloro se elimin con 3 lavados con agua destilada
estril cada uno de 5 minutos.
Induccin de callos. Los botones florales se transfirieron a una cpsula de Petri estril,
para realizar la diseccin de los mismos (Figura 1) con ayuda del estreo microscopio.

Figura 3. Diseccin de los botones florales con ayuda del estereoscopio


Los estaminoides y los ptalos (Figura 2) extrados de los botones se colocan en un medio
de cultivo DKW (Driver & Kuniyuki, 1984) + 22,7 nM TDZ suplementados con 80 g/L de
sacarosa y 4 mg/L de 2,4-D. Se utilizaron botones entre 3.3 a 5 y 5.6 a 6mm de longitud,
siguiendo la metodologa aplicada por Velsquez, 2005.

Ptalos

Estaminoides

Figura 2. Posicin de les estaminoides y ptalos en los botones florales

RESULTADOS Y DISCUSIN
Los ptalos y estaminoides se sembraron en la misma placa de petri (Figura 3), 5 en cada
lado de la placa, observndose contaminacin exgena por hongos en 6 de las 15 placas
de petri sembradas (Tabla 1)
TABLA 1. Materiales sanos y contaminados en Estaminoides y ptalos de Cacao
Estaminoides y ptalos de cacao
Sin Contaminar (%)
Contaminacin exgena (%)

Contaminacin endgena (%)


60

B*

H*

L*

0
0

40
40

40

*B =Bacterias, H=Hongos, L =Levaduras

Ptalo
s

Estaminoidesb
s

Figura 3. Distribucin de los ptalos y estaminoides en la placa de petri


Transcurridas 3 semana se observo en algunas ptalos un aumento de tamao, sin que se
notara formacin de callos (Figura 4), hasta la fecha de la observacin, los estaminoides
algunos parecan haberse secado y los otros no presentaban cambio en su forma. De
acuerdo con VELSQUEZ et al, 2006, los estaminoides son los explantes que mejor
resultado dieron para la induccin de callos embriognicos en los distintos genotipos, al
utilizar una concentracin de 80g l-1 sacarosa y 4 mg l-1 2,4-D. Sin embargo, el genotipo
Porc.-UCV fue el nico que form ES en las distintas fases de desarrollo, demostrndose
as diferencias entre los genotipos evaluados.

Figura 4. Explantes de ptalos con un ligero aumento de tamao

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Velsquez R, Y. Sandrea, C. Betancourt, J. Mata (2006). Embriognesis somtica


en cultivares de cacao venezolano. Agronoma. Trop. 56: 61-74.

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