MEDIOS DE CULTIVO Y SU

RESPECTIVA CEPA DE
CRECIMIENTO
Agar BP (Agar BAIRD-PARKER):
Para el aislamiento y la diferenciacin
de estafilococos en alimentos y
materiales farmacuticos.
Contiene cloruro de litio y telurito para
la inhibicin de la flora acompaante,
en tanto que el piruvato y la glicocola
favorecen
el
crecimiento
de
Estafilococos.
Staphylococcus aureus:
Negras,
lustrosas, convexas, 1 a 5 mm de
dimetro,
con
borde
estrecho
blanquecino, rodeado por un halo
claro de 2 a 5 mm de anchura.

AGAR
CETRIMIDE:
Para
el
aislamiento
de
Pseudomonas
aeruginosas, a partir de diversos
materiales.
Ejerce una suficiente inhibicin de los
organismos
acompaantes,
perjudicando
mnimamente
el
crecimiento
de
Pseudomona
aeruginosa.
Pseudomonas aeruginosas: Colonias
azul-verdoso positivas. Las colonias
de
Pseudomonas
aeruginosas
forman un pigmento verde-azulado
(Piocianina) y son fluorescentes a la
luz UV.
E. coli, S. Aureus: Colonias azulverdoso negativas.

Agar BPLS (Agar verde brillante

rojo fenol lactosa sacarosa): Para
el aislamiento de Salmonella a parir
de materiales patolgicos, heces,
orina, alimentos, etc.

Agar EMB (Agar Eosina Azul de

metileno Lactosa Sacarosa): Agar
selectivo para la demostracin y
aislamiento
de
Enterobacterias
patgenas.

Su base nutritiva ms rica y

abundante
permite
un
mejor
crecimiento de salmonella.

El contenido en lactosa y sacarosa

hacen posible la distincin de
Salmonellas y de Shigellas lactosanegativas y sacarosa-negativas. Los
grmenes
de
acompaamiento
indeseables resultan ampliamente
inhibidos en su crecimiento gracias a
los colorantes.

Salmonella: Rojo-rosado con halo

rojo. Lactosa y sacarosa negativas.
E.
coli
y
Klebsiella:
Verdeamarillentas,
con
halo
verde
amarillento. Lactosa o sacarosa
positivas.

E. coli: Verdosas con brillo metlico a

la luz reflejad, con el centro
negroazulado a la luz transmitida.
Salmonella y Shigella: Transparentes
e incoloras.

Klebsiella: Ms grandes que las E.

coli, mucosas, confluentes, con el
centro pardo-grisceo a la luz
transmitida.

Agar McConkey: Para el aislamiento

de Salmonellas, Shigellas y bacterias
coliformes, a partir de heces, orina,
alimentos, aguas residuales, etc.
Las sales biliares y el violeta cristal
inhiben considerablemente la flora
gram-positiva. La lactosa, junto con el
indicador de pH rojo neutro, sirve
para la comprobacin de la
degradacin de dicho azcar.
Salmonella y Shigella: Incoloras y
transparentes en un medio de cultivo
de color amarillo.
E. coli: Grandes, rojas y con halo
turbio en un medio de cultivo de color
rojo con presencia de precipitado.
Klebsiella:
mucosas.

Grandes,

rosadas

Agar SPS (Agar Sulfito Polimixina

Sulfadiacina): Para el aislamiento de
Clostridium perfringens en alimentos
de todo tipo.
El sulfito es reducido a sulfuro por la
mayora de los Clostridium. Este
sulfuro reacciona con el citrato de
hierro, dando una coloracin negra a
las colonias.

Agar
SS
(Agar
Salmonella
Shigella): Para el aislamiento de
salmonellas y Shigellas a partir de
heces, alimentos y otros materiales
que son objeto de investigacin.
El verde brillante, la bilis de buey y la
elevada concentracin de tiosulfato y
de citrato inhiben considerablemente
la flora acompaante. Con el
tiosulfato y los iones de hierro se
pone en manifiesto la formacin de
sulfuro por el ennegrecimiento de las
correspondientes
colonias.
Las
colonias de coliformes quedan
sealadas por la demostracin de la
degradacin de lactosa a acido, a
cargo del indicador de pH Rojo
neutro.
Algunas Salmonellas: Incoloras con
centro negro por formacin de H2S
(sulfuro), el medio presenta un viraje
amarillo.
Salmonellas y Shigellas: Incoloras y
transparentes, el medio presenta un
viraje amarillento.
E. coli y Klebsiella: Rosadas hasta
rojas, el medio presenta un viraje
Rosa-Rojo
con
formacin
de
precipitado.

