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REA DE SUSTENTABILIDAD PARA EL DESARROLLO

PROGRAMA ACADMICO DE QUMICA


ESPECIALIDAD TECNOLOGIA AMBIENTAL
GRUPO
QU-301
MATERIA
MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

TITULO
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS
DE LA MATRIZ AMBIENTAL: AIRE
ASESORA
Dr. ROSA RICO MATA
DATOS DE IDENTIFICACIN DE LOS ANALISTAS
Fecha de inicio del anlisis: 29 DE JUNIO DEL 2015
Fecha de trmino: 10 DE JULIO DEL 2015
Nombre
Rea Garca Cesar Alejandro

Cargo
Responsable

Rea Garca Cesar Alejandro

Administrador

Macas Jasso Luz Evelia

Laboratorista 1

Felipe Florido Mauricio Ivn

Laboratorista 2

Martnez Chiquito Josu Neftal de Jess

Laboratorista 3

GENERACIN: 2014-2016

MICROBIOLOGA AMBIENTAL UTL


ASESORA:

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DATOS DEL SITIO EN ESTUDIO


1.- Breve descripcin del estatus ambiental del sitio de estudio: Habitacin con poca luz solar, poca ventilacin
de aire y una temperatura aproximadamente de 25C
Nombre

Ubicacin
/coordenadas GPS

Universidad
tecnolgica de
len

Blvd. Universidad
tecnolgica de len
#225 col san Carlos
CP.37670

Edificio F

21.063223
-101.578865

Imagen de mapa satelital

Edificio F

Imagen No.1. Edificio F de la Universidad Tecnolgica de Len

SITIO DE
MUESTREO

2. Evidencia fotogrfica del sitio


Fecha: 29 de junio del 2015
Hora: 2:12 pm

Fecha: 29 de junio del 2015


Hora: 2:18 pm

DATOS DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR


1. Identificacin
Matriz ambiental: Aire
Hora de toma de muestra: 2:10 pm
Hora de siembra: 2:10 pm
Punto de Muestreo (ubicacin /coordenadas GPS):
Tiempo de exposicin (aplica solo para muestra de aire)
Saln de QU-301 Edificio F (21.063223-101.578865)
5 minutos
Nombre del/ los analistas que tomaron la muestra:
Nombre del/ los analistas que sembr la muestra:
Rea Garca Cesar Alejandro
Rea Garca Cesar Alejandro

2.Parmetros Fisicoqumicos
Color:N/A

Temperatura (oC) ambiental:

Olor: N/A

Describir condiciones climatolgicas: Da nublado con un poco de viento

25C

pH: N/A

3. Evidencia fotogrfica del sitio de toma de muestra

Imagen Caja Petri con agar sabouraud expuesta al aire para la


toma muestra

Imagen. Momento de la toma de muestra

MICROBIOLOGA AMBIENTAL UTL


ASESORA:

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
1. Justificacin del proceso para la identificacin bacteriana
La identificacin bacteriana es de gran importancia porque a travs de las diferentes pruebas bioqumicas que
se le realizan a las bacterias y hongos se puede establecer de manera especfica las bacterias presentes en
determinadas zonas de muestreo, y poder identificar la funcin que realizan en los diferentes ciclos
biogeoqumicos y como contribuyen a estos.
2. Dos medios de siembra (Nombre y Composicin)
Medio No. 1: Agar Sabouraud
FRMULA (en gramos por litro)
Peptona...........................5.0.
Triptena...........................5.0.
Glucosa.............................40.0.
Cloranfenicol....................0.05.
Agar..................................15.0.
pH final: 5.6 0.2

Medio No. 2: Agar harina de maz


Harina de maz.40 g
Agar.. 20 g
Tween 8010 ml
Agua destilada..1000 ml
Morfologa Colonial (Medio 1)
Descripcin
Colonias lisas, plegadas, rugosas o membranosas,
brillantes, de color blanco o ligeramente beige.

Morfologa Colonial (Medio 2)


Descripcin
Colonias lisas, brillantes que con el tiempo se vuelven
plegadas, rugosas o membranosas, de color blanco o
ligeramente beige.

