REA DE SUSTENTABILIDAD PARA EL DESARROLLO

PROGRAMA ACADMICO DE QUMICA

ESPECIALIDAD TECNOLOGA AMBIENTAL
GRUPO
QU-301
MATERIA
MICROBIOLOGA AMBIENTAL
TITULO
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS
DE LA MATRIZ AMBIENTAL: ______SUELO_____
ASESORA
Dra. ROSA RICO MATA
DATOS DE IDENTIFICACIN DE LOS ANALISTAS
Fecha de inicio del anlisis: 03/07/2015
Fecha de trmino: 10/07/2015
Nombre
Cargo
Becerra Calvillo Rubn Isaas
Responsable
Martnez Sarabia Diana Aurora del
Administrador
Roco
Gonzlez Daz Jos Luis
Martnez Sarabia Diana Aurora del

Laboratorista 1
Laboratorista 2

Roco
Becerra Calvillo Rubn Isaas
Martnez Sarabia Diana Aurora del

Laboratorista 3
Muestreador

Roco

GENERACIN: 2014-2016

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DATOS DEL SITIO EN ESTUDIO

1.- Breve descripcin del estatus ambiental del sitio de estudio:
El sitio de estudio es una zona poco transitada con gran cantidad de rboles y pasto lo cual nos da
un ndice de que el sitio de estudio es un rea fresca. Este sitio tiene bastante materia orgnica
como hojas secas y gran diversidad de organismos vivos como hormigas, moscas, sancudos y
chirrioneros.
Nombre
Ubicacin
Imagen de mapa satelital
/coordenadas
GPS
Universidad
Tecnolgica de Len

Blvd.
Universidad
Tecnolgica
#225 col. San
Carlos
Coordenadas:
101 34' 43.57" W,
21 3' 42.69" N

SITIO DE
MUESTRE
O

Fig.1 Sitio a muestrear (Google maps.com)

2. Evidencia fotogrfica del sitio

Fecha: 06/07/2015
2:15

Hora:

Fecha: 06/07/2015

Fig.2 planta de tratamiento

Hora: 2:20

Fig.3 sito a muestrear

DATOS DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR

1. Identificacin
Hora de toma de muestra: 2:20
Hora de siembra: 2:30 pm
pm
Punto de Muestreo (ubicacin /coordenadas
Tiempo de exposicin (aplica solo para muestra
GPS):
de aire)
101 34' 57.07" W, 21 3' 46.98" N
N/A
Nombre del/ los analistas que tomaron la
Nombre del/ los analistas que sembr la
muestra:
muestra:
Becerra Calvillo Rubn Isaas
Martnez Sarabia Diana Aurora del Roco
Matriz ambiental: Suelo

2.Parmetros Fisicoqumicos
Color: Caf obscuro

Temperatura (o C) ambiental: 26C

pH: 6.7

Olor: Tierra hmeda

Describir condiciones climatolgicas: Da

nublado, viento moderado.

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3. Evidencia fotogrfica del sitio de toma de muestra

Fig. 4 Zona especfica del muestreo

Fig.5 Excavacin superficial para la recolecta de

la muestra

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
1. Justificacin del proceso para la identificacin bacteriana
Se llev a cabo la recoleccin de la muestra dentro de la Universidad Tecnolgica de
Len ya que sta tiene una planta de tratamiento que tiene como fin llevar a cabo el
tratado de toda el agua residual generada por la misma universidad, as pues, se opt por
tomar la muestra de los alrededores de la planta debido a la gran cantidad de agua
residual que puede llegar a filtrarse por la tierra. Adems que, para la identificacin de
microorganismo se requieren de ciertos factores como; el ser humano, ya que en ellos se
encuentran la mayor parte de los microorganismos a identificar, esto a travs de la orina
o heces fecales producidas por el mismo ser humano.
2. Dos medios de siembra (Nombre y Receta)
Agar Mac Conkey
Peptona..17.0
musculo de corazn.0.375
Pluripeptona3.0
Peptona..10.0
Lactosa.10.0
sodio5.0
Mezcla de sales biliares1.5
Agar.15.0
Cloruro de sodio5.0
Agar...13.5
Rojo neutro..0.03
Cristal violeta0.001

Morfologa Colonial (Medio 1)

Descripcin
Enterococcus faecalis es una bacteria en
forma de coco dispuesta en cadenas o
pares,
son
colonias
diminutas,
con
consistencia mucosa, incoloro-opaca o rosavioleta, con forma de esfera y bordes
redondeados.