Agar XLD (Agar Xilosa Lisina

Desoxicolato): Para el aislamiento y
diferenciacin de Enterobactericeas
patgenas, especialmente de especie
Shigella y Salmonella.

El efecto inhibidor de este tipo de

medios es dbil. La degradacin a
acido de la xilosa, lactosa y sacarosa
producen un viraje a amarillo del rojo
de fenol. El tiosulfato y la sal de
hierro(III) revelan la formacin de
cido sulfhdrico por la precipitacin
de sulfuro de hierro negro en las
colonias.
Las
bacterias
que
descarboxilasan la lisina produciendo
cadaverina se reconocen por la
presencia de un color rojo-purpureo,
debido al aumento del pH, alrededor
de sus colonias.

Alc/A: vino/amarillo: Fermentacin

de la glucosa
A/A: amarrillo/amarillo:
Fermentacin de los dos azucares
Alc/Alc: vino/vino: No hay
fermentacin
Gas o no gas: Formacin de
burbujas y rompimiento del medio
Presencia o ausencia de H2S:
Ennegrecimiento del medio

E. coli: Amarillas con zona amarilla

alrededor, opacas y presentan un
halo debido a la precipitacin. El
medio presenta un viraje amarillo con
precipitado.

(+) Crecimiento con un color azul

intenso
(-) No hay crecimiento ni cambio de
color (verde)

Klebsiella: Amarillas con zona

amarilla alrededor, opacas, mucosas
y presentan un halo debido a la
precipitacin. El medio presenta un
viraje amarillo con precipitado.
Salmonella:
Transparentes,
del
mismo color que el medio de cultivo,
con presencia de centro negro debido
a la precipitacin de H2S.
Shigella: Transparentes, del mismo
color que el medio de cultivo.
MEDIOS
PARA
PRUEBAS
BIOQUIMICAS
DE
RECONOCIMIENTO Y SELECCIN
TSI O KIA (Medio TSI o KIA)
Para KIA:

CITRATO (Medio
Simmons)

Citrato

segn

INDOL (Caldo peptona tripticasa)

Reactivo: de kovacs
(+) Anillo rojo en la superficie
(-) No se produce color, se torna
amarillo por el reactivo
(+/-) Un color anaranjado en la
superficie del medio

ROJO DE METILO (Caldo RM-VP):

Reactivo : rojo de metilo
Algunas bacterias utilizan glucosa
con gran formacin de cido, de
forma que el valor del pH del medio
desciende a menos de 4,4. Otras
bacterias producen menos cido,

reduciendo el menor medida el pH del

medio.
(+) Anillo rojo en la superficie (E. coli,
Klebsiella)
(-) Color amarillo en la superficie
Reaccin retardada: un color
anaranjado, continuar la incubacin
hasta 4 das y repetir la prueba

DESCARBOXILASA (Medio LIA)

(+) Prpura turbio o amarillento
(-) Color amarillo claro y brillante por
fermentacin de la glucosa o sin
cambio de color (Prpura claro)
Voges proskauer (medio RM-VP):
Reactivo: naftol al 5%, 0.2ml KOH
al 40% o NaOH al 40%

amarillo (E. coli, Salmonella)

(-) Transparente

MOTILIDAD Y H2S (Medio SIM):

Medio de cultivo de ensayo para
comprobar la formacin de sulfuro y
motilidad, en el marco del diagnstico
de Enterobactericeas.
Motilidad (+) Los microorganismos
mviles migran de la lnea de siembra
y se difunden en el medio (E. coli,
Salmonella)
Motilidad (-) Crecimiento solo en la
lnea de siembra (Shigella, Klebsiella)
H2S (+) Ennegrecimiento del medio
(Salmonella)
H2S (-) No se produce
ennegrecimiento (E. coli, Shigella,
Klebsiella)

(+):color rojo o rosado en la superficie

(-): color amarillo en la superficie por
el reactivo

CATALASA (H2O2 sobre la colonia)

(+) Formacin inmediata de burbujas
(-) No se producen burbujas

NITRATO (Caldo Nitrato):

Reactivo de Griess - ilosvay
Medio de cultivo de ensayo para la
demostracin de la reduccin de
Nitrato y formacin de Indol con los
correspondientes reactivos en la
identificacin
bioqumica
de
microorganismos.
(+) Al minuto color rojo o rosado en la
superficie, inclusive puede virar

UREASA (Medio UREA): En este

medio de cultivo solo pueden crecer
aquellos microorganismos que son
capaces de utilizar urea como nica
fuente de carbono. Los grmenes que
utilizan urea producen un viraje del
indicador
hacia
el
rojo
y,
eventualmente,
su
crecimiento
produce turbidez en el medio de
cultivo.