Imagen

Imagen

Imagen No. 1. Cultivo de Candida albicans en agar Sabouraud


Dextrosa

Imagen No. 2. Cultivo de Candida en agar harina de maz

MICROBIOLOGA AMBIENTAL UTL


ASESORA:

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3. Dos Medios selectivos de resiembra (Nombre y Composicin)


Medio No. 1: Agar BD Sabouraud con Gentamicin y Cloranfenicol
Ingredientes.
Digerido pancretico de casena.5.0 gr
Digerido pptico de tejido animal..5.0 gr
Glucosa..40.0 gr
Agar15.0 gr
Gentamicina.0.04 gr
Cloranfenicol..0.4 gr
pH de 5.6 0.2
Medio No. 2: Agar Sabouraud glucosa con cloranfenicol
Ingredientes.
Digerido pancretico de casena.5.0 gr
Digerido pptico de tejido animal..5.0 gr
Glucosa..40.0 gr
Agar15.0 gr
Cloranfenicol..0.4 gr
pH de 5.6 0.2
Morfologa Colonial (Medio 1)

Morfologa Colonial (Medio 2)

Descripcin
Descripcin
Colonias ovaladas, lisas, plegadas, rugosas o Colonias de un color verde claro, de forma ovalada
membranosas, brillantes, de color blanco brillante su de apariencia mucosa, tarde en crecer de 5 a 8 das,
brillantes, lisas y membranosas
crecimiento tarde de 5 a 8 das

Imagen

Imagen

Imagen No. 3. Cultivo de C. albicans Agar BD Imagen No. 4. Cultivo de C. albicans en Agar
Sabouraud glucosa con cloranfenicol
Sabouraud con Gentamicin y Cloranfenicol

MICROBIOLOGA AMBIENTAL UTL


ASESORA:

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4. Procedimiento de Aislamiento
(describir detalladamente la cantidad de materiales y los pasos a seguir)
Materiales/Reactivos/Medios de cultivo/ Equipo a utilizar
Material
- 4 cajas Petri
- 4 matraz Erlenmeyer de 250 ml
- 2 probetas
- 1 pipeta
- 1 autoclave
- 2 esptulas
- 1 mechero bunsen
- 4 charolas de pesado
- 1 pizeta
- 1 bascula de pesado
- Algodn
- Gasas
- Papel de aluminio
- Agar sabouraud

Pasos para el aislamiento del microorganismos (siembra, seleccin de la colonia y resiembra):


Preparacin de medios de cultivo:
- 1.- Pesar 1.95 gr de agar sabouraud para disolver en 30 ml de agua destilada en un matraz
- 2.- Introduccion el matraz con el agar al autoclave para esterilizar durante 20 min
- 3.- Una vez transcurrido los 20 min dejar enfriar a temperatura ambiente
- 4.-Posteriormente pasar el agar a una caja Petri donde se tiene que dejar que se solidificar. Esto se
tiene que hacer en la campana de flujo laminar
Siembra:
1.- Se llev la caja Petri con el agar a la zona de muestreo.
2.- Luego se abri la caja y se expuso al aire durante 5 minutos.
3.- Se deja encubar durante una semana para ver el crecimiento de alguna bacteria en este caso C. Albicans
Seleccin de la colonia:
Para la seleccin de un colonia de la primera siembra se divide la caja petir, (con el agar donde nada ms crese
la bacterias o hongo que se est buscando) en cuatro sectores para luego con una asa tomar un pequea
muestra de la colonia seleccionada y colocarla en uno de los cuatro sectores en forma de zigzag, si se quiere
tomar otra colonia diferente el asa se tiene que esterilizar metindola a la llama de un mechero

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ASESORA:

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5. Esquema del Perfil bioqumico (metablico )


para la identificacin del microorganismo seleccionado
Candida
Albicans

Pruebas para identificacin.

chromID
Candida

Hidrlisis
especfica de un
substrato
cromognico,
hexosaminidasa
(patente de
bioMrieux).Las
colonias de
Candida albicans
se colorean de
azul

Crecimiento
en Sabouraud
con 6.5% de
cloruro de
sodio

Fermentacin
de azucares

Observaciones
microscpicas a
partir del cultivo

Agar Sabouraud
con 6.5% de
cloruro de sodio
La Candida
Albicans es las
nicas bacterias
que cresen en
este medio