Agar sangre
Infurcin de

Cloruro de

Morfologa Colonial (Medio 2)

Descripcin
Enterococcus faecalis. Tienen un tamao
entre 0.5 y 1 mm, a menudo opacas y
blancas, que suelen ser hemolticas o no
hemolticas, aunque en algunos casos
aparecen como hemolticas. Puede
crecer a temperaturas entre 10 y 45C,
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aunque su temperatura
crecimiento es 35C

ptima

Imagen

Imagen

Fig.6 Agar Mac Conkey con Enterococcus

faecalis (fundacionio.org)

Fig.7 Agar sangre con Enterococcus

faecalis(flickr.com)

de

3. Dos Medios selectivos de resiembra (Nombre y receta)

Agar Mac Conkey
esculina
Peptona..17.0
carne.3.0
Pluripeptona3.0
carne.5.0
Lactosa.10.0
buey40.0
Mezcla de sales biliares1.5
Esculina..1.0
Cloruro de sodio5.0
frrico.0.5
Agar...13.5
Agar15.0
Rojo neutro..0.03
Cristal violeta0.001
Morfologa Colonial (Medio 1)
Descripcin
Enterococcus faecalis es una bacteria en
forma de coco dispuesta en cadenas o
pares,
son
Colonias
diminutas,
con
consistencia mucosa, incoloro-opaca o rosa-

Agar bilis
Extracto de
Peptona de
Bilis de

Citrato

Morfologa Colonial (Medio 2)

Descripcin
Colonias color obscuras bajo la luz
ultravioleta, posee formacin de un
complejo color negro, el medio preparado
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violeta, con forma de esfera y bordes

redondeados.

es color mbar u oscuro ligeramente

opalescente. El medio con esculina tiene
un tinte azulado.

Imagen

Imagen

Fig.8 Enterococcus faecalis en agar Mac

Conkey (microbiologypictures.com)

Fig.9 Enterococcus faecalis en agar bilis

esculina(telmeds.org)

4. Procedimiento de Aislamiento
(describir detalladamente la cantidad de materiales y los pasos a seguir)
Materiales/Reactivos/Medios de cultivo/ Equipo a utilizar
o Materiales
4 cajas Petri.
1 charola de pesado.
1 esptula.
1 matraz Erlenmeyer de 250 mL.
1 Piceta.
1 probeta.
1 mechero bunsen.
1 asa microbiolgica.
o Reactivos
Agua destilada.
Alcohol etlico.
o Medios de cultivo
Agar Mac Conkey.
o Equipo a utilizar
Balanza analtica.
Autoclave.
Incubadora
Preparacin de medios de cultivo:
1. Lavar cuidadosamente el material a utilizar.
2. Esterilizar las placas y el material a utilizar (cajas Petri e hisopos).
3. Tomar el agar Mac Conkey y con una charola de pesado y esptula pesar
correctamente.
4. Suspender 50 g del polvo en litro de agua destilada.
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NOTA: Realizar los clculos correspondientes de acuerdo a la cantidad de ml de agar

Mac Conkey a preparar.
50 g de polvo Mac Conkey / 1000 mL = 3.25 g polvo Mac Conkey
x
65 mL de agar Mac Conkey
5. Vaciar 3.25 g de polvo Mac Conkey a un matraz Erlenmeyer de 250 ml y agregar 60
ml el agua destilada.
6. Reposar 5 minutos y mezclar con un movimiento circular de mueca hasta
uniformar.
7. Tomar un mechero y Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta disolver.
8. Tapar el matraz Erlenmeyer correctamente con un tapn de algodn cubierto de
gasa.
9. Colocar aluminio en la parte superior del matraz tapado la boquilla
correctamente.
10.
Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.
11.
Dejar enfriar por 1 minuto.
12.
Verter 15 mL del agar Mac Conkey en cada una de las placas previamente
esterilizada e identificada.
NOTA: La realizacin del paso 9 se debe de llevar a cabo dentro de la
13.
Dejar reposar la caja por 3 minutos parcialmente abierta para que se
solidifique.
14.
Tapar la caja y almacenar hasta la siembra.
15.
Tirar el sobrante de agar Mac Conkey en residuos.
Pasos para el aislamiento del microorganismos (siembra, seleccin de la colonia
y resiembra):
Procedimiento para siembra de Enterococcus faecalis.
1. Llevar a cabo la toma de muestra de suelo cuidadosamente.
2. Elegir una superficie en la cual la muestra pueda ser fcil de extraer.
3. Tomar un frasco de vidrio y colocar la muestra con una esptula.
4. Cerrar el frasco de vidrio con la muestra.
Nota: Si la muestra requiere ser trasladada a algn laboratorio lejano se deber
preservar a 4 C hasta su siembra.
5. Tomar la muestra de suelo extrada anteriormente abrir el frasco de vidrio
cuidadosamente.
6. Colocar el mechero en un lugar con el cual te resulte fcil laborar.
7. Con un hisopo realizar la extraccin de la muestra.
8. Tomar la caja Petri con el agar Mac Conkey y abrirla cerca del mechero.
9. Realizar un estriado por desgaste en la placa.
10.
Cerrar la placa. Desechar el hisopo en alcohol.
11.
Guardar la caja Petri en la incubadora por 72 h a 48 C 2.
12.
Una vez pasando las 72 h revisar las cajas Petri y observar el crecimiento de
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colonas.
13.
Si hay crecimiento realizar la resiembra.
Procedimiento para la resiembra.
1. Prender el mechero bunsen.
2. Tomar la placa con la siembra elaborada anteriormente y tomar otra placa con el
medio de cultivo agar Mac Conkey.
3. Calentar ligeramente la tapa de la placa con la que se ara la resiembra con el fin
de que tu placa se encuentre en temperatura ptima para hacer el traslado
microbiano.
4. Abrir la caja petri con la siembra cerca del mechero
5. Tomar el asa y calentarla en el mechero, esto con el fin de eliminar bacterias que
puedan afectar el crecimiento microbiano.
6. llevar el asa a la placa con la siembra y tomar la colonia que se encuentre aislada
y que sea fcil de identificar para realizar la extraccin.
7. Una vez extrado la colonia pasarla a la otra placa con agar Mac Conkey sin
muestra realizando un estriado de forma uniforme en uno de los cuadrantes de tu
placa.
8. Volver a tapar las dos cajas petri y calentar el asa nuevamente.
9. Realizar nuevamente los paso 6, 7, 8.
NOTA: asegrate de que el estriado se haga solo una vez por cuadrante y de forma
opuesta para una mejor visualizacin, recuerda que el ltimo estriado lo realizaras de
forma que quede una cola en el centro de la placa.
10.
esterilizar el asa bajo calentamiento.
11.
Cerrar las placas.
12.
Llevar la placa de resiembra a la incubadora almacenarla por 24h a 37 C y
llevar la placa de siembra en el refrigerador.

5. Esquema del Perfil bioqumico (metablico )

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para la identificacin del microorganismo seleccionado

Enterococcus
faecalis

CAPSULA (+/-)

TINCIN DE GRAM
(+)

MOVILIDAD (-)

FERMENTACION
DE GLUCOSA (+)

FERMETACION DE
LACTOSA (-)

FERMETACION DE
SACAROSA (-)

FERMENTACION
ALCOHOLICA (-)

PRUEBA DE
CATALASA (-)

PRUEBA DE
PRODUCCION DE
INDOL (-)

PRODUCCION DE
SULFURO (-)

PRUEBA DE
CITRATO DE
SIMMONS (-)

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RESULTADOS DEL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN

1. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO DE LA MUESTRA (SIEMBRA)

Fig.10 Placa con siembra

Fig.11 Placa con siembra

2. MORFOLOGA COLONIAL OBSERVADA

Tipo de colonia 1: Descripcin

FOTO 1

Se form una colonia pequea de forma alargada

entre color blanquecina y transparente, de
consistencia mucosa.

Fig.12 Enterococcus faecalis

Tipo de colonia 2: Descripcin

FOTO 2

En la placa con la muestra de suelo hubo poco

crecimiento de colonias mucosas por lo que la
placa fue almacenada por 72 h para su mejor
apreciacin e identificacin de Enterococcus
faecalis presuntivos.

