Aula 1 - Tcnicas de preparo de amostra

1. O que torna a anlise de alimentos algo complexo? E quais os pontos

crticos de uma anlise?
A anlise de um alimento complexo por causa da quantidade de componentes de
sua matriz, que se interferem. Os pontos crticos de uma anlise comeam a partir
da amostragem, preparao da amostra, instrumentao, erros, analista e a anlise
propriamente dita.
2. Quais qualidades um mtodo analtico deve ter? O que deve ser
considerado para a escolha de um mtodo?
Exatido, preciso, sensibilidade, especificidade, simplicidade, anlise simultnea,
aplicabilidade, custo/tempo, rusticidade e consideraes ecolgica.
Para se escolher um mtodo, preciso considerar o que o analista ir determinar, a
quantidade de amostra e do componente.
3. Em relao ao componente analisado, indique um limitante entre a
escolha de um mtodo clssico ou convencional ou uma tcnica sofisticada.
Um limitante entre a escolha de mtodos a quantidade relativa do componente
analisado. Para componentes maiores de 1%, pode-se usar o mtodo clssico, e
para menores, uma tcnica mais sofisticada.
4. Quais as 4 tcnicas de extrao em amostras?
Extrao em fase gasosa, fludo supercrtico, lquidos e sorbentes.
5. Discorra sobre a finalidade das operaes de preparo de amostras:
a) Pr-concentrao
Compatibilizar:
- a capacidade de processamento do sistema cromatogrfico;
- a sensibilidade de deteco do sistema;
- demanda do processo analtico.
b) Clean-up/ Limpeza da amostra
Eliminar compostos que possam danificar o sistema cromatogrfico; materiais que
possam interferir com a deteco/quantificao dos analitos de interesse.
6. Qual o princpio dos principais mtodos de preparo de amostras?
O princpio dos mtodos de preparo de amostra obter amostras de tamanho
reduzido com maior especificidade ou seletividade na extrao.
7. Analise o princpio bsico de operao, os fundamentos tericos, e os
matrias usados dos seguintes processos fsico-qumicos de separao:
a) Partio
No mtodo de partio, os analitos so extrados de uma matriz para um solvente
extrator, formando uma soluo. Esses analitos so extrados da matriz at que
ocorra o equilbrio.
Solventes utilizados: orgnicos (hidrocarbonetos (hexano, pentano, ter de
petrleo) e organoalogenados (clorofrmio e diclorometano), polmeros (acima da

temperatura de transio vtrea, estes tm comportamento de solvente similares

aos de lquidos convencionais).
b) Adsoro
A amostra passa atravs de um tubo contendo um slido adsorvente, onde os
analitos ficam temporariamente retidos. Esse processo envolve pelo menos duas
etapas, adsoro e dessoro.
A superfcie dos slidos adsortivos possuem um nmero finito de stios ativos, por
onde as molculas se ligam atravs de: atrao entre dipolos - foras de van der
Walls (Fisissoro) ou ligaes qumicas covalentes (Quimissoro).
So utilizados como slidos adsorventes: carves (carvo ativo); compostos
inorgnicos (materiais baseados em alumina, Al2O3, e slica, SiO2); compostos
orgnicos.
c) Volatilizao
Os analitos so evaporados seletivamente separando-se da matriz e interferentes.
8. Discorra sobre extrao lquido-lquido. Quais procedimentos
convencionais e alternativos?
Na extrao descontnua (procedimento convencional) utiliza-se um funil de
separao, onde ambos os solventes so adicionados. Com a agitao do funil de
separao, o soluto passa a fase na qual est o solvente com maior afinidade. A
separao feita, ento, sendo que a fase mais densa recolhida antes. A extrao
lquido-lquido descontnua indicada quando existe uma grande diferena de
solubilidade do soluto nos dois solventes (grande valor de KD)
Na extrao lquido-lquido contnua (procedimento alternativo), o solvente orgnico
passa continuamente sobre a soluo contendo o soluto, levando parte deste
consigo, at o balo de aquecimento. Como o solvente est sendo destilado, o
soluto vai se concentrando no balo. um processo til para quando a diferena de
solubilidade do soluto em ambos os solventes no muito grande (baixo valor de
KD).
9. Discorra sobre extrao em fase slida. Quais os modos de operao?
Quais as vantagens, desvantagens e limitaes?

