Digestin de

macromolculas
Equipo 4
4IM1

La nutricin microbiana consiste en suministrar a las clulas

los ingredientes qumicos que necesitan para hacer
monmeros. Estos compuestos qumicos son los
nutrientes, macro y micro. Diferentes microorganismos
necesitan diferentes tipos de nutrientes y a menudo los
requerimientos son especficos.

Factores de crecimiento: Compuestos orgnicos que,

como los micronutrientes, se necesitan en pequeas
cantidades y slo por algunas clulas.
Vitaminas (riboflavina, tiamina, cido nicotnico,
cido pantotnico).
Aminocidos (triptfano, cistina, etc.).
Purinas.
Pirimidinas.
Elementos metlicos simples.
Sales inorgnicas.

La digestin celular consiste en una serie de reacciones de hidrlisis,

catalizadas enzimticamente son degradadas y transformadas en otras
de menor tamao y estructura ms simple que resultan fcilmente
asimilables por la clula.
Enlaces glucosdicos

Monosacridos.

Enlaces peptdicos

Aminocidos.

Enlaces ster

Glicerol y cidos grasos.

Enlaces ster-fosfato

Nucletidos.

Las partculas alimenticias que la clula

incorpora mediante endocitosis no
resultan directamente asimilables por
ella, debido a su gran tamao, estas
partculas no pueden atravesar la
membrana de la vescula en la que se
encuentran confinadas; adems, las
sustancias de que se componen estas
partculas, por ser ajenas a la clula, no
podran formar parte de su maquinaria
bioqumica, y no le resultan de ninguna
utilidad.

Se distinguen dos modalidades de

digestin celular:
Extracelular: Los lisosomas se Intracelular: confinado en el
interior
de
una
vescula
aproximan
a
la
membrana
membranosa intracelular en
plasmtica y, por exocitosis, vierten
cuyo interior tiene lugar el
a dicho medio su contenido en
proceso de digestin.
enzimas hidrolticas, los cuales
heterofgica,
si
el
pueden ahora actuar directamente
contenido
de
esta
sobre las partculas alimenticias y
vescula
es
de
liberar las unidades monomricas
procedencia extracelular
que forman parte de los diferentes
autofgica, si es de
tipos de macromolculas que las
procedencia intracelular.
constituyen.

PRUEBAS BIOQUMICAS:
Digestin de Macromolculas.

Hidrlisis de Gelatina
PRINCIPIO: La gelatina es una protena que tiene la
capacidad de gelificar, cuando es hidrolizada por la
gelatinasa en los aminocidos que la componen, pierde
esta caracterstica.
Gelatinasas
Gelatina -------
Aminocidos individuales
Prueba positiva en tubo: Bacillus subtilis.
Prueba positiva en placa: Bacillus subtilis,
Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus.
En el caso de placa el revelador empleado fue: HgCl2.

Hidrlisis de Gelatina: Tubo

Hidrlisis de Gelatina: Placa

Hidrlisis de Almidn
Determinar la capacidad de un microorganismo de hidrolizar el
almidn. Probar la desaparicin del almidn con el uso de un
reactivo con yodo.
Estructura bsica del almidn: amilosa (lineal), amilopectina
(ramificada)

Agar Almidn
Sustrato: Almidn (polmero de glucosa).
Enzima: Amilasa (exoenzima).
Producto: Glucosa.
Revelador: Lugol.
Almidn amilasa Glucosa

Hidrlisis de Almidn
Positivo
Bacillus Subtilis
Negativo
Salmonella typhi

Hidrlisis de Casena: Placa

PRINCIPIO: La casena es la protena de la leche que le
confiere el color blanco. Cuando la casena es
hidrolizada desaparece este color caracterstico,
generndose un halo alrededor del crecimiento
microbiano.
Caseasa

Casena --- Aminocidos (L-Arginina)

Prueba positiva para: Bacillus subtilis, Klebsiella
pneumoniae y Pseudomonas aeruginosa.

Hidrlisis de Casena: Placa

Hidrlisis de Fosfolpidos
PRINCIPIO: Los fosfolpidos son steres complejos de
alcohol, cido graso, cido fosfrico y una base nitrogenada.
Las fosfolipasas son enzimas catablicas importantes en el
metabolismo de los fosfolpidos que se producen
constitutivamente.