El cambio de color en el agar Mac Conkey fue

solamente alrededor de la colonia ya que se pudo
apreciar un color naranja-amarillo

Fig.13 Presuntivamente Enterococcus

faecalis

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3. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO PURO (RESIEMBRA)

FOTO 1

Fig.14 Colonia generada en agar Mac Conkey la

cual fue seleccionada para resiembra.

FOTO 2

Fig.15 Resultado de la resiembra en agar

Mac Conkey de posible Enterococcus
faecalis.

4. MORFOLOGIA COLONIAL OBSERVADA

FOTO 1
Descripcin

Colonias aisladas de forma

circular con bordes enteros
con una elevacin plana, de
superficie lisa y con una
consistencia mucosa de color
rosado opaco.

5
6

1
Fig.16 Seis colonias identificadas
FOTO 2

Fig.17 Placa de resiembra

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5. EVIDENCIA FOTOGRFICA DEL RESULTADO DEL PERFIL BIOQUMICO

Nombre de
la prueba

1.- Prueba
de Tincin
Gram

Medio de
cultivo utilizado

Resultado
obtenido
(positivo/neg
ativo)

N/A

Negativo (-)

Evidencia fotogrfica

Fundamento de la prueba

La tincin Gram es el proceso por el cual las molculas de un colorante se adsorben a una
superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las clulas de los
microorganismos y poder realizar la observacin en microscopio ptico. Dado que las
bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual se
encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algn tratamiento
previo.
Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien, primero con una solucin de
cristal violeta y son lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado,
todas las clulas, tanto las Gram positivas como las Gram negativas, estn teidas de
azul. El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de yodo-yoduro potsico. El
ingrediente activo es aqu el I2; el KI simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra
en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto
las clulas Gram positivas como las Gram negativas se encuentran en la misma situacin.
Se lleva a cabo despus la decoloracin, usando una mezcla de alcohol-acetona,
sustancias en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (Gram
positivos) no se decoloran, mientras que otros (Gram negativos) lo hacen.

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2.- Prueba
de
fermentac
in
alcohlica
(Voges
Proskauer
)

Medio: MR-VP

Negativo (-)

Fundamento de la prueba

La reaccin de VP se basa en la deteccin de acetona como producto final neutro

derivado del metabolismo de la glucosa. sta es metabolizada en cido pirvico,
intermediario clave en la gluclisis. A partir del cido pirvico, una bacteria puede seguir
muchas vas. La produccin de acetona (precursor de la produccin de 2,3-butanediol)
que es uno de los ciclos para la degradacin dela glucosa en las bacterias. La formacin
de acetona y butilenglicol es una va alternativa del metabolismo del cido pirvico. Las
bacterias que utilizan esta va producen solo pequeas cantidades de cidos mixtos que
son insuficientes para disminuir el pH del medio de rojo de metilo, lo bastante como para
producir un cambio de color. Por este motivo muchas de las especies de Enterobacterias
son VP positivas, con pocas excepciones son RM negativas y viceversa.
El primer reactivo agregado a una alcuota incubada es el catalizador alfa-naftol porque
ste acta como intensificador del color, lo que aumenta la sensibilidad de la reaccin sin
prdida de su especificidad.
El segundo reactivo es el KOH que cuando se agrega al medio de VP contribuye a la
absorcin de CO2. No debe excederse de un volumen exacto. El KOH reaccionar con la
peptona dando un color rosado salmn y con el agregado posterior de alfa-naftol no
habr alteracin del color.
Reaccin:
Alfa-naftol (catalizador) + acetona
Condensacin color rojo rosado

KOH

Diacetilo + Ncleo de guanidina

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3.- Prueba
fermentacin
de glucosa

Medio: MRVP

Negativo (-)

(Rojo de
Metilo)