Se lleva a cabo en
Agar Sabouraud . Se
identifica una colonia
y se observa al
microscopio para
identificar algunos
rasgos caractersticos

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ASESORA:

Se lleva a cabo
en caldo base
rojo fenol con
maltosa,
lactosa,
dextrosa,
galactosa y
sacarosa y se
observa la
generacin de
gas

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RESULTADOS DEL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN


1. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO DE LA MUESTRA (SIEMBRA)

2. MORFOLOGA COLONIAL OBSERVADA


Tipo de colonia 1: Descripcin

FOTO 1

Presuntiva colonia de Candida Albicans a los 2 das de


haberse sembrado.
Punto blanco, brillante de aspecto mucoso y forma circular

Tipo de colonia 2: Descripcin

FOTO 2

Presuntivo colonia de Candida albicans a los 4 das de


haberse sembrado.
Punto blanco, brillante de aspecto mucoso y forma circular
con un aumento de tamao.

Tipo de colonia 1: Descripcin

FOTO 3

Presuntiva colonia de Candida Albicans a los 8 das de


haberse sembrado.
Colonias de color anaranjado, de color amarillo y una de
mayor dimetro de color blanco. De aspecto mucoso y
menbranoso

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ASESORA:

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4. EVIDENCIA FOTOGRFICA DEL RESULTADO DEL ANALISIS MICROSCOPICO

Vista al microscopio con un enfoque al 40x. Con un frotis


Vista al microscopio con un enfoque al 100x. Con un frotis

5. ANALISIS BIBLIOGRFICO DE LA IDENTIFICACION DEL MICROORGANISMO AISLADO


Nombre de la
prueba

1.-

chromID
Candida

Medio de cultivo
utilizado

Resultado obtenido
(positivo/negativo)

Evidencia fotogrfica

Las
colonias
de
Hidrlisis
Candida albicans se
especfica de un colorean de azul
substrato
cromognico,
hexosaminidasa
(patente
de
bioMrieux).

Fundamento de la prueba

Los agares cromognicos son medios selectivos y diferenciales disponibles comercialmente. Contienen como
base glucosa y peptona, la selectividad es dada por el cloranfenicol, contiene una mezcla de sustratos
cromgenos que liberan unos componentes coloreados diferentes cuando son degradados por enzimas
especficas producidas por ciertas especies de Candida. Este medio permite el desarrollo de las especies ms
comunes de Candida y hongos levaduriformes mediante la formacin de colonias coloridas diferenciadas: C.
albicans (azul), C. dubliniensis (verde oscuro), C. tropicalis(azul oscuro), C. krusei (violeta plido), C.
glabrata (violeta intenso). (http://www.biomerieux.es)

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ASESORA:

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2.- Crecimiento
en Sabouraud
con 6.5% de
cloruro de sdio

Agar Sabouraud Es la nica bacteria


con 6.5% de que crece en este
cloruro de sodio agar

Fundamento de la prueba
Esta prueba se realiza con el fin de determinar la capacidad de crecimiento de Candida albicans en un medio
Sabouraud hipertnico incubado a temperatura ambiente (25C), a diferencia de C. dubliniensis que no crece a
estas concentraciones de sal
3.-

Observaciones
microscpicas a
partir del
cultivo

Agar Sabouraud
Colonia de color
blanco mucoide.

Fundamento de la prueba

(http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/mod/resource/view.php?inpopup=true&id=100778)

Este es un mtodo presuntivo donde solamente se observan las colonias en el microscopio y por su morfologa
se clasifica el tipo de candida ms idntico.

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ASESORA:

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4.-

Fermentacin

Caldo base rojo


fenol
con
maltosa, lactosa, Se
observa
la
dextrosa,
generacin de gas
galactosa
y
sacarosa.

Fundamento de la prueba

Las fermentaciones, indican un cambio marcado de color del medio de fucsia a amarillo intenso se indican
positivas, en casi de no haber cambio de color la reaccin se torna como negativa, y las reacciones dbiles se
indican con un ms menos

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ASESORA:

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IDENTIFICACIN DEL MICROORGANISMO AMBIENTAL


EN LA MATRIZ DE ESTUDIO AIRE
1.- Nombre cientfico del o los microorganismo identificado de acuerdo a los resultados
del perfil bioqumico planteado ( gnero y especie)
Presuntivamente es Candida Albicans
2. Taxonoma del o los microorganismo identificados
Filo: Deuteromiceta
Subfilo: Saccharomycotina
Clase: Saccharomycetes
Orden: Saccharomycetales
Familia: Saccharomycetaceae
Gnero: Candida
Especie: albicans

3. Caractersticas generales
Candida albicans es un hongo dimrfico, es decir, se desarrolla de forma distinta en funcin de la temperatura
de crecimiento, como levadura, normalmente a 37C en el husped, y como hongo de aspecto filamentoso, a
25C en la naturaleza. Pertenece al filo Ascomycota y se reproduce de forma asexual por gemacin. En forma
de levadura presenta un aspecto de clulas redondas u ovaladas, de 3-8 x 2-7 micras de tamao, agrupadas en
pequeos grupos, mientras que, en forma de hongo filamentoso, las clulas se alargan y se diversifican
tomando la apariencia de filamentos, pseudo-hifas o pseudo-micelio. Estos hongos estn siempre presentes en
la piel y en la mucosa del tracto digestivo, genitourinario y respiratorio de la mayora de las personas, pero se
encuentran controlados por otros microorganismos no patgenos. Cuando se produce un desequilibrio, el
aumento desmedido de la poblacin de hongos produce esta u otras micosis. La Candida Albicans se encuentra
en todo tipo de ambiente, y pueden detectarse en interiores o exteriores durante todo el ao. El crecimiento
del hongo es promovido por condiciones hmedas y clidas. En los exteriores puede encontrarse en reas
sombreadas y hmedas, o en lugares donde se descomponen hojas y otro tipo de vegetacin. En interiores,
puede encontrarse en lugares donde haya altos niveles de humedad.

4. Ciclo(s) biogeoqumicos en el(los) que intervienen


Ciclo del carbono, ciclo del azufre, ciclo del fosforo y ciclo del nitrgeno
5. La funcin que juegan en la transformacin de la materia orgnica a travs
de los ciclos biogeoqumicos
Las fermentaciones degradan fundamentalmente los glcidos de la materia orgnica, dando como producto
final el CO2 que vuelve a la atmsfera
Las putrefacciones son descomposiciones de materia orgnica compuesta principalmente por protenas.
Las bacterias y los hongos secretan enzimas que rompen parcialmente la materia muerta. La digestin final de
esta materia tiene lugar en las clulas bacterianas y fngicas a travs de procesos de fermentacin y
respiracin. El CO2 liberado en estos procesos regresa a la atmsfera para reanudar el ciclo
MICROBIOLOGA AMBIENTAL UTL
ASESORA:

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6. Conclusin parcial sobre las interacciones bacterianas en la matriz estudiada y la importancia de la


microbiologa en el rea ambiental
De acuerdo con el hongo que se observ, presuntivamente se cree que es una Candida Albicans ya que
presenta las caractersticas similares en su morfologa y en microscopio presenta similitudes con dicho
hongo. Con este estudio nos dimos cuenta de que unos hongos pueden ser tanto buenos como malos para el
medio ambiente y que estn presentes en todo lugar y tenemos que tener cuidado ya que los hongo pueden
ser patgeno y causante de enfermedades como el hongo Candida Albicans que causa candidiasis
(candidosis, moniliasis), o a la ves el hongos de Candida Albicans pueden ser bueno para el medio ambiente
ya que degradan la materia orgnica medio la fermentacin y la putrefaccin dando como resultado la
formacin de CO2 y devolvindolo al medio ambiente. Con esto se demuestra que la microbiologa es muy
importante en el rea ambiental ya que con la microbiologa podemos detectar los organismos ya sea
bateras y hongos que estn presentes en las diferentes matrices (agua, suelo, aire) realizando pruebas
qumicas para poder identificarlas mediante la recopilacin de resultados que se obtienen en las diferentes
pruebas y observa en que ciclo biogeoqumico aparecen y que funcin realizan en estos ciclos para que la
vida pueda seguir tal y como la conocemos.

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