Medio de cultivo agar sangre

Composicin:Infusin de corazn de ternera,
triptosa, cloruro de sodio
Prueba positiva: Se visualiza una zona
amarillenta
opaca
traslcida
hidrlisis de fosfolpidos de la
membrana celular de los eritrocitos.

Interpretacin:
hemlisis Halo opaco
parcial
verdosa

enlaces ster fosfato con

acumulacion extracelular de
digliceridos

hemlisis halo
total
transparente

Enlaces ster y utilizacin de

cidos grasos

sin
sin halo
hemlisis

no empleo de los fosfolpidos

membranales de los eritrocitos

Prueba positiva en gelosa sangre:

Bacillus subtilis y Escherichia
coli Hemlisis
Pseudomonas aeruginosa y
Shigella typhi Hemlisis

Medio de cultivo agar yema de huevo

Composicin:
Triptona, extracto de carne, extracto de levadura,
glicina, piruvato de sodio, cloruro de litio, telurito de
potasio.
Interpretacin:
Prueba positiva: Formacin de un halo
transparente alrededor de la colonia.

Medio de cultivo agar yema de huevo

Prueba positiva
Bacillus subtilis
Staphylococcus
aureus
Pseudomonas
aeruginosa

Prueba de leche tornasolada

La leche contiene lactosa junto con tres protenas principales:
Casena:

Fosfoprotena compleja y globular, soluble en agua o en soluciones

acuosas de cidos, bases o sales.
Cantarow y Schepartz: La casena se presenta tal vez como una sal (caseinato
de calcio) y precipita con la acidificacin, como sucede con la leche cortada.
Lactoalbmina.
Lactoglobulina.

posee un pH de 6.66.9 debido a la presencia de fosfatos cidos.

El tornasol es un indicador tanto de pH como E (oxidacinreduccin); como

indicador de pH, es rojo en una solucin cida (pH 4.5) y azul en condiciones
alcalinas (pH 8.3).

Prueba de leche tornasolada

La leche tornasolada es un medio diferencial para determinar diversas
funciones metablicas de un microorganismo, cada una para una
especfica para una especie particular:
a)Fermentacin

de la lactosa (acidificacin).

b)Reduccin

del tornasol.

c)Formacin

de un cogulo.

d)Peptonizacin
e)Formacin

(Digestin).

de gas.

Prueba de leche tornasolada:

Fermentacin de la lactosa (acidificacin)
La leche tornasolada, no inoculada, muestra un color azul purpreo
(pH 6.8). Si un microorganismo fermenta la lactosa produce, sobre
todo, cido lctico que origina cambios en el medio a un color rosarojo.
Ciertas bacterias formadoras de lcalis, no fermentan la lactosa,
actan sobre las sustancias nitrogenadas presentes en la leche que
ocasionan la liberacin de NH

y, en consecuencia, originan un pH

alcalino evidenciado por un color prpura azulado.

Prueba de leche tornasolada:

Fermentacin de la lactosa (acidificacin)
Lactosa

Glucosa + Galactosa

cido lctico
Glucosa

cido pirvico

cido butrico
CO y H O

Reduccin del tornasol

Los niveles de reduccin de oxgeno a menudo

acompaan la formacin de cido en la profundidad
del tubo.
La profundidad de la capa superior depende de la
proporcin de reduccin, no de la oxidacin del aire.
Tornasol Leucobase (blanca)

Formacin de un cogulo
Las caseasas (proteasas) hidrolizan las protenas de la leche que la
coagulan.
Quimosina del cuajo (rennina): Enzima digestiva responsable de la
formacin del cogulo por la precipitacin de la casena mediante la
formacin de cido o por la conversin casena paracasena, por
accin de esta enzima.

Prueba de leche tornasolada

Bibliografa y
Fuentes de consulta
MacFADDIN, J.F. 2003. Pruebas bioqumicas para la
identificacin de bacterias de importancia clnica. 3 ed.
Editorial Mdica Panamericana, S.A. Argentina. 851p.
MADIGAN, M.T., MARTINKO, J.M. y PARKER, J. 2004. Brock:
Biologa de los microorganismo. 10 ed. Pearson Educacin, S.
A. Madrid. 1096p.
http://www.bionova.org.es/biocast/documentos/tema12.pdf