Fundamento de la prueba

Comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos

terminales cidos de la fermentacin de la glucosa y vencer la capacidad amortiguadora del
sistema. Es una prueba cualitativa de la produccin de cido (determinacin de pH). Las
bacterias que principalmente siguen la va de fermentacin de cidos mixtos a menudo
producen suficiente cido para mantener un pH menor de 4.4.
La prueba de rojo de metilo se basa en el empleo de un indicador de pH para determinar la
concentracin de iones hidrgeno presentes cuando un organismo fermenta glucosa. Las
bacterias RM positivas producen cidos estables manteniendo una alta concentracin de
iones hidrgeno hasta alcanzar cierta concentracin y entonces cesa toda actividad.
Los organismos RM negativo tambin producen cidos pero tienen una menor concentracin
de iones hidrgeno porque hay una reversin hacia la neutralidad debida a la nueva
degradacin de los cidos orgnicos en carbonatos.
La validez de la prueba de RM depende de un tiempo de incubacin suficiente como para
permitir que se produzca la diferencia en el metabolismo de la glucosa. Los organismos en
estudio se incubarn por lo menos 2 das, lo que permite que todos los organismos con baja
proporcin gaseosa muestren su lmite en la concentracin de iones hidrgeno.
4.- Prueba de
Citrato de
Simmons

Medio:
Citrato de
Simmons

Positivo (+)

Fundamento de la prueba

En el medio de cultivo, el fosfato mono amnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato

de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el
desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es
cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de
bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino.
El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar
citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de
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nitrgeno,
con
la
consiguiente
produccin
de
alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa,
a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente,
oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos
orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y
bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin
de citrato permeasa.
Reaccin:
Citrato
Oxalacetato + acetato
Piruvato + CO2
PH bsico:
Citrato

Co2+ Acido Frmico + 2 cido actico

PH cido:
2 piruvato
2 piruvato

5.-Prueba de
Indol

Medio SIM

acetato +Co2 + lactato

acetoina+ 2 Co2

negativo (-)

Fundamento de la prueba
El triptfano es un aminocido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres
metabolitos principales: indol, es catol e indol actico. Diversas enzimas intracelulares que
intervienen en ste proceso reciben el nombre de triptofanasa, lo que implica el sistema
completo de enzimas vinculadas con la produccin del indol. El principal intermediario en la
degradacin del triptfano es el cido indol pirvico. La degradacin del triptfano libera
indol, cido pirvico, amoniaco y energa. El cido pirvico puede ser nuevamente
metabolizado por medio del ciclo glucoltico o entrar en el ciclo de Krebs para liberar CO2 y
H2O y una gran produccin de energa. El NH3 puede ser utilizado para sintetizar nuevos
aminocidos empleando la energa que se encuentra para la reaccin anablica.
La prueba de indol se bas en la formacin de un complejo de color rojo cuando el indol
reacciona con el grupo aldehdo de p-dimetilaminobenzaldehdo (sustancia activa del
reactivo de Kovacs).La formacin de indol se produce solamente en aquellos organismos
capaces de fermentar los hidratos de carbono. La elevada acidez producida por la
fermentacin de la glucosa puede impedir el crecimiento del organismo o inhibirla enzima.
El agregado de triptfano estimula la produccin de indol mientras que la glucosa la inhibe.
Reaccin:
L-triptfano

triptofanasa H2O Desaminacin

indol + acido pirvico + Amoniaco

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6.-Prueba de
sulfuro

Medio SIM

NEGATIVO (-)

Fundamento de la prueba
La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reaccin de reduccin que
da un sulfito y un sulfato. Este es un proceso de respiracin anaerbica donde el tomo de
azufre sirve como aceptor de electrones para la oxidacin de los sustratos orgnicos. El
tiosulfato reemplaza al sulfato como aceptor de electrones y es una fuente de azufre para el
organismo.
El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citratofrrico de amonio para producir un
precipitado negro insoluble, sulfuro ferroso.
Reacciones:
Bacteria (medio cido) + tiosulfato de sodio gas SH2
SH2+ iones frricos sulfuro ferroso (pp. negro)

7.- Prueba de
motilidad

Medio SIM

Negativos (-)

Fundamento de la prueba
El agar es el agente solidificante y a esta concentracin le otorga al medio la propiedad
de ser semislido, condicin necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el
enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde ms all de la lnea de siembra
del microorganismo en estudio.
Las bacterias tienen movilidad por medio de sus flagelos, que se encuentran
principalmente entre los bacilos; sin embargo algunas formas de cocos son inmviles. Las
bacterias mviles pueden contener un solo flagelo o muchos; adems su localizacin
vara con su especie bacteriana y las condiciones de cultivo. A veces, las bacterias con
movilidad producen variantes no mviles que parecen se restables y raramente se
revierten en formas mviles.