Aula 2 - Espectrofotometria no UV-Visvel

1. Quais os trs tipos de transies eletrnicas?
Transies do tipo -> *: alta energia UV (pouco utilizado);
Transies do tipo n -> *: energia menores que -> * (150 a 250 nm);
Transies do tipo n -> * e -> *: entre 200 e 700 nm, apresentam menores que
anteriores, efeito salvatocrmico: bandas se deslocam para diferentes comprimentos de onda
com a variao do solvente. (mais utilizado).
2. Complete:
a) A luz ultravioleta __________ o suficiente para que transies de
eltrons aconteam nas camadas mais distante dos tomos.

b) A absoro da radiao UV ou visvel geralmente resulta da ressonncia

de eltrons de ligao.
c) UV-visvel:
necessrio haver ligaes de duplas conjugadas, ou
_________ no __________.
d) Quanto maior o nmero de ligaes duplas conjugadas, maior o
comprimento de onda da _________. Assim para anlise no visvel
necessrio mais de __________ duplas ______________.
3. Quais os nveis energticos de excitao? Faa um esquema ilustrando.
4. Defina cromforo e auxocromo.
Cromforo: Compostos que absorvem radiao UV/VIS. Possuem duplas ligaes
conjugadas.
Auxocromo: elementos qumicos ligados ao cromforo que podem variar a absoro
de energia dessa molcula. Normalmente possuem eltrons mal pareados, ou seja,
eltrons livres que ajudam a estabilizar a energia de ressonncia.
5. Analise a instrumentao bsica de um espectrofotmetro.
Consiste em fonte, atenuador ou fenda, monocromador ou filtro, cela para a
amostra, detector, amplificador e registrador.
- Fonte: deve gerar uma radiao contnua, contendo todos os comprimentos de
onda da regio espectral; deve ter porncia suficiente para ser detectada; deve ser
estvel, com potncia constante, principalmente no espectrofotometro de feixe
simples.
- Atenuador ou fenda: Controla a passagem de luz. No deve ser grande para
permitir passar mais de um tipo de . Deve ter um tamanho ideal para que no haja perda
de sensibilidade.
- Monocromador ou filtro: Seleciona uma banda ou um nico comprimento de onda
da radiao total emitida pela fonte. Podem ser trs tipos: prisma, filtros ou rede de
difrao.
- Cela para amostras: Cubetas. Dois tipos: para a regio do visvel, qualquer
material transparente como vidro ou plstico; e regio ultra-violeta, cubeta de
quartzo, pois a de vidro absorve a radiao emitida.
- Detector: fotoclulas que detectam a quantidade de radiao aps passarem pela
amostra. Um detector ideal possui alta sensibilidade, alta razo de sinal/rudo,
resposta constante a um grande intervalo de comprimentos de onda, tempo rpido
de resposta, mnimo sinal de sada na ausncia de iluminao, sinal eltrico
diretamente proporcional radiao.
6. Quais as fontes de radiao, e quando usar cada uma?
- Lmpada com descarga de hidrognio ou deutrio- utilizada na regio UV - 200 400 hm. A potncia radiante da lmpada de deutrio 3X maior.
- Lmpada de tungstnio - utilizada na regio visvel - 320 - 2500 nm.
7. Para anlise no visvel, quais cubetas eu posso usar?
Podem ser utilizadas qualquer material transparente, sendo o vidro e o plstico
mais comuns. As cubetas mais eficientes possuem janelas paralelas e bem polidas.

Suas espessuras variam de acordo com a quantidade do material analisado. de

1cm, 0.1cm para pequenas quantidades e de 10cm para amostras muito diludas.
8. Quais os critrios de escolha de um solvente?
preciso levar em conta aspectos como transparncia, solubilidade da amostra,
interao entre solvente e soluto, pureza grau-espectromtrico. Na regio visvel
pode-se usar gua destilada ou qualquer lquido incolor. Na regio UV, solventes
que no absorvam a energia nesta regio. Ou seja, que no possuam duplas
ligaes conjugadas, p.e. gua ou hidrocarbonetos saturados.
9. Como selecionar o melhor comprimento de onda?
Para obter mxima sensibilidade, medidas espectrofotomtricas devem ser
realizadas no comprimento de onda referente ao mximo de absoro. No mximo,
ocorre uma maior linearidade da relao absorbncia x concentrao.