(+) Color Fucsia-Rojo

(-) No se produce cambio de color
(piel de ante) (Shigella, E. coli,
Salmonella)
(+/-) Viraje a rojo muy ligero
(Klebsiella)
COLORACION DE BACTERIAS
Coloracin con Azul de Metileno
1. Realizar un frotis de secrecin
faringea y fijarlo con calor
2. Cubrir la lmina con AZUL DE
METILENO por dos minutos
3. Lavar con agua destilada
4. Dejar secar al aire
5. Observar al microscopio con
objetivo de inmersin
6. Reportar la morfologa y
disposicin de las bacterias
Coloracin de Gram
1. Realizar dos frotis: uno a
partir de un cultivo en medio
slido y otro a partir de un
medio liquido
2. Dejar secar al aire y fijar con
calor
3. Cubrir el portaobjetos con
CRISTAL VIOLETA por 1
minuto
4. Lavar con agua destilada
5. Adicionar LUGOL por 1
minuto
6. Lavar con agua destilada
7. Decolorar con ALCOHOL
ACETONA por 14 segundos
8. Lavar con agua destilada
9. Cubrir
la
lmina
con
SAFRANINA DE GRAM por
30 segundos
10. Lavar con agua destilada
11. Dejar secar y observar al
microscopio con objetivo de
inmersin

12. Reportar la morfologa y

disposicin de las bacterias
Coloracin de Zielh-Neelsen (cido
Alcohol Resistentes)
1. Realizar un frotis a partir de
una muestra de tierra
2. Dejar secar al aire y fijar con
calor
3. Cubrir el portaobjetos con
FUCSINA BASICA y calentar
con el mechero hasta la
emisin de vapores sin dejar
de hervir durante 10 minutos
4. Dejar enfriar
5. Lavar con agua destilada
6. Decolorar
con
ALCOHOL
ACIDO
7. Lavar con agua destilada
8. Adicionar
AZUL
DE
METILENO por 2 minutos
9. Lavar con agua destilada
10. Dejar secar y observar al
microscopio con objetivo de
inmersin
11. Reportar lo observado
Coloracin de Schaeffer-Fulton
(Esporas)
1. Realizar un frotis a partir de un
cultivo de Bacillus sp de 18 a
24 horas
2. Dejar secar al aire y fijar con
calor
3. Cubrir el portaobjetos con
VERDE DE MALAQUITA y
calentar con el mechero
durante 30 segundos
4. Dejar enfriar
5. Lavar con agua destilada
6. Adicionar
SAFRANINA al
0.5% por 1 minuto

7. Lavar con agua destilada

8. Dejar secar y observar al
microscopio con objetivo de
inmersin
9. Reportar lo observado

observan de color azul

intenso o violeta.
Las bacterias GRAM
NEGATIVAS
se
observan de color rojo
o fucsia

Coloracin de Hiss (Cpsula)

1. Realizar un frotis a partir de un
cultivo
de
Klebsiella
pneumonie de 36 a 48 horas
2. Dejar secar al aire y no fijar
con calor
3. Cubrir el portaobjetos con
COLORANTE DE HISS o
Solucin acuosa al 1% de
CRISTAL VIOLETA
4. Lavar con solucin acuosa al
20%
DE
SULFATO
DE
COBRE
5. Dejar secar y observar al
microscopio con objetivo de
inmersin
6. Reportar lo observado

RESULTADOS
Coloracin de Gram
- Las bacterias
POSITIVAS

GRAM
se

Coloracin de Zielh-Neelsen (cido

alcohol Resistentes)
- Los
bacilos
cido
alcohol resistente se
vern rojos o fucsias
- Los que no tengan esta
caracterstica se vern
azules
Coloracin
de
Shaeffer-Fulton
(Espora)
- Las
esporas
se
observaran de color
verde
- Las clulas vegetativas
de color fucsia
Coloracin de Hiss (Cpsula)
- La cpsula se observara
como un halo alrededor
de la bacteria de color
violeta plido.
- La bacteria se vera
violeta intensa o morado