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8.- Prueba de
fermentacin
de glucosa

Agar TSI

Negativos (-)

Fundamento de la prueba

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes

adecuados para el desarrollo bacteriano. La glucosa, es uno de los hidratos de carbono
fermentables. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico. El agar es el agente solidificante. Por fermentacin de azcar, se
produce cido, que se detecta por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color
amarillo en medio cido.
Reaccin:
Glucosa Ciclo de Krebs Co2 + H2O +Energa anaerobia
9.-Prueba de
fermentacin
de lactosa

Agar TSI

Negativa (-)

Fundamento de la prueba
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes
adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, es uno de los hidratos de carbono
fermentables. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico. El agar es el agente solidificante. Por fermentacin de azcar, se
produce cido, que se detecta por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color
amarillo en medio cido.
Reaccin:
Lactosa
glucosa + galactosa

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10.-Prueba
de
fermentacin
de sacarosa

Agar SIM

Negativos(-)

Fundamento de la prueba

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes

adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, es uno de los hidratos de carbono
fermentables. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico. El agar es el agente solidificante. Por fermentacin de azcar, se
produce cido, que se detecta por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color
amarillo en medio cido.

IDENTIFICACIN DEL MICROORGANISMO AMBIENTAL

EN LA MATRIZ DE ESTUDIO: _______suelo__________
1.- Nombre cientfico del o los microorganismos identificados de acuerdo a
los resultados
del perfil bioqumico planteado ( gnero y especie)
Gnero: Enterobacter Especie: aerogenes
De acuerdo con los resultados obtenidos en las pruebas bioqumicas se obtuvo como
resultado el perfil de una bacteria diferente a la Enterococcus faecalis que es la que se
esperaba obtener. Con los resultados de las pruebas realizadas, se dedujo que la
Enterococcus aerogenes es la que posee un perfil ms similar al obtenido, ya que de 11
pruebas realizadas, solo 1 no coinciden con el resultado (prueba VP). Por lo que
consideramos la mala preparacin del reactivo. Por lo que se tom la identificacin de
Enterobacter aerogenes.
2. Taxonoma del o los microorganismo identificados
Enterobacter aerogenes
Dominio: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Gammaproteobacteria
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
Gnero: Enterobacter
Especie: E. aerogenes
3. Ccaractersticas generales
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Enterobacter aerogenes
Enterobacter spp. Bastoncillos Gram negativa con forma de varilla microorganismo de la familia
Enterobacteriaceae. De los cuales varias cepas son patgenos oportunistas en los nosocomios. Se encuentran
sobre la piel humana, las plantas, los suelos, el agua, las cloacas, los tractos intestinales y en algunos
productos lcteos.
Enterobacter especies son conocidas por su resistencia a los medicamentos, que se cree que ha sido
amplificada por el uso de cefalosporinas de amplio espectro en los hospitales (Giamarellou, 2005). E.
aerogenes utiliza tres mecanismos de resistencia, enzimas inactivadoras, alteracin de las dianas de frmacos y
la alteracin de la capacidad de los frmacos para entrar y acumularse o en sus clulas .

Marcha bioqumica
P.
P.
P. de
de de catalas
RM VP a

de Enterobacter
P.
P. de
de
motilida
ind
d
ol

aerogenes.
P. de
P. de
citrato
sulfur
de
o
Simmon
s
+
+
+/+
Resultados de Marcha bioqumica elaborada .
P.
P.
P. de
P.
P. de
P. de
P. de
de de catalas de
motilid
citrato
sulfur
RM VP a
ind
ad
de
o
ol
Simmon
s
+
+
-

P. de
glucos
a

P. de
lactos
a

P. de
sacaros
a

Tinci
n
Gram

P. de
glucos
a

P. de
lactos
a

P. de
sacaros
a

Tinci
n
Gram

4. Ciclo(s) biogeoqumicos en el(los) que intervienen

Ciclo del Nitrgeno, ciclo del Carbono
5. La funcin que juegan en la transformacin de la materia orgnica a travs
de los ciclos biogeoqumicos
El proceso a travs del cual la Enterobacter aerogenes reduce el nitrgeno hasta una
forma utilizable es conocido como Fijacin Biolgica de Nitrgeno (FBN, por sus siglas en
espaol). El proceso puede ser llevado a cabo por los microorganismos en vida libre o en
simbiosis con plantas, y permite no slo usar el nitrgeno atmosfrico, sino tambin
revertir o reducir la degradacin del suelo.
Las bacterias Enterobacter aerogenes son componentes importantes del suelo y
requieren una fuente de energa qumica.
Estudios han mostrado que adems de la fijacin de nitrgeno, estas bacterias secreta
cantidades considerables de sustancias biolgicamente activas como vitamina B, cido
nicotnico, cido pantotnico, heteroxinas, giberelinas, cido indol actico, etc. las cuales
ayudan al crecimiento de la planta (Behl y col., 2003). Las bacterias se alimentan de las
sustancias liberadas por las races de la planta, y sta a su vez se beneficia de los
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nutrientes que las bacterias le proporcionan mediante la fijacin de nitrgeno.

Las bacterias nitrificantes y sulfato reductoras son las que principalmente llevan a cabo
las funciones de degradacin de la materia orgnica en los sedimentos anaerbicos y
microaerofilicos del manglar. Las bacterias sulfato reductoras, adems de ser los
principales descomponedores de materia orgnica en suelos anaerobios, participan en la
mineralizacin del azufre y en la disponibilidad de hierro y fsforo en manglares.
La participacin de microorganismos en el funcionamiento y transformacin de nutrientes
dentro de los ecosistemas de manglar ha sido muy exitosa.
6. Conclusin parcial sobre las interacciones bacterianas en la matriz
estudiada y la importancia de la microbiologa en el rea ambiental
Se concluy que cada bacteria tiene un perfil bioqumico especifico lo cual nos permite
llegar a la identificacin de microorganismos diferentes de acuerdo al resultado de las
pruebas, Ya que una de ellas puede llegar a cambiar completamente el perfil de la
bacteria esperada, o buscada y por esta razn es de suma importancia llevar a cabo cada
prueba lo mejor y ms profesionalmente posible, ya que si esto no se realiza con los
cuidados adecuados, el resultado obtenido al finalizar la marcha bioqumica no permitir
la identificacin del microorganismo.
Una de las ramas de mayor importancia para la formacin acadmica de los alumnos del
rea de qumica, es la de microbiologa ambiental, ya que esta tiene como base muchos
procesos fundamentales para el aprendizaje y el desarrollo intelectual del alumno, estos
conocimientos se pueden aplicar a procesos de investigacin o remediacin de lo que
sucede en el suelo, el agua y el aire como matrices ambientales, o como rea de inters
propia. Dichos procesos se basan en la caracterizacin e investigacin de
microorganismos como bacterias, hongos, enzimas, algas, entre otros, y posteriormente
despus de la caracterizacin investigar cmo es que se puede emplear e uso de estos
microorganismos para que produzcan un beneficio para la sociedad y para el medio
ambiente.
La salud e integridad fsica de las persona es uno de los factores ms importantes que se
deben de cuidar en el rea de microbiologa ya que puede llegar a contraer alguna
infeccin, enfermedad o dao, tanto para el propio analista como para los que se
encuentran cerca. Es por esto que todos los materiales y equipos que se manipulen
dentro del laboratorio deben ser esterilizados o desinfectados al finalizar las actividades y
especialmente si estuvieron en contacto con las muestras, cajas o medios inoculados.
Se concluy que es de suma importancia la microbiologa y los procesos por el cual se
lleva a cabo la identificacin de la bacteria para la sustentabilidad ambiental, ya que de
ella dependen muchos proceso que pueden ser beneficios para la preservacin del medio
ambiente.
Se lleg a la conclusin de que la bacteria que se esperaba identificar en el inicio de la
prctica no fue la misma que se obtuvo ya que muchos factores pueden afectar los
resultados de las pruebas, como por ejemplo la mala toma de muestra, la
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implementacin errnea del equipo de trabajo, reactivos contaminados o caducados o

materiales no esterilizados, que pueden contaminar la muestra o a la bacteria. Los datos
que se obtuvieron nos pudieron dar la identificacin casi completa de varias bacterias
como; Shigella dysenteriae y Enterobacter aerogenes ya que estas al igual que la
Enterococcus faecalis se puede generar en un medio selectivo como el agar mac conkey
y la mayora de las pruebas bioqumicas emiten el mismo resultado, adems de que se
producen en las mismas condiciones ambientales como la temperatura ambiente, el
oxgeno presente, entre otros factores naturales.

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