Clulas procariotas

Fundamentos:
Las clulas procariotas estructuralmente son las ms simples y
pequeas. Como toda clula, estn delimitadas por una membrana
plasmtica que contiene pliegues hacia el interior (invaginaciones)
algunos de los cuales son denominados laminillas y otro es denominado
mesosoma y est relacionado con la divisin de la clula. La clula
procariota por fuera de la membrana est rodeada por una pared celular
que le brinda proteccin. El interior de la clula se denomina citoplasma.
En el centro es posible hallar una regin ms densa, llamada nucleoide,
donde se encuentra el material gentico o ADN. Es decir que el ADN no
est separado del resto del citoplasma y est asociado al mesosoma. En
el citoplasma tambin hay ribosomas, que son estructuras que tienen la
funcin de fabricar protenas. Pueden estar libres o formando conjuntos
denominados polirribosomas. Las clulas procariotas pueden tener
distintas estructuras que le permiten la locomocin, como por ejemplo
las cilias (que parecen pelitos) o flagelos (filamentos ms largos que las
cilias).

Esquema de clula procariota. Las bacterias son los organismos que

poseen una organizacin celular de este tipo. La zona sombreada en el
citoplasma representa el nucleoide, zona ms densa donde se encuentra
el ADN bacteriano y no est fsicamente separado del resto de las
estructuras citoplasmticas.

Objetivos:

Reconocer los diferentes tipos de bacterias.

Saber que tipos de bacterias se tien con la tincin gram.

Materiales:
En este experimento se utiliz:
- Microscopio
- Cristal violeta
- Lugol
- Etanol
- Safranina
- Aceite de Inmersin
- Mechero
- Yogurt Natural
- Vinagre de Manzana
- Sarro Dental

Metodologa:

Recoge las muestras.

Se hace un extendido.
Dejar seca.
Agregar cristal violeta o violeta de genciana y esperar 1 min. Todas
las clulas gram positivas y gram negativas se tien de color azulpurpura.
Enjuagar con agua.
Agregar lugol y esperar entre 1 minuto.
Enjuagar con agua.
Agregar acetona y/o alcohol y esperar 30 segundos (parte critica
de la coloracin)
Enjuagar con agua.
Tincin de contraste agregando safranina o fucsina bsica y
esperar 1-2 min Este tinte dejar de color rosado-rojizo las
bacterias Gram negativas.
Enjuagar con agua.
Para observar al microscopio ptico es conveniente hacerlo a 100x
con aceite de inmersin.

El cristal violeta(colorante catinico) penetra en todas las clulas

bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a travs de la
pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en
equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual est presente para
solubilizar el yodo, y acta de mordiente, haciendo que el cristal violeta

se fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana. El I 2 entra

en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el
cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la
decoloracin, ya que en la misma es soluble el complejo I 2/cristal violeta.
Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram
negativos s lo hacen.
Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una
coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo,
como la safranina o la fucsina. Despus de la coloracin de contraste las
clulas Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas
permanecen azules.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la tcnica. Sirve
para hacer una tincin de contraste que pone de manifiesto las bacterias
Gram negativas. Al trmino del protocolo, las Gram positivas se vern
azul-violceas y las Gram negativas, se vern rosas (si no se hizo la
tincin de contraste) o rojas (si se us, por ejemplo, safranina).
Esta importante coloracin diferencial fue descubierta por Hans Christian
Gram en 1884. En este mtodo de tincin, la extensin bacteriana se
cubre con solucin de uno de los colorantes de violeta de metilo, que se
deja actuar durante un lapso determinado. Se escurre luego el exceso de
violeta de metilo y se aade luego una solucin de yodo, que se deja
durante el mismo tiempo que la anterior; despus se lava
el portaobjetos con alcohol hasta que ste no arrastre ms colorante.
Sigue a tal tratamiento una coloracin de contraste, como safranina,
fucsina fenicada diluida, pardo Bismarck, pironin B o hasta inclusive
verde de malaquita.
Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, an despus de
tratarlos con un decolorante, y el color no se modifica al aadir ste;
otros pierden con facilidad el primer tinte, y toman el segundo. Los que
fijan el violeta, se califican de grampositivos, y los que pierden la
primera coloracin y retienen la segunda, de gramnegativos.

Basndonos pues, en la reaccin Gram, podemos clasificar a los

microorganismos en uno de los dos grupos. Los colorantes de prosanilina son los que mejores resultados dan en la coloracin Gram. Los
representantes ms usados de este grupo son violeta de metilo y violeta
cristal o de genciana. En realidad, violeta de metilo es el nombre
atribuido al compuesto tetrametil-p-rosanilina.
El matiz de color de la p-rosanilina se intensifica al aumentar el nmero
de grupos metilo en la molcula; por consiguiente, de los tres grupos, el
tono ms oscuro es la hexametil-p-rosanilina (violeta cristal), y el tinte
ms ligero, la tetrametil-p-rosanilina (violeta de metilo). Los nombres
violeta de metilo 3R, 2R, R, B, 2B, 3B, etc., se refieren al nmero de
grupos metilo contenidos. La letra R indica matices rojos, y la letra B,
tonos azules. El violeta de cristal contiene seis grupos metilo, y se
considera como el mejor colorante primario para teir por el mtodo de
Gram.
La facultad de las clulas para tomar la coloracin Gram no es propia de
toda sustancia viviente, sino que se limita casi en absoluto a hongos y
bacterias. As vemos que las clulas de plantas y animales superiores no
conservan la primera coloracin; los mohos se tien con cierta
irregularidad; los grnulos de micelios propenden retener el colorante.
La reaccin de Gram no es infalible ni constante; puede variar con el
tiempo del cultivo y el pH del medio, y quiz por otras causas.

nagre
s del sarro
de Bacterias
manzana
dental de yogurt

Resultados:

Clulas eucariotas:
Fundamentos:
Las clulas eucariotas tienen un modelo de organizacin mucho ms
complejo que las procariotas. Su tamao es mucho mayor y en el
citoplasma es posible encontrar un conjunto de estructuras celulares
que cumplen diversas funciones y en conjunto se denominan organelas
celulares. El siguiente esquema representa el corte de una clula a la
mitad para poder observar todas sus organelas internas.

Entre las clulas eucariotas podemos distinguir dos tipos de clulas que
presentan alguna diferencia: son las clulas animales y vegetales.

Objetivos:

Observar y caracterizar las clulas eucariotas de tipo animal.

Observar y caracterizar las clulas eucariotas unicelulares.

Materiales:
-

Microscopio
Azul de metileno
Agua estancada
Levadura de pan
Epitelio bucal

Metodologa: