PRACTICA NRO 8

MICROCULTIVO DE HONGOS
I.-INTRODUCCION
Los hongos ambientales son microorganismos que se encuentran
ampliamente distribuidos en la naturaleza , en el aire , agua tierra , sobre
cualquier sustrato orgnico en descomposicin , contaminan los ambientes
hmedos , alimentos reactivos , medios de cultivo material de laboratorio
muestras patolgicas , estos hongos desarrollan en 2-3 dias en medios de
cultivo selectivos, los mas comunes son : Aspergillus , Rhizopus ,
Penicilium , fusarium .
II.-OBJETIVOS:
-Observar los procesos de evolucin y desarrollo mediante observaciones
peridicas hasta obtener una perfecta formacin de las estructura de los
hongos.
- Adiestrar al estudiante al estudio microscpico de los hongos.
III.-MATERIALES:
Placas petri con agar sabouraud
Laminas portaobjeto estril.
Laminillas cubreobjeto estriles
Placas Petri estriles
Frascos con agua destilada estril.
Pinzas
Bistur
Vidrios para soporte tamao que las placas Petri.
IV.-PROCEDIMIENTO:
1. En condiciones estriles con la ayuda de un bistur cortar el agar en
pequeos rectngulos aproximadamente de 1x 0.5 mm y de 2-3 mm
de espesor.

2. Colocar en una placa petri estril los vidrios soporte estriles con la
ayuda de una pinza, luego colocar una lamina portaobjeto.

3. El bloque de agar colocar sobre la lamina portaobjeto.

4. Sembrar con una asa de kolle una pequea porcin de hongo y
cubrir con la laminilla cubre objeto.
5. Adicionar de 10-15 ml. de agua destilada estril en el interior de la
placa
6. dejar en un sitio limpio a temperatura de ambiente de 18-20 C de
3 5 das

7. Sacar el cubre objeto y colocar sobre una lamina limpia con la cara
hacia arriba y examinar con el microscopio con los objetivos de
10X y 40X.

CONCLUSIN
Para concluir podemos decir que se cumplieron los objetivos esperados al emplear
la tcnica del microcultivo y al poder diferenciar las estructuras morfolgicas de los
hongos examinados. Existen muchas diferencias entre las estructuras de los
hongos zigomicetos y los hongos ascomicetos.

CUESTIONARIO.

1. Que diferencia existe entre la tcnica bacteriolgica y

micolgica.

DIFERENCIAS
TCNICA BACTERIOLGICA
seleccin,
recoleccin
y
el
transporte de una muestra
Evitar la contaminacin de la
muestra
con
flora
normal
asegurando
una
muestra
representativa
del
proceso
infeccioso.

TCNICA MICOLGICA.
Conjunto
de
operaciones
y
observaciones de laboratorio
Permite el estudio morfolgico e
identificacin de los hongos y de
cuyo resultado se llega a la
sistemtica de los hongos y de
cuyo resultado se llega a la
sistematica de esos organismos
Se
deben
utilizar
solamente Conocer las caractersticas y
recipientes estriles
utilidad de los materiales de uso
frecuente en el laboratorio
Cada
muestra
debe
estar Conocer las principales tcnicas en
adecuadamente rotulada.
el estudio de los hongos.
2. Que es un cultivo puro en tcnicas micolgicas.
Un cultivo que contiene una poblacin de una nica especie.
Los cultivos puros son esenciales en el proceso de fabricacin del
micelio (" semilla") en los hongos. Cultivos puros: son aquellos que
contienen un solo tipo de microorganismo. El modo de obtener estos cultivos consiste
en obtener colonias aisladas, que provienen de una sola clula (son clones).

Caractersticas de los cultivos puros

Las colonias deben ser iguales en forma, tamao y color.

Que no existan formas inhibidas.

Al microscopio deben tener un aspecto comn.

Tiene que tener iguales propiedades tintoriales

Deben ser bioqumicamente y fisiolgicamente iguales..

Una regla importante es no coger nunca de la primera colonia

3. Que otra tcnica resulta til en la identificacin de los
hongos.

Preparacin en fresco
Se realiza empleando el procedimiento descrito a continuacin:

1.

Seleccionar una colonia aislada.

2.

Calentar a la llama el alambre de un asa de siembra, y

doblar de forma que se convierta en un objeto cortante.

3.

Con la ayuda del asa, extraer un fragmento triangular de

la colonia que contenga adems un poco de agar en la
parte inferior.

4.

Depositar el fragmento extrado sobre un portaobjetos en

el cual, previamente, se ha depositado una gota de azul de lactofenol.

5.

Cubrir con un portaobjetos y presionar suavemente para dispersar la colonia y el agar;

de esta forma, la muestra est disponible para su observacin al microscopio.

Preparacin con cinta de celofn adhesiva

El procedimiento se lleva a cabo como sigue :

1.

Apoyar el lado engomado de un trozo de cinta adhesiva

transparente sobre la superficie de una colonia.

2.

Colocar la cinta bien extendida sobre una gota de azul de

lactofenol o azul de anilina colocada, a su vez, sobre un
portaobjetos.

3.

Observar al microscopio para conocer la forma y ordenamiento caracterstico de las

esporas.

Cultivo sobre portaobjetos

Se realiza empleando el procedimiento descrito a continuacin:

1.

Cortar un bloque pequeo de un medio slido adecuado (agar), que ha sido vertido en
una cpsula de Petri, hasta una altura de 2 cm. El bloque puede cortarse con la ayuda
de un bistur estril o con un tubo de ensayo estril sin reborde (lo que permite obtener
un taco redondo).

2.

Colocar un portaobjetos estril sobre una capa de agar al 2% contenida en una cpsula
de Petri.

3.

Colocar el bloque de agar sobre el portaobjetos.

4.

Con una asa de siembra cuyo alambre ha sido doblado en ngulo recto, inocular los
cuatro cuadrantes del taco con el microorganismo a
identificar.

5.

Colocar un cubreobjetos estril sobre la superficie del

bloque de agar.

6.

Tapar la cpsula de Petri que contiene el cultivo e incubar a

30o C.

7.

Finalizado el perodo de incubacin, retirar el cubreobjetos

(este proceso debe realizarse en una cabina de seguridad biolgica), y colocarlo en un
portaobjetos que contenga azul de lactofenol o azul de anilina.

8.

La observacin al microscopio permite distinguir la forma y disposicin de las esporas.

4 Que relaciones encuentra entre los medios de cultivo

utilizados en micologia con requerimientos nutricionales
para su desarrollo.
Todos los medios de cultivo utilizados han de contener los nutrientes
suficientes para asegurar el desarrollo de los hongos (carbono,
nitrgeno, vitaminas, etc). El pH ha de ser ligeramente acido para
facilitar el crecimiento de los hongos e inhibir al mismo tiempo el
desarrollo de otros microorganismos
Generalmente se utiliza medios de cultivo diferentes, ya sea en placa
o en tubo.

Medios de cultivo en placa: tienen la ventaja de ofrecer una

gran superficie para el aislamiento y para soportar la
deshidratacin durante el largo periodo de incubacin a que
vana ser sometidos (un mes o mas), contienen una gruesa capa
de medio (25 a 40ml). Son ms peligrosos a la hora de su
manipulacin y fciles de contaminan.
Medio de cultivo en tubo: tienen una superficie de trabajo
mucho ms pequea, pero ofrecen mxima seguridad en su

manipulacin y buena resistencia a la deshidratacin y a la

contaminacin.