Aula 3 - Colorimetria e Fluorscencia Molecular

1. Defina absortividade.
Capacidade que um mol de substncia tem de absorver luz a um dado comprimento
de onda.
2. Defina Colorimetria. Quais os requisitos para a aplicao desta tcnica?
Cite exemplos na anlise de alimentos.
A colorimetria o tipo de anlise feita nos alimentos. utilizado em compostos que
no absorvem bem as ondas nem no UV ou visvel.
Para se aplicar este tipo de anlise preciso ter uma relao linear entre o
composto colorido formado e o de origem; estabilidade do composto colorido;
especificidade.
Aplicado em Protenas, Aminocidos, Vitaminas A, B, C, D e E, Carboidratos, entre
outros.
3. Quais compostos fluorescem? Quais componentes do meio afetam essa
capacidade?
A fluorescncia favorecida em molculas com estruturas rgidas, uma vez que ao
fornecer energia em forma de radiao, o gasto de energia voltado para a
emisso de luz. Em molcula que no possuem rigidez estrutural, o gasto de
energia voltado para a forma de trabalho para fazer com que as molculas girem.
As principais variveis que afetam a fluorescncia a estrutura molecular e o
ambiente qumico. Esses fatores tambm determinam a intensidade de emsso e
quando a iluminescncia ir ocorrer.
4. Quais as vantagens e desvantagens de se analisar por fluorescncia?
Vantagens: maior sensibilidade, maior seletividade, faixa linear extensa.
Desvantagens: nmero limitado de molculas pode produzir luminescncia

Aula 4 - Espectroscopia no Infravermelho

1. Qual faixa de comprimento de onda a radiao infravermelho abrange? E
a luz visvel? E o UV ?
Infravermelho: 8 ~ 300m;
Luz visvel: 380 ~ 800nm;
UV prximo: 200 ~ 380nm;
UV no vcuo: 100 ~ 200nm.
2. Que tipo de molculas absorvem no Infravermelho? Discorra sobre
vibraes moleculares (tambm detalhe quais os tipos).
Este tipo de radiao no energtica o suficiente para causar transies
eletrnicas. Por isso, absorvem o infravermelho, as molculas que sofrero uma
mudana no momento de dipolo como consequncia de sua rotao/vibrao.
As vibraes moleculares tm frequencia nica e nunca param, dependem da fora
de ligao entre os tomos e da massa de cada tomo. Se a frequncia da radiao
coincidir com a frequncia vibracional da molcula, ocorrer a transferncia de
energia efetiva, resultando na alterao da amplitude da vibrao molecular. Como
consequncia, a molcula absorve a radiao.
Os
tipos
de
vibrao
so:
- de estiramento: os tomos se movem ao longo do eixo de ligao;
- de flexo ou deformao: envolvem movimentos do tomo fora do eixo de
ligao;
- de esqueleto: o esqueleto do grupo (p.e. anel benznico) vibra (estiramento e
flexo);
- combinadas: soma ou diferena de outras vibraes.

Aula 5 - Espectrometria de massas

1. Defina espectrometria de massas.
Tcnica analtica potente usada para identificar produtos desconhecidos, para
determinao quantitativa de compostos e esclarecer propriedades estruturais e
qumicas das molculas.
2. Comente sobre a instrumentao utilizada.
3. Discorra sobre a Ionizao por eltrons (EI).
4. Discorra sobre Electrospray Ionization (ESI).
Nesse processor ocorre a nebulizao da amostra. Quando sai da cromatografia
liquida, sai misturado a fase mvel com o solvente e os analitos de interesse. Ao
nebulizar a amostra, ocorre a transformao do lquido em microgotculas, que vai
entrar num sistema de evaporao. Conforme vai evaporando o solvente, como se
tem analitos com carga, comea a ocorrer a repulso das cargas, fazendo com que
ocorra a exploso de Coulomb das gotculas em tamanhos ainda menores. Isso
ocorre at o analito ficar na forma gasosa, isento de solvente.

Esse processo pode ser usado em molculas ionizadas de baixo peso molecular,
compostos que so ons em soluo, compostos que apresentam muitas cargas em
soluo, compostos que apresentam heterotomos, compostos que podem aceitar
uma carga por induo. Para este tipo de anlise, deve-se evitar compostos
apolares, onde a induo de cargas ineficiente.
5. Quais analisadores m/z, e qual o